專利名稱：一種中藥提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥提取物及其制備方法和用途，特別是一種由赤芍、枳殼、薤白制成的中藥提取物及其制備方法，該中藥提取物能夠用于抗動脈粥樣硬化。
背景技術(shù)：
動脈粥樣硬化是機體中/大型動脈壁的慢性炎癥性疾病，其病理機制是不平衡的脂質(zhì)代謝以及失調(diào)的免疫反應(yīng)，特點是動脈壁脂質(zhì)積聚和炎性細(xì)胞浸潤，而常好發(fā)于受擾動的層流影響的動脈分支點等部位。隨著人們生活水平的不斷提高，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，動脈粥樣硬化是誘發(fā)冠心病、冠狀動脈疾病、中風(fēng)、缺血性心臟病等疾病的重要因素。因此尋找高效無毒的抗動脈粥樣硬化藥物有重要的現(xiàn)實意義?！つ壳坝糜趧用}粥樣硬化預(yù)防與治療的西藥主要是他汀類化合物，因其起效快且療效肯定而臨床應(yīng)用廣泛，但是部分他汀類藥物在長期使用過程中存在橫紋肌溶解等副作用。而中藥在預(yù)防和治療動脈粥樣硬化，阻斷心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展等方面有著獨特的優(yōu)勢，其療效肯定、持續(xù)、副作用小。特別是在辨證分型方面，體現(xiàn)了中醫(yī)靈活組方、因人制宜的治療特色。赤茍(PaeoniaeRadix Rubra)、積殼(Aurantii Fructus)> 薤白(AlliiMacrostemonis Bulbus)是臨床常用的中藥材,分別具有行瘀止痛、行痰消積、通陽散結(jié)的功效。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)由赤芍、枳殼、薤白按照一定比例混合后提取純化制得的提取物，經(jīng)藥效實驗驗證，具有較好的抗動脈粥樣硬化效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一方面提供一種中藥提取物，其通過包括如下步驟的方法制得I)將赤芍、枳殼和薤白用水提取，得到水提取液；2)使步驟I)中獲得的水提取液經(jīng)歷吸附色譜法，用甲醇、乙醇或它們與水的混合物，優(yōu)選乙醇洗脫，得到醇洗脫液；3)除去步驟2)中獲得的醇洗脫液中的醇，且真空干燥，得到所述中藥提取物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的中藥提取物中赤芍、枳殼、薤白的重量比為2 4:1 3:0. 5 I. 5，優(yōu)選為 3:2:1。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的中藥提取物，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別為8 12%，12 20%，12^20% ；優(yōu)選地，其中茍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別為1(Γ12%，14 16%，14 16% ；優(yōu)選地，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別約為11%，15%，15% ；
優(yōu)選地，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別約為10.38%，15. 38%, 14. 78%,或分別約為 11. 48%, 15. 76%, 15. 15%,或分別約為 11. 68%, 15. 83%, 15. 14%。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的中藥提取物，其中步驟2)中所述的吸附色譜為大孔吸附樹脂柱色譜；優(yōu)選地，所述的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4 5 ;優(yōu)選地，大孔樹脂的重量與三種藥材提取前的總重量之比約為I : I;優(yōu)選地，所述的真空干燥的溫度條件為40 60°C，更優(yōu)選的溫度為50°C。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的中藥提取物，其中步驟I)中所述的水提取的方式為煎煮，
優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的4-10倍，煎煮時間為O. 5 I. 5小時，煎煮次數(shù)為I 5次；進一步優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6 8倍，煎煮時間為O. 8 I. 2小時，煎煮次數(shù)為2 4次；更優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6倍或8倍，煎煮時間為I小時，煎煮次數(shù)為3次。