本發(fā)明屬于醫(yī)藥保健領域，具體涉及一種營養(yǎng)美白保健品。
背景技術：
：隨著環(huán)境的惡化、歲月的流逝，粗糙、干燥、暗黃、皺紋、色斑、松弛、困倦等皮膚問題越來越引起人們的困擾，能夠美容皮膚的功能性食品越來越受到人們的廣泛關注。近年來各項研究表明，人體內膠原蛋白的減少是皮膚衰老的重要指示之一。膠原蛋白是一種存在于細胞間質的結構蛋白質，它廣泛分布于動物結締組織中，膠原蛋白作為功能性生物大分子，具有多種特性，如沒有細胞毒性、可調控的生物降解速度、能特異促進或抑制細胞-材料的相互作用等諸多優(yōu)點。膠原蛋白在酸、堿、熱、酶的作用下水解，會產生氨基酸組成相似的膠原蛋白水解產物。膠原及其水解物與人皮膚膠原的結構相似、相容性好，存在著離子鍵、氫鍵等相互作用，極易被人體的皮膚、毛發(fā)等所吸收和利用。人體的膠原蛋白處于不斷合成和降解吸收中，其更新的速率隨著年齡的增長而降低，皮膚中膠原蛋白的生成減少，而變形膠原蛋白的降解吸收也減慢，使皮膚結締組織逐漸老化變質，補充新鮮的膠原蛋白能促進皮膚新陳代謝，激活膠原蛋白的合成與更新，延緩皮膚結構和機能的衰退。如果能及時補充皮膚膠原蛋白，一方面維持真皮層的厚度，阻擋紫外線的深層損傷；一方面促進膠原蛋白的合成和變性蛋白的降解清除，加速日曬后皮膚修復，則可有效防止老化現(xiàn)象，減少皺紋和色斑產生，保持皮膚光滑有彈性、柔嫩白皙。目前市場上關于補充膠原蛋白的營養(yǎng)品琳瑯滿目，包括飲料、口服液、粉末、膠囊、片劑等等。據(jù)市場調查和研究資料表明，很多膠原蛋白類產品吸收率很低，雖然有一定的補充作用，但食用有很大的局限性，而且存在功能單一、大量服用反而造成腎臟負擔加重等不良反應的缺陷，美容效果不明顯。同時，人體環(huán)境對膠原蛋白營養(yǎng)品的吸收也很大的影響，如果人體的免疫力低下，膠原蛋白營養(yǎng)品對皮膚的修復作用就會很差；另外，膠原蛋白在體內被吸收，需要全面改善細胞的營養(yǎng)狀況和微環(huán)境，才能重新組成人體所需的膠原蛋白，從而令肌膚重新煥發(fā)青春。技術實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明通過對營養(yǎng)美白保健品富含活性成分及膠原蛋白，通過對各組分的配比，不僅提高營養(yǎng)美白保健品的美白效果，同時改善人體環(huán)境，提高各組分在人體內的吸收率，從而達到提高皮膚活力、美白肌膚的效果，并有提高免疫力的功效。本發(fā)明的技術方案為：一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A40-50，氯化鉀1-3，木糖醇5-8，檸檬酸鈉2-4，膠原蛋白10-30，活性組分B11-15，活性組分C9-13，碳酸氫鈉2-6，蜂蜜0.3-0.5，葡聚糖3-5，水32-65。進一步的，所述的兒童，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A43，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B13，活性組分C11，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。進一步的，所述活性組分A為大比目魚酶解產物，所述大比目魚酶解產物的制備方法為：S1.取大比目魚魚糜，使料水比為1:2-1:8(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0-3.5以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為1200-1500U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、100-130r/min振蕩酶解1.5-2.5h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.0-9.0，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為4500-6000U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為4:1-6:1，所述料水比1:3-1:6，酶解時間為3-4.5h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到大比目魚酶解產物。更進一步的，所述活性組分A為大比目魚酶解產物，所述大比目魚酶解產物的制備方法為：S1.取大比目魚魚糜，使料水比為1:3(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.5以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為1300U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、110r/min振蕩酶解2h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.5，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為5200U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為5:1，所述料水比1:4.5，酶解時間為3.5h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到大比目魚酶解產物。