本發(fā)明涉及一種防治牛支原體病的中藥復(fù)方噴鼻劑的制備方法。
背景技術(shù):
牛支原體(mycoplasmabovis)是一種能夠?qū)е屡.a(chǎn)生各種疾病和高感染率的重要病原體。它可以導(dǎo)致牛發(fā)生肺炎、關(guān)節(jié)炎、久治不愈乳腺炎、結(jié)膜角膜炎、懷孕母牛流產(chǎn)、生殖器感染等疾病。癥狀為發(fā)燒、咳嗽、鼻孔流有鐵銹色鼻液、腹瀉、關(guān)節(jié)腫大、嚴(yán)重乳房炎、頭胎牛發(fā)生流產(chǎn)、死胎,新生犢牛在飼喂乳房炎奶牛的乳汁后,逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)和蹄部腫大,行走困難,甚至無法站立等。牛支原體肺炎有傳染性,故影響集約化牛場(chǎng)的生產(chǎn),且常常由于高病死率、治療昂貴以及病牛生長(zhǎng)緩慢而給奶牛養(yǎng)殖企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)文獻(xiàn)記載歐洲每年因牛病損失的5.79億歐元中有1/3是由牛支原體引起的在英國(guó),約有190萬頭?;加信Vгw肺炎,死亡可達(dá)15.7萬頭,經(jīng)濟(jì)損失超過5400萬英鎊,在這些呼吸道感染牛中,至少有1/4-1/3是由牛支原體引起的。在我國(guó),1983年黎濟(jì)申首次報(bào)道了從乳房炎牛乳中分離得到牛支原體,此后僅少數(shù)臨床報(bào)道證實(shí)了牛支原體導(dǎo)致奶牛乳房炎;2008年湖北多地報(bào)道了牛支原體可導(dǎo)致牛傳染性支原體肺炎。
目前,牛支原體病的臨床處置主要以西藥防治為主,而長(zhǎng)期使用西藥不僅會(huì)產(chǎn)生許多副作用,損傷肝腎,同時(shí)處理炎癥時(shí)抗生素的使用也會(huì)導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生,而且藥物的殘留對(duì)食品安全及人類的健康也會(huì)產(chǎn)生不良影響。中草藥屬于純天然物質(zhì),含有多種生物活性成分,具有疏通消導(dǎo)和降逆、健脾益氣、增強(qiáng)機(jī)體免疫力,毒害作用小、環(huán)保等特點(diǎn),并且利用中藥制劑防治牛支原體病屬于非抗生素療法,因此應(yīng)用前景廣闊。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明目的在于防治牛支原體病傳統(tǒng)中藥驗(yàn)方的基礎(chǔ)上,提取中藥有效成分,進(jìn)一步離心、過濾、濃縮,制備出的一種主要具有牛支原體抑菌效果、治療牛支原體所引起肺炎,用藥安全、方便、低殘留與的特點(diǎn)的中藥復(fù)方噴鼻劑。
本發(fā)明的方案如下:一種防治牛支原體病的中藥復(fù)方噴鼻劑由苦參3份、魚腥草3份、大黃3份、黃柏3份、透骨草3份、胡黃連3份、花椒2份、黃連2份、丁香2份、甘草2份、連翹3份;所有藥材分別提取有效成分后混合提取物,分裝噴霧瓶制成。
采用本發(fā)明方法制備中藥復(fù)方噴鼻劑的有益效果是:
1、本發(fā)明的制劑為純中藥制劑,具無殘留、無公害、抑菌消炎等作用,可有效緩解由牛支原體引起的呼吸道癥狀,組方藥物療效確切。
2、現(xiàn)有的抗生素西藥治療方法在臨床上有一定的治療效果。但易引起菌株的耐藥性,還會(huì)造成藥物殘留,影響畜產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明的中藥復(fù)方噴鼻劑,純中藥配方,無殘留且不易耐藥。
3、治療效果:在實(shí)驗(yàn)室建立的牛支原體家兔感染模型上進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn),噴鼻劑噴鼻給藥,0.5ml/kg體重,1次/天,連續(xù)給藥5天,治療效果顯著。藥物安全性檢測(cè)結(jié)果顯示,本藥物安全無毒。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例:
1、各種中藥有效成分提?。?/p>
(1)苦參的提取:
首先將苦參粉碎至40目,然后將粉碎后的苦參放入藥材8倍量,體積濃度為65%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取3次,每次提取時(shí)間1.5h,提取溫度80℃,將三次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(2)魚腥草的提?。?/p>
首先將魚腥草粉碎至40目,然后將粉碎的魚腥草放入藥材20倍、體積濃度為70%的乙醇溶液中,采用超聲震蕩的方法提取,提取1~3次,每次提取時(shí)間為1.5h,提取溫度為55℃,功率為100w,然后將3次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(3)大黃的提?。?/p>
首先將大黃粉碎至40目,然后將粉碎后的大黃放入藥材10倍量,體積濃度為80%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取3次,每次提取時(shí)間1.5h,提取溫度80℃,將三次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(4)黃柏的提?。菏紫葘ⅫS柏切成厚度為2mm的薄片,然后將切片的黃柏放入藥材10倍量、體積濃度為75%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取3次,每次提取時(shí)間2h,提取溫度80℃,將3次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(5)透骨草的提?。?/p>
首先將透骨草粉碎至40目,然后將粉碎的透骨草放入藥材10倍、體積濃度為80%的乙醇溶液中,采用超聲震蕩的方法提取,提取3次,每次提取時(shí)間為2.5h,提取溫度為55℃,功率為100w,然后將3次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(6)胡黃連的提?。?/p>
