一種n-乙酰-l-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟：A、將N-乙酰-L-半胱氨酸與無水乙醇、吐溫-80、乳糖、可溶性淀粉和麩皮制成顆粒劑、口服液、粉劑。B、將顆粒劑、口服液、粉劑加入到飼料或飲水中；C、或N-乙酰-L-半胱氨酸為單獨(dú)給藥；D、作為預(yù)防性添加與飼料中長期使用，在整個飼養(yǎng)周期連續(xù)使用；E、作為治療性使用時可將粉劑、顆粒劑直接飼喂；F、或?qū)⒎蹌㈩w粒劑與日糧混合，添加于飼料中，每天早中晚添加，連續(xù)使用。具有安全性高、無毒副作用，N-乙酰-L-半胱氨酸具有抗病毒活性，能有效防治豬圓環(huán)病毒2型和豬流行性腹瀉病毒的感染，降低發(fā)病豬的死亡率，有效提高豬的成活率和生產(chǎn)性能。
【專利說明】一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥 物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于豬病毒病防治【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體涉及一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備 治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC)是L-半胱氨酸的衍生物和還原型谷胱甘肽的合成前 體，其分子式為C5H9NO3S，分子量為163. 2,其生物活性主要在于硫基。NAC進(jìn)入動物機(jī)體后， 約97%被小腸迅速吸收，經(jīng)小腸和肝臟細(xì)胞代謝，與蛋白肽鏈結(jié)合，形成多種代謝產(chǎn)物。
[0003]NAC為硫醇類化合物，是天然L-半胱氨酸和還原型谷胱甘肽（GSH)的前體物質(zhì)，進(jìn) 而在機(jī)體抗氧化防御體系中發(fā)揮重要作用。長期以來，作為一種黏液溶解劑多用于呼吸系 統(tǒng)疾病以及對乙酰氨基酚過量的解毒劑，同時還可減輕重金屬、堿性腐蝕劑、丙烯腈等物質(zhì) 的毒性。體外研究表明，NAC對流感病毒和艾滋病毒（HIV)有一定抑制作用；近年來，大量的 研究發(fā)現(xiàn)NAC在癌癥、艾滋病、藥物中毒、帕金森病、心臟病、肝臟疾病以及吸煙損害等方面 有重要的作用。NAC的具體作用機(jī)制如下：1)提高機(jī)體內(nèi)GSH含量：NAC作為小分子物質(zhì)， 易于進(jìn)入細(xì)胞。在體內(nèi)脫乙?；笊傻陌腚装彼崾呛铣蒅SH的前體，可以促進(jìn)GSH的合 成，提高細(xì)胞內(nèi)GSH含量，增強(qiáng)組織的抗自由基、藥物過量及毒物損傷能力。2)抑制炎癥反 應(yīng)：NAC能清除活性氧介質(zhì)，加強(qiáng)缺氧缺血狀態(tài)下的機(jī)體抗氧化能力，有效抑制LPS、TNF-α 和IL-Iβ等所誘導(dǎo)的NF-κB活性，阻斷NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，進(jìn)而下調(diào)IL-6、TNF-α等 的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)。3)免疫調(diào)節(jié)作用：有研究報道，感染HIV患者早期階段，就伴有半胱 氨酸分解代謝，經(jīng)生化檢測證實，HIV患者外周血液中胱氨酸水平降低，淋巴細(xì)胞內(nèi)-SH水 平也降低，而-SH及其前體半胱氨酸在免疫反應(yīng)中起限速作用。許多淋巴細(xì)胞的功能與細(xì) 胞內(nèi)-SH含量有關(guān)。病毒引起的半胱氨酸或胱氨酸的不足是免疫系統(tǒng)功能受損的主要原因 之一。HIV患者在應(yīng)用NAC后，提高了T淋巴細(xì)胞的增殖，使自然殺傷細(xì)胞重新活化，幾乎接 近正常的水平。4)清除自由基：NAC由于含有還原性的-SH基團(tuán)，能清除一些活性氧和自由 基等，從而防止機(jī)體自由基過量，減少機(jī)體應(yīng)激導(dǎo)致的損傷。
