專利名稱：用于治療自身抗體陽(yáng)性疾病患者的方法和組合物的制作方法
用于治療自身抗體陽(yáng)性疾病患者的方法和組合物本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2006年10月05日的申請(qǐng)?zhí)枮?00680047110. 7標(biāo)題為“用于
治療自身抗體陽(yáng)性疾病患者的方法和組合物”的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)
背景技術(shù)：
Neutrokine-a蛋白(SEQ ID NO:2)是TNF配體家族的一個(gè)成員，其與APRIL (28. 7%、SEQ ID NO: 4)、TNF a (16. 2%)、和淋巴毒素-a (LT a ) (14. 1%)享有氨基酸序列相同性(Moore, et al. , (1999) Science 285:260-263)。Neutrokine- a 在科技和專利文獻(xiàn)中有著多個(gè)名稱，包括B淋巴細(xì)胞刺激物(BLyS)、B細(xì)胞活化因子(BAFF)、TNF和ApoL相關(guān)性白細(xì)胞表達(dá)配體-I (TALL-I) (Moore, et al. , (1999) Science 285:260-263 ;Schneideret al. , (1999) J. Exp. Med. 189:1747-1756 ；和 Khare et al. , (2000) Proc. Natl. Acad.Sci. 97:3370-3375)。Neutrokine-a的正式名稱是腫瘤壞死因子(配體)超家族成員13B(TNFSF13b)。全長(zhǎng)Neutrokine- a基因編碼285個(gè)氨基酸的多肽，其第47位到73位氨基·酸之間為跨膜區(qū)，跨膜區(qū)前面為II型膜結(jié)合蛋白特征性的非疏水性序列。和TNF家族的其他成員一樣，Neutrokine-a以三聚體蛋白的形式發(fā)揮作用。當(dāng)Neutrokine-a在細(xì)胞表面表達(dá)之后，在第134位氨基酸處裂解細(xì)胞外區(qū)，以便釋放出有生物學(xué)活性的三聚體。已知Neutrokine-a與來(lái)自腫瘤壞死因子受體超家族的三種不同受體結(jié)合。它們是跨膜活化物和CAML互作用體(TACI，GenBank編號(hào)AAC51790，SEQ ID N0:6)、B細(xì)胞活化因子受體、B細(xì)胞成熟抗原(BCMA，GenBank編號(hào)NP_001183、SEQ ID NO:8)和(BAFF-R、GenBank編號(hào) NP_443177SEQ ID NO: 10)。(Gross, etal.，(2000)Nature 404:995-999 ；Thompson etal. , (2001) Science 293:2108-2111 ;和Yan et al. , (2000)Nature Immunol. 1:252-256)。受體的表達(dá)主要限定于B淋巴細(xì)胞(Moore, et al.，(1999) Science 285:260-263)。相信Neutrokine- a的大部分作用都是由BAFF-R介導(dǎo)的，因?yàn)樵贜eutrokine- a表達(dá)缺陷或BAFF-R表達(dá)缺陷小鼠的B細(xì)胞組分中的主要缺陷在TACI或BCMA缺陷小鼠中并不明顯(Schieman，et al., (2001)Science 292:2111-2114 ；Gross et al. , (2001)Immunityl5:289-302 ;和 Yan et al. , (2000)Nature Immunol. 1:252-256)。當(dāng)在體外和體內(nèi)檢測(cè)Neutrokine-a蛋白時(shí)，Neutrokine- a顯不出能促進(jìn)B細(xì)胞的增殖、分化和生存。另外，Neutrokine- a也顯示出一些對(duì)T細(xì)胞的作用(MacKay et al. , (1999) J. Exp. Med. 190: 1697-1710 ；Huard et al. , (2001)J.Immunol. 167:6225-6231 ;Huard et al. , (2004)Int. Immunol. 16:467-475 ；Ng etal. , (2004) J. Immunol. 173:807-817)。被遺傳工程化成過(guò)度表達(dá) Neutrokine-a 的小鼠具有增加數(shù)目的外周B細(xì)胞和增高的免疫球蛋白濃度。另外，Neutrokine-a轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出自身免疫表型，其與人系統(tǒng)性紅斑狼瘡中看到的類似，包括發(fā)生自身抗體和腎小球腎炎相關(guān)癥狀(Moore, et al. , (1999) Science 285:260-263 ;MacKay, et al. , (1999)J. Exp. Med. 192:129-135)。后來(lái)的研究顯示在自身免疫病例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和干燥綜合征患者的血清和/或滑膜液中的Neutrokine-a水平也是被上調(diào)的(Cheema et al. , (2001)Arthritis Rheum. 44:1313-1319 ；Groom et al. , (2002)J. Clin.Invest. 109:59-68 ；Mariette et al. , (2003)Ann. Rheum. Dis 62:168-171)。因此，在科學(xué)界普遍的看法是Neutrokine-a拮抗劑在治療自身免疫病方面具有治療作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或“狼瘡”)是一種自身免疫病，其癥狀是極其異質(zhì)性的。目前SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)包括11條標(biāo)準(zhǔn)(I)頰部“蝶形”紅斑；(2)盤(pán)狀紅斑；(3)光過(guò)敏；(4) 口腔潰瘍；(5)關(guān)節(jié)炎；(6)漿膜炎；(7)腎臟?。?8)神經(jīng)系統(tǒng)異常；(9)血液系統(tǒng)異常；(10)免疫學(xué)異常；和(11)存在抗核抗體。在Tan et al. , (1982)ArthritisRheum. 25:1271-1277 JPHochberg et al. , Arthritis Rheum. (1997) 40:1725 中對(duì)這些標(biāo)準(zhǔn)有著更詳細(xì)的解釋。符合這11條標(biāo)準(zhǔn)中4條標(biāo)準(zhǔn)的患者就可以被診斷為SLE。因此，臨床診斷為SLE的個(gè)體可以具有無(wú)重疊的癥狀。此外，多個(gè)狼瘡癥狀與其他疾病的癥狀相重疊。例如，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性肌炎-皮肌炎、系統(tǒng)性硬化(或硬皮病)、干燥綜合征和各種形式的血管炎都與狼瘡共有一些癥狀，包括一個(gè)或多個(gè)以下特征出現(xiàn)自身抗體包括抗核抗體和抗dsDNA抗體、關(guān)節(jié)痛和關(guān)節(jié)腫脹、皮疹和器官受累。因此，在臨床實(shí)踐中常常難以準(zhǔn)確地診斷出狼瘡患者和其他類似疾病的患者。造成狼瘡診斷困難的其他因素包括疾病沒(méi)有快速進(jìn)展，患者在一定時(shí)間內(nèi)逐步地蓄積癥狀。另外，SLE是一種在患者體內(nèi)有著可變活性的疾病。疾病有時(shí)是靜止的，而患者在其他時(shí)候表現(xiàn)出癥狀數(shù)目和嚴(yán)重度的增加，即處·于“活動(dòng)”發(fā)作。最后，沒(méi)有一個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢查能確診狼瘡。因此，本領(lǐng)域需要能夠確定具有特殊癥狀的狼瘡患者亞群以及確定這些患者亞群和最可能使得這些亞群患者獲益的治療之間的相關(guān)性。本申請(qǐng)鑒定出了特殊的自身免疫病患者亞群，其最可能從免疫調(diào)節(jié)劑治療中獲
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發(fā)明內(nèi)容
在2期臨床試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)用中和Neutrokine- a蛋白的抗體治療狼瘡患者(第O、14、28天靜脈內(nèi)輸注，之后每4周靜脈內(nèi)輸注I次，直到第52周)，顯著地緩解了 ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者亞群中與狼瘡相關(guān)的癥狀(見(jiàn)實(shí)施例I)。令人驚訝的是，與整個(gè)入選臨床試驗(yàn)的患者人群不同的是，只在患者亞組中獲得了測(cè)定疾病活性的臨床終點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的改善(例如SELENA SLEDA評(píng)分下降，在下面由更為詳細(xì)的解釋)。因此，本發(fā)明涉及鑒定出最可能應(yīng)答于免疫調(diào)節(jié)劑例如Neutrokine-a的拮抗劑的治療的患者亞組。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血衆(zhòng)或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的方法,包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。下面將更為詳細(xì)地描述免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑是Neutrokine-a的拮抗劑,包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白或其片段或變體、結(jié)合Neutrokine-a受體的抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合肽或多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體(例如Neutrokine- a 和 / 或APRIL 的顯性負(fù)調(diào)控物(dominant negative)形式)。Neutrokine-a的其他拮抗劑包括Neutrokine-a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a肽模擬物、祀向于Neutrokine- a的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)、靶向于APRIL的反義RNA和短干擾RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine- a的受體和/或APRIL的受體的反義RNA和短干擾RNA(siRNA) o Neutrokine- a受體包括例如跨膜活化物和CAML互作用體(TACI, GenBank編號(hào)AAC51790，SEQ ID NO:6)、B細(xì)胞活化因子受體、B細(xì)胞成熟抗原(BCMA，GenBank編號(hào)NP_001183、SEQ ID NO:8)和(BAFF-R、GenBank 編號(hào) NP 443177SEQ ID NO: 10)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的自身免疫病患者的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。其中可以鑒定出ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的自身免疫病實(shí)例包括，但不限于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、硬皮病、多發(fā)性肌炎-皮肌炎、Felty綜合征、混合結(jié)締組織病、雷諾綜合征、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜和IgA腎病。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的干燥綜合征患者的方法,包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血衆(zhòng)或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的干燥綜合征患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。·在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血衆(zhòng)或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，本發(fā)明提供治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)狼瘡患者已經(jīng)被臨床診斷為SLE(見(jiàn)例如 Tan et al. , Arthritis Rheum. 25:1271-7，(1982);和 Hochberg et al. , ArthritisRheum. 40:1725, (1997)，在此通過(guò)引用其全部?jī)?nèi)容將其并入本申請(qǐng))。本發(fā)明也提供了治療患者的方法，包括在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定患者血漿或血清中的ANA滴度為1:80或更高和/或抗(1如嫩抗體大于或等于30幾/1^。本發(fā)明也提供了治療患者的方法，包括在施用Neutrokine-a的拮抗劑之前確定患者血楽；或血清中的ANA滴度為1:80或更高和/或抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL。在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療狼瘡患者的方法，包括在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定患者具有一個(gè)或多個(gè)以下特征依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)臨床診斷為SLE (見(jiàn)例如 Tan et al. , Arthritis Rheum. 25:1271-7，(1982);和 Hochberg et al. , ArthritisRheum. 40:1725, (1997)) ；SELENA SLEDAI評(píng)分彡6 ;血漿或血清C4補(bǔ)體水平下降；血漿或血清C3補(bǔ)體水平下降；ANA滴度為1:80或更高；血漿或血清抗ds-DNA抗體大于或等于30IU/mL ;正在接受> 7. 5mg/天的潑尼松或其他用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的糖皮質(zhì)激素；正在接受或者先前接受過(guò)用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的免疫抑制劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，臨床醫(yī)生根據(jù)對(duì)患者病例記錄的評(píng)價(jià)進(jìn)行確定。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，臨床醫(yī)師根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行確定。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，臨床醫(yī)師根據(jù)從患者的最后一次狼瘡的藥物治療(包括免疫調(diào)節(jié)劑的藥物治療)以及在開(kāi)始包括施用治療有效量的在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑(包括Neutrokine-a的拮抗劑)藥物治療之前獲得的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行確定。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的干燥綜合征患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的干燥綜合征患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。
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在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的拮抗劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)狼瘡患者已經(jīng)被臨床診斷為SLE (見(jiàn)例如Tan et al. , ArthritisRheum. 25:1271-7，(1982);和 Hochberg et al. , Arthritis Rheum. 40:1725, (1997)，在此通過(guò)引用其全部?jī)?nèi)容將其并入本申請(qǐng))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中的抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的糖皮質(zhì)激素的量的方法，所述糖皮質(zhì)激素的量被降低至少25%到< 7. 5mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，糖皮質(zhì)激素選自由潑尼松、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍和地塞米松組成的組。在進(jìn)一步的具體的實(shí)施方式中，糖皮質(zhì)激素是潑尼松。在另一個(gè)實(shí)施方式中，提供減少施用給自身免疫病患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法，包括施用治療有效量的抗Neutrokine-a抗體。在另一個(gè)2期臨床試驗(yàn)(實(shí)施例3)中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者接受了中和Neutrokine-a蛋白的抗體的治療，施用方式為第0、14、28天靜脈輸注I次，然后每4周一次直到第24周，所述治療最可能緩解在開(kāi)始中和Neutrokine-a的抗體治療之前其DAS28評(píng)分大于5. I的患者、先前沒(méi)有接受過(guò)抗TNF治療、和/或血漿和/或血清類風(fēng)濕因子陽(yáng)性的患者中的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)癥狀。表現(xiàn)出最可能應(yīng)答于中和Neutrokine-a蛋白的抗體治療的其他亞組或類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者包括男性患者、血漿和/或血清有抗CCP (環(huán)狀瓜氨酸It (cycliccitrullinated peptide))抗體的患者。在接受中和 Neutrokine-a 蛋白的抗體同時(shí)接受甲氨喋呤的患者、先前甲氨喋呤治療失敗的患者、和/或先前甲氨喋呤治療以及至少一種其他DMARD治療失敗的患者。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種確定狼瘡患者是否應(yīng)答于藥物治療的方法，包括在施用藥物治療之前確定患者的SELENA SLEDAI、BILAG和PGA評(píng)分；施用藥物治療；以及在施用藥物治療之后確定患者的SELENA SLEDAI,BILAG和PGA評(píng)分。在這個(gè)方法中，只要出現(xiàn)以下情況患者就被認(rèn)為是對(duì)藥物治療有應(yīng)答在施用藥物治療之后確定的患者的SELENA SLEDAI評(píng)分比在施用藥物治療之前的SELENA SLEDAI評(píng)分低4分或更多分；與在施用藥物治療之前確定的BILAG評(píng)分相比較，在施用藥物治療之后確定的患者的BILAG指數(shù)評(píng)分不包含新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分；和在施用藥物治療之后確定的PGA評(píng)分比在施用藥物治療之前確定的PGA評(píng)分高出不到0. 3分。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的方法，包括在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者具有一個(gè)或多個(gè)以下特征患者先前沒(méi)有接受過(guò)抗·TNF治療例如英夫利昔單抗(Infliximab)(也稱作Remicade Centocor, Inc.)、阿達(dá)木單抗(adalimumab) (Abbott 實(shí)驗(yàn)室的Humira )、或依那西普(etanercept) ((Etlbrel );患者的血漿和/或血清中有類風(fēng)濕因子；患者具有可測(cè)定的血漿和/或血清抗CCP (環(huán)狀瓜氨酸肽)抗體；患者有增高水平的血漿和/或血清CRP(C反應(yīng)蛋白)水平；患者先前經(jīng)一種或多種緩解疾病的抗風(fēng)濕性藥物治療失?。换颊哂懈叩男揎椉膊』顒?dòng)評(píng)分(DAS28);患者有腫脹和壓痛的關(guān)節(jié)；患者有晨僵；患者的紅細(xì)胞沉積率(ESR)加快和/或患者為男性。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種水性藥物制劑，包括治療有效量的抗體、量從約5mM到約50mM的緩沖劑、量從約150mM到約500mM的NaCl、量從約0. 003%到約0. 05%的表面活性劑，以及PH值從約5. 5到約6. 5。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，上述制劑中的抗體是具有IgGl/X同種型的抗體。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，上述制劑中的抗體是具有有IgGl/入同種型的人抗體，上述制劑中的緩沖劑是IOmM組氨酸或檸檬酸鈉，上述制劑中的表面活性劑是量為0. 01%w/v的聚山梨酯80(polysorbate80)，上述制劑中的NaCl濃度為約150mM，以及制劑的PH值為6. O。在其他具體的實(shí)施方式中，上述制劑能夠在約2-8° C的溫度保持穩(wěn)定至少I(mǎi)年。在另一個(gè)實(shí)施方式中，上述制劑中的抗體的量為100mg/ml。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供水性藥物制劑，包括lOOmg/mllgGl/入抗體、0. 74mg/ml L-組氨酸、I. lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽(L-histidinemonohydrochloride)、8. 8mg/ml NaCl 和 0. lmg/ml 聚山梨酯 80，其中制劑的 pH 值為 6. O。


下面的附圖只是用于舉例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，并不表示限制了權(quán)利要求書(shū)所覆蓋的本發(fā)明的范圍。圖I顯示了基線ANA抗體為1:80或更高、和/或抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者在第52周時(shí)SELENA SLEDAI下降的百分比的平均值。用t檢驗(yàn)確定p值。定義在一個(gè)方面，本發(fā)明廣泛涉及通過(guò)施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑來(lái)治療自身抗體陽(yáng)性疾病患者的方法。自身抗體陽(yáng)性疾病患者是其一種或多種生物學(xué)體液樣品例如血漿或血清或滑膜液中具有可檢測(cè)的自身抗體滴度的患者。“免疫調(diào)節(jié)劑”在此指的是一大類能夠刺激或抑制免疫系統(tǒng)的藥物化合物。本申請(qǐng)的工作實(shí)施例描述了拮抗性的抗Neutrokine-a抗體在治療狼瘡患者亞組中的成功應(yīng)用。因此，術(shù)語(yǔ)“免疫調(diào)節(jié)劑”特異地意欲覆蓋能夠作為Neutrokine-a的拮抗劑的藥物化合物或分子。Neutrokine-a的拮抗劑包括但不限于包括抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白或其片段或變體、結(jié)合Neutrokine-a受體的抗體或其抗原結(jié)合片段和Neutrokine-a結(jié)合肽或多肽的組合物。Neutrokine-a受體包括例如跨膜活化物和 CAML 互作用體(TACI，GenBank 編號(hào) AAC51790)、BAFF-R (GenBank 編碼 NP_443177)、和B細(xì)胞成熟抗原(BCMA，GenBank編號(hào)NP_001183)。特別有用的Neutrokine- a受體形式包括可溶性形式的細(xì)胞外區(qū)。Neutrokine-a受體或其片段或變體和Neutrokine-a結(jié)合多肽可以被用作融合蛋白例如Fe或人血清白蛋白(HAS)融合蛋白。Neutrokine-a的其他拮抗劑包括Neutrokine-a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a肽模擬物、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體(例如Neutrokine-a和/或APRIL的顯性負(fù)調(diào)控物形式)。這種Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體可以拮抗Neutrokine-a功能，例如通過(guò)干擾·Neutrokine- a和/或APRIL同或異多聚體化?；蛘?Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體可以阻止包括所述多肽的多肽結(jié)合Neutrokine- a受體例如TACI、BCMA和BAFF-R和/或經(jīng)所述Neutrokine- a受體的信號(hào)傳導(dǎo)。Neutrokine- a的其他拮抗劑包括Neutrokine- a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a肽模擬物、祀向于Neutrokine-a的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)、靶向于APRIL的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)、靶向于Neutrokine- a受體和/或APRIL受體的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)。下面將更詳細(xì)地描述Neutrokine- a的拮抗劑。相信Neutrokine- a抗體通過(guò)減少B細(xì)胞數(shù)目和/或B細(xì)胞活性例如免疫球蛋白分泌來(lái)發(fā)揮作用。因此，術(shù)語(yǔ)“免疫調(diào)節(jié)劑”也特異地意欲覆蓋B細(xì)胞調(diào)節(jié)劑，具體地是直接或間接地抑制或降低B細(xì)胞活性(例如B細(xì)胞增殖、分化、生存或免疫球蛋白分泌)和/或B細(xì)胞數(shù)目的藥物分子和化合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以結(jié)合本發(fā)明的方法使用的B細(xì)胞調(diào)節(jié)劑是減少所有B細(xì)胞、活化B細(xì)胞、純真B細(xì)胞(naive B cell)、記憶B細(xì)胞、漿性 B 細(xì)胞(plasma B cell)、和漿細(xì)胞樣 B 細(xì)胞(plasmacytoid B cell)、CD19+B 細(xì)胞和/或CD20+B細(xì)胞的活性或數(shù)目的藥物。免疫系統(tǒng)是細(xì)胞和細(xì)胞因子相互作用的復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。例如，抗原呈遞細(xì)胞(APC，例如巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞)和T細(xì)胞(特別是CD4+T輔助(Th)細(xì)胞)在激活B細(xì)胞增殖并分泌抗體(包括在某些疾病狀態(tài)下的自身抗體)方面起到了作用。因此，通過(guò)減少或抑制APC或Th細(xì)胞數(shù)目或活性來(lái)抑制B細(xì)胞活性也是可能的。同樣，已知由不同類型的免疫應(yīng)答例如Thl和Th2應(yīng)答?？梢杂糜诒景l(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑可以促進(jìn)一種類型的免疫應(yīng)答超過(guò)另一種，因此對(duì)治療自身抗體陽(yáng)性患者有著正面作用。因此，術(shù)語(yǔ)“免疫調(diào)節(jié)劑”最廣義地特異地意欲覆蓋刺激或抑制免疫系統(tǒng)的一種或多種細(xì)胞、細(xì)胞表面分子(例如細(xì)胞表面信號(hào)傳導(dǎo)分子)和/或細(xì)胞因子的活性或數(shù)量的藥物分子或組合物，包括作為先天性和/或適應(yīng)性免疫系統(tǒng)一部分的細(xì)胞、細(xì)胞表面分子(例如細(xì)胞表面信號(hào)傳導(dǎo)分子)和細(xì)胞因子。免疫系統(tǒng)的細(xì)胞包括，但不限于B細(xì)胞、T細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、和天然殺傷(NK)細(xì)胞?？梢员幻庖哒{(diào)節(jié)劑刺激或抑制的免疫系統(tǒng)的細(xì)胞表面上的細(xì)胞表面分子包括但不限于CD抗原例如CD20。免疫系統(tǒng)中重要的細(xì)胞因子包括但不限于TNF配體超家族成員，后者包括但不限于Neutrokine-a、APRIL 和 CD40L。
具體實(shí)施例方式在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的II期臨床試驗(yàn)中，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)用中和Neutrokine- a蛋白的抗體(施用方式為第0、14、28天靜脈內(nèi)輸注，然后每4周靜脈內(nèi)輸注I次，直到第52周)治療狼瘡患者，顯著地消除了 ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者中與狼瘡相關(guān)的癥狀(見(jiàn)實(shí)施例I)。因此，本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
提供了用Neutrokine-a的抗體拮抗劑治療其血漿或血清ANA滴度彡1:80和/或抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的方法。但是，本領(lǐng)域人員容易明白抗體分子只是各種能夠作為Neutrokine-a的拮·抗劑的分子中的其中一種。因此，本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方式
提供了用Neutrokine-a的拮抗劑治療其血漿或血清ANA滴度彡1:80和/或抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的方法。Neutrokine- a的拮抗劑包括但不限于包括抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白或其片段或變體、結(jié)合Neutrokine-a受體的抗體或其抗原結(jié)合片段和Neutrokine-a結(jié)合肽或多肽的組合物。Neutrokine-a受體包括例如跨膜活化物和 CAML 互作用體(TACI，GenBank 編號(hào) AAC51790)、BAFF-R (GenBank 編號(hào) NP_443177)和B細(xì)胞成熟抗原(BCMA，GenBank編號(hào)NP_001183)。特別有用的Neutrokine-a受體形式包括能夠結(jié)合Neutrokine-a的可溶性形式的細(xì)胞外區(qū)。Neutrokine-a受體或其片段或變體和Neutrokine-a結(jié)合多肽可以被用作融合蛋白例如Fe或人血清白蛋白(HAS)融合蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a的拮抗劑是TACI-Fc蛋白。TACI-Fc蛋白的一個(gè)實(shí)例是SEQ ID N0:6的第I到154位氨基酸與IgGl免疫球蛋白分子的Fe區(qū)相融合。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a的拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。BAFF-R-Fc蛋白的一個(gè)實(shí)例是SEQ ID NO: 10的第I到70位氨基酸與IgGl免疫球蛋白分子的Fe區(qū)相融合。任選地，用天冬酰胺取代BAFF-R中的第20位氨基酸(纈氨酸)以及用脯氨酸取代BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)。SEQ IDNO: 26顯示了具有這兩個(gè)氨基酸變化的BAFF-R的第I到70位氨基酸。Neutrokine- a的其他拮抗劑包括Neutrokine-a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a 妝模擬物、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多妝變體(例如 Neutrokine-a 和/或APRIL的顯性負(fù)調(diào)控物形式)。此類Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體可以拮抗Neutrokine- a功能,例如通過(guò)干擾Neutrokine-a和/或APRIL同或異多聚體化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a的拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物功能的Neutrokine-a蛋白片段或其變體。或者，Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體可以阻止包括所述多肽的多妝結(jié)合Neutrokine- a受體例如TACI、BCMA和BAFF-R和/或經(jīng)所述Neutrokine- a受體的信號(hào)傳導(dǎo)。Neutrokine-a的其他拮抗劑包括Neutrokine-a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a妝模擬物、革巴向于Neutrokine- a的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)、革巴向于APRIL的反義RNA和短干擾RNA(siRNA)、靶向于Neutrokine- a受體和/或APRIL受體的反義RNA和短干擾RNA(siRNA)。下面將更詳細(xì)地描述Neutrokine-a的拮抗劑。同樣，本領(lǐng)域人員明白其他免疫調(diào)節(jié)劑(具體地包括能夠調(diào)節(jié)B細(xì)胞活性或數(shù)目的分子)可以用于本發(fā)明。在具體的實(shí)施方式中，可以聯(lián)合本發(fā)明的方法一起使用的B細(xì)胞調(diào)節(jié)劑是能夠直接或間接抑制或減少B細(xì)胞活性(例如B細(xì)胞增殖、分化、生存或免疫球蛋白分泌)和/或B細(xì)胞數(shù)目的藥物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以聯(lián)合本發(fā)明的方法一起使用的B細(xì)胞調(diào)節(jié)劑是能夠減少所有B細(xì)胞、活化B細(xì)胞、純真B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、漿性B細(xì)胞和漿細(xì)胞樣B細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞和/或CD20+B細(xì)胞的活性或數(shù)目的藥物。可以用于本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)分子和B細(xì)胞調(diào)節(jié)分子對(duì)于本領(lǐng)域人員是已知的，并在下面有更為詳細(xì)的描述。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療歸為具有“活動(dòng)性”系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或“狼瘡”)病變的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者亞組中的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前被診斷為狼瘡并有著活動(dòng)性狼瘡的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑。本·發(fā)明提供治療歸為具有“活動(dòng)性”系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或“狼瘡”)病變的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者亞組中的患者的方法,包括在施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑之前確定患者具有“活動(dòng)性狼瘡”。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前被診斷為狼瘡并有著活動(dòng)性狼瘡的患者的方法，包括在施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑之前確定患者先前被診斷為狼瘡并具有“活動(dòng)性狼瘡”。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療歸為具有“活動(dòng)性”系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或“狼瘡”)病變的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者亞組中的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前被診斷為狼瘡并有著活動(dòng)性狼瘡的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine- a的抗體拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明提供治療歸為具有“活動(dòng)性”系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE或“狼瘡”)病變的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者亞組中的患者的方法，包括在施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑之前確定患者具有“活動(dòng)性狼瘡”。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前被診斷為狼瘡并有著活動(dòng)性狼瘡的患者的方法，包括在施用治療有效量的Neutrokine-a的抗體拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑之前確定患者先前被診斷為狼瘡并具有“活動(dòng)性狼瘡”。在具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)被臨床診斷為 SLE 的患者(見(jiàn)例如 Tan et al. , Arthritis Rheum. 25:1271-7，(1982);和Hochberg et al. , Arthritis Rheum. 40:1725，(1997),在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分彡4的患者。SELENA SLEDAI表示如雌激素在紅斑狼瘡中的安全性的全國(guó)評(píng)價(jià)試驗(yàn)中修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)。臨床醫(yī)生利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)和方法學(xué)可以常規(guī)地確定SELENASLEDAI 評(píng)分，見(jiàn)例如 Bombardier, et al. , Arthritis Rheum. Jun; 35 (6) : 630-40, 1992 ;和Strand, et al. , J Rheumatol. Feb; 26 (2) :490-7, 1999，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。簡(jiǎn)單地，通過(guò)考慮跨9個(gè)器官系統(tǒng)中的24項(xiàng)SLE疾病活動(dòng)項(xiàng)目確定SELENA SLEDAI評(píng)分。一些器官系統(tǒng)的病變?cè)u(píng)分比其他器官系統(tǒng)的病變加權(quán)得更多。具體地，如果出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和血管的SLE疾病活動(dòng)表現(xiàn)則記為8分；如果出現(xiàn)腎臟和肌肉骨骼的SLE疾病活動(dòng)表現(xiàn)則記為4分；如果出現(xiàn)漿膜腔、皮膚和免疫學(xué)的SLE疾病活動(dòng)表現(xiàn)則記為2分；以及如果出現(xiàn)全身和血液學(xué)的SLE疾病活動(dòng)表現(xiàn)則記為I分。理論上SELENASLEDAI評(píng)分的最高值是105，但是實(shí)際上只有少數(shù)患者的評(píng)分超過(guò)45分。在標(biāo)準(zhǔn)的SELENA SLEDAI評(píng)分系統(tǒng)中，如果患者有新出現(xiàn)的大于0. 5g/24小時(shí)的蛋白尿或者蛋白尿最近增加到了大于0.5g/24小時(shí)，則記為4分。換句話說(shuō)，如果在一次24小時(shí)尿液樣品中獲得的蛋白尿數(shù)值比患者最近一次24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的數(shù)值高0. 5g，那么SELENA SLEDAI評(píng)分表中的蛋白尿一項(xiàng)記為4分。這常常被描述了蛋白尿增加或新出現(xiàn)“0. 5g/24小時(shí)”。因此，在標(biāo)準(zhǔn)的SELENA SLEDAI評(píng)分系統(tǒng)中，在基線因?yàn)榈鞍啄虮挥洖?分的患者在隨訪中將有改善的SELENA SLEDAI，條件是目前24小時(shí)尿液樣品中的尿蛋白數(shù)值比最近一次24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值不超過(guò)0. 5g。換句話說(shuō)，患者將從其總分中扣除4分，即便是有著穩(wěn)定的蛋白尿或者蛋白尿增加<0.5g/24小時(shí)。實(shí)施例2描述了對(duì)SELENA SLEDAI蛋白尿評(píng)分規(guī)則的修訂。在實(shí)施例2中，修訂了蛋白尿評(píng)·分，使得持續(xù)被記為4分，除非24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿比患者最近一次24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值減少超過(guò)了 0.5g。此外，如果有新出現(xiàn)的蛋白尿或者蛋白尿增加>0. 5g/24小時(shí)，則記為4分。如果在此提到SELENA SLEDAI評(píng)分表，表示可以依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的SELENASLEDAI評(píng)分表完成蛋白尿的評(píng)分。優(yōu)選地，根據(jù)實(shí)施例2所述的蛋白尿評(píng)分系統(tǒng)確定患者的SELENA SLEDAI評(píng)分中的蛋白尿的評(píng)分。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 5的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 6的患者。在進(jìn)一步具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分>7的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分>8的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 9的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 10的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 11的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為SELENA SLEDAI評(píng)分> 12的患者。在其他的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中有著抗dsDNA抗體的患者。臨床醫(yī)師利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)和方法可以常規(guī)地測(cè)定出抗dsDNA抗體滴度、濃度或水平。一種用于測(cè)定抗dsDNA抗體滴度、濃度或水平的示例檢測(cè)法是基于抗dsDNA抗體與固定化的dsDNA的特異結(jié)合的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)，見(jiàn)例如Halbert，etal. , J Lab Clin Med. 97:97-111，(1981)。用于測(cè)定dsDNA抗體滴度、濃度或水平的另一種示例檢測(cè)法是基于抗dsDNA抗體與綠蠅短膜蟲(chóng)dsDNA的特異結(jié)合的間接免疫熒光檢測(cè)法，見(jiàn)例如 Whiteside, et al. , Am J Clin Pathol. 72:829-35，(1979)。用于測(cè)定 dsDNA 抗體滴度、濃度或水平的另一種示例檢測(cè)法是基于抗dsDNA抗體與同位素標(biāo)記的dsDNA的特異結(jié)合以及隨后抗dsDNA抗體-同位素標(biāo)記的dsDNA復(fù)合物的沉淀的Farr檢測(cè)法，見(jiàn)例如Davis, et al. , Am J Clin Pathol.，67:374-8，(1977)。在具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30個(gè)國(guó)際單位/mL的患者，其中國(guó)際單位(IU)是依據(jù)于世界衛(wèi)生組織抗dsDNA抗體的參考制劑,見(jiàn)例如Feltkamp, et al. , Ann.Rheum.Dis. ,47:740-746, (1988)。在此通過(guò)引用將本段中所引用的所有參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容都并入本申請(qǐng)。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于40IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于50IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于60IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于75IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于100IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于125IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于150IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于200IU/mL的患者。在其他具體的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于300IU/mL的患者?！ぴ谄渌膶?shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成其血衆(zhòng)或血清中具有抗核抗體(ANA+)的患者。臨床醫(yī)生利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)和方法可以常規(guī)地測(cè)定出抗核抗體滴度。用于測(cè)定抗核抗體滴度的一個(gè)示例檢測(cè)法是基于抗核抗體與ffip-2人上皮細(xì)胞的特異結(jié)合的間接免疫突光檢測(cè)法，見(jiàn)例如 Osborn, et al. , Arthritis Rheum. , 27:1286-9，(1984)。在另一個(gè)實(shí)例檢測(cè)法中，利用基于ANA與固定化的ANA抗原例如dsDNA、Ro/SS-A、La/SS-B、Sm,RNP的特異結(jié)合的ELISA可以測(cè)定出抗核抗體濃度或水平，見(jiàn)例如Fenger，et al.，ClinChem. , 50:2141-7, (2004)。在 Kavanaugh et al. , Archives of Pathology & LaboratoryMedicine(2000) 124:71-81 和 Greidinger, EL and Hoffman, Rff, Laboratory Medicine(2003) 34:113-117中進(jìn)一步描述了 ANA檢測(cè)。在此通過(guò)弓丨用將本段中所引用的所有參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容都并入本申請(qǐng)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成ANA滴度為1:80或更高的患者(即當(dāng)患者的血漿或血清的稀釋系數(shù)為80或更高時(shí)，可以得到陽(yáng)性的ANA檢查結(jié)果)。例如滴度1:160、1:320和1:640都大于滴度1:80。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡的患者被定義成ANA滴度為1:160或更高的患者。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成ANA滴度為1:320或更高的患者。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成ANA滴度為1:640或更高的患者。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，利用基于HEp-2細(xì)胞的間接免疫熒光法測(cè)定出ANA滴度。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，利用抗dsDNA ELISA檢測(cè)法測(cè)定出ANA滴度。在其他的實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成具有可檢測(cè)到的自身抗體的患者，所述自身抗體包括但不限于抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體、抗dsDNA抗體、抗Sm抗體。臨床醫(yī)師利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)和方法學(xué)可以常規(guī)地測(cè)定出自身抗體的滴度、濃度或水平。在其他實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義成具有降低的血漿或血清C3和/或C4補(bǔ)體水平的患者。本領(lǐng)域人員明白C3和/或C4的正常水平可以有所不同，取決于用于測(cè)定C3和/或C4的檢測(cè)法。因此，血漿或血清C3補(bǔ)體的正常水平可以從約90mg/dL到約180mg/dL。在其他具體的實(shí)施方式中，血漿或血清C3補(bǔ)體的正常水平的范圍也可以從約88mg/dL到約206mg/dL或者從約88mg/dL到約252mg/dL。血衆(zhòng)或血清C4補(bǔ)體的正常水平可以從約16mg/dL到約47mg/dL。在其他具體的實(shí)施方式中，血漿或血清C4補(bǔ)體的正常水平的范圍也可以從約12mg/dL到約72mg/dL或者從約13mg/dL到約75mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平被定義成小于90mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平被定義成小于88mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平被定義成小于85mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平被定義成小于80mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平被定義成小于75mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血衆(zhòng)或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于16mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于15mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于14mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于13mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于12mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于llmg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被·定義成小于10mg/dL。在具體的實(shí)施方式中，降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平被定義成小于9mg/dL。臨床醫(yī)師利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)和方法學(xué)例如利用放射免疫彌散檢測(cè)法可以常規(guī)地測(cè)定出補(bǔ)體水平。在其他實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為具有以下任一個(gè)或多個(gè)特征的患者依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)臨床診斷為SLE(見(jiàn)例如Tan et al. , ArthritisRheum. 25:1271-7，(1982)；和 Hochberg et al. , Arthritis Rheum. 40:1725, (1997))；SELENA SLEDAI評(píng)分> 6 ；降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平；降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平；ANA滴度為1:80或更高；血漿或血清抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL ;正在接受彡7. 5mg/天的潑尼松或其他用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的糖皮質(zhì)激素；和/或正在接受或者先前接受過(guò)用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的免疫抑制治療。在其他實(shí)施方式中，活動(dòng)性狼瘡患者被定義為具有以下任一個(gè)或多個(gè)特征的患者依據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)標(biāo)準(zhǔn)臨床診斷為SLE ；SELENA SLEDAI評(píng)分彡8 ;降低的血漿或血清C4補(bǔ)體水平；降低的血漿或血清C3補(bǔ)體水平；ANA滴度為1:80或更高；血漿或血清抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL ;正在接受最高到40mg/天的潑尼松或其他用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的糖皮質(zhì)激素；和/或正在接受或者先前接受過(guò)用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的免疫抑制治療。多個(gè)疾病活動(dòng)度指數(shù)對(duì)于本領(lǐng)域臨床醫(yī)師都是熟知的，并且可以用于測(cè)定類風(fēng)濕疾病活動(dòng)度例如SLE疾病活動(dòng)度的程度(見(jiàn)例如Strand，et al.，JRheumatol.，26:490-7，(1999))。在一個(gè)實(shí)施方式中，SELENA SLEDAI被用作疾病活動(dòng)度指數(shù)(DAI)(見(jiàn)例如 Bombardier, et al. , Arthritis Rheum. 35:630-40，(1992))。在另一個(gè)實(shí)施方式中，SLE Flare 指數(shù)被用作 DAI (見(jiàn)例如 Petri, et al.，Lupus, 8:685-91，(1999))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡國(guó)際合作單位/美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)損傷指數(shù)(SLICC/ACR)被用作 DAI (見(jiàn)例如 Gladman, et al. , Arthritis Rheum.，39:363-9，(1996))。在另一個(gè)實(shí)施方式中，醫(yī)師總體評(píng)價(jià)(PGA)被用作DAI，PGA是一種直觀模擬標(biāo)度尺，范圍從O到3，其中O是沒(méi)有疾病活動(dòng)，I是輕微疾病活動(dòng)，2是中等疾病活動(dòng)，而3是嚴(yán)重疾病活動(dòng)。在仍另一個(gè)實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)歸調(diào)查簡(jiǎn)易表格(Medical Outcomes SurveyShort Form 36，SF-36)被用作DAI。SF-36是通用的健康相關(guān)的生活質(zhì)量(HRQOL)工具，在觀察性群組研究和隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中都已經(jīng)顯示出其反映出了 SLE對(duì)HRQOL所有方面的影響(Cook, et al. , J. Rheumatol. , 27:1892-1895, (2000) ；Thumboo, et al.,JRheumatol.，26:97-102，(1999) ；Thumboo, et al. , J Rheumatol.，27:1414-1420，(2000)；Ware JE , et aI. , Med Care, 30 : 473-483，(199 2) ； Smo Ien JS, et a I. , JRheumatoI ，26:504-507，(1999) ；Gladman,et al., Lupus, 5:190-195, (1996)；Alonso J, et al. , Qual Life Res.，13:283-298，2004 ;和 Gladman et al, JRheumatol., 27:377-9, (1995)，在此通過(guò)引用將它們的全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，EQ_5D(也稱作EuroQol工具)被用作DAI。EQ-5D是一種通用的健康相關(guān)的生活質(zhì)量測(cè)量工具。這是一種簡(jiǎn)單的、自用調(diào)查問(wèn)卷，它不僅包含描述性的健康狀態(tài)分類系統(tǒng)，還能夠生成反映出與給定健康狀態(tài)相關(guān)的偏向值的復(fù)合評(píng)分或指數(shù)。EQ-OT描述性系統(tǒng)由5個(gè)部分組成活動(dòng)度、自我照顧、日?；顒?dòng)、疼痛/不適、和焦慮·/抑郁。每個(gè)部分都有3個(gè)水平，分別反映“無(wú)健康問(wèn)題”、“中等健康問(wèn)題”、和“重度健康問(wèn)題”(見(jiàn)例如Health Policy. 1990Dec; 16 (3) : 199-208，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，慢性病治療的功能評(píng)價(jià)(FACIT)測(cè)量系統(tǒng)中的慢性病治療的功能評(píng)價(jià)-乏力(FACIT-F)次級(jí)評(píng)分表被用作DAI。FACIT-F次級(jí)評(píng)分表是27個(gè)項(xiàng)目的常見(jiàn)問(wèn)題的組合，分成4個(gè)主要的QOL部分身體狀態(tài)、社會(huì)/家庭狀態(tài)、情緒狀態(tài)、和功能狀態(tài)。該測(cè)量工具收集了患者關(guān)于能量水平、倦怠、和開(kāi)始或完成活動(dòng)的能力方面的反饋(見(jiàn)，例如 Yellen, S. B.，et al. , Journal of Pain and SymptomManagement, 13:63-74，(1997) ；Cella, D. , et al.，94 (2) : 528-538，(2002);和Celia, D.，etal. , Journal of Pain & Symptom Management, 24(6) :547-561, (2002),在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)被用作DAI。DAS28是風(fēng)濕病學(xué)家使用的用于評(píng)價(jià)風(fēng)濕性疾病活動(dòng)度的標(biāo)準(zhǔn)工具。該測(cè)量工具依據(jù)以下評(píng)價(jià)計(jì)算出指數(shù)評(píng)分壓痛(TEN)關(guān)節(jié)的數(shù)目、腫脹(SW)關(guān)節(jié)的數(shù)目、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、和患者對(duì)疾病活動(dòng)度的評(píng)價(jià)(VAS ；mm)(見(jiàn)例如Van der HeijdeD. M. F. M. , et al. , J. Rheumatol, 20:579-8, (1993) ；Prevoo M. L. L. , et al. , ArthritisRheum, 38:44-8, (1995)，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，不列顛群島狼瘡評(píng)價(jià)組(BILAG)被用作DAI (見(jiàn)例如，Isenberg,et al. , Rheumatology, 44:902-6, (2005) ；Gordon,et al. , Rheumatology,42
