專利名稱：治療毒性叮咬及叮刺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用5-HT2拮抗劑來治療或緩解毒性叮咬或叮刺的癥狀。
毒性叮咬及叮刺根據(jù)毒素的來源及個(gè)體或動(dòng)物的敏感性而能引起多種反應(yīng)。在某些情況下，叮咬或叮刺中的毒素能引起過敏反應(yīng)，即一種能威脅生命的速發(fā)型超敏反應(yīng)。在其它情況下，某些毒素能引起皮膚的“局部”反應(yīng)。皮膚的局反應(yīng)被分為1)有限大小及持續(xù)時(shí)間的“非過敏性”反應(yīng)或2)“過敏性”或“擴(kuò)大的”局部反應(yīng)，一般在大小上增大而在持續(xù)時(shí)間上延長。對(duì)膜翅目動(dòng)物的毒素(蜜蜂、黃蜂、大黃蜂及鮮黃色胡蜂)而言，“非過敏性局部反應(yīng)為對(duì)毒素成分的毒性反應(yīng)，而擴(kuò)大的局部反應(yīng)似乎是由對(duì)毒素蛋白質(zhì)的過敏反應(yīng)而引起的”。[見D.N.Wright，對(duì)叮刺昆蟲(膜翅目)的局部反應(yīng)，Allergy Proc.11(1):23-28(Jan-Feb.1990)]。
一旦接受了毒性的叮咬或叮刺，即可出現(xiàn)由毒素引起的多種癥狀，包括瘙癢、紅斑、蕁麻疹、血管水腫、軟組織腫脹、感染部位的炎癥及感染部位疼痛。
當(dāng)被皮下注射時(shí)，許多叮咬及叮刺中的毒素引起從鄰近血管中外滲。[見V.Cattell,Focal Mesangial Proliferative Glomerulonephritis InThe Rat Caused By Habu Snake Venom:The Role of Platelets,British J.ofExp.Pathol.,60(2):201-208(April 1979)]；另外，毒素可誘發(fā)血小板聚集及肥大細(xì)胞脫粒，炎癥的兩個(gè)成分一起外滲。5-羥色胺的釋放也與毒素的注射有關(guān)。[見如Y.Ozaki等，Mastopran,A Wasp Venom,Activates Platelets Via Pertussis Toxin-Sensitive GTP-Binding Proteins,Biochem.Biophys.Res.Commun.,170(2):779-85(July 31,1990)及C.Wang等，Experimental Study of Chinese Agkistrodon Actus Venom InAetivation of Rabbit Platelets In Viuo,Hua Hsi I Ko Ta Huseh Huseh Pao,25(1):38-40(March 1994)。
從四十多年前發(fā)現(xiàn)血清素(5-羥色胺，5-HT)以來，許多不同研究的累積結(jié)果表明血清素在哺乳動(dòng)物體的機(jī)能上，即在中樞神經(jīng)系統(tǒng)及在外周神經(jīng)系統(tǒng)上起著重要作用。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)學(xué)研究表明源于腦干的血清素激活的神經(jīng)元形成一個(gè)凸出到腦及脊髓的大部分區(qū)域中的充分?jǐn)U散的系統(tǒng)[R.A.O’Brien,Serotonin in MentalAbnormalities,1∶41(1978)；H.W.M.Steinbusch,HANDBOOK OFCHEMICAL NEUROANATOMY,Volume 3,PartⅡ,68(1984)；N.E.Anden等，Acta Physiologica Scandinavia,67:313(1966)]。這些研究通過生化結(jié)果予以補(bǔ)充，其結(jié)果表明5-HT的大部分集中在腦及脊髓中[H.W.M.Steinbusch，上文]。
由于具有這樣的擴(kuò)散系統(tǒng)，所以5-HT與各種行為表現(xiàn)、生理性反應(yīng)以及源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病有關(guān)是不足為奇的。它們包括這樣的擴(kuò)散區(qū)域如睡眠、吃、可察覺的疼痛、控制體溫、控制血壓、抑郁、精神分裂癥以及其它身體狀態(tài)[R.W.Fuller,BIOLOGY OFSEROTONERGIC TRANSMISSION,221(1982)；D.J.Boullin,SEROTONIN IN MENTAL ABNORMALITIES 1:316(1978)；J.Barchas等，Serotonin and Behavior(1973)]。
血清素在外周系統(tǒng)中也起著重要作用。例如，近90％的體內(nèi)的血清素在胃腸道系統(tǒng)中被合成，已發(fā)現(xiàn)血清素介導(dǎo)該系統(tǒng)中的各種收縮、分泌及電生理作用。血清素可被血小板吸收，以及在血小板聚集過程中，它可被釋放，以使心血管系統(tǒng)提供另一個(gè)能釋放及響應(yīng)血清素的外周網(wǎng)絡(luò)的實(shí)例。由于血清素在體內(nèi)的廣泛的分布，即可理解存在對(duì)影向血清素系統(tǒng)藥物極大興趣的原因。特別是，受體特異性激動(dòng)劑及拮抗劑對(duì)治療很大范圍內(nèi)的紊亂是重要的，包括焦慮、抑郁、高血壓、偏頭痛、強(qiáng)迫性紊亂、精神分裂癥、孤獨(dú)癥、神經(jīng)變性性紊亂、如Alzheimer氏病、帕金森神經(jīng)機(jī)能障礙及Huntington氏舞蹈病及癌癥化療誘發(fā)的嘔吐[M.D.Gershon等，THE PERIPHERAL ACTIONSOF 5-HYDROXYTRYPTAMINE,246(1989)；P.R.Saxena等，Journalof Cardiovascular Pharmacology,15:Supplement 7(1990)]。
血清素通過與細(xì)胞表面上專門化的受體結(jié)合而影響細(xì)胞的生理。許多類型的受體為許多神經(jīng)遞質(zhì)及激素而存在，包括血清素。多種結(jié)構(gòu)上有區(qū)別的血清素受體的存在提供了制造亞型選擇藥物制劑的可能性。這些化合物的發(fā)現(xiàn)可產(chǎn)生新的、選擇性增加的及較少副作用的治療劑，因?yàn)閭€(gè)別受體亞型的激活可起影響中樞和/或外周血清素系統(tǒng)的不同部分的特殊作用。
這種特性的實(shí)例可通過應(yīng)用作為例子的血管系統(tǒng)來說明。在某些血管中，刺激在內(nèi)皮細(xì)胞上某些5-HT受體引起血管舒張而刺激在平滑肌細(xì)胞上某些5-HT受體引起血管收縮。
當(dāng)前，大多數(shù)種類的血清素受體(5-HT1,5-HT2、5-HT3、5-HT4、5-HT5、5-HT6及5-HT7)含有約14-18個(gè)單獨(dú)的、以其藥理或結(jié)構(gòu)差別正式分類的受體。[對(duì)于各種5-HT受體類型的藥理作用及臨床影響的非常好的綜述，見Glennon等，Neuroscience and BehavioralReviews,14:35(1990)]。
一類血清素受體為5-HT2。在這一類中已知存在幾種亞型。這些亞型包括5-HT2A、5-HT2B及5-HT2C。亞型5-HT2A位于許多組織中，包括(但不限于此)血管平滑肌、血小板、肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)及胃腸道中。認(rèn)為這些受體與某些效應(yīng)有關(guān)例如，血管收縮、血小板聚集及支氣管收縮。5-HT2B受體局限于鼠肺、胃底、子宮、膀胱及結(jié)腸中。5-HT2B受體位于人體上值得注意的部位包括(但不限于此)腦部及血管。亞型5-HT2C位于CNS中，在脈絡(luò)叢中具有高密度。
由于在受影響人群中對(duì)當(dāng)今毒性叮咬及叮刺治療的普遍不滿，所以存在著對(duì)一種更有效及安全治療的需求。本發(fā)明提供該治療。
本發(fā)明提供治療或緩解哺乳動(dòng)物毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動(dòng)物有效劑量的一種或多種具有5-HT2拮抗劑活性的化合物。
除非另有指明，用在本制備及實(shí)施例中的術(shù)語及縮寫都具有其正常意義。例如“℃”指攝氏度；“N”指正?；蛘顟B(tài)；“mmol”指毫摩爾；“g”指克；“ml”指毫升；“L”指升；“M”指摩爾或摩爾濃度；“MS”指質(zhì)譜；“IR”指紅外光譜；而“NMR”指核磁共振光譜。
術(shù)語“叮刺”指由導(dǎo)入個(gè)體的昆蟲或其它動(dòng)物的毒素(生物毒素)所引起的損傷，以及由器官對(duì)毒素的反應(yīng)而引起的機(jī)械性損傷。
術(shù)語“毒素”指一種毒物，更準(zhǔn)確地說，一種一般由昆蟲或其它動(dòng)物分泌的毒性物質(zhì)。在此所用的術(shù)語“毒素”不包括被認(rèn)為是神經(jīng)毒素的物質(zhì)。所知能分泌毒素的昆蟲及其它動(dòng)物的實(shí)例包括(但不限于此)某些類型的蛇、螞蟻、水母、水螅、雙鰭鯧、刺鰩、?？?、海膽、錐螺、蜘蛛、蝎子、蚊子、蜜蜂、黃蜂、大黃蜂、蜂、蚋蚊及蠅。
“炎癥”是組織對(duì)各種刺激或損害的非特異性應(yīng)答，其導(dǎo)致在炎癥部位釋放引起疼痛的物質(zhì)。現(xiàn)已了解肥大細(xì)胞、中性白細(xì)胞及T-細(xì)胞與發(fā)炎皮膚癥狀的病理生理以及其它生理性紊亂有關(guān)。