[0004] 豬流行性腹瀉（Porcineepidemicdiarrhea,PED)是一種以豬腹瀉、嘔吐和脫水 為主要特征的急性高度接觸性腸道傳染病，此病多發(fā)于冬季12月至來年2月寒冬季節(jié)，在 夏季也可發(fā)生，尤其哺乳仔豬受害最嚴(yán)重。新生仔豬PED潛伏期為24?36小時。病豬表 現(xiàn)嘔吐、腹瀉和脫水，年齡越小，癥狀越重，其病原是豬流行性腹瀉病毒（Porcine印idemic diarrheavirus，PEDV)。自1971年英國首先報道了PEDV的發(fā)生，相繼在比利時、德國、瑞 士、日本等國家報道了該病的發(fā)生，在過去的幾十年間，PEDV在亞洲豬場中的感染非常嚴(yán) 重，我國于1976年首次報道PED的發(fā)生。近年來，該病的流行區(qū)域有逐漸擴(kuò)大的趨勢，從 2010年冬季至今，我國的大部分省份的很多規(guī)?；i場，陸續(xù)發(fā)生哺乳仔豬劇烈腹瀉，死 亡嚴(yán)重的病例，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。我國自上世紀(jì)80年代初開始陸續(xù) 發(fā)生PED，特別是最近3年以來，PED已成為最重要的豬群疫病，不僅感染面廣，而且發(fā)病率 和死亡率都居高不下，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究顯示，我國采用的基于CV777 而研制的弱毒苗對于仔豬只具有部分或無免疫保護(hù)作用，一旦豬群集體流行PEDV，一周齡 內(nèi)的仔豬很難存活下來。因此對于豬流行性腹瀉至今仍沒有可以治療的藥物和可以預(yù)防該 病的疫苗。
[0005] 豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒引起的斷奶仔豬進(jìn)行性消瘦、淋巴組織等組織病變 的一種多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS)。豬圓環(huán)病毒是一種小而無囊膜、二十面體對稱、共價閉 合、環(huán)狀、單股DNA病毒，病毒粒子直徑平均為17nm，是目前發(fā)現(xiàn)的最小動物病毒。根據(jù)其致 病性、抗原性及核苷酸序列差異而被分為PCVl和PCV2兩種血清型。PCVl最早在豬腎細(xì)胞 系PK15中被發(fā)現(xiàn)，一般認(rèn)為其對豬沒有致病性。PCV2則于1998年在患斷奶后多系統(tǒng)消耗 綜合征的豬群中首次分離獲得，并被確認(rèn)為PMWS的主要病原。除可引發(fā)豬斷奶后仔豬多系 統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎腎病綜合征、母豬繁殖障礙、先天性震顫、豬呼吸道綜合征和PCV2相 關(guān)性腸炎等多種疾病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來重大的經(jīng)濟(jì)損失。目前已有多種商品PCV2疫苗可用于 PCV疾病防控。已有疫苗屬于亞單位疫苗或全病毒滅活疫苗，均能夠產(chǎn)生良好的免疫保護(hù) 率，但也存在成本高、免疫抗體產(chǎn)生較慢、免疫保護(hù)效力還需進(jìn)一步提高等不足，從而限制 了其在中國大規(guī)模推廣應(yīng)用。因此對于豬圓環(huán)病毒病，至今仍沒有可以治療的藥物和可以 預(yù)防該病的有效疫苗。
[0006] 目前我國畜禽重要疾病的發(fā)生和流行的防控主要靠疫苗，但由于很多因素都會導(dǎo) 致免疫失敗，在我國高密度的養(yǎng)殖狀況，大劑量的抗病毒藥物濫用，導(dǎo)致病毒（菌）株的 變異速度超過了疫苗研制的速度，大規(guī)模流行病時常爆發(fā)。這些都意味著我們也要清醒地 認(rèn)識到抗病毒藥物和抗細(xì)菌藥物的研發(fā)迫在眉睫。隨著對NAC認(rèn)識的不斷深入，發(fā)現(xiàn)它對 治療吸煙損害、癌癥、艾滋病（AIDS)、帕金森病及心臟病等；減輕堿性腐蝕劑、藥物及重金 屬等物質(zhì)的毒性等方面具有明顯的作用。大量研究報道NAC作為抗氧化劑，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的 代謝活性，是通過干擾自由基產(chǎn)生的和清除已生成的自由基等實現(xiàn)的，在神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系 統(tǒng)、抗乙肝病毒和AIDS的實驗研究中和臨床上得到了廣泛應(yīng)用，然而目前，尚未見到N-乙 酰-L-半胱氨酸在防治上述豬病毒感染性疾病的應(yīng)用報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是在于提供了一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒 感染藥物中的應(yīng)用，具有安全性高、無毒副作用，對豬病毒感染保護(hù)率高的效果。