(II): 1372-9, (2003) ；Isenberg, et al. , Lupus, 9 (9) : 651-4, (2000) ；Hay et al. , Q JMed.，86:447-58，(1993);和 ADS-Limathon Ltd 在 2004 年 4 月 4 日發(fā)布的 BLIPS 第 3. 0版軟件程序用戶指南，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。BILAG指數(shù)包括已知受狼瘡影響的8個(gè)身體器官/系統(tǒng)，以及每個(gè)評(píng)分都取決于與先前的評(píng)價(jià)相比較，臨床表現(xiàn)是否是新的、惡化的、相同的或者改善的。對(duì)于所有8個(gè)身體器官/系統(tǒng)，SLE疾病表現(xiàn)的嚴(yán)重度分別為A、B、C、D或E評(píng)分，其中A是最為嚴(yán)重的(見(jiàn)例如，Hay，同上)。BILAG指數(shù)提供了評(píng)價(jià)疾病嚴(yán)重度和治療有效性的復(fù)合評(píng)分。該復(fù)合評(píng)分組合了狼瘡中受影響的所有8個(gè)身體器官/系統(tǒng)。利用本領(lǐng)域已知的BILAG或其他測(cè)量方法，治療可以靶向于具有特殊器官/系統(tǒng)亞組的疾病表現(xiàn)的狼瘡患者。因此，在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者已經(jīng)獲得了其SELENASLEDAI評(píng)分的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線SELENA SLEDAI評(píng)分，即在患者開(kāi)始免疫調(diào)節(jié)劑治療之前測(cè)定到的SELENA SLEDAI評(píng)分相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線SELENA SLEDAI評(píng)分，即在患者開(kāi)始免疫調(diào)節(jié)劑治療之前測(cè)定到的SELENA SLEDAI評(píng)分相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)·答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有表現(xiàn)出如醫(yī)師整體評(píng)價(jià)(PGA)所測(cè)定出的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果PGA評(píng)分已經(jīng)降低、仍然穩(wěn)定或者增高不超過(guò)0. 3分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線PGA評(píng)分，即在患者開(kāi)始免疫調(diào)節(jié)劑治療之前測(cè)定到的PGA評(píng)分相比較，所述患者的PGA評(píng)分已經(jīng)降低、仍然穩(wěn)定或者增高不超過(guò)0. 3分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有表現(xiàn)出如不列顛群島狼瘡評(píng)價(jià)組(BILAG)疾病活動(dòng)指數(shù)所測(cè)定出的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有獲得新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線BILAG評(píng)價(jià)，即在患者開(kāi)始免疫調(diào)節(jié)劑治療之前測(cè)定到的BILAG評(píng)價(jià)相比較，患者沒(méi)有獲得新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果分別與他們的基線SELENASLEDAI評(píng)分、PGA評(píng)分和不列顛群島狼瘡評(píng)價(jià)組(BILAG)評(píng)價(jià)相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分的下降、沒(méi)有表現(xiàn)出其PGA評(píng)分的顯著惡化、以及沒(méi)有表現(xiàn)出如BILAG疾病活動(dòng)指數(shù)所測(cè)定出的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果分別與其基線SELENA SLEDAI評(píng)分、PGA評(píng)分和BILAG評(píng)價(jià)相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降、其PGA評(píng)分的增加不超過(guò)0. 3分以及沒(méi)有獲得新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)減少，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)實(shí)施方式中，如果與患者的基線潑尼松劑量，即在患者開(kāi)始免疫調(diào)節(jié)劑治療之前正在服用的潑尼松劑量相比較，患者的潑尼松劑量已經(jīng)減少，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少25%，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少25%到小于或等于7. 5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)比基線潑尼松劑量降低至少25%到小于或等于7. 5mg/天,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的·實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少50%，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少50%到小于或等于
7.5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)比基線潑尼松劑量降低至少50%到小于或等于7. 5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。可以用其他測(cè)量方法測(cè)定狼瘡患者應(yīng)答于治療的質(zhì)量。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的SF-36健康調(diào)查評(píng)分(Health Survey Score),則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線SF-36健康調(diào)查評(píng)分相比較，患者具有改善的SF-36健康調(diào)查評(píng)分,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的EQ-OT評(píng)分,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線EQ-OT評(píng)分相比較，患者具有改善的EQ-OT評(píng)分,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者表現(xiàn)出經(jīng)患者的FACIT-F評(píng)分所顯示出的乏力的減輕，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線FACIT-F評(píng)分相比較，患者表現(xiàn)出經(jīng)患者的FACIT-F評(píng)分所顯示出的乏力的減輕，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的DAS28評(píng)分，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線DAS28評(píng)分相比較，患者具有改善的DAS28評(píng)分,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用免疫調(diào)節(jié)劑治療之前的發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間相比較，患者有發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有發(fā)作嚴(yán)重度的減輕，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用免疫調(diào)節(jié)劑·治療之前的發(fā)作嚴(yán)重度相比較，患者有發(fā)作嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。SLE發(fā)作指數(shù)評(píng)價(jià)狼瘡癥狀惡化(發(fā)作)的頻率和嚴(yán)重度。發(fā)作被分成了 “輕度或中度”或“重度”。輕度或中度發(fā)作包括以下一條或多條SELENASLEDAI評(píng)分改變3分或更多；新的/惡化的盤(pán)狀的、光過(guò)敏的、深的、皮下血管炎的或大皰性的狼瘡；鼻咽部潰瘍；胸膜炎；心包炎；關(guān)節(jié)炎；發(fā)熱(SLE);強(qiáng)地松劑量增加，但不超過(guò)0.5mg/kg/天；因?yàn)榧膊』顒?dòng)增加了 NSAID或硫酸輕氯喹(Plaquenil)劑量；以及PGA評(píng)分增加到超過(guò)I. 0,但不超過(guò)2. 5。重度發(fā)作包括以下一條或多條SELENA SLEDAI評(píng)分改變超過(guò)12分；新的/惡化的CNS-SLE ;血管炎；腎炎；肌炎；Plt〈60，000 ;貧血(〈7%或Hb下降>3%);潑尼松劑量加倍；潑尼松劑量增加到超過(guò)0. 5mg/kg/天；處方環(huán)磷酰胺；處方硫唑嘌呤；處方甲氨喋呤；住院(SLE)和PGA評(píng)分增加到超過(guò)2. 5分。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有經(jīng)SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用免疫調(diào)節(jié)劑治療之前的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度相比較，患者有經(jīng)SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用免疫調(diào)節(jié)劑治療之前的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度相比較，患者有改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)不包括由SELENA SLEDAI評(píng)分變化單獨(dú)觸發(fā)的嚴(yán)重發(fā)作。因此,如果患者已經(jīng)顯示了其SELENA SLEDAI評(píng)分的降低，貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a的拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線SELENA SLEDAI評(píng)分、在患者開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑治療之前測(cè)定到的SELENA SLEDAI評(píng)分相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線SELENA SLEDAI評(píng)分、在患者開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑治療之前測(cè)定到的SELENA SLEDAI評(píng)分相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑·是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體(peptibody)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有表現(xiàn)出經(jīng)醫(yī)師整體評(píng)價(jià)(PGA)所確定的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果PGA評(píng)分已經(jīng)降低、仍然穩(wěn)定或者增高不超過(guò)0. 3分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線PGA評(píng)分、在患者開(kāi)始Neutrokine- a拮抗劑治療之前測(cè)定到的PGA評(píng)分相比較,所述患者的PGA評(píng)分已經(jīng)降低、仍然穩(wěn)定或者增高不超過(guò)0. 3分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有表現(xiàn)出如不列顛群島狼瘡評(píng)價(jià)組(BILAG)疾病活動(dòng)指數(shù)所測(cè)定出的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者沒(méi)有獲得新的BILAGA器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與同一患者的基線BILAG評(píng)價(jià)、在患者開(kāi)始Neutrokine- a拮抗劑治療之前測(cè)定到的BILAG評(píng)價(jià)相比較，患者沒(méi)有獲得新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則患者沒(méi)有表現(xiàn)出疾病活動(dòng)度的惡化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果分別與他們的基線SELENA SLEDAI評(píng)分、PGA評(píng)·分和BILAG評(píng)價(jià)相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分的下降、沒(méi)有表現(xiàn)出其PGA評(píng)分的顯著惡化、以及沒(méi)有表現(xiàn)出如不列顛群島狼瘡評(píng)價(jià)組(BILAG)疾病活動(dòng)指數(shù)所測(cè)定出的疾病活動(dòng)度的惡化，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果分別與其基線SELENA SLEDAI評(píng)分、PGA評(píng)分和BILAG評(píng)價(jià)相比較，患者已經(jīng)獲得了其SELENA SLEDAI評(píng)分中至少4分的下降、其PGA評(píng)分的增加不超過(guò)0. 3分以及沒(méi)有獲得新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或者沒(méi)有獲得2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutookine-a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)減少，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine- a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多妝、Neutrokine- a和/或APRIL多月太變體、革巴向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)實(shí)施方式中，如果與患者的基線潑尼松劑量，即在患者開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑治療之前正在服用的潑尼松劑量相比較，患者的潑尼松劑量已經(jīng)減少，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少25%，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少25%到小于或等于7. 5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)比基線潑尼松劑量降低至少25%到小于或等于7. 5mg/天,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少50%,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)降低至少50%到小于或等于7. 5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者的潑尼松劑量已經(jīng)比基線潑尼松劑量降低至少50%到小于或等于7. 5mg/天，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在·一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體?？梢杂闷渌麥y(cè)量方法測(cè)定狼瘡患者應(yīng)答于治療的質(zhì)量。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的SF-36健康調(diào)查評(píng)分,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線SF-36健康調(diào)查評(píng)分相比較，患者具有改善的SF-36健康調(diào)查評(píng)分,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine- a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。
在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的EQ-OT評(píng)分,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線EQ-OT評(píng)分相比較，患者具有改善的EQ-OT評(píng)分，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，·Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者表現(xiàn)出經(jīng)患者的FACIT-F評(píng)分所顯示出的乏力的減輕，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine- a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線FACIT-F評(píng)分相比較，患者表現(xiàn)出經(jīng)患者的FACIT-F評(píng)分所顯示出的乏力的減輕,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有改善的DAS28評(píng)分，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的基線DAS28評(píng)分相比較，患者具有改善的DAS28評(píng)分,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮·顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine- a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多妝、Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 多妝變體、革巴向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用Neutrokine-a拮抗劑治療之前的發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間相比較，患者有發(fā)作頻率和/或持續(xù)時(shí)間的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有發(fā)作嚴(yán)重度的減輕，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用Neutrokine-a拮抗劑治療之前的發(fā)作嚴(yán)重度相比較，患者有發(fā)作嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。SLE發(fā)作指數(shù)評(píng)價(jià)狼瘡癥狀惡化(發(fā)作)的頻率和嚴(yán)重度。發(fā)作被分成了”輕度或中度”或“重度”。輕度或中度發(fā)作包括以下一條或多條=SELENA SLEDAI評(píng)分改變3分或更多；新的/惡化的盤(pán)狀的、光過(guò)敏的、深的、皮下血管炎的或大皰性的狼瘡；鼻咽部潰瘍；胸膜炎；心包炎；關(guān)節(jié)炎；發(fā)熱(SLE);強(qiáng)地松劑量增加，但不超過(guò)0. 5mg/kg/天；因?yàn)榧膊』顒?dòng)增加了 NSAID或硫酸羥氯喹劑量；以及PGA評(píng)分增加到超過(guò)I. 0，但不超過(guò)2. 5。重度發(fā)作包括以下一條或多條SELENA SLEDAI評(píng)分改變超過(guò)12分；新的/惡化的CNS-SLE ;血管炎；腎炎；肌炎；Plt〈60，000 ;貧血(〈7%或Hb下降>3%);潑尼松劑量加倍；潑尼松劑量增加到超過(guò)0. 5mg/kg/天；處方環(huán)磷酰胺；處方硫唑嘌呤；處方甲氨喋呤；住院(SLE)和PGA評(píng)分增加到超過(guò)2. 5分。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有經(jīng)SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用免疫調(diào)節(jié)劑治療之前的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度相比較，患者有經(jīng)SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者有改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與用Neutrokine-a拮抗劑治療之前的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度相比較，患者有改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)測(cè)定到的發(fā)作頻率和/或嚴(yán)重度的降低，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。改進(jìn)版的SLE發(fā)作指數(shù)不包括由SELENA SLEDAI評(píng)分變化單獨(dú)觸發(fā)的嚴(yán)重發(fā)作。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮·顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體?？梢詥蝹€(gè)地或聯(lián)合地使用上述的疾病活動(dòng)度指數(shù)(例如SELENA SLEDAI、PGA、BILAG、SLE發(fā)作指數(shù)、SF-36健康調(diào)查評(píng)分、EQ- 、FACIT-F, DAS28)評(píng)價(jià)狼瘡患者的狀態(tài)。也可以在開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多妝變體、祀向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine-a 和 / 或APRIL的受體的反義或siRNA)的治療之后通過(guò)比較一種或多種患者先前的疾病活動(dòng)度指數(shù)評(píng)分測(cè)量值來(lái)評(píng)價(jià)如這些疾病活動(dòng)度指數(shù)所測(cè)定到的患者健康狀態(tài)的改善。另外，在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者保持著與先前的測(cè)量值相比疾病活動(dòng)度評(píng)分有改善，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以在開(kāi)始Neutookine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之前或者在開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之后的第1、2、3、4、5、6、7、8、10、11或12周時(shí)評(píng)價(jià)一種或多種疾病活動(dòng)度指數(shù)評(píng)分。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療具有一個(gè)或多個(gè)器官/系統(tǒng)的疾病表現(xiàn)的狼瘡患者。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine- a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在具體的實(shí)施方式中，用Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑治療具有一個(gè)或多個(gè)內(nèi)在器官系統(tǒng)的疾病表現(xiàn)以及有或沒(méi)有粘膜皮膚和/或肌肉骨骼系統(tǒng)受累的狼瘡患者。在具體的實(shí)施方式中，用Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑治療具有一個(gè)或多個(gè)內(nèi)在器官系統(tǒng)的疾病表現(xiàn)且沒(méi)有粘膜皮膚和/或肌肉骨骼系統(tǒng)受累的狼瘡患者。在狼瘡中，累及粘膜皮膚和/或肌肉骨骼系統(tǒng)的疾病表現(xiàn)包括但不限于盤(pán)狀紅斑、頰部紅斑、或其他皮膚斑疹、粘膜潰瘍、脂膜炎、皮膚血管炎、皮膚血栓形成、指趾梗死、指趾血栓形成、禿發(fā)、甲周紅斑、凍瘡、甲下線狀出血、肌炎、多關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、膜炎、關(guān)節(jié)痛和肌痛。在狼瘡中，可以受:到狼瘡影響的內(nèi)在器官系統(tǒng)包括但·不限于神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿/排泄系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和眼睛。神經(jīng)系統(tǒng)的狼瘡疾病表現(xiàn)包括但不限于無(wú)菌性腦膜炎、腦血管炎、脫髓鞘綜合征、脊髓病、急性精神錯(cuò)亂狀態(tài)、精神病、急性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)根病、單神經(jīng)病、顱神經(jīng)病、神經(jīng)叢病、多發(fā)性神經(jīng)病、癲癇病、癲癇持續(xù)狀態(tài)、非血管炎造成的腦血管病、認(rèn)知障礙、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、自主神經(jīng)病、小腦共濟(jì)失調(diào)、頭痛、偏頭痛、情緒障礙和焦慮障礙。循環(huán)系統(tǒng)的狼瘡疾病表現(xiàn)包括但不限于心肌炎、心衰、心律失常、新的瓣膜功能不全、漿膜炎、心包填塞、胸腔積液伴呼吸困難、肺出血、肺血管炎、間質(zhì)性肺泡炎、間質(zhì)性肺炎、皺縮肺綜合征、主動(dòng)脈炎和冠狀動(dòng)脈血管炎。消化系統(tǒng)的狼瘡疾病表現(xiàn)包括但不限于腹膜炎、腹部漿膜炎、腹水、狼瘡腸炎、狼瘡結(jié)腸炎、吸收不良、失蛋白性腸病、肝炎、假性腸梗阻、急性膽囊炎和急性胰腺炎。與眼睛相關(guān)的狼瘡疾病表現(xiàn)包括但不限于眼眶炎癥、角膜炎、前葡萄膜炎、后葡萄膜炎、視網(wǎng)膜血管炎、鞏膜外層炎、鞏膜炎、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜血管閉塞病、CUtOid體、視神經(jīng)炎和前部缺血性視神經(jīng)病。通過(guò)在開(kāi)始治療之后的一個(gè)或多個(gè)間期內(nèi)評(píng)價(jià)生物學(xué)標(biāo)記物并比較患者的生物學(xué)標(biāo)記物評(píng)價(jià)和患者的同一生物學(xué)標(biāo)記物的基線和/或先前的測(cè)量值可以監(jiān)測(cè)患者對(duì)Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF_R 或其他 Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的應(yīng)答。可以被評(píng)價(jià)的生物學(xué)標(biāo)記物包括但不限于免疫球蛋白水平(例如總血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgAjP /或IgE水平)、自身抗體水平(例如抗dsDNA抗體、抗CCP抗體、抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體和抗Sm抗體水平以及ANA滴度)、B細(xì)胞數(shù)目(例如總的B細(xì)胞數(shù)目、活化B細(xì)胞數(shù)目、純真B細(xì)胞數(shù)目、記憶B細(xì)胞數(shù)目、漿樣B細(xì)胞數(shù)目、漿細(xì)胞樣B細(xì)胞數(shù)目、總的CD19+B細(xì)胞和/或CD20+B細(xì)胞數(shù)目)、C4補(bǔ)體水平、C3補(bǔ)體水平。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療之前和/或在開(kāi)始Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療之后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周、月和年時(shí)評(píng)價(jià)生物學(xué)測(cè)量值。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的免疫球蛋白的基線測(cè)量值相比較，患者具有降低的免疫球蛋白水平(例如總血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgA、和/或IgE水平)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的·實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者先前的免疫球蛋白測(cè)量值相比較，患者具有降低的免疫球蛋白水平(例如總血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgAjP /或IgE水平)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者先前的免疫球蛋白測(cè)量值相比較，患者保持住降低的免疫球蛋白水平(例如總血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgAjP /或IgE水平)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者具有正常的免疫球蛋白水平(例如總血清免疫球蛋白、和血清IgM、IgG、IgAjP /或IgE水平)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的自身抗體的基線測(cè)量值相比較，患者具有降低的自身抗體(例如抗dsDNA抗體、抗CCP抗體、抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體和抗Sm抗體水平以及ANA滴度)水平，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine- a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的一次或多次先前的自身抗體測(cè)量值相比較，患者具有降低的自身抗體(例如抗dsDNA抗體、抗CCP抗體、抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體和抗Sm抗體水平以及ANA滴度)水平,貝U正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的一次或多次先前的自身抗體測(cè)量值相比較，患者保持了降低的自身抗體(例如抗dsDNA抗體、抗CCP抗體、抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體和抗Sm抗體水平以及ANA滴度)水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者獲得了正常的自身抗體(例如抗dsDNA抗體、抗CCP抗體、抗Ro/SS-A抗體、抗La/SS-B抗體、抗RNP抗體、抗心磷脂(抗磷脂)抗體和抗Sm抗體水平以及ANA滴度)水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治·療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，測(cè)定了IgG同種型的自身抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的B細(xì)胞數(shù)目的基線測(cè)量值相比較，患者具有降低的B細(xì)胞數(shù)目(總的B細(xì)胞數(shù)目、活化B細(xì)胞數(shù)目、純真B細(xì)胞數(shù)目、記憶B細(xì)胞數(shù)目、漿樣B細(xì)胞數(shù)目、漿細(xì)胞樣B細(xì)胞數(shù)目、總的CD19+B細(xì)胞和/或CD20+B細(xì)胞數(shù)目)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的B細(xì)胞數(shù)目測(cè)量值相比較,患者具有降低的B細(xì)胞數(shù)目(總的B細(xì)胞數(shù)目、活化B細(xì)胞數(shù)目、純真B細(xì)胞數(shù)目、記憶B細(xì)胞數(shù)目、漿樣B細(xì)胞數(shù)目、漿細(xì)胞樣B細(xì)胞數(shù)目、總的CD19+B細(xì)胞和/或⑶20+B細(xì)胞數(shù)目)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的B細(xì)胞數(shù)目測(cè)量值相比較，患者保持了降低的B細(xì)胞數(shù)目(總的B細(xì)胞數(shù)目、活化B細(xì)胞數(shù)目、純真B細(xì)胞數(shù)目、記憶B細(xì)胞數(shù)目、漿樣B細(xì)胞數(shù)目、漿細(xì)胞樣B細(xì)胞數(shù)目、總的⑶19+B細(xì)胞和/或⑶20+B細(xì)胞數(shù)目)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者獲得了正常的B細(xì)胞數(shù)目(總的B細(xì)胞數(shù)目、活化B細(xì)胞數(shù)目、純真B細(xì)胞數(shù)目、記憶B細(xì)胞數(shù)目、漿樣B細(xì)胞數(shù)目、漿細(xì)胞樣B細(xì)胞數(shù)目、總的⑶19+B細(xì)胞和/或⑶20+B細(xì)胞數(shù)目)，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的C4基線測(cè)量值相比較，患者具有增高的血清補(bǔ)體因子C4水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，·Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的C4測(cè)量值相比較，患者具有增高的C4水平，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的C4測(cè)量值相比較，患者保持了增高的C4水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者獲得了正常的C4水平，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutookine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與患者的C3基線測(cè)量值相比較，患者具有增高的血清補(bǔ)體因子C3水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的C3測(cè)量值相比較，患者具有增高的C3水平，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果與一次或多次患者的先前的C3測(cè)量值相比較，患者保持了增高的C3水平,則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果患者獲得了正常的C3水平，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutookine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑治療的狼瘡患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前已經(jīng)接受過(guò)一種或多種免疫抑制劑治療的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑，包括但不限于抗Neutrokine- a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-a和/或APRIL的受體的反義或siRNA。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療先前已經(jīng)被診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(狼瘡)以及先前接受過(guò)一種或多種免疫抑制劑治療的患者的方法，包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，·Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在具體的實(shí)施方式中，患者先前接受過(guò)的免疫抑制劑是硫唑嘌呤(例如依木蘭 )、環(huán)磷酰胺(例如Cytoxan' 、Neosar 、CTX)、神經(jīng)鈣蛋白抑制劑例如FK506、他克莫司或環(huán)孢菌素(例如PR0GRAF )和/或CELLCEPT (霉酚酸酯，其活性代謝物是霉酚酸)。目前狼瘡和其他自身免疫病的最為通用的治療方法都利用非特異性阻斷各種炎癥通路的藥物。在這種治療方法中最為危險(xiǎn)的藥物可能就是糖皮質(zhì)激素。雖然糖皮質(zhì)激素例如潑尼松是控制疾病表現(xiàn)的基本藥物，但是它們也對(duì)患者的健康有著多種不良作用例如整體的免疫抑制造成感染、骨質(zhì)疏松造成骨折、以及動(dòng)脈粥樣硬化造成了早期發(fā)生心臟事件和中風(fēng)。在臨床試驗(yàn)中，申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)用中和Neutrokine-a蛋白的抗體的治療(第O、14和28天靜脈內(nèi)輸注，然后每4周一次，直到第52周)能有效地減少緩解狼瘡患者的疾病表現(xiàn)所需的糖皮質(zhì)激素潑尼松的劑量。特別是，抗Neutrokine-a抗體的治療與治療期最后3個(gè)月內(nèi)的潑尼松量的減少有關(guān)。在基線ANA滴度為1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的患者中，有更高比例的接受抗Neutrokine-a抗體的患者減少了他們的潑尼松劑量，相反，更多數(shù)目的接受安慰劑治療的患者已經(jīng)增加潑尼松劑量到大于7. 5mg/天。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給患者的糖皮質(zhì)激素治療的頻率和/或糖皮質(zhì)激素的量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑，包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine- a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多妝、Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 多妝變體、祀向于 Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R或其他Neutrokine-a和/或APRIL的受體的反義或siRNA。在具體的實(shí)施方式中，糖皮質(zhì)激素是潑尼松、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍或地塞米松。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是抗Neutrokine- a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，其中減少了糖皮質(zhì)激素治療的患者是患有炎癥的患者。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，其中減少了糖皮質(zhì)激素治療的患者是患有自身免疫病的患者，包括但不限于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、狼瘡、干燥綜合征或其他自身免疫病例如在此所述的一種自身免疫病。因此，在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給系統(tǒng)性紅斑狼瘡(狼瘡)患者的糖皮質(zhì)激素治療的頻率和/或糖皮質(zhì)激素的量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑,包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、革巴向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRI·L 的受體的反義或siRNA。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少施用給系統(tǒng)性紅斑狼瘡(狼瘡)患者的潑尼松治療的頻率和/或潑尼松的量的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine- a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑,包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、祀向于Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或siRNA?！爸委熡行Я俊痹诖酥傅氖菧p少通常的緩解疾病表現(xiàn)所需的糖皮質(zhì)激素的處方量的量。這些表現(xiàn)以及用于確定能有效地減輕這些表現(xiàn)的嚴(yán)重度的抗體/組合物的量的方法學(xué)都是臨床醫(yī)師熟知的。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，施用給患者的本發(fā)明的抗體的劑量是0. Img到100mg/kg患者體重。更優(yōu)選地，施用給患者的劑量是在0. Img到20mg/kg患者體重之間。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，施用給患者的劑量是l、4、10、*20mg/kg。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a 結(jié)合多妝、Neutrokine-a 和 / 或 APRIL 多妝變體、祀向于 Neutrokine-a、APRIL,TACI,BCMA,BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 / 或 APRIL 的受體的反義或 siRNA)的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了(80mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了<40mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了小于20mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine- a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了(IOmg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了 <8mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了( 6mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了( 4mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了<2mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑·是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量從先前更高的劑量被減少到了<7. 5mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，與患者在開(kāi)始包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之前所服用的潑尼松劑量相比較，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量最終降低至少25%。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，與患者在開(kāi)始包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之前所服用的潑尼松劑量相比較，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量最終降低至少50%。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，與患者在開(kāi)始包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之前所服用的潑尼松劑量相比較，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量最終降低至少25%到< 7. 5mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，與患者在開(kāi)始包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑之前所服用的潑尼松劑量相比較，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，施用給患者的糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)的量最終降低至少50%到^ 7. 5mg/天。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，當(dāng)同一患者同時(shí)接受了包括施用Neutrokine-a拮抗劑或其他免疫調(diào)節(jié)劑的治療方案時(shí)，患者暫時(shí)地或永久地停止了糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松)治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在具體的實(shí)施方式中，用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療臨床診斷為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的患者。在具體的實(shí)施方式中，所治療的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者沒(méi)有B細(xì)胞腫瘤。此外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者還任選地接受了一種或多種適用于治療RA的藥物例如水楊酸鹽、非留體類抗炎藥例如吲哚美辛、苯丁唑酮、苯乙酸衍生物(例如布洛芬和非諾洛芬)、萘乙酸(甲氧萘丙酸)、pyrrolealkanoic·acicKTometin)、吲哚乙酸(奇諾力)、鹵代鄰氨基苯甲酸(甲氯滅酸鈉)、吡洛昔康、苯酰吡酸鈉和二氟尼酸、抗瘧藥例如氯喹、金鹽、青霉胺、或免疫抑制劑例如甲氨喋呤或糖皮質(zhì)激素，所述劑量為這些藥物的常用劑量或減量。但是，優(yōu)選地類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者只接受了Neutrokine- a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的和/或在此所屬的其他免疫調(diào)節(jié)劑的治療。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是抗Neutrokine- a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。按照下面所述的給藥方案給RA患者施用這些免疫調(diào)節(jié)劑，本領(lǐng)域人員都可以容易地確定所述給藥方案。用Paulus指數(shù)(Paulus etal. Arthritis Rheum. 33:477-484(1990))確定初始應(yīng)答，即晨僵、痛性和炎性關(guān)節(jié)數(shù)目、紅細(xì)胞沉降率(ESR)的提高、以及經(jīng)患者和醫(yī)師所評(píng)價(jià)的5分疾病嚴(yán)重度評(píng)分表至少提高2分。施用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑將緩解如上所述治療的RA患者的一種或多種RA癥狀。在2期臨床試驗(yàn)(實(shí)施例3)中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者接受了中和Neutrokine-a蛋白的抗體的治療，第0、14、28天靜脈內(nèi)輸注，然后，每4周I次直到第24周，治療更傾向于緩解在開(kāi)始中和Neutrokine-a蛋白的抗體治療之前其DAS28評(píng)分大于5. I的患者、先前沒(méi)有接受過(guò)抗TNF治療的患者、和/或血漿和/或血清中類風(fēng)濕因子陽(yáng)性的患者中與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)的癥狀。表現(xiàn)出更傾向于應(yīng)答于中和Neutrokine-a蛋白的抗體的治療的附加亞組包括男性患者、血漿和/或血清抗CCP(環(huán)瓜氨酸肽)抗體陽(yáng)性的患者、同時(shí)接受中和Neutrokine-a蛋白的抗體和甲氨喋呤的患者、先前甲氨喋呤治療失敗的患者、和/或先前甲氨喋呤治療以及至少一種其他DMARD治療失敗的患者。因此，本發(fā)明提供一種用Neutrokine-a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的方法，其中所述類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者具有以下任何一種或多種特征患者先前沒(méi)有接受過(guò)抗TNF治療例如英夫利昔單抗(也稱作Remicade Centocor, Inc.)、阿達(dá)木單抗(Abbott實(shí)驗(yàn)室的Humira )或依那西普(Enbrel );患者的血漿和/或血清類風(fēng)濕因子陽(yáng)性；患者的血漿和/或血清中具有可檢測(cè)到的抗CCP (環(huán)瓜氨酸肽)抗體；患者有提高了的血漿和/或血清CRP (C反應(yīng)蛋白)水平；患者先前有一種或多種疾病修飾抗類風(fēng)濕藥物失敗史；患者有高的改進(jìn)的疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)；患者有腫脹和壓痛的關(guān)節(jié)；患者有晨僵；患者有高的紅細(xì)胞沉降率(ESR)和/或男性患者。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。在具體的實(shí)施方式中,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的類風(fēng)濕因子等于或大于12IU/ml。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少I(mǎi). 5mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少5mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少6mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少9mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少10mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少20mg/L。在具體的·實(shí)施方式中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的抗CCP抗體等于或大于10單位。在具體的實(shí)施方式中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的抗CCP抗體等于或大于20單位。在具體的實(shí)施方式中，患者先前經(jīng)一種或多種DMARD包括但不限于甲氨喋呤、氨喹脲、柳氮磺吡啶、和來(lái)氟米特的治療失敗。在具體的實(shí)施方式中，患者先前經(jīng)甲氨喋呤治療失敗。在具體的實(shí)施方式中，患者的DAS評(píng)分大于5. I。在具體的實(shí)施方式中，患者有至少6個(gè)腫脹的關(guān)節(jié)和至少8個(gè)壓痛的關(guān)節(jié)。在具體的實(shí)施方式中，患者的ESR大于28mm/小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為45分鐘。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為I個(gè)小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為I個(gè)半小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為2個(gè)小時(shí)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-a蛋白片段或變體。因此，本發(fā)明提供用Neutrokine- a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL 多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a和/或APRIL的受體的反義或siRNA)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的方法。其中所述類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者具有以下任何一種或多種特征患者先前沒(méi)有接受過(guò)抗TNF治療例如英夫利昔單抗(也稱作Remicade Centocor, Inc.)、阿達(dá)木單抗(Abbott實(shí)驗(yàn)室的Humira )或依那西普(Enbrel );患者的血漿和/或血清類風(fēng)濕因子陽(yáng)性；患者的血漿和/或血清中具有可檢測(cè)到的抗CCP (環(huán)瓜氨酸肽)抗體；患者有提高了的血漿和/或血清CRP (C反應(yīng)蛋白)水平；患者先前有一種或多種疾病修飾抗類風(fēng)濕藥物失敗史；患者有高的改進(jìn)的疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS28);患者有腫脹和壓痛的關(guān)節(jié)；患者有晨僵；患者有高的紅細(xì)胞沉降率(ESR)和/或男性患者。在具體的實(shí)施方式中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的類風(fēng)濕因子等于或大于12IU/ml。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少I(mǎi). 5mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少5mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少6mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少9mg/L0在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少10mg/L。在具體的實(shí)施方式中，提高了的CRP水平被定義為至少20mg/L。在具體的實(shí)施方式中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的抗CCP抗體等于或大于10單位。在具體的實(shí)施方式中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血漿和/或血清的抗CCP抗體等于或大于20單位。在具體的實(shí)施方式中，患者先前經(jīng)一種或多種DMARD包括但不限于甲氨喋呤、氨喹脲、柳氮磺吡啶、和來(lái)氟米特的治療失敗。在具體的實(shí)施方式中，患者先前經(jīng)甲氨喋呤治療失敗。在具體的實(shí)施方式中，患者的DAS評(píng)分大于5. I。在具體的實(shí)施方式中，患者有至少6個(gè)腫脹的關(guān)節(jié)和至少8個(gè)壓痛的關(guān)節(jié)。在具體的實(shí)施方式中，患者的ESR大于28mm/小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為45分鐘。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為I個(gè)小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為I個(gè)半小時(shí)。在具體的實(shí)施方式中，患者的晨僵時(shí)間至少為2個(gè)小時(shí)。