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的中藥提取物，其中，所述的步驟2)進行醇洗脫前，還包括水洗脫的步驟；優(yōu)選地，水洗脫時，用2 4倍柱體積的水沖洗，流速為每小時I 3倍柱體積；更優(yōu)選地,用約3倍柱體積的水沖洗，流速為每小時2倍柱體積優(yōu)選地，步驟2)中進行醇洗脫時，用約I 3倍柱體積的醇洗脫，流速為每小時I 3倍柱體積；更優(yōu)選地，用約2倍柱體積的醇洗脫，流速為每小時I倍柱體積；優(yōu)選地，步驟3)中除去醇洗脫液中的醇的方式為減壓回收；優(yōu)選地，步驟3)中除醇后的醇洗脫液在60°C相對于水的密度為I. 08 I. 15。本發(fā)明的第二方面提供一種藥物組合物，其含有本發(fā)明第一方面所述的中藥提取物，以及任選的藥學(xué)可接受的輔料。所述的藥學(xué)可接受的輔料是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所述的藥物組合物可根據(jù)需要，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)制成各種常用劑型，優(yōu)選制成膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、滴丸劑等劑型。本發(fā)明的第三方面提供第一方面所述的中藥提取物或第三方面所述的藥物組合物在制備用于抗動脈粥樣硬化的藥物中的用途。本發(fā)明的第四方面提供赤芍、枳殼和薤白在制備藥物中的用途，其中所述藥物用于抗動脈粥樣硬化。 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的中藥提取物還可以通過如下方法制備，改方法包括以下步驟I)將赤芍、枳殼、薤白混合，用水提取，得提取液；2)將步驟I)獲得的提取液經(jīng)過大孔吸附樹脂柱吸附后，先水洗，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮并回收乙醇，得濃縮液；3)將步驟2)獲得的濃縮液真空干燥，得到該中藥提取物浸膏。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，第二方面所述的制備方法，其中步驟I)中所述的水提取的方式為煎煮，
優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的4-10倍，煎煮時間為O. 5 I. 5小時，煎煮次數(shù)為I 5次；進一步優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6 8倍，煎煮時間為O. 8 I. 2小時，煎煮次數(shù)為2 4次；更優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6倍或8倍，煎煮時間為I小時，煎煮次數(shù)為3次。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，第二方面所述的制備方法，其中步驟2)中，所述的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4 5 ;優(yōu)選地，大孔樹脂的重量與三種藥材提取前的總重量之比約為I : I;優(yōu)選地，水洗時，用2 4倍柱體積的水沖洗，流速為每小時I 3倍 柱體積；更優(yōu)選地,用約3倍柱體積的水沖洗，流速為每小時2倍柱體積優(yōu)選地，乙醇洗脫時，用約I 3倍柱體積的乙醇洗脫，流速為每小時I 3倍柱體積；更優(yōu)選地，用約2倍柱體積的乙醇洗脫，流速為每小時I倍柱體積；優(yōu)選地，濃縮方式為減壓濃縮；優(yōu)選地，濃縮液在60°C時的相對密度為I. 08 I. 15。所述的相對密度是相對于水的密度。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的技術(shù)方案中，第二方面所述的制備方法，其中步驟3)中所述的干燥方式為真空干燥，優(yōu)選的干燥溫度為40 60°C，更優(yōu)選的干燥溫度為50°C。發(fā)明的有益效果本發(fā)明的中藥提取物中含有質(zhì)量百分比約為8 12%，12 20%，12^20%的芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷，能夠有效地抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成，能夠用于抗動脈粥樣硬化。


圖I實施例I制備的中藥提取物液相色譜分析譜圖；圖2ApoE-/_小鼠動脈粥樣硬化斑塊病理切片圖。
具體實施例方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例I中藥提取物的制備取赤芍1500g，枳殼lOOOg，薤白500g，加8倍量水，煎煮I小時，濾過，藥渣再加6