本發(fā)明中，所述金槍魚下腳料包括魚頭，內臟，鰓，暗色肉和魚皮。進一步的，所述活性組分B為金槍魚下腳料酶解產物，所述金槍魚下腳料酶解產物的制備方法為：S1.取金槍魚下腳料攪碎混合，使料水比為1:1-1:2(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為800-1000U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、75-105r/min振蕩酶解1-1.5h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.0-9.0，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為2500-3500U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為6:1-8:1，所述料水比1:2-1:4，酶解時間為2.5-3.5h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到金槍魚下腳料酶解產物。更進一步的，所述活性組分B為金槍魚下腳料酶解產物，所述金槍魚下腳料酶解產物的制備方法為：S1.取金槍魚下腳料攪碎混合，使料水比為1:1.5(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為880U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、85r/min振蕩酶解1.3h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.2，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為2900U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為7:1，所述料水比1:2.5，酶解時間為2.8h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到金槍魚下腳料酶解產物。進一步的，所述活性組分C為獨活菌體粗提物，所述獨活菌體粗提物的制備方法為：取新鮮植物的根、莖、葉分別洗凈至沒有明顯的雜質，表面消毒處理后，接種至PDA（分離內生真菌）和高氏一號培養(yǎng)基（分離內生放線菌）上培養(yǎng)5-7d，然后分離獲取菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，置30℃，150r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d；發(fā)酵培養(yǎng)物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，45℃減壓濃縮蒸干，即為混合菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物。上述技術方案中，所述的運動營養(yǎng)保健品的制備方法為：按配比，將各組分混合，攪拌分散均勻后即可得成品。本發(fā)明所述的營養(yǎng)美白保健品，配方合理，活性組分中富含膠原蛋白，并且各活性組分之間不易發(fā)生化學反應且具有協(xié)同增效作用。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明充分利用這些物質的相互作用全方位來提高膠原蛋白的吸收率，同時避免人體大量服用而造成腎臟負擔加重等不良反應的發(fā)生，美容效果更加明顯。另外，本發(fā)明經驗證，長久食用可達到增強免疫力和美白的效果，基于本發(fā)明中主要活性組分采用模擬人體胃腸消化的方式制得，配合從植物體內提取出的活性菌體成分，活性菌體成分進入腸道內，一方面可以在腸道內定殖，維持腸道微生物菌群的平衡；另一方面是活性菌體成分與大比目魚酶解產物以及金槍魚下腳料酶解產物共同作用于宿主的免疫系統(tǒng)，誘發(fā)腸道免疫，并刺激胸腺，脾臟等免疫器官，促進巨噬細胞活性，通過增強B、T淋巴細胞對抗原刺激的反應性，發(fā)揮特異性免疫活性，從而增強機體的免疫功能，易于被人體吸收，條件98%低齡人群長期服用無不適癥狀。具體實施方式以下結合具體實施例來對本發(fā)明作進一步的描述。實施例1一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A43，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B13，活性組分C11，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。進一步的，所述活性組分A為大比目魚酶解產物，所述大比目魚酶解產物的制備方法為：S1.