·
在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者已經(jīng)獲得了 ACR20應(yīng)答，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。ACR20是美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)開(kāi)發(fā)出的評(píng)價(jià)患者對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的應(yīng)答的指數(shù)。ACR20應(yīng)答被定義為除了 5個(gè)其他癥狀或疾病表現(xiàn)評(píng)價(jià)(即患者疼痛評(píng)價(jià)、患者總體評(píng)價(jià)、醫(yī)師總體評(píng)價(jià)、患者自我評(píng)價(jià)的殘疾、急性期反應(yīng)物(ESR或CRP))中的3個(gè)評(píng)價(jià)都至少提高了 20%外，還要壓痛關(guān)節(jié)數(shù)目和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)目至少減少20%。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者已經(jīng)獲得了 ACR50應(yīng)答，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合多肽、Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a 和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。ACR50是美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)開(kāi)發(fā)出的評(píng)價(jià)患者對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的應(yīng)答的指數(shù)。ACR50應(yīng)答被定義為除了 5個(gè)其他癥狀或疾病表現(xiàn)評(píng)價(jià)(即患者疼痛評(píng)價(jià)、患者總體評(píng)價(jià)、醫(yī)師總體評(píng)價(jià)、患者自我評(píng)價(jià)的殘疾、急性期反應(yīng)物(ESR或CRP))中的3個(gè)評(píng)價(jià)都至少提高了 50%外，還要壓痛關(guān)節(jié)數(shù)目和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)目至少減少50%。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，如果類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者已經(jīng)獲得了 ACR70應(yīng)答，則正在接受或已經(jīng)接受過(guò)Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑(包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白(例如TACI、BCMA或BAFF-R)或其片段或變體、抗Neutrokine-a受體(例如TACI、BCMA或BAFF-R)抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine- a結(jié)合多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體、靶向于 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA、BAFF-R 或其他 Neutrokine- a ·和 /或APRIL的受體的反義或siRNA)治療的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者被認(rèn)為是應(yīng)答于或者已經(jīng)應(yīng)答于所述治療。ACR70是美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)開(kāi)發(fā)出的評(píng)價(jià)患者對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的應(yīng)答的指數(shù)。ACR70應(yīng)答被定義為除了 5個(gè)其他癥狀或疾病表現(xiàn)評(píng)價(jià)(即患者疼痛評(píng)價(jià)、患者總體評(píng)價(jià)、醫(yī)師總體評(píng)價(jià)、患者自我評(píng)價(jià)的殘疾、急性期反應(yīng)物(ESR或CRP))中的3個(gè)評(píng)價(jià)都至少提高了 70%外，還要壓痛關(guān)節(jié)數(shù)目和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)目至少減少70%。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- a拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine- a蛋白片段或變體。免疫調(diào)節(jié)劑本發(fā)明提供用免疫調(diào)節(jié)劑治療ANA滴度為1:80或更高和/或其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的方法。上面討論了在此所用的“免疫調(diào)節(jié)劑”的含義。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑是Neutrokine-a拮抗劑?！稗卓箘北硎灸軌蛞种苹蜣卓筃eutrokine- a的體外和/或體內(nèi)的功能性作用和/或生物學(xué)作用(例如刺激B細(xì)胞的分化、增殖、和/或生存；刺激B細(xì)胞生成Ig ;和結(jié)合Neutrokine-a受體)的藥物?？梢栽诖嬖诨虿淮嬖谵卓箘┖蚇eutrokine-a多肽的直接物理的接觸時(shí)發(fā)生這種抑制作用(例如拮抗劑可以調(diào)節(jié)Neutrokine- a活性的上游效應(yīng)物，以便降低所述活性)。在此描述了用于測(cè)定Neutrokine- a拮抗劑抑制B細(xì)胞活性的檢測(cè)法。Neutrokine- a拮抗劑包括但不限于抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a受體蛋白或其片段或變體、結(jié)合Neutrokine-a受體的抗體或其抗原結(jié)合片段、Neutrokine-a結(jié)合肽或多肽、Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體(例如Neutrokine- a和/或APRIL的顯性負(fù)調(diào)控物形式)。其他的Neutrokine-a拮抗劑包括Neutrokine-a的小分子拮抗劑、Neutrokine- a妝模擬物、革巴向于Neutrokine- a的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)和革巴向于APRIL的反義RNA和短干擾RNA (siRNA)、靶向于Neutrokine- a的受體和/或APRIL的受體的反義RNA和短干擾RNA(SiRNA)。下面將更詳細(xì)地描述每種拮抗劑。Neutrokine- a 括抗.劑A. Neutrokine- a 和 APRIL 多妝在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法的Neutrokine- a拮抗劑是Neutrokine- a或APRIL多妝片段或變體。下面將更詳細(xì)地描述Neutrokine-a多妝、APRIL多肽和其片段或變體。Neutrokine-a蛋白(SEQ ID NO:2)是TNF配體家族的成員，其與APRIL (SEQ ID NO:4 ；GenBank 編號(hào) AF046888 ；PCT 國(guó)際出版物 W097/33902 ；Hahne, M.，etal. , J Exp Med. (1998) 188 (6) : 1185-90)、TNF a 和淋巴毒素 a (LT a ) (Moore, etal. , 1999)享有氨基酸序列相同性。全長(zhǎng)Neutrokine-a基因編碼285個(gè)氨基酸多肽，其具有第I和46位殘基之間的細(xì)胞內(nèi)區(qū)、第47和73位殘基之間的跨膜區(qū)，所述跨膜區(qū)前面是II型膜結(jié)合蛋白特征性的非疏水性序列，以及第74和285位殘基之間的細(xì)胞外區(qū)。與TNF家族的其他成員一樣，Neutrokine-a以三聚體蛋白的形式發(fā)揮作用。在細(xì)胞表面上表達(dá)Neutrokine-a之后，在134位氨基酸上裂解出細(xì)胞外區(qū)，以便釋放出生物學(xué)活性的三聚·體。結(jié)構(gòu)表征發(fā)現(xiàn)雖然TNF家族配體表現(xiàn)出序列多樣性，但是它們都顯示出高度的結(jié)構(gòu)同源性。與其他的TNF配體家族的成員一樣,Neutrokine-a蛋白是2層的P -三明治結(jié)構(gòu)，其形成了 TNF樣的凝膠卷(jellyroll)形式。Neutrokine-a蛋白在總體結(jié)構(gòu)和尺度上都與其他TNF配體家族相似。但是,Neutrokine-a的受體結(jié)合區(qū)是比在其他細(xì)胞因子上觀察到的結(jié)合區(qū)更深的溝(Oren, et al. , (2002)Nature Structural Biology 9:288-292)。在例如國(guó)際出版物W098/18921、W000/50597、W002/1820、和W003/033658中更詳細(xì)地描述了Neutrokine- a多肽，在此通過(guò)弓|用將其全部?jī)?nèi)容都并入本申請(qǐng)。如上所述，Neutrokine-a多肽的作用為刺激B細(xì)胞增殖、分化、存活、和Ig分泌。因此，沒(méi)有人會(huì)預(yù)期可在本發(fā)明方法中使用天然形式的Neutrokine-a。但是，天然形式的Neutrokine-a可以作為靶向劑，其可以將其他能夠抑制B細(xì)胞活性的藥物(例如細(xì)胞毒基序或蛋白)攜帶帶接近于B細(xì)胞的位置(見(jiàn)例如，W000/033658的實(shí)施例12和13，其中同位素標(biāo)記的Neutrokine-a被用于祀向并殺死表達(dá)Neutrokine-a受體的細(xì)胞,所述細(xì)胞主要是B細(xì)胞來(lái)源的)?；蛘?，結(jié)合一種或多種Neutrokine-a受體但不誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的Neutrokine- a的片段或變體可以用作Neutrokine-a拮抗劑。影響Neutrokine-a形成或保持穩(wěn)定的同三聚體或異三聚體的能力的Neutrokine-a片段或變體也可以用作本發(fā)明方法中的Neutrokine-a拮抗劑。因此，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽包括SEQ ID NO: 2的Neutrokine-a蛋白的多肽片段或變體。多肽片段或變體可以是“獨(dú)立式的(free standing) ”或者可包含于更大的多肽內(nèi)，其中所述片段形成了所述更大多肽的一部分或一個(gè)區(qū)域，最優(yōu)選地是作為單一的連續(xù)區(qū)域。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽包括多肽片段,所述多肽片段包含推定的Neutrokine-a細(xì)胞外區(qū)(SEQ ID NO:2的第73到285位氨基酸殘基)和Neutrokine-a的可溶性片段(SEQ ID NO:2的第134到285位氨基酸殘基)或者是由它們組成。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的多肽片段或變體包括與上面所述的天然的Neutrokine-a的多肽片段至少有著80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%相同性的多肽片段或變體或者是由其組成。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽變體包括肽模擬物。模擬物是模擬了蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的元件的含肽分子。見(jiàn)例如Johnsonet al.，" Peptide Turn Mimetics " in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto etal. , Eds. , Chapman and Hall, New York(1993),在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。使用肽模擬物背后的潛在原理是蛋白的肽骨架存在主要是為了按促進(jìn)分子相互作用的方式來(lái)定位氨基酸側(cè)鏈，例如抗體和抗原的那些側(cè)鏈。預(yù)計(jì)肽模擬物可以容許類似于天然分子的分子相互作用。這些原理可以用于遺傳工程化具有在此所述的靶向肽的天然性能但是具有改變的、甚至改良的特征的第二代分子。APRIL (SEQ ID NO: 4)是 TNF 配體家族的成員，其與 Neutrokine-a (SEQ IDNO:2 ；GenBank 編號(hào) NM_006573 ;Moore,et al. , (1999)Science285:260-263 ；Schneideret al. , (1999) J. Exp. Med. 189:1747-1756 ;和 Khareet al. , (2000) Proc. Natl. AcadSci. 97:3370-3375)、TNFa、和淋巴毒素- a (LT a ) (Moore, etal.，1999)享有氨基酸序列的相同性。全長(zhǎng)APRIL基因編碼250個(gè)氨基酸的多肽，其具有第I和28位殘基之間的細(xì)胞內(nèi)區(qū)、第29和49位殘基之間的跨膜區(qū)、以及第50和250位殘基之間的細(xì)胞外區(qū)。與TNF家族的其他成員一樣，APRIL以三聚體蛋白的形式發(fā)揮作用。在細(xì)胞表面上表達(dá)APRIL之后，在105位氨基酸上裂解出細(xì)胞外區(qū)，以便釋放出生物學(xué)活性的三聚體。·在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽包括SEQ ID NO:4的APRIL蛋白的多肽片段或變體。多肽片段或變體可以是“獨(dú)立式的”或者可包含于更大的多肽內(nèi)，其中所述片段形成了所述更大多肽的一部分或一個(gè)區(qū)域，最優(yōu)選地是作為單一的連續(xù)區(qū)域。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽包括多肽片段，所述多肽片段包含推定的APRIL細(xì)胞外區(qū)(SEQ ID NO: 4的第50到250位氨基酸殘基)和APRIL的可溶性片段(SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸殘基)或者是由其組成。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的多肽片段或變體包括與上面所述的天然的APRIL的多肽片段至少有著80%、85%、90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%相同性的多肽片段或變體或者是由其組成。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽變體包括肽模擬物。模擬物是模擬了蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的元件的含肽分子。見(jiàn)例如Johnson et al. , " PeptideTurn Mimetics" in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto et al. , Eds. , Chapman andHall1New York(1993)，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。使用肽模擬物背后的潛在原理是蛋白的肽骨架存在主要是為了按促進(jìn)分子相互作用的方式來(lái)定位氨基酸側(cè)鏈，例如抗體和抗原的那些側(cè)鏈。預(yù)計(jì)肽模擬物可以容許類似于天然分子的分子相互作用。這些原理可以用于遺傳工程化具有在此所述的靶向肽的天然性能但是具有改變的、甚至是改良的特征的第二代分子?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的Neutrokine-a和APRIL多肽可以被表達(dá)或合成為修飾形式例如融合蛋白(包含經(jīng)肽鍵連接于(不同蛋白的)異源蛋白序列的多肽)，以及不僅可以包含分泌信號(hào)，還可以包含額外的異源的功能區(qū)。通過(guò)用本領(lǐng)域已知的方法在合適的閱讀框內(nèi)彼此連接Neutrokine-a或APRIL多核苷酸和編碼所需氨基酸序列的核酸序列，并用本領(lǐng)域已知的方法表達(dá)融合蛋白產(chǎn)物可以生成這種融合蛋白?；蛘?，可以用蛋白合成技術(shù)例如通過(guò)使用肽合成儀可以生成這種融合蛋白。因此，例如，可以向多肽的N末端加入額外的氨基酸區(qū)域(特別是帶電荷的氨基酸)，以提高其在宿主細(xì)胞內(nèi)、純化期間、或隨后的操作和儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性和持久性。也可以向多肽加入肽基序，以促進(jìn)純化?？梢栽诙嚯闹苽浣Y(jié)束之前去除這些區(qū)域。向多肽加入肽基序以引起分泌或排出、提高穩(wěn)定性和促進(jìn)純化都是本領(lǐng)域熟悉的和常規(guī)的技術(shù)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的優(yōu)選的Neutrokine-a或APRIL融合蛋白包括能夠用于穩(wěn)定和純化蛋白的來(lái)自免疫球蛋白的異源區(qū)域。例如，EP-A-0464533(對(duì)應(yīng)于加拿大2045869)和W000/024782闡述了包括免疫球蛋白分子的恒定區(qū)的不同部分和另一種人類蛋白或其部分的融合蛋白。例如在Yu，et al. , (2000) Nat Immunol 1:252-256中已經(jīng)能夠描述了 Neutrokine-a免疫球蛋白融合蛋白，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。例如在PCT出版物W001/087977中已經(jīng)描述了 APRIL免疫球蛋白融合蛋白，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在很多情況中，融合蛋白中的Fe部分非常適用于治療和診斷，并因此造成了改善的藥物動(dòng)力學(xué)性能(EP-A 0232262)。另一方面，對(duì)于某些應(yīng)用而言，需要在以在此所述的有利的方式表達(dá)、檢測(cè)并純化出融合蛋白之后能夠缺失Fe部分。當(dāng)Fe部分被證實(shí)其對(duì)用于治療和診斷是妨礙時(shí)就是這種情況，例如當(dāng)融合蛋白被用作免疫接種的抗原時(shí)。在藥物研發(fā)中，例如人類蛋白如hIL-5已經(jīng)與Fe部分融合，以便用高通量篩選檢測(cè)法鑒定出 hIL_5 的拮抗劑。見(jiàn) D. Bennett et al. , J. Molecular Recognition 8:52-58·(1995)和 K. Johanson et al.，J. Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)。本領(lǐng)域人員知道并如上面討論的那樣，Neutrokine-a和APRIL多肽可以與其他多肽序列融合。例如，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽可以與免疫球蛋白(IgA, IgE, IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CHI、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP394, 827、Traunecker etal.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物TO 96/22024和W099/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)。人血清白蛋白(HAS或HA)的成熟形式是585個(gè)氨基酸的蛋白(SEQ ID NO: 11)，其是引起血清滲透壓的主要部分，也作用能夠?yàn)閮?nèi)源性和外源性配體的載體?，F(xiàn)在，通過(guò)人類血液提取生成用于臨床應(yīng)用的HA。EP330451和EP 361991已經(jīng)闡述了在微生物中生成重組 HA (rHA)0白蛋白作為載體分子的作用以及其惰性性能都是在體內(nèi)用作多肽的載體和轉(zhuǎn)運(yùn)子所需的性能。在WO 93/15199、TO 93/15200、和EP 413622中已經(jīng)提出了白蛋白作為白蛋白融合蛋白的組件用作各種蛋白的載體的用途。也已經(jīng)提出了 HA作為與多肽的融合物的N末端片段的用途(EP 399666)。通過(guò)遺傳學(xué)操作可以實(shí)現(xiàn)白蛋白與治療性蛋白的融合，例如將編碼HA或其片段的DAN加入到編碼治療性蛋白的DNA中。然后用排列在合適質(zhì)粒上的融合的核苷酸序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染合適的宿主，以表達(dá)融合蛋白?？梢栽隗w外從原核或真核細(xì)胞中或者在體內(nèi)從轉(zhuǎn)基因生物體中實(shí)現(xiàn)所述表達(dá)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一個(gè)Neutrokine-a多肽的片段或變體以及至少一個(gè)人血清白蛋白的片段或變體，其彼此連接在一起，優(yōu)選地通過(guò)遺傳融合(即通過(guò)翻譯核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，編碼Neutrokine-a的全部或一部分的多核苷酸與編碼白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架連接)，或者化學(xué)綴合彼此連接在一起。一旦作為白蛋白融合蛋白的一部分，Neutrokine-a多肽和白蛋白蛋白可以被稱作白蛋白融合蛋白的“部分”、“區(qū)域”或“基序”(例如“Neutrokine-a部分”或“白蛋白部分”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine- a多肽和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine- a多肽的片段和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-a多肽的變體和血清白蛋白或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的血清·白蛋白蛋白組分是血清白蛋白的成熟部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-a多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine-a多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的Neutrokine-a部分是全長(zhǎng)Neutrokine- a多肽。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的Neutrokine-a蛋白部分是Neutrokine- a多肽的成熟的、可溶性的區(qū)域。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括Neutrokine- a多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由Neutrokine-a多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))組成的白蛋白融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，Neutrokine-a多肽與成熟形式的人血清白蛋白(即如歐洲專利0322094的圖I和2所示的人血清白蛋白的第I到585位氨基酸)融合，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到X位殘基組成的多肽片段融合，其中X是從I到585的整數(shù)，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，Neutrokine-a多肽(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到z位氨基酸組成的多肽片段融合，其中z是從369到419的整數(shù)，如美國(guó)專利5，766，883所述，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。Neutrokine-a多肽(包括其片段或變體)可以與異源蛋白(例如免疫球蛋白Fe多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一組或兩組下面的參照SEQ ID NO: 11的點(diǎn)突變組Leu-407突變?yōu)锳la、Leu-408 突變?yōu)?Val、Val-409 突變?yōu)?Ala、和 Arg-410 突變?yōu)?Ala ;*Arg_410 突變?yōu)?A、Lys-413突變?yōu)镚in、和Lys-414突變?yōu)镚ln (見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)W095/23857，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在甚至更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，含有一組或兩組上面所述的點(diǎn)突變組的可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白已經(jīng)提高了對(duì)酵母Yap3p蛋白裂解性降解的穩(wěn)定性/耐受性，容許增加在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組白蛋白融合蛋白的產(chǎn)量。優(yōu)選地，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括作為N末端部分的HA和作為C末端部分的Neutrokine-a多肽?；蛘撸部梢允褂冒ㄗ鳛槠銫末端部分的HA和作為其N末端部分的Neutrokine- a多肽的白蛋白融合蛋白。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白具有與白蛋白的N末端和C末端融合的Neutrokine-a多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的Neutrokine-a多肽是相同的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的Neutrokine- a多肽是不同的Neutrokine-a多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，Neutrokine-a多肽被融合于白蛋白的N或C末端，異源多肽被融合于剩余末端。
·
另外，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之間的連接物肽，以提供所述部分之間的更大的物理分隔。連接物肽可以由氨基酸組成，使得其是柔性的或更具剛性。一般而言，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一個(gè)HA衍生區(qū)和一個(gè)Neutrokine-a區(qū)。但是，每個(gè)蛋白中的多個(gè)區(qū)域都可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。同樣，一種以上的蛋白可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在這種構(gòu)型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。雙官能的白蛋白融合蛋白的結(jié)構(gòu)可以表示為X-HA-Y或 Y-HA-X。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a蛋白或其片段或變體可以與細(xì)胞毒素(例如細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑)綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒藥物可以包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥物。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、吐根素、絲裂霉素、足葉乙甙、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、I-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛爾、和嘌呤霉素以及其類似物或同系物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a或其片段或變體可以與毒素綴合。“毒素”表示一種或多種可以結(jié)合并激活內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的化合物、放射性同位素、全毒素、修飾毒素、毒素的催化亞基、或在給定的引起細(xì)胞死亡的條件下不會(huì)正常地表達(dá)于細(xì)胞表面內(nèi)或表面上的任何分子或酶。可以使用的毒素包括但不限于本領(lǐng)域已知的放射性同位素、化合物例如結(jié)合內(nèi)在的或誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的抗體(或其含補(bǔ)體固定化的部分)、胸苷激酶、核酸內(nèi)切酶、RNA酶、a毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假單胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素(saporin)、木鱉子甙(momordin)、白樹(shù)毒素(gelonin)、美洲商路抗病毒蛋白、a -帚曲霉素(a -Sarcin)、和霍亂毒素。“毒素”也包括細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療藥物或放射性金屬離子例如a粒子發(fā)射離子，例如213Bi、或其他放射性同位素如 103Pd、133Xe、131I、68Ge、57CO、65Zn、85Sr、32P、35S、9°Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、9° 釔(90Yttrium),117(117Tin)、186 錸(186Rhenium)、166 欽(166Holmium)、和188錸。在另一個(gè)實(shí)例中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP394, 827、Traunecker etal.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物TO 96/22024和W099/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中·和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)。可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一個(gè)APRIL多肽的片段或變體以及至少一個(gè)人血清白蛋白的片段或變體，其彼此連接在一起，優(yōu)選地通過(guò)遺傳融合(即通過(guò)翻譯核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，編碼APRIL的全部或一部分的多核苷酸與編碼白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架連接)，或者化學(xué)綴合彼此連接在一起。一旦作為白蛋白融合蛋白的一部分，APRIL多肽和白蛋白蛋白可以被稱作白蛋白融合蛋白的“部分”、“區(qū)域”或“基序”(例如“APRIL部分”或“白蛋白部分”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的變體和血清白蛋白或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白組分是血清白蛋白的成熟部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的APRIL部分是全長(zhǎng)APRIL多肽。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的APRIL蛋白部分是APRIL多肽的成熟的、可溶性的區(qū)域。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括APRIL多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分或者是由它們組成的白蛋白融合蛋白。 在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括APRIL多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由APRIL多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))組成的白蛋白融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，APRIL多肽與成熟形式的人血清白蛋白(即如歐洲專利0322094的圖I和2所示的人血清白蛋白的第I到585位氨基酸)融合，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到X位殘基組成的多肽片段融合，其中X是從I到585的整數(shù)，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，APRIL多肽(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到z位氨基酸組成的多肽片段融合，其中z是從369到419的整數(shù)，如美國(guó)專利5，766，883所述，在此通過(guò)弓I用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。APRIL多肽(包括其片段或變體)可以與異源蛋白(例如免疫球蛋白Fe多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一組或兩組下面的參照SEQ ID NO: 11的點(diǎn)突變組Leu-407突變?yōu)锳la、·Leu-408突變?yōu)閂al、Val-409突變?yōu)锳la、和Arg-410突變?yōu)锳la ;或Arg-410突變?yōu)锳、Lys-413突變?yōu)镚in、和Lys-414突變?yōu)镚ln (見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)W095/23857，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在甚至更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，含有一組或兩組上面所述的點(diǎn)突變組的可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白已經(jīng)提高了對(duì)酵母Yap3p蛋白裂解性降解的穩(wěn)定性/耐受性，容許增加在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組白蛋白融合蛋白的產(chǎn)量。優(yōu)選地，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括作為N末端部分的HA和作為C末端部分的APRIL多肽?；蛘?，也可以使用包括作為其C末端部分的HA和作為其N末端部分的APRIL多肽的白蛋白融合蛋白。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白具有與白蛋白的N末端和C末端融合的APRIL多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的APRIL多肽是相同的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的APRIL多肽是不同的APRIL多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，APRIL多肽被融合于白蛋白的N或C末端，異源多肽被融合于剩余末端。另外，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之間的連接物肽，以提供所述部分之間的更大的物理分隔。連接物肽可以由氨基酸組成，使得其是柔性的或更具剛性。一般而言，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一個(gè)HA衍生區(qū)和一個(gè)APRIL區(qū)。但是，每個(gè)蛋白中的多個(gè)區(qū)域都可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。同樣，一種以上的蛋白可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在這種構(gòu)型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。雙官能的白蛋白融合蛋白的結(jié)構(gòu)可以表示為X-HA-Y或Y-HA-X。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL蛋白或其片段或變體可以與細(xì)胞毒素(例如細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑)綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒藥物可以包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥物。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、吐根素、絲裂霉素、足葉乙甙、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、I-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛爾、和嘌呤霉素以及其類似物或同系物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL或其片段或變體可以與毒
素綴合?！岸舅亍北硎疽环N或多種可以結(jié)合并激活內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的化合物、放射性同位素、全毒素、修飾毒素、毒素的催化亞基、或在給定的引起細(xì)胞死亡的條件下不會(huì)正常地表達(dá)于細(xì)胞表面內(nèi)或表面上的任何分子或酶?？梢允褂玫亩舅匕ǖ幌抻诒绢I(lǐng)域已知的放射性同位素、化合物例如結(jié)合內(nèi)在的或誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的抗體(或其含補(bǔ)體固定化的部分)、胸苷激酶、核酸內(nèi)切酶、RNA酶、a毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假單胞菌外毒素A、白喉毒素、皂草素、木鱉子甙、白樹(shù)毒素、美洲商路抗病毒蛋白、a -帚曲霉素、和霍亂毒素。“毒素”也包括細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療藥物或放射性金屬離子例如a粒子發(fā)射離子，例如213Bi、或其他放射性同位素如1(l3Pd、133Xe、131I、68Ge、57C·0、65Zn、85Sr、32P、35S、9°Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、9° 釔、117 錫、186 錸、166 欽、和 188 錸?？梢圆捎眠z傳工程化來(lái)改變Neutrokine-a和APRIL多肽的特征，以生成可以用于本發(fā)明方法中的多肽?？梢杂帽绢I(lǐng)域人員已知的重組DNA技術(shù)生成新的突變蛋白或“突變型蛋白”包括單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。這些修飾多肽可以表現(xiàn)出例如增強(qiáng)活性、降低活性或增加穩(wěn)定性。另外，至少在特定的純化和儲(chǔ)存條件下，它們可以比相應(yīng)的天然多肽按更高的產(chǎn)量被純化，并表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性。例如，對(duì)于多種包括分泌蛋白的細(xì)胞外區(qū)或成熟形式的蛋白而言，本領(lǐng)域已知可以從N末端或C末端缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸，且基本上不丟失生物學(xué)功能。例如，Ron et al. , J.Biol.Chem.，268:2984-2988(1993)報(bào)道了經(jīng)修飾的KGF蛋白具有肝素結(jié)合活性，即使缺失了 3、