倍量水提取兩次，每次煎煮I小時，濾過，合并濾液。濾液過DlOl大孔吸附樹脂柱(投料藥材總重量大孔樹脂重量約為I : 1，徑高比約為1:4 5)，用3倍柱體積的水沖洗，流速為每小時2倍柱體積，棄去水洗液；再用約2倍柱體積乙醇洗脫，流速為每小時I倍柱體積。收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，將洗脫液調(diào)節(jié)至相對水的密度I. 08 I. 15 (60°C)，再于50 V下真空干燥至無水，得到提取物。按照上述工藝流程分三次投料，制備三個批次的中藥提取物，分別得到提取物241. 8 克(批號 20120101),245. 7 克(批號 20120102)和 249. 3 克(批號 20120103)，結(jié)果表明該制備工藝的批次間波動較小，工藝穩(wěn)定可控。實施例2中藥提取物的分析稱取實施例I制備的中藥提取物浸膏，加水溶解配制成IOmg浸膏/mL樣品溶液，取ImL轉(zhuǎn)移至棕色液相進樣瓶，用于液相色譜分析。分析條件為Agilent 1100型液相色譜儀,色譜柱為Waters公司symmetry色譜柱(4. 6x250mm，5 μ m);流動相為乙腈-O. 02%磷酸水溶液梯度洗脫，梯度條件為Omin，10%乙腈(體積比);0_15min，乙腈濃度按照每分鐘升高O. 67%上升至20% (體積比);15-30min,維持20%乙腈(體積比);流速為I. Oml/min ;柱溫30°C ;檢測波長為230nm。提取物分析譜圖如附圖I所示。以標(biāo)準(zhǔn)品定量分析，分析三批提取物，批號20120101的提取物中芍藥苷、柚皮苷 和新橙皮苷的重量百分比含量分別為10. 38%，15. 38%和14. 78%;批號20120102的提取物中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分比含量分別為11. 48%、15. 76%和15. 15% ;批號20120103的提取物中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分比含量分別為11. 68%、15. 83%和 15. 14%。實施例3片劑制備取取實施例I制備的提取物(批號20120101)120g、淀粉180g、糊精IOg混和均勻，用10%預(yù)膠化淀粉漿粘合，濕法制粒，烘干，加適量硬脂酸鎂混和，壓成片劑1000片，包衣即得。實施例4膠囊的制備取取實施例I制備的提取物(批號20120101) 200g與羥丙基纖維素60g及微粉硅膠30g混和，用適量70%乙醇做濕潤劑，濕法制粒，揮發(fā)油用β -環(huán)糊精包合，兩者混合過篩烘干后加入硬脂酸鎂，混勻后裝膠囊，制成1000粒。實施例5滴丸的制備取取實施例I制備的提取物(批號20120101 )200g研磨過篩(100目)，加聚乙二醇6000 350g和硬脂酸25g混勻，加熱至90°C，攪拌至熔化，保持在80-85°C，控速滴入甲基硅油冷卻成丸，制得1000粒。實施例6抗動脈粥樣硬化藥效評價采用經(jīng)Apo-E基因敲除(ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化模型，觀察給藥12周對ApoE-/-小鼠高血脂癥的調(diào)節(jié)作用及動脈粥樣硬化斑塊形成的抑制作用。I.動脈粥樣硬化模型的建立Apo-E基因敲除(ApoE-/-)小鼠及C57BL/6J小鼠購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實驗動物中心(室溫24±2°C，相對濕度58-65%)。ApoE-/-小鼠經(jīng)正常飼料(購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司)喂養(yǎng)4周后，改用高脂飼料喂養(yǎng)12周，高脂飼料配方為基料77. 8%、蛋黃粉10%、豬油10%、膽固醇I. 0%、豬膽鹽O. 2%，造成動脈粥樣硬化模型。2.分組及給藥方法將小鼠分為模型組、高劑量組和低劑量組、陽性藥組、以及空白對照組。所有供試藥品均用O. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液助溶后，口服灌胃給藥，每日一次。其中
模型組給予O. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液，給藥體積為lml/100g鼠重；分別取實施例I制備的中藥提取物(批號20120101)4g和2g，加入IOOml O. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液溶解，混勻后配制成40mg/ml (高劑量組)和20mg/ml (低劑量組)的溶液，口服灌胃給藥，給藥體積為lml/100g鼠重。陽性藥給予3mg/kg的辛伐他??；空白對照組為C57BL/6J小鼠，給予O. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液，給藥體積為lml/100g 鼠重；連續(xù)給藥12周，給藥期間各組動物均自由飲水，期間喂飼高脂飼料，每隔10天稱體重I次。觀察給藥12周對ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的抑制作用。3.實驗方法 連續(xù)給藥12周后,處死小鼠,小鼠處死前24小時禁食禁水,稱重。剝離主動脈固定于10%甲醒中，石臘包埋切片后進行HE染色(蘇木精-伊紅染色，hematoxylin-eosinstaining，簡稱HE染色)，光學(xué)顯微鏡觀察、拍照動脈粥樣硬化斑塊病變情況。分別檢測主動脈弓部、主動脈胸段及主動脈腹段中的斑塊面積，用Image J軟件計算該三部分斑塊面積與管腔面積的比值。