活化ampk的化合物及其使用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于活化AMPK的化合物，其為腺嘌呤及/或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。并公開了該化合物的應(yīng)用，此化合物適用于活化AMPK(AMP-活化蛋白激酶)，并使用該化合物于預(yù)防或治療生理狀況或疾病，因此于哺乳動物預(yù)防或治療可被AMPK改善的生理狀況或疾病。
【專利說明】活化AMPK的化合物及其使用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明關(guān)于腺嘌呤，此化合物適用于活化AMPK (AMP-活化蛋白激酶），并使用該 化合物于預(yù)防或治療生理狀況或疾病。

【背景技術(shù)】
[0002] AMPK明確為細(xì)胞能量的感應(yīng)器及能量需求的回應(yīng)者。AMPK為異三元體由催化性 α次單元體、調(diào)節(jié)性β、Y次單元體組成，所有次單元體在真核生物具高度保留性。AMPK 活化是借由其上游激酶如LKB1、鈣離子/攜鈣素依賴的蛋白質(zhì)磷酸激酶（Ca27Calmodulin dependent kinase)及TAKl磷酸化α次單元體具保留性的第172蘇胺酸殘基，由生理或 病理壓力造成高ΑΜΡ/ΑΤΡ比例亦活化AMPK。AMPK活化后會促進(jìn)分解代謝路徑進(jìn)行并抑制 合成代謝，借由減少ATP消耗及促進(jìn)ATP生成進(jìn)而恢復(fù)細(xì)胞能量平衡。
[0003] 作為一能量代謝平衡調(diào)節(jié)者，AMPK被認(rèn)為對代謝癥候群，包括第二型糖尿病、心血 管疾病、脂肪肝等為一具潛力的藥物標(biāo)的。許多代謝癥候群都與胰島素抵抗有關(guān)。胰島素 抵抗是為一病理狀態(tài)，在此狀況細(xì)胞無法對胰島素進(jìn)行回應(yīng)，因此血液中過多的葡萄糖無 法移除至骨胳肌或脂肪組織。在肌肉細(xì)胞中，AMPK活化以非胰島素依賴性方式，通過轉(zhuǎn)錄 調(diào)控增加葡萄糖運輸?shù)鞍祝℅LUT4)表現(xiàn)量，并誘導(dǎo)GLUT4轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜上導(dǎo)致細(xì)胞攝取葡 萄糖速率增加。AMPK活化亦分別借由抑制乙酰輔酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylase) 及羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMG-CoA reductase)抑制脂肪酸及膽固醇合成。此 外AMPK活化導(dǎo)致數(shù)個轉(zhuǎn)錄因子的抑制，包括SREBP-lc，ChREBP and HNF-4a，并下降調(diào)節(jié) 脂肪酸合成及糖質(zhì)新生作用相關(guān)酵素的蛋白質(zhì)表現(xiàn)。上述提及的研究發(fā)現(xiàn)，均支持AMPK是 為代謝癥候群尤其糖尿病的治療標(biāo)的。
[0004] 除了能量代謝平衡調(diào)節(jié)外，AMPK亦參與數(shù)個細(xì)胞機(jī)制的調(diào)節(jié)，包括發(fā)炎反應(yīng)、細(xì) 胞生長、細(xì)胞雕亡、自體吞噬、老化及分化。許多研究顯示AMPK為發(fā)炎反應(yīng)抑制者。AMPK 活化通過抑制細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子（NF-kB)的訊息傳遞抑制發(fā)炎反應(yīng)。細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的訊 息傳遞為活化先天免疫及后天免疫主要路徑，當(dāng)AMPK活化后會通過刺激SIRTl、Forkhead box 0 (FoxO)或 peroxisome proliferator-activated receptor co-activator Ια (PGCla)抑制細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性以達(dá)到抑制發(fā)炎反應(yīng)的效果。此外數(shù)個研究室 亦證明AMPK活化抑制環(huán)氧化酶-2 (cyclooxygenase-2，C0X_2)的蛋白質(zhì)表現(xiàn)。環(huán)氧化 酶-2是為一誘導(dǎo)性酵素，可被發(fā)炎性細(xì)胞激素及生長因子調(diào)控，其功能為將花生四烯酸轉(zhuǎn) 化成前列腺素因而導(dǎo)致發(fā)炎反應(yīng)及疼痛，因此抑制環(huán)氧化酶的活性或表現(xiàn)已被證實具抗發(fā) 炎作用。