本發(fā)明的方法應(yīng)用5-HT2受體。有三個(gè)5-HT受體的5-羥色胺2(5-HT2)家族的成員5-HT2A、5-HT2B及5-HT2C受體。這些受體為G-蛋白質(zhì)連接的受體，其實(shí)際至少在這些受體的克隆模型中與磷酸肌醇的代謝正性結(jié)合。這些受體享有序列同源性，且具有相同模式的內(nèi)含子和外顯子。該類受體對(duì)其配體特異性上的相似進(jìn)一步表明該家族受體的共同團(tuán)體性。本發(fā)明的方法優(yōu)選使用5-HT2B受體。
本發(fā)明提供治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動(dòng)物有效劑量的一種或多種5-HT2受體拮抗劑。如所指明的，在本發(fā)明的方法中應(yīng)用一種或多種5-HT2拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，只用一種5-HT2拮抗劑。在某些情況下，該5-HT2拮抗劑將僅對(duì)一種亞型的5-HT2受體有親合力(如對(duì)5-HT2A、5-HT2B或5-HT2C的特異性)。在其它情況下，5-HT2拮抗劑將對(duì)多種5-HT2受體的亞型具有親合力(如對(duì)5-HT2A和5-HT2B；5-HT2A和5-HT2C；5-HT2B和5-HT2C或5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C的特異性)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可用多種5-HT2拮抗劑。這些5-HT2拮抗劑中的每一種對(duì)專門的5-HT2受體亞型、多種5-HT2受體亞型可有親合力，或者可以是一種對(duì)專門的受體亞型及多種受體亞型有親合力的5-HT2拮抗劑的混合物。本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案提供了治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動(dòng)物有效劑量的一種或多種5-HT2B受體拮抗劑。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)熟練人員將了解盡管用于本發(fā)明中的拮抗劑可以對(duì)一種或多種5-HT2受體亞型具有親合力，可出現(xiàn)一定量的與其它5-HT受體類型的交叉反應(yīng)性。不排除化合物或組合物在本發(fā)明中的使用，僅因?yàn)樗哂袑?duì)一種或多種5-HT受體的親合力。
在最近的出版物中記敘了許多可用于本發(fā)明的不同的5-HT2受體拮抗劑。
例如，美國專利第5428036號(hào)(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)介紹了一組式Ⅱ的5-HT2拮抗劑及其藥學(xué)上可接受的鹽
其中X選自CO、CS或CH2，而若X為CO或CS，則R選自ⅰ)氫、C1-C24烷基、C1-C24鏈烯基、C3-C8環(huán)烷基、C3-C8環(huán)烯基或C4-C32環(huán)烷(烯)基烷(烯)基，以上基團(tuán)任選由一個(gè)或多個(gè)羥基取代，或由一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、三氟甲基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C3烷硫基、酰氧基或氰基的取代基任選取代的苯基；或ⅱ)YR1，其中Y為O或S，而R1選自以上ⅰ)項(xiàng)下作為R所定義的取代基；及ⅲ)NR2R3，其中R2和R3獨(dú)立選自以上ⅰ)項(xiàng)下作為R所定義的取代基，或R2和R3結(jié)合形成一個(gè)含有1-3個(gè)氮原子及0-3個(gè)氧或硫原子的4-8元雜環(huán)；或若X為CH2，則R選自ⅳ)如ⅱ)中定義的YR1基團(tuán)；ⅴ)如ⅲ)中定義的NR2R3基團(tuán)；或ⅵ)OC(O)R4基團(tuán)，其中R4定義同R1。
另一組5-HT2拮抗劑包括在美國專利第5229382號(hào)(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)中介紹的化合物，其通式為式Ⅲ
還有另一組5-HT2拮抗劑是在美國專利第5457115中(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)中介紹的式Ⅳ拮抗劑及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽或前體藥物
其中Ar為下列基團(tuán)之一苯基，由選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、羥基、三氟甲基及氰基的至少一個(gè)取代基取代的苯基以及選自2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噁唑基、2-咪唑基、2-吡啶基、3-吡啶基及4-吡啶基的雜芳基；每條虛線為一可任選雙鍵；X和X’為獨(dú)立選自氫、鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、羥基、低級(jí)烷硫基、低級(jí)烷磺?；?、低級(jí)烷氨基、低級(jí)二烷基氨基、氰基、三氟甲基及三氟甲硫基；或X和X’一起形成一個(gè)5-7元碳環(huán)；R1選自氫、低級(jí)烷基及由1個(gè)或2個(gè)羥基取代的烷基；條件是當(dāng)X是氫或氟時(shí)，R1不能為氫；R是具有下式的取代基
其中n為2-6范圍內(nèi)的整數(shù)；W為氧或硫；V1選自O(shè)R4、SF5、CHR6R7和NR8R9；其中R3-R9獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、環(huán)烷基、由一個(gè)或二個(gè)羥基取代的低級(jí)烷基及由一個(gè)或二個(gè)羥基取代的低級(jí)鏈烯基。
還有一組可用于本發(fā)明方法中的5-HT2拮抗劑包括在美國專利第5480885號(hào)(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)中介紹的式Ⅴ的拮抗劑、其外消旋體和酸加成鹽
其中R1、R2和R3獨(dú)立代表氫原子或直鏈或支鏈的C1-C6烷基；X代表氫或鹵原子；Z代表羰基或亞甲基及C9…C10代表單鍵或雙鍵。
可用于本發(fā)明方法中的另一組5-HT2拮抗劑包括在美國專利第4563461號(hào)(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)介紹的式Ⅵ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R為C1-3烷基或烯丙基，R1為C1-3羥烷基或C1-3二羥基烷基，而R2為H或甲基。
以上各組化合物僅是對(duì)可使用的5-HT2受體拮抗劑的說明。所列的這些組的化合物并不是全面的，本發(fā)明的方法可應(yīng)用任何5-HT2受體拮抗劑而且不局限于任何具體類型的化合物。
更優(yōu)選類別的拮抗劑為式Ⅶ的5-HT2受體拮抗劑、其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
其中R1為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R6選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷?；O2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5和OR5；R7和R8獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、NO2、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷?；?、C7-C16芳基烷基、CO2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、-SR5和OR5；n為1、2或3；n’為1、2或3；m為1或2；R5獨(dú)立為氫或C1-C4烷基；R5’為C1-C4烷基；…可任選為一個(gè)鍵。
式Ⅶ化合物的實(shí)例包括(但不限于此)螺-9,9-[2-(3,4-二氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲氧基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲氧基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二乙氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,5-二氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-二甲氨基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3-氟，4-氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-乙基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-溴-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-氯-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚。