8、或27個(gè)氨基末端的氨基酸殘基?？梢员挥糜诒景l(fā)明方法中的Neutrokine-a和APRIL多肽可以是單體或多聚體(即二聚體、三聚體、四聚體、和更高聚體)，在具體的實(shí)施方式中，可以被用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a和APRIL多肽可以是同聚體或異聚體。Neutrokine-a同聚體指的是只含有Neutrokine-a多肽(包括Neutrokine-a片段、變體、和在此所述的融合蛋白)的多聚體。這些同聚體可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine- a多肽。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是Neutrokine-a同二聚體(例如含有兩個(gè)具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine- a多肽)或者是Neutrokine-a同三聚體(例如含有三個(gè)具有相同的或不同的氨基酸序列的Neutrokine-a多肽)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是Neutrokine-a的同三聚體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽至少是同二聚體、同三聚體或同四聚體。APRIL同聚體指的是只含有APRIL多肽(包括APRIL片段、變體、和在此所述的融合蛋白)的多聚體。這些同聚體可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是APRIL同二聚體(例如含有兩個(gè)具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽)或者是APRIL同三聚體(例如含有三個(gè)具有相同的或不同的氨基酸序列的APRIL多肽)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是APRIL的同三聚體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽至少是同二聚體、同三聚體或同四聚體。異聚體的Neutrokine-a指的是除了 Neutrokine-a多肽外還含有異源性多肽(即不同蛋白的多肽)的多聚體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是異二聚體、異三聚體、或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是多聚體，其中至少是異二聚體、異三聚體、或異四聚體。異聚體的APRIL指的是除了 APRIL多肽外還含有異源性多肽(即不同蛋白的多肽)的多聚體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是異二聚體、異三聚體、或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是多聚體，其中至少是異二聚體、異三聚體、或異四聚體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是包括Neutrokine-a多肽和APRIL多肽或其片段或變體的異三聚體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是包括一個(gè)Neutrokine-a多肽(包括片段或變體)和兩個(gè)APRIL多肽(包括片段或變體)的異三聚體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a多肽是包括兩個(gè)Neutrokine- a多肽(包括片段或變體)和一個(gè)APRIL多肽(包括片段或變體)的異三聚·體。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine- a多肽是同聚體的、特別是同三聚體的Neutrokine- a多肽，其中多聚體的單個(gè)蛋白組分包括Neutrokine-a的成熟形式(例如SEQ ID NO:2的第134到285位氨基酸)或其片段或變體或者是由它們組成。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutookine-a多肽是異聚體的、特別是異三聚體的Neutrokine-a多肽例如含有兩個(gè)Neutrokine-a多肽和一個(gè)APRIL多肽的異三聚體或含有一個(gè)Neutrokine- a多肽和兩個(gè)APRIL多肽的異三聚體，其中Neutrokine-a異聚體的單個(gè)蛋白組分包括Neutrokine-a的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO: 2的第134到285位氨基酸)或其片段或變體、或APRIL的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸)或其片段或變體或者是由其組成。在另外的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是同聚體的、特別是同三聚體的APRIL多肽，其中多聚體的單個(gè)蛋白組分包括APRIL的成熟形式(例如SEQ IDN0:4的第105到250位氨基酸)或其片段或變體或者是由其組成。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL多肽是異聚體的、特別是異三聚體的APRIL多肽例如含有兩個(gè)APRIL多肽和一個(gè)Neutrokine- a多肽的異三聚體或含有一個(gè)APRIL多肽和兩個(gè)Neutrokine-a多肽的異三聚體，其中APRIL異聚體的單個(gè)蛋白組分包括APRIL的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸)或其片段或變體、或Neutrokine- a的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO: 2的第134到285位氨基酸)或其片段或變體或者是由其組成?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的多聚體可以是疏水連接、親水連接、離子連接和/或共價(jià)連接相連的結(jié)果，和/或可以是間接相連的，例如通過(guò)脂質(zhì)體形成。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)多肽在溶液中彼此接觸時(shí)，就形成了同多聚體例如同二聚體或同三聚體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)多肽在溶液中彼此接觸時(shí)，就形成了異二聚體例如異三聚體或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，通過(guò)與Neutrokine-a多肽的共價(jià)連接或者Neutrokine-a之間的共價(jià)連接形成多聚體。在其他實(shí)施方式中，通過(guò)與APRIL多肽的共價(jià)連接或者APRIL之間的共價(jià)連接形成多聚體。這些共價(jià)連接可能涉及到多肽序列(例如Neutrokine-a的SEQ ID NO: 2或APRIL的SEQ ID NO:4)所含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。在一種情況中，共價(jià)連接是位于多肽序列內(nèi)的半胱氨酸殘基之間的交聯(lián)，所述半胱氨酸殘基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一種情況中，共價(jià)連接是化學(xué)或重組處理后的結(jié)果?；蛘?，這種共價(jià)連接可以涉及一個(gè)或多個(gè)在Neutrokine- a或APRIL融合蛋白的異源性多肽序列中所含的氨基酸殘基(見(jiàn)美國(guó)專利5，478，925)。在一個(gè)具體的實(shí)例中，共價(jià)連接是Neutrokine-a-Fe融合蛋白(如在此所述)所含的異源性序列之間的共價(jià)連接。在一個(gè)具體的實(shí)例中，共價(jià)連接是APRIL-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的異源性序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的融合蛋白的共價(jià)連接是來(lái)自另一個(gè)能夠形成共價(jià)連接的多聚體的TNF家族配體/受體成員例如護(hù)骨蛋白(oseteoprotegerin)(見(jiàn)例如國(guó)際出版物WO 98/49305，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))的異源性多肽序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，兩個(gè)或多個(gè)Neutrokine-a多肽和/或APRIL多肽經(jīng)合成的連接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚體連接物)連接在一起。實(shí)例包括在美國(guó)專利5，073，627中所述的那些肽連接物(在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng))。利用傳統(tǒng)·的重組DNA技術(shù)可以生成包括多個(gè)經(jīng)肽連接物分離的Neutrokine- a多肽和/或APRIL多肽的蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a拮抗劑是Neutrokine-a和/或APRIL的顯性負(fù)調(diào)控物形式。具體地，在例如國(guó)際專利出版物W006/034106、TO05/113598、TO04/089982、W004/081043 和 TO03/057856 以及美國(guó)專利出版物 US20060014248、US20050221443、US20050130892、US20050048626、US2005003480 和US20030166559中已經(jīng)描述了 Neutrokine-a和/或APRIL的變體，包括顯性負(fù)調(diào)控物形式。在此通過(guò)弓I用將其所有內(nèi)容并入本申請(qǐng)。這種Neutrokine- a和/或APRIL多肽變體例如可以通過(guò)干擾Neutrokine-a和/或APRIL形成同或異多聚體化來(lái)拮抗Neutrokine-a功能?；蛘?Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體可以阻止包括所述Neutrokine-a和/或APRIL多肽變體的多肽與Neutrokine- a受體例如TACI、BCMA和BAFF-R的結(jié)合和/或信號(hào)傳導(dǎo)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，Neutrokine-a 拮抗劑是 Gao et a. I, (2006)Biotechnol.Lett. 28:1649-54所述的Neutrokine- a蛋白突變體,在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a拮抗劑是A BAFF(SEQ ID N0:12)。B.抗 Neutrokine-a 抗體在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-a抗體或其抗原結(jié)合片段。例如在 PCT 出版物 W001/087977、W003/016468、W001/60397、W002/02641 和W003/55979 ;美國(guó)出版物 2005/0070694 和 2005/0255532 ;和 Cao et al.，(2005) ImmunolLett 101:87-94 ;Ch，en et al. , (2005)Cell Immunol 236:78-85 ;Liu et al. , (2005)Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai)37:415-420 ;Schneider et al. , (1999)J Exp Med189:1747-1756 ；Sun et al., (2006)Hybridoma 25:80-85 ;Sun et al., (2006)Hybridoma25:238-242中已經(jīng)描述了抗Neutrokine-a抗體及其片段；下面將做更為詳細(xì)的描述。在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。術(shù)語(yǔ)“抗體”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。術(shù)語(yǔ)抗體不僅包括整個(gè)抗體分子，還包括抗體片段和抗體以及抗體片段的變體(包括衍生物)。在本申請(qǐng)中術(shù)語(yǔ)“抗體”所述的分子的實(shí)例包括但不限于單鏈Fv(ScFv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2、二硫鍵連接的Fv(sdFv)、Fv、和包括或由VL或VH結(jié)構(gòu)域組成的片段。術(shù)語(yǔ)“單鏈Fv”或“scFv”在此指的是包括與抗體的VH結(jié)構(gòu)域相連的抗體的VL結(jié)構(gòu)域的多肽。免疫特異性結(jié)合特殊抗原(例如Neutrokine-a )的抗體可以具有與其他抗原的交叉反應(yīng)性。優(yōu)選地,免疫特異性結(jié)合特殊抗原的抗體與其他抗原沒(méi)有交叉反應(yīng)。例如通過(guò)免疫檢測(cè)法或其他本領(lǐng)域人員已知的技術(shù)可以鑒定出與特殊抗原的免疫特異性結(jié)合，例如2006年7月31日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)60/834，152所述的免疫檢測(cè)法，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體包括但不限于單克隆的、多特異性的、人類或嵌合·的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab')片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體、以及上述所有抗體的表位結(jié)合片段。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可以是任何類型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何組(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞組的免疫球蛋白?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體也可以包括多聚體形式的抗體。例如，可以用于本發(fā)明方法中的抗體可以是抗體二聚體、三聚體、或單體免疫球蛋白分子的高級(jí)多聚體形式。整個(gè)免疫球蛋白分子或者F(ab’ )2片段的二聚體是四價(jià)的，而Fab片段或scFv分子的二聚體是二價(jià)的。抗體多聚體內(nèi)的單個(gè)單體可以是相同的或不同的，即它們可以是異聚體的或同聚體的抗體多聚體。例如，多聚體內(nèi)的單個(gè)抗體可以具有相同的或不同的結(jié)合特異性。通過(guò)抗體的天然聚集或者通過(guò)本領(lǐng)域已知的化學(xué)或重組連接技術(shù)可以完成抗體的多聚體化。例如，一部分純化的抗體制劑(例如純化的IgGl分子)可以自發(fā)地形成含有抗體同二聚體和其他更高級(jí)的抗體多聚體的蛋白聚集物?；蛘?，可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的化學(xué)連接技術(shù)形成抗體同二聚體。例如，異雙官能的交聯(lián)劑包括但不限于SMCC (琥珀酰亞胺基4-(馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己燒-I-羧酸酯)[succinimidyl 4-(maleimidomethyl)cycIohexane-I-carboxylate]和 SATA[N-succinimidyl S-acethylthio-acetate](例如購(gòu)自Pierce Bio technology, Inc. (Rockford, IL)),可以用所述交聯(lián)劑形成抗體多聚體° Ghetie et al. , Proceedings of the National Academy of SciencesUSA(1997)94:7509-7514給出了用于形成抗體同二聚體的示例方案，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。通過(guò)胃蛋白酶的消化可以將抗體同二聚體轉(zhuǎn)化成Fab’ 2同二聚體。形成抗體同二聚體的另一個(gè)方法是通過(guò)使用在Zhao and Kohler, The Journal ofImmunology (2002) 25:396-404中所述的autophilic的T15肽，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?；蛘撸梢酝ㄟ^(guò)重組DNA技術(shù)使得抗體多聚體化。IgM和IgA通過(guò)與J鏈多肽的相互作用天然地形成抗體多聚體。非IgA或非IgM分子例如IgG分子可以被遺傳工程化成含有IgA或IgM的J鏈相互作用區(qū)，據(jù)此賦予非IgA或非IgM分子形成高級(jí)多聚體的能力(見(jiàn)例如 Chintalacharuvu et al. , (2001)Clinical Immunology 101:21-31.和Frigerio et al. , (2000)Plant Physiology 123:1483-94 ,在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。也可以要通過(guò)本領(lǐng)域已知的重組技術(shù)形成scFv 二聚體,Goel et al. , (2000)CancerResearch 60:6964-6971給出了構(gòu)建scFv 二聚體的實(shí)例,在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。利用本領(lǐng)域已知的任何合適的方法包括但不限于分子排阻色譜法可以純化出抗體多聚體。除非在本說(shuō)明書(shū)中有其他不同的說(shuō)明，抗體的特異性結(jié)合或免疫特異性結(jié)合都表示抗體結(jié)合靶抗原，但不會(huì)顯著地結(jié)合(即交叉反應(yīng))除靶抗原以外的蛋白例如同一蛋白家族中的其他蛋白(例如其他TNF家族配體)。結(jié)合靶抗原和不會(huì)與其他蛋白交叉反應(yīng)的抗體不必是在所有條件下都不會(huì)結(jié)合所述其他蛋白的抗體，而是相比較于其結(jié)合所述其他蛋白的能力而言，靶抗原特異性抗體優(yōu)選地結(jié)合靶抗原，使得其適用于至少一種類型的檢測(cè)法或治療，即得到了低背景水平或者對(duì)治療不會(huì)造成不合理的副作用。抗體所結(jié)合的蛋白部分稱作表位，這是公知的。表位可以是線性的(即由蛋白序列中的次序的氨基酸殘基組成)或者構(gòu)象的(即由蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)中不連續(xù)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基組成，但是通過(guò)蛋白的二級(jí)、三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)組合在一起)。假定靶抗原特異性抗體結(jié)合靶抗原的表位，那么特異性結(jié)合靶抗原的抗體可以或不可以結(jié)合靶抗原的片段和/或靶抗原的變體(例如與靶抗原至少90%相同的蛋白)，這取決于靶抗原片段或變體中是否存在給定靶抗原特異性·抗體所結(jié)合的表位。同樣，靶抗原特異性抗體可以結(jié)合靶抗原(包括其片段)的物種直系同源物(species orthologues),這也取決于在直系同源物中是否存在抗體所識(shí)別的表位。另外，靶抗原特異性抗體可以結(jié)合修飾形式的靶抗原例如靶抗原融合蛋白。在這種情況中，當(dāng)抗體結(jié)合靶抗原融合蛋白時(shí)，抗體必須與融合蛋白的靶抗原基序結(jié)合接觸，以便使得結(jié)合是特異性的。例如通過(guò)免疫檢測(cè)法或其他本領(lǐng)域人員已知的技術(shù)可以鑒定出與任何特殊靶抗原特異性結(jié)合的抗體，例如通過(guò)2006年7月31日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)60/834，152所述的免疫檢測(cè)法，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以“特異于”Neutrokine-a，但是這并非是必要條件?？筛鶕?jù)其交叉反應(yīng)性來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體。不會(huì)結(jié)合Neutrokine-a的任何其他類似物、同源物、或同系物的抗體可以用于本發(fā)明的方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體與APRIL交叉反應(yīng)。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體與人類蛋白質(zhì)的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相應(yīng)表位交叉反應(yīng)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，結(jié)合Neutrokine-a多肽、多肽片段、或SEQ ID N0:2的變體、和/或Neutrokine-a表位(通過(guò)用于檢測(cè)特異的抗體-抗原結(jié)合的本領(lǐng)域熟知的免疫檢測(cè)法確定的表位)的抗體可以用于本發(fā)明方法中。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體可以結(jié)合與其他多肽序列融合的Neutrokine-a多肽。例如，Neutrokine- a多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3或其任何組合及其部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化以及增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如 EP 394，827、Traunecker et al.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與 FcRn 結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物W096/22024和WO 99/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如Fountoulakis et al. , J.Biochem.，270:3958-3964(1995)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合突變的Neutrokine-a多肽，通過(guò)對(duì)編碼Neutrokine-a多肽的多核苷酸的隨機(jī)突變、通過(guò)錯(cuò)配PCR、隨機(jī)核苷酸插入或重組之前的其他方法生成所述突變的Neutrokine-a多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合與一種或多種異源分子的一個(gè)或多個(gè)組分、基序、節(jié)段、部分、區(qū)域、片段等重組的NeutiOkine-a的一個(gè)或多個(gè)組分、基序、節(jié)段、部分、區(qū)域、片段等。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，異源分子是例如TNF-a、淋巴毒素-a (LT_ a，也叫做TNF-β )、LT-β (見(jiàn)于復(fù)雜異三聚體 LT-a 2-β )、OPGL, FasL、CD27L、CD30L、CD40L、4_1BBL、DcR3、0X40L、TNF- y (國(guó)際出版物 WO 96/14328)、AIM-I (國(guó)際出版物 WO 97/33899)、AIM-II (國(guó)際出版物 WO 97/34911)、APRIL (J. Exp. Med. 188 (6) : 1185-1190)、endokine-α (·國(guó)際出版物 TO 98/07880)、0PG、0X40、和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、和可溶形式的 Fas、CD30、CD27、CD40和4IBB、TR2(國(guó)際出版物W096/34095)、DR3 (國(guó)際出版物WO 97/33904)、DR4 (國(guó)際出版物 W098/32856)、TR5 (國(guó)際出版物 WO 98/30693)、TR6 (國(guó)際出版物 W098/30694)、TR7 (國(guó)際出版物WO 98/41629)、TRANK, TR9 (國(guó)際出版物WO 98/56892)、TRlO (國(guó)際出版物WO98/54202)、312C2(國(guó)際出版物 TO98/06842)、TR12、CAD、和 v-FLIP。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，異源分子是TNF家族的任一成員。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合同聚體的、特別是同三聚體的Neutrokine-α多肽。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合異聚體的、特別是異三聚體的Neutrokine-a多肽例如含有兩個(gè)Neutrokine-a多肽和一個(gè)APRIL多肽的異三聚體或者含有一個(gè)Neutrokine- a多肽和兩個(gè)APRIL多肽的異三聚體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合同聚體的、特別是同三聚體的Neutrokine-a多肽,其中多聚體的單個(gè)蛋白組分是由成熟形式的Neutrokine-a (例如SEQ ID NO:2的第134到285位氨基酸殘基)組成的。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合異聚體的、特別是異三聚體的Neutrokine-a多肽例如含有兩個(gè)Neutrokine-a多肽和一個(gè)APRIL多肽的異三聚體或者含有一個(gè)Neutrokine-a多肽和兩個(gè)APRIL多肽的異三聚體,其中Neutrokine- a異聚體的蛋白組分是由Neutrokine- a的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO: 2的第134到285位氨基酸)或APRIL的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸)組成的。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合Neutrokine-a單體蛋白的構(gòu)象表位。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合Neutrokine-a多聚體的、特別是三聚體的蛋白的構(gòu)象表位。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合由Neutrokine-a和異源多肽的并置所產(chǎn)生的構(gòu)象表位，當(dāng)Neutrokine-a形成異三聚體(例如和APRIL多肽)或者在Neutrokine-a和異源多肽之間的融合蛋白內(nèi)可以出現(xiàn)所述構(gòu)象表位。
可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括但不限于多克隆的、單克隆的、多特異性的、人的、人源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab) ’片段、Fab表達(dá)文庫(kù)生成的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括抗Neutrokine- α抗體的抗id抗體)、和上面所有抗體的表位結(jié)合片段。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，免疫球蛋白是IgGl或IgG4同種型。免疫球蛋白可以具有重鏈和輕鏈。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY的排列可以與κ或λ形式的輕鏈相匹配。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體是結(jié)合Neutrokine-a的抗體片段，包括但不限于Fab、Fab’、和F (ab’ ) 2、Fd、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)和包括VL或VH區(qū)的片段。包括單鏈抗體的結(jié)合Neutrokine-α的抗體片段可以包括單獨(dú)的可變區(qū)或者與下面的全部或一部分組合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合片段包括可變區(qū)和鉸鏈區(qū)、CHU CH2和CH3區(qū)的任一組合?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以來(lái)自任何動(dòng)物來(lái)源的抗體，包括鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物類。優(yōu)選地，抗體是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驢、ship rabbit、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞來(lái)源的。“人”抗體在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體以及包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從轉(zhuǎn)基因了一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白且不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中分離到的抗體，如在Kucherlapati等的美國(guó)專·利5，939，598所述的那樣，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的或更高的多特異性的。多特異性抗體可以特異于Neutrokine-α多肽的不同表位或者可以特異于Neutrokine-a多肽以及異源表位例如異源多肽或固體支持材料。見(jiàn)例如PCT 出版物 WO 93/17715、WO 92/08802、W091/00360、WO 92/05793、Tutt, et al. , J.Immunol. 147:60-69(1991);美國(guó)專利 4，474，893、4，714，681、4，925，648、5，573，920、5，601，819、Kostelnyet al. , J. Immunol. 148:1547-1553(1992)?？梢钥贵w與Neutrokine-α多肽的結(jié)合親和力來(lái)描述或說(shuō)明可用于本發(fā)明方法中的抗體。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合Neutrokine-a多肽或其片段或變體，其解離常數(shù)或Kd小于或等于5x10_9M、10_9M、5x 10^10MU0^10M,5x10_nM、10_nM、5x 10_12M、或10_12M。在具體的實(shí)施方式中，可用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合Neutrokine-a多肽的解離常數(shù)或Kd是在每個(gè)單個(gè)給出值之間的任一范圍內(nèi)。部分或完全地阻斷與Neutrokine- α多肽的受體/配體相互作用的Neutrokine-a抗體可以用于本發(fā)明方法。也包括不會(huì)阻止配體結(jié)合但會(huì)阻止受體活化的Neutrokine-a特異性抗體。用在此所述的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以確定受體活化(即信號(hào)傳導(dǎo))。例如，通過(guò)用本領(lǐng)域已知的技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT、AP-U MAPK8/JNK和/或NF-kB (包括非經(jīng)典的NF-κ B信號(hào)傳導(dǎo)途徑)的活化和/或通過(guò)免疫沉淀以及隨后的western印跡分析檢測(cè)受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)可以確定受體活化。利用本領(lǐng)域已知的方法可以制備出上述的Neutrokine-a抗體。見(jiàn)例如PCT出版物WO 96/40281 ；美國(guó)專利5，811，097 ;Deng etal.,Blood92(6):1981-1988(1998) ；Chen et al. , Cancer Res.58 (16):3668-3678(1998)；Harrop et al. , J. Immuno1. 161 (4) :1786-1794(1998) ；Zhu et al. , CancerRes.58(15):3209-3214(1998) ；Yoon et al.,J.Immunol. 160 (7):3170-3179 (1998)；Prat et al.，J. Cell. Sci. Ill (Pt2) : 237-247 (1998) ；Pitard et al.，J. Immunol.Methods 205(2):177-190(1997) ；Liautard et al., Cytokine 9(4):233-241 (1997)；Carlson et al. , J. Biol. Chem. 272(17) :11295-11301(1997) ；Taryman et al. , Neuron14(4):755-762(1995) ；Muller et al., Structure 6 (9) : 1153-1167(1998) ；Bartunek etal.，Cytokine 8 (I) : 14-20 (1996)(在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α抗體(包括包含或由抗體片段或其變體組成的分子)特異地結(jié)合Neutrokine-α或Neutrokine-α的片段或變體。具體地，抗體例如具有在表I中所指出的SEQ ID NO: 13-18中的任一氨基酸序列的單鏈Fv(ScFv)都可以用于本發(fā)明方法。表I :免疫特異性結(jié)合Neutrokine-α的scFv。
Ii)sd-.vV], Vl CDRl V1.CDR2 V. CDR3 Vii Vll CDRi V!i CDR2 ViI Cl)·R3
SEQ ID NO 的aa 的aa 的aa 的aa 的aa 的aa 的aa的aa
I006D0813141 -249 163- 173~189- 195~228 -238~I - 12326 - 3550-6699-112
I050B1114143 -251 166- 177 193 - 199 232 -240 I - 12526 - 3550 -6699-114
I050A1215142-250 164- 174 190 - 196 229-239 1 - 12426-3550-6699-113
I050B11-1516143-251 166- 177 193 - 199 232-240 I - 12526-3550-6699-114
I116A0117141 -249 163 - 173 189-195 228 -238 I - 12326-3550-6699- 112
I026C04-K18142-250 164- 176 192- 198 231 -239 I - 12526 - 3550-6699- 114在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合Neutrokine- α并包括具有表I所指出的任一 VH區(qū)和/或表I所指出的任一 VL區(qū)的氨基酸序列的多肽。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括來(lái)自表I所指出的同一 scFv的VH區(qū)和VL區(qū)的氨基酸序列。在另一個(gè)的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括來(lái)自表I所指出的不同的scFv的VH區(qū)和VL區(qū)的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體特異性結(jié)合Neutrokine-α并包括具有表I所指出的任一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)VH CDR和/或表I所指出的任一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)VL CDR的氨基酸序列的多肽。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括來(lái)自表I所指出的同一scFv的VH CDR和VL CDR的氨基酸序列。在另一個(gè)的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括來(lái)自表I所指出的不同的scFv的VH⑶R和VIXDR的氨基酸序列。包括或由免疫特異性結(jié)合Neutrokine-a的表I指出的scFv的抗體片段或變體組成的分子也可以用于本發(fā)明方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 13的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 13的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDRl、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 14的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 13的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDRl、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 13的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 14的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-α抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 15的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 15的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDRl、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 16的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 16的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 17的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 17的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDRl、·VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 18的VH和VL區(qū)。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括如表I所述的SEQ ID NO: 18的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括15C10的VH和VL區(qū)，15C10是例如美國(guó)專利申請(qǐng)20050186637中所述的一種中和性抗Neutrokine-α抗體。15C10的VH區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO: 19。15C10的VL區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID N0:20o在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體是15C10變體的抗原結(jié)合片段。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-α抗體是人源化的15C10。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括15C10的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3和VL CDRUVL CDR2和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-a抗體包括4A5-3. I. 1-B4的VH和VL區(qū)，4A5-3. I. I-B4是國(guó)際專利出版物W003/0164468中所述的抗Neutrokine-α抗體，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在W003/0164468中，Neutrokine-a 被稱作 hTNFSF13b。4A5-3. I. 1-B4 的 VH 區(qū)的氨基酸序列為 SEQ ID N0:21。4A5-3. I. 1-B4的VL區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID N0:22。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗Neutrokine-α抗體是4A5-3. I. 1-B4變體的抗原結(jié)合片段。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體包括4A5-3. I. 1-B4的VH⑶R1、VH⑶R2、VH CDR3 和 VL CDRl、VL CDR2 和 VL CDR3 區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明的Neutrokine-a抗體特異地結(jié)合細(xì)胞所表達(dá)的天然的Neutrokine-α多肽。C. Neutrokine- α 結(jié)合多妝在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是Neutrokine-α結(jié)合肽或多肽。例如在國(guó)際專利出版物 W005/005462、W005/00035U W002/092620、TO02/16412、W002/02641 和 TO02/16411 以及美國(guó)專利出版物 US2006135430、US2006084608、US2003194743、US20030195156 和 US2003091565 中已經(jīng)描述了 Neutrokine- α 結(jié)合肽或多肽，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。例如在Sun et al. , (2006)Biochem.Biophys. Res. Commun. 346:1158-1162 中已經(jīng)描述了 Neutrokine- α 結(jié)合妝或多妝，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽包括從經(jīng)與絲狀噬菌體包被蛋白的融合所展示出的隨機(jī)肽序列中鑒定出的短的多肽。對(duì)于嗤菌體展示肽文庫(kù)技術(shù)的討論見(jiàn)例如Scott et al. (1990) Science 249:386 ；Devlin etal. (1990), Science 249:404 ；1993 年 6 月 29 日提交的美國(guó)專利 5，223，409 ；1998 年 3 月31日提交的美國(guó)專利5，733，731 ；1996年3月12日提交的美國(guó)專利5，498，530 ；1995年7月11日提交的美國(guó)專利5，432，018 ;1994年8月16日提交的美國(guó)專利5，338, 665 ;1999年7月13日提交的美國(guó)專利5，922，545 ；1996年12月19日出版的WO 96/40987 ;和1998年4月16日出版的WO 98/15833，在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng)。通過(guò)連續(xù)多輪的針對(duì)固定化的Neutrokine-α靶向肽的親和純化以及隨后的再繁殖可以分離出表達(dá)肽的噬菌體。給具有與Neutrokine-α的最高結(jié)合力的候選曬菌體測(cè)序，以便確定每個(gè)結(jié)合肽的身份。然后將所有鑒定出的Neutrokine-α結(jié)合肽都連接到“載體”上，以生成用于本發(fā)明方法中的進(jìn)一步的Neutrokine-α結(jié)合肽。術(shù)語(yǔ)“載體”指的是能夠阻止Neutrokine-α結(jié)合肽·的降解和/或延長(zhǎng)半衰期、降低毒性、減少免疫原性、或增加生物學(xué)活性的分子。示例載體包括Fe區(qū)及其變體(“肽抗體”是優(yōu)選的)；線性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)，包括5kD、20kD、和30kDPEG、聚賴氨酸、葡聚糖等)；支鏈聚合物(見(jiàn)例如1981年9月15日提交的Denkenwalter 等的美國(guó)專利 4，289，872 ；1993 年 7 月 20 日提交的 Tam 的 5，229，490 ；1993年10月28日出版的Frechet等的WO 93/21259);脂質(zhì)；膽固醇基團(tuán)(例如類固醇)；碳水化合物或寡糖(例如葡聚糖)；任何與補(bǔ)救受體結(jié)合的天然的或合成的蛋白、多肽或肽；白蛋白，包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969 ;歐洲專利0413622 ;和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))；亮氨酸拉鏈區(qū)；和其他這樣的蛋白和蛋白片段?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽要求存在至少一個(gè)經(jīng)其中一個(gè)氨基酸殘基的N末端、C末端或側(cè)鏈與肽相連的載體。也可以使用多個(gè)載體，例如每個(gè)末端為Fe或一個(gè)末端為Fe,另一個(gè)末端或側(cè)鏈為PEG基團(tuán)。對(duì)于Neutrokine-a結(jié)合肽而言，F(xiàn)e區(qū)是優(yōu)選的載體。Fe區(qū)可以與肽的N或C末端融合或者融合于肽的兩個(gè)N和C末端。與N末端的融合是優(yōu)選的。如上所述，F(xiàn)e變體是可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽的合適載體。天然的Fe可以被廣泛地修飾，以便形成Fe變體，條件是保持了與補(bǔ)救受體的結(jié)合能力；見(jiàn)例如WO 97/34631和WO 96/32478。在這些Fe變體中，可以去除天然Fe中提供了可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽所不需要的結(jié)構(gòu)性能或功能活性的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)。例如通過(guò)取代或缺失殘基、向位點(diǎn)中插入殘基、或截?cái)嗪鑫稽c(diǎn)的部分都可以去除這些位點(diǎn)。所插入的或取代的殘基也可以是改變了的氨基酸例如肽模擬物或D-氨基酸。基于多種原因都需要Fe變體，下面描述了一些原因。示例Fe變體包括分子和序列，其中I.去除了涉及二硫鍵形成的位點(diǎn)。這種去除可以避免與用于生成本發(fā)明分子的宿主細(xì)胞上所具有的其他含半胱氨酸蛋白的反應(yīng)。為此，可以截?cái)郚末端的含半胱氨酸片段或者可以缺失半胱氨酸殘基或者用其他氨基酸(例如丙氨酸、絲氨酸)取代半胱氨酸。甚至當(dāng)去除了半胱氨酸殘基時(shí)，單鏈Fe區(qū)仍能形成非共價(jià)結(jié)合在一起的二聚體的Fe區(qū)。2.修飾天然Fe，使得其與所選的宿主細(xì)胞更為兼容。例如，可以去除鄰近經(jīng)典的天然Fe的N末端的PA序列，所述序列可以被大腸桿菌中的消化酶例如脯氨酸亞胺基肽酶所識(shí)別。也可以添加N末端的甲硫氨酸殘基，特別是當(dāng)在細(xì)菌細(xì)胞例如大腸桿菌中重組表達(dá)所述分子時(shí)。3.去除天然Fe的N末端的一部分，以避免當(dāng)在所選的宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)的N末端的異質(zhì)性。為此，可以缺失N末端的頭20個(gè)氨基酸中的任何殘基。4.去除一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)。通常被糖基化的殘基(例如天冬酰胺)可以賦予細(xì)胞裂解效應(yīng)。可以缺失或用非糖基化的殘基(例如丙氨酸)取代這些殘基。5.去除涉及與補(bǔ)體相互作用的位點(diǎn)例如Clq結(jié)合位點(diǎn)。例如，可以缺失或取代人IgGl的EKK序列。補(bǔ)體募集對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的分子可能是不利的，因此用這種Fe變體可以避免這一點(diǎn)?！?.去除影響與Fe受體而不是補(bǔ)救受體的結(jié)合的位點(diǎn)。天然Fe可以具有與某些白細(xì)胞相互作用的位點(diǎn)，這些對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽融合分子是不需要的，因此可以將其去除。7.去除ADCC位點(diǎn)。ADCC位點(diǎn)在本領(lǐng)域是已知的，見(jiàn)例如Molec.Immunol. 29(5) :633-9(1992)闡述了 IgGl的ADCC位點(diǎn)。這些對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的融合分子是不需要的，因此可以將其去除。8.當(dāng)天然Fe衍生于非人抗體時(shí)，天然Fe可以被人源化。通常為了人源化天然Fe，可以用正常見(jiàn)于人天然Fe中的殘基取代所選的非人的天然Fe中的殘基。用于抗體人源化的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽的另一種載體是能夠結(jié)合補(bǔ)救抗體的蛋白、多肽、肽、抗體、抗體片段、或小分子(例如肽模擬化合物)。例如，可以使用在美國(guó)專利5，739，277中所述的肽作為載體。也可以用噬菌體展示或用于結(jié)合補(bǔ)救受體的RNA-肽篩選來(lái)選出肽。這些補(bǔ)救受體結(jié)合化合物也包含在“載體”的含義內(nèi)，并且可以用于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽中。應(yīng)當(dāng)根據(jù)延長(zhǎng)半衰期(例如通過(guò)避免蛋白酶所識(shí)別的序列)和降低免疫原性(例如通過(guò)優(yōu)先非免疫原性序列，如在抗體人源化中所見(jiàn)的那樣)來(lái)選擇這些載體。如上所述，聚合物載體也可以用于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽。目前可得到各種用于連接可作為載體的化學(xué)部分的方法，見(jiàn)例如專利合作條約("PCT")國(guó)際出版物WO 96/11953，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。該P(yáng)CT申請(qǐng)闡述了水溶性聚合物與蛋白N末端的選擇性相連。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，優(yōu)選的聚合物載體是聚乙二醇(PEG)。PEG基團(tuán)可以是任何便利的分子量，可以是線性的或支鏈的。PEG的平均分子量范圍優(yōu)選的是從約2千道爾頓(“kD”)到約IOOkD,更優(yōu)選的從約5kD到約10kD，最優(yōu)選的是從約5kD到約10kD。對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine- α結(jié)合肽，PEG基團(tuán)一般都通過(guò)PEG基序上的反應(yīng)基團(tuán)的?；饔没蜻€原烷基化作用連接到發(fā)明化合物的反應(yīng)基團(tuán)(例如醛基、氨基、或酯基)上。用于合成肽的PEG化的有用的策略包括通過(guò)在溶液中形成綴合物連接來(lái)組合肽和PEG基序，每個(gè)組分都具有彼此相互反應(yīng)的特殊功能性。用傳統(tǒng)的固相合成法可以容易地制備出肽。用合適的功能基團(tuán)在特殊的位點(diǎn)上“預(yù)活化”肽。在與PEG基序反應(yīng)之前，純化并完全表征出前體。通常在液相中發(fā)生肽與PEG的連接，用反向分析HPLC可以容易地監(jiān)視這個(gè)過(guò)程。用制備級(jí)的HPLC可以容易地純化出PEG化的肽，用分析級(jí)HPLC、氨基酸分析和激光吸減質(zhì)譜法表征出所述PEG化的肽。多糖聚合物是另一類型的可以用于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽中的水溶性聚合物。葡聚糖是由主要經(jīng)a 1-6連鍵連接在一起的單個(gè)葡萄糖亞基組成的多糖聚合物。葡聚糖本身可以由多種分子量范圍，容易得到的分子量范圍是從約IkD到約70kD。葡聚糖是合適的水溶性聚合物，其本身或者聯(lián)合另一種載體(例如Fe)可以作為可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine- α結(jié)合肽的載體。見(jiàn)例如WO 96/11953和W096/05309。已經(jīng)報(bào)道了葡聚糖與治療性或診斷性免疫球蛋白綴合的用途；見(jiàn)例如European Patent出版物0315456，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。當(dāng)葡聚糖作為本發(fā)明的載體時(shí)，約IkD到約20kD的葡聚糖是優(yōu)選的。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽任選·地包括“連接物”。當(dāng)存在連接物時(shí)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)并不重要，因?yàn)樗饕鳛橐粋€(gè)間隔物。連接物優(yōu)選地是由經(jīng)肽鍵連接在一起的氨基酸組成的。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，連接物是由經(jīng)肽鍵連接在一起的I到30個(gè)氨基酸組成的，其中所述氨基酸選自20個(gè)天然存在的氨基酸。這些氨基酸中的一些氨基酸可以被糖基化，本領(lǐng)域人員非常了解這一點(diǎn)。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，I到20個(gè)氨基酸是選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和賴氨酸。甚至更優(yōu)選地，連接物是由大部分空間上未受阻礙的氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸組成的。因此，優(yōu)選的連接物是聚甘氨酸(特別是(Gly)4、(Gly)5)、聚(Gly-Ala)、和聚丙氨酸。優(yōu)選的連接物是包括超過(guò)5個(gè)氨基酸的氨基酸連接物，合適的連接物可以具有最多500個(gè)選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸中的氨基酸。約20到50個(gè)氨基酸的連接物是最優(yōu)選的。非肽的連接物也可以用于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽。例如，可以使用烷基連接物例如一NH--(CH2)n--C(O)--,其中η為2到20?？梢杂萌魏畏强臻g阻礙基團(tuán)例如更低的烷基(例如C1--C6)、更低的烴基、鹵素(例如Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代這些烷基連接物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:23、氨基酸序列SEQ ID NO:24或氨基酸序列SEQ ID N0:25。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽是氨基酸序列SEQ IDNO: 23 (AMG 623 ；AGP3 肽抗體)。Neutrokine- α 受體在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是Neutrokine-α受體蛋白或其片段或變體。Neutrokine-a受體包括例如跨膜活化劑和CAML相互作用劑(TACI，GenBank 編號(hào) AAC51790，SEQ ID NO: 6)、B 細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R，GenBank 編號(hào)NP_443177，SEQ ID NO: 10)、B細(xì)胞成熟抗原(BCMA，GenBank編號(hào) ΝΡ_001183，SEQ ID NO: 8) 例如在 PCT 出版物 TO03/014294、TO02/066516、TO02/024909、TO03/014294、W003/02499UW002/094852 和 W004/011611 以及美國(guó)專利出版物 US20030148445、U S20030099990、US2005070689、US2005043516 和 US2003012783 已經(jīng)描述了 Neutrokine-α 受體蛋白、其片段和變體、以及抗體。下面將對(duì)此有更為詳細(xì)的描述。在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。D. Neutrokine- α 受體，TACITACI多肽，例如下面所述的那些多肽，可作為Neutrokine-a和/或APRIL拮抗齊U，也可以用于本發(fā)明方法。TACI也稱作TR17，是一種293個(gè)氨基酸殘基的蛋白(SEQ IDNO: 6)，其推測(cè)分子量約為31. 8kDa。編碼TACI的cDNA核苷酸序列是SEQ ID NO: 5。推定的從約I到約165位氨基酸組成了細(xì)胞外區(qū)(SEQ ID NO: 6)、從約166到約186位氨基酸組成了跨膜區(qū)(SEQ ID NO:6);以及從約187到約293位氨基酸組成了細(xì)胞內(nèi)區(qū)(SEQID N0:6)。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI蛋白是包括或是由氨基酸序列SEQ ID N0:6組成的分離的多肽，或者是包括或是由一部分SEQ ID N0:6組成的多肽例如TACI細(xì)胞外區(qū)(包括SEQ ID NO:6的第I到165位氨基酸)和/或TACI富半胱氨酸區(qū)(包括SEQ ID NO: 6的第33到104位氨基酸)；以及與上面所述的多肽至少80%相同·的、更優(yōu)選的至少90%或95%相同的、仍更優(yōu)選的至少96%、97%、98%、99%或100%相同的多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI蛋白是包括SEQ ID N0:6的第I到154位氨基酸的分離的多肽以及與上面所述的多肽至少80%相同的、更優(yōu)選的至少90%或95%相同的、仍更優(yōu)選的至少96%、97%、98%、99%或100%相同的多肽。具有與TACI多肽的參照氨基酸序列至少例如95% “相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列與參照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100個(gè)TACI受體的參照氨基酸序列的氨基酸中最多5個(gè)氨基酸改變。換句話說(shuō)，為了得到具有與參照氨基酸序列至少95%相同的多肽，可以缺失或用另一種氨基酸取代參照序列中最多5%的氨基酸殘基，或者最多達(dá)參照序列的總氨基酸殘基數(shù)目5%的氨基酸殘基可以被插入到參照序列內(nèi)。參照序列的這些改變可以發(fā)生于參照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者發(fā)生在這些末端位置之間的任一位置，可以散在發(fā)生于參照序列中的單個(gè)殘基上或者發(fā)生于參照序列內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)連續(xù)殘基上。TACI的多肽片段包括包含或由SEQ ID NO:6所含的氨基酸序列組成的多肽。多肽片段可以是“獨(dú)立式的”或者包含在更大的多肽內(nèi)，所述片段形成了更大多肽的一部分或區(qū)域，最優(yōu)選的是作為單一的連續(xù)區(qū)域。在另外的實(shí)施方式中，多肽片段包括一個(gè)或多個(gè)TACI區(qū)或者是由其組成。優(yōu)選的多肽片段包括選自組中的成員(a)包括或由TACI細(xì)胞外區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:6的第I到約165位氨基酸殘基)組成的多肽；(b)包括或由TACI富半胱氨酸區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:6的第33到第104位氨基酸殘基)組成的多肽；(c)包括或由TACI跨膜區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO: 6的第166到第186位氨基酸殘基)組成的多肽；⑷包括或由TACI細(xì)胞內(nèi)區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:6的第187到第293位氨基酸殘基)組成的多肽；或(e) (a)-(d)中的多肽的任一組合。相信TACI的細(xì)胞外的富半胱氨酸基序?qū)τ赥ACI及其配體(Neutrokine-α和APRIL)之間的相互作用是重要的。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI多肽片段包括SEQ ID NO:6的第33到66位和/或第70到104位氨基酸殘基或者是由它們組成。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI多肽片段包括一個(gè)或兩個(gè)細(xì)胞外的富半胱氨酸基序(SEQ ID NO:6的第33到66位和第70到104位氨基酸殘基)或者是由其組成。包括與一個(gè)或兩個(gè)這些富半胱氨酸基序的多肽序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多肽序列或者是由所述多肽序列組成的蛋白也是優(yōu)選的?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的TACI蛋白的其他片段是經(jīng)TACI的結(jié)構(gòu)或功能屬性所表征的片段。這些片段包括包含完整(全長(zhǎng))TACI(SEQ IDNO:6)的α螺旋或α螺旋形成區(qū)(“α區(qū)”)、β折疊和β折疊形成區(qū)(“β區(qū)”)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)形成區(qū)(“轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)”)、卷曲和卷曲形成區(qū)(“卷曲區(qū)”)、親水區(qū)、疏水區(qū)、α兩親區(qū)、β兩親區(qū)、表面形成區(qū)和高抗原性指數(shù)區(qū)(即含有四個(gè)或更多個(gè)具有抗原指數(shù)大于或等于I. 5的連續(xù)氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默認(rèn)參數(shù)所鑒定到的)的氨基酸殘基，如在美國(guó)專利6，969，519中所討論的那樣。如利用這些計(jì)算機(jī)程序的默認(rèn)參數(shù)所推定的，某些優(yōu)選的區(qū)域包括但不限于Garnier-Robson推定的α區(qū)、β區(qū)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)、和卷曲區(qū)；Chou-Fasman推定的α區(qū)、β區(qū)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)；Kyte_Doolittle推定的親水區(qū)；Hopp_Woods推定的疏水區(qū)；Eisenberga和β兩親區(qū)；Emini表面形成區(qū)；以及Jameson-Wolf高抗原性指數(shù)區(qū)?？梢员磉_(dá)修飾形式的可以用于本發(fā)明方法中的TACI多肽例如融合蛋白(包括經(jīng)·肽鍵與異源蛋白序列(不同蛋白的序列)連接的多肽)，不僅可以包括分泌信號(hào)，還可以包括額外的異源功能區(qū)?；蛘呖梢酝ㄟ^(guò)合成技術(shù)例如通過(guò)使用肽合成儀制備出這種融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入額外的氨基酸區(qū)，特別是帶電荷的氨基酸，以提高在宿主細(xì)胞中、純化期間或隨后的處理和儲(chǔ)存期間的的穩(wěn)定性和持久性。也可以將肽基序加入到多肽中，以便促進(jìn)純化。可以在最終制備出多肽之前去除這些區(qū)域。向多肽中添加肽基序以便引起分泌或排出、提高穩(wěn)定性和促進(jìn)純化等都是本領(lǐng)域熟知的和常規(guī)的技術(shù)。優(yōu)選的可以用于本發(fā)明方法中的TACI融合蛋白包括來(lái)自免疫球蛋白的異源區(qū)，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464533(對(duì)應(yīng)于加拿大2045869)和W000/024782、PCT出版物 WOO1/60397、TOO1/81417、TOO1/087977、和 TO02/94852 ;美國(guó)出版物 US2003103986和 US2006034852 以及 Gross, et al.，(2000)Nature 404:995-999 和 Yu, et al.，(2000)Nat Immunol 1:252-256都闡述了包括免疫球蛋白分子的恒定區(qū)的各個(gè)部分以及另一種人蛋白或其部分的融合蛋白，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。在很多情況中，融合蛋白中的Fe部分非常適用于治療和診斷，并因此造成了改善的藥物動(dòng)力學(xué)性能(EP-A0232262)。另一方面，對(duì)于某些應(yīng)用而言，需要在以在此所述的有利的方式表達(dá)、檢測(cè)并純化出融合蛋白之后能夠缺失Fe部分。當(dāng)Fe部分被證實(shí)其對(duì)用于治療和診斷是妨礙時(shí)就是這種情況，例如當(dāng)融合蛋白被用作免疫接種的抗原時(shí)。在藥物研發(fā)中，例如人類蛋白如hIL-5已經(jīng)與Fe部分融合，以便用高通量篩選檢測(cè)法鑒定出hIL-5的拮抗劑。見(jiàn)D.Bennett et al. , J. Molecular Recognition8:52-58(1995)和 K. Johanson et al. , J.Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI-Fc 融合蛋白是 Atacicept (TACI-Ig)。本領(lǐng)域人員知道并如上面討論的那樣，TACI多肽可以與其他多肽序列融合。例如，可以用于本發(fā)明方法中的TACI多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP394, 827、Traunecker etal.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物TO 96/22024和W099/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一個(gè)TACI多肽的片段或變體以及至少一個(gè)人血清白蛋白的片段或變體，其彼此連接在一起，優(yōu)選地通過(guò)遺傳融合(即通過(guò)翻譯核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，編碼TACI的全部或一部分的多核苷酸與編碼白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架連接)，或者化學(xué)綴合彼此連接在一起?！ひ坏┳鳛榘椎鞍兹诤系鞍椎囊徊糠?，TACI多肽和白蛋白蛋白可以被稱作白蛋白融合蛋白的“部分”、“區(qū)域”或“基序”(例如“TACI部分”或“白蛋白部分”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的變體和血清白蛋白或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白組分是血清白蛋白的成熟部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的TACI部分是全長(zhǎng)TACI多肽。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的TACI蛋白部分是TACI多肽的成熟的、可溶性的區(qū)域。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由TACI多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分組成的白蛋白融合蛋白。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括TACI多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由TACI多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))組成的白蛋白融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，TACI多肽(包括其片段或變體)與成熟形式的人血清白蛋白(即如歐洲專利0322094的圖I和2所示的人血清白蛋白的第I到585位氨基酸)融合，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到X位殘基組成的多肽片段融合，其中X是從I到585的整數(shù)，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，TACI多肽(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到z位氨基酸組成的多肽片段融合，其中z是從369到419的整數(shù)，如美國(guó)專利5，766，883所述，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。TACI多肽(包括其片段或變體)可以與異源蛋白(例如免疫球蛋白Fe多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一組或兩組下面的參照SEQ ID NO: 11的點(diǎn)突變組Leu-407突變?yōu)锳la、Leu-408突變?yōu)閂al、Val-409突變?yōu)锳la、和Arg-410突變?yōu)锳la ;或Arg-410突變?yōu)锳、Lys-413突變?yōu)镚in、和Lys-414突變?yōu)镚ln (見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)W095/23857，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在甚至更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，含有一組或兩組上面所述的點(diǎn)突變組的可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白已經(jīng)提高了對(duì)酵母Yap3p蛋白裂解性降解的穩(wěn)定性/耐受性，容許增加在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組白蛋白融合蛋白的產(chǎn)量。
