用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種中藥組合物，特別涉及一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物及其制備預(yù)防或用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生藥物的應(yīng)用。針對目前缺血性腦血管病的化學(xué)治療藥物肝毒性較大，本發(fā)明的提供一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，其包括如下組分：巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份，丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。該中藥組合物在用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生方面均具有很好的治療效果，具有顯著的臨床推廣價值。
【專利說明】用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]缺血性腦血管病(ICVD)約占全部腦血管病的80%，具有發(fā)病率、致殘率、治病率高的特點，已經(jīng)成為嚴重危害人類健康的疾病之一。缺血性腦血管病是腦血管病中最主要的病種之一，是局部血液循環(huán)所提供的氧及其他營養(yǎng)物質(zhì)與神經(jīng)元代謝需求之間的驟然供需不平衡，最終導(dǎo)致缺血中央?yún)^(qū)的神經(jīng)元受損的一類疾病。短暫性腦缺血發(fā)作簡稱TIA，也稱一過性腦缺血發(fā)作或小中風(fēng)，它是由于負責(zé)供應(yīng)腦部血液的動脈血管短時間內(nèi)供血不足，引起相應(yīng)動脈負責(zé)供血的腦組織發(fā)生暫時性功能障礙。此病的主要臨床癥狀常常表現(xiàn)為突然發(fā)作的頭暈、眼花、眩暈、耳鳴、走路不穩(wěn)，嚴重時意識模糊、雙目失明或復(fù)視、單側(cè)或雙側(cè)肢體無力與感覺異常、莫名其妙地摔倒、說話不流利等。能夠引發(fā)短暫性腦缺血發(fā)作的原因頗多，諸如高血壓、高脂血癥、動脈粥樣硬化、糖尿病是最主要和最常見的原因，而過度用腦，情緒激動，寒冷，勞累則可促其發(fā)生。
[0003]短暫性腦缺血發(fā)作每次犯病的時間持續(xù)不久，通常是數(shù)秒鐘、數(shù)分鐘或數(shù)小時不等，最長不超過24小時，因此容易被人忽視。實際上，短暫性腦缺血是腦血管病的先兆或危險信號，如不及時治療極易惡化發(fā)展成為嚴重腦血管病從而威脅病人生命。據(jù)統(tǒng)計，約有25%-40%短暫性腦缺血患者在5年內(nèi)將產(chǎn)生嚴重的腦梗塞。因此，對短暫性腦缺血發(fā)作應(yīng)當進行積極治療，降低血液粘稠度，調(diào)整血液的高凝狀態(tài)，控制和維持血壓在正常范圍內(nèi)，終止和減少短暫性腦缺血發(fā)作，預(yù)防或推遲腦梗塞的發(fā)生。
[0004]腦梗塞是由于腦動脈粥樣硬化，血管內(nèi)膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進而因多種因素使局部血栓形成，使動脈狹窄加重或完全閉塞，導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧、壞死，引起神經(jīng)功能障礙的一種腦血管病。腦缺血和腦梗塞具有十分密切的聯(lián)系，能夠?qū)崿F(xiàn)對腦缺血的治療就會進一步延緩或者預(yù)防腦梗塞的發(fā)生和發(fā)展。
[0005]腦保護藥物是目前神經(jīng)學(xué)界研究的熱點，各種藥物處于不同研究階段，但目前還沒有一種藥物可以對大腦保護取得公認的確切療效。目前醫(yī)學(xué)上對于腦缺血或腦梗塞的治療尚沒有特效藥物，一般臨床上建議是控制血壓，清淡飲食，并可以服用擴血管藥和活血化淤的藥或者營養(yǎng)腦細胞的藥物改善。但臨床實踐表明，上述藥物的治療效果并不能令人滿意，而這些藥物高昂的花費通常讓患者苦不堪言。
