一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體的制作方法
【專利摘要】發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體，是用保藏編號為CGMCC?No.8504的番鴨細(xì)小病毒作為抗原制備的。本發(fā)明用番鴨細(xì)小病毒YBMDP株接種番鴨胚，分別收獲死亡胚胚體和胚液，經(jīng)研磨、凍融后收取病毒液，經(jīng)超濾濃縮、甲醛溶液滅活后，加油佐劑混合乳化制成疫苗。用此疫苗接種產(chǎn)蛋雞，收獲雞蛋，分離蛋黃，滅活、萃提精制得到抗體。制備的抗體能預(yù)防番鴨細(xì)小病毒引起的雛鴨細(xì)小病毒感染，此卵黃抗體具有高效、安全性好、保護(hù)率高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于獸用生物制品領(lǐng)域，具體涉及一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]番鴨細(xì)小病毒病是侵害雛番鴨的一種急性或亞急性傳染病，它具有高度傳染性，發(fā)病率和死亡率都很高，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，主要發(fā)生于I~3周齡的雛番鴨，尤其是10日齡左右的雛番鴨，3周齡以上基本不發(fā)病。雛番鴨以喘氣、腹瀉及胰臟壞死和出血為主要特征的傳染病。本病最早于20世紀(jì)80年代中后期出現(xiàn)于中國福建和法國西部Brittany地區(qū)，20世紀(jì)90年代初才認(rèn)識到它是不同于小鵝瘟的獨(dú)立疾病，死亡率高達(dá)80%。對死亡的番鴨如果處理不當(dāng)，往往造成病毒的蔓延，產(chǎn)生更大的危害，目前市場上有預(yù)防該病的活疫苗，但而尚無快速有效的藥物或方法來防治番鴨細(xì)小病毒病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體，提供的卵黃抗體具有效價(jià)高、保護(hù)率高、安全性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0004]本發(fā)明所提供的用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病的卵黃抗體，是用保藏編號為CGMCC N0.8504的番鴨細(xì)小病毒作為抗原制備的。
[0005]該保藏編號為CGMCC N0.8504的番鴨細(xì)小病毒，為YBMDV株，已于2013年11月08日保藏于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
[0006]本發(fā)明的卵黃抗體，其制備包括如下的步驟
[0007]I)用番鴨細(xì)小病毒作為抗原，制成滅活疫苗；
[0008]2)將制備的滅活疫苗注射免疫產(chǎn)蛋雞，來獲得用番鴨細(xì)小病毒免疫后的雞蛋；
[0009]3)將免疫后的雞蛋收集卵黃用酸化水-辛酸的方法萃提、滅活制成卵黃抗體。
[0010]本發(fā)明用番鴨細(xì)小病毒YBMDP株接種番鴨胚，分別收獲死亡胚胚體和胚液，經(jīng)研磨、凍融后收取病毒液，經(jīng)超濾濃縮、甲醛溶液滅活后，加油佐劑混合乳化制成疫苗。用此疫苗接種產(chǎn)蛋雞，收獲雞蛋，分離蛋黃，滅活、萃提精制得到抗體。制備的抗體能預(yù)防番鴨細(xì)小病毒引起的雛鴨細(xì)小病毒感染，此卵黃抗體具有高效、安全性好、保護(hù)率高等優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0011]本發(fā)明使用的抗原為番鴨細(xì)小病毒YBMDP株，其信息如下:
[0012]一、YBMDV 株的篩選