[0008] 本發(fā)明所采取的技術(shù)措施如下： 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、 將N-乙酰-L-半胱氨酸5g或10g與無水乙醇20mL、吐溫-80 30mL、注射用水50mL 溶解混勻后制成50mg/mL或lOOmg/mL的口服液， B、 將N-乙酰-L-半胱氨酸50g與乳糖15g、可溶性淀粉35g按此比例用常規(guī)技術(shù)制成 N-乙酰-L-半胱氨酸含量為50%的顆粒劑或者片劑， C、 將N-乙酰-L-半胱氨酸50g與可溶性淀粉50g或者麩皮50g按此比例用常規(guī)技術(shù) 制成N-乙酰-L-半胱氨酸含量為50%的粉劑。
[0009] 所述的N-乙酰-L-半胱氨酸與無水乙醇、注射用水、吐溫-80、乳糖、可溶性淀粉和 麩皮中的一種或2 - 5種的一定比例組成。
[0010] D、將顆粒劑、口服液、粉劑或者片劑加入到飼料或飲水中，按照100mg/kg體重的 劑量使用。
[0011]E、或N-乙酰-L-半胱氨酸為單獨(dú)給藥，按照100mg/kg體重的劑量使用。
[0012] F、作為平時預(yù)防豬病時添加，可以按照10mg/kg體重的添加劑量添加于飼料中， 在整個飼養(yǎng)周期使用； G、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將口服液經(jīng)口腔灌服， H、 或者將粉劑、顆粒劑或片劑按照100mg/kg體重劑量直接飼喂， I、 或?qū)⒎蹌㈩w粒劑或片劑按照l〇〇mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用， 每天早中晚添加三次，連續(xù)使用一周。
[0013] 所述的病毒感染為豬圓環(huán)病毒2型或豬流行性腹瀉病毒的感染。
[0014] 所述的豬圓環(huán)病毒2型為PCV2病毒W(wǎng)H株； 所述的豬流行性腹瀉病毒為PED病毒YN株。
[0015] 所述的N-乙酰-L-半胱氨酸為單獨(dú)給藥，或與輔料制成制劑給藥。
[0016] 本發(fā)明所述的重量份可以是μg、mg、g、kg等醫(yī)藥領(lǐng)域公知的重量單位。
[0017] 所述的制劑為顆粒劑、口服液、粉劑或者片劑采用藥學(xué)上常規(guī)的制劑方法制備而 成。
[0018] N-乙酰-L-半胱氨酸的有效劑量是10-100毫克/千克體重，直接給藥或制備成制 劑給藥，也可以單獨(dú)或制成制劑后添加到飼料中或者飲水中給藥。
[0019] 本發(fā)明所述的N-乙酰-L-半胱氨酸顆粒劑、口服液、粉劑或者片劑，用于臨床預(yù)防 豬病時可以按照10mg/kg體重的劑量將粉劑、顆粒劑或片劑與日糧混合，添加于豬飼料中 使用，在整個飼養(yǎng)周期使用；當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照l〇〇mg/kg體重的劑量 將口服液經(jīng)口腔灌服，或者將粉劑、顆粒劑或片劑直接飼喂，或與日糧混合，添加于飼料中 使用，每天添加三次，連續(xù)使用一周。
[0020] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果： 1、N-乙酰-L-半胱氨酸為天然氨基酸衍生物，安全性高，可以作為飼料添加劑長期使 用，已達(dá)到預(yù)防疫病的目的，長期使用也不會導(dǎo)致耐藥菌株產(chǎn)生，也不會有其他的毒副作 用，這是其他抗病藥物所不具備的優(yōu)點。
[0021] 2、N-乙酰-L-半胱氨酸也是體內(nèi)還原型谷胱甘肽合成前體，可顯著增強(qiáng)機(jī)體抗氧 化防御機(jī)能，提高豬的天然免疫功能，在豬的日糧中添加N-乙酰-L-半胱氨酸能夠顯著仔 豬血清中IFN-α的水平。