[0006]中醫(yī)藥在用 于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生方面積累大量的中醫(yī)理論和臨床實踐。中醫(yī)認為，缺血性腦血管病是腦血管意外之一，屬于中醫(yī)的“中風(fēng)病”，“中風(fēng)病”為“風(fēng)、癆、臌、脹”四大難癥之首，是僅次于心血管疾病與癌癥而位居第三位的威脅人類生命的疾病，老年人易發(fā)，并有逐漸年輕化的趨勢。缺血型中風(fēng)病發(fā)作前絕大多數(shù)病人有先兆，中醫(yī)稱“中風(fēng)先兆”。病人多有高血脂、高血糖、高粘血癥、頸椎病等。主要病理變化是在腦動脈硬化、高脂血癥、聞?wù)逞Y的基礎(chǔ)上，血流粘桐而緩慢，或者加上其它因素壓迫腦血管，由粘、緩、窄的共同作用，使血管內(nèi)形成小血栓或血管壁形成了附壁血栓，部分阻塞或者暫短的阻塞了腦血流，造成腦組織的短時缺血、缺氧，病人表現(xiàn)為一過性的頭暈?zāi)垦！⒖诮橇飨?、手臂麻木、下肢發(fā)軟等癥狀。在“中風(fēng)先兆”期及時進行防治，可預(yù)防中風(fēng)病發(fā)生或者減輕患者的中風(fēng)病癥狀，從而降低發(fā)病率、致殘率及死亡率。傳統(tǒng)醫(yī)藥治療腦梗塞在昔日曾挽救了不少患者的生命，隨著西方醫(yī)學(xué)的發(fā)展，盡管傳統(tǒng)醫(yī)藥倍受冷遇，但一些單方和提純制劑目前仍廣泛應(yīng)用于臨床，如丹參、銀杏、川芎、葛根、燈盞花等中藥制劑。中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會于1998年建議活血化淤的中藥可用于急性缺血性腦卒中的治療，但需要更多高質(zhì)量的證據(jù)應(yīng)證。目前國外指南中尚無有關(guān)中醫(yī)中藥治療缺血性腦卒中的建議。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對目前醫(yī)學(xué)實踐中缺少腦缺血或腦梗塞顯效治療藥物、且藥物價格高昂的現(xiàn)有技術(shù)不足，本發(fā)明提供一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的藥物。該藥物以中藥組合物為主要活性成分，其用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生時，療效顯著，成本低廉，具有良好的醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景。
[0008]針對目前缺血性腦血 管病臨床治療藥物的不足，本發(fā)明的第一個目的在于提供一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，該中藥組合物在治療急性缺血性腦血管病、慢性缺血性腦血管病以及過敏性缺血性腦血管病方面具有很好的治療效果。本發(fā)明所述的中藥組合物由以下重量份的原料制得:巴戟天14-20份、烏藥4-8份、石榴皮6-12份、木通6-12份、浙貝母6-12份、牛膝15-25份、丹參15-25份、腫節(jié)風(fēng)6_12份、川芎4_8份、青葙子8份、黃柏14-20份、牛蒡子4-8份、蛇床子6-12份、甘草6_12份。
[0009]本發(fā)明中藥組合物優(yōu)選由以下重量份的原料制得:巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份、丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。
[0010]巴戟天為中草藥雙子葉植物茜草科巴戟天的干燥根。主治陽痿遺精、宮冷不孕、月經(jīng)不調(diào)、少腹冷痛、風(fēng)濕痹痛、筋骨痿軟。巴戟天與淫羊霍二者性味相近，均可補腎陽、強筋骨，祛風(fēng)除濕。然淫羊霍辛、溫之性較強，其辛散壯陽之力較峻，且溫中寓燥，二藥有一緩，一峻，一潤、一燥之不同。鹽巴戟天擅入腎經(jīng)，補腎功強，用于腎虧陽萎、早泄不孕，制巴戟天性緩毒去，使功更專，用治風(fēng)冷腹痛，關(guān)節(jié)酸痛，小便失禁等證。
[0011]烏藥為樟科植物烏藥的干燥塊根。全年均可采挖，除去細根，洗凈，趁鮮切片，曬干，或直接曬干。《藥品化義》中記載“烏藥，氣雄性溫，故快氣宣通，疏散凝滯，甚于香附。外解表而理肌，內(nèi)寬中而順氣。以之散寒氣，則客寒冷痛自除；驅(qū)邪氣則天行疫瘴即卻；開郁氣，中惡腹痛，胸膈脹滿，頓然可減；疏經(jīng)氣，中風(fēng)四肢不遂，初產(chǎn)血氣凝滯，漸次能通，皆藉其氣雄之功也。”。