[0005] 數(shù)個AMPK活化劑已于生物體內(nèi)實驗被證實具抗發(fā)炎功能。舉例而言， 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR)于小鼠模式已被證實可緩 解由三硝基苯磺酸或右旋糖酐硫酸酯鈉所引起的急性及復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎，AICAR治療顯著 降低疾病小鼠的體重減少并減緩發(fā)炎反應(yīng)。此外AICAR對于人類多發(fā)性硬化癥動物模式 (EAE)有明顯的治療效果，亦降低以脂多醣誘導(dǎo)小鼠肺損傷的嚴(yán)重程度。
[0006] 細(xì)胞訊息傳遞路徑失調(diào)可能會導(dǎo)致細(xì)胞異常生長，最終導(dǎo)致癌癥。哺乳動物雷帕 霉素標(biāo)靶蛋白（mTOR)是為一絲胺酸/蘇胺酸激酶，其調(diào)控細(xì)胞生長及自體吞噬作用。哺 乳動物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白訊息傳遞路徑的活性失調(diào)在許多不同癌癥被發(fā)現(xiàn)，因此哺乳動 物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白抑制劑被認(rèn)為是癌癥治療的潛力藥物。大量研究證實AMPK磷酸化 tuberous sclerosis complex 2 (TSC2)及Raptor達(dá)到抑制哺乳動物雷帕霉素標(biāo)革巴蛋白 路徑。各種AMPK活化劑包括AICAR、metformin、phenformin已被證實抑制哺乳動物雷帕霉 素標(biāo)靶蛋白訊息路徑，并抑制癌細(xì)胞生長。此外AMPK活化通過抑制哺乳動物雷帕霉素標(biāo)靶 蛋白復(fù)合體-1誘導(dǎo)自體吞噬作用。由于AMPK抑制哺乳動物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白復(fù)合體-1， Ulkl上第757絲胺酸磷酸化減少，其后第317及777絲胺酸被AMPK磷酸化，Ulkl被AMPK 憐Ife化后隨的啟動自體吞喔作用。
[0007] 綜上所述，AMPK被認(rèn)為對許多人類疾病或病理狀況，包括發(fā)炎性疾病、傷口愈合、 神經(jīng)退化、癌癥、氧化壓力及心血管疾病為一很好的治療標(biāo)的。事實上，AMPK活化劑已被應(yīng) 用于至少24類疾病的臨床試驗，包括：細(xì)菌及真菌疾病、行為及心理失調(diào)、血液及淋巴疾 病、癌癥、腫瘤、消化系統(tǒng)疾病、耳鼻喉疾病、眼疾、腺體及賀爾蒙相關(guān)疾病、心血管疾病、免 疫系統(tǒng)疾病、嘴巴及牙齒疾病、肌肉、骨胳、軟骨疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、營養(yǎng)及代謝性疾病、呼 吸道疾病、皮膚及結(jié)締組織疾病、傷口愈合等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了一種新穎AMPK活化劑-腺嘌呤及使用該化合物于預(yù)防或治療疾病。
[0009] 本發(fā)明提供一種用于活化AMPK的化合物，其為腺嘌呤及/或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的 鹽。
[0010] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備治療可被AMPK活化劑改善的疾病或生理狀況的 藥物的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備治療發(fā)炎性生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備預(yù)防或治療前期糖尿病、第二型糖尿病、代謝癥 候群的一種或其組合的生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備預(yù)防或治療前期糖尿病、第二型糖尿病、代謝癥 候群的一種或其組合的生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備預(yù)防或治療阿茲海默癥的藥物的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備治療可被自體吞噬作用改善的疾病或生理狀況 的藥物的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備傷口愈合過程抑制疤痕形成的藥物的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備加強傷口愈合的藥物的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備哺乳動物中保護(hù)及治療受活性氧族傷害的細(xì)胞 的藥物的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明提供上述化合物作為制備預(yù)防或治療癌癥藥物的應(yīng)用。