取大比目魚魚糜，使料水比為1:3(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.5以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為1300U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、110r/min振蕩酶解2h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.5，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為5200U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為5:1，所述料水比1:4.5，酶解時間為3.5h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過真空冷凍干燥，設置干燥條件為預冷溫度-30℃,預冷時間2h，加熱溫度從-10℃開始18h后緩慢升溫,達到25℃,并保持到干燥終點，得到大比目魚酶解產物。進一步的，所述活性組分B為金槍魚下腳料酶解產物，所述金槍魚下腳料酶解產物的制備方法為：S1.取金槍魚下腳料攪碎混合，使料水比為1:1.5(w/v)，用2mol/L鹽酸將溶液pH值調至2.0以呈現(xiàn)胃部酸堿環(huán)境，以酶與底物濃度比為880U/g加入胃蛋白酶，在恒溫水浴振蕩器中保持37℃、85r/min振蕩酶解1.3h，在此條件下獲得經胃蛋白酶酶解的初產物；S2.用2mol/L的氫氧化鈉將經胃蛋白酶酶解后的酶解液pH值調至8.2，保持37℃酶解溫度，復合酶添加量為2900U/g，所述復合酶中胰蛋白酶與胰凝乳蛋白酶的質量比為7:1，所述料水比1:2.5，酶解時間為2.8h，酶解結束后，在100℃沸水浴中滅酶10min；將S2中的酶解產物通過噴霧干燥的方式，設置干燥條件為進風溫度160℃,進樣速度為50ml/min,離心霧化器轉速為25000r/min，得到金槍魚下腳料酶解產物。進一步的，所述活性組分C為獨活菌體粗提物，所述獨活菌體粗提物的制備方法為：取新鮮植物的根、莖、葉分別洗凈至沒有明顯的雜質，表面消毒處理后，接種至PDA（分離內生真菌）和高氏一號培養(yǎng)基（分離內生放線菌）上培養(yǎng)5-7d，然后分離獲取菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，置30℃，150r/min搖床振蕩培養(yǎng)3d；發(fā)酵培養(yǎng)物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，45℃減壓濃縮蒸干，即為混合菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物。實施例2本實施例提供一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A40，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B11，活性組分C9，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。實施例3本實施例提供一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A50，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B15，活性組分C13，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。實施例4本實施例提供一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A50，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B15，活性組分C9，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。實施例5本實施例提供一種營養(yǎng)美白保健品，以重量份計，由以下組分組成：活性組分A40，氯化鉀2，木糖醇6，檸檬酸鈉3，膠原蛋白14，活性組分B11，活性組分C13，碳酸氫鈉4，蜂蜜0.4，葡聚糖4，水45。本實施例中活性組分A、活性組分B、活性組分C的成分及制備方式與實施例1一致。效果實施例1.美白效果測試實驗小鼠脂質抗氧化實驗實驗樣品和方法實驗動物：健康12月齡昆明種小鼠60只，雌性，體重48-60g。將通過實施例1制得的營養(yǎng)美白保健品各組分混合，濃縮干燥后制備成粉末狀，作為測試樣品。實驗分組：實驗小鼠按血中MDA水平隨機分為6組，每組10只動物，分別為受試物低劑量組（實施例1制備的產品50mg/kg)、受試物中劑量組（實施例1樣品100mg/kg)、受試物高劑量組（實施例1樣品150mg/kg)、陽性對照組（中國專利申請201110415844.9中實施例2提供的產品，即女性美白養(yǎng)顏的組合物，給藥量為100mg/kg)和空白對照組。實驗方法：三個實驗組、陽性對照組分別取實施例2所得粉劑、文獻實施例2樣品加溫水稀釋150倍，空白對照組給予等量溫水，按照分組進行灌胃給藥，連續(xù)進行30天。末次給予各組相應的處理30min后，取受試動物眼內眥靜脈血，分別測定其全血谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px)活性、活性紅細胞超氧化物歧化酶（SOD)活性和小鼠血中過氧化脂質丙二醛（MDA)含量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計：數(shù)據(jù)采用SPSS16.0forwindows軟件進行方差分析。