[0012]石槽皮系維吾爾醫(yī)常用藥材,為石槽科植物石槽(punicagranatum L.)的干燥果 皮。石榴皮性酸、味澀，在我國傳統(tǒng)醫(yī)藥中主要用于久瀉、出血等證。石榴皮中的多酚
是一類具有多酚羥基化合物的總稱，包括鞣花單寧、沒食子單寧、鞣花酸、沒食子酸等多種化合物，含量約為其干質(zhì)量的10%_20%，具有抗菌、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、降血壓和預(yù)防心腦血管疾病等多種生理和藥理活性。
[0013]木通為雙子葉植物藥木通科植物白木通或三葉木通、木通(五葉木通)的木質(zhì)莖。屬木通科木通屬。性味苦，涼。瀉火行水。通利血脈。主治小便赤澀，淋濁，水腫，胸中煩熱，喉痹咽痛，遍身拘痛，婦女經(jīng)閉，乳汁不通。內(nèi)無濕熱，津虧，氣弱，精滑，溲頻及孕婦忌服。
[0014] 牛膝為莧科植物牛膝的根，有補肝腎；強筋骨；活血通經(jīng)；引火下行；利尿通淋的功效。主治:腰膝酸痛；下肢痿軟；血滯經(jīng)閉；痛經(jīng)；產(chǎn)后血瘀腹痛；徵瘕；胞衣不下；熱淋；血淋；跌打損傷；癰腫惡瘡；咽喉腫痛。丹參具有活血散淤、消腫止血、消炎止痛、調(diào)經(jīng)止痛、擴張冠狀動脈、改善心肌缺血狀況、降低血壓、安神靜心、降血糖和抗菌等功效，對月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠；肝脾腫大，心絞痛等病癥有一定的療效。此外，近代醫(yī)學(xué)實驗證明，丹參還具有抗血小板凝聚、降低血液黏度及調(diào)節(jié)內(nèi)外凝血系統(tǒng)的功能，是一種安全又可靠的治療心臟血管疾病的天然中藥。
[0015]腫節(jié)風(fēng)為金粟蘭科植物草珊瑚的干燥全株。夏、秋二季采收，除去雜質(zhì)，曬干。功能主治抗菌消炎涼血清熱解毒，祛風(fēng)通絡(luò)，活血散結(jié)。用于肺炎、闌尾炎、蜂窩組織炎屬熱毒壅盛證候者；以及風(fēng)濕痹痛、跌撲損傷、腫瘤的輔助治療。
[0016]川芎，原名芎藭。一種中藥植物，常用于活血行氣，祛風(fēng)止痛，主要栽培于四川、云南、貴州、廣西、湖北等地。川芎辛溫香燥，走而不守，既能行散，上行可達巔頂；又入血分，下行可達血海?；钛铕鲎饔脧V泛，適宜瘀血阻滯各種病癥；祛風(fēng)止痛，效用甚佳，可治頭風(fēng)頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥。昔人謂川芎為血中之氣藥,殆言其寓辛散、解郁、通達、止痛等功能。本品辛溫升散，凡陰虛陽亢及肝陽上亢者不宜應(yīng)用；月經(jīng)過多、孕婦亦忌用。
[0017]青葙子，系青葙的種子。該植物為一年生草本。高30-100厘米，莖直立，具分枝?；ǘ鄶?shù)，密生，在莖和枝端形成塔狀或圓柱狀穗狀花序。胞果卵狀，包在宿存花被片內(nèi)；蓋裂，上部作帽狀脫落。種子腎狀圓形，黑色，光亮，放大鏡下可見矩形網(wǎng)狀花紋，呈同心圓狀排列。種子脂肪油為青葙子油(celosiaol)，并含煙酸和硝酸鉀。味苦，微寒。有清肝火、祛風(fēng)熱、明目、降血壓之功效，分布幾乎遍及全國。
[0018]木通為雙子葉植物藥木通科植物白木通或三葉木通、木通(五葉木通)的木質(zhì)莖。屬木通科木通屬。性味苦，涼。瀉火行水。通利血脈。主治小便赤澀，淋濁，水腫，胸中煩熱，喉痹咽痛，遍身拘痛，婦女經(jīng)閉，乳汁不通。內(nèi)無濕熱，津虧，氣弱，精滑，溲頻及孕婦忌服。
[0019]蛇床子為傘形科植物蛇床的果實。另Ij名:蛇米、蛇珠、蛇粟、蛇床仁、蛇床實、氣果、雙腎子、癩頭花子、野茴香。有溫腎壯陽；燥濕殺蟲；祛風(fēng)止癢的功效。治男子陽痿；陰囊濕癢；女子宮寒不孕；寒濕帶下；陰癢腫痛；風(fēng)濕痹痛；濕瘡疥癬。唐代用于陽痿及宮冷不孕。蛇床子有溫腎助陽之功，治療腎陰虛衰引起的男子陽痿，女子宮冷不孕，可與枸杞子、菟絲子、五味子、肉桂等同用，以益腎補火，助陽興痿；《千金方》治腎陽虛寒，陽痿不起的天雄丸，即以本品配伍而成。用于男子陰囊濕癢，女子陰癢帶下，濕疹疥癬。蛇床子可燥濕祛風(fēng)，殺蟲止癢。治陰囊濕疹，女子陰癢帶多，可單用或與苦參、黃柏、明礬等煎湯外洗；《外科大成》以本品與威靈仙、當歸尾、苦參同用，水熏洗，并服龍膽瀉肝湯，治腎囊風(fēng)瘙癢作痛。治濕疹疥癬，可與枯礬、苦參、黃柏、硼砂等合用；治禿瘡、疥瘡、瘙癢多水者，可以本品配伍枯礬、雄黃、大楓子等，如《瘍科綱要》蛇床子散。