[0022] 3、大量試驗研究表明，N-乙酰-L-半胱氨酸具有顯著抑制豬圓環(huán)病毒和豬流行性 腹瀉病毒的體外增殖的效果，按10mmol/L的添加量在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加N-乙酰-L-半 胱氨酸，能夠使豬圓環(huán)病毒和豬流行性腹瀉病毒其在相應(yīng)細(xì)胞上的TCID5tl分別降低約4和 5個滴度。
[0023] 4、動物試驗顯示：N-乙酰-L-半胱氨酸具有抗病毒活性，能有效防治豬圓環(huán)病毒 2型和豬流行性腹瀉病毒的感染，從而降低發(fā)病豬的死亡率，有效提高豬的成活率和生產(chǎn)性 能。按l〇〇mg/kg體重經(jīng)口服或在仔豬飼料中添加N-乙酰-L-半胱氨酸對豬圓環(huán)病毒2型 和豬流行性腹瀉病毒感染保護(hù)率可達(dá)到75%左右。

【具體實施方式】
[0024] 實施例1 : 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、稱取N-乙酰-L-半胱氨酸IOg、無水乙醇20mL、吐溫-80 30mL、注射用水加之IOOmL0
[0025] B、制備方法：先將N-乙酰-L-半胱氨酸溶于無水乙醇中，接著加入吐溫-80,最后 緩慢加入注射用水，補(bǔ)足至l〇〇mL。
[0026] C、獲得一種N-乙酰-L-半胱氨酸口服液（100mg/mL)。
[0027] D、作為平時預(yù)防豬病時使用，可以按照10mg/kg體重的添加劑量添加于飼料中， 在整個飼養(yǎng)周期使用； E、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將口服液經(jīng)口腔灌服， F、 或者將口服液按照100mg/kg體重劑量直接飼喂， G、 或?qū)⒖诜喊凑?00mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用，每天早中晚添 加三次，連續(xù)使用一周。
[0028] 實施例2 : 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、稱取N-乙酰-L-半胱氨酸5g、無水乙醇20mL、吐溫-80 30mL、注射用水加之100mL。
[0029] B、制備方法：先將N-乙酰-L-半胱氨酸溶于無水乙醇中，接著加入吐溫-80,最后 緩慢加入注射用水，補(bǔ)足至l〇〇mL。
[0030] C、獲得一種N-乙酰-L-半胱氨酸口服液（50mg/mL)。
[0031] D、作為平時預(yù)防豬病時使用，可以按照10mg/kg體重的添加劑量添加于飼料中， 在整個飼養(yǎng)周期使用； E、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將口服液經(jīng)口腔灌服， F、 或者將口服液按照100mg/kg體重劑量直接飼喂， G、 或?qū)⒖诜喊凑?00mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用，每天早中晚添 加三次，連續(xù)使用一周。
[0032] 實施例3 : 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、稱取N-乙酰-L-半胱氨酸50g、乳糖15g、可溶性淀粉35g。
[0033] B、制備方法：將N-乙酰-L-半胱氨酸、乳糖、可溶性淀粉混合制粒，烘干制粒，分裝 即得。
[0034] C、獲得一種N-乙酰-L-半胱氨酸顆粒劑（N-乙酰-L-半胱氨酸含量為50%)。
[0035] D、作為平時預(yù)防豬病時使用，可以按照10mg/kg體重的添加劑量添加于飼料中， 在整個飼養(yǎng)周期使用； E、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將顆粒劑直接飼喂， F、 或?qū)㈩w粒劑按照100mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用，每天早中晚添 加三次，連續(xù)使用一周。
[0036] 實施例4 : 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、稱取N-乙酰-L-半胱氨酸50g、可溶性淀粉50g或麩皮50g。
[0037] B、制備方法：將N-乙酰-L-半胱氨酸與可溶性淀粉混合均勻，過60目篩，分裝即 得。
