本發(fā)明涉及減肥降脂藥物或者保健品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：高血脂癥是人類(lèi)健康的重要威脅，可以導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病。很多現(xiàn)代人有身材肥胖、體制過(guò)多的問(wèn)題，不僅影響形象，還有增加身體負(fù)擔(dān)和患病機(jī)率等諸多危害。殼聚糖，已被證明具有降低血漿膽固醇的作用，可能在心血管疾病的預(yù)防和治療中發(fā)揮重要作用的影響，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，由于帶正電的殼聚糖與帶負(fù)電的脂質(zhì)通過(guò)靜電作用，減少了動(dòng)物胃腸道對(duì)脂質(zhì)的吸收，從而降低血清膽固醇。目前，評(píng)估殼聚糖的降血脂效果所采用的灌胃劑量為2～5g/kg·d。1997年，日本健康、勞動(dòng)與福利部門(mén)將殼聚糖作為一種特殊的健康功能食品，規(guī)定人體口服劑量為每天0.5～3g。幾丁質(zhì)納米纖維與殼聚糖相比而言，雖然其表面氨基含量較低(約0.06～0.35)，但具有高密度的電荷。其中，經(jīng)脫乙酰處理后幾丁質(zhì)納米纖維表面具有高密度正電荷的特性(zeta-電位約+20～70mv)，而氧化幾丁質(zhì)納米纖維表面具有高密度負(fù)電荷的特性(zeta-電位約﹣60mv左右)。同時(shí)幾丁質(zhì)納米纖維還兼具結(jié)晶度高和納米尺度效應(yīng)，能夠形成纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。這些優(yōu)異的特性為幾丁質(zhì)納米纖維實(shí)現(xiàn)對(duì)脂質(zhì)的靜電吸附和包埋提供了可能。因此，開(kāi)發(fā)一種基于幾丁質(zhì)納米纖維的減肥降脂產(chǎn)品是十分有必要的。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物，將具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物應(yīng)用，能夠緩解高脂血癥，有望開(kāi)發(fā)成為新的減肥降脂藥物或保健食品。技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物，由以下質(zhì)量百分比的原料組成：水分97～99.95％，幾丁質(zhì)納米纖維0.05～3％。所述的幾丁質(zhì)來(lái)源為節(jié)肢動(dòng)物如蟹、蝦的外骨骼，魷魚(yú)頂骨，昆蟲(chóng)的角質(zhì)層以及某些真菌的細(xì)胞壁。所述的幾丁質(zhì)納米纖維的制備方法為直接機(jī)械分散法或化學(xué)脫乙酰基法(濃堿熱解脫乙?；?或化學(xué)氧化法(tempo-naclo-nabr氧化法)或酶法氧化法(tempo-漆酶-o2氧化法)。所述幾丁質(zhì)納米纖維的脫乙酰度為0.06～0.35。所述的幾丁質(zhì)納米纖維組合物的ph為1～10。所述的幾丁質(zhì)納米纖維組合物在制備減肥藥物或減肥保健品中的應(yīng)用。所述的幾丁質(zhì)納米纖維組合物在制備降脂藥物或保健品中的應(yīng)用。一種具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物，由以下質(zhì)量百分比的原料組成：水分，幾丁質(zhì)納米纖維0.05～3％，0.1ppm～10％的ph調(diào)節(jié)劑，各組分質(zhì)量百分比之和為100％；所述的ph調(diào)節(jié)劑選自醋酸、鹽酸、具有不同解離常數(shù)的羥基酸(果酸系列)、維生素c、一元羧酸、多元羧酸、烯烴基酸、氨基酸以及其他無(wú)機(jī)酸。該幾丁質(zhì)納米纖維組合物的ph至1～5。所述的幾丁質(zhì)納米纖維組合物在制備減肥藥物或減肥保健品中的應(yīng)用。所述的幾丁質(zhì)納米纖維組合物在制備降脂藥物或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明的具有減肥降脂作用的幾丁質(zhì)納米纖維組合物的應(yīng)用，對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，劑量為5～100mg/kg·d。本發(fā)明的預(yù)防和治療方案如下：預(yù)防肥胖型實(shí)驗(yàn)：(1)將小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)，高脂對(duì)照組(control)，實(shí)驗(yàn)組(chns)，實(shí)驗(yàn)周期為30天。