·
優(yōu)選地，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括作為N末端部分的HA和作為C末端部分的TACI多肽?；蛘?，也可以使用包括作為其C末端部分的HA和作為其N末端部分的TACI多肽的白蛋白融合蛋白。 在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白具有與白蛋白的N末端和C末端融合的TACI多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的TACI多肽是相同的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的TACI多肽是不同的TACI多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，TACI多肽被融合于白蛋白的N或C末端，異源多肽被融合于剩余末端。另外，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之間的連接物肽，以提供所述部分之間的更大的物理分隔。連接物肽可以由氨基酸組成，使得其是柔性的或更具剛性。一般而言，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一個(gè)HA衍生區(qū)和一個(gè)TACI區(qū)。但是，每個(gè)蛋白中的多個(gè)區(qū)域都可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。同樣，一種以上的蛋白可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在這種構(gòu)型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。雙官能的白蛋白融合蛋白的結(jié)構(gòu)可以表示為X-HA-Y或Y-HA-X。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI蛋白或其片段或變體可以與細(xì)胞毒素(例如細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑)綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒藥物可以包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥物。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、吐根素、絲裂霉素、足葉乙甙、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、I-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛爾、和嘌呤霉素以及其類似物或同系物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI蛋白或其片段或變體可以與毒素綴合?！岸舅亍北硎疽环N或多種可以結(jié)合并激活內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的化合物、放射性同位素、全毒素、修飾毒素、毒素的催化亞基、或在給定的引起細(xì)胞死亡的條件下不會(huì)正常地表達(dá)于細(xì)胞表面內(nèi)或表面上的任何分子或酶?？梢允褂玫亩舅匕ǖ幌抻诒绢I(lǐng)域已知的放射性同位素、化合物例如結(jié)合內(nèi)在的或誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的抗體(或其含補(bǔ)體固定化的部分)、胸苷激酶、核酸內(nèi)切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假單胞菌外毒素Α、白喉毒素、皂草素、木鱉子甙、白樹(shù)毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α -帚曲霉素、和霍亂毒素?！岸舅亍币舶?xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療藥物或放射性金屬離子例如α粒子發(fā)射離子，例如213Bi、或其他放射性同位素如1(l3Pd、133Xe、131I、68Ge、57C0、65Zn、85Sr、32P、35S、9°Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、9° 釔、117 錫、186 錸、166 欽、和 188 錸?？梢圆捎眠z傳工程化來(lái)改進(jìn)或改變可以用于本發(fā)明方法中的TACI多肽的特征，以生成可以用于本發(fā)明方法中的多肽?？梢杂帽绢I(lǐng)域人員已知的重組DNA技術(shù)生成新的突變蛋白或“突變型蛋白”包括單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。這些修飾多肽可以表現(xiàn)出例如增強(qiáng)活性、或增加穩(wěn)定性。另外，至少在特定的純化和儲(chǔ)存條件下，它們可以比相應(yīng)的天然多肽按更高的產(chǎn)量被純化，并表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性?？梢员挥糜诒景l(fā)明方法中的TACI多肽可以是單體或多聚體(即二聚體、三聚體、四聚體、和更高聚體)。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多肽是單體、二聚體、三聚體·或四聚體。在另外的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多聚體至少是二聚體、三聚體或四聚體。相信某些TNF家族蛋白成員是以三聚體的形式存在的(Beutler and Huffel, Science264:667, 1994;Banner et al.，Cell73:431，1993)。因此，三聚體的 TACI 可以提供增強(qiáng)生物學(xué)活性的優(yōu)勢(shì)。在具體的實(shí)施方式中，多聚體可以是同聚體或異聚體。術(shù)語(yǔ)“同聚體”在此指的是只含有TACI多肽(包括TACI片段、變體、和在此所述的融合蛋白)的多聚體。這些同聚體可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的TACI多肽。在具體的實(shí)施方式中，同聚體是只含有具有相同的多肽序列的TACI蛋白的多聚體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，同聚體是含有具有不同多肽序列的TACI蛋白的多聚體。術(shù)語(yǔ)“異聚體”在此指的是除了 TACI多肽外還含有異源性多肽(即只含有非對(duì)應(yīng)于TACI基因所編碼的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚體?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的多聚體可以是疏水連接、親水連接、離子連接和/或共價(jià)連接相連的結(jié)果，和/或可以是間接相連的，例如通過(guò)脂質(zhì)體形成。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)?shù)鞍自谌芤褐斜舜私佑|時(shí)，就形成了同多聚體例如同二聚體、同三聚體、異四聚體或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，通過(guò)與TACI蛋白的共價(jià)連接或者TACI蛋白之間的共價(jià)連接形成多聚體。這些共價(jià)連接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。在一種情況中，共價(jià)連接是位于蛋白的多肽序列內(nèi)的半胱氨酸殘基之間的交聯(lián)，所述半胱氨酸殘基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一種情況中，共價(jià)連接是化學(xué)或重組處理后的結(jié)果?；蛘?，這種共價(jià)連接可以涉及一個(gè)或多個(gè)在TACI融合蛋白的異源性多肽序列中所含的氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)例中，共價(jià)連接是融合蛋白所含的異源性序列之間的共價(jià)連接(見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)5，478，925，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))。在一個(gè)具體的實(shí)例中，共價(jià)連接是TACI-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的異源性序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的融合蛋白的共價(jià)連接是來(lái)自另一個(gè)能夠形成共價(jià)連接的多聚體的TNF家族配體/受體成員例如護(hù)骨蛋白(見(jiàn)例如國(guó)際出版物WO98/49305，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))的異源性多肽序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，兩個(gè)或多個(gè)TACI多肽經(jīng)合成的連接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚體連接物)連接在一起。實(shí)例包括在美國(guó)專利5，073，627中所述的那些肽連接物(在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng))。利用傳統(tǒng)的重組DNA技術(shù)可以生成包括多個(gè)經(jīng)肽連接物分離的TACI多肽的蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，結(jié)合TACI多肽、多肽片段、或SEQ IDN0:6的變體、和/或TACI多肽表位(通過(guò)用于檢測(cè)特異的抗體-抗原結(jié)合的本領(lǐng)域熟知的免疫檢測(cè)法確定的表位)的抗體可以用于本發(fā)明方法中。例如在PCT出版物W004/011611、W001/087977、W001/60397、和 W002/66516 ;美國(guó)專利出版物 US2005043516 和 US2003012783 ;和 Ch’en, etal., (2005)Cell Immunol 236:78-85和Liu, et al., (2003)XiBao Yu Fen Zi Mian Yi XueZa Zhi 19:168-169中已經(jīng)能夠描述了抗TACI抗體及其片段。在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。抗體包括但不限于單克隆的、多特異性的、人的、人源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(aY )片段、Fab表達(dá)文庫(kù)生成的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括例如抗TACI抗體的抗Id抗體)、以及上述所有抗體的表位結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原·結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可以是任何類型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何組(IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞組的免疫球蛋白。在具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgGl。在其他具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的結(jié)合TACI的抗體片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)和包括VL或VH區(qū)的片段。包括單鏈抗體的結(jié)合TACI的抗體片段可以包括單獨(dú)的可變區(qū)或者與下面的全部或一部分組合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CHU CH2和CH3區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的TACI結(jié)合片段包括可變區(qū)和鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)的任一組合?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以來(lái)自任何動(dòng)物來(lái)源的抗體，包括鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物類。優(yōu)選地，抗體是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驢、shiprabbit、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞來(lái)源的。“人”抗體在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體以及包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從轉(zhuǎn)基因了一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白且不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中分離到的抗體，如在Kucherlapati等的美國(guó)專利5，939，598所述的那樣，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。可以用于本發(fā)明方法中的抗TACI抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的或更高的多特異性的。多特異性抗體可以特異于TACI多肽的不同表位或者可以特異于TACI多肽以及異源表位例如異源多肽或固體支持材料。見(jiàn)例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、W091/00360、WO 92/05793、Tutt, et al. , J. Immunol. 147:60-69(1991)；美國(guó)專利 4，474，893,4, 714，681,4, 925，648,5, 573，920,5, 601，819、Kostelny et al.，J. Immunol. 148:1547-1553(1992);在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。可根據(jù)其交叉反應(yīng)性來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的TACI抗體。不會(huì)結(jié)合TACI多肽的任何其他類似物、同源物、或同系物的抗體可以用于本發(fā)明的方法。在具體的實(shí)施方式中，TACI抗體與人TACI蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相應(yīng)表位交叉反應(yīng)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗TACI抗體不僅結(jié)合TACI，也結(jié)合 BCMA 和 BAFF-R。也可根據(jù)其與TACI多肽的結(jié)合親和力來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的抗體。優(yōu)選的結(jié)合親和力包括解離常數(shù)或Kd小于或等于5x 10_9M、10_9M、5x 10^10MU0^10M,5x10_11MU0_11M,5x 1(T12M、或 1(T12M?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的TACI抗體可以是TACI多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑。例如包括部分或完全地阻斷與TACI多肽的受體/配體相互作用的TACI抗體。也包括不會(huì)阻止配體結(jié)合但會(huì)阻止受體活化的受體特異性抗體。用在此所述的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以確定受體活化(即信號(hào)傳導(dǎo))。例如，通過(guò)用本領(lǐng)域已知的技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT、AP-1、和/或NF- K B的活化和/或通過(guò)免疫沉淀以及隨后的western印跡分析檢測(cè)受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)可以確定受體活化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，阻止配體結(jié)合和受體活化的受體特異性TACI抗體和識(shí)別受體-配體復(fù)合物以及優(yōu)選地不會(huì)特異地識(shí)別未結(jié)合的受體或未結(jié)合的配體的TACI抗體都可以用于本發(fā)明方法。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以制備出上述TACI·抗體。見(jiàn)例如 PCT 出版物 TO 96/40281 ;美國(guó)專利 5，811，097 ；Deng et al.，Blood92 (6):1981-1988 (1998) ；Chen et al., Cancer Res.58 (16):3668-3678 (1998)；Harrop et al. , J. ImmunoI. 161 (4) :1786-1794(1998) ；Zhu et al., CancerRes. 58(15) :3209-3214(1998) ；Yoon et al.，J. Immunol. 160 (7) : 3170-3179 (1998)；Prat et al. , J. Cell. Sci. Ill (Pt2) :237-247 (1998) ；Pitard et al.，J. Immunol.Methods 205 (2):177-190 (1997) ；Liautard etal., Cytokine 9(4):233-241 (1997)；Carlson et al. , J. Biol. Chem. 272(17) :11295-11301(1997) ；Taryman et al. , Neuron14(4):755-762(1995) ；Muller et al., Structure 6 (9) : 1153-1167(1998) ；Bartunek etal.，Cytokine8 (I) : 14-20 (1996)(在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。E. Neutrokine- α 受體，BCMABCMA多肽，例如下面所述的那些BCMA多肽，可以作為Neutrokine-α和/或APRIL的拮抗劑，并且也可以用于本發(fā)明方法。BCMA也稱作TR18，是184個(gè)氨基酸殘基的蛋白(SEQID NO:8)，推斷分子量約為20. IkDa0編碼BCMA的cDNA核苷酸序列為SEQ ID N0:7。推定的從約I到約45位氨基酸構(gòu)成了細(xì)胞外區(qū)(SEQ ID NO:8);從約55到約80位氨基酸構(gòu)成了跨膜區(qū)(SEQ ID NO:8);以及從約81到約184位氨基酸構(gòu)成了細(xì)胞內(nèi)區(qū)(SEQ ID N0:8)。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BCMA蛋白是包括或是由氨基酸序列SEQ ID N0:8組成的分離的多肽，或者是包括或是由一部分SEQ ID N0:8組成的多肽例如BCMA細(xì)胞外區(qū)(包括SEQ ID NO:8的第I到54位氨基酸)和/或BCMA富半胱氨酸區(qū)(包括SEQ ID NO:8的第8到41位氨基酸)；以及與上面所述的多肽至少80%相同的、更優(yōu)選的至少90%或95%相同的、仍更優(yōu)選的至少96%、97%、98%、99%或100%相同的多肽。具有與BCMA多肽的參照氨基酸序列至少例如95% “相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列與參照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100個(gè)BCMA受體的參照氨基酸序列的氨基酸中最多5個(gè)氨基酸改變。換句話說(shuō)，為了得到具有與參照氨基酸序列至少95%相同的多肽，可以缺失或用另一種氨基酸取代參照序列中最多5%的氨基酸殘基，或者最多達(dá)參照序列的總氨基酸殘基數(shù)目5%的氨基酸殘基可以被插入到參照序列內(nèi)。參照序列的這些改變可以發(fā)生于參照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者發(fā)生在這些末端位置之間的任一位置，可以散在發(fā)生于參照序列中的單個(gè)殘基上或者發(fā)生于參照序列內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)連續(xù)殘基上。BCMA的多肽片段包括包含或由SEQ ID NO: 8所含的氨基酸序列組成的多肽。多肽片段可以是“獨(dú)立式的”或者包含在更大的多肽內(nèi)，所述片段形成了更大多肽的一部分或區(qū)域，最優(yōu)選的是作為單一的連續(xù)區(qū)域。在另外的實(shí)施方式中，多肽片段包括一個(gè)或多個(gè)BCMA區(qū)或者是由其組成。優(yōu)選的多肽片段包括選自組中的成員(a)包括或由BCMA細(xì)胞外區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:8的第I到約54位氨基酸殘基)組成的多肽；(b)包括或由BCMA富半胱氨酸區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:8的第8到第41位氨基酸殘基)組成的多肽；(c)包括或由BCMA跨膜區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:8的第55到第80位氨基酸殘基)組成的多肽；⑷包括或由BCMA細(xì)胞內(nèi)區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO:8的第81到第184位氨基酸殘基)組成的多肽；或(e) (a)-(d)中的多肽的任一組合。相信BCMA的細(xì)胞外的富半胱氨酸基序?qū)τ贐CMA及其配體(Neutrokine-α和APRIL)之間的相互作用是重要的。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的·BCMA多肽片段包括SEQ ID NO:8的第8到41位氨基酸殘基或者是由其組成。包括與所述富半胱氨酸基序的多肽序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多肽序列或由所述多肽序列組成的蛋白也是優(yōu)選的。可以用于本發(fā)明方法中的BCMA蛋白的其他片段是經(jīng)BCMA的結(jié)構(gòu)或功能屬性所表征的片段。這些片段包括包含完整(全長(zhǎng))BCMA (SEQ IDNO: 8)的α螺旋或α螺旋形成區(qū)(“α區(qū)”)、β折疊和β折疊形成區(qū)(“β區(qū)”)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)形成區(qū)(“轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)”)、卷曲和卷曲形成區(qū)(“卷曲區(qū)”)、親水區(qū)、疏水區(qū)、α兩親區(qū)、β兩親區(qū)、表面形成區(qū)和高抗原性指數(shù)區(qū)(即含有四個(gè)或更多個(gè)具有抗原指數(shù)大于或等于I. 5的連續(xù)氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默認(rèn)參數(shù)所鑒定到的)的氨基酸殘基，如在美國(guó)專利6，969，519中所討論的那樣。如利用這些計(jì)算機(jī)程序的默認(rèn)參數(shù)所推定的，某些優(yōu)選的區(qū)域包括但不限于Garnier-Robson推定的α區(qū)、β區(qū)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)、和卷曲區(qū)；Chou-Fasman推定的α區(qū)、β區(qū)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)；Kyte_Doolittle推定的親水區(qū)；Hopp_Woods推定的疏水區(qū)；Eisenberga和β兩親區(qū)；Emini表面形成區(qū)；以及Jameson-Wolf高抗原性指數(shù)區(qū)?？梢员磉_(dá)修飾形式的可以用于本發(fā)明方法中的BCMA多肽例如融合蛋白(包括經(jīng)肽鍵與異源蛋白序列(不同蛋白的序列)連接的多肽)，不僅可以包括分泌信號(hào)，還可以包括額外的異源功能區(qū)?；蛘呖梢酝ㄟ^(guò)合成技術(shù)例如通過(guò)使用肽合成儀制備出這種融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入額外的氨基酸區(qū)，特別是帶電荷的氨基酸，以提高在宿主細(xì)胞中、純化期間或隨后的處理和儲(chǔ)存期間的的穩(wěn)定性和持久性。也可以將肽基序加入到多肽中，以便促進(jìn)純化?？梢栽谧罱K制備出多肽之前去除這些區(qū)域。向多肽中添加肽基序以便引起分泌或排出、提高穩(wěn)定性和促進(jìn)純化等都是本領(lǐng)域熟知的和常規(guī)的技術(shù)。優(yōu)選的可以用于本發(fā)明方法中的BCMA融合蛋白包括來(lái)自免疫球蛋白的異源區(qū)，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464533 (對(duì)應(yīng)于加拿大2045869)和W000/024782闡述了包括免疫球蛋白分子的恒定區(qū)的各個(gè)部分以及另一種人蛋白或其部分的融合蛋白。例如 PCT 出版物 TOO1/087977、W001/60397、和 TOO1/24811 以及 Gross, et al. , (2000) Nature404:995-999 !Thompson, et al. , (2000) J Exp Med 192:129-135 ;和 Yu, et al., (2000) NatImmunol 1:252-256都已經(jīng)描述了 BCMA免疫球蛋白融合蛋白，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。在很多情況中，融合蛋白中的Fe部分非常適用于治療和診斷，并因此造成了改善的藥物動(dòng)力學(xué)性能(EP-A 0232262)。另一方面，對(duì)于某些應(yīng)用而言，需要在以在此所述的有利的方式表達(dá)、檢測(cè)并純化出融合蛋白之后能夠缺失Fe部分。當(dāng)Fe部分被證實(shí)其對(duì)用于治療和診斷是妨礙時(shí)就是這種情況，例如當(dāng)融合蛋白被用作免疫接種的抗原時(shí)。在藥物研發(fā)中，例如人類蛋白如hIL-5已經(jīng)與Fe部分融合，以便用高通量篩選檢測(cè)法鑒定出hIL-5的拮抗劑。JAL D. Bennett et al. , J. Molecular Recognition 8:52-58(1995)和 K. Johansonet al.，J. Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)。本領(lǐng)域人員知道并如上面討論的那樣，BCMA多肽可以與其他多肽序列融合。例如，可以用于本發(fā)明方法中的BCMA多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰·期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP394, 827、Traunecker etal.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物TO 96/22024和W099/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一個(gè)BCMA多肽的片段或變體以及至少一個(gè)人血清白蛋白的片段或變體，其彼此連接在一起，優(yōu)選地通過(guò)遺傳融合(即通過(guò)翻譯核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，編碼BCMA的全部或一部分的多核苷酸與編碼白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架連接)，或者化學(xué)綴合彼此連接在一起。一旦作為白蛋白融合蛋白的一部分，BCMA多肽和白蛋白蛋白可以被稱作白蛋白融合蛋白的“部分”、“區(qū)域”或“基序”(例如“BCMA部分”或“白蛋白部分”)。 在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的變體和血清白蛋白或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白組分是血清白蛋白的成熟部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的BCMA部分是全長(zhǎng)BCMA多肽。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的BCMA蛋白部分是BCMA多肽的成熟的、可溶性的區(qū)域。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由BCMA多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分組成的白蛋白融合蛋白。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BCMA多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由BCMA多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))組成的白蛋白融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，BCMA多肽(包括其片段或變體)與成熟形式的人血清白蛋白(即如歐洲專利0322094的圖I和2所示的人血清白蛋白的第I到585位氨基酸)融合，在此通過(guò)引用·將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到X位殘基組成的多肽片段融合，其中X是從I到585的整數(shù)，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，BCMA多肽(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到z位氨基酸組成的多肽片段融合，其中z是從369到419的整數(shù)，如美國(guó)專利5，766，883所述，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。BCMA多肽(包括其片段或變體)可以與異源蛋白(例如免疫球蛋白Fe多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一組或兩組下面的參照SEQ ID NO: 11的點(diǎn)突變組Leu-407突變?yōu)锳la、Leu-408突變?yōu)閂al、Val-409突變?yōu)锳la、和Arg-410突變?yōu)锳la ;或Arg-410突變?yōu)锳、Lys-413突變?yōu)镚in、和Lys-414突變?yōu)镚ln (見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)W095/23857，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在甚至更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，含有一組或兩組上面所述的點(diǎn)突變組的可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白已經(jīng)提高了對(duì)酵母Yap3p蛋白裂解性降解的穩(wěn)定性/耐受性，容許增加在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組白蛋白融合蛋白的產(chǎn)量。優(yōu)選地，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括作為N末端部分的HA和作為C末端部分的BCMA多肽?；蛘撸部梢允褂冒ㄗ鳛槠銫末端部分的HA和作為其N末端部分的BCMA多肽的白蛋白融合蛋白。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白具有與白蛋白的N末端和C末端融合的BCMA多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的BCMA多肽是相同的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的BCMA多肽是不同的BCMA多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，BCMA多肽被融合于白蛋白的N或C末端，異源多肽被融合于剩余末端。另外，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之間的連接物肽，以提供所述部分之間的更大的物理分隔。連接物肽可以由氨基酸組成，使得其是柔性的或更具剛性。一般而言，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一個(gè)HA衍生區(qū)和一個(gè)BCMA區(qū)。但是，每個(gè)蛋白中的多個(gè)區(qū)域都可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。同樣，一種以上的蛋白可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在這種構(gòu)型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。雙官能的白蛋白融合蛋白的結(jié)構(gòu)可以表示為X-HA-Y或Y-HA-X。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BCMA蛋白或其片段或變體可以與細(xì)胞毒素(例如細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑)綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒藥物可以包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥物。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、吐根素、絲裂霉素、足葉乙甙、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、I-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛爾、和嘌呤霉素以及其類似物或同系物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BCMA蛋白或其片段或變體可以與毒素綴合?！岸舅亍北硎疽环N或多種可以結(jié)合并激活內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的化合物、放射性同位素、全毒素、修飾毒素、毒素的催化亞基、或在給定的引起細(xì)胞死亡的條件下不會(huì)正·常地表達(dá)于細(xì)胞表面內(nèi)或表面上的任何分子或酶?？梢允褂玫亩舅匕ǖ幌抻诒绢I(lǐng)域已知的放射性同位素、化合物例如結(jié)合內(nèi)在的或誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的抗體(或其含補(bǔ)體固定化的部分)、胸苷激酶、核酸內(nèi)切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假單胞菌外毒素Α、白喉毒素、皂草素、木鱉子甙、白樹(shù)毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α -帚曲霉素、和霍亂毒素?！岸舅亍币舶?xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療藥物或放射性金屬離子例如α粒子發(fā)射離子，例如213Bi、或其他放射性同位素如1(l3Pd、133Xe、131I、68Ge、57C0、65Zn、85Sr、32P、35S、9°Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、9° 釔、117 錫、186 錸、166 欽、和 188 錸?？梢圆捎眠z傳工程化來(lái)改進(jìn)或改變可以用于本發(fā)明方法中的BCMA多肽的特征，以生成可以用于本發(fā)明方法中的多肽?？梢杂帽绢I(lǐng)域人員已知的重組DNA技術(shù)生成新的突變蛋白或“突變型蛋白”包括單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。這些修飾多肽可以表現(xiàn)出例如增強(qiáng)活性、或增加穩(wěn)定性。另外，至少在特定的純化和儲(chǔ)存條件下，它們可以比相應(yīng)的天然多肽按更高的產(chǎn)量被純化，并表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性。仍在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，BCMA多肽突變體可以是“顯性負(fù)調(diào)控物”。為此，可以用缺陷型BCMA多肽例如缺少整個(gè)或部分TNF保守區(qū)的突變體消除BCMA的活性。無(wú)功能的BCMA多肽能組裝形成能夠結(jié)合但不能誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的受體(例如多聚體)?？梢员挥糜诒景l(fā)明方法中的BCMA多肽可以是單體或多聚體(即二聚體、三聚體、四聚體、和更高聚體)。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多肽是單體、二聚體、三聚體或四聚體。在另外的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多聚體至少是二聚體、三聚體或四聚體。相信某些TNF家族蛋白成員是以三聚體的形式存在的(Beutler and Huffel, Science264:667, 1994;Banner et al.，Cell73:431，1993)。因此，三聚體的 BCMA 可以提供增強(qiáng)生物學(xué)活性的優(yōu)勢(shì)。在具體的實(shí)施方式中，多聚體可以是同聚體或異聚體。術(shù)語(yǔ)“同聚體”在此指的是只含有BCMA多肽(包括BCMA片段、變體、和在此所述的融合蛋白)的多聚體。這些同聚體可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的BCMA多肽。在具體的實(shí)施方式中，同聚體是只含有具有相同的多肽序列的BCMA蛋白的多聚體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，同聚體是含有具有不同多肽序列的BCMA蛋白的多聚體。術(shù)語(yǔ)“異聚體”在此指的是除了 BCMA多肽外還含有異源性多肽(即只含有非對(duì)應(yīng)于BCMA基因所編碼的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚體?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的多聚體可以是疏水連接、親水連接、離子連接和/或共價(jià)連接相連的結(jié)果，和/或可以是間接相連的，例如通過(guò)脂質(zhì)體形成。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)?shù)鞍自谌芤褐斜舜私佑|時(shí)，就形成了同多聚體例如同二聚體、同三聚體、異四聚體或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，通過(guò)與BCMA蛋白的共價(jià)連接或者BCMA蛋白之間的共價(jià)連接形成多聚體。這些共價(jià)連接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。在一種情況中，共價(jià)連接是位于蛋白的多肽序列內(nèi)的半胱氨酸殘基之間的交聯(lián)，所述半胱氨酸殘基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一種情況中，共價(jià)連接是化學(xué)或重組處理后的結(jié)果?；蛘?，這種共價(jià)連接可以涉及一個(gè)或多個(gè)在BCMA融合蛋白的異源性多肽序列中所含的氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)例中，共價(jià)連接是融合蛋白所含的異源性序列之間的共價(jià)連接(見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)5，478，925，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))。在一個(gè)具體的實(shí)例中，共價(jià)連接是BCMA-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的異源性序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的融合蛋白的共價(jià)連接是來(lái)自另一個(gè)能夠形成共價(jià)連接的多聚體的TNF家族配體/受體成員例如護(hù)骨蛋白(見(jiàn)例如國(guó)際出版物WO·98/49305，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))的異源性多肽序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，兩個(gè)或多個(gè)BCMA多肽經(jīng)合成的連接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚體連接物)連接在一起。實(shí)例包括在美國(guó)專利5，073，627中所述的那些肽連接物(在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng))。利用傳統(tǒng)的重組DNA技術(shù)可以生成包括多個(gè)經(jīng)肽連接物分離的BCMA多肽的蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，結(jié)合BCMA多肽、多肽片段、或SEQ IDN0:8的變體、和/或BCMA多肽表位(通過(guò)用于檢測(cè)特異的抗體-抗原結(jié)合的本領(lǐng)域熟知的免疫檢測(cè)法確定的表位)的抗體可以用于本發(fā)明方法中。例如在PCT出版物W001/087977、W001/60397、和W002/66516 以及 Ch，en，et al. , (2005) Cell Immunol 236:78-85 中已經(jīng)描述了抗 BCMA 抗體及其片段。在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？贵w包括但不限于單克隆的、多特異性的、人的、人源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab')片段、Fab表達(dá)文庫(kù)生成的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括例如抗BCMA抗體的抗Id抗體)、以及上述所有抗體的表位結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可以是任何類型的(例如 IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、任何組(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞組的免疫球蛋白。在具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgGl。在其他具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4。可以用于本發(fā)明方法中的結(jié)合BCMA的抗體片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)和包括VL或VH區(qū)的片段。包括單鏈抗體的結(jié)合BCMA的抗體片段可以包括單獨(dú)的可變區(qū)或者與下面的全部或一部分組合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CHU CH2和CH3區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BCMA結(jié)合片段包括可變區(qū)和鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)的任一組合?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以來(lái)自任何動(dòng)物來(lái)源的抗體，包括鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物類。優(yōu)選地，抗體是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驢、shiprabbit、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞來(lái)源的?！叭恕笨贵w在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體以及包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從轉(zhuǎn)基因了一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白且不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中分離到的抗體，如在Kucherlapati等的美國(guó)專利5，939，598所述的那樣，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗BCMA抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的或更高的多特異性的。多特異性抗體可以特異于BCMA多肽的不同表位或者可以特異于BCMA多肽以及異源表位例如異源多肽或固體支持材料。見(jiàn)例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、W091/00360、WO 92/05793、Tutt, et al.，J. Immunol. 147:60-69 (1991);美國(guó)專利 4，474，893、4，714，681、4，925，648、5，573，920、5，601，819、Kostelny et al. , J.Immunol. 148:1547-1553(1992);在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？筛鶕?jù)其交叉反應(yīng)性來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的BCMA抗體。不會(huì)結(jié)合BCMA多肽的任何其他類似物、同源物、或同系物的抗體可以用于本發(fā)明的方法。在具體的實(shí)施方式中，BCMA抗體與人BCMA蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相應(yīng)表位交叉反應(yīng)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗BCMA抗體不僅結(jié)合BCMA，也·結(jié)合 TACI 和 BAFF-R。也可根據(jù)其與BCMA多肽的結(jié)合親和力來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的抗體。優(yōu)選的結(jié)合親和力包括解離常數(shù)或Kd小于或等于5x 10_9M、10_9M、5x 10^10MU0^10M,5x10_11MU0_11M,5x 1(T12M、或 1(T12M。可以用于本發(fā)明方法中的BCMA抗體可以是BCMA多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑。例如包括部分或完全地阻斷與BCMA多肽的受體/配體相互作用的BCMA抗體。也包括不會(huì)阻止配體結(jié)合但會(huì)阻止受體活化的受體特異性抗體。用在此所述的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以確定受體活化(即信號(hào)傳導(dǎo))。例如，通過(guò)用本領(lǐng)域已知的技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT、AP-1、和/或NF- K B的活化和/或通過(guò)免疫沉淀以及隨后的western印跡分析檢測(cè)受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)可以確定受體活化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，阻止配體結(jié)合和受體活化的受體特異性BCMA抗體和識(shí)別受體-配體復(fù)合物以及優(yōu)選地不會(huì)特異地識(shí)別未結(jié)合的受體或未結(jié)合的配體的BCMA抗體都可以用于本發(fā)明方法。