[0038]C、獲得一種N-乙酰-L-半胱氨酸粉劑（N-乙酰-L-半胱氨酸含量為50%) D、 作為平時預(yù)防豬病時使用，可以按照I〇mg/kg體重的添加劑量添加于飼料中，在整 個飼養(yǎng)周期使用； E、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將粉劑直接飼喂， F、 或?qū)⒎蹌┌凑誰〇〇mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用，每天早中晚添加 三次，連續(xù)使用一周。
[0039] 實施例5 : 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用，其步驟是： A、稱取N-乙酰-L-半胱氨酸50g、乳糖15g、可溶性淀粉35g。
[0040]B、制備方法：將N-乙酰-L-半胱氨酸、乳糖、可溶性淀粉混合后，用壓片機(jī)壓片烘 干即可。
[0041]C、獲得一種N-乙酰-L-半胱氨酸片劑（N-乙酰-L-半胱氨酸含量為50%) D、 作為平時預(yù)防豬病時使用，可以按照l〇mg/kg體重的添加劑量將片劑添加于飼料 中，在整個飼養(yǎng)周期使用； E、 當(dāng)用于臨床治療豬病的時候，可以按照100mg/kg體重的劑量將片劑直接飼喂， F、 或?qū)⑵瑒┌凑誰〇〇mg/kg體重劑量與日糧混合，添加于飼料中使用，每天早中晚添加 三次，連續(xù)使用一周。
[0042] 對上述實施例制備的N-乙酰-L-半胱氨酸制劑進(jìn)行實驗，實驗方法及結(jié)果如下： 實驗例6 : N-乙酰-L-半胱氨酸對豬天然免疫功能的影響 1、材料與方法： I. 1試驗動物：35±2日齡健康仔豬(杜洛克X長白X大白，體重11. 58±0. 26kg)， 購自武漢中糧肉食品有限公司。
[0043] 1. 2試驗藥物：N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC):市售醫(yī)藥級產(chǎn)品，純度彡98%; 1. 3試驗分組：將實驗仔豬隨機(jī)分為三個試驗組和一個空白對照組，三個試驗組為NAC低劑量組(按照l〇mg/kg體重劑量添加)、NAC中劑量組(按照50mg/kg體重劑量添加)和NAC 高劑量組(按照l〇〇mg/kg體重劑量添加),每組10頭豬。
[0044] 1.4給藥方式：試驗豬預(yù)飼期3d后，藥物以粉劑的形式添加于飼料中，豬自由采 食，空白對照組飼料中不添加NAC。分別于用藥后的第10d、20d、30d后，每組隨機(jī)選4頭仔 豬前腔靜脈采血5mL，用于細(xì)胞因子的測定。
[0045] 2、試驗指標(biāo)： 血清中IL-2、IL-6、TNF-a、IFN-α和IFN-Y的水平，在武漢輕工大學(xué)動物營養(yǎng)學(xué)重 點實驗室采用放射免疫法按試劑盒說明書進(jìn)行測定。
[0046]3、數(shù)據(jù)分析： 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS13. 0統(tǒng)計軟件中的單因素方差分析（One-wayAN0VA)和Duncan氏法多重比較，以P〈〇. 05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)，以P〈0. 01為差異極顯著標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果用平均值 土標(biāo)準(zhǔn)差表示。
[0047] 4、實驗結(jié)果： 飼料中添加不同劑量的嫩(：后，對仔豬血清中的11^-2、幾-6、了即-〇和正^￥的水平 影響不明顯，但是仔豬血清中的IFN-α差異顯著。對仔豬血清中IFN-α的影響見表1。
[0048]表1血清中TFN食景的亦仆（IVfean + SrO (η〇·/πιΤΛ

【權(quán)利要求】
1. 一種N-乙酰-L-半胱氨酸在制備治療或預(yù)防豬病毒感染藥物中的應(yīng)用； 所述的病毒感染為豬圓環(huán)病毒2型或豬流行性腹瀉病毒的感染。
【文檔編號】A61K31/198GK104398498SQ201410726587
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月4日
【發(fā)明者】侯永清, 吳濤, 丁斌鷹, 易丹, 趙迪 申請人:武漢輕工大學(xué)