這些化合物的合成在公開未決的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)系列號(hào)60/014119(代理人檔案號(hào)P-10656,1996年3月25日申請(qǐng))中被介紹(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)。以下詳細(xì)介紹此類典型化合物的合成，包括6個(gè)特定實(shí)施例。
式Ⅶ化合物可用本領(lǐng)域所熟知的化學(xué)方法制備。這些實(shí)施例只用以說明，并不限制本發(fā)明的范圍。
以下的吲哚起始原料(1a、1b和1c)中，(1a)可購買，(1b)根據(jù)Bartoli的方法制備[Bartoli,G.等，Tetrahedron Lett.,1989,30,2129]或者(1c)由2-碘代-4,6-二甲基苯胺(5)合成。該過程通過下列圖式來說明
2-碘代-4,6-二甲基苯胺(5)合成按如下來完成在氬氣下，向5(24mmol)、CuI(0.05當(dāng)量)及(PPh3)2PdCl2(0.05當(dāng)量)的30ml干燥三乙胺的混懸液中加入三甲基硅烷基乙炔(1.1當(dāng)量)，將產(chǎn)生的混合液攪拌3小時(shí)。然后真空下除去溶劑，殘留物經(jīng)快速層析純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脫劑得到定量收率的6”。將6(23mmol)和CuI(2當(dāng)量)的50ml干燥二甲基甲酰胺的淤漿在通Ar氣下，于100℃加熱2.5小時(shí)。冷卻至室溫后，過濾反應(yīng)混合物，固體用乙醚(20ml)沖洗二次。有機(jī)相用水洗(3×50ml)，用Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑至干。粗品經(jīng)快速層析純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脫劑得1c(1.5g,45％)。
實(shí)施例1
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(3a)(1g)與對(duì)應(yīng)的二甲氧基四氫萘酮(3b)(1g)的乙醇(10ml)中的混懸液回流128小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾。洗滌固體粗品并干燥。
熔點(diǎn)261℃。
理論值計(jì)算值C 69.25 69.24H6.82 6.97N7.02 6.98
實(shí)施例2
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(2a)(575mg)與對(duì)應(yīng)的酮(2b)(464mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流128小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到525mg理論值 計(jì)算值C74.43 74.36H 6.846.84N 8.278.25MS:301實(shí)施例3
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(2a)(500mg)與對(duì)應(yīng)的酮(2b)(396mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時(shí)。然后將反應(yīng)混合液冷卻至約0℃，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到262mgMS:274。
實(shí)施例4
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(4a)(500mg)與對(duì)應(yīng)的酮(4b)(396mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時(shí)。然后將反應(yīng)混合液冷卻至約0℃達(dá)約24小時(shí)，過濾。將粗品固體洗滌并干燥。
進(jìn)行質(zhì)譜分析，得MI為274。
實(shí)施例5
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(5a)(500mg)與對(duì)應(yīng)的酮(5b)(397μl)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時(shí)。然后將反應(yīng)混合液冷卻至約0℃達(dá)約14小時(shí)，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到630mg理論值計(jì)算值C73.9573.32H 6.52 6.73N 8.62 8.59MS:288實(shí)施例6
將對(duì)應(yīng)的色胺鹽酸鹽(4a)(1g)與對(duì)應(yīng)的酮(4b)(800mg)的乙醇(10ml)另一優(yōu)選類型的5-HT2受體拮抗劑是WO 95/24200(在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)中介紹的式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物
其中Q為氫或(CHR2)R4；R1為氫或C1-C3烷基；R2為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R4為C5-C8環(huán)烷基、取代的C5-C8環(huán)烷基、C5-C8環(huán)烯基、取代的C5-C8環(huán)烯基、雙環(huán)或取代的雙環(huán)；A選自
和
其中，R6和R7獨(dú)立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷?；?、CO2R5、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5或OR5；m為1或2；R5獨(dú)立為氫或C1-C4烷基；R5為C1-C4烷基；R8獨(dú)立選自R6基團(tuán)、取代的C3-C8環(huán)烷基、C3-C8環(huán)烷基、C3-C8環(huán)烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8環(huán)烯基、取代的C5-C8環(huán)烯基、C5-C8環(huán)烯基-(C1-C3)烷基、C7-C16芳基烷基；或R6和R7一起與基團(tuán)A的碳原子形成一個(gè)5-8元碳環(huán)。
式Ⅰ化合物的實(shí)例包括(但不限于此)8-甲基-1[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6,8-二溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；8-甲氧基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6,8-二氟-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]哚；7-甲基-8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-(1,1-二甲基乙基)-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-1-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5-氟-6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；7,8,9,10-四氫-10-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1H-苯并[g]吡啶并[3,4-b]吲哚；6-環(huán)己基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-(1-甲基乙基)-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；5,7-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6,7-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-乙基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-溴-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；7,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