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以制備出上述BCMA抗體。見(jiàn)例如 PCT 出版物 TO 96/40281 ;美國(guó)專利 5，811，097 ；Deng et al.，Blood92 (6): 1981-1988 (1998) ；Chen et al., Cancer Res.58 (16):3668-3678 (1998)；Harrop et al. , J. Immuno1. 161 (4) :1786-1794(1998) ；Zhu et al. , CancerRes.58(15):3209-3214(1998) ；Yoon et al.,J.Immunol.160 (7):3170-3179 (1998)；Prat et al. , J. Ce 11. Sci. Ill (Pt2) :237-247 (1998) ；Pitard et al.，J. Immunol.Methods 205 (2):177-190(1997) ；Liautard etal. , Cytokine 9(4):233-241 (1997)；Carlson et al. , J. Biol. Chem. 272(17):11295-11301 (1997) ；Taryman et al. , Neuron14(4):755-762(1995) ；Muller et al. , Structure 6 (9):1153-1167(1998) ；Bartunek etal.，Cytokine8 (I) : 14-20 (1996)(在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。F. Neutrokine- α 受體，BAFF-RBAFF-R多肽，例如下面所述的那些BAFF-R多肽，可以作為Neutrokine- α和/或APRIL的拮抗劑，并且也可以用于本發(fā)明方法。BAFF-R也稱作TR21，是184個(gè)氨基酸殘基的蛋白(SEQ ID NO: 10)，推斷分子量約為18. 9kDa。編碼BAFF-R的cDNA核苷酸序列為SEQID N0:9。推定的從約I到約81位氨基酸構(gòu)成了細(xì)胞外區(qū)(SEQ ID NO: 10);從約82到約101位氨基酸構(gòu)成了跨膜區(qū)(SEQ ID NO: 10);以及從約102到約184位氨基酸構(gòu)成了細(xì)胞內(nèi)區(qū)(SEQ ID NO: 10)。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白是包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10或是由其組成的分離的多肽，或者是包括一部分SEQ ID NO: 10或是由其組成的多肽，例如BAFF-R細(xì)胞外區(qū)(包括SEQ ID NO: 10的第I到81位氨基酸)和/或BAFF-R富半胱氨酸區(qū)(包括SEQ ID NO: 10的第19到35位氨基酸)；以及與上面所述的多肽至少80%相同的、更優(yōu)選的至少90%或95%相同的、仍更優(yōu)選的至少96%、97%、98%、99%或100%相同的多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白是包括SEQ ID NO: 10的第I到70位氨基酸和或氨基酸序列SEQ ID N0:26的分離的多肽。SEQ ID N0:26顯示了BAFF-R的第I到70位氨基酸，其中BAFF-R中的第20位氨基酸(纈氨酸)被天冬酰胺所取代以及BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸所取代。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可·以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白是包括SEQ ID NO: 26的第2到70位氨基酸的分離的多肽。與上面所述的多肽至少80%相同的、更優(yōu)選的至少90%或95%相同的、仍更優(yōu)選的至少96%、97%、98%、99%或100%相同的多肽也可用于本發(fā)明方法。具有與BAFF-R多肽的參照氨基酸序列至少例如95% “相同的”氨基酸序列的多肽表示多肽的氨基酸序列與參照序列相同，除了所述多肽序列可以包括每100個(gè)BAFF-R受體的參照氨基酸序列的氨基酸中最多5個(gè)氨基酸改變。換句話說(shuō)，為了得到具有與參照氨基酸序列至少95%相同的多肽，可以缺失或用另一種氨基酸取代參照序列中最多5%的氨基酸殘基，或者最多達(dá)參照序列的總氨基酸殘基數(shù)目5%的氨基酸殘基可以被插入到參照序列內(nèi)。參照序列的這些改變可以發(fā)生于參照氨基酸序列的氨基末端或羧基末端位置，或者發(fā)生在這些末端位置之間的任一位置，可以散在發(fā)生于參照序列中的單個(gè)殘基上或者發(fā)生于參照序列內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)連續(xù)殘基上。BAFF-R的多肽片段包括包含SEQ ID NO: 10所含的氨基酸序列或由其組成的多肽。多肽片段可以是“獨(dú)立式的”或者包含在更大的多肽內(nèi)，所述片段形成了更大多肽的一部分或區(qū)域，最優(yōu)選的是作為單一的連續(xù)區(qū)域。在另外的實(shí)施方式中，多肽片段包括一個(gè)或多個(gè)BAFF-R區(qū)或者是由其組成。優(yōu)選的多肽片段包括選自組中的成員(a)包括或由BAFF-R細(xì)胞外區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO: 10的第I到約81位氨基酸殘基)組成的多肽；(b)包括或由BAFF-R富半胱氨酸區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO: 10的第19到第35位氨基酸殘基)組成的多肽；(c)包括或由BAFF-R跨膜區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO: 10的第82到第101位氨基酸殘基)組成的多肽；(d)包括或由BAFF-R細(xì)胞內(nèi)區(qū)(推定其構(gòu)成SEQ ID NO: 10的第102到第184位氨基酸殘基)組成的多肽；或(e) (a)-(d)中的多肽的任一組合。相信BAFF-R的細(xì)胞外的富半胱氨酸基序?qū)τ贐AFF-R及其配體(Neutrokine- α和APRIL)之間的相互作用是重要的。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R多肽片段包括SEQ ID NO: 10的第19到35位氨基酸殘基或者是由其組成。包括與所述富半胱氨酸基序的多肽序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的多肽序列或由所述多肽序列組成的蛋白也是優(yōu)選的。可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白的其他片段是經(jīng)BAFF-R的結(jié)構(gòu)或功能屬性所表征的片段。這些片段包括包含完整(全長(zhǎng))BAFF-R(SEQID NO: 10)的α螺旋或α螺旋形成區(qū)(“α區(qū)”)、β折疊和β折疊形成區(qū)(“β區(qū)”)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)形成區(qū)(“轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)”)、卷曲和卷曲形成區(qū)(“卷曲區(qū)”)、親水區(qū)、疏水區(qū)、α兩親區(qū)、β兩親區(qū)、表面形成區(qū)和高抗原性指數(shù)區(qū)(即含有四個(gè)或更多個(gè)具有抗原指數(shù)大于或等于I. 5的連續(xù)氨基酸，利用Jameson-Wolf程序的默認(rèn)參數(shù)所鑒定到的)的氨基酸殘基，如在美國(guó)專利6，969，519中所討論的那樣。如利用這些計(jì)算機(jī)程序的默認(rèn)參數(shù)所推定的，某些優(yōu)選的區(qū)域包括但不限于Garnier-Robson推定的α區(qū)、β區(qū)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)、和卷曲區(qū)；Chou-Fasman推定的α區(qū)、β區(qū)和轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)區(qū)；Kyte-Doolittle推定的親水區(qū)；Hopp-Woods推定的疏水區(qū)；Eisenberga和β兩親區(qū)；Emini表面形成區(qū)；以及Jameson-Wolf高抗原性指數(shù)區(qū)。可以表達(dá)修飾形式的可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R多肽例如融合蛋白(包括經(jīng)肽鍵與異源蛋白序列(不同蛋白的序列)連接的多肽)，不僅可以包括分泌信號(hào)，還可以包括額外的異源功能區(qū)。或者可以通過(guò)合成技術(shù)例如通過(guò)使用肽合成儀制備出這種融合蛋白。因此，可以向多肽的N末端加入額外的氨基酸區(qū)，特別是帶電荷的氨基酸，以提高在宿主細(xì)胞中、純化期間或隨后的處理和儲(chǔ)存期間的的穩(wěn)定性和持久性。也可以將肽基序加入到多肽中，以便促進(jìn)純化?？梢栽谧罱K制備出多肽之前去除這些區(qū)域。向多肽中添加肽基·序以便引起分泌或排出、提高穩(wěn)定性和促進(jìn)純化等都是本領(lǐng)域熟知的和常規(guī)的技術(shù)。優(yōu)選的可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R融合蛋白包括來(lái)自免疫球蛋白的異源區(qū)，其被用于增溶蛋白。例如EP-A-O 464533 (對(duì)應(yīng)于加拿大2045869)和W000/024782闡述了包括免疫球蛋白分子的恒定區(qū)的各個(gè)部分以及另一種人蛋白或其部分的融合蛋白。例如 Pelletier, et al., (2003)J Biol Chem 278:33127-33133 和 Carter, et al.，(2005)Arthritis Rheum 52:3943-3954已經(jīng)描述了 BAFF-R免疫球蛋白融合蛋白，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。在很多情況中，融合蛋白中的Fe部分非常適用于治療和診斷，并因此造成了改善的藥物動(dòng)力學(xué)性能(EP-A 0232262)。另一方面，對(duì)于某些應(yīng)用而言，需要在以在此所述的有利的方式表達(dá)、檢測(cè)并純化出融合蛋白之后能夠缺失Fe部分。當(dāng)Fe部分被證實(shí)其對(duì)用于治療和診斷是妨礙時(shí)就是這種情況，例如當(dāng)融合蛋白被用作免疫接種的抗原時(shí)。在藥物研發(fā)中，例如人類蛋白如hIL-5已經(jīng)與Fe部分融合，以便用高通量篩選檢測(cè)法鑒定出 hIL_5 的拮抗劑。見(jiàn) D. Bennett et al. , J. Molecular Recognition 8:52-58(1995)和 K. Johanson et al.，J. Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R-Fc融合蛋白是BR3-Fc。本領(lǐng)域人員知道并如上面討論的那樣，BAFF-R多肽可以與其他多肽序列融合。例如，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP394, 827、Traunecker etal.，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物TO 96/22024和W099/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)。BAFF-R-Fc蛋白的一個(gè)實(shí)例是與IgGl免疫球蛋白分子的Fe區(qū)相融合的SEQ IDNO: 10的第I到70位氨基酸。任選地，BAFF-R中的第20位氨基酸(纈氨酸)被天冬酰胺所取代以及BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸所取代。SEQ ID NO: 26顯示了具有這兩個(gè)氨基酸變化的BAFF-R的第I到70位氨基酸。可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括至少一個(gè)BAFF-R多肽的片段或變體以及至少一個(gè)人血清白蛋白的片段或變體，其彼此連接在一起，優(yōu)選地通過(guò)遺傳融合(即通過(guò)翻譯核酸生成白蛋白融合蛋白，其中在所述核酸中，編碼BAFF-R的全部或一部分的多核苷酸與編碼白蛋白的全部或一部分的多核苷酸骨架連接)，或者化學(xué)綴合彼此連接·在一起。一旦作為白蛋白融合蛋白的一部分，BAFF-R多肽和白蛋白蛋白可以被稱作白蛋白·融合蛋白的“部分”、“區(qū)域”或“基序”(例如“BAFF-R部分”或“白蛋白部分”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段和血清白蛋白或者是由它們組成。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的變體和血清白蛋白或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的血清白蛋白蛋白組分是血清白蛋白的成熟部分。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或者是由它們組成。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的BAFF-R部分是全長(zhǎng)BAFF-R多肽。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，白蛋白融合蛋白的BAFF-R蛋白部分是BAFF-R多肽的成熟的、可溶性的區(qū)域。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括BAFF-R多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分或由它們組成的白蛋白融合蛋白。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括BAFF-R多肽的片段或變體和血清白蛋白的具有生物學(xué)活性的和/或有治療活性的片段或變體或者是由它們組成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括BAFF-R多肽的成熟部分和血清白蛋白的成熟部分(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))或由它們組成的白蛋白融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，BAFF-R多肽(包括其片段或變體)與成熟形式的人血清白蛋白(即如歐洲專利0322094的圖I和2所示的人血清白蛋白的第I到585位氨基酸)融合，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到X位殘基組成的多肽片段融合，其中X是從I到585的整數(shù)，所述白蛋白片段具有人血清白蛋白活性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，BAFF-R多肽(包括其片段或變體)與包括或由人血清白蛋白的第I到z位氨基酸組成的多肽片段融合，其中z是從369到419的整數(shù)，如美國(guó)專利5，766，883所述，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。BAFF-R多肽(包括其片段或變體)可以與異源蛋白(例如免疫球蛋白Fe多肽或人血清白蛋白多肽)的N末端或C末端融合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白中所用的人血清白蛋白含有一組或兩組下面的參照SEQ ID NO: 11的點(diǎn)突變組Leu-407突變?yōu)锳la、Leu-408突變?yōu)閂al、Val-409突變?yōu)锳la、和Arg-410突變?yōu)锳la ;或Arg-410突變?yōu)锳、Lys-413突變?yōu)镚in、和Lys-414突變?yōu)镚ln (見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)W095/23857，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。在甚至更為優(yōu)選的實(shí)施方式中，含有一組或兩組上面所述的點(diǎn)突變組的可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白已經(jīng)提高了對(duì)酵母Yap3p蛋白裂解性降解的穩(wěn)定性/耐受性，容許增加在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組白蛋白融合蛋白的產(chǎn)量。·優(yōu)選地，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白包括作為N末端部分的HA和作為C末端部分的BAFF-R多肽?；蛘撸部梢允褂冒ㄗ鳛槠銫末端部分的HA和作為其N末端部分的BAFF-R多肽的白蛋白融合蛋白。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白具有與白蛋白的N末端和C末端融合的BAFF-R多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的BAFF-R多肽是相同的。在另一個(gè)實(shí)施方式中，在N末端和C末端融合的BAFF-R多肽是不同的BAFF-R多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，BAFF-R多肽被融合于白蛋白的N或C末端，異源多肽被融合于剩余末端。另外，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以包含被融合部分之間的連接物肽，以提供所述部分之間的更大的物理分隔。連接物肽可以由氨基酸組成，使得其是柔性的或更具剛性。—般而言，可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白可以具有一個(gè)HA衍生區(qū)和一個(gè)BAFF-R區(qū)。但是，每個(gè)蛋白中的多個(gè)區(qū)域都可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。同樣，一種以上的蛋白可以被用于制備可以用于本發(fā)明方法中的白蛋白融合蛋白。例如，蛋白可以融合于HA的N末端和C末端。在這種構(gòu)型中，所述蛋白部分可以是相同的或不同的蛋白分子。雙官能的白蛋白融合蛋白的結(jié)構(gòu)可以表示為X-HA-Y或Y-HA-X。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白或其片段或變體可以與細(xì)胞毒素(例如細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑)綴合。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒藥物可以包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥物。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、吐根素、絲裂霉素、足葉乙甙、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、dihydroxy anthracin dione、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、I-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、地卡因、利多卡因、普萘洛爾、和嘌呤霉素以及其類似物或同系物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R蛋白或其片段或變體可以與毒素綴合?！岸舅亍北硎疽环N或多種可以結(jié)合并激活內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的化合物、放射性同位素、全毒素、修飾毒素、毒素的催化亞基、或在給定的引起細(xì)胞死亡的條件下不會(huì)正常地表達(dá)于細(xì)胞表面內(nèi)或表面上的任何分子或酶?？梢允褂玫亩舅匕ǖ幌抻诒绢I(lǐng)域已知的放射性同位素、化合物例如結(jié)合內(nèi)在的或誘導(dǎo)的內(nèi)源性細(xì)胞毒效應(yīng)物系統(tǒng)的抗體(或其含補(bǔ)體固定化的部分)、胸苷激酶、核酸內(nèi)切酶、RNA酶、α毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、假單胞菌外毒素Α、白喉毒素、皂草素、木鱉子甙、白樹(shù)毒素、美洲商路抗病毒蛋白、α -帚曲霉素、和霍亂毒素?！岸舅亍币舶?xì)胞生長(zhǎng)抑制劑或殺細(xì)胞劑、治療藥物或放射性金屬離子例如α粒子發(fā)射離子，例如213Bi、或其他放射性同位素如1(l3Pd、133Xe、131I、68Ge、57C0、65Zn、85Sr、32P、35S、9°Y、153Sm、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、9° 釔、117 錫、186 錸、166 欽、和 188 錸。可以采用遺傳工程化來(lái)改進(jìn)或改變可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R多肽的特征，以生成可以用于本發(fā)明方法中的多肽。可以用本領(lǐng)域人員已知的重組DNA技術(shù)生成新的突變蛋白或“突變型蛋白”包括單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、添加或融合蛋白。這些修飾多肽可以表現(xiàn)出例如增強(qiáng)活性、或增加穩(wěn)定性。另外，至少在特定的純化和儲(chǔ)存條件下，它們可以比相應(yīng)的天然多肽按更高的產(chǎn)量被純化，并表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性。仍在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，BAFF-R多肽突變體可以是“顯性負(fù)調(diào)控物”。為此，可以用缺陷型BAFF-R·多肽例如缺少整個(gè)或部分TNF保守區(qū)的突變體消除BAFF-R的活性。無(wú)功能的BAFF-R多肽能組裝形成能夠結(jié)合但不能誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的受體(例如多聚體)?？梢员挥糜诒景l(fā)明方法中的BAFF-R多肽可以是單體或多聚體(即二聚體、三聚體、四聚體、和更高聚體)。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多肽是單體、二聚體、三聚體或四聚體。在另外的實(shí)施方式中，本發(fā)明的多聚體至少是二聚體、三聚體或四聚體。相信某些TNF家族蛋白成員是以三聚體的形式存在的(Beutler and Huffel, Science264:667, 1994;Banner et al. , Cell 73:431,1993)。因此，三聚體的 BCMA 可以提供增強(qiáng)生物學(xué)活性的優(yōu)勢(shì)。在具體的實(shí)施方式中，多聚體可以是同聚體或異聚體。術(shù)語(yǔ)“同聚體”在此指的是只含有BAFF-R多肽(包括BAFF-R片段、變體、和在此所述的融合蛋白)的多聚體。這些同聚體可以含有具有相同的或不同的氨基酸序列的BAFF-R多肽。在具體的實(shí)施方式中，同聚體是只含有具有相同的多肽序列的BAFF-R蛋白的多聚體。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，同聚體是含有具有不同多肽序列的BAFF-R蛋白的多聚體。術(shù)語(yǔ)“異聚體”在此指的是除了 BAFF-R多肽外還含有異源性多肽(即只含有非對(duì)應(yīng)于BAFF-R基因所編碼的多肽序列的多肽序列的蛋白)的多聚體。可以用于本發(fā)明方法中的多聚體可以是疏水連接、親水連接、離子連接和/或共價(jià)連接相連的結(jié)果，和/或可以是間接相連的，例如通過(guò)脂質(zhì)體形成。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)?shù)鞍自谌芤褐斜舜私佑|時(shí)，就形成了同多聚體例如同二聚體、同三聚體、異四聚體或異四聚體。在其他實(shí)施方式中，通過(guò)與BAFF-R蛋白的共價(jià)連接或者BAFF-R蛋白之間的共價(jià)連接形成多聚體。這些共價(jià)連接可能涉及到蛋白的多肽序列(所含的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。在一種情況中，共價(jià)連接是位于蛋白的多肽序列內(nèi)的半胱氨酸殘基之間的交聯(lián)，所述半胱氨酸殘基在天然(即天然存在)多肽中也相互作用。在另一種情況中，共價(jià)連接是化學(xué)或重組處理后的結(jié)果?；蛘?，這種共價(jià)連接可以涉及一個(gè)或多個(gè)在BAFF-R融合蛋白的異源性多肽序列中所含的氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)例中，共價(jià)連接是融合蛋白所含的異源性序列之間的共價(jià)連接(見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)5，478，925，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))。在一個(gè)具體的實(shí)例中，共價(jià)連接是BAFF-R-Fc融合蛋白(如在此所述)所含的異源性序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的融合蛋白的共價(jià)連接是來(lái)自另一個(gè)能夠形成共價(jià)連接的多聚體的TNF家族配體/受體成員例如護(hù)骨蛋白(見(jiàn)例如國(guó)際出版物WO 98/49305，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))的異源性多肽序列之間的共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，兩個(gè)或多個(gè)BAFF-R多肽經(jīng)合成的連接物(例如肽、碳水化合物或可溶性的多聚體連接物)連接在一起。實(shí)例包括在美國(guó)專利5，073，627中所述的那些肽連接物(在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng))。利用傳統(tǒng)的重組DNA技術(shù)可以生成包括多個(gè)經(jīng)肽連接物分離的BAFF-R多肽的蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，結(jié)合BAFF-R多肽、多肽片段、或SEQ IDN0:10的變體、和/或BAFF-R多肽表位(通過(guò)用于檢測(cè)特異的抗體-抗原結(jié)合的本領(lǐng)域熟知的免疫檢測(cè)法確定的表位)的抗體可以用于本發(fā)明方法中。例如在Lee, et al.，(2006)Synthetic anti_BR3antibodies that mimic BAFF binding and target both humanand murine B cells Blood(Blood First Edition Paper, prepublished online July13，2006)Vol. 0，No. 2006，pp. 200603011 ;Ch，en, et al. , (2005)Cell Immunol 2·36:78-85 ；Nakamura, et al. , (2005) Virchows Arch 447:53-60 ;和Carter, et al. , (2005) ArthritisRheum 52:3943-3954中已經(jīng)描述了抗BAFF-R抗體及其片段。在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。抗體包括但不限于單克隆的、多特異性的、人的、人源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab')片段、Fab表達(dá)文庫(kù)生成的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括例如抗BAFF-R抗體的抗Id抗體)、以及上述所有抗體的表位結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可以是任何類型的(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何組(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞組的免疫球蛋白。在具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgGl。在其他具體的實(shí)施方式中，免疫球蛋白分子是IgG4。可以用于本發(fā)明方法中的結(jié)合BAFF-R的抗體片段包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)和包括VL或VH區(qū)的片段。包括單鏈抗體的結(jié)合BAFF-R的抗體片段可以包括單獨(dú)的可變區(qū)或者與下面的全部或一部分組合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CHU CH2和CH3區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R結(jié)合片段包括可變區(qū)和鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)的任一組合?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以來(lái)自任何動(dòng)物來(lái)源的抗體，包括鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物類。優(yōu)選地，抗體是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驢、ship rabbit、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞來(lái)源的?！叭恕笨贵w在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體以及包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從轉(zhuǎn)基因了一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白且不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中分離到的抗體，如在Kucherlapati等的美國(guó)專利5，939，598所述的那樣，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗BAFF-R抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的或更高的多特異性的。多特異性抗體可以特異于BAFF-R多肽的不同表位或者可以特異于BAFF-R多肽以及異源表位例如異源多肽或固體支持材料。見(jiàn)例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、W091/00360、WO 92/05793、Tutt, et al.，J. Immunol. 147:60-69 (1991);美國(guó)專利 4，474，893、4，714，681、4，925，648、5，573，920、5，601，819、Kostelny et al. , J.Immunol. 148:1547-1553(1992);在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？筛鶕?jù)其交叉反應(yīng)性來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R抗體。不會(huì)結(jié)合BAFF-R多肽的任何其他類似物、同源物、或同系物的抗體可以用于本發(fā)明的方法。在具體的實(shí)施方式中，BAFF-R抗體與人BAFF-R蛋白的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相應(yīng)表位交叉反應(yīng)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗BAFF-R抗體不僅結(jié)合 BAFF-R，也結(jié)合 TACI 和 BCMA。也可根據(jù)其與BAFF-R多肽的結(jié)合親和力來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R抗體。優(yōu)選的結(jié)合親和力包括解離常數(shù)或Kd小于或等于5χ 10_9Μ、10_9Μ、5χ ΙΟ,Μ、1(Γ10Μ、5χ 10_11MU0_11M,5x 1(Γ12Μ、或 1(Γ12Μ。可以用于本發(fā)明方法中的BAFF-R抗體可以是BAFF-R多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑。例如包括部分或完全地阻斷與BAFF-R多肽的受體/配體相互作用的BAFF-R抗體。也包括不會(huì)阻止配體結(jié)合但會(huì)阻止受體活化的受體特異性抗體。用在此所述的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)·可以確定受體活化(即信號(hào)傳導(dǎo))。例如，通過(guò)用本領(lǐng)域已知的技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT、AP-UP /或NF- K B的活化和/或通過(guò)免疫沉淀以及隨后的western印跡分析檢測(cè)受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)可以確定受體活化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，阻止配體結(jié)合和受體活化的受體特異性BAFF-R抗體和識(shí)別受體-配體復(fù)合物以及優(yōu)選地不會(huì)特異地識(shí)別未結(jié)合的受體或未結(jié)合的配體的BAFF-R抗體都可以用于本發(fā)明方法。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以制備出上述BAFF-R 抗體。見(jiàn)例如 PCT 出版物 W096/40281 ;美國(guó)專利 5,811,097 ;Deng et al. , Blood92 (6): 1981-1988 (1998) ；Chen et al., Cancer Res.58 (16):3668-3678 (1998)；Harrop et al.,J. Immunol. 161 (4) :1786-1794 (1998) ；Zhu et al. , CancerRes. 58(15) :3209-3214(1998) ；Yoon et al.，J. Immunol. 160 (7) : 3170-3179 (1998)；Prat et al. , J. Cell. Sci. Ill (Pt2) :237-247 (1998) ；Pitard et al.，J. Immunol.Methods 205(2):177-190(1997) ；Liautard et al., Cytokine 9(4):233-241 (1997)；Carlson et al.,J.Biol.Chem. 272(17):11295-11301 (1997) ；Taryman et al. , Neuron14(4):755-762(1995) ；Muller et al. , Structure 6 (9):1153-1167(1998) ；Bartunek etal.，Cytokine 8 (I) : 14-20 (1996)(在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。G.抗 APRIL 抗體在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- α拮抗劑是抗APRIL抗體或其抗原結(jié)合片段。例如在 PCT 出版物 W001/087977、W099/12965、W001/60397、和 W002/094192 ;美國(guó)專利6，506,882 ；2002年10月11日提交的美國(guó)專利出版物2003/0166864 ;和Ch，en, etal. , (2005) Cell Immunol236:78-85中已經(jīng)描述了抗APRIL抗體及其片段。在此通過(guò)引用
將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，與APRIL多肽、多肽片段、或SEQ IDN0:4的變體、和/或APRIL表位(如本領(lǐng)域已知的用于檢測(cè)特異的抗體-抗原結(jié)合的免疫檢測(cè)法所確定的)結(jié)合的抗體可以用于本發(fā)明方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體可以結(jié)合與其他多肽序列融合的APRIL多肽。例如，APRIL多肽可以與免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG、IgM)的恒定區(qū)或其部分(CH1、CH2、CH3、或其任一組合和部分)、或白蛋白(包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)例如1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969、歐洲專利0413622、和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))融合，形成嵌合多肽。這些融合蛋白可以促進(jìn)純化、可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間以及可以增加體內(nèi)半衰期。由人CD4多肽的頭兩個(gè)結(jié)構(gòu)域和哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的重鏈或輕鏈恒定區(qū)的不同區(qū)域組成的嵌合蛋白已經(jīng)顯示出這一點(diǎn)。見(jiàn)例如EP 394，827、Trauneckeret al·，Nature, 331:84-86 (1988)。對(duì)于與FcRn結(jié)合伴侶例如IgG或Fe片段綴合的抗原(例如胰島素)已經(jīng)證實(shí)可以增強(qiáng)抗原跨越上皮屏障轉(zhuǎn)運(yùn)到免疫系統(tǒng)的能力(見(jiàn)例如PCT出版物W096/22024和WO 99/04813)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)由于IgG部分的二硫鍵所造成的具有二硫鍵連接的二聚體結(jié)構(gòu)的IgG融合蛋白能比單聚體多肽或其片段單獨(dú)本身更有效地結(jié)合并中和其他分子。見(jiàn)例如 Fountoulakis et al.，J. Biochem.，270:3958-3964(1995)。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合同聚體的、特別是同三聚體的APRIL多肽。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合異聚體的、特別是異三聚體的APRIL多肽例如含有兩個(gè)APRIL多肽和一個(gè)Neutrokine- α多肽的·異三聚體或者含有一個(gè)APRIL多肽和兩個(gè)Neutrokine-α多肽的異三聚體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合同聚體的、特別是同三聚體的APRIL多肽，其中多聚體的單個(gè)蛋白組分是由成熟形式的APRIL(例如SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸殘基)組成的。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合異聚體的、特別是異三聚體的APRIL多肽例如含有兩個(gè)APRIL多肽和一個(gè)Neutrokine- α多肽的異三聚體或者含有一個(gè)APRIL多肽和兩個(gè)Neutrokine- α多肽的異三聚體，其中APRIL異聚體的蛋白組分是由APRIL的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID NO:4的第105到250位氨基酸)或Neutrokine-α的成熟的細(xì)胞外可溶性部分(例如SEQ ID N0:2的第134到285位氨基酸)組成的。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合APRIL單體蛋白的構(gòu)象表位。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合APRIL多聚體的、特別是三聚體的蛋白的構(gòu)象表位。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合由APRIL和異源多肽的并置所產(chǎn)生的構(gòu)象表位，當(dāng)APRIL形成異三聚體(例如和Neutrokine- α多肽)或者在APRIL和異源多肽之間的融合蛋白內(nèi)可以出現(xiàn)所述構(gòu)象表位?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體包括但不限于多克隆的、單克隆的、多特異性的、人的、人源化的或嵌合的抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab) ’片段、Fab表達(dá)文庫(kù)生成的片段、抗獨(dú)特型(抗Id)抗體(包括抗APRIL抗體的抗id抗體)、和上面所有抗體的表位結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”在此指的是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。本發(fā)明的免疫球蛋白分子可以是任何類型的(IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、任何組的(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亞組的免疫球蛋白分子。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，免疫球蛋白是IgGl或IgG4同種型。免疫球蛋白可以具有重鏈和輕鏈。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY的排列可以與κ或λ形式的輕鏈相匹配。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體是結(jié)合APRIL的抗體片段，包括但不限于Fab、Fab’、和F(ab’)2、Fd、單鏈Fv(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fv(sdFv)和包括VL或VH區(qū)的片段。包括單鏈抗體的結(jié)合APRIL的抗體片段可以包括單獨(dú)的可變區(qū)或者與下面的全部或一部分組合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合片段包括可變區(qū)和鉸鏈區(qū)、CH1、CH2和CH3區(qū)的任一組合?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以來(lái)自任何動(dòng)物來(lái)源的抗體，包括鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物類。優(yōu)選地，抗體是人、鼠(例如小鼠和大鼠)、驢、ship rabbit、山羊、豚鼠、駱駝、馬或雞來(lái)源的。“人”抗體在此包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體以及包括從人免疫球蛋白文庫(kù)或從轉(zhuǎn)基因了一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白且不表達(dá)內(nèi)源性免疫球蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中分離到的抗體，如在Kucherlapati等的美國(guó)專利5，939，598所述的那樣，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的或更高的多特異性的。多特異性抗體可以特異于APRIL多肽的不同表位或者可以特異于APRIL多肽以及異源表位例如異源多肽或固體支持材料。見(jiàn)例如PCT出版物WO 93/17715、WO 92/08802、W091/00360、W092/05793、Tutt, et al. , J. Immunol. 147:60-69 (1991)；美國(guó)專利 4，474，893、4，714，681、4，925，648、5，573，920、5，601，819、Kostelny et al. , J.Immunol. 148:1547-1553(1992)。
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可根據(jù)其交叉反應(yīng)性來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的抗APRIL抗體。不會(huì)結(jié)合APRIL多肽的任何其他類似物、同源物、或同系物的抗體可以用于本發(fā)明的方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體與Neutrokine-α交叉反應(yīng)。在具體的實(shí)施方式中，抗體與人類蛋白質(zhì)的小鼠、大鼠和/或兔的同系物或其相應(yīng)表位交叉反應(yīng)。也可根據(jù)其與APRIL多肽的結(jié)合親和力來(lái)描述或說(shuō)明可以用于本發(fā)明方法中的抗體。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合APRIL多肽或其片段或變體，其解離常數(shù)或 Kd 小于或等于 5x 10_9M、10_9M、5x IO-10MUO-iciM,5x 10_nM、10_nM、5x10_12M、或10_12M。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗體結(jié)合APRIL多肽的解離常數(shù)或Kd是在每個(gè)單個(gè)給出值之間的任一范圍內(nèi)。例如，包括部分或完全地阻斷與APRIL多肽的受體/配體相互作用的APRIL抗體。也包括不會(huì)阻止配體結(jié)合但會(huì)阻止受體活化的APRIL特異性抗體。用在此所述的或本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以確定受體活化(即信號(hào)傳導(dǎo))。例如，通過(guò)用本領(lǐng)域已知的技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT、AP-UP /或NF- K B的活化和/或通過(guò)免疫沉淀以及隨后的western印跡分析檢測(cè)受體或其底物的磷酸化(例如酪氨酸或絲氨酸/蘇氨酸)可以確定受體活化。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，阻止配體結(jié)合和受體活化的受體特異性APRIL抗體和識(shí)別受體-配體復(fù)合物以及優(yōu)選地不會(huì)特異地識(shí)別未結(jié)合的受體或未結(jié)合的配體的APRIL抗體都可以用于本發(fā)明方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，結(jié)合配體并阻止配體和受體結(jié)合的中和抗體以及結(jié)合配體據(jù)此阻止受體活化但不會(huì)阻止配體結(jié)合受體的抗體都可以用于本發(fā)明方法。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以制備出上述APRIL 抗體。例如 PCT 出版物 W096/40281 ;美國(guó)專利 5，811，097 ;Deng et al. , Blood92 (6):1981-1988 (1998) ；Chen et al., Cancer Res.58 (16):3668-3678 (1998)；Harrop et al.,J. ImmunoI. 161 (4) :1786-1794(1998) ；Zhu et al. , CancerRes. 58(15) :3209-3214(1998) ；Yoon et al. , J. Immunol. 160 (7) : 3170-3179 (1998)；Prat et al. , J. Cell. Sci. Ill (Pt2) :237-247 (1998) ；Pitard et al.，J. Immunol.Methods 205(2):177-190(1997) ；Liautard et al., Cytokine 9(4):233-241 (1997)；Carlson et al.，J. Biol. Chem. 272(17): 11295-11301 (1997) ；Taryman et al. , Neuron14(4):755-762(1995) ；Muller et al. , Structure 6 (9):1153-1167(1998) ；Bartunek etal.，Cytokine 8 (I) : 14-20 (1996)(在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。H. APRIL 結(jié)合多肽在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-α拮抗劑是APRIL結(jié)合肽或多肽。例如在國(guó)際專利出版物W001/87977、W001/87979和美國(guó)專利出版物US2002081296及US2002086018中已經(jīng)描述了 APRIL結(jié)合肽或多肽，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽包括從經(jīng)與絲狀噬菌體包被蛋白的融合所展示出的隨機(jī)肽序列中鑒定出的短的多肽。對(duì)于噬菌體展示肽文庫(kù)技術(shù)的討論見(jiàn)例如Scott etal. (1990)Science 249:386 ；Devlin et al. (1990)，Science 249:404 ; 1993 年 6 月 29 日提交的美國(guó)專利5，223，409 ；1998年3月31日提交的美國(guó)專利5，733，731 ；1996年3月12日提交的美國(guó)專利5，498，530 ;1995年7月11日提交的美國(guó)專利5，432，018 ;1994年8月16日提交的美國(guó)專利5，338, 665 ; 1999年7月13日提交的美國(guó)專利5，922，545 ; 1996年12·月19日出版的WO 96/40987 ;和1998年4月16日出版的WO 98/15833，在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng)。通過(guò)連續(xù)多輪的針對(duì)固定化的APRIL靶向肽的親和純化以及隨后的再繁殖可以分離出表達(dá)肽的噬菌體。給具有與APRIL的最高結(jié)合力的候選噬菌體測(cè)序，以便確定每個(gè)結(jié)合肽的身份。然后將所有鑒定出的APRIL結(jié)合肽都連接到“載體”上，以生成用于本發(fā)明方法中的進(jìn)一步的APRIL結(jié)合肽。術(shù)語(yǔ)“載體”指的是能夠阻止APRIL結(jié)合肽的降解和/或延長(zhǎng)半衰期、降低毒性、減少免疫原性、或增加生物學(xué)活性的分子。示例載體包括Fe區(qū)及其變體(“肽抗體”是優(yōu)選的)；線性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)，包括5kD、20kD、和 30kDPEG、聚賴氨酸、葡聚糖等)；支鏈聚合物(見(jiàn)例如1981年9月15日提交的Denkenwalter等的美國(guó)專利4，289，872 ；1993年7月20日提交的Tam的5，229，490 ；1993年10月28日出版的Frechet等的WO 93/21259);脂質(zhì)；膽固醇基團(tuán)(例如類固醇)；碳水化合物或寡糖(例如葡聚糖)；任何與補(bǔ)救受體結(jié)合的天然的或合成的蛋白、多肽或肽；白蛋白，包括但不限于重組人白蛋白或其片段或變體(見(jiàn)1999年3月2日提交的美國(guó)專利5，876，969 ;歐洲專利0413622;和1998年6月16日提交的美國(guó)專利5，766，883，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))；亮氨酸拉鏈區(qū)；和其他這樣的蛋白和蛋白片段?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽要求存在至少一個(gè)經(jīng)其中一個(gè)氨基酸殘基的N末端、C末端或側(cè)鏈與肽相連的載體。也可以使用多個(gè)載體，例如每個(gè)末端為Fe或一個(gè)末端為Fe，另一個(gè)末端或側(cè)鏈為PEG基團(tuán)。對(duì)于APRIL結(jié)合肽而言，F(xiàn)e區(qū)是優(yōu)選的載體。Fe區(qū)可以與肽的N或C末端融合或者融合于肽的兩個(gè)N和C末端。與N末端的融合是優(yōu)選的。如上所述，F(xiàn)e變體是可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽的合適載體。天然的Fe可以被廣泛地修飾，以便形成Fe變體，條件是保持了與補(bǔ)救受體的結(jié)合能力；見(jiàn)例如WO97/34631和WO 96/32478。在這些Fe變體中，可以去除天然Fe中提供可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽所不需要的結(jié)構(gòu)性能或功能活性的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)。例如通過(guò)取代或缺失殘基、向位點(diǎn)中插入殘基、或截?cái)嗪鑫稽c(diǎn)的部分都可以去除這些位點(diǎn)。所插入的或取代的殘基也可以是改變了的氨基酸例如肽模擬物或D-氨基酸?；诙喾N原因都需要Fe變體，下面描述了一些原因。示例Fe變體包括分子和序列，其中I.去除了涉及二硫鍵形成的位點(diǎn)。這種去除可以避免與用于生成本發(fā)明分子的宿主細(xì)胞上所具有的其他含半胱氨酸蛋白的反應(yīng)。為此，可以截?cái)郚末端的含半胱氨酸片段或者可以缺失半胱氨酸殘基或者用其他氨基酸(例如丙氨酸、絲氨酸)取代半胱氨酸。甚至當(dāng)去除了半胱氨酸殘基時(shí)，單鏈Fe區(qū)仍能形成非共價(jià)結(jié)合在一起的二聚體的Fe區(qū)。2.修飾天然Fe，使得其與所選的宿主細(xì)胞更為兼容。例如，可以去除鄰近經(jīng)典的天然Fe的N末端的PA序列，所述序列可以被大腸桿菌中的消化酶例如脯氨酸亞胺基肽酶所識(shí)別。也可以添加N末端的甲硫氨酸殘基，特別是當(dāng)在細(xì)菌細(xì)胞例如大腸桿菌中重組表達(dá)所述分子時(shí)。3.去除天然Fe的N末端的一部分，以避免當(dāng)在所選的宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)的N末端的異質(zhì)性。為此，可以缺失N末端的頭20個(gè)氨基酸中的任何殘基。4.去除一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)。通常被糖基化的殘基(例如天冬酰胺)可以賦予細(xì)胞裂解效應(yīng)?？梢匀笔Щ蛴梅翘腔臍埢?例如丙氨酸)取代這些殘基。5.去除涉及與補(bǔ)體相互作用的位點(diǎn)例如Clq結(jié)合位點(diǎn)。例如，可以缺失或取代人·IgGl的EKK序列。補(bǔ)體募集對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的分子可能是不利的，因此用這種Fe變體可以避免這一點(diǎn)。6.去除影響與Fe受體而不是補(bǔ)救受體的結(jié)合的位點(diǎn)。天然Fe可以具有與某些白細(xì)胞相互作用的位點(diǎn)，這些對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α結(jié)合肽融合分子是不需要的，因此可以將其去除。7.去除ADCC位點(diǎn)。ADCC位點(diǎn)在本領(lǐng)域是已知的，見(jiàn)例如Molec.Immunol. 29(5) :633-9(1992)闡述了 IgGl的ADCC位點(diǎn)。這些對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的融合分子是不需要的，因此可以將其去除。8.當(dāng)天然Fe衍生于非人抗體時(shí)，天然Fe可以被人源化。通常為了人源化天然Fe，可以用正常見(jiàn)于人天然Fe中的殘基取代所選的非人的天然Fe中的殘基。用于抗體人源化的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽的另一種載體是能夠結(jié)合補(bǔ)救抗體的蛋白、多肽、肽、抗體、抗體片段、或小分子(例如肽模擬化合物)。例如，可以使用在美國(guó)專利5，739，277中所述的肽作為載體。也可以用噬菌體展示或用于結(jié)合補(bǔ)救受體的RNA-肽篩選來(lái)選出肽。這些補(bǔ)救受體結(jié)合化合物也包含在“載體”的含義內(nèi)，并且可以用于可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a結(jié)合肽中。應(yīng)當(dāng)根據(jù)延長(zhǎng)半衰期(例如通過(guò)避免蛋白酶所識(shí)別的序列)和降低免疫原性(例如通過(guò)優(yōu)先非免疫原性序列，如在抗體人源化中所見(jiàn)的那樣)來(lái)選擇這些載體。如上所述，聚合物載體也可以用于可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽。目前可得到各種用于連接可作為載體的化學(xué)部分的方法，見(jiàn)例如專利合作條約("PCT")國(guó)際出版物WO 96/11953，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。該P(yáng)CT申請(qǐng)闡述了水溶性聚合物與蛋白N末端的選擇性相連。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，優(yōu)選的聚合物載體是聚乙二醇(PEG)。PEG基團(tuán)可以是任何便利的分子量，可以是線性的或支鏈的。PEG的平均分子量范圍優(yōu)選的是從約2千道爾頓(“kD”)到約IOOkD,更優(yōu)選的從約5kD到約10kD，最優(yōu)選的是從約5kD到約10kD。對(duì)于可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽，PEG基團(tuán)一般都通過(guò)PEG基序上的反應(yīng)基團(tuán)的?；饔没蜻€原烷基化作用連接到發(fā)明化合物的反應(yīng)基團(tuán)(例如醛基、氨基、或酯基)上。