(2)檢測(cè)(1)小鼠的部分生化指標(biāo)。應(yīng)用性能檢測(cè)如下：體重、體脂、血脂、器官、肝組織檢查。預(yù)防方案中的步驟(1)中的幾丁質(zhì)納米纖維分散液，均是對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，劑量為5～100mg/kg·d；過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。預(yù)防方案中的步驟(1)中各分組小鼠的處理方案如下：空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料；高脂對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料；實(shí)驗(yàn)組(chns)：飼喂高脂飼料和幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃(劑量為5～100mg/kg·d)。治療肥胖型實(shí)驗(yàn)：(1)肥胖模型造模：正常組喂食普通飼料，造模組喂食高脂飼料，每天記錄小鼠體重，30天后，計(jì)算肥胖度，造模組每只小鼠實(shí)際體重－正常組平均體重)/正常組平均體重×100％。當(dāng)肥胖度大于20％，肥胖模型建立成功。(2)將肥胖造模成功小鼠分成兩組：對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料；實(shí)驗(yàn)組(chns)：飼喂高脂飼料和幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃(劑量為5～100mg/kg·d)，實(shí)驗(yàn)周期為60天。(3)檢測(cè)(1)小鼠的部分生化指標(biāo)。應(yīng)用性能檢測(cè)如下：體重、體脂、血脂、器官、肝組織檢查。治療方案中的步驟(1)中的幾丁質(zhì)納米纖維分散液，均是對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，劑量為5～100mg/kg·d；過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。治療方案中的步驟(1)中各分組小鼠的處理方案如下：對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料；實(shí)驗(yàn)組(chns)：飼喂高脂飼料和幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃(劑量為5～100mg/kg·d)。有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)本發(fā)明幾丁質(zhì)納米纖維產(chǎn)品具有天然、無(wú)毒、可再生、可生物降解、減肥效果明顯等優(yōu)點(diǎn)，因此可以開(kāi)發(fā)成為新的減肥降脂藥物或保健食品。2)本發(fā)明的幾丁質(zhì)納米纖維的脫乙酰度為0.06～0.35，與殼聚糖(脫乙酰度＞0.7)相比，部分脫乙?；^(guò)程更簡(jiǎn)易，制備工序更加綠色環(huán)保。而且，幾丁質(zhì)納米纖維擁有更高的結(jié)晶度以及優(yōu)良的納米尺度效應(yīng)，能夠形成獨(dú)特的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。3)本發(fā)明的幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃劑量為5～100mg/kg·d，與殼聚糖灌胃劑量2～5g/kg·d相比，幾丁質(zhì)納米纖維分散液的劑量極低，因此該幾丁質(zhì)納米纖維組合物作為減肥降脂產(chǎn)品更加經(jīng)濟(jì)環(huán)保。附圖說(shuō)明圖1是高脂對(duì)照組小鼠肝組織切片照片圖；圖2是幾丁質(zhì)納米纖維組小鼠肝組織切片照片圖。具體實(shí)施方式：下面通過(guò)實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1(1)幾丁質(zhì)的來(lái)源及純化：蟹殼(portunustrituberculatus)，產(chǎn)自中國(guó)南通，蟹殼幾丁質(zhì)的純化方法：1)蟹殼剪成1cm2大小，1mol/lnaoh浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟹殼中的蛋白質(zhì)；2)1mol/lhcl浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟹殼中的鈣鹽等成分；3)重復(fù)以上步驟2～3次，用蒸餾水洗滌至中性，接下來(lái)用0.5％的naclo2、冰醋酸調(diào)節(jié)ph5.0、70℃水浴進(jìn)行漂白2h(要先預(yù)熱一下實(shí)際達(dá)到2.5h)，間歇攪拌(如漂白不徹底，洗滌至中性后進(jìn)行二次漂白)；4)漂白后的樣品用蒸餾水洗滌至中性，而后用榨汁機(jī)粉碎，稱(chēng)重放入封口袋存放于4℃冰箱保存，2天后測(cè)定含水量。