[0020]制備本發(fā)明中藥組合物的方法如下:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的
5-15倍的水，浸泡10-60分鐘，煎煮1-4次，每次1-3小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.05-1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為60-90% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇至濃縮，即得。本發(fā)明上述中藥組合物可以進一步制備成臨床上常用的藥物制劑，優(yōu)選為合劑、片劑、膠囊劑。
[0021]本發(fā)明實施例7中藥組合物對腦缺血模型大鼠海馬一氧化氮和一氧化氮合酶的影響實驗中，中藥組合物各治療組的NO和NOS水平均極顯著低于模型組的NO和NOS水平，且明顯低于陽性對照藥尼莫地平治療組的NO和NOS水平，提示中藥組合物可以顯著降低大鼠海馬中的過氧化物，對大腦海馬神經(jīng)元具有明顯的保護作用。本發(fā)明實施例8中中藥組合物對腦缺血及其引發(fā)的腦梗塞治療結(jié)果顯示，中藥組合物不僅可以顯著降低大鼠腦缺血模型的血清MDA含量，減少自由基對大鼠腦的損傷，而且可以減小腦缺血大鼠的腦梗塞面積，可見中藥組合物對缺血性腦損傷疾病特別是腦缺血以及腦缺血引發(fā)的腦梗塞具有顯著的治療效果，且這種治療效果具有劑量依賴性。各給藥組大鼠的海馬錐體細胞的顯微鏡下照片顯示模型組大鼠海馬錐體細胞細胞核皺縮，染色深，細胞碎片多，應(yīng)用中藥組合物治療后中藥組合物組對腦缺血后損傷的神經(jīng)元具有保護作用，其中中藥組合物高劑量組的神經(jīng)元細胞的細胞形態(tài)和數(shù)量與模型組具有十分顯著的差異。本發(fā)明實施例8發(fā)現(xiàn)應(yīng)用本發(fā)明中藥組合物干預(yù)7 d后，其缺血BrdU+陽性細胞明顯增加，說明可促進內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的激活、分化、增殖，有利于缺血性損傷的神經(jīng)細胞修復(fù)。該實施例還證實，本發(fā)明中藥組合物能夠激活內(nèi)源性神經(jīng)干細胞，增加缺血區(qū)新生血管，改善缺血區(qū)腦供血，促進神經(jīng)功能恢復(fù)。具體如下:與缺血性腦卒中組相比，陽性藥物和本發(fā)明中藥組合物均可以顯著升高BrdU+細胞數(shù)量和CD31+細胞數(shù)量，其中本發(fā)明中藥組合物在升高BrdU+細胞數(shù)量和CD31+細胞數(shù)量方面與陽性藥物組相比具有顯著性或極顯著性的差異，本發(fā)明中藥組合物對于神經(jīng)干細胞的再生和腦微血管的生成體現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。
[0022]因此，本發(fā)明請求保護中藥組合物用于用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的用途，由于現(xiàn)代動物福利的提高和飲食的復(fù)雜性，動物患腦血管疾病機率也明顯增加。本發(fā)明所述的用途治療對象可以為人或者動物，所述動物優(yōu)選為哺乳動物。本發(fā)明所述的藥物用途中，中藥組合物用于缺血性 腦卒中后神經(jīng)再生時可以根據(jù)病情和藥物性質(zhì)選擇合適的給藥途徑，優(yōu)選為口服給藥，用于治療或預(yù)防腦缺血或腦梗塞的給藥劑型可以為本發(fā)明上述所述的藥物制劑，如合劑、片劑、膠囊劑。
[0023]本發(fā)明所述的藥物組合物用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生時具有以下優(yōu)勢:
1)本發(fā)明中藥組合物對腦缺血或腦梗塞治療和預(yù)防效果確切，不僅可以為腦缺血或腦梗塞的治療提供一種新的用藥選擇，而且其治療效果優(yōu)于陽性藥物尼莫地平，適宜推廣使用；