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一新穎AMPK活化劑-腺嘌呤，可于細(xì)胞內(nèi)活化AMPK，因 此可于哺乳動物預(yù)防或治療可被AMPK改善的生理狀況或疾病。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一通過活化AMPK降低血糖的方法，從而預(yù)防或治療疾 病包括：代謝癥候群、前期糖尿病、第二型糖尿病、胰島素抵抗，其中給予需要此治療的哺 乳動物有效劑量的腺嘌呤及/或醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一通過活化AMPK抗發(fā)炎的方法，從而預(yù)防或治療發(fā)炎 性狀況或疾病，其中給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的腺嘌呤及/或醫(yī)藥學(xué)上可接受 的鹽。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一通過活化AMPK抑制纖維母細(xì)胞生長的方法，從而于 傷口愈合期間預(yù)防疤痕組織生成。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一加強傷口愈合的方法，其中給予需要此治療的哺乳 動物有效劑量的腺嘌呤及/或醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一抑制反應(yīng)性氧族（ROS)生成的方法，從而保護(hù)或治 療哺乳動物的細(xì)胞遠(yuǎn)離反應(yīng)性氧族傷害，其中給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的腺嘌 呤及/或醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，提供一抑制癌細(xì)胞生長的方法，從而預(yù)防或治療癌癥，其中 給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的腺嘌呤及/或醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
[0027] 本發(fā)明是關(guān)于腺嘌呤，此化合物適用于活化AMPK，并使用腺嘌呤于預(yù)防或治療生 理狀況或疾病，包括：前期糖尿病、胰島素抵抗、第二型糖尿病、代謝癥候群、肥胖、發(fā)炎、傷 口愈合、阿茲海默癥、癌癥、氧化壓力及心血管疾病。
[0028] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤為一新穎的AMPK活化劑，并具有各種生物性功能。近年來， AMPK活化已被證實有助于疾病的預(yù)防及治療，如前期糖尿病、胰島素抵抗、第二型糖尿病、 代謝癥候群、肥胖、發(fā)炎、傷口愈合、阿茲海默癥、癌癥、氧化壓力、心血管疾病以及促進(jìn)傷口 愈合。本發(fā)明認(rèn)為，此效果可歸因于AMPK活化所導(dǎo)致但不限于降低環(huán)氧化酶-2表現(xiàn)量、抑 制應(yīng)性氧族（ROS)的生產(chǎn)及葡萄糖攝取活性的增加。
[0029] 預(yù)期適應(yīng)癥 基于本發(fā)明的研究成果（見實施例），腺嘌呤可通過活化AMPK作為使用于各種生理狀 況或疾病的治療劑。以下提供預(yù)期適應(yīng)癥的示例性引導(dǎo)及證據(jù)。
[0030] 腺嘌呤于高血糖、前期糖尿病、胰島素抵抗、第二型糖尿病的治療 最近已有報告指出AMPK活化劑包括metformin，A769662，AICAR于糖尿病或肥胖小 鼠模式降低血漿葡萄糖濃度。于本發(fā)明中，1 μ M飛00 μ M的腺嘌呤顯著增加肌肉細(xì)胞C2C12 的葡萄糖攝?。ū?)。更進(jìn)一步以高脂肪飼料喂養(yǎng)小鼠作為第二型糖尿病動物模型評估腺 嘌呤對血漿葡萄糖濃度調(diào)節(jié)效果。與控制組的高脂肪飼料喂養(yǎng)小鼠比較，給予腺嘌呤顯著 減少高脂肪飼料喂養(yǎng)小鼠的血漿葡萄糖30%以上，并減少血漿三酸甘油酯35%以上，15%以 上的體重減少（實施例3)。這里使用的術(shù)語「高血糖」是指一生理狀況，其特征為血糖高 于126毫克/分升。這里使用的術(shù)語「前期糖尿病」是指一生理狀況，其特征為空腹血糖高 于100毫克/分升但低于140毫克/分升。這里使用的術(shù)語「胰島素抵抗」是指一生理狀 況，其中全身或組織包括肝臟、骨胳肌、脂肪組織無法對胰島素反應(yīng)。這里使用的術(shù)語「第二 型糖尿病」亦指非胰島素依賴型糖尿病或成人發(fā)病型糖尿病。是指代謝失調(diào)引起的胰島素 生產(chǎn)不足或胰島素抵抗，其特征通常為空腹血糖高于140毫克/分升。根據(jù)此實施例，腺嘌 呤被證實加速葡萄糖攝取，因此可作為與高血糖有關(guān)的生理狀況或疾病的有效治療方式。