(2)部分脫乙酰氨基幾丁質(zhì)的制備：采用濃堿熱解脫乙?；ㄖ苽洳糠置撘阴；鶐锥≠|(zhì)：將干重1g蟹殼幾丁質(zhì)浸泡于25ml35wt％naoh溶液中，90℃水浴，不斷攪拌4h。反應(yīng)結(jié)束后，用蒸餾水清洗部分脫乙酰幾丁質(zhì)至中性，留下水不溶物于4℃冰箱保存，24h后測(cè)定含水量，作為部分脫乙酰氨基幾丁質(zhì)濕樣待用。(3)幾丁質(zhì)納米纖維組合物：取干重部分脫乙酰基幾丁質(zhì)1g，幾丁質(zhì)的脫乙酰度(氨基含量)為0.29，加入蒸餾水，用醋酸調(diào)節(jié)組合物ph3.5，均質(zhì)、超聲成功制備出含幾丁質(zhì)納米纖維0.1％的組合物。(4)將昆明小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料，0.9％生理鹽水灌胃；高脂對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料，ph3.5左右的醋酸溶液灌胃；實(shí)驗(yàn)組(dechns)：飼喂高脂飼料，醋酸分散幾丁質(zhì)納米纖維分散液(ph3.5左右)灌胃，劑量為5mg/kg·d。過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)周期為30天。用本發(fā)明所得的幾丁質(zhì)納米纖維組合物灌胃的昆明小鼠，對(duì)其部分生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。(5)體重及體重增量的檢測(cè)：對(duì)小鼠體重的影響，實(shí)驗(yàn)組(dechns)與高脂對(duì)照組(control)體重在第一周發(fā)生變化，且有顯著性差異，第六天，dechns組小鼠體重增重2.96％，control組小鼠體重增重10.35％，說(shuō)明在喂食高脂飼料的情況下，幾丁質(zhì)納米纖維組合物顯著延緩了小鼠體重的增加。經(jīng)過(guò)18天的喂養(yǎng)，小鼠空白對(duì)照組體重和高脂對(duì)照組體重的增長(zhǎng)率分別為41.48％、32.60％，而實(shí)驗(yàn)組的增長(zhǎng)率為30.50％(表1和表2)，說(shuō)明長(zhǎng)期的幾丁質(zhì)納米纖維喂養(yǎng)，小鼠適應(yīng)了飲食環(huán)境，且劑量為5mg/kg·d的幾丁質(zhì)納米纖維具有一定的延緩小鼠體重增長(zhǎng)的作用。表1幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體重變化分組第2天(g)第6天(g)第10天(g)第14天(g)第18天(g)blank26.98730.08433.28935.36236.827control26.58428.10330.93932.59233.769dechns26.84827.07429.38632.77634.316表2幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體重增量分組第2天第6天第10天第14天第18天blank3.68％15.57％27.89％35.85％41.48％control4.39％10.35％21.49％27.98％32.60％dechns2.10％2.96％11.76％24.65％30.50％實(shí)施例2(1)幾丁質(zhì)的來(lái)源及純化：魷魚(yú)頂骨，魷魚(yú)頂骨幾丁質(zhì)的純化方法：1)魷魚(yú)頂骨在1mol/lnaoh浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除魷魚(yú)頂骨中的蛋白質(zhì)；2)1mol/lhcl浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除魷魚(yú)頂骨中的鈣鹽等成分；3)重復(fù)以上步驟2～3次，用蒸餾水洗滌至中性，接下來(lái)用0.5％的naclo2、冰醋酸調(diào)節(jié)ph5.0、70℃水浴進(jìn)行漂白2h(要先預(yù)熱一下實(shí)際達(dá)到2.5h)，間歇攪拌(如漂白不徹底，洗滌至中性后進(jìn)行二次漂白)；4)漂白后的樣品用蒸餾水洗滌至中性，而后用榨汁機(jī)粉碎，稱(chēng)重放入封口袋存放于4℃冰箱保存，2天后測(cè)定含水量。