2)本發(fā)明中藥組合物可促進內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的激活、分化、增殖，有利于缺血性損傷的神經(jīng)細胞修復(fù)；另外，本發(fā)明中藥組合物能夠激活內(nèi)源性神經(jīng)干細胞，增加缺血區(qū)新生血管，改善缺血區(qū)腦供血，促進神經(jīng)功能恢復(fù)；
3)本發(fā)明所述中藥組合物起效劑量低，并可以制備成不同的給藥劑型和給藥劑量，可以根據(jù)患者疾病的嚴重程度選用合適的給藥方案，從而可以大大提高患者的用藥依從性，提高藥物使用的長期效果。
【具體實施方式】
[0024]以下通過【具體實施方式】進一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅限于以下實施例。在本發(fā)明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對本發(fā)明所述的中藥組合物進行適當改進、替換功效相同的組分，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0025]實施例1本發(fā)明的中藥組合物合劑
處方:巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份，丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。
[0026]制備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的5倍的水，浸泡30分鐘，煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.1的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為75% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇濃縮，加水至1000ml,攪勻，分裝,流通蒸汽滅菌35min,即得合劑。
[0027]實施例2本發(fā)明的中藥組合物片劑
處方:巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份，丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。
[0028]制備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的10倍的水，浸泡60分鐘，煎煮I次，每次I小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為80% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇至濃縮，真空干燥、制粒，壓片即得。
[0029]實施例3本發(fā)明中藥組合物膠囊
處方:巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份，丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。
[0030]制備方法:取上述重量組分的各藥材，加藥材總重量的8倍的水，浸泡45分鐘，煎煮4次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.2的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為90% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇至濃縮，真空干燥，制粒，裝膠囊即得。
[0031]本發(fā)明中藥組合物還可以含有其他藥學(xué)輔料制成合適的藥物制劑，如片劑、膠囊劑等。其中首先將中藥組合物制備成中藥組合物細粉，所述中藥組合物細粉的制備方法為:取上述重量組分的各藥材,加藥材總重量的5-15倍的水，浸泡10-60分鐘，煎煮1-4次，每次1-3小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.05-1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為60-90% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回收乙醇至濃縮，真空干燥后粉碎即可得到中藥組合物細粉。