[0031] 腺嘌呤于發(fā)炎性疾病的治療 各種AMPK活化劑已被證實于生物體內(nèi)具抗發(fā)炎功能。舉例而言， 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR)于小鼠模式已被證實可緩 解由三硝基苯磺酸或右旋糖酐硫酸酯鈉所引起的急性及復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎，AICAR治療顯著 降低疾病小鼠的體重減少并減緩發(fā)炎反應(yīng)。此外AICAR對于人類多發(fā)性硬化癥動物模式 (EAE)有明顯的治療效果，亦降低以脂多醣誘導(dǎo)小鼠肺損傷的嚴(yán)重程度。于本發(fā)明中，腺嘌 呤于體外試驗中抑制脂多醣誘導(dǎo)的發(fā)炎反應(yīng)：于脂多醣刺激下，經(jīng)腺嘌呤處理的巨噬細(xì)胞 的發(fā)炎性細(xì)胞激素分泌量，包括腫瘤壞死因子α (TNF-α)、介白素_1β (IL-Ιβ)及介白 素-6 (IL-6)，與控制組相比有顯著性減少。腺嘌呤亦減少人類巨噬細(xì)胞因脂多醣誘導(dǎo)表現(xiàn) 的環(huán)氧化酶-2表現(xiàn)量（實施例4)。于三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的發(fā)炎性腸?。↖BD)小鼠模式中， 給予腺嘌呤治療組別的結(jié)腸發(fā)炎性細(xì)胞激素，包括腫瘤壞死因子（TNF)、干擾素 γ (INFy) 及介白素（IL-17)均較控制組小鼠顯著減少，且挽救體重?fù)p失（實施例5)。
[0032] 這里使用的術(shù)語「發(fā)炎性細(xì)胞激素」是指促進(jìn)系統(tǒng)性發(fā)炎反應(yīng)的細(xì)胞激素。這里 使用的術(shù)語「發(fā)炎性疾病」是指與發(fā)炎相關(guān)的疾病，包括但不限制于僵直性脊椎炎、關(guān)節(jié)炎 (骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干癬性關(guān)節(jié)炎）、氣喘、動脈粥樣硬化、克隆氏癥、結(jié)腸炎、皮膚 炎、大腸憩室炎、纖維肌痛癥、肝炎、激躁性結(jié)腸癥、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡、腎炎、阿茲海默癥、 帕金森式癥、潰瘍性大腸炎等。近年來，許多報告已證實AMPK是環(huán)氧化酶-2上游調(diào)控者，可 抑制環(huán)氧化酶-2的蛋白質(zhì)表現(xiàn)。與先前研究相符，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一新穎AMPK活化劑，腺嘌呤， 可有效抑制環(huán)氧化酶-2的蛋白質(zhì)表現(xiàn)，由此可知腺嘌呤可抑制環(huán)氧化酶_2介導(dǎo)的發(fā)炎。根 據(jù)本發(fā)明，腺嘌呤被發(fā)現(xiàn)可抑制發(fā)炎，因此可作為發(fā)炎相關(guān)的生理狀況或疾病的治療。
[0033] 腺嘌呤于傷口愈合及疤痕形成 AMPK被認(rèn)為可促進(jìn)細(xì)胞能動性并加強傷口愈合。一 AMPK活化劑，白藜蘆醇，已被證實 可加強手術(shù)傷口的愈合。除了傷口愈合外，在愈合過程中減少疤痕的形成一直為現(xiàn)代醫(yī)學(xué) 的首選目標(biāo)。新生兒傷口愈合不同于成人的傷口愈合，不會伴隨疤痕的形成，此間差異在于 環(huán)氧化酶-2的活化。于成人的傷口愈合過程，環(huán)氧化酶_2活性會經(jīng)由TGF-beta被提升， 因而導(dǎo)致傷口處前列腺素生產(chǎn)的增加。前列腺素已被證實可促進(jìn)纖維母細(xì)胞增生及膠原蛋 白的形成，此兩種因素可導(dǎo)致疤痕形成。因此，抑制環(huán)氧化酶-2的活性被認(rèn)為可有效預(yù)防 疤痕形成。于本發(fā)明中，腺嘌呤抑制纖維母細(xì)胞生長（實施例8)并降低環(huán)氧化酶-2的蛋 白質(zhì)表現(xiàn)。于動物模式中，于傷口處直接施用腺嘌呤不僅可加強傷口愈合并可減少疤痕生 成（實施例9)。依據(jù)上述資料，局部施用腺嘌呤可有效加強傷口愈合并防止疤痕形成。 [0034] 神經(jīng)退化 許多細(xì)胞機(jī)制的缺陷已被證實與神經(jīng)退化性疾病有關(guān)，包括發(fā)炎、細(xì)胞內(nèi)運輸、自體吞 噬等。