(2)幾丁質(zhì)納米纖維組合物，直接機(jī)械分散法制備幾丁質(zhì)納米纖維：取干重魷魚(yú)頂骨幾丁質(zhì)1g，幾丁質(zhì)的脫乙酰度(氨基含量)為0.11，加入蒸餾水，用衣康酸調(diào)節(jié)組合物ph4.0，均質(zhì)、超聲成功制備出含幾丁質(zhì)納米纖維0.2％的組合物。(3)將昆明小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料，0.9％生理鹽水灌胃；高脂對(duì)照組(control)，飼喂高脂飼料，ph4.0左右的衣康酸溶液灌胃；實(shí)驗(yàn)組(dechns)：飼喂高脂飼料，衣康酸分散幾丁質(zhì)納米纖維分散液(ph4.0左右)灌胃，劑量為60mg/kg·d。過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)周期為30天。用本發(fā)明所得的幾丁質(zhì)納米纖維組合物灌胃的昆明小鼠，對(duì)其部分生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。(4)器官重量及體脂含量的檢測(cè)：對(duì)小鼠器官的影響，空白對(duì)照組(blank)、高脂對(duì)照組(control)與實(shí)驗(yàn)組(dechns)小鼠各器官占體重的比例差別不大，說(shuō)明各組小鼠器官發(fā)育正常，小鼠正常生長(zhǎng)(表3)。高脂對(duì)照組(control)小鼠腎臟周邊脂肪、睪丸周邊脂肪和腸系周邊脂肪含量比空白對(duì)照組(blank)高，說(shuō)明喂食高脂飼料導(dǎo)致了小鼠的肥胖，肥胖模型建立成功。與高脂對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組(dechns)小鼠體脂含量明顯降低，說(shuō)明幾丁質(zhì)納米纖維對(duì)昆明小鼠具有一定的預(yù)防肥胖的作用(表4)。表3幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠器官重量表4幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體脂重量實(shí)施例3(1)幾丁質(zhì)的來(lái)源及純化：蝦殼，蝦殼幾丁質(zhì)的純化方法：1)蝦殼在1mol/lnaoh浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蝦殼中的蛋白質(zhì)；2)1mol/lhcl浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蝦殼中的鈣鹽等成分；3)重復(fù)以上步驟2～3次，用蒸餾水洗滌至中性，接下來(lái)用0.5％的naclo2、冰醋酸調(diào)節(jié)ph5.0、70℃水浴進(jìn)行漂白2h(要先預(yù)熱一下實(shí)際達(dá)到2.5h)，間歇攪拌(如漂白不徹底，洗滌至中性后進(jìn)行二次漂白)；4)漂白后的樣品用蒸餾水洗滌至中性，而后用榨汁機(jī)粉碎，稱(chēng)重放入封口袋存放于4℃冰箱保存，2天后測(cè)定含水量。(2)氧化幾丁質(zhì)的制備：tempo-漆酶-o2氧化法制備氧化幾丁質(zhì)：配制0.1mph6.8磷酸緩沖液，以緩沖液配制50mmol/ltempo溶液，稱(chēng)取干重1g蝦殼幾丁質(zhì)加入100mltempo溶液，在30℃水浴環(huán)境中進(jìn)行氧化，每隔24h分批添加漆酶，總添加漆酶酶活約500u，總氧化時(shí)間為4d。氧化結(jié)束后，tempo溶液回收(勿稀釋)，氧化幾丁質(zhì)用蒸餾水清洗至電導(dǎo)率接近蒸餾水，留下水不溶物于4℃冰箱保存，24h后測(cè)定含水量，作為tempo-漆酶氧化的幾丁質(zhì)濕樣待用。(3)幾丁質(zhì)納米纖維組合物：取干重氧化幾丁質(zhì)1g，幾丁質(zhì)的脫乙酰度(氨基含量)為0.12，羧基含量為0.662mmol/g，加入蒸餾水，均質(zhì)、超聲成功制備出含幾丁質(zhì)納米纖維0.3％的組合物。(4)將昆明小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料，0.9％生理鹽水灌胃；高脂對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料，0.9％生理鹽水灌胃；實(shí)驗(yàn)組(tochns)：飼喂高脂飼料，幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃，劑量為20mg/kg·d。