[0032]所述的中藥組合物細粉可以應(yīng)用于下述實施例中。
[0033]實施例4本發(fā)明中藥組合物片劑制備
處方:中藥組合物細粉50g、淀粉25g、糊精35g、低取代羥丙基纖維素5g、硬脂酸鎂lg、60%乙醇適量。
[0034]制備工藝:稱取處方量的、中藥組合物細粉、淀粉、糊精和低取代羥丙基纖維素混合均勻。另取適宜量的60%乙醇，加入于混合粉末中，混合均勻后制軟材，通過16目篩制粒，60°C以下干燥。干燥后完成后用18目篩進行整粒，篩出干粒中的細粉，與過篩的硬脂酸鎂混勻，然后再與干顆?；旌途鶆?，壓片，即得。
[0035]實施例5本發(fā)明中藥組合物片劑制備
處方:中藥組合物細粉25g、微晶纖維素18g、羥丙基纖維素15g、硬脂酸鎂1.5g、8%淀粉衆(zhòng)適量。
[0036]制備工藝:稱取處方量的中藥組合物細粉、微晶纖維素和羥丙基纖維素混合均勻。另取適宜量的8%淀粉漿溶液，加入混合粉末中，混合均勻后制軟材，通過16目篩制粒，60°C以下干燥。干燥后完成后用18目篩進行整粒，篩出干粒中的細粉，與過篩的硬脂酸鎂混勻，然后再與干顆?；旌途鶆颍瑝浩?，即得。
[0037]實施例6本發(fā)明中藥組合物膠囊劑制備
處方:中藥組合物細粉25g、可壓性淀粉40g、乳糖3g、低取代羥丙基纖維素5g、60%乙醇適量。
[0038]制備工藝:將處方中的各輔料過100目篩，稱取中藥組合物細粉與可壓性淀粉、乳糖和低取代羥丙基纖維素混合均勻后，加入60%乙醇溶液制軟材，18目篩制顆粒，于60°C干燥，16目篩整粒，裝填膠囊，即得。 [0039]實施例7中藥組合物對腦缺血模型大鼠海馬一氧化氮和一氧化氮合酶的影響 本試驗中發(fā)明人采用尼莫地平作為陽性對照藥物，它是一種Ca2+通道阻滯劑，通過有
效地阻止Ca2+進入細胞內(nèi)、抑制平滑肌收縮，達到解除血管痙攣之目的。動物實驗證明，尼莫地平對腦動脈的作用遠較全身其他部位動脈的作用強許多，并且由于它具有很高的脂溶性特點，易透過血腦屏障。此外，可選擇性地作用于腦血管平滑肌，擴張腦血管，增加腦血流量，明顯減少血管痙攣引起的缺血性腦損傷。
[0040]1、材料與方法
1.1動物分組
SPF級健康雄性SD大鼠60只，體重250-300 g，由山東大學(xué)實驗動物中心提供。造模6周后，大鼠隨機分為6組，正常對照組、模型組、尼莫地平組、中藥組合物高劑量組(高劑量組)、中藥組合物中劑量組(中劑量組)和中藥組合物低劑量組(低劑量組)，每組10只。造模后第7周正常對照組和模型組大鼠分別給予等體積的溶媒灌胃，尼莫地平組大鼠給予30mg/(kg.d),中藥組合物高劑量組大鼠給藥劑量IOOmg/(kg.d),中藥組合物中劑量組給藥劑量50 mg/ (kg.d)中藥組合物低劑量組大鼠給藥劑量為IOmg/ (kg.d),連續(xù)給藥3周。
[0041]1.2試劑和儀器
中藥組合物:按實施例2制備工藝制備，中藥組合物處方為:巴戟天15克、烏藥6克、石榴皮10克、木通10克、浙貝母10克、牛膝20克，丹參20克、腫節(jié)風(fēng)10克、川芎5克、青葙子8克、黃柏15g、牛蒡子7g、蛇床子10g、甘草10克。
[0042]尼莫地平:購自山西亞寶藥業(yè)集團股份有限公司，批號90602 ；
NO、NOS試劑盒:南京建成生物工程研究所，批號20091210 ；
一抗nNOS、iNOS、eNOS和t3肌動蛋白抗體:北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號
S-0156R ;羊抗兔Ig-G:北京鼎國生物技術(shù)有限公司，批號0090915。
[0043]DYCZ-24D型垂直板電泳槽,北京六一儀器廠；
JS-250電泳儀，上海培清科技有限公司；
TS-2000A脫色搖床，江蘇其林貝爾儀器制造有限公司；MDF-U333 低溫冰箱，SANYO ；Precisa XS125 電子天平；
UV2550分光光度計，日本島津。
[0044]1.3腦缺血大鼠模型的制備
大鼠術(shù)前禁食12 h、禁水4 h，用10%水合氯醛(0.30ml/100g)腹腔注射麻醉，仰臥固定于木制手術(shù)臺上。頸前部備皮，酒精、碘酒消毒后，沿腹側(cè)頸正中切開，依次鈍性分離皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸鎖乳頭肌，再分別分離暴露左、右側(cè)頸總動脈及氣管，于近心端和遠心端雙重結(jié)扎后從中間剪斷，然后逐層縫合肌肉、皮膚。正常對照組大鼠同法行頸前皮膚切開，分離皮下脂肪。
