專利名稱：千金子霜在制備抑制os-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及千金子霜在制備抑制0S-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
骨肉瘤是指骨骼系統(tǒng)與其他器官一樣會(huì)罹患來(lái)自任何組織成份腫瘤或來(lái)自其他器官的轉(zhuǎn)移性病變。犯及骨骼的腫瘤，可發(fā)生于骨細(xì)胞、骨骼的造血成份，軟骨以及纖維性或滑膜成份。可能與骨骼過(guò)度生長(zhǎng)、慢性炎癥刺激、遺傳因素、特殊病毒的感染，骨內(nèi)血液回流不順暢及放射線照射等因素有關(guān)。病人之年齡、性別與發(fā)生部位，對(duì)骨瘤之良性與惡性之鑒別診斷很有幫忙。骨癌易發(fā)生在12 20歲左右的年輕人，以原發(fā)性骨瘤為常見(jiàn)，次為 50 60歲者，則以轉(zhuǎn)移性骨癌及多發(fā)性骨髓瘤轉(zhuǎn)移較多。千金子為大戟科植物續(xù)隨子EuphorbialathyrisL.的種子。又名千兩金、菩薩豆(《日華子》)，續(xù)隨子(《開(kāi)寶本草》)，拒冬實(shí)(《本草圖經(jīng)》)，聯(lián)步(《斗門(mén)方》)，拒冬子(《本草匯言》)，灘板救(《湖南藥物志》)，看園老(《貴州草藥》)，百藥解、干金藥解(《云南藥用植物志》)，小巴豆(《山西中草藥》)。原植物續(xù)隨子又名拒冬(《開(kāi)寶本草》)，半枝蓮(《綱目拾遺》)，降龍草(《陜西中藥名錄》)。有逐水退腫，破血消癥，解毒殺蟲(chóng)的功效。千金子霜的制備方法為取千金子，去皮取凈仁，照藥典制霜法制霜，即得。目前還沒(méi)有其抑制骨肉瘤(0S-732)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供千金子霜在制備抑制0S-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案千金子霜在制備抑制0S-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。千金子霜性味辛、溫；有毒。歸肝、腎、大腸經(jīng)。能逐水消腫，破血消癥。用于水腫，痰飲，積滯脹滿，二便不通，血瘀經(jīng)閉；外治頑癬，疣贅。0.5 lg，多入丸散服。外用適量?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制0S-732細(xì)胞增殖。有益效果千金子霜抑制0S-732細(xì)胞增殖，效果良好。
具體實(shí)施例方式千金子霜抑制0S-732細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料I. I實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株骨肉瘤(0S-732)，來(lái)自本公司實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實(shí)驗(yàn)藥物研究藥物千金子霜，陜西康威生物工程有限公司，批號(hào)20110323藥液儲(chǔ)液稱取IOOmg千金子霜，溶于5ml無(wú)水乙醇中，O. 2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)O. 2 μ m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。I. 3實(shí)驗(yàn)試劑DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100_061Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào)2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號(hào)2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號(hào)2010382);無(wú)水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào)080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；I. 4實(shí)驗(yàn)器材萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào)DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào)SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào)3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司 制造型號(hào)SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào)S/N 020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào)P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號(hào)MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào)DHG9123A);冰箱(西門(mén)子公司型號(hào)KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào)2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào)SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實(shí)驗(yàn)方法I) 0S-732 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入千金子霜溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。3統(tǒng)計(jì)處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean + S. D.表不。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)0S-732細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I千金子霜對(duì)0S-732細(xì)胞增殖抑制影響研究Γ~(Χ土 SD)
權(quán)利要求
1.千金子霜在制備抑制os-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了千金子霜在制備抑制OS-732細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，千金子霜的制備方法為取千金子，去皮取凈仁，照藥典制霜法制霜，即得，味辛、溫；有毒。歸肝、腎、大腸經(jīng)。能逐水消腫，破血消癥。用于水腫，痰飲，積滯脹滿，二便不通，血瘀經(jīng)閉；外治頑癬，疣贅，0.5～1g，多入丸散服，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制OS-732細(xì)胞增殖。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102824402SQ20121035771
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司