自體吞噬的功能在于移除細(xì)胞內(nèi)失去功能的胞器或蛋白質(zhì)團(tuán)塊，并且對細(xì)胞內(nèi)平衡 扮演重要角色。許多神經(jīng)退化性疾病的發(fā)病機(jī)制涉及細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外蛋白質(zhì)團(tuán)塊的沉積， 而移除這些蛋白質(zhì)團(tuán)塊已顯示可改善此類疾病的進(jìn)展。此外，自體吞噬途徑受損或移除負(fù) 責(zé)自體吞噬的蛋白質(zhì)已被證實導(dǎo)致神經(jīng)退化。AMPK活化已證實可促進(jìn)自體吞噬路徑。因此， 通過活化AMPK以促進(jìn)自體吞噬路徑可作為預(yù)防或控制神經(jīng)退化性疾病的有效策略。AMPK 活化劑已被證實可經(jīng)由自體吞噬路徑減少類淀粉沉積。每日給予AMPK活化劑-白藜蘆醇 可增加阿茲海默癥小鼠的壽命。另一 AMPK活化劑-姜黃素亦被證實可作為阿茲海默癥治 療的潛在藥物。于本發(fā)明中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)腺嘌呤于神經(jīng)細(xì)胞NeUr〇-2A中顯著加強自體吞噬 活性并降低A累積，此外腺嘌呤改善阿茲海默癥疾病小鼠的認(rèn)知功能（實施例6、7)。根據(jù) 上述發(fā)現(xiàn)，腺嘌呤可作為神經(jīng)退化性疾病的治療使用。
[0035] 這里使用的術(shù)語「神經(jīng)退化」是指神經(jīng)元結(jié)構(gòu)或功能逐漸喪失的情況。神經(jīng)退化 性疾病是為神經(jīng)退化的結(jié)果，包括但不限制于阿茲海默癥、帕金森氏癥、漢丁頓舞蹈癥、肌 萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、脊髓小腦萎縮癥、脊髓性肌肉萎縮癥等。
[0036] 反應(yīng)性氧族相關(guān)疾病 生物組織中，反應(yīng)性氧族包括超氧化物自由基、羥基自由基及過氧化氫不斷的被產(chǎn) 生，且過量的反應(yīng)性氧族與許多疾病有關(guān)，包括但不限制于：神經(jīng)組織肌肉無力伴隨運動 失調(diào)與色素沉積性視網(wǎng)膜炎（NARP)、MELAS癥候群、肌抽躍癲癇合并紅色襤褸肌纖維癥 (MERRF)、Leber遺傳性視神經(jīng)萎縮癥（LHON)、KSS癥候群、阿茲海默癥、帕金森氏癥、漢丁 頓舞蹈癥、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、弗里德賴希氏共濟(jì)失調(diào)（FA)及老化。許多研究報告 證實AMPK活化劑如AICAR，于高葡萄糖、棕梠酸或白蛋白誘導(dǎo)狀況下，可減少反應(yīng)性氧族產(chǎn) 生。于本發(fā)明中，腺嘌呤降低HUVEC細(xì)胞中反應(yīng)性氧族的生產(chǎn)（表6)，因此腺嘌呤可作為反 應(yīng)性氧族相關(guān)的生理狀況或疾病的治療使用。
[0037] 癌癥 AMPK活化抑制環(huán)氧化酶-2與哺乳動物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白途徑，此二路徑為癌細(xì)胞 生長的重要機(jī)制?；诃h(huán)氧化酶-2與哺乳動物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白對癌癥的重要性，活化 AMPK以達(dá)抑制環(huán)氧化酶-2與哺乳動物雷帕霉素標(biāo)靶蛋白途徑被認(rèn)為是合理的癌癥治療 策略。事實上，許多研究報告證實AMPK活化劑中斷癌癥發(fā)展，舉例而言，phenformin及 metformin于異體移植的癌癥小鼠模式被發(fā)現(xiàn)抑制乳癌腫瘤發(fā)展及生長。于本發(fā)明中，腺嘌 呤抑制人類肝癌細(xì)胞H印G2、人類乳腺癌細(xì)胞MCF7及結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的細(xì)胞生長（實施 例11)。腺嘌呤對H印G2、MCF7、HT29的50%生長抑制濃度分別為544. 1，537. 5 and 531. 9 μΜ。于!fep G2移植小鼠模式，長期給予腺嘌呤顯著延遲腫瘤生長。根據(jù)本發(fā)明，以腺嘌呤 活化AMPK的治療方式，可預(yù)防或控制癌癥的形成或發(fā)展。

【具體實施方式】
[0038] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的 理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。