測試結果全血GSH-px活性測定：采用試劑盒法（南京建成生物工程研究所購買），見表1：表1受試樣品對小鼠GSH-px活性的影響注：表中P1為各組別與空白對照組相比的顯著性分析結果，P2為受試物劑量組與陽性對照組的顯著性分析結果?；钚约t細胞SOD活性測定：采用試劑盒法（南京建成生物工程研究所購買）見表2：表2受試樣品對小鼠紅細胞SOD活性的影響注：表中P1為各組別與空白對照組相比的顯著性分析結果，P2為受試物劑量組與陽性對照組的顯著性分析結果。小鼠血中MDA含量測定：采用試劑盒法（南京建成生物工程研究所購買），見表3：表3受試樣品對小鼠血中MDA含量的影響組別（mg/kg·BW）動物數(shù)（只）MDA（mmol/mL）P1P2空白對照組1011.3±2.3——陽性對照組1014.8±2.7P<0.05P<0.05受試物低劑量組1011.5±2.1P<0.01P<0.01受試物中劑量組1014.2±1.9P<0.01P<0.01受試物高劑量組1015.9±3.2P1P2注：表中P1為各組別與空白對照組相比的顯著性分析結果，P2為受試物劑量組與陽性對照組的顯著性分析結果。同樣，對其余實施例和本發(fā)明的實施例其余配比進行相同實驗，結果與實施例1的效果類似。2.增強免疫力效果實驗將通過實施例1制得的營養(yǎng)美白保健品各組分混合，濃縮干燥后制備成粉末狀，作為測試樣品。對照品：天美健牌大豆肽蛋白粉；來源：北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司；成人臨床推薦用量：0.167g.kg-1.d-1。受試動物品系和級別：BALB/c小鼠，Hartley豚鼠，SPF級；數(shù)量及性別：BALB/c小鼠60只，雄性；Hartley豚鼠6只，均可。購入體重BALB/c小鼠17-19g，Hartley豚鼠250-350g。由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2013-0002。實驗期間，小鼠自由進食飲水，每天觀察小鼠狀態(tài)。根據(jù)樣品的基本情況進行劑量設計，樣品低、中、高按成人臨床用量的5倍、10倍、20倍設計劑量，分別為0.15g.kg-1.d-1、0.30g.kg-1.d-1、0.60g.kg-1.d-1；陽性對照組劑量按成人推薦劑量的5倍設計，為0.835g.kg-1.d-1。將60只雄性小鼠隨機各分為5組（陰性對照組、陽性對照組、受試樣品低、中、高劑量組），每組12只，其中2只作為備用動物。各組小鼠每天按0.1mL/10g體重灌胃相應樣品液，陰性對照組給予等量純凈水，每天1次，連續(xù)給藥30天。試驗開始、試驗結束均稱量體重1次，試驗期間每周稱量體重1次。小鼠淋巴細胞轉化實驗末次給藥1h，無菌取脾置于盛有RPMI-1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置200目篩網(wǎng)，用注射器活塞在其上方研磨制成脾細胞懸液，分裝脾細胞懸液至加有淋巴細胞分離液的離心管中。400g，20℃下離心20min，離心完畢，取出離心管中淋巴細胞層離心管，加入RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌數(shù)次，250g，4℃下離心10min。洗滌完畢后，棄去上清液，加入完全培養(yǎng)基，吹打均勻，用臺盼蘭染色計數(shù)保證95%以上活細胞率，將細胞濃度調整為3×106個/ml。將每份脾細胞懸液分兩孔加入48孔培養(yǎng)板中，每孔0.5ml，一孔加25ulConA液（相當于5ug/ml），另一孔作為對照，置于5%CO2,37℃CO2孵箱中培養(yǎng)48h后每孔輕輕吸去上清液0.3ml，加入0.3mlRPMI-1640培養(yǎng)液，同時加入CCK8試劑50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)2h。結束培養(yǎng)后，吹打均勻，然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每孔作3個平行實驗，用酶標儀測450nm波長下的光密度值。淋巴細胞的增殖能力由加ConA孔的光密度值與不加ConA孔的光密度值的差值表示。小鼠體液免疫功能（血清溶血素）影響給藥25天，用生理鹽水洗滌(2000r/min，10min)已脫纖維的羊血3次，在壓積SRBC中加入生理鹽水配成2%（v/v）的細胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2ml，第30天時，給藥1h后，稱重，所有小鼠摘除眼球取血0.8ml于離心管，靜置1h，離心2000r/min，10min，收集血清。頸椎脫臼處死小鼠。用SA緩沖液稀釋300倍的血清取1ml置試管內，再一次加入10%（v/v）SRBC0.5ml、用SA緩沖液稀釋9倍的補體1ml，設置對照管（用SA代替血清），37℃恒溫水浴20min，再冰浴，然后離心2000r/min，10min。取上清液1ml于新試管，加3.75ml都氏試劑、0.25ml10%（v/v）SRBC，充分混勻，靜置10min，以對照管為空白，540nm處分別測定各管光密度值，溶血素的量以半數(shù)溶血值（HC50）表示。