用于合成肽的PEG化的有用的策略包括通過(guò)在溶液中形成綴合物連接來(lái)組合肽和PEG基序，每個(gè)組分都具有彼此相互反應(yīng)的特殊功能性。用傳統(tǒng)的固相合成法可以容易地制備出肽。用合適的功能基團(tuán)在特殊的位點(diǎn)上“預(yù)活化”肽。在與PEG基序反應(yīng)之前，純化并完全表征出前體。通常在液相中發(fā)生肽與PEG的連接，用反向分析HPLC可以容易地監(jiān)視這個(gè)過(guò)程。用制備級(jí)的HPLC可以容易地純化出PEG化的肽，用分析級(jí)HPLC、氨基酸分析和激光吸減質(zhì)譜法表征出所述PEG化的肽。多糖聚合物是另一類型的可以用于可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽中的水溶性聚合物。葡聚糖是由主要經(jīng)α 1-6連鍵連接在一起的單個(gè)葡萄糖亞基組成的多糖聚合物。葡聚糖本身可以由多種分子量范圍，容易得到的分子量范圍是從約IkD到約70kD。葡聚糖是合適的水溶性聚合物，其本身或者聯(lián)合另一種載體(例如Fe)可以作為可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽的載體。見(jiàn)例如WO 96/11953和WO 96/05309。已經(jīng)報(bào)道了葡聚糖與治療性或診斷性免疫球蛋白綴合的用途；見(jiàn)例如European Patent出版物0315456，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。當(dāng)葡聚糖作為本發(fā)明的載體時(shí)，約IkD到約20kD的葡聚糖是優(yōu)選的。·在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽任選地包括“連接物”。當(dāng)存在連接物時(shí)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)并不重要，因?yàn)樗饕鳛橐粋€(gè)間隔物。連接物優(yōu)選地是由經(jīng)肽鍵連接在一起的氨基酸組成的。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，連接物是由經(jīng)肽鍵連接在一起的I到30個(gè)氨基酸組成的，其中所述氨基酸選自20個(gè)天然存在的氨基酸。這些氨基酸中的一些氨基酸可以被糖基化，本領(lǐng)域人員非常了解這一點(diǎn)。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，I到20個(gè)氨基酸是選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和賴氨酸。甚至更優(yōu)選地，連接物是由大部分空間上未受阻礙的氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸組成的。因此，優(yōu)選的連接物是聚甘氨酸(特別是(Gly) 4、(Gly) 5)、聚(Gly-Ala)、和聚丙氨酸。優(yōu)選的連接物是包括超過(guò)5個(gè)氨基酸的氨基酸連接物，合適的連接物可以具有最多500個(gè)選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸中的氨基酸。約20到50個(gè)氨基酸的連接物是最優(yōu)選的。非肽的連接物也可以用于可以用于本發(fā)明方法中的APRIL結(jié)合肽。例如，可以使用烷基連接物例如一NH--(CH2)n--C(O)--,其中η為2到20?？梢杂萌魏畏强臻g阻礙基團(tuán)例如更低的烷基(例如C1--C6)、更低的烴基、鹵素(例如Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代這些烷基連接物。I.反義 RNA 和 siRNA在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine- α拮抗劑是革巴向于Neutrokine- α、APRIL 或 Neutrokine- α 的受體(例如 TACI、BCMA 和 BAFF-R)的反義 RNA、催化 RNA (核酶)或短干擾RNA(siRNA)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，針對(duì)于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的反義RNA可以用于本發(fā)明方法?？梢杂梅戳x技術(shù)通過(guò)反義DNA或RNA或通過(guò)三螺旋形成來(lái)控制基因表達(dá)。例如，在Okano，J. Neurochem. 56:560(1991) ; " 01igodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRC Press,BocaRaton, FL (1988)中討論了反義技術(shù)。例如，在 Lee et al. , Nucleic Acids Research6:3073(1979) ； Cooney et al.，Science 241:456 (1988)；和 Dervan et al.，Science251:1360(1991)中討論了三螺旋形成。所述方法是依據(jù)于多核苷酸和互補(bǔ)的DNA或RNA的結(jié)合。例如，編碼本發(fā)明多肽的細(xì)胞外區(qū)的多核苷酸的5’編碼部分可以被用于設(shè)計(jì)出長(zhǎng)度約10到40堿基對(duì)的反義RNA寡核苷酸。DNA寡核苷酸可以被設(shè)計(jì)成與涉及轉(zhuǎn)錄的基因區(qū)域互補(bǔ),據(jù)此阻止Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的轉(zhuǎn)錄和生成。反義RNA寡核苷酸在體內(nèi)與mRNA雜交，并阻斷mRNA分子翻譯成Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R多肽。上面所述的寡核苷酸也可以被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞，使得可以在體內(nèi)表達(dá)反義RNA或DNA,以便抑制 Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA 或 BAFF-R 的生成。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)從外源序列的轉(zhuǎn)錄生成了可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反義核酸。例如，載體或其一部分被轉(zhuǎn)錄，生成了可以用于本發(fā)明方法中的反義核酸(RNA)。這種載體可以含有編碼Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反義核酸的序列。這種載體可以仍然是游離的基因的或者可以是染色體內(nèi)整合的，條件是它們能被轉(zhuǎn)錄生成所需的反義RNA。用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的DNA技術(shù)方法可以構(gòu)建出這些載體。載體可以是質(zhì)粒的、病毒的或者本領(lǐng)域其他已知的用于在脊椎動(dòng)物細(xì)胞中復(fù)制并表達(dá)的載體。編碼Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的序列的變大可以是本領(lǐng)域已知的在脊椎動(dòng)物細(xì)胞優(yōu)選的是人類細(xì)胞中發(fā)揮作用的啟動(dòng)子。這些啟動(dòng)子可以是誘導(dǎo)型的或組成型的。這些啟動(dòng)子包括但不限于SV40早期啟動(dòng)子區(qū)(Bernoist·and Chambon, Nature 29:304-310 (1981))、Rous肉瘤病毒的3’長(zhǎng)末端重復(fù)所含的啟動(dòng)子(Yamamoto et al. , Cell 22:787-797(1980))、皰疫胸腺卩密唳啟動(dòng)子(Wagner et al., Proc.Natl. Acad. Sci. U. S. A. 78:1441-1445 (1981))、金屬硫蛋白基因的調(diào)節(jié)序列(Brinster, etal. , Nature 296:39-42(1982))等?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的反義核酸包括與至少一部分Neutrokine-α、APRIL、TACI,BCMA或BAFF-R基因的RNA轉(zhuǎn)錄體互補(bǔ)的序列。但是，絕對(duì)互補(bǔ)性雖然是優(yōu)選的，但不是必需的?！芭c至少一部分RNA互補(bǔ)的”序列在此指的是具有足夠的互補(bǔ)性使之能夠與RNA雜交形成穩(wěn)定的雙鏈體的序列；對(duì)于雙鏈Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R反義核酸而言，因此可以檢測(cè)雙鏈DNA的單鏈或者可以檢測(cè)三鏈體的形成。雜交能力取決于互補(bǔ)程度以及反義核酸的長(zhǎng)度。一般而言，雜交核酸越大，則其含有與Neutrokine- a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R錯(cuò)配的堿基越多，并且仍可形成穩(wěn)定的雙鏈體(或者是三鏈體)。本領(lǐng)域人員用標(biāo)準(zhǔn)方法可以確定可接受的錯(cuò)配程度，以便確定雜交復(fù)合物的解鏈溫度。與信使RNA的5’末端例如5’直到并包括AUG起始密碼子的非翻譯序列互補(bǔ)的寡核苷酸應(yīng)當(dāng)對(duì)抑制翻譯有著最為有效的作用。但是，與mRNA的3’非翻譯序列互補(bǔ)的序列已經(jīng)顯示出也能有效地抑制mRNA的翻譯。一般見(jiàn)于Wagner, R.，1994，Nature 372:333-335。因此，與 Neutrokine-α (SEQID NO: I)、APRIL (SEQ ID NO: 3)、TACI (SEQ ID NO: 5)、BCMA (SEQIDNO:7)或BAFF-R(SEQ ID NO:9)的5’或3’非翻譯的、無(wú)編碼區(qū)互補(bǔ)的寡核苷酸可以用于反義方法，以便抑制內(nèi)源性Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA的翻譯。與mRNA的5’非翻譯區(qū)互補(bǔ)的寡核苷酸應(yīng)當(dāng)包括AUG起始密碼子的互補(bǔ)物。與mRNA編碼區(qū)互補(bǔ)的反義寡核苷酸是翻譯的較為無(wú)效的抑制劑，但是也可以用于本發(fā)明的方法。無(wú)論是否被設(shè)計(jì)成與Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-RmRNA的5’、3’或編碼區(qū)雜交，反義核酸應(yīng)當(dāng)至少為6個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，優(yōu)選地是長(zhǎng)度從6到約50個(gè)核苷酸的寡核苷酸。在特殊的方面，寡核苷酸是至少10個(gè)核苷酸、至少17個(gè)核苷酸、至少25個(gè)核苷酸或者至少50個(gè)核苷酸。
可以用于本發(fā)明方法中的多核苷酸可以是單鏈的或雙鏈的DNA或RNA或其嵌合混合物或衍生物或修飾形式?？梢栽趬A基部分、糖部分或磷酸骨架上修飾寡核苷酸，以便例如提高分子雜交的穩(wěn)定性等。寡核苷酸可以包括其他額外的基團(tuán)例如肽(例如用于在體內(nèi)祀向于宿主細(xì)胞受體)或促進(jìn)轉(zhuǎn)運(yùn)經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜的制劑(見(jiàn)例如Letsinger etal. , 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86:6553-6556 ;Lemaitre et al. , Proc. Natl.Acad. Sci. 84:648-652(1987) ;1988 年 12 月 15 日出版的 PCT 出版物 W088/09810)、或轉(zhuǎn)運(yùn)經(jīng)過(guò)血腦屏障的制劑(見(jiàn)例如1988年4月25日出版的PCT出版物W089/10134)、雜交靶向裂解劑(見(jiàn)例如Krol et al. ,BioTechniques 6:958-976(1988))或嵌入劑(見(jiàn)例如Zon, Pharm. Res. 5:539-549(1988))。為此,寡核苷酸可以與另一種分子例如肽、雜交祀向交聯(lián)劑、轉(zhuǎn)運(yùn)劑、雜交靶向裂解劑等綴合。可以用于本發(fā)明方法中的反義寡核苷酸可以包括至少一個(gè)經(jīng)修飾的堿基部分，其選自包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧羥甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫脲苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧唳、二氫尿卩密唳、β -D-半乳糖基辮苷(β -D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-異戍烯腺嘌呤、I-甲基鳥(niǎo)嘌呤、I-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥(niǎo)嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥(niǎo)嘌呤、3-甲·基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鳥(niǎo)嘌呤、5-甲基氨甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫尿喃唳、β -D-甘露糖基辮苷(β -D-mannosy lqueo sine)、5_甲氧基羧甲基尿喃唳、5-甲氧基尿卩密卩定、2-甲硫基-N6-異戍烯腺嘌呤、尿卩密唳-5-輕乙酸(V)、wybutoxosine、假尿嘧啶、辮苷(queosine)、2_硫胞嘧啶、5-甲基_2_硫尿嘧啶、2_硫尿嘧啶、4_硫尿嘧唆、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(V)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、
3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w、和2，6- 二氨基嘌呤的組?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的反義寡核苷酸也可以包括至少一個(gè)選自包括但不限于阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木酮糖、和己糖的組中的修飾糖基。在仍另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的反義寡核苷酸包括至少一個(gè)選自包括但不限于磷硫酰、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、甲基膦酸酯(methylphosphonate)、燒基磷酸三酯和formacetal或其類似物的組中的修飾磷酸骨架。在仍另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的反義寡核苷酸是α異頭寡核苷酸。α異頭寡核苷酸與互補(bǔ)RNA形成了特殊的雙鏈雜合體，其中與常見(jiàn)的β單元不同的是，所述鏈彼此相互平行(Gautier et al. , Nucl. Acids Res. 15:6625-6641 (1987))。寡核苷酸是 2-0-甲基核糖核苷(Inoue et al. , Nucl. Acids Res. 15:6131-6148 (1987))或嵌合的 RNA-DNA 類似物(Inoue etal. , FEBS Lett. 215:327-330 (1997))。用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法例如使用自動(dòng)化的DNA合成儀(例如可以購(gòu)自Biosearch, Applied Biosystems等)可以合成可以用于本發(fā)明方法中的多核苷酸。例如，用Stein等的方法(Nucl. Acids Res. 16: 3209 (1988))可以合成硫代磷酸酯寡核苷酸，利用可控多孔玻璃聚合物支持(Sarin et al. , Proc. Natl. Acad. Sci.U. S. A. 85:7448-7451 (1988))可以制備出甲基膦酸酯寡核苷酸等。雖然可以使用與Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R編碼區(qū)序列互補(bǔ)的反義核苷酸，與轉(zhuǎn)錄的非翻譯區(qū)互補(bǔ)的那些反義核苷酸對(duì)于本發(fā)明方法中是最優(yōu)選的。
在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-α拮抗劑也包括針對(duì)Neutrokine- α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的催化性RNA或核酶(見(jiàn)例如1990年10月4日出版的PCT國(guó)際出版物TO90/11364 ；Sarver et al, Science247:1222-1225 (1990))。雖然可以用在特殊識(shí)別序列的位點(diǎn)上裂解mRNA的核酶破壞Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA,錘頭狀核酶在本發(fā)明方法中是優(yōu)選的。錘頭狀核酶在與靶mRNA形成互補(bǔ)堿基對(duì)的側(cè)向區(qū)所指示的部位裂解mRNA。唯一的要求是靶mRNA具有以下的兩個(gè)堿基的序列5' -UG-3'。錘頭狀核酶的構(gòu)建和生成是本領(lǐng)域公知的，并在 Haseloff and Gerlach, Nature 334:585-591 (1988)中更好的闡述。在Neutrokine- α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的核苷酸序列中有著多個(gè)潛在的錘頭狀核酶的裂解位點(diǎn)。優(yōu)選地，核酶被遺傳工程化成使得裂解識(shí)別位點(diǎn)位于接近于Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R mRNA的5’末端的位置，即增加了效率并使得無(wú)功能的mRNA轉(zhuǎn)錄體的細(xì)胞內(nèi)蓄積最小化。和反義方法一樣，可以用于本發(fā)明方法中的核酶可以是由修飾寡核苷酸組成的(例如用于提高穩(wěn)定性、祀向性等)，其應(yīng)當(dāng)在體內(nèi)被轉(zhuǎn)運(yùn)到表達(dá)Neutrokine- α、APRIL、·TACI,BCMA或BAFF-R的細(xì)胞內(nèi)。用與上述的引入反義編碼DNA的方式相同的方式可以將編碼核酶的DNA引入到細(xì)胞內(nèi)。優(yōu)選的轉(zhuǎn)運(yùn)方法涉及使用在強(qiáng)的組成型啟動(dòng)子例如pol III或pol II啟動(dòng)子控制下的編碼核酶的DNA構(gòu)建提，使得轉(zhuǎn)染細(xì)胞生成足夠量的核酶，以便破壞內(nèi)源性Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R信使并抑制翻譯。因?yàn)楹嗣概c反義分子不同的是其是催化性的，因此起效只需要更低的細(xì)胞內(nèi)濃度。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，針對(duì)Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R的短干擾RNA可以用于本發(fā)明方法中?？梢杂胹iRNA技術(shù)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)來(lái)控制基因表達(dá)。例如在 Hamilton AJ and Baulcombe DC. Science. 1999Oct 29;286(5441):950-2 ；Elbashir SM, et al. Nature. 2001 May 24;411(6836):494-8和Hanon, Gregory J. and Rossi, John J. Nature 431, 371-378 (2004)討論了 siRNA 技術(shù)。方法依據(jù)于向細(xì)胞內(nèi)引入短的雙鏈RNA (—般是20到25個(gè)核苷酸)。雙鏈RNA是未伸展的，每條鏈都是分離的。然后單鏈RNA將被整合到RISC內(nèi)。然后RISC指導(dǎo)進(jìn)行序列特異性的mRNA降解，造成了翻譯抑制。例如，可以用編碼Neutrokine- α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R多肽的多核苷酸的編碼部分設(shè)計(jì)出長(zhǎng)度約為20到25個(gè)核苷酸的siRNA寡核苷酸。用近20到25個(gè)核苷酸片段、近9個(gè)核苷酸的分隔物以及所選的寡核苷酸片段的反向互補(bǔ)物涉及出DNA寡核苷酸。預(yù)計(jì)從此構(gòu)建體中生成的RNA轉(zhuǎn)錄體將自我折疊形成發(fā)夾環(huán)。發(fā)夾環(huán)RNA向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)造成了 RNA酶的加工處理，生成了短的雙鏈siRNA。該siRNA的一條鏈向RISC效應(yīng)物復(fù)合體內(nèi)的整合造成了 siRNA所祀向的mRNA的降解,抑制了 Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA 或 BAFF-R 的生成。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)外源性序列的轉(zhuǎn)錄在細(xì)胞內(nèi)生成了可以用于本發(fā)明方法中的Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA核酸。例如，轉(zhuǎn)錄出載體或其一部分，生成了可以用于本發(fā)明方法中的siRNA。這種載體含有編碼Neutrokine-a、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA核酸的序列。通過(guò)本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)方法可以構(gòu)建出這些載體。載體可以是可以在脊椎動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)的質(zhì)粒載體、病毒載體或本領(lǐng)域已知的其他載體。通常利用RNA聚合酶III啟動(dòng)子(例如U6或Hl)實(shí)現(xiàn)編碼Neutrokine-α、APRIL、TACI、BCMA或BAFF-R siRNA的轉(zhuǎn)錄，所述啟動(dòng)子常常指導(dǎo)小核RNA(snRNA)的轉(zhuǎn)錄。B細(xì)胞調(diào)節(jié)劑除了表達(dá)Neutrokine-α和APRIL的受體外，B淋巴細(xì)胞還表達(dá)多種細(xì)胞表面分子，所述分子的作用為告知B細(xì)胞細(xì)胞外微環(huán)境的情況，以及作為正向或負(fù)向地調(diào)節(jié)B細(xì)胞功能和生存的跨膜信號(hào)。在這些受體中，⑶19、⑶20和⑶22已經(jīng)被鑒定為治療干預(yù)的有希望的靶點(diǎn)。⑶20是膜內(nèi)在蛋白，其在作為鈣離子通道的復(fù)合體中發(fā)揮作用。⑶20鈣離子通道的抑制劑破壞了 Ca2+內(nèi)平衡和細(xì)胞周期進(jìn)程。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，抗CD20抗體可以用于本發(fā)明方法中。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗CD20抗體是美羅華 (利妥昔單抗)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗CD20抗體是TRU-015。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗CD20抗體是ocrelizumab(PR070769)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗⑶20·抗體是IMMU-106。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗CD20抗體是HuMax-CD20。⑶22是見(jiàn)于多種細(xì)胞包括B淋巴細(xì)胞中的唾液酸結(jié)合蛋白的siglec家族的成員。CD22和多種順式和反式糖配體的相互作用造成了對(duì)B細(xì)胞發(fā)育、增殖和活化的多個(gè)方面的調(diào)節(jié)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，抗CD22抗體可以用于本發(fā)明方法中。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的抗⑶22抗體是epratuzumab。其他免疫調(diào)節(jié)劑在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用一種或多種以下藥物來(lái)實(shí)踐本發(fā)明的方法騎悉(麥考酹酸莫酯；MMF、Orencia (abatacept ；C TLA4_Ig)、Riquent (阿貝莫司納；LJP 394) > Prestara (praserone) > Edratide (TV-4710) > Actemra ^(tocilizumab ;atlizumab)、VX-702、TRX I、IPP-201101、ABR-215757、鞘氨醇—I—磷酸酯-I (sphingosine-l-phosphate-l, S1P1)激動(dòng)劑、HuMax-Inflam (MDX 018)、MEDI-545(MDX-1103/1333)、RhuDex 、脫氧精胍菌素(Deoxyspergualin)、ENBREL (Etanercept)、抗TNF抗體、抗干擾素α抗體?；颊呷巳涸诖怂龅臄?shù)據(jù)來(lái)自臨床試驗(yàn),其中狼瘡患者接受了中和Neutrokine-α蛋白的抗體的治療，這顯著地緩解了具有ANA滴度為1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的患者中與狼瘡相關(guān)的癥狀(實(shí)施例I)。令人驚訝的是，與臨床試驗(yàn)所入選的整個(gè)患者人群不同，只有在一亞組患者中得到了測(cè)定疾病活動(dòng)度的臨床終點(diǎn)(例如SELENASLEDAI評(píng)分的降低，下面有更詳細(xì)的解釋)的顯著改善。因此，本發(fā)明涉及鑒定出最可能應(yīng)答于免疫調(diào)節(jié)劑例如Neutrokine-a拮抗劑治療的患者亞組。另外，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)在此是一種極為異質(zhì)性的疾病，其難以被準(zhǔn)確地診斷，因?yàn)榛颊呖赡苡卸喾N癥狀以及多種與狼瘡相關(guān)的癥狀也可見(jiàn)于大量其他的自身免疫性疾病的事實(shí)。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式提供了治療ANA滴度為1:80或更高、和/或其血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑,無(wú)論疾病的診斷如何。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式提供了治療ANA滴度為1:80或更高、和/或其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑，無(wú)論疾病的診斷如何；還包括在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定ANA滴度為1:80或更高、和/或其血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有非SLE的自身免疫病。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有干燥綜合征。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有硬皮病。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有多發(fā)性肌炎-皮肌炎。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有Felty綜合征。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或·等于30IU/mL的患者患有混合結(jié)締組織病。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血衆(zhòng)或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有雷諾綜合征。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，ANA滴度為1:80或更高、和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/mL的患者患有幼年型慢性關(guān)節(jié)炎。此外，值得注意的是，在兩個(gè)用中和Neutrokine-a蛋白的抗體治療患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的2期臨床試驗(yàn)(見(jiàn)，實(shí)施例I和3)中，發(fā)現(xiàn)具有基線自身抗體陽(yáng)性疾病的患者更可能應(yīng)答于治療。基線ANA滴度為1:80或更高、和/或抗dsDNA大于或等于30IU/mL的SLE患者比其ANA滴度小于1:80以及其抗dsDNA抗體水平小于30IU/mL的SLE患者顯示出更強(qiáng)的應(yīng)答。同樣，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中，觀察到基線類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體陽(yáng)性的患者比基線類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體陰性的患者顯示出更強(qiáng)的應(yīng)答。因此，在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了治療基線類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體陽(yáng)性的患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑，無(wú)論疾病診斷如何。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式提供了治療基線類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體陽(yáng)性的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑，無(wú)論疾病診斷如何；以及在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定基線類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體陽(yáng)性的患者。在具體實(shí)施方式
中，如果患者的血漿和/或血清中類風(fēng)濕因子^ 12IU/ml，則認(rèn)為患者的類風(fēng)濕因子陽(yáng)性。在具體實(shí)施方式
中，如果患者的血漿和/或血清中抗CCP抗體> 10單位，則認(rèn)為患者的抗CCP抗體陽(yáng)性。在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，提供了治療基線自身抗體陽(yáng)性的患者的方法，包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)齊U，而無(wú)論疾病診斷如何。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式提供了治療基線自身抗體陽(yáng)性的患者的方法,包括施用治療有效量的Neutrokine-a拮抗劑或本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑，而無(wú)論疾病診斷如何；以及在施用免疫調(diào)節(jié)劑之前確定基線自身抗體陽(yáng)性的患者。制備免疫調(diào)節(jié)劑制備和/或分離可以用于本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑的方法對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域的熟練人員是已知的。下面，簡(jiǎn)要地復(fù)習(xí)了可獲得的用于制備性質(zhì)上為蛋白源性的免疫調(diào)節(jié)劑(例如抗Neutrokine-α抗體、Neutrokine-α結(jié)合妝和多妝、Neutrokine-α受體蛋白以及上面提及的多肽的片段和變體)的方法。在一個(gè)實(shí)施方式中，將編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸插入到載體(例如克隆載體或表達(dá)載體)內(nèi)。載體例如可以是噬菌體、質(zhì)粒、病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以是能復(fù)制的或復(fù)制缺陷的。在后一情況中，一般只有在互補(bǔ)的宿主細(xì)胞內(nèi)才會(huì)發(fā)生病毒繁殖。編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸可以與含用于在宿主內(nèi)繁殖的選擇標(biāo)記物的載體相連接。通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)載體構(gòu)建體向宿主細(xì)胞內(nèi)的引入,所述技術(shù)包括但不限于磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、陽(yáng)離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感·染或其他方法。在多種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)例如Davis et al. , Basic Methods In MolecularBiology (1986)中都描述了這些方法。重組表達(dá)載體一般都包括復(fù)制起點(diǎn)和容許轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的選擇標(biāo)記物例如大腸桿菌的氨芐青霉素耐藥基因和釀酒酵母TRPl基因、指導(dǎo)下游結(jié)構(gòu)序列轉(zhuǎn)錄的源自高表達(dá)基因的啟動(dòng)子。這些啟動(dòng)子可以源自編碼糖酵解酶例如3-磷酸甘油酯激酶(PGK)、α-因子、酸性磷酸酶、或熱休克蛋白等的操縱子。裝配合適狀態(tài)的異源結(jié)構(gòu)序列和翻譯起始及終止序列、以及優(yōu)選的能夠指導(dǎo)翻譯蛋白分泌到原生質(zhì)周圍間隙或細(xì)胞外介質(zhì)中的前導(dǎo)序列。任選地，異源序列可以編碼融合蛋白，包括N末端的傳遞所需表征例如穩(wěn)定或簡(jiǎn)化所表達(dá)的重組產(chǎn)物的純化的鑒定肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸與合適的異源調(diào)節(jié)元件(例如啟動(dòng)子或增強(qiáng)子)如噬菌體λ PL啟動(dòng)子、大腸桿菌lac、trp、phoA、tac啟動(dòng)子、SV40早期和晚期啟動(dòng)子和逆轉(zhuǎn)錄病毒LTR的啟動(dòng)子可操縱地相連。其他合適的啟動(dòng)子對(duì)于本領(lǐng)域人員是已知的。如上所述,表達(dá)載體優(yōu)選地包括至少一個(gè)選擇標(biāo)記物。這些標(biāo)記物包括真核細(xì)胞培養(yǎng)的二氫葉酸還原酶、G418或新霉素耐藥基因以及大腸桿菌和其他細(xì)菌培養(yǎng)的卡那霉素或氨芐青霉素耐藥基因。合適宿主的代表性實(shí)例包括但不限于細(xì)菌細(xì)胞例如大腸桿菌、鏈霉菌和鼠傷寒沙門(mén)氏菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞例如酵母菌細(xì)胞(例如釀酒酵母或畢赤酵母(ATCC編號(hào)201178));昆蟲(chóng)細(xì)胞例如Drosophila S2和Spodoptera Sf9細(xì)胞；動(dòng)物細(xì)胞例如CH0、COS 293和Bowes黑色素瘤細(xì)胞；和植物細(xì)胞。上述宿主細(xì)胞的合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件在本領(lǐng)域是已知的。宿主細(xì)胞可以是更高等的真核細(xì)胞例如哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如人源細(xì)胞)或耕地等的真核細(xì)胞例如酵母細(xì)胞、或者宿主細(xì)胞可以使原核細(xì)胞例如細(xì)菌細(xì)胞?？梢赃x出宿主菌株，其按所需的特殊方式調(diào)控所插入的基因序列的表達(dá)，或修飾并處理基因產(chǎn)物。在存在特定的誘導(dǎo)劑時(shí)，可以提高特定啟動(dòng)子的表達(dá)；因此可以控制遺傳工程化過(guò)的多肽的表達(dá)。此夕卜，不同的宿主細(xì)胞具有翻譯和翻譯后加工和修飾(例如磷酸化、裂解)蛋白的特征性的和特殊的機(jī)制?？梢赃x擇合適的細(xì)胞系，以保證所需的對(duì)所表達(dá)的外來(lái)蛋白的修飾和加工處理。對(duì)用于在宿主細(xì)胞中的表達(dá)的合適的載體和啟動(dòng)子的選擇是公知的方法，對(duì)于表達(dá)載體構(gòu)建、向宿主內(nèi)引入載體以及宿主內(nèi)的表達(dá)的必要技術(shù)都是本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。通過(guò)插入與功能性啟動(dòng)子處于可操縱閱讀相的編碼所需蛋白的結(jié)構(gòu)性DNA序列連同合適的翻譯起始和終止信號(hào)構(gòu)建出用于細(xì)菌的表達(dá)載體。載體將包括一個(gè)或多個(gè)表型選擇標(biāo)記物和復(fù)制起點(diǎn)，以保證維持載體，以及如果需要?jiǎng)t提供載體在宿主內(nèi)的擴(kuò)增。用于轉(zhuǎn)化的合適的原核細(xì)胞宿主包括大腸桿菌、枯草桿菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌和假單胞菌屬、鏈霉菌屬和葡萄球菌屬內(nèi)的不同菌種，盡管也可以選擇其他的宿主細(xì)胞。作為代表性的但不受限的實(shí)例，用于細(xì)菌的表達(dá)載體可以包括源自商品化可獲得的質(zhì)粒中的選擇標(biāo)記物和細(xì)菌的復(fù)制起點(diǎn)，所述質(zhì)粒包括公知的克隆載體pBR322(ATCC 37017)的遺傳元件。這些商品化的載體包括例如 pKK223_3 (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sweden)和 GEMI (Promega Biotec, Madison, WI, USA) 這些pBR322 “骨架”部分與合適的載體以及所表達(dá)的結(jié)構(gòu)序列相組合。在優(yōu)選用于細(xì)菌的載體中，包括pHE4-5(ATCC編碼No. 209311及其變體)、pQE70、pQE60 和 pQE-9,購(gòu)自 QIAGEN, Inc. , supra ；pBS 載體、Phagescript 載體、Bluescript 載體、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46A,購(gòu)自 Stratagene ;和 ptrc99a、pKK223_3、PKK233-3、pDR540、pRIT5,購(gòu)自 Pharmacia ;pYES2、pYDl、pTEFl/Zeo、pYES2/GS、pPICZ·、pGAPZ、pGAPZalpha、pPIC9、pPIC3. 5、pHIL_D2、pHIL-Sl、pPIC3. 5K、pPIC9K、和 PA0815(所有都購(gòu)自 Invitrogen, Carlsbad, CA)。優(yōu)選的真核載體是 pWLNE0、pSV2CAT、p0G44、pXTl 和pSG,購(gòu)自 Stratagene ;和 pSVK3、pBPV、pMSG 和 pSVL (購(gòu)自 Pharmacia)。其他合適的載體對(duì)于本領(lǐng)域人員是顯而易見(jiàn)的。在轉(zhuǎn)化了合適的宿主株以及宿主株生長(zhǎng)到合適的細(xì)胞密度之后，用合適的方式(例如溫度變化或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇性啟動(dòng)子，再培養(yǎng)細(xì)胞一段時(shí)間。通常通過(guò)離心收集細(xì)胞，用物理或化學(xué)方法破壞細(xì)胞，保留所生成的粗提取物進(jìn)行進(jìn)一步的純化?？梢杂萌我槐憷姆椒ò▋鋈谘h(huán)、超聲、機(jī)械破壞、或應(yīng)用細(xì)胞裂解劑破壞表達(dá)蛋白所采用的微生物細(xì)胞。這些方法對(duì)于本領(lǐng)域人員是公知的。在一個(gè)實(shí)施方式中，用酵母菌畢赤酵母在真核系統(tǒng)中表達(dá)Neutrokine-α蛋白。畢赤酵母是一種嗜甲基酵母，其可以將甲醇代謝為其唯一的碳源。在甲醇代謝途徑中的主要步驟是利用氧氣將甲醇氧化成甲醛。這個(gè)反應(yīng)是受酶醇氧化酶所催化的。為了將甲醇代謝為其唯一的碳源，畢赤酵母必須生成高水平的純氧化酶，部分原因是因?yàn)榇佳趸笇?duì)氧氣的相對(duì)低的親和力。因此，在依賴甲醇作為主要碳源的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，兩個(gè)醇氧化酶基因(A0X1)其中之一的啟動(dòng)子區(qū)是高度活化的。在存在甲醇時(shí)，從AOXl基因生成的醇氧化酶占到了畢赤酵母中總可溶性蛋白的近30%。見(jiàn)，Ellis, S. B. ,et al. , Mol. Cell.Biol. 5:1111-21 (1985) ；Koutz, P. J, et al. , Yeast 5:167-77 (1989) ；Tschopp, J. F. , etal. ,Nucl. Acids Res. 15:3859-76 (1987)。因此，在生長(zhǎng)在甲醇中的畢赤酵母中，受所有或部分AOXl調(diào)節(jié)序列的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)下的異源編碼序列是異常高水平表達(dá)的。在一個(gè)實(shí)例中，在基本上如"PichiaProtocols:Methods inMolecularBiology, " D. R. Higgins and J. Cregg, eds. The Humana Press, Totowa, NJ, 1998所述的畢赤酵母系統(tǒng)中，用質(zhì)粒載體PPIC9K表達(dá)編碼在此定義的免疫調(diào)節(jié)蛋白或其部分的DNA。通過(guò)與位于多個(gè)克隆位點(diǎn)上游的畢赤酵母堿性磷酸酶(PHO)分泌信號(hào)肽(即前導(dǎo)序列)相連的強(qiáng)AOXl啟動(dòng)子的作用，該表達(dá)載體容許表達(dá)并分泌免疫調(diào)節(jié)蛋白。
本領(lǐng)域人員容易明白，可以用多種其他的酵母載體取代pPIC9K，例如pYES2、PYDK pTEFl/Zeo、pYES2/GS、pPICZ、pGAPZ、pGAPZ α、pPIC9、pPIC3. 5、pHIL_D2、pHIL-Sl、PPIC3. 5K、和PA0815 ;只要所提出的表達(dá)構(gòu)建體提供了用于轉(zhuǎn)錄、翻譯、分泌(如果需要)等的合適定位的信號(hào)，包括所需的框內(nèi)AUG。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)將本發(fā)明的異源多核苷酸克隆到表達(dá)載體例如pGAPZ或PGAPZ α中并容許在沒(méi)有甲醇的條件下生長(zhǎng)酵母培養(yǎng)物可以獲得異源編碼序列的高水平表達(dá)。通過(guò)將增強(qiáng)子序列加入到載體內(nèi)就增加了高等真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的DNA。增強(qiáng)子是DNA的順式作用元件，一般是從約10到300bp，其作用于啟動(dòng)子以增加其轉(zhuǎn)錄。實(shí)例包括復(fù)制起點(diǎn)后側(cè)IOObp到270bp處的SV40增強(qiáng)子、巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子增強(qiáng)子、復(fù)制起點(diǎn)后側(cè)的多瘤增強(qiáng)子以及腺病毒增強(qiáng)子。也可以用各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白。哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例包·括Gluzman (Cell 23:175(1981))所述的猴腎成纖維細(xì)胞的C0S-7細(xì)胞系，和其他能夠表達(dá)兼容載體的細(xì)胞系例如C127、3T3、CH0、HeLa和BHK細(xì)胞系。哺乳動(dòng)物表達(dá)載體包括復(fù)制起點(diǎn)、合適的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子、也包括任何必需的核糖體結(jié)合位點(diǎn)、多腺苷酸化位點(diǎn)、剪切供體和受體位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止序列、和5’側(cè)的非轉(zhuǎn)錄序列。可以用源自SV40剪切體的DNA序列和多腺苷酸化位點(diǎn)提供所需的非轉(zhuǎn)錄的遺傳元件。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，使用被設(shè)計(jì)成表達(dá)免疫調(diào)節(jié)蛋白的一部分例如Neutrokine-α受體(例如TACI、BCMA和BAFF-R)的細(xì)胞外區(qū)的構(gòu)建體。本領(lǐng)域一些熟練人員能夠使用分別為SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7和SEQ ID NO:8或分別為SEQ ID N0:9和SEQ ID NO: 10的多核苷酸或多肽設(shè)計(jì)出多核苷酸引物，以生成這種表達(dá)構(gòu)建體。宿主細(xì)胞被用于表達(dá)編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸。這些宿主細(xì)胞包括脊椎動(dòng)物來(lái)源的，特別是哺乳動(dòng)物來(lái)源的原代的、次級(jí)的和永生的宿主細(xì)胞。在一些情況中，宿主細(xì)胞已經(jīng)被遺傳工程化成缺失或取代了內(nèi)源性遺傳材料(例如Neutrokine-α編碼序列)和/或包括遺傳材料(例如異源性多核苷酸序列)。在一些情況中，宿主細(xì)胞被修飾成啟動(dòng)和/或改變編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的內(nèi)源性多核苷酸的表達(dá)。例如，可以用本領(lǐng)域已知的技術(shù)通過(guò)同源重組可操縱地連接異源控制區(qū)(例如啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子)和內(nèi)源性多核苷酸序列(見(jiàn)例如1997年6月24日提交的美國(guó)專利5，641，670 ; 1996年9月26日出版的國(guó)際出版物WO 96/29411 ;1994年8月4日出版的國(guó)際出版物WO 94/12650 ；Kolleret al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935 (1989) ；and Zijlstra et al. , Nature342:435-438(1989);在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng))。可以用傳統(tǒng)的方式使用在此所述的細(xì)胞來(lái)生成免疫調(diào)節(jié)蛋白。或者，也可以利用源自本發(fā)明的DNA構(gòu)建體的RNA，采用無(wú)細(xì)胞翻譯系統(tǒng)來(lái)生成免疫調(diào)節(jié)蛋白?？梢员磉_(dá)或合成修飾形式的所需的閱讀框AUG，例如融合蛋白(包括經(jīng)肽鍵與(不同蛋白的)異源蛋白序列相連的多肽)，不僅可以包含分泌信號(hào)，還可以包含額外的異源功能區(qū)。用本領(lǐng)域已知的方法通過(guò)將編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸和編碼所需的氨基酸序列的所需核酸序列彼此連接在合適的閱讀框內(nèi)，并用本領(lǐng)域已知的方法表達(dá)融合蛋白產(chǎn)物可以制備出這種融合蛋白?；蛘?，通過(guò)蛋白合成技術(shù)例如通過(guò)使用肽合成儀可以制備出這種融合蛋白。因此，例如，可以向多肽的N末端加入額外的氨基酸區(qū)，特別是帶電荷的氨基酸，以提高在宿主細(xì)胞內(nèi)、純化期間、或隨后的操作和儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性和持久性。也可以將肽基序加入到多肽內(nèi)，以促進(jìn)純化?？梢栽谧罱K制備出多肽之前去除這些區(qū)域。向多肽內(nèi)添加肽基序以引發(fā)分泌或排泄、提高穩(wěn)定性和促進(jìn)純化等都是本領(lǐng)域常用的和常規(guī)的技術(shù)。在一個(gè)實(shí)施方式中，編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸可以與信號(hào)序列融合，所述信號(hào)序列將指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)蛋白定位于原核或真核細(xì)胞的特殊的隔室內(nèi)和/或指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)蛋白從原核或真核細(xì)胞內(nèi)分泌出來(lái)。例如，在大腸桿菌中，希望指導(dǎo)蛋白被分泌到原生質(zhì)周間隙內(nèi)?？梢耘c本發(fā)明的多肽融合以便指導(dǎo)多肽表達(dá)到細(xì)菌的原生質(zhì)周間隙內(nèi)的信號(hào)序列或蛋白(或其片段)的實(shí)例包括但不限于PelB信號(hào)序列、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)信號(hào)序列、MBP、ompA信號(hào)序列、原生質(zhì)周的大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞基的信號(hào)序列和堿性磷酸酶的信號(hào)序列。可以商品化獲得一些用于構(gòu)建指導(dǎo)蛋白定位的融合蛋白的載體，例如NewEngland Biolabs的pMAL載體系列(特別是pMAL-p系列)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸可以與PelB果膠酶信號(hào)序列融合，以增加這些多肽在革蘭陰性細(xì)菌中的表達(dá)和純化的效率。見(jiàn)，美國(guó)專利5，576，195和5，846，818，在此通過(guò)引用將其·全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)蛋白融合以便指導(dǎo)所述蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的分泌的信號(hào)肽的實(shí)例包括但不限于MPIF-I信號(hào)序列(GenBank編號(hào)AAB51134的第I到21位氨基酸)、斯鈣素(stanniocalcin)信號(hào)序列(MLQNSAVLLLLVISASA，SEQ ID NO: 27)、和共有信號(hào)序列(MPTffAffffLFLVLLLALffAPARG, SEQ ID NO:28)。可以結(jié)合顆粒癥病毒表達(dá)系統(tǒng)一起使用的合適的信號(hào)序列是gp67信號(hào)序列(GenBank編號(hào)AAA72759的第I到19位氨基酸)。優(yōu)選的融合蛋白包括來(lái)自免疫球蛋白的異源區(qū)，其用于穩(wěn)定并純化蛋白。例如，EP-A-O 464533(對(duì)應(yīng)于加拿大2045869)闡述了包括免疫球蛋白分子恒定區(qū)的不同部分以及另一種人類蛋白或其部分的融合蛋白。在很多情況中，融合蛋白中的Fe部分非常適用于治療和診斷，并因此造成了改善的藥物動(dòng)力學(xué)性能(EP-A 0232262)。另一方面，對(duì)于某些應(yīng)用而言，需要在以在此所述的有利的方式表達(dá)、檢測(cè)并純化出融合蛋白之后能夠缺失Fe部分。當(dāng)Fe部分被證實(shí)其對(duì)用于治療和診斷是妨礙時(shí)就是這種情況，例如當(dāng)融合蛋白被用作免疫接種的抗原時(shí)。在藥物研發(fā)中，例如人類蛋白如hIL-5已經(jīng)與Fe部分融合，以便用高通量篩選檢測(cè)法鑒定出hIL-5的拮抗劑。見(jiàn)D. Bennett et al. , J. Molecular Recognition8:52-58(1995)和 K. Johanson et al.，J. Biol. Chem. 270:9459-9471 (1995)?？梢杂糜诒景l(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白包括天然純化產(chǎn)物、化學(xué)合成方法的產(chǎn)物、和經(jīng)重組技術(shù)從原核或真和宿主中生成的產(chǎn)物，所述宿主包括例如細(xì)菌、酵母菌、高等植物、昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。根據(jù)在重組生產(chǎn)方法中所采用的宿主細(xì)胞的不同，免疫調(diào)節(jié)蛋白可以被糖基化或者可以未被糖基化。另外，免疫調(diào)節(jié)蛋白也可以包含初始的修飾甲硫氨酸殘基，在一些情況中這是宿主介導(dǎo)的加工處理的結(jié)果。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以化學(xué)合成可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白(例如見(jiàn) Creighton, 1983，Proteins: Structures and Molecular Principles, ff.