[0039] 實施例1 AMPK活性分析 于小鼠肌肉細(xì)胞C2C12、小鼠纖維母細(xì)胞3T3、人類肝癌細(xì)胞H印G2、人類乳腺癌細(xì) 胞MCF7及人類結(jié)腸癌細(xì)胞HT29人類臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC、人類急性單核白血球細(xì) 胞株THP1、人類巨噬細(xì)胞U937、小鼠微神經(jīng)膠細(xì)胞BV-2、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞Neur 〇2A及 毛乳突細(xì)胞Dermal Papilla進(jìn)行腺噪呤對AMPK磷酸化影響的分析。細(xì)胞以Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)含 10% 胎牛血清（FBS)，4mM L-glutamine, 2 mM sodium pyruvate 及 1% penicillin / streptomycin (Invitrogen GibcoBRL, Carlsbad, CA, USA)于37 ° C、5% CO2環(huán)境下培養(yǎng)。3X IO5細(xì)胞接種于6-well盤，24小時后以指 定化合物處理細(xì)胞30分鐘，接著溶解細(xì)胞并以西方墨點法進(jìn)行分析。等量蛋白質(zhì)以十二烷 基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離，接著轉(zhuǎn)印至聚偏氟乙烯膜。轉(zhuǎn)印后的聚偏氟乙烯 膜浸泡至溶于PBS緩沖液的3%牛血清白蛋白60分鐘后，分別加入抗磷酸化AMPK (Thr 172) 抗體（1:2000，Cell signaling)、抗AMPK抗體（1:2000，Cell signaling)，于4。C 作 用。16小時后加入對應(yīng)的二抗于室溫下反應(yīng)1小時。具免疫反應(yīng)帶以冷光受質(zhì)偵測，并以 底片紀(jì)錄信號。所得的信號掃描后以TotalLab Quant軟件（TotalLab)進(jìn)行分析。
[0040] 腺嘌呤對AMPK活化的影響統(tǒng)整于表1。于所有測試細(xì)胞中，腺嘌呤均顯著活化 AMPK。
[0041] 表（1)

【權(quán)利要求】
1. 一種用于活化AMPK的化合物，其特征在于，其為腺嘌呤及/或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的 鹽。
2. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備治療可被AMPK活化劑改善的疾病或生理狀況的藥 物的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備治療發(fā)炎性生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備預(yù)防或治療前期糖尿病、第二型糖尿病、代謝癥候 群的一種或其組合的生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
5. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備預(yù)防或治療前期糖尿病、第二型糖尿病、代謝癥候 群的一種或其組合的生理狀況或疾病的藥物的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備預(yù)防或治療阿茲海默癥的藥物的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備治療可被自體吞噬作用改善的疾病或生理狀況的 藥物的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備傷口愈合過程抑制疤痕形成的藥物的應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備加強傷口愈合的藥物的應(yīng)用。
10. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備哺乳動物中保護(hù)及治療受活性氧族傷害的細(xì)胞的 藥物的應(yīng)用。
11. 權(quán)利要求1所述化合物作為制備預(yù)防或治療癌癥藥物的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P17/02GK104510736SQ201310444518
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月26日
【發(fā)明者】邱壬乙, 陳翰民, 郭正宜, 林俊材, 黃純芳 申請人:華安醫(yī)學(xué)股份有限公司