過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)周期為30天。用本發(fā)明所得的幾丁質(zhì)納米纖維組合物灌胃的昆明小鼠，對(duì)其部分生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。(5)體重增量及體脂含量的檢測(cè)：對(duì)小鼠體重的影響，空白對(duì)照組(blank)與高脂對(duì)照組(control)體重在第一周發(fā)生變化，且有顯著性差異，第六天，blank組小鼠體重增重15.37％，control組小鼠體重增重10.33％，說(shuō)明在喂食高脂飼料的情況下，衣康酸延緩了小鼠體重的增加。此外，實(shí)驗(yàn)組(tochns)的小鼠體重增重為2.09％，喂食幾丁質(zhì)納米纖維，小鼠的體重增長(zhǎng)率顯著降低。經(jīng)過(guò)18天的喂養(yǎng)，小鼠空白對(duì)照組體重和高脂對(duì)照組體重的增長(zhǎng)率分別為40.48％、32.63％，而幾丁質(zhì)納米纖維組的增長(zhǎng)率為31.11％(表5)，說(shuō)明長(zhǎng)期的幾丁質(zhì)納米纖維喂養(yǎng)，小鼠適應(yīng)了飲食環(huán)境，且劑量為20mg/kg·d的幾丁質(zhì)納米纖維有一定的延緩小鼠體重增長(zhǎng)的作用。高脂對(duì)照組(control)小鼠腎臟周邊脂肪、睪丸周邊脂肪和腸系周邊脂肪含量比空白對(duì)照組(blank)高，說(shuō)明喂食高脂飼料導(dǎo)致了小鼠的肥胖，肥胖模型建立成功。與高脂對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組(tochns)小鼠體脂含量明顯降低，說(shuō)明幾丁質(zhì)納米纖維對(duì)昆明小鼠具有一定的預(yù)防肥胖的作用(表6)。表5幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體重增量分組第2天第6天第10天第14天第18天blank3.67％15.37％27.88％35.65％40.48％control4.38％10.33％21.39％27.88％32.63％tochns2.09％2.94％12.76％23.65％31.11％表6幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體脂重量實(shí)施例4(1)幾丁質(zhì)的來(lái)源及純化：蟬蛻，蟬蛻幾丁質(zhì)的純化方法：1)蟬蛻于1mol/lnaoh浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟬蛻中的蛋白質(zhì)；2)1mol/lhcl浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟬蛻中的鈣鹽等成分；3)重復(fù)以上步驟2～3次，用蒸餾水洗滌至中性，接下來(lái)用0.5％的naclo2、冰醋酸調(diào)節(jié)ph5.0、70℃水浴進(jìn)行漂白2h(要先預(yù)熱一下實(shí)際達(dá)到2.5h)，間歇攪拌(如漂白不徹底，洗滌至中性后進(jìn)行二次漂白)；4)漂白后的樣品用蒸餾水洗滌至中性，而后用榨汁機(jī)粉碎，稱(chēng)重放入封口袋存放于4℃冰箱保存，2天后測(cè)定含水量。(2)氧化幾丁質(zhì)的制備：tempo-naclo-nabr氧化法制備氧化幾丁質(zhì)：向100ml蒸餾水(含0.016g，0.1mmoltempo、0.1g，1mmolnabr)中加入干重1g蟬蛻幾丁質(zhì)；加入一定量naclo溶液(干重1g幾丁質(zhì)加5～6mmol/gnaclo)開(kāi)始氧化；室溫下，使用ph滴定儀連續(xù)滴加0.5mnaoh溶液保持混合液ph為10；當(dāng)體系不再消耗堿時(shí)，向混合液中滴加少量乙醇終止反應(yīng)；向混合液中添加0.5mhcl溶液將ph調(diào)至7后，離心機(jī)10000r/min離心5min，傾倒去除上清液；重復(fù)用蒸餾水清洗，離心，傾倒上清液7-8次，留下水不溶物于4℃冰箱保存，24h后測(cè)定含水量，作為tempo-naclo-nabr體系氧化的幾丁質(zhì)濕樣待用。(3)幾丁質(zhì)納米纖維組合物：取干重化學(xué)氧化幾丁質(zhì)1g，幾丁質(zhì)的脫乙酰度(氨基含量)為0.09，羧基含量為0.685mmol/g，加入蒸餾水，均質(zhì)、超聲成功制備出含幾丁質(zhì)納米纖維0.6％的組合物。(4)將昆明小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料，0.9％生理鹽水灌胃；高脂對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料，0.9％生理鹽水灌胃；實(shí)驗(yàn)組(tochns)：飼喂高脂飼料，幾丁質(zhì)納米纖維分散液灌胃，劑量為90mg/kg·d。