4,5-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,3,4-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,5-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,4,5-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-(1-甲基乙基)-1-[(2,3,4-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基-5-硝基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-碘代-4,5-二甲氧基-苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基-5-氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-甲氧基-4-丙氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-1-[(4-二甲氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(4-二丁氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-氟-4-甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4-二甲基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-氯-3-甲氧基-4-羥基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5-氟-6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-(環(huán)己基甲基)-1,2,3,4-四氫-9H-比啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[2,4-b]吲哚；及6-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽。
實(shí)施例76-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽的制備
將2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛(10.45g)、N-乙?；拾彼?11.9g,0.1 0mol)及乙酸鈉(8.4g,0.1mol)的醋酐(100ml)溶液加熱至100℃2小時(shí)。將反應(yīng)混合液冷卻到室溫，攪拌下倒入冰(300ml)中。過濾分離產(chǎn)物，用水(3×50ml)及乙醚(3×50ml)洗滌，減壓干燥得5.26g。
將上面制備的氮雜內(nèi)酯(1.34g,4.76mmol)及5-甲基色胺鹽酸鹽(1.0g,4.75mmol)的1N HCl(30ml)中的混懸液在通氮?dú)庀录訜峄亓?4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾分得粗品產(chǎn)物。將固體用乙醇研磨，用乙醚洗滌。過濾分得產(chǎn)物(1.19g)。m/e=370,mp 244℃(分解)。分析計(jì)算值實(shí)測(cè)值C 61.92 61.67H5.94 5.94N6.88 6.94實(shí)施例86-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚的制備實(shí)施例8按實(shí)施例7中所述的相同方法制備，有下列例外用2-溴-3,4-二甲氧基苯甲醛代替2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛作為起始原料。生成的終產(chǎn)物的收率為79.2％。M/I 416,414；mp272-4℃。
分析計(jì)算值實(shí)測(cè)值C 55.83 55.57H5.35 5.36N6.20 6.09
實(shí)施例96-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽的制備實(shí)施例9按實(shí)施例7中說明的相同方法制備，有下列例外用3,4-二甲氧基苯甲醛代替2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛，用5-碘代-色胺代替5-甲基色胺作為起始原料。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合液用碳酸鉀水溶液中和，用氯仿提取。將合并的氯仿層用無水碳酸鈉干燥，減壓濃縮。產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化，用2％的甲醇的氯仿液洗脫。收集含有產(chǎn)物的部分，濃縮。將殘留物溶于乙醚中，用HCl氣體處理。將得到的HCl鹽過濾分離，減壓干燥。得到的終產(chǎn)物收率為31.3％；M/I 448；mp272-3℃。
分析計(jì)算值實(shí)測(cè)值C49.5549.62H 4.57 4.51N 5.78 5.66被確信為有效的5-HT2受體拮抗劑的化合物的生物效能首先通過應(yīng)用能快速及準(zhǔn)確測(cè)定待測(cè)化合物與5-HT2受體結(jié)合的初篩實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。一旦待測(cè)化合物結(jié)合，在受體上待測(cè)化合物的體外活性即顯出。用于評(píng)估5-HT2拮抗劑的測(cè)試試驗(yàn)對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員是熟知的。5-HT2B受體結(jié)合活性化合物結(jié)合5-HT2B受體的能力用下面列出的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定。測(cè)試方法本發(fā)明的某些化合物及中間體用于調(diào)節(jié)5-HT2B受體。主要用于結(jié)合5-HT2B受體的化合物可用下列方法證明。另外，以下提供用以說明5-HT2B活性的體外模型。5-HT2B的放射配體結(jié)合研究從轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中制備膜將表達(dá)克隆大鼠的5-HT2B受體的懸浮細(xì)胞通過在4℃下，以2200xg離心15分鐘收集[J.Kursar等，Mol.Pharmacol.42:549-557(1992)]。用于結(jié)合測(cè)試的膜通過在50mM Tris HCl,pH 7.4中旋轉(zhuǎn)該粒狀沉淀物而得(0.5×109細(xì)胞/30ml)。然后將該組織懸浮物以3,9800xg轉(zhuǎn)速，在4℃下離心10分鐘。將該步驟總共重復(fù)三次洗滌，在第一和第二次洗滌之間，在37℃下孵育10分鐘。將后最的粒狀沉淀物在67mM Tris-HCl,pH7.4(以20-40及12.5×106細(xì)胞/ml，最初細(xì)胞數(shù)，分別用于表達(dá)低及相對(duì)高水平的5-HT2B受體的細(xì)胞)中用Tissumizer(Tekmar,Cincinnati,OH)，設(shè)定65下均化15秒。5-HT結(jié)合研究用Biomek 1000(Beckman Instruments,Fullerton,CA)使結(jié)合測(cè)試自動(dòng)進(jìn)行，該試驗(yàn)在0.8ml總體積下一式三份進(jìn)行。將膜懸浮液200μl(0.04-0.27mg蛋白質(zhì))及200ml藥物的水稀釋液加入到400μl含有[3H]5-HT、優(yōu)降寧、CaCl2及L-抗壞血酸的67mM Tris-HCl(pH 7.4)中。優(yōu)降寧、CaCl2及L-抗壞血酸的最后濃度分別是10μM、3mM和0.1％。將試管在37℃下孵育15分鐘或在0℃下孵育2小時(shí)(兩個(gè)條件都用來證實(shí)結(jié)合平衡)，然后通過預(yù)先浸于0.5％聚乙烯亞胺及用冰冷的50mM Tris-HCl,pH7.4預(yù)冷卻的Whatman GF/B濾器，用Brandel細(xì)胞收集器(Model MB-48R；Brandel,Gaithersburg,MD)迅速過濾。然后用1ml冰冷的50mMTris-HCl,pH 7.4迅速洗滌濾器4次。在濾器上截留的[3H]5-HT的量通過液相閃爍光譜法測(cè)定(Ready Protein and Beckman LS 6000 IC,BeckmanInstruments,Fullerton,CA)。對(duì)于飽和實(shí)驗(yàn)，實(shí)際的游離放射配體濃度通過對(duì)其中結(jié)合的放射活性已通過離心分離的平行的飽和實(shí)驗(yàn)的上清液取樣測(cè)試而得。將用于飽和實(shí)驗(yàn)的濃度范圍0.02-5nM及0.6-63nM的[3H]5-HT分別在0℃及37℃下孵育。5-HT,10μM或1-萘基哌嗪(1-NP),10μM確定為非特異性結(jié)合。對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)而言，要用6-12個(gè)濃度的待測(cè)藥物，跨越6個(gè)log單位，[3H]5-HT的最后濃度為2nM。蛋白質(zhì)通過Bradford的方法，用牛的血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品來測(cè)定[M.M.Bradford,Anal.Biochem.,72:248-254(1976)]。統(tǒng)計(jì)分析用部分F檢驗(yàn)確定飽和測(cè)試中Kd及Bmax值以便最佳地適合一位點(diǎn)或二位點(diǎn)的結(jié)合模型[A.De Lean等，Mol.Pharmacol.,21:5-16(1981)]。下列方程用于一位點(diǎn)結(jié)合模型
