專利名稱：抗病毒新化合物短葉蘇木酚酸甲酯及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，是關于一種具有抗病毒活性的化合物。
乙型肝炎是危害人類健康的主要傳染病之一。國內約有10%的人口攜帶乙肝表面抗原。目前治療乙肝的藥物及其乙肝疫苗的研究雖有進展，但至今仍無良好的特效藥。為了研究治療乙型肝炎的藥物，世界各國都投入了很大的人力、財力。美國費城癌癥研究中心的布侖伯博士(Dr.B.Blumberg)采用植物藥粗篩，發(fā)現葉下珠粗提物，抑制乙肝表面抗原的活性達82%，但均屬粗提取物。
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗病毒活性的新化合物，以及從葉下珠中提取這種新化合物的方法。
本發(fā)明自葉下珠中分離、純化得到的這種抗病毒活性化合物為短葉蘇木酚酸甲酯(Methy Brevifolin-carboxlate)，其結構式為
該化合物可作為制備抗病毒新藥。
用化學反應、紫外、紅外、核磁共振和質譜等現代波譜方法對提取的新化合物的結構進行了鑒定。在結構鑒定中還采用了二維核磁共振及其1H-1H COSY、13C-1HCOSY、遠程13C-1H及DEPT、INEPT等新技術、新方法，鑒定結果如下短葉蘇木酚酸甲酯為微黃色針晶.m.p.200℃(分解，二甲亞砜)。高分辨質譜給出分子式C14H10O0(M306.0376，計算值306.0376)。三氯化鐵反應陽性，氫氧化鉀反應陽性。聚酰胺薄膜上顯黃色熒光。
UV(λMEOHmaxnm，logε)218.5(4.57)，279.0(4.95)，349.0(4.62)，369.0(4.62)與文獻報道的短葉蘇木酚酸乙酯(ethyl brevifolinca rboxylate)基本一致。
IR(VKBrmaxcm-1)3387，3140(OH)，1720，1698(C＝o)，1634(C＝C)，1598，1498(芳環(huán)骨架振動)。
比較本品與短葉木酚乙酸的1H-NMR，其芳香氫信號δ7.29(1H，S)，酚羥基信號δ10.20(3H，b)，和所呈現的ABX系統信號，δ2.46(1H，dd，j＝2HZ)，2.98(1H，dd，j＝8HZ，19HZ)，4.42(1H，dd，j＝8HZ，2HZ)均與短蘇葉木酚酸乙酯相近。所不同的是短葉蘇木酚酸乙酯呈現OCH2CH3的A2X3系統的信號，而本品代之以OCH3的δ3.62(3H，S)氫信號。
比較本品和短葉蘇木酚酸乙酯的13C-NMR(見表-1)。短葉蘇木酚酸乙酯有OCH2CH3中的兩個碳信號，而本品代之以OCH3碳信號。其它碳信號相同。
由以上推斷表明，本品為葉蘇木酚酸甲酯(Methyl brevifolin carboxlate)，為一新化合物，其結構式為
1H-1H COSY，13C-1H COSY，遠程13C-1H COSY進一步驗證了短葉蘇木酚酸甲酯的結構。并據此對短葉蘇木酚酸甲酯的13C-NMR進行了歸屬。從而通過比較對短葉蘇木酚酸乙酯的13C-NMR重新進行了歸屬(見表-1)。
本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的質譜裂解規(guī)律見附

圖1。
本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的高分辨碎片組成見表-2。
本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的1H-1H COSY譜見附圖2;13C-1H COSY譜見附圖3;遠程13C-1H COSY譜見附圖4;DEPT譜見附圖5。
表-2 短葉蘇木酚酸甲酯的高分辨質譜碎片組成
進一步測定了新化合物短葉蘇木酚酸甲酯的抗病毒活性。
按通常測定藥物抗病毒活性的方法，以人宮頸癌Hela細胞測定藥物對細胞毒性(TO50)，再觀察藥物對人單純皰疹病毒HSV-1 STAKER株和HSV-2 SAR株的抗病毒作用，測定ED50，并計算其保護指數(PI)。陽性對照藥物采用病毒唑(三氮唑核苷，virazole)，結果如表3、4、5、6、7所示。
表3，人單純皰疹病毒Hsv-1，Hsv-2致Hela細胞病變記錄(CPE)
