本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域,尤其涉及中藥提取物,具體涉及具有抗血栓作用的廣西莪術提取物的應用。
背景技術:
血栓性疾病嚴重威脅人類健康和生命,冠心病、心絞痛、腦中風、心肌梗死等血栓性疾病發(fā)病率、致殘率和致死率都很高,且近年來,血栓性栓塞引起的疾病發(fā)病率逐漸增加,造成病患者生活質量下降,勞動力喪失致殘,嚴重阻礙了經濟發(fā)展與人民生活水平的進一步提高。從中藥中應用具有良好抗血栓作用的中藥及其提取物,用于防治血栓性疾病。
廣西莪術為姜科植物廣西莪術(Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang)的干燥根莖,性味辛、苦、溫,具有行氣破血,消積止痛之功效,在廣西、云南、四川、福建等地有分布,在廣西主產于欽州、南寧、大新、貴港、上思等地,是廣西地道藥材,做為中藥莪術使用,在廣西已大量人工栽培種植成功,為廣西大宗藥材,廣西民間廣泛用于瘀血經閉、食積脹痛、跌打損傷等。
廣西莪術主要含桉油精、樟腦、異龍腦、莪術烯等30余種揮發(fā)油成分及姜黃素類、吉馬酮、β-谷甾醇、羽扇豆醇等化學成分,現代藥理研究表明,廣西莪術具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、抗?jié)兊人幚碜饔谩?/p>
技術實現要素:
本發(fā)明的目的是從廣西莪術(Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang)的干燥根莖中提取分離得到的廣西莪術提取物,而該提取物具有抗血栓方面的用途,用于治療血栓性疾病,為血栓性疾病患者帶來福音。
本發(fā)明通過如下技術方案解決上述技術問題。
廣西莪術藥材用水提取,提取液濃縮后,80℃烘干得干膏,上聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱,依次用蒸餾水、體積濃度為30%的乙醇、體積濃度為50%的乙醇、體積濃度為70%的乙醇、體積濃度為90%的乙醇進行梯度洗脫,分別收集各洗脫部位液體,減壓濃縮,真空干燥,得水洗脫部位、體積濃度為30%乙醇洗脫部位、體積濃度為50%乙醇洗脫部位、體積濃度為70%乙醇洗脫部位、體積濃度為90%乙醇洗脫部位。
以對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內血栓形成的影響試驗,對大鼠體內靜脈血栓形成的影響試驗,對電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成的影響試驗,對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響試驗為抗血栓作用藥效學指標,進行抗血栓作用藥效學評價,結果發(fā)現,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位和大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位具有很好的抗血栓作用,用于制備治療血栓性疾病的抗血栓方面的藥物。
所述的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂為D101大孔吸附樹脂,而用D101大孔吸附樹脂柱進行洗脫完成后的處理:待洗脫完成后,在D101大孔吸附樹脂柱中,加入高于大孔吸附樹脂層10-20厘米的體積濃度為5%鹽酸溶液浸泡4小時后,用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%鹽酸溶液沖洗,再用蒸餾水充分沖洗,直至出口洗滌液pH值呈中性,然后以體積濃度為5%氫氧化鈉溶液按以上方法浸泡4小時,并用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%氫氧化鈉溶液沖洗,再用蒸餾水充分沖洗直至出水pH值呈中性后,D101大孔吸附樹脂柱可重新使用。
上述提取方法中涉及的提取、濃縮、洗脫、干燥均為本領域的常規(guī)操作。
與現有技術相比,本發(fā)明具有以下有益效果:
1、本發(fā)明采用水提取廣西莪術藥材后,用大孔吸附樹脂柱進行洗脫分離,得到抗血栓作用有效洗脫提取部位:廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位。
2、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位提取物及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物可明顯抑制膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內血栓形成,降低動物死亡和偏癱數,提高恢復數;明顯減輕大鼠體內靜脈血栓濕重;明顯延長電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成時間;明顯減輕大鼠動靜脈旁路血栓濕重;具有明顯的抗血栓作用,可用于血栓性疾病的治療。
具體實施方式
為了更好地說明本發(fā)明的特點和實質,下面用實施例的形式提供廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位抗血栓作用的藥理試驗結果,說明其在醫(yī)藥技術領域的用途。
以下是本發(fā)明的實施例,具體實施例并不對本發(fā)明做任何限制。
實施例1 廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位的制備方法