其中結(jié)合=[3H]5-HT特異結(jié)合的量，Bmax＝結(jié)合位點(diǎn)的最大數(shù)目，Kd=平衡離解常數(shù)，[L]=游離[3H]5-HT濃度，或二位點(diǎn)結(jié)合模型
其中結(jié)合=[3H]5-HT特異結(jié)合的量，Bmax=高親合力結(jié)合位點(diǎn)的最大數(shù)目，Bmax2=低親合力結(jié)合位點(diǎn)的最大數(shù)目，Kd1=高親合力位點(diǎn)的平衡離解常數(shù)，Kd2=低親合力位點(diǎn)的平衡離解常數(shù)，[L]=游離的[3H]5-HT濃度。競(jìng)爭(zhēng)測(cè)試中IC50值、IP3標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)合參數(shù)以及IP3測(cè)試中EC50和Emax值通過四參數(shù)邏輯方程的非線性回歸分析確定[(Systat,Systat Inc.Evanston.IL)。A.De Lean.等，Mol.Pharmacol.,21:5-16(1981)]。用Cheng-Prusoff方程將IC50等值轉(zhuǎn)換成Ki值[Y.Cheng等，Biochem.Pharmacol.,22:3099-3108(1973)]。體外5-HT2B測(cè)試方法將雄性Wistar鼠(150-375g；Laboratory Supply,Indianapolis,IN)通過頸部離位處死，制備胃底的縱向截面供體內(nèi)試驗(yàn)。由一個(gè)鼠的胃底得四份制備物。按Hooker說明的方法制備取出的頸靜脈的環(huán)狀制備物[Blood Vessels.14:1(1977)及M.L.Cohen,J.Pharmacol.Exp.Ther.227:327(1983)。將組織固定于器官浴中，其中含有10ml改進(jìn)的下列成分的Krebs溶液(毫摩爾濃度)NaCl,118.2,KCl4.6；CaCl2.H2O,1.6；KH2PO4,1.2；MgSO4,1.2；葡萄糖，10.0及NaHCO3,24.8。將組織浴液保持在37℃，用95％O2和5％CO2均衡。將組織置于最適靜止力(4g)之下，然后平衡約1小時(shí)，再接觸待測(cè)化合物。在具有Statham UC-3轉(zhuǎn)換器的Beckman倍增描記器上記錄等長收縮的力的克數(shù)的變化。表觀拮抗劑離解常數(shù)的測(cè)定胃底中非累積可縮濃度-血清素響應(yīng)曲線以及頸靜脈中累積濃度響應(yīng)曲線通過每15-20分鐘洗掉在先的濃度之后濃度的逐步增加而獲得。測(cè)定與組織接觸約2分鐘時(shí)每種興奮劑的保留的濃度以及對(duì)每種化合物濃度的最大響應(yīng)。ED50值為產(chǎn)生最大收縮的一半的激動(dòng)劑的濃度。在獲得控制響應(yīng)之后，將組織與適當(dāng)濃度的緩沖液或拮抗劑孵育1小時(shí)。然后在一拮抗劑存在下重復(fù)對(duì)血清素的響應(yīng)。濃度響應(yīng)每一組織只利用一種激動(dòng)劑和一種拮抗劑濃度。一般地說，在緩沖液處理存在下連續(xù)的激動(dòng)劑響應(yīng)是不被改變的(平均劑量比率為1.28+/-0.21)。
根據(jù)下列方程測(cè)定每個(gè)拮抗劑濃度的表觀拮抗劑離解常數(shù)(KB)KB=[B]/(劑量比率-1)其中[B]為拮抗劑的濃度而劑量比率為在拮抗劑存在下激動(dòng)劑的ED50被對(duì)照的ED50除。一般地說，濃度-響應(yīng)曲線中平行移動(dòng)出現(xiàn)在拮抗劑存在下。以KB的負(fù)對(duì)數(shù)值(例如，-logKB)表示結(jié)果。用已知的方法進(jìn)行計(jì)算[B.R.Zaborowsky,J.Pharmacol.Methods,4:4165(1980)]。5-HT2B轉(zhuǎn)化細(xì)胞中IP3的形成IP3的形成及提取將懸浮液中生長的Abook-2-3-MTX細(xì)胞通過以200xg轉(zhuǎn)速的離心作用收集，再將其懸浮在無蛋白質(zhì)的細(xì)胞孵育基介質(zhì)中。將該細(xì)胞(2.5-3×106細(xì)胞/管125μl中)在37℃下孵育10分鐘后，加入125μl稀釋于無蛋白質(zhì)介質(zhì)中的所研究的化合物。所有孵育一式三份進(jìn)行。當(dāng)用拮抗劑抑制5-HT的效用時(shí)，在加入5-HT之前，將細(xì)胞與該拮抗劑一起在37℃下孵育10分鐘。加入激動(dòng)劑后，旋轉(zhuǎn)細(xì)胞懸浮液，在37℃下再孵育10秒(該10秒包括旋轉(zhuǎn)時(shí)間)。然后加入250μl冰冷的10％高氯酸終止反應(yīng)。將試管在冰上孵育10分鐘，再以1500xg轉(zhuǎn)速離心10分鐘。離心后，取400μl的上清液樣本。從已發(fā)表的方法中改進(jìn)下列IP3提取的方法(E.S.Sharps等，高效液相色譜法測(cè)定孵育細(xì)胞中結(jié)合入磷酸化代謝物持的32P,Anal.Biochem.124:421-424(1982)及K.A.Wreggett等，磷酸肌醇酯及其異構(gòu)體的Rapic分離法，Biochem.J.,245:655-660(1987))。將400μl樣本加入到含有100μl 10mM EDTA,pH 9.0的1.5ml microfuge管中。再加入500μl1,1,2-三氯三氟乙烷/三正辛胺(1∶1,v/v)。將該管劇烈旋轉(zhuǎn)5-7分鐘，然后以1500xg轉(zhuǎn)速離心2分鐘以分成三層。取最上部的水層100μl為樣本，按以下說明的方法測(cè)定IP3含量。
IP3結(jié)合測(cè)試用大鼠小腦膜作為結(jié)合測(cè)試中IP3-結(jié)合蛋白質(zhì)的來源，該測(cè)試由已發(fā)表的方法改進(jìn)(P.F.Worley等，腦中三磷酸肌醇酯受體結(jié)合的鑒定，J.Biol.Chem.,262:12132-12136(1987)及D.S.Bredt等，生物組織中1,4,5-三磷酸肌醇酯的簡便、靈敏及專一的放射性受體測(cè)試試驗(yàn)，Biochem.Biophys.Res.Commun.,159:976-982(1989))。膜是通過將在30體積均化緩沖液(在50mM Tris·HCl,pH7.7中的1mMEDTA和1mM 2-巰基乙醇)中，用Tissumizer(Tekmar)以65設(shè)置，均化鼠小腦15秒而制成。將均化物在4℃下以39800xg轉(zhuǎn)速離心10分鐘。將該步驟再重復(fù)三次以上，一共四次洗滌。將最后的粒狀沉淀物懸浮于30體積的IP3結(jié)合緩沖液(在64.3mM Tris·HCl,pH 9.0中的1mMEDTA和1mM 2-巰基乙醇)中，然后于-70℃下冷凍，待用。
將結(jié)合緩沖液(350μl，含[3H]IP3)及50μl結(jié)合蛋白質(zhì)均漿加入到100μl已經(jīng)過以上所述提取過程的提取的IP3樣本液或已知的IP3標(biāo)準(zhǔn)液中。[3H]IP3的最后濃度為1nM。將此管在0℃下孵育15分鐘，然后用Brandel細(xì)胞收集器通過Whatman GF/B濾器過濾[濾器用水先潤濕，再用2ml冰冷的IP3洗滌緩沖液(1mM EDTA于50mM Tris·HCl,pH 9.0中)預(yù)冷)]。然后將濾器用1ml冰冷的IP3洗滌緩沖液快速洗滌二次。截留在濾器上[3H]IP3的量通過液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定。樣本中IP3的量通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比確定。
