專利名稱：一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物。
背景技術(shù)：
隨著年齡的增長，機體彈性的喪失引起皮膚皺紋的增加是衰老的典型特征。因此延緩皮膚衰老的分子篩選可以篩選能提高機體彈性的分子來實現(xiàn)。現(xiàn)在已知，機體彈性主要由空間上高度有序交聯(lián)的彈性纖維提供，其中彈性纖維的交聯(lián)度是評估彈性的主要指標。早于2004及2006年，有研究發(fā)現(xiàn)，賴?；趸窱 (Lysyl oxidase-like I, LOXLl)是特異地維護機體彈性纖維的發(fā)育及其更新的關(guān)鍵因子。沒有LOXLl直接特異性地影響彈性纖維的交聯(lián)形成，進而導(dǎo)致一系列的動態(tài)結(jié)締組織的病變，包括皮膚松弛、肺氣腫、心血管異常、血管增生 誘發(fā)的視網(wǎng)膜黃斑退變、性器官脫垂及尿失禁。進一步研究發(fā)現(xiàn)，隨著組織器官的老化，LOXLl的水平大大降低，并伴隨著彈性纖維交聯(lián)度的下降及彈性蛋白單體無序堆積的增加。這些發(fā)現(xiàn)揭示通過增強LOXLl蛋白的表達水平或活性能延緩生物有機體胞外基質(zhì)的衰老過程(Nature Genetics 2004 (36):178 ；Am J Path 2006(168): 519 ； IOVS2008 (49):2599 ；W0/2005/069975, US Patent 7255856, US Patent 7255857, Europeanpatent 1706139)。但是，現(xiàn)有技術(shù)還有沒有出現(xiàn)一種藥物篩選方法，能用于篩選出對LOXLl蛋白的表達水平或活性有效促進作用的物質(zhì)，并將此類物質(zhì)用于制備抗衰老的藥物、化妝品等。另夕卜，現(xiàn)有技術(shù)中用于抗衰老的藥物，其活性成分采用了一定量的化學合成材料。這些化學合成材料對皮膚都有一定刺激性，不同程度的毒副作用。而且，并不能從基因水平上解決皮膚衰老問題。因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，旨在解決現(xiàn)有抗衰老藥物問題。本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種中藥的應(yīng)用，其中，所述中藥具有進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述的中藥的應(yīng)用，其中，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。一種抗衰老藥物，其中，所述抗衰老藥物中含有如上所述的中藥的抽提物。所述的抗衰老藥物，其中，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。一種篩選藥物的方法，其中，用于篩選具有進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用的藥物，所述篩選藥物的方法包括以下步驟:研磨粉碎中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測細胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時之后，通過實時PCR的方法檢測LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實驗檢測LOXLl蛋白水平。所述篩選藥物的方法，其中，所述篩選方法，還包括以下步驟:
將培養(yǎng)過的待測細胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維交聯(lián)度是否提高。有益效果:本發(fā)明中提供了所述的中藥的應(yīng)用，所述中藥具有促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述藥物用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述中藥具有提高皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。而且本發(fā)明還提供了一種促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的藥物的篩選方法，篩選出具有促進胞外基質(zhì)交聯(lián)的中藥，此方法操作簡單，能快速檢測出具有促進作用的中藥。


圖1為本發(fā)明實施例1中人成纖維細胞的LOXLl mRNA水平檢測結(jié)果。圖2為本發(fā)明實施例1中人成纖維細胞的LOXLl蛋白水平檢測結(jié)果。圖3為本發(fā)明實施例2中人成纖維細胞的LOXLl鎖鏈素含量檢測結(jié)果。圖4為本發(fā)明實施例3中人皮膚組織細胞的LOXLl mRNA水平檢測結(jié)果。圖5為本發(fā)明實施例3中人皮膚組織細胞的LOXLl蛋白水平檢測結(jié)果。圖6為本發(fā)明實施 例4中人皮膚組織細胞的LOXLl鎖鏈素含量檢測結(jié)果。
具體實施例方式本發(fā)明提供一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。為尋找能夠提高體內(nèi)LOXLl水平的藥物分子，本發(fā)明通過實時PCR的方法，發(fā)現(xiàn)了一系列能促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥，將這些中藥作用于組織細胞，從而提高了細胞中的LOXLl蛋白及彈性纖維的交聯(lián)度。所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。這些中藥的抽提物分子均具有能促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，從而促進胞外基質(zhì)交聯(lián)。其中，虎杖的促進作用最為突出。因此，本發(fā)明提供一種中藥的應(yīng)用，所述中藥具有進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。由于此類中藥的抽提物可以通過提高胞外基質(zhì)彈性纖維交聯(lián)度的方式，以延緩皮膚衰老。因此本發(fā)明中還提供一種抗衰老藥物，所述抗衰老藥物中含有具有促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥的抽提物。本發(fā)明中還提供所述中藥的篩選方法，通過簡單的步驟，有效快速地篩選出具有促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥。所述篩選方法，包括以下步驟:
研磨粉碎適量中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測細胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時之后，通過實時PCR的方法檢測LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實驗檢測LOXLl蛋白水平。這樣，通過實時PCR和免疫印跡實驗雙重檢測，確定中藥是否具有促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用。為了進一步評估經(jīng)所述藥物抽提物處理之后彈性纖維交聯(lián)度是否提高，所述篩選方法，還包括以下步驟:
將培養(yǎng)過的待測細胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維交聯(lián)度是否提高。其中，所述待測細胞可以是人成纖維細胞或人皮膚組織細胞。以下通過實施例對本發(fā)明做進一步說明。實施例1:中藥粗提物的制備及刺激人成纖維細胞中LOXLl基因表達的藥物篩選 研磨粉碎適量藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥。將粗提物粉
末加入到生理鹽水中，制備濃度為I mg/ml的儲液。使用時藥物粗提物以200倍稀釋加入到人成纖維細胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24小時之后檢測LOXLl mRNA水平和蛋白水平。LOXLl mRNA水平檢測結(jié)果如圖1所示，LOXLl蛋白水平如圖2所示。實時PCR結(jié)果表明，郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物能顯著性提高LOXLl mRNA水平；免疫印跡實驗表明，LOXLl的蛋白水平增加了 1.3-2.1倍，圖示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。實施例2:中藥粗提物對人成纖維細胞中彈性纖維交聯(lián)的促進作用
為評估經(jīng)藥物處理之后彈性纖維交聯(lián)度，本實施例中測定了人成纖維細胞經(jīng)IN鹽酸110°C消化過夜后反應(yīng)彈性纖維交聯(lián)度的鎖鏈素的含量，檢測結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明經(jīng)郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物處理細胞之后24小時，細胞的鎖鏈素含量提高了
0.4-1.7倍，說明彈性纖維的交聯(lián)度顯著性提高，圖示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。實例3:中藥抽提物對人皮膚組織中LOXLl表達的促進作用
本實施例中進一步測定了人皮膚組織培養(yǎng)48小時之后，藥物200倍稀釋對LOXLl表達的影響。LOXLl mRNA水平檢測結(jié)果如圖4所示，LOXLl蛋白水平如圖5所示。實時PCR的結(jié)果表明，LOXLl mRNA水平提高了 0.4-1.9倍；免疫印跡的實驗表明，LOXLl蛋白水平提高7 0.7-1.6 倍，圖示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。實施例4:中藥抽提物對人皮膚組織中彈性纖維交聯(lián)的促進作用
本實施例中進一步測定了人皮膚組織培養(yǎng)48小時之后，細胞的彈性纖維交聯(lián)度。人皮膚組織經(jīng)IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測彈性纖維交聯(lián)度的鎖鏈素的含量，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明經(jīng)郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物處理后，鎖鏈素含量提高了 0.5-1.8倍，說明彈性纖維的交聯(lián)度顯著性提高，圖示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。綜上，本發(fā)明提供了一種促進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的藥物的篩選方法，篩選出具有促進胞外基質(zhì)交聯(lián)的中藥，此方法操作簡單，能快速檢測出具有促進作用的中藥。而且本發(fā)明中還提供了所述的中藥的應(yīng)用，將所述藥物用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織 病變所致的疾病的藥物。所述中藥具有提高皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。 應(yīng)當理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種中藥的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥具有進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。
3.一種抗衰老藥物，其特征在于，所述抗衰老藥物中含有如權(quán)利要求1所述的中藥的抽提物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗衰老藥物，其特征在于，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。
5.一種篩選藥物的方法，其特征在于，用于篩選具有進LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用的藥物，所述篩選藥物的方法包括以下步驟: 研磨粉碎中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測細胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時之后，通過實時PCR的方法檢測LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實驗檢測LOXLl蛋白水平。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述篩選藥物的方法，其特征在于，所述篩選方法，還包括以下步驟: 將培養(yǎng)過的待測細胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維 交聯(lián)度是否提高。
全文摘要
本發(fā)明公開一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，所述中藥具有進LOXL1基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。這些中藥的抽提物分子均具有能促進LOXL1基因轉(zhuǎn)錄的作用，從而促進胞外基質(zhì)交聯(lián)。
文檔編號A61P19/04GK103239380SQ20131018673
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月20日
發(fā)明者劉小青 申請人:劉小青