小鼠體液免疫（抗體生成細胞）的影響給藥25天，用生理鹽水洗滌已脫纖維的羊血3次，每次離心2000r/min，10min，在壓積SRBC中加入生理鹽水配成2%（v/v）的細胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2ml，第30天時，給藥1h后，稱重。頸椎脫臼處死小鼠后，取出脾臟，置于放有Hank’s液平皿中，經過200目篩網(wǎng)過濾后，再用Hank’s液洗滌兩次，加入到5mLRPMI-1640培養(yǎng)液中將細胞懸浮，計數(shù)細胞，且調整細胞濃度為5×106個/mL。將1g瓊脂糖加雙蒸水至100mL形成的表層培養(yǎng)基加熱溶解后，40-45℃水浴保溫.與PH7.2-7.4、2倍Hank’s液等體積混合，搖勻，每管0.5mL分裝不同的試管，繼續(xù)向每管加入用SA緩沖液配制成的10％SRBC(v/v）50ul和脾細胞懸液20ul，快速混勻，傾倒于涂有一層薄薄的瓊脂糖的薄片上，做平行片，等到瓊脂糖凝固后，將薄片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-1.5h后，將用SA緩沖液稀釋了9倍的補體加到玻片架的凹槽內，繼續(xù)培養(yǎng)1-1.5h，然后計數(shù)溶血空斑數(shù)。小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能及免疫器官影響的測定末次給藥1h，按體重從尾靜脈注射用生理鹽水1:3稀釋的印度墨汁（10mL/kg），待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2、10min，分別從眼眶靜脈叢采血20μL，并立即加到2mL0.1％Na2CO3溶液中，以Na2CO3溶液作空白對照，用分光光度計在600nm波長處測定光密度值（OD），計算吞噬指數(shù)a。小鼠采血后脫臼處死，解剖取肝臟、脾臟和胸腺，濾紙吸干臟器周圍血液后，精密稱重，計算臟器/體重比值。NK細胞活性測定末次給藥1h，無菌取脾，無菌取脾置于盛有RPMI-1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置200目篩網(wǎng)，用注射器活塞在其上方研磨制成脾細胞懸液，分裝脾細胞懸液至加有淋巴細胞分離液的離心管中。400g，20℃下離心20min，離心完畢，取出離心管中淋巴細胞層離心管，加入RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌數(shù)次，250g，4℃下離心10min。洗滌完畢后，棄去上清液，加入完全培養(yǎng)基，吹打均勻，用臺盼蘭染色計數(shù)活細胞數(shù)（應在95%以上），最后用RPMI1640完全培養(yǎng)液調整細胞濃度為2×107個/mL。按比例將效應細胞和靶細胞（50:1）各100ul加入U型96孔板；靶細胞和培養(yǎng)液各100ul加入靶細胞自然釋放孔；靶細胞和0.25%Triton各100ul加入靶細胞最大釋放孔。每組均設3個平行孔，37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h后，離心1500rpm,5min。每孔吸取上清液100ul于平底96孔板，加入LDH基質液100ul/孔，反應3-10min，加入1mol/mlHCL30ul/孔，酶標490nm測定光密度值。所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析，測試結果如下表所示。表4實施例樣品與對照組對小鼠淋巴細胞轉化的影響注：采用方差分析方法進行統(tǒng)計分析，與陰性對照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對照組比較,“b”:p<0.01表5實施例樣品與對照組對小鼠抗體水平（血清溶血素）的影響注：采用方差分析方法進行統(tǒng)計分析，與陰性對照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對照組比較,“b”:p<0.01表6實施例樣品與對照組對小鼠溶血空斑數(shù)的影響注：采用方差分析方法進行統(tǒng)計分析，與陰性對照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對照組比較,“b”:p<0.01。表7實施例樣品與對照組對小鼠吞噬指數(shù)的影響注：采用方差分析方法進行統(tǒng)計分析，與陰性對照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對照組比較,“b”:p<0.01。表8實施例樣品與對照組對小鼠NK細胞活性的影響注：采用方差分析方法進行統(tǒng)計分析，與陰性對照組比較，”a”:p<0.05;與陽性對照組比較,“b”:p<0.01。同樣，對其余實施例和本發(fā)明的實施例其余配比進行相同實驗，結果與實施例1的效果類似。對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發(fā)明內。此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。對于本發(fā)明中所有未詳盡描述的技術細節(jié)，均可通過本領域任一現(xiàn)有技術實現(xiàn)。當前第1頁1 2 3