當(dāng)表達(dá)5-HT2B受體的細(xì)胞在加入5-HT之前與米安舍林、二甲麥角新堿、rauwolscine或l-NP預(yù)孵育時(shí)，5-HT曲線向右移而Emax值相對(duì)于5-HT本身降低。5-HT2A與5-HT2C受體結(jié)合活性化合物結(jié)合5-HT2A或5-HT2C受體的能力用以下所列的標(biāo)準(zhǔn)方法來測(cè)定。測(cè)試方法從轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系得膜制品。使用與人-5-HT2A與5-HT2C受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的AV12細(xì)胞(Syrian hamster fibroblast,ATCC no.CRL 9595)來制備膜(Wainscott等，新克隆大鼠5-羥色胺2F受體的藥理特性，Mol.Pharmacol.,48:419-426(1993))。簡單地說，表達(dá)有關(guān)受體的細(xì)胞在懸浮液中生長且通過離心收集。再將細(xì)胞懸浮于最小體積的低滲緩沖液50mM Tris-HCl,pH 7.4中，再在-70℃下冷凍，備用。在測(cè)試當(dāng)天，將所述懸浮液解凍，用50mM Tris-HCl稀釋至35ml/0.5×102細(xì)胞(原始細(xì)胞數(shù))，再在4℃下以39800xg轉(zhuǎn)速離心。將得到的粒狀沉淀物通過旋轉(zhuǎn)再懸浮，再在37℃下孵育10分鐘，然后在4℃下以39800xg轉(zhuǎn)速離心。將粒狀沉淀物再進(jìn)行一次懸浮及離心。為得到均化的膜懸浮液，用Tissumizer(Tekmar,Cincinnati,OH)在設(shè)置75下，將最終的粒狀沉淀物在67mM Tris-HCl,pH 7.4中再懸浮10-15秒鐘，以作為表達(dá)人或大鼠的5-HT2A受體的細(xì)胞，或在含有13mM MgCl2及0.67mMEDTA的67mM Tris-HCl,pH 7.4中再懸浮10-15秒鐘，以作為表達(dá)人的5-HT2C受體的細(xì)胞。
5-HT2A,2C[125I]DOI結(jié)合研究人的5-HT2A或5-HT2C結(jié)合研究基本上按[3H]5-HT結(jié)合5-HT2B受體中說明的方法，帶有下列例外來進(jìn)行。在最后濃度中，測(cè)試緩沖液含有10mM巴吉林、9.75mM MgCl2、0.5mM EDTA、0.1％抗壞血酸鈉及50mM Tris-HCl,pH 7.4。分別與約40及30mg的5-HT2A及5-HT2C受體蛋白質(zhì)在37℃下孵育30分鐘，然后通過在0.5％(w/v)聚乙烯亞胺中預(yù)浸及用4ml冰泠的洗滌緩沖液預(yù)冷的Whatman GF/C濾器過濾。然后用1ml冰冷的洗滌緩沖液快速洗滌濾器4次。用伽馬計(jì)數(shù)器測(cè)定截留在濾器上的[125I]DOI的量。測(cè)定用10mM米安舍林對(duì)5-HT2C及1mM酮舍林對(duì)5-HT2A受體的非特異性結(jié)合。[125I]DOI的最后濃度對(duì)競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)來說約為0.07-0.15mM。
統(tǒng)計(jì)分析飽和及競(jìng)爭(zhēng)曲線的非線性回歸分析按前面提到的方法進(jìn)行(Wainscott等，新克隆大鼠5-羥色胺2F受體的藥理特性，Mol.Pharmacol.,48:419-426(1993))。在pK1值(即logK,molar)上進(jìn)行單向方差分析，接著進(jìn)行Tukay-kramer簡單顯著性差異檢驗(yàn)(JMP；SASInstitute Inc.,Cary,Nc)。用Cheng-Prusoff(1973)方程將競(jìng)爭(zhēng)曲線的IC50值轉(zhuǎn)化成Kd值。對(duì)[125I]DOI標(biāo)記的受體而言，5-HT2A或5-HT2C受體[125I]DOI的Kd值用重排Cheng-Prusoff方程來測(cè)定Kd=IC50-[L]，其中IC50為引起50％特異[125I]DOI結(jié)合抑制的未標(biāo)記DOI的濃度，[I]=[125I]DOI的游離濃度。
5-HT2A及5-HT2C轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中IP3形成5-HT2A及5-HT2C轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中IP3形成測(cè)試按5-HT2B轉(zhuǎn)化細(xì)胞中IP3形成相同的方法進(jìn)行，其例外為對(duì)于5-HT2C用人的AHSlC-3S細(xì)胞而對(duì)于5-HT2A用人的Hu2-3S細(xì)胞。
建議用下列實(shí)驗(yàn)檢測(cè)用于治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的5-HT2拮抗劑的效用。實(shí)驗(yàn)#1在實(shí)驗(yàn)前16-24小時(shí)，將重250-400g的雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，用甲氧氟烷(Metofane)通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三種濃度的血清素用26號(hào)的皮下針真皮下注射。另外，給每個(gè)動(dòng)物真皮下注射0.05ml鹽水來表明由于注射出現(xiàn)的血管滲漏的量。在真皮下注射血清素之前15分鐘，腹膜內(nèi)給予樣品1(6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽)、樣品2(螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚)、樣品3(6-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)-甲基]-,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚)及樣品4(6-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)-甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽)。真皮下注射血清素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍(lán)染料(35mg/kg)。為得到最大響應(yīng)，在真皮下注射血清素30分鐘之后，通過頸部離位處死動(dòng)物。反映的皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0N KOH中，在37℃下孵育16-20小時(shí)。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉(zhuǎn)，然后離心(400xg,25min)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectronic 710分光光度計(jì)在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍(lán)染料的光密度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中確定未知樣品的Evans藍(lán)染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總?cè)玖蠟檠軆?nèi)及血管外染料的總和，我們通過測(cè)定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數(shù)，按單位重量計(jì)算，再減去其它每片皮膚的量來修正血管內(nèi)染料的量。
用方差分析來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，接著進(jìn)行Dunnett的檢驗(yàn)以比較均值。當(dāng)p＜0.05時(shí)，認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果血清素在真皮下給藥時(shí)能使皮膚的染料外滲增加。當(dāng)用真皮下注射血清素激發(fā)前15分鐘給藥時(shí)，樣品1-4(0.1及1.0mg/kg,i.p.)的劑量依賴性地抑制血清素誘導(dǎo)的皮膚血管滲透性的增加。實(shí)驗(yàn)#2在實(shí)驗(yàn)前16-24小時(shí)，將重250-400g雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，用甲氧氟烷通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三個(gè)濃度的蜜蜂毒素(天然懸浮液，Sigma#V 3250)用26號(hào)皮下針真皮下注射。另外，給每個(gè)動(dòng)物真皮下注射0.05ml鹽水來標(biāo)明由于注射出現(xiàn)的血管滲漏的量。真皮下注射蜜蜂毒素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍(lán)染料(35mg/kg)。為得到最大響應(yīng)，在真皮下注射蜜蜂毒素30分鐘之后頸部離位處死動(dòng)物。反映皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0NKOH中，在37℃下孵育16-20小時(shí)。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉(zhuǎn)，然后離心(400xg,25min)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectronic 710分光光度計(jì)在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍(lán)染料的光密度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中確立未知樣品的Evans藍(lán)染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總?cè)玖蠟檠軆?nèi)及血管外染料的總和，我們通過測(cè)定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數(shù)，按單位重量計(jì)算，再減去其它每片的量來修正血管內(nèi)染料的量。