[0013]2011年從浙江省某鴨場爆發(fā)了急性的番鴨細(xì)小病毒病，取病死鴨的胰臟及腸道，將胰臟及腸道組織用無生理鹽水勻漿制成20%懸液，3000r/min離心15min，取上清除菌后經(jīng)尿囊腔分別接種13日齡番鴨胚，孵化120小時(shí)，收集尿囊液及胚體組織，經(jīng)勻漿后，反復(fù)凍融3次，取上清液凍存。收獲的病毒液經(jīng)純化后進(jìn)行了病毒含量、免疫原性、特異性及純凈性等方面的病毒特性的分析檢測，結(jié)果表明該毒株病毒含量為105_7ELD5(i/0.2ml,最小免疫劑量為102_°ELD5(i/0.2ml，該病毒僅與番鴨細(xì)小病毒發(fā)生特異性反應(yīng)，無細(xì)菌、支原體及外源病毒污染，適合作為制苗用毒株。將篩選的病毒株于2013年11月08日保藏于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.8504。
[0014]對于本發(fā)明篩選的毒株的性狀進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，該株病毒屬細(xì)小病毒，圓形無囊膜，直徑在20μ m左右、對乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，對紅細(xì)胞無凝集現(xiàn)象。該病毒可引起雛番鴨發(fā)生以出血性腸炎為特征的急性敗血性傳染病。該毒株制備的疫苗免疫成年番鴨后，能保護(hù)免疫4個(gè)月內(nèi)種番鴨所產(chǎn)子代免受流行毒株的攻擊。該毒株作100倍稀釋后，與等量雛番鴨細(xì)小病毒病抗血清中和，接種13日齡番鴨胚，結(jié)果表明，中和組番鴨胚全部健活，而病毒對照組番鴨胚全部死亡。
[0015]對篩選的YBMDV株的結(jié)構(gòu)基因VP進(jìn)行測序，結(jié)果VP全長為2199bp，編碼732個(gè)氨基酸；NCBI的blast序列分析表明，YBMDV株的結(jié)構(gòu)基因VP與已公開的番鴨細(xì)小病毒的VP存在差異位點(diǎn)，同源性為97.7%~98.3% (即存在著9_16個(gè)氨基酸的差異)。
[0016]實(shí)施例1
[0017]1.制苗用病毒液的制備將生產(chǎn)用毒種YBMDV株，尿囊腔接種12~14日齡易感番鴨胚，每胚0.2ml，36~37°C孵育,每日2次照胚檢查。選擇接種后48~120小時(shí)內(nèi)死亡，且胚體有廣泛出血，毛囊出血，肝臟變性和壞死，絨毛尿膜有輕度水腫的鵝胚，取其尿囊液及鵝胚體放入組織搗碎機(jī)中粉碎，取粉碎后的組織按1:2加入生理鹽水混合；置2~8°C 4~12小時(shí)，收取尿囊液、羊水及胚體(去掉頭和四肢)。用胚液勻漿、凍融3次，4000r/min離心30min，取上清混合于無菌容器中，置2~8°C保存。(參見表1)。
[0018]表1:病毒液的制備
[0019]
【權(quán)利要求】
1.一種卵黃抗體，其特征在于，所述的卵黃抗體是用番鴨細(xì)小病毒YBMDV株作為抗原制備的。
2.如權(quán)利要求1所述的卵黃抗體，其特征在于，所述的番鴨細(xì)小病毒YBMDV株的番鴨細(xì)小病毒YBMDV株已于2013年11月08日保藏于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號為CGMCCN0.8504。
3.權(quán)利要求1所述的卵黃抗體，其制備包括如下的步驟 1)用番鴨細(xì)小病毒作為抗原，制成滅活疫苗； 2)將步驟I)制備的滅活疫苗注射免疫產(chǎn)蛋雞，來獲得用番鴨細(xì)小病毒免疫后的雞蛋； 3)將免疫后的雞蛋收集卵黃用酸化水-辛酸的方法萃提、滅活后制成卵黃抗體。
4.權(quán)利要求1所述的卵黃抗體用于預(yù)防治療番鴨細(xì)小病毒病。
【文檔編號】A61P31/20GK103833848SQ201410083016
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月7日
【發(fā)明者】宮曉, 徐保娟, 宋新宇, 李陸梅, 胡瀟, 張維, 王龍 申請人:青島易邦生物工程有限公司