過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)周期為30天。用本發(fā)明所得的幾丁質(zhì)納米纖維組合物灌胃的昆明小鼠，對(duì)其部分生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。(5)血脂含量的檢測(cè)：與高脂對(duì)照組(control)小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組(tochns)小鼠血漿tc(總膽固醇)和hdl(高密度脂蛋白)含量明顯降低，說(shuō)明幾丁質(zhì)納米纖維對(duì)昆明小鼠具有一定的降低血脂的作用(表7)。表7幾丁質(zhì)納米纖維組合物預(yù)防組昆明小鼠體脂重量grouptc(mmol/l)tg(mmol/l)hdl(mmol/l)hdl/tcldl(mmol/l)blank3.5621.3891.6650.46761.266control3.91021.2471.6580.42411.685tochns3.8011.3110.7020.18472.503實(shí)施例5(1)幾丁質(zhì)的來(lái)源及純化：蟹殼(portunustrituberculatus)，產(chǎn)自中國(guó)南通，蟹殼幾丁質(zhì)的純化方法：1)蟹殼剪成1cm2大小，1mol/lnaoh浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟹殼中的蛋白質(zhì)；2)1mol/lhcl浸泡12h以上，而后用蒸餾水洗滌至中性，用以去除蟹殼中的鈣鹽等成分；3)重復(fù)以上步驟2～3次，用蒸餾水洗滌至中性，接下來(lái)用0.5％的naclo2、冰醋酸調(diào)節(jié)ph5.0、70℃水浴進(jìn)行漂白2h(要先預(yù)熱一下實(shí)際達(dá)到2.5h)，間歇攪拌(如漂白不徹底，洗滌至中性后進(jìn)行二次漂白)；4)漂白后的樣品用蒸餾水洗滌至中性，而后用榨汁機(jī)粉碎，稱(chēng)重放入封口袋存放于4℃冰箱保存，2天后測(cè)定含水量。(2)部分脫乙酰氨基幾丁質(zhì)的制備：采用濃堿熱解脫乙酰基法制備部分脫乙?；鶐锥≠|(zhì)：將干重1g蟹殼幾丁質(zhì)浸泡于25ml35wt％naoh溶液中，90℃水浴，不斷攪拌2h。反應(yīng)結(jié)束后，用蒸餾水清洗部分脫乙酰幾丁質(zhì)至中性，留下水不溶物于4℃冰箱保存，24h后測(cè)定含水量，作為部分脫乙酰氨基幾丁質(zhì)濕樣待用。(3)幾丁質(zhì)納米纖維組合物：取干重部分脫乙?；鶐锥≠|(zhì)1g，幾丁質(zhì)的脫乙酰度(氨基含量)為0.18，加入蒸餾水，用葡萄糖酸調(diào)節(jié)組合物ph2.5，均質(zhì)、超聲成功制備出含幾丁質(zhì)納米纖維0.8％的組合物。(4)將昆明小鼠分成三組，空白對(duì)照組(blank)：飼喂普通飼料，0.9％生理鹽水灌胃；高脂對(duì)照組(control)：飼喂高脂飼料，ph2.5左右的葡萄糖酸溶液灌胃；實(shí)驗(yàn)組(dechns)：飼喂高脂飼料，醋酸分散幾丁質(zhì)納米纖維分散液(ph2.5左右)灌胃，劑量為10mg/kg·d。過(guò)程中均選用昆明小鼠，spf級(jí)，單一性別，雄性，體重18～20g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)周期為30天。用本發(fā)明所得的幾丁質(zhì)納米纖維組合物灌胃的昆明小鼠，對(duì)其部分生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。(5)肝組織細(xì)胞檢查：圖1是高脂對(duì)照組小鼠肝組織切片照片，圖上的箭頭所指的是脂肪粒，即照片上的白點(diǎn)，脂肪粒的大小和數(shù)目可以衡量肝組織的脂肪化程度，從而判斷小鼠是否肥胖。由圖1可以看出，喂食高脂飼料的對(duì)照組小鼠的肝組織中含有眾多的脂肪顆粒，這表明用高膽固醇和脂類(lèi)飼料喂養(yǎng)成功形成了酯代謝紊亂動(dòng)物模型，肥胖造模成功。圖2是實(shí)驗(yàn)組小鼠肝組織切片照片。由圖可以很直觀地看出幾丁質(zhì)納米纖維組小鼠肝組織與高脂對(duì)照組小鼠肝組織的差異，切片照片顯示幾丁質(zhì)納米纖維組小鼠的肝組織脂肪粒很少，表明幾丁質(zhì)納米纖維能夠有效阻止脂肪肝的形成，幾丁質(zhì)納米纖維對(duì)小鼠的減肥作用明顯，并且能夠有效地預(yù)防脂肪肝的形成。當(dāng)前第1頁(yè)12