用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，接著進(jìn)行Dunnett的檢驗(yàn)以便比較均值。當(dāng)p＜0.05時(shí)，認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果蜜蜂毒素在皮下給藥時(shí)能使皮膚的染料外滲增加。實(shí)驗(yàn)#3在實(shí)驗(yàn)前16-24小時(shí)，將重250-400g雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，用甲氧氟烷通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三個(gè)濃度的蜜蜂毒素(天然懸浮液，Sigma#V 3250)用26號(hào)皮下針真皮下注射。另外，給每個(gè)動(dòng)物真皮下注射0.05ml鹽水來表明由于注射出現(xiàn)的血管滲漏的量。在真皮下注射蜜蜂毒素前15分鐘，腹膜內(nèi)注射樣品1-4。真皮下注射蜜蜂毒素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍(lán)染料(35mg/kg)。為得到最大響應(yīng)，在真皮下注射蜜蜂毒素30分鐘之后頸部離位處死動(dòng)物。反映皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0N KOH中，在37℃下孵育16-20小時(shí)。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉(zhuǎn)，然后離心(400xg,25分鐘)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectromic 710分光光度計(jì)在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍(lán)染料的光密度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中確立未知樣品的Evans藍(lán)染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總?cè)玖蠟檠軆?nèi)及血管外染料的總和，我們通過測(cè)定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數(shù)，按單位重量計(jì)算，再減去其它每片的量來修正血管內(nèi)染料的量。結(jié)果蜜蜂毒素在皮下給藥時(shí)能使皮膚的染料外滲增加。當(dāng)皮下注射血清素激發(fā)前15分鐘給藥時(shí)，樣品1-4(0.1及1.0mg/kg i.p)劑量依賴性地抑制蜜蜂毒素誘導(dǎo)的皮膚血管滲透性的增加。
盡管可能將用在本發(fā)明方法中的化合物不經(jīng)任何制劑形式直接給藥，但通常該化合物以含有藥學(xué)上可接受的賦形劑及至少一種活性組分(本發(fā)明的化合物)的藥用組合物形式給藥。這些組合物含有約0.1-90.0％(重量)的本發(fā)明化合物。這些組合物可通過多種途徑給藥，包括口服、直腸、局部、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)及鼻腔內(nèi)給藥。許多用于本發(fā)明方法中的化合物作為注射、口服及局部的組合物都有效。這些組合物以制藥領(lǐng)域熟知的方法制備，含有至少一種活性化合物[見如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES，(16版，1980)]。
在制備本發(fā)明所用的組合物中，通常將活性成分與一賦形劑混合、用一種賦形劑稀釋或者在一種以膠囊、香囊、紙或其它容器形式的載體中包封。當(dāng)所述賦形劑被用作稀釋劑時(shí)，它可為固體、半固體或液體物質(zhì)，其作用為活性成分的溶媒、載體或介質(zhì)。因此，該組合物可為片劑、小丸、粉末、錠劑、香囊、扁膠囊劑、酏劑、懸浮液、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠(以固體或于液體介質(zhì)中)、含有如達(dá)10％(重量)的活性化合物的軟膏、軟或硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌包裝粉末。
在制備制劑中，有必要在與其它成分混合前將活性化合物研磨以提供適當(dāng)?shù)牧６?。如果活性化合物基本上是不溶的，通常將其研磨成粒度小?00目。如果活性化合物基本上是水溶性的，一般通過研磨調(diào)節(jié)粒度，以提供制劑中基本均勻的分布，如約40目。
一些適當(dāng)?shù)妮d體、賦形劑及稀釋劑的實(shí)例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、黃蓍膠、明膠、水、糖漿及甲基纖維素。這些制劑另外可包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；潤濕劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑如羥基苯甲酸甲酯和丙酯；甜味劑及香味劑。通過應(yīng)用本領(lǐng)域中熟知的方法，可以配制本發(fā)明的組合物，以便在給藥后速釋、持續(xù)釋放或緩釋活性成分。
可用已知的透皮傳遞系統(tǒng)和賦形劑將本發(fā)明的化合物透皮傳遞。最優(yōu)選將本發(fā)明的化合物與滲透增強(qiáng)劑混合，該滲透增強(qiáng)劑包括(但不限于此)丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯及氮雜環(huán)烷-2-酮，并摻入貼劑或類似傳遞系統(tǒng)中?？蓪z凝劑、乳化劑及緩沖劑的另外的賦形劑加入到所述的透皮制劑中。
對(duì)于局部給藥來說，為形成粘性液或乳狀制劑，一般將本發(fā)明的化合物與各種賦形劑充分混合。
對(duì)口服給藥來說，一般將本發(fā)明的化合物與載體及稀釋劑充分混合，再壓制成片劑或用明膠膠囊包封。
優(yōu)選將所述組合物制成含有約0.05-約100mg，更通常為約1.0-約30mg活性成分的單位劑量形式。術(shù)語“單位劑量形式”指適于以單位的劑量給予患者或其它哺乳動(dòng)物的物理上獨(dú)立的單位，每個(gè)單位含有計(jì)算能產(chǎn)生所要求的藥理效應(yīng)的預(yù)定量的活性物及適當(dāng)?shù)乃幱觅x形劑。
一般活性化合物在一很寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如，一般每目的劑量在每公斤體重約0.01-約30mg的范圍內(nèi)。在成年人的治療中，單劑量或分劑量的特別優(yōu)選范圍為0.1-約15mg/kg/天。但是，應(yīng)理解實(shí)際給藥劑量將由主治醫(yī)師根據(jù)有關(guān)情況而定，包括治療的癥狀、所選的給藥途徑、實(shí)際給藥的化合物、個(gè)別患者的年齡、體重及反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重性，因此以上的劑量范圍并不在任何方面限制本發(fā)明的范圍。在某些情況下，低于上面所說的范圍的下限的劑量水平更為適合，而在其它一些情況下，可應(yīng)用在不引起任何有毒副作用下更大的劑量，條件是將這些較大的劑量首先分成幾個(gè)較小劑量在一天內(nèi)給藥。
為了更充分說明本發(fā)明的操作，提供下列制劑的實(shí)施例。這些實(shí)施例只用于說明，并不限制本發(fā)明的范圍。這些制劑可利用作為活性成分(化合物)的本發(fā)明的任何化合物。
制劑制備1制備含有下列組分的硬明膠膠囊組分 用量(mg/膠囊)活性組分 100.0淀粉 235.0硬脂酸鎂 5.0將以上組分混合，再以340mg量裝入硬明膠膠囊中。
制劑制備2用下列組分制備片劑組分 用量(mg/片)活性組分 100.0
吲微晶纖維素 125.0膠態(tài)二氧化硅 10.0硬脂酸 5.0將各組分混合，再壓制成片，每片重240mg。
制劑制備3制備含下列組分的干粉吸入劑組分 重量％活性組分 5乳糖 95將活性混合物與乳糖混合，再將混合物加入到干粉吸入裝置中。
制劑制備4每片含30mg活性組分的片劑按如下制備組分用量(mg/片)活性組分 30.0mg淀粉 45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮4.0mg(為10％的水溶液)羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石粉1.0mg總計(jì) 120.mg
將活性組分、淀粉及纖維素通過20目美國篩，再徹底混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與上面得到的粉末混合，然后過16目美國篩。將所得顆粒在50-60℃下干燥，再通過16目美國篩。然后將預(yù)先通過30目美國篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂及滑石粉加入到該顆粒中，攪拌后，在壓片機(jī)上壓制得每片重120mg的片劑。