首先將胡黃連粉碎至40目,然后將粉碎后的黃連放入藥材12倍量、體積濃度為65%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取1次,再放入藥材8倍量、體積濃度為60%的乙醇溶液中再提取一次,每次提取時(shí)間3h,提取溫度80℃,然后將2次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(7)花椒的提?。?/p>
首先將干燥花椒(去仁、去梗),然后將干燥的花椒放入藥材10倍量、體積濃度為90%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取2次,每次提取時(shí)間3h,提取溫度80℃,然后將2次提取的溶液混合、單層濾紙加壓抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(8)黃連的提?。?/p>
首先將黃連粉碎至40目,然后將粉碎后的黃連放入藥材10倍量、體積濃度為60%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取2次,每次提取時(shí)間2h,提取溫度80℃,然后將2次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(9)丁香的提?。?/p>
首先將丁香粉碎至40目,然后將粉碎的甘草放入藥材14倍、體積濃度為60%的乙醇溶液中,采用超聲震蕩的方法提取,提取3次,每次提取時(shí)間為60min,提取溫度為60℃,功率為180w,然后將3次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(10)甘草的提?。?/p>
首先將甘草粉碎至40目,然后將粉碎的甘草放入藥材10倍、體積濃度為75%的乙醇溶液中,采用超聲震蕩的方法提取,提取3次,每次提取時(shí)間為40min,提取溫度為45℃,功率為200w,然后將3次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
(11)連翹的提?。?/p>
首先將連翹粉碎至40目,然后將粉碎后的連翹放入藥材10倍量,體積濃度為80%的乙醇溶液中,采用回流提取法提取4次,每次提取時(shí)間2h,提取溫度60℃,將4次提取的溶液混合、單層濾紙真空抽濾后收集濾液,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的流浸膏,即原藥材1g制成1ml的流浸膏;
2、配置復(fù)方中藥:
將從所有藥材中分別提取到的有效成分混合,在常溫下靜置18-24小時(shí)后,以3000-3500r/min離心25-30min然后收集上清液,棄去殘?jiān)?,再將上清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮,最終制成1:1的混合液,即原藥材1g制成1ml的混合溶液。
3、噴鼻劑的制備:
靜置、過濾、離心取上清后,溶液無殘?jiān)?、均勻、透亮,含有糖成分所以有一定粘性,可以附著在鼻腔、氣管、支氣管及肺泡?nèi)部以釋放有效成分達(dá)到治療效果。將藥液分裝于噴霧瓶中,即得到含量為1g原藥/ml溶劑的中藥復(fù)方噴鼻劑。
4、體外抑菌試驗(yàn):
使用中藥提取物及復(fù)方中藥溶液,針對(duì)牛支原體致病菌株進(jìn)行藥敏片法體外抑菌實(shí)驗(yàn):常用治療西藥抗牛支原體藥物抑菌圈直徑為四環(huán)素d=31.17±1.04mm、泰秒菌素d=47.17±1.61mm、環(huán)丙沙星d=21.50±2.60mm,自制中藥液藥敏片(含藥量20mg/片)抑菌圈直徑:魚腥草d=26.67±0.89mm、黃連d=50.00±1.33mm、黃柏d==24.83±1.89mm、透骨草d=21.33±0.76mm、大黃d=26.33±0.89mm、胡黃連d=24.50±0.33mm、苦參d=14.67±3.01mm、甘草d=20.83±0.56mm、丁香d=20.50±3.04mm、花椒d=17.17±0.76mm、連翹d=25.50±2.04mm、復(fù)方制劑d=28.56±1.33mm。與治療常用西藥抑菌圈直徑結(jié)果進(jìn)行比較,證明中藥組方各成分以及混合液均有較好的抑制牛支原體生長(zhǎng)的效果。
5、臨床治療效果:
在制造的牛支原體感染家兔模型上進(jìn)行治療,待體溫升高,出現(xiàn)一定臨床癥狀后,通過噴鼻給藥,藥量0.5ml/kg,1次/天,連續(xù)給藥五天。治療第二天體溫開始下降,第三天即<35℃回歸正常范圍;剖檢情況可知,感染牛支原體20d未治療家兔的肺臟有明顯紅色肉變、出血點(diǎn)密集、輕微皺縮現(xiàn)象,氣管環(huán)出血,淋巴結(jié)腫大粘連且內(nèi)有膿液。而感染20d經(jīng)過治療的家兔肺部出血點(diǎn)輕微、略微水腫、無其他病變,氣管環(huán)出血不明顯,淋巴結(jié)輕微腫大無膿液;病理組織切片結(jié)果可知,感染未治療組組織切片結(jié)果出現(xiàn)肺組織淤血、肺組織出血、肺泡塌陷、小血管淤血、肺泡隔增厚等,而治療組則未見明顯出血,也無纖維素性滲出、淤血及水腫、肺泡隔清晰;所以該中藥復(fù)方制劑有較好的臨床治療效果。
6、安全性檢測(cè)結(jié)果:
在spf小鼠上進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)安全性檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腹腔注射急性毒性試驗(yàn),小鼠的最大耐受量ld0=20000mg/kg,最小致死量mld=25940mg/kg,根據(jù)改良寇氏法計(jì)算公式:ld50=lg-1[xm-i(∑p-0.5)],式中xm為最大劑量的對(duì)數(shù),p為各組動(dòng)物的死亡率,∑p為各組動(dòng)物死亡率總和,i為組間距(相鄰兩組對(duì)數(shù)劑量的差值),計(jì)算出ld50=41438mg/kg。根據(jù)公式slogld50=d