將晾干的廣西莪術藥材切碎,用按物料重量8倍量的水浸泡1h后,加熱煮沸2h,過濾;濾渣加8倍量水后加熱煮沸1h,過濾;濾渣再加8倍量水后加熱煮沸1h,過濾,合并3次濾液,濃縮后,80℃烘干得干膏,上聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱,依次用蒸餾水、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為90%乙醇進行梯度洗脫,分別收集各洗脫部位液體,減壓濃縮,真空干燥,得廣西莪術水洗脫部位、體積濃度為30%乙醇洗脫部位、體積濃度為50%乙醇洗脫部位、體積濃度為70%乙醇洗脫部位、體積濃度為90%乙醇洗脫部位。
所述的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂為D101大孔吸附樹脂,而用D101大孔吸附樹脂柱進行洗脫完成后的處理:待洗脫完成后,在D101大孔吸附樹脂柱中,加入高于大孔吸附樹脂層10-20厘米的體積濃度為5%鹽酸溶液浸泡4小時后,用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%鹽酸溶液沖洗,再用蒸餾水充分沖洗,直至出口洗滌液pH值呈中性,然后以體積濃度為5%氫氧化鈉溶液按以上方法浸泡4小時,并用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%氫氧化鈉溶液沖洗,再用蒸餾水充分沖洗直至出水pH值呈中性后,D101大孔吸附樹脂柱可重新使用。
實施例2 廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內血栓形成的影響
取體重18~22g小鼠120只,隨機分為12組,每組10只,雌雄各半,分別為正常對照組,血塞通組,廣西莪術各洗脫部位提取物高、低劑量組。各藥物組小鼠每日灌胃給藥一次,正常對照組給予等體積蒸餾水,連續(xù)7d,于末次給藥后1h,小鼠自尾靜脈注射膠原蛋白(225μg/只)與腎上腺素(9μg/只)的混合誘導劑,注射后觀察5min內小鼠死亡數和15min內小鼠偏癱的未恢復數。結果見表1。
表1結果表明,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、低劑量組均能明顯抑制膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內血栓形成,降低動物死亡和偏癱數,提高恢復數,對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內血栓具有抗血栓作用。
實施例3 廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對大鼠體內靜脈血栓形成的影響
取體重200~250g SD大鼠120只,隨機分為12組,每組10只,雌雄各半,分別為正常對照組,血塞通組,廣西莪術各洗脫部位提取物高、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次,正常對照組給予等體積蒸餾水,連續(xù)7d,末次給藥前禁食不禁水12h,末次給藥后1h,大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg·kg-1),剖開腹腔,分離下腔靜脈,于左腎靜脈下方用手術絲線結扎,縫合腹壁,4h后重新打開腹腔,在結扎處下方2cm處用止血鉗夾閉血管,縱向打開血管,取出血栓,放于濾紙上,吸干血液,用電子分析天平稱其血栓濕重。結果見表2。
表2結果表明,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、低劑量組均能明顯減輕大鼠體內靜脈血栓濕重,具有明顯的抗血栓作用。
實施例4 廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成的影響
取體重250~300g SD大鼠80只,隨機分為8組,每組10只,雌雄各半,分別為正常對照組,血塞通組,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次,正常對照組給予等體積蒸餾水,連續(xù)7d,末次給藥后1h,各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg·kg-1),分離右側頸總動脈,用YLS-14B小動物血栓生成儀進行電刺激右側頸總動脈形成血栓,記錄血栓形成時間(秒,S)。結果見表3。
表3結果表明,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、中、低劑量組均能明顯延長電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成時間,抑制血栓形成,具有明顯的抗血栓作用。
實施例5 廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響
取體重250~300g SD大鼠80只,隨機分為8組,每組10只,雌雄各半,分別為正常對照組,血塞通組,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次,正常對照組給予等體積蒸餾水,連續(xù)7d,末次給藥后1h,各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg·kg-1),分離右側頸總動脈和左側頸外動脈,取在中段放入長5cm的4號手術絲線的三段聚乙烯管組成的套管,將肝素生理鹽水溶液(50U/ml)充滿聚乙烯管腔,一端插入左側頸外動脈,另一端插入右側頸總動脈,建立動靜脈旁路,開放血流15min后中斷血流,取出絲線,在濾紙上吸除浮血后稱重,總重量減去絲線重即為血栓濕重。結果見表4。
表4結果表明,廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、中、低劑量組均能明顯減輕大鼠動靜脈旁路血栓濕重,具有明顯的抗血栓作用。