4.實驗結(jié)果( I)本發(fā)明提取物抗動脈粥樣硬化的效果結(jié)果表明，空白對照小鼠未形成動脈粥樣硬化斑塊，而模型組小鼠其主動脈各部分均出現(xiàn)了明顯的粥樣硬化斑塊，出現(xiàn)動脈管腔狹窄的情況。陽性藥組對動脈粥樣硬化斑塊形成有一定的抑制作用，但與模型組相比統(tǒng)計上無顯著差異；而提取物高、低劑量組對整個主動脈斑塊的形成有明顯的抑制作用，其中高劑量組對主動脈弓部和主動脈腹段斑塊的形成具有顯著抑制作用(P〈0. 05)，具體數(shù)據(jù)見表I及附圖2。結(jié)果提示，本發(fā)明提供的中藥提取物具有顯著的抗動脈粥樣硬化效果，其藥效作用強度不弱于辛伐他汀。表I中藥提取物對動脈粥樣硬化斑塊形成的抑制作用
權(quán)利要求
1.一種中藥提取物，其通過包括如下步驟的方法制得 1)將赤芍、枳殼和薤白用水提取，得到水提取液； 2)使步驟I)中獲得的水提取液經(jīng)歷吸附色譜法，用甲醇、乙醇或它們與水的混合物，優(yōu)選乙醇洗脫，得到醇洗脫液； 3)除去步驟2)中獲得的醇洗脫液中的醇，且真空干燥，得到所述中藥提取物。
2.權(quán)利要求I所述的中藥提取物，其中赤芍、枳殼、薤白的重量比為2 4:f 3:0. 5 1. 5，優(yōu)選為3:2:1。
3.權(quán)利要求I所述的中藥提取物，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別為 8 12%，12 20%，12 20% ； 優(yōu)選地，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別為1(Γ12%，1Γ16%,14 16% ； 優(yōu)選地，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別約為11%，15%，15% ； 優(yōu)選地，其中芍藥苷、柚皮苷和新橙皮苷的重量百分含量分別約為10. 38%，15. 38%，14.78%，或分別約為 11. 48%, 15. 76%, 15. 15%，或分別約為 11. 68%, 15. 83%, 15. 14%。
4.權(quán)利要求I至3任意項所述的中藥提取物，其中步驟2)中所述的吸附色譜為大孔吸附樹脂柱色譜； 優(yōu)選地，所述的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4 5 ; 優(yōu)選地，大孔樹脂的重量與三種藥材提取前的總重量之比約為I : I; 優(yōu)選地，所述的真空干燥的溫度條件為40 60°C，更優(yōu)選的溫度為50°C。
5.權(quán)利要求I至3任意項所述的中藥提取物，其中步驟I)中所述的水提取的方式為煎煮， 優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的4-10倍，煎煮時間為O. 5 I. 5小時，煎煮次數(shù)為I 5次； 進一步優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6 8倍，煎煮時間為O. 8 I. 2小時，煎煮次數(shù)為2 4次； 更優(yōu)選地，水的用量為藥物總重量的6倍或8倍，煎煮時間為I小時，煎煮次數(shù)為3次。
6.權(quán)利要求I至3任意項所述的中藥提取物，其中，所述的步驟2)進行醇洗脫前，還包括水洗脫的步驟； 優(yōu)選地,水洗脫時,用2 4倍柱體積的水沖洗，流速為每小時I 3倍柱體積；更優(yōu)選地,用約3倍柱體積的水沖洗，流速為每小時2倍柱體積 優(yōu)選地,步驟2)中進行醇洗脫時，用約I 3倍柱體積的醇洗脫，流速為每小時I 3倍柱體積；更優(yōu)選地，用約2倍柱體積的醇洗脫，流速為每小時I倍柱體積； 優(yōu)選地，步驟3)中除去醇洗脫液中的醇的方式為減壓回收； 優(yōu)選地，步驟3)中除醇后的醇洗脫液在60°C相對于水的密度為I. 08 I. 15。
7.—種藥物組合物，其含有權(quán)利要求I至6任一項所述的中藥提取物，以及任選的藥學(xué)可接受的輔料。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，該中藥組合物的劑型為膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、滴丸劑。
9.權(quán)利要求I至6任一項所述的中藥提取物或權(quán)利要求7至8任一項所述的藥物組合物在制備用于抗動脈粥樣硬化的藥物中的用途。
10.赤芍、枳殼和薤白在制備藥物中的用途，其中所述藥物用于抗動脈粥樣硬化。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥提取物、其制備方法和用途。該中藥提取物由赤芍、枳殼、薤白提取得到，可以用于制備抗動脈粥樣硬化的藥物。
文檔編號A61K36/8962GK102895477SQ201210306969
公開日2013年1月30日 申請日期2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月24日
發(fā)明者程翼宇, 王怡, 王毅 申請人:天津中醫(yī)藥大學(xué)