制劑制備5每粒含40mg藥物的膠囊按如下制備組分 用量(mg/膠囊)活性組分 40.0mg淀粉109.0mg硬脂酸鎂 1.0mg總計(jì)150.0mg將活性組分、纖維素、淀粉及硬脂酸鎂混合，過20目美國篩，再以150mg量裝入硬明膠膠囊中。
制劑制備6每粒含25mg活性組分的栓劑按如下制備組分用量活性組分 25mg飽和脂肪酸甘油酯 至2000mg使活性組分過60目美國篩，再將其混懸于預(yù)先用所需最少的熱量熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合液倒入公稱2.0g容量的栓劑模中，冷卻。
制劑制備7每5ml劑量含有50mg藥物的混懸液按如下制備組分 用量活性組分 50.0mg合成生物聚合膠 4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)微晶纖維素(89％) 50.0mg蔗糖 1.75g苯甲酸鈉 10.0mg調(diào)味劑及著色劑 適量純水 至5.0ml將藥物、蔗糖及合成生物聚合膠混合，過10目美國篩，然后與預(yù)先制得的微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。將苯甲酸鈉、調(diào)味劑及著色劑用部分水稀釋并在攪拌下加入。然后加入足量的水以達(dá)到所要求的體積。
制劑制備8每粒含有15mg藥物的膠囊按如下制備組分 用量(mg/膠囊)活性組分 15.0mg淀粉 407.0mg硬脂酸鎂 3.0mg總計(jì) 425.0mg將活性組分、纖維素、淀粉及硬脂酸鎂混合，過20目美國篩，再以425mg量裝入硬明膠膠囊。
制劑制備9靜脈注射劑可按如下制備組分 用量活性組分250.0mg等滲鹽水1000ml制劑制備10局部制劑按如下制備組分 用量活性組分1-10g乳化蠟 30g液體石蠟20g白色軟石蠟 至100g將白色軟石蠟加熱至熔化。將該液體石蠟與乳化蠟混合，攪拌至溶解。加入活性組分，繼續(xù)攪拌至分散。然后冷卻該混合物成固體。
制劑制備11每片含10mg活性組分的舌下及口腔片劑可按如下制備組分 每片用量活性組分 10.0mg甘油 210.5mg水143.0mg檸檬酸鈉 4.5mg聚乙烯醇 26.5mg聚乙烯吡咯烷酮15.5mg
總計(jì) 410.0mg將甘油、水、檸檬酸鈉、聚乙烯醇及聚乙烯吡咯烷酮在持續(xù)攪拌且保持溫度約90℃下一起混合。當(dāng)聚合物進(jìn)入溶液后，將溶液冷卻至約50-55℃，再慢慢混入藥物。將此均相混合液倒入由惰性材料制成的結(jié)構(gòu)中，得到含藥物具有約2-4mm厚度的擴(kuò)散基質(zhì)。然后將該擴(kuò)散基質(zhì)切成具有適當(dāng)大小的單片。
另一優(yōu)選用于本發(fā)明方法中的制劑應(yīng)用透皮傳遞裝置(“貼劑”)。可用這些透皮貼來提供以控制劑量的持續(xù)或間斷的本發(fā)明化合物的輸注。這些用于傳遞藥劑的透皮貼的制造及使用在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的(見如美國專利第5023252號(hào)，1991年6月11日授權(quán)，在此結(jié)合到本發(fā)明中作為參考)?？蓪⑦@些貼制成供持續(xù)、間斷或按要求傳遞給藥的形式。
一般為優(yōu)選的間接技術(shù)通常包括通過將親水性藥物轉(zhuǎn)化成脂溶性藥物或前藥來配制可提供藥物潛伏作用(latentiation)的所述組合物。潛伏作用一般通過將藥物上呈現(xiàn)的羥基、羰基、磺酸酯基及伯胺基封閉，以使藥物脂溶性增加而更易透過血腦屏障來達(dá)到。另外，親水性藥物的傳遞可通過能瞬時(shí)打開血腦屏障的高滲溶液的動(dòng)脈內(nèi)輸注而增強(qiáng)。
使用本發(fā)明方法中所用的化合物的給藥的制劑類型可由所用的具體化合物、給藥途徑及化合物所要求的藥物動(dòng)力學(xué)分布的類型以及患者的狀況來決定。
權(quán)利要求
1．一種或多種具有作為5-HT受體拮抗劑活性的化合物或組合物在制備用于治療或緩解哺乳動(dòng)物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
2．一種或多種具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物在制備用于治療或緩解哺乳動(dòng)物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
3．按權(quán)利要求2中要求的用途，其中使用一種具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物。
4．按權(quán)利要求3中要求的用途，其中所述5-HT2受體拮抗劑為5-HT2A、5-HTB或5-HTC受體拮抗劑。
5．權(quán)利要求3的方法，其中所述5-HT2受體拮抗劑為受體亞型5-HT2A和5-HT2B、5-HT2A和5-HT2C、5-HT2B和5-HT2C或5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C的5-HT2受體拮抗劑。
6．按權(quán)利要求2中要求的用途，其中使用一種以上的具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物。
7．按權(quán)利要求6中要求的用途，其中每個(gè)5-HT2受體拮抗劑是不同受體亞型的受體拮抗劑。
8．按權(quán)利要求6中要求的用途，其中每個(gè)5-HT2受體拮抗劑為對(duì)多個(gè)受體亞型具有親合力的受體拮抗劑。
9．按權(quán)利要求6中要求的用途，其中所述5-HT2受體拮抗劑為對(duì)單個(gè)受體亞型具有親合力的受體拮抗劑及對(duì)多個(gè)受體亞型具有親合力的受體拮抗劑的混合物。
10．下式的5-HT2受體拮抗劑
其中R1為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R6選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、CO2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5和OR5；R7和R8獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、NO2、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷?；?、C7-C16芳基烷基、CO2R5、(C1-C6烷基)m氨基、-SR5和OR5；n為1、2或3；n’為1、2或3；m為1或2；R5獨(dú)立為氫或C1-C4烷基；R5’為C1-C4烷基；…可任選為一個(gè)鍵；及其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑化物，在制備用于治療或緩解哺乳動(dòng)物體上毒性叮咬或叮剌癥狀的藥物中的用途。
11．下式的5-HT2受體拮抗劑
其中Q為氫或(CHR2)R4；R1為氫或C1-C3烷基；R2為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R4為C5-C8環(huán)烷基、取代的C5-C8環(huán)烷基、C5-C8鏈烯基、取代的C5-C8環(huán)烯基、雙環(huán)或取代的雙環(huán)；A選自
其中，R6和R7獨(dú)立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷?；O2R5、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5或OR5；m為1或2；R5獨(dú)立為氫或C1-C4烷基；R5為C1-C4烷基；R8獨(dú)立選自R6基團(tuán)、取代的C3-C8環(huán)烷基、C3-C8環(huán)烷基、C3-C8環(huán)烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8環(huán)烯基、取代的C5-C8環(huán)烯基、C5-C8環(huán)烯基-(C1-C3)烷基及C7-C16芳基烷基；或R6和R7與基團(tuán)A的碳原子一起形成一個(gè)5-8元碳環(huán)，或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑化物，在制備用于治療或緩解哺乳動(dòng)物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
12．藥用組合物，它含有用于治療或緩解哺乳動(dòng)物體上毒性叮咬或叮剌癥狀的5-HT2受體拮抗劑。
全文摘要
本發(fā)明提供治療或緩解毒性叮咬或叮刺癥狀的方法,它包括給予需要此治療的哺乳動(dòng)物一種或多種5－HT
文檔編號(hào)A61K31/403GK1219104SQ97194729
公開日1999年6月9日 申請(qǐng)日期1997年3月17日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月25日
發(fā)明者M·L·克亨, K·W·約翰遜 申請(qǐng)人:伊萊利利公司