表4 人單純細胞病毒HSV-1、HSV-2對Hela細胞致死作用及TCID50(MTT法)
表5 不同濃度藥物對Hela細胞的殺傷率(%)及TD50
表6 短葉蘇木酚酸甲酯抗HSV-1病毒作用(ED50)及保護指數(PI)
表7 短葉蘇木酚酸甲酯抗HSV-2病毒作用(ED50)及保護指數(PI)
表3-7結果表明，短葉蘇木酚酸甲酯對人單純皰疹病毒HSV-1、HSV-2株有肯定的和顯著的抗病毒活性。
本發(fā)明所述的短葉蘇木酚酸甲酯是從葉下珠中提取、分離、純化得到的新化合物。葉下珠為大戟科油柑屬植物，本發(fā)明所用的葉下珠均采用福建武夷山區(qū)，提取這種新化合物主要包括以下幾個步驟1、取干燥葉下珠全草粉碎到適當細度;
2、先用石油醚脫脂，并分離出脫脂液;
3、分離出的藥渣用甲醇充分提取;
4、用減壓蒸餾濃縮甲醇提取液，得到一種甲醇浸膏;
5、加水混懸，浸膏并依次以氯仿及正丁醇分配;
6、分離出正丁醇分配相，再進行濃縮;
7、以硅膠低壓柱層析并以氯仿-甲醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫得到短葉蘇木酚酸甲酯粗品;
8、二次用硅膠柱層析純化;
9、用甲醇-氯仿重結品，得到純短葉蘇木酚酸甲酯。
以下對附圖作一說明附圖1為本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的質譜裂解圖;
附圖2為本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的1H-1HCOSY譜圖。
附圖3為本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的13C-1HCOSY譜圖。
附圖4為本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的遠程13C-1HCOSY譜圖。
附圖5為本發(fā)明短葉蘇木酚酸甲酯的DEPT譜圖。
下面再用一個實際例子對本發(fā)明自葉下珠中提取短葉蘇木酚酸甲酯的方法作進一步描述，取干燥葉下珠全草，打成粗粉，置入索氐提取器中，先加石油醚脫脂后，把藥渣涼干，再用甲醇充分提取。分出甲醇提取液，用減壓蒸餾濃縮甲醇提取液，得到甲醇浸膏。將此浸膏加適量水混懸，依次以氯仿及正丁醇分配，將正丁醇取出減壓濃縮后，以硅膠及硅藻土拌料，硅膠低壓柱層析，用氯仿-甲醇-水作梯度洗脫，分別收集洗脫液，每份250毫升，在第36份起得到短葉蘇木酚酸甲酯粗品。該粗制品再經過硅膠柱二次純化，用甲醇-氯仿重結晶，即得到純短葉蘇木酚酸甲酯。
本發(fā)明以葉下珠中提取的這種短葉蘇木酚酸甲酯，經實驗證實這種新化合物具有顯著的抗病毒活性，從而為開發(fā)這一新的抗病毒新藥奠定了化學的和生物學的基礎，并可直接用于開發(fā)抗病毒新藥。
權利要求
1.一種從葉下珠提取的抗病毒活性化合物，其特征在于所說的抗病毒活性化合物為短葉蘇木酚酸甲酯，其結構式為
該化合物可作為制備抗病毒新藥。
2.按照權利要求1所述的抗病毒活性化合物的提取方法，其特征在于包括以下提取步驟2-1、粉碎干燥的葉下珠全草;2-2、用石油醚脫脂，分離脫脂液;2-3、浸取渣用甲醇充分提取;2-4、減壓蒸餾濃縮甲醇提取液，得甲醇浸膏;2-5、浸膏加水混懸;2-6、依次以氯仿及正丁醇分配;2-7、分離出正丁醇萃取液相，并進行濃縮;2-8、以硅膠低壓柱層析;2-9、以氯仿-甲醇-水梯度洗脫，取得短葉蘇木酚酸甲酯粗品;2-10、二次用硅膠柱層析純化;2-11、以甲醇-氯仿重結晶，得到純短葉蘇木酚酸甲酯。
全文摘要
一種抗病毒新化合物短葉蘇木酚酸甲酯，以葉下珠全草為原料，通過粉碎、脫脂、甲醇提取、硅膠柱低壓層析，以氯仿-甲醇-水梯度洗脫，制得粗品，并用甲醇-氯仿重結晶后得到短葉蘇木酚酸甲酯純品。實驗證明該化合物具有顯著的抗病毒活性。本發(fā)明為開發(fā)新的抗病毒新藥奠定了化學和生物學的基礎，并可直接用于開發(fā)抗病毒新藥。
文檔編號A61K31/35GK1093362SQ9311518
公開日1994年10月12日 申請日期1993年10月30日 優(yōu)先權日1993年10月30日
發(fā)明者左春旭, 李鳳琴, 姚慶強, 仲英, 丁杏苞, 楊尚軍 申請人:山東省醫(yī)學科學院藥物研究所