[0045]1.4 NO含量和NOS活性的測定
造模后第10周，各組大鼠斷頭取腦，去除嗅球、小腦，取出大腦海馬稱重，加入9倍冷生理鹽水，電動勻衆(zhòng)機研磨，制成10%勻衆(zhòng)液,3000 r/min,離心10 min,取上清液,按試劑盒說明書測定NO含量和NOS活性。
[0046]各組大鼠新鮮腦組織海馬抽提蛋白后取等量的蛋白進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，室溫封閉30 min, nNOS、iNOS、eNOS和t3肌動蛋白一抗500倍稀釋于封閉液中，4°C反應(yīng)過夜后室溫孵育2 h。充分漂洗后辣根過氧化物酶標記的二抗羊抗兔IgG 1500倍稀釋于封閉液中，室溫孵育I h。將膜置于DAB顯色液中，顯影、定影、曝光。利用Quantity one軟件分析條帶的灰度值。
[0047]1.5統(tǒng)計學(xué) 方法
采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以s ± s表示，組問比較
采用方差分析，方差齊者采用LSD檢驗，方差不齊者采用Tamhane’ S檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0048]2 結(jié)果
2.1各組大鼠海馬NO含量和NOS活性的比較
如表1所示，與正常對照組比較，模型組大鼠海馬NO含量和NOS活性明顯升高(P< 0.01);與模型組比較，尼莫地平組和中藥組合物各劑量組大鼠海馬NO含量和NOS活性明顯降低(P <0.05);與陽性對照藥尼莫地平相比，中藥組合物各劑量組大鼠海馬NO含量和NOS活性均顯著降低(P < 0.05)，其中中藥組合物高劑量組與尼莫地平治療組相比具有極顯著差異(P <0.01)。
[0049]表1各給藥組大鼠海馬NO含量和NOS活性比較
【權(quán)利要求】
1.一種用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，其特征在于由以下重量份的原料制得:巴戟天14-20份、烏藥4-8份、石榴皮6-12份、木通6_12份、浙貝母6_12份、牛膝15-25份、丹參15-25份、腫節(jié)風(fēng)6_12份、川芎4_8份、青葙子8份、黃柏14-20份、牛蒡子4-8份、蛇床子6-12份、甘草6-12份。
2.如權(quán)利要求1所述的用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，其特征在于由以下重量份的原料制得:巴戟天15份、烏藥6份、石榴皮10份、木通10份、浙貝母10份、牛膝20份、丹參20份、腫節(jié)風(fēng)10份、川芎5份、青葙子8份、黃柏15份、牛蒡子7份、蛇床子10份、甘草10份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物，其特征在于所述中藥組合物為合劑、片劑、膠囊劑。
4.一種制備如權(quán)利要求1或2所述的用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生的中藥組合物的方法，其特征在于它包括以下步驟:取各藥材，加藥材總重量的5-15倍的水，浸泡10-60分鐘，煎煮1-4次，每次1-3小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度1.05-1.25的浸膏，該相對密度是在60攝氏度下的檢測結(jié)果，加入乙醇至含醇量為60-90%v/v，靜置24小時，取上清液，回收乙醇至濃縮，即得。
5.如權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備用于缺血性腦卒中后神經(jīng)再生藥物中的用途。
6.如權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備用于制備治療或預(yù)防腦缺血或腦梗死藥物中的 途。
【文檔編號】A61P9/10GK103989912SQ201410275212
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年6月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月19日
【發(fā)明者】曹現(xiàn)娥 申請人:楊獻華