H.Freeman & Co. , N. Y. , and Hunkapiller, M. , et al. , 1984, Nature 310:105-111)。例如，利用肽合成儀可以合成對(duì)應(yīng)于免疫調(diào)節(jié)蛋白的一個(gè)片段的肽。此外，如果需要，還可以向編碼免疫調(diào)節(jié)蛋白的多核苷酸序列中作為取代或添加的氨基酸來(lái)引入非常用的氨基酸或化學(xué)氨基酸類似物。非常用的氨基酸包括但不限于常用氨基酸的D-異構(gòu)體、2，4- 二氨基丁酸、a-氨基異丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、g-Abu、e-AhX、6-氨基己酸、Aib、2_氨基異丁酸、3-氨基丙酸、鳥(niǎo)氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、羥脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、丙氨酸環(huán)己酯、b-丙氨酸、氟氨基酸、設(shè)計(jì)者氨基酸例如b-甲基氨基酸、Ca-甲基氨基酸、Na-甲基氨基酸、和一般的氨基酸類似物。此外，氨基酸可以是D (右旋)或L(左旋)體。在翻譯期間或之后可以不同地修飾可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白，例如糖基化、乙?；?、磷酸化、氨?；⒁阎Ｗo(hù)性/封閉性基團(tuán)的衍生化、蛋白裂解性降解、與抗體分子或其他細(xì)胞配體的連接等。用已知的技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)所有的多種化學(xué)修飾，所述技術(shù)包括但不限于溴化氰、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜酶、V8蛋白酶、NaBH4的特殊的化學(xué)降解、甲?；饔谩⒀趸饔?、還原作用、存在衣霉素時(shí)的代謝性合成。額外的翻譯后修飾包括例如N-連接或O-連接的糖鏈、N末端或C-末端的加工處理、化學(xué)部分與氨基酸骨架的附著、N連接或O連接的糖鏈的化學(xué)修飾、以及原核宿主細(xì)胞·表達(dá)所造成的N末端甲硫氨酸殘基的添加或缺失。也可以用可檢測(cè)標(biāo)記例如酶的、熒光的、放射性同位素的或親和的標(biāo)記修飾多肽，以便容許檢測(cè)并分離蛋白。合適的酶的實(shí)例包括辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、β -半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實(shí)例包括抗生物素蛋白鏈菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光物質(zhì)的實(shí)例包括生物素、傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、dichlorotriazinylamine突光素、氯化丹?；蛟寮t蛋白；發(fā)光物質(zhì)的實(shí)例包括魯米諾；生物發(fā)光物質(zhì)的實(shí)例包括螢光素酶、螢光素、和水母素；合適的放射性物質(zhì)的實(shí)例包括放射性金屬離子例如α粒子輻射劑例如213Bi、或其他放射性同位素例如碘(1311、1251、1231、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氣(3H)、銦(115mIn,113mIn,112In,111In)、和锝(99Tc^99mTc)、 它(201Ti)、鎵(68Ga^67Ga)、鈀(103Pd)、鑰(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho,90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、和117錫。在具體的實(shí)施方式中，可以用銪標(biāo)記可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白。例如，依據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，可以利用DELFIA Eu標(biāo)記試劑盒(目錄號(hào)#1244-302，Perkin ElmerLife Sciences, Boston, MA)用銪標(biāo)記免疫調(diào)節(jié)蛋白(例如Neutrokine-α拮抗劑)。在具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)蛋白(例如)與大環(huán)螯合劑相附著，所述大環(huán)螯合劑用于將放射性金屬離子，包括但不限于mIn、177Lu、9°Υ、166Ηο、和153Sm,綴合于多肽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，與附著于免疫調(diào)節(jié)劑的大環(huán)螯合劑相連的放射性金屬離子是mIn。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，與附著于免疫調(diào)節(jié)劑的大環(huán)螯合劑相連的放射性金屬離子是9°Y。在具體的實(shí)施方式中，大環(huán)螯合劑是1，4，7，10_四氮雜環(huán)十二燒-N, N ' , N " , N "'-四乙酸(1，4，7，10-tetraazacycIododecane-N, N ' , N ",N" ' -tetraacetic acid, D0TA)。在其他具體的實(shí)施方式中，DOTA經(jīng)連接物分子與免疫調(diào)節(jié)蛋白相附著。用于綴合DOTA和多肽的連接物分子是本領(lǐng)域常見(jiàn)的，見(jiàn)例如DeNardo et al. , Clin Cancer Res. 4(10):2483-90, 1998 ；Peterson et al. , Bioconjug.Chem. 10 (4) : 553-7，1999 ;和 Zimmerman et al, Nucl. Med. Biol. 26 (8) : 943-50，1999，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。另外，美國(guó)專利5，652，361和5，756，065闡述了可以與抗體相綴合的螯合劑以及制備并使用所述螯合劑的方法，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。盡管美國(guó)專利5，652，361和5，756，065集中于螯合劑和抗體的綴合作用，本領(lǐng)域人員容易采用在此所述的方法來(lái)綴合螯合劑和其他多肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以用生物素標(biāo)記可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白?？梢蕴峁└郊觾?yōu)點(diǎn)例如增加多肽的可溶性、穩(wěn)定性以及體內(nèi)或體外循環(huán)時(shí)間或者降低免疫原性(見(jiàn)美國(guó)專利4，179，337)的免疫調(diào)節(jié)蛋白的化學(xué)修飾衍生物也可以用于本發(fā)明方法中。用于衍生化的化學(xué)部分可以選自水溶性聚合物例如聚乙二醇、乙烯乙二醇/丙烯乙二醇共聚體、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇等?？梢栽诜肿觾?nèi)的隨機(jī)位置或者在分子內(nèi)的預(yù)定位置修飾多肽，所述多肽可以包括1、2、3或更多個(gè)相連的化學(xué)部分。聚合物可以是任一分子量，可以是分支的或不分支的。對(duì)于聚乙二醇而言，為了操作和生產(chǎn)的便利性，優(yōu)選的分子量是約IkDa和約IOOkDa之間(術(shù)語(yǔ)“約”表示在聚乙二醇制劑中，一些分子可能要比給定的分子量更重，一些分子可能更輕)?？梢允褂闷渌某叽纾Q于所需的治療譜(例如所需的持續(xù)釋放的持續(xù)時(shí)間、作用、任何對(duì)生物學(xué)活性·方面的作用、操作的便利性、抗原性的程度和缺乏以及聚乙二醇對(duì)治療蛋白或類似物的其他已知的作用)。例如，聚乙二醇的平均分子量可以約為200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10，000、10，500,11,000,11,500,12,000,12,500,13,000,13,500,14,000,14,500,15,000,15,500、16，000,16,500,17, 000,17, 500,18, 000,18, 500,19, 000,19, 500,20, 000,25, 000,30, 000、35，000,40,000,50,000,55, 000,60, 000,65, 000,70, 000,75, 000,80, 000,85, 000,90, 000、95，000、或 100，OOOkDa0如上所述，聚乙二醇可以具有分支結(jié)構(gòu)。例如在美國(guó)專利5，643，575 ；Morpurgo et al. ,Appl.Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996) ；Vorobjev etal. , Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999) ^PICaliceti et al. , Bioconjug.Chem. 10:638-646 (1999)中已經(jīng)描述了分支的聚乙二醇,在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入
本申請(qǐng)。應(yīng)當(dāng)根據(jù)其對(duì)蛋白的功能區(qū)或抗原區(qū)的作用來(lái)連接聚乙二醇分子(或其他化學(xué)部分)和蛋白。本領(lǐng)域人員可以得到多種連接方法，例如EP 0401384，在此通過(guò)引用將其并入本申請(qǐng)(結(jié)合 PEG 和 G-CSF)，也見(jiàn)于 Malik et al. , Exp. Hematol. 20:1028-1035 (1992)(報(bào)道了利用三氟乙基磺酰氯(tresylchloride)將GM-CSF聚乙二醇化)。例如,通過(guò)反應(yīng)
基團(tuán)例如游離的氨基或羧基，聚乙二醇可以與氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。反應(yīng)基團(tuán)是那些活性聚乙二醇分子可以結(jié)合的基團(tuán)。具有游離氨基的氨基酸殘基可以包括例如賴氨酸和N末端的氨基酸殘基；那些具有游離羧基的氨基酸殘基可以包括天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基以及C末端的氨基酸殘基。巰基也可以用作連接聚乙二醇分子的反應(yīng)基團(tuán)。治療性目的所優(yōu)選的是氨基連接，例如N末端或賴氨酸的氨基連接。如上所提示的那樣，聚乙二醇可以通過(guò)與任何氨基酸殘基的連接與蛋白相連接。例如，聚乙二醇可以通過(guò)與賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸殘基的共價(jià)鍵與蛋白相連接。可以采用一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)化學(xué)物連接聚乙二醇和蛋白的特殊的氨基酸殘基(例如賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或者蛋白的一種以上類型的氨基酸殘基(例如賴氨酸、組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸及其組合)。
可以特殊地要求在N末端化學(xué)修飾蛋白。利用聚乙二醇作為舉例說(shuō)明，可以從多種聚乙二醇分子中選出聚乙二醇(根據(jù)分子量、分支等)、可以選擇反應(yīng)混合物中的聚乙二醇分子與蛋白(或肽)分子的比例、所進(jìn)行的聚乙二醇化反應(yīng)的類型、以及獲得所選的N末端聚乙二醇化蛋白的方法。獲得N末端聚乙二醇制劑的方法(即如果需要將該基序與其他單聚乙二醇化的基序分離開(kāi))可以是從聚乙二醇化蛋白分子群中純化出N末端聚乙二醇化的物質(zhì)。通過(guò)利用了在具體蛋白質(zhì)中可用于衍生化的不同類型的伯氨基(賴氨酸對(duì)N末端氨基酸)的不同的反應(yīng)性的還原性烷基化可以實(shí)現(xiàn)在N末端修飾中被化學(xué)修飾的選擇性蛋白。在合適的反應(yīng)條件下，實(shí)現(xiàn)了含羰基聚合物在N末端對(duì)蛋白的基本上選擇性的衍生化。如上所述，用多種方法都可以實(shí)現(xiàn)對(duì)本發(fā)明蛋白的聚乙二醇化。例如，聚乙二醇可以直接地或者通過(guò)插入連接物與蛋白相連接。在Delgado et al. , Crit. Rev. Thera. DrugCarrier Sys. 9:249-304(1992) ；Francis et al. , Intern. J. of Hematol. 68:1-18(1998)；美國(guó)專利4，002，531 ;美國(guó)專利5，349，052 ；W0 95/06058 ;和WO 98/32466中描述了用于連接聚乙二醇和蛋白的無(wú)連接物系統(tǒng)，在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng)。用于無(wú)插入連接物直接連接聚乙二醇和蛋白的氨基酸殘基的一個(gè)系統(tǒng)采用了三·氟乙基磺?；腗PEG,這是通過(guò)用三氟乙基磺酰氯(tresylchloride) (ClSO2CH2CF3)修飾單甲氧基聚乙二醇(MPEG)生成的產(chǎn)物。在用三氟乙基磺?；腗PEG與蛋白反應(yīng)之后，聚乙二醇與蛋白的氨基直接相連。因此，發(fā)明包括通過(guò)本發(fā)明的蛋白與具有2，2，2-三氟乙基磺?；木垡叶挤肿拥姆磻?yīng)生成的蛋白-聚乙二醇綴合物。也可以利用不同的插入連接物連接聚乙二醇和蛋白。例如，美國(guó)專利5，612，460(在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))闡述了用于連接聚乙二醇和蛋白的氨基甲酸酯連接物。通過(guò)蛋白和化合物例如MPEG-琥珀酰亞胺基丁二酸酯(MPEG-succinimidy I succinate)、經(jīng) 1，I '-擬二咪唑活化的 MPEG、MPEG-2, 4, 5-三氯苯基碳酸酯(MPEG-2, 4, 5-trichloropeny I carbonate)、MPEG-對(duì)硝基酌■碳酸酯(MPEG-p-n i tropheno I carbonate)和各種MPEG-琥拍酸衍生物的反應(yīng)也可以生成其中經(jīng)連接物連接聚乙二醇和蛋白的蛋白-聚乙二醇綴合物。在WO 98/32466中描述了多種額外的用于連接聚乙二醇和蛋白的聚乙二醇衍生物和反應(yīng)化學(xué)物，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。利用在此給出的反應(yīng)化學(xué)物生成的聚乙二醇化的蛋白產(chǎn)物包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。與本發(fā)明的每種蛋白相連的聚乙二醇基序的數(shù)目(即取代程度)也可以有所不同。例如，本發(fā)明的聚乙二醇蛋白可以連接平均1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、17、20、或更多個(gè)聚乙二醇分子。同樣，平均取代程度是在例如每個(gè)蛋白分子1-3、2-4、3-5、
4-6、5-7、6-8、7-9、8-10、9-11、10-12、11-13、12-14、13-15、14-16、15-17、16-18、17-19、或18-20 個(gè)聚乙二醇基序的范圍之內(nèi)。在 Delgado et al. , Crit. Rev. Thera. DrugCarrierSys. 9:249-304(1992)中討論了用于確定取代程度的方法。用已知的方法可以回收并純化可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)蛋白，所述方法包括但不限于硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陽(yáng)離子或陰離子交換色譜法、磷酸纖維素色譜法、疏水性相互作用色譜法、親和色譜法、羥磷灰石色譜法和凝集素色譜法。最優(yōu)選地采用高效液相色譜法(“HPLC”)進(jìn)行純化。制劑和施用
本發(fā)明提供通過(guò)給對(duì)象施用治療有效量的包括免疫調(diào)節(jié)劑例如Neutrokine-α拮抗劑的藥物組合物的治療、抑制和預(yù)防的方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-α抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-α拮抗劑是TACI-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中,Neutrokine-α拮抗劑是BAFF-R-Fc蛋白。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是抗Neutrokine-α肽抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，Neutrokine-a拮抗劑是發(fā)揮顯性負(fù)調(diào)控物作用的Neutrokine-α蛋白片段或變體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑是基本上純化的(即基本上沒(méi)有限制其作用或生成不必要的副作用的物質(zhì))。對(duì)象優(yōu)選地是動(dòng)物，包括但不限于動(dòng)物例如牛、豬、馬、雞、貓、狗等，優(yōu)選地是哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選地是人。結(jié)合個(gè)體患者的臨床狀況(特別是單獨(dú)的免疫調(diào)節(jié)劑治療的副作用)、含免疫調(diào)節(jié)劑的組合物的轉(zhuǎn)運(yùn)位點(diǎn)、施用方法、施用計(jì)劃、和其他醫(yī)學(xué)從業(yè)人員已知的因素，按照與好的醫(yī)療實(shí)踐相符的方式來(lái)制劑和定量免疫調(diào)節(jié)劑。因此，根據(jù)這些考慮確定出在此提出的免疫調(diào)節(jié)劑的“治療有效量”。各種轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)都是已知的，并且可以用于施用包括免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物，例·如脂質(zhì)體膠囊化、微粒、微膠囊、能夠表達(dá)化合物的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用(見(jiàn)例如Wu and Wu，J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987))、將核酸構(gòu)建為逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體的一部分等。給藥方法包括但不限于皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜夕卜、和口服途徑?？梢酝ㄟ^(guò)任何便利的途徑例如通過(guò)輸注或彈丸式注射、通過(guò)上皮或粘膜層(例如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)的吸收施用包括免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物，可以與其他生物學(xué)活性藥物一起施用包括免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物。施用可以是全身的或局部的。另夕卜，通過(guò)合適的途徑包括腦室內(nèi)和鞘內(nèi)注射將包括免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物引入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)可能是需要的；通過(guò)例如與儲(chǔ)存囊如0_aya囊相連的腦室內(nèi)導(dǎo)管可能有助于腦室內(nèi)注射。例如通過(guò)使用吸入器或霧化器和霧化劑的制劑也可以采用肺部施用。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療藥物(例如本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑)的藥物制劑。具體地，本發(fā)明涉及本質(zhì)上為蛋白源性的治療藥物(例如蛋白和抗體)的藥物制劑。本發(fā)明的藥物制劑含有可藥用賦形劑。一般而言，本發(fā)明的藥物制劑被配制成使得治療藥物保留了其物理的、化學(xué)的和生物學(xué)的活性?？梢栽诤线m的溫度下儲(chǔ)存本發(fā)明的藥物制劑。例如，可以在2-8° C、-40° C、或-80° C下儲(chǔ)存本發(fā)明的藥物制劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，穩(wěn)定制劑是其中在2年內(nèi)觀察到治療藥物不到約1%發(fā)生凝集、2年內(nèi)觀察到治療藥物不到約1%發(fā)生氧化、和/或在2年內(nèi)觀察到不到約4%治療藥物發(fā)生脫酰胺作用的制劑。例如通過(guò)結(jié)合所需的劑量容積和施用方式來(lái)確定出本發(fā)明的藥物制劑中的治療藥物的量。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的治療藥物的濃度是約 l-160mg/ml、約 0_155mg/ml、約 20-150mg/ml、約 30_145mg/ml、約 40_140mg/ml、約 50_135mg/ml、約 60_130mg/ml、約 70_125mg/ml、約 80_120mg/ml、約 90_115mg/ml、約95-110mg/ml、約為100-105mg/ml、或約100mg/ml。上述濃度范圍中間的濃度范圍例如約ll-154mg/ml預(yù)計(jì)也是本發(fā)明的一部分。例如，預(yù)計(jì)包括利用上面所述的任一數(shù)值作為上限和/或下限的組合的數(shù)值范圍。“約”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2、或l)mg/ml的范圍。本發(fā)明的水性藥物制劑包括pH緩沖液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑所用的緩沖液的pH值范圍是從約5到約7。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑所用的緩沖液的PH值范圍是從約5. 5到約6. 5。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑所用的緩沖液的PH值范圍是從約5. 8到約6. 2。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑所用的緩沖液的PH值范圍是約6. O。在上面所述的pH值范圍中間的PH值范圍預(yù)計(jì)也是本發(fā)明的一部分。例如，預(yù)計(jì)包括利用上面所述的任一數(shù)值作為上限和/或下限的組合的數(shù)值范圍。“約”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小O. 5、0. 4、0. 3、0. 2、或O. IpH值單位的范圍。將pH值控制在優(yōu)選范圍內(nèi)的緩沖劑實(shí)例包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、琥珀酸鹽(例如琥珀酸鈉)、葡萄糖酸鹽、組氨酸鹽、檸檬酸鹽、Tris鹽、磷酸鹽、甘氨酰甘氨酸和其他有機(jī)酸緩沖劑。額外的示例緩沖劑是那些可藥用的以及可以從合適的酸、堿及其鹽中生成的緩沖劑，例如下面所定義的那些緩沖劑。可藥用的酸包括在其所被配制的濃度和方式方面為無(wú)毒的無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸。例如，合適的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸、高氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磺酸、亞磺酸、對(duì)氨基苯磺酸、磷酸、碳酸等。合適的有機(jī)酸包括直鏈和直鏈烷基酸、芳香基酸、環(huán)酸、環(huán)脂肪酸、芳香族脂肪酸、異環(huán)酸、飽和酸、不飽和酸、單、雙或三羧酸，包括例如甲酸、乙酸、2-羥乙酸、三氟乙酸、苯乙酸、三甲基乙酸、叔丁乙酸、鄰氨基苯甲酸、丙酸、2-羥基丙酸、2-氧丙酸、丙二酸、·環(huán)戊烷丙酸、環(huán)戊烷丙酸、3-苯丙酸、丁酸、丁二酸、苯甲酸、3-(4-羥苯基)苯甲酸、2-乙酸-苯甲酸、抗壞血酸、肉桂酸、月桂硫酸、硬脂酸、粘康酸、扁桃酸、琥珀酸、雙羥萘酸、反丁烯二酸、蘋(píng)果酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、丙二酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、羥乙酸、葡萄糖酸、葡糖酸、丙酮酸、乙醒酸、草酸、mesylate、琥拍酸、水楊酸、鄰苯二甲酸、palmoic、palmeic、硫氰酸、甲烷磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、萘-2-磺酸(napthalene-2-sulphonic)、對(duì)甲苯硫橫酸(p-toluenesulphonic)、樟腦橫酸、4-甲基雙環(huán)[2. 2. 2]- A _2_ 烯-I-羧酸(4-methylbicyclo [2. 2. 2]-oct-2-ene-l-carboxylic)、葡庚糖酸、4，4' _ 亞甲基雙-3_(輕基 _2_ 烯-I-羧酸)(4，4' -methylenebis-3- (hydroxy-2-ene-l-carboxylic acid))、輕萘甲酸(hydroxynapthoic)等。可藥用的堿包括在其所被配制的濃度和方式方面為無(wú)毒的無(wú)機(jī)堿和有機(jī)堿。例如，合適的堿包括那些來(lái)自無(wú)機(jī)堿形成金屬例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、銨、鐵、鋅、銅、錳、鋁、N-甲基葡胺、嗎啉、哌啶的堿以及有機(jī)的無(wú)毒的堿，包括伯銨、仲銨和叔銨、取代銨、環(huán)銨和堿性離子交換樹(shù)脂、[例如N(R' )4+(其中R獨(dú)立地是H或Ch烷基例如銨，Tris)]，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨基丁三醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、氨茶堿、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹(shù)脂等。特別優(yōu)選的有機(jī)的無(wú)毒堿是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己銨、膽堿和咖啡因?？梢杂糜诒景l(fā)明中的額外的可藥用的酸和堿包括那些衍生自氨基酸的酸和堿，包括組氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸和天冬酰胺?？伤幱玫木彌_液包括那些源自上面所述的酸和堿的酸性和堿性的加成鹽的緩沖液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑的緩沖液是琥珀酸鹽、組氨酸鹽、檸檬酸鹽和/或磷酸鹽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑的緩沖劑是組氨酸鹽。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑的緩沖劑是檸檬酸鹽。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的緩沖劑濃度為約5_50mM、約5-20mM、約5-15mM、或約10mM。上述濃度范圍中間的濃度范圍例如約6_48mM預(yù)計(jì)也是本發(fā)明的一部分。例如，預(yù)計(jì)包括利用上面所述的任一數(shù)值作為上限和/或下限的組合的數(shù)值范圍?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、
3、2、或l)mM的范圍。也可以向本發(fā)明的藥物制劑中加入表面活性劑。示例的表面活性劑包括非離子型表面活性劑例如聚山梨酯(例如聚山梨酯20或80)或聚羥亞烴(例如聚羥亞烴188)。其他可藥用的表面活性劑是本發(fā)明公知的，也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，所加入的表面活性劑的量足以減少治療藥物的凝集(例如在搖晃或運(yùn)輸之后發(fā)生的凝集)、使得本發(fā)明的藥物制劑中的顆粒形成最小化、和/或減少治療藥物的非特異性吸收。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑包括表面活性劑，所述表面活性劑是聚山梨酯。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有表面活性劑聚山梨酯20。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 007%和約O. 07%之間的聚山梨酯20。在另一·個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 01%和約O. 05%之間的聚山梨酯20。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 01%和約O. 03%之間的聚山梨酯20。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有約O. 01%聚山梨酯20?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(O. 01%、0. 009%、0. 008%、O. 007%,O. 006%或O. 005%)的范圍，條件是聚山梨酯20的百分比不低于O. 007%。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有表面活性劑聚山梨酯80。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 0015%和約O. 07%之間的聚山梨酯80。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 003%和約O. 05%之間的聚山梨酯80。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 005%和約O. 03%之間的聚山梨酯80。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有至少O. 01%和約
O.03%之間的聚山梨酯80。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有約O. 01%聚山梨酯80?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(O. 01%,O. 009%,O. 008%,O. 007%,O. 006%或O. 005%)的范圍，條件是聚山梨酯80的百分比不低于 O. 0015%。也可以向本發(fā)明的藥物制劑中加入張力調(diào)節(jié)劑。有用的張力調(diào)節(jié)劑包括鹽和氨基酸?？伤幱玫囊约斑m用于本發(fā)明的藥物制劑的鹽包括氯化鈉、琥珀酸鈉、硫酸鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、和氯化鈣。優(yōu)選的用于本發(fā)明的藥物制劑的鹽是NaCl和MgCl2。NaCl可以通過(guò)保護(hù)藥物避免脫酰胺作用和凝集來(lái)提高治療藥物的穩(wěn)定性。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有NaCl。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有約150和約500mM之間的NaCl。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有約150mMNaCl?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(1、2、3、
4、5、10、25或50mM)的范圍。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑是等張的。等張表示本發(fā)明的藥物制劑具有與人體血液基本上相同的滲透壓。等張制劑一般具有從約250到約350m0sm的滲透壓,優(yōu)選地是從約290到約310m0sm?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或DmOsm的范圍。例如利用蒸汽壓型或冰凍型滲透壓儀都可以測(cè)定出等張性。
在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑含有上面所定義的藥物(即治療藥物、緩沖劑、表面活性劑和張力調(diào)節(jié)劑)，以及基本上沒(méi)有一種或多種防腐劑例如苯甲醇、苯酚、m-甲酚、三氯丁醇、和苯乙胺氯。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑可以包括防腐齊U，特別是其中所述制劑是多劑量制劑時(shí)。本發(fā)明的藥物制劑可以包括一種或多種其他的可藥用載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，例如那些在Remington' s Pharmaceutical Sciences16thedition, Osol, A. Ed. (1980)中所述的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑,條件是它們不會(huì)顯著地負(fù)向影響制劑所需的特性。所用的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度時(shí)對(duì)于受體都是無(wú)毒的，并包括額外的緩沖劑、共溶劑、抗氧化劑包括抗壞血酸和甲硫氨酸、螯合劑例如EDTA、金屬?gòu)?fù)合物(例如Zn蛋白復(fù)合物)、可生物降解的聚合物例如聚酯、防腐劑、抗凍劑、抗裂解劑、填充劑等。合適的抗凍劑實(shí)例包括多元醇、聚乙二醇(PEG)、牛血清白蛋白(BSA)、谷氨酸、其他氨基酸等。其他合適的抗凍劑包括糖和糖醇例如蔗糖、甘露糖、海藻糖、葡萄糖、山梨醇、和甘露醇等。合適的抗裂解劑可以包括糖例如蔗糖、海藻糖、乳糖、和麥芽糖等。合適的填充劑包括甘露醇、甘氨酸和山梨糖醇等。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑不包括抗凍劑。在進(jìn)一步的實(shí)施方·式中，本發(fā)明的藥物制劑不包括蔗糖。本發(fā)明的藥物制劑也可以包括常用于穩(wěn)定蛋白制劑的EDTA。EDTA作為螯合劑可以抑制金屬催化的巰基氧化，據(jù)此減少二硫鍵連接的聚集物的形成。EDTA的優(yōu)選濃度是從約 O. 01% 到約 O. 2%O對(duì)于所治療的特殊適應(yīng)癥，本發(fā)明的藥物制劑也可以按需與一種或多種其他的治療藥物組合，優(yōu)選地是那些具有互補(bǔ)活性且不負(fù)向影響本發(fā)明的藥物制劑中的治療藥物的治療藥物。本發(fā)明涉及額外的其他的治療藥物被配制成與免疫調(diào)節(jié)劑的混合物的組合。另夕卜，本發(fā)明也涉及其中額外的治療藥物被獨(dú)立制劑但被打算用于與免疫調(diào)節(jié)劑的同步或重疊施用的組合。在組合中，這些額外的治療藥物具有能有效地實(shí)現(xiàn)所計(jì)劃目的的量。在此進(jìn)一步描述了可以被與本發(fā)明的制劑組合的額外的治療藥物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl和O. 01%聚山梨酯80 (pH 6.0±0. 5)組成的藥物制劑。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑包括量從約lmg/ml到約160mg/ml的抗體,優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl和O. 01%聚山梨酯80 (pH 6. 0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的藥物制劑包括量從約Img/ml到約160mg/ml的抗體,優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl和O. 01%聚山梨酯80 (pH 6.0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于皮下施用的本發(fā)明的藥物制劑包括量從約lmg/ml到約160mg/ml的抗體，優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mMNaCl和O. 01%聚山梨酯80(pH 6.0±0. 5)或者是由其組成?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或l)mg/ml的范圍。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl和0.01%聚山梨酯80 (pH 6.0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl和0.01%聚山梨酯80 (pH 6. 0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于皮下施用的本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、IOmM組氨酸緩沖液、150mMNaCl和O. 01%聚山梨酯80 (pH 6·0±0· 5)或者是由其組成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包括或由O. 74mg/ml L-組氨酸、L lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl和O. lmg/ml聚山梨酯80 (pH 6. 0±0. 5)組成的藥物制劑。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑包括量從約lmg/ml到約160mg/ml的抗體,優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、O. 74mg/ml L-組氨酸、I. lmg/mlL-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl和O. lmg/ml聚山梨酯80 (pH 6·0±0·5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的藥物制劑包括量從約lmg/ml到約160mg/ml的抗體,優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、O. 74mg/ml L-組氨酸、
I.lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl 和 O. lmg/ml 聚山梨酯 80 (pH 6. 0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于皮下施用的本發(fā)明的藥物制劑包括量從約lmg/ml到約160mg/ml的抗體，優(yōu)選的是從約80mg/ml到約120mg/ml的抗體、O. 74mg/ml L-組氨酸、I. lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl和O. lmg/ml聚山梨酯80 (pH·6.0±0.5)或者是由其組成?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或l)mg/ml的范圍。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、0. 74mg/mlL-組氨酸、I. lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl和0. lmg/ml聚山梨酯80 (pH6.0±0.5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、0. 74mg/ml L-組氨酸、I. lmg/ml L-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/mlNaCl和0. lmg/ml聚山梨酯80 (pH 6. 0±0. 5)或者是由其組成。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于皮下施用的本發(fā)明的藥物制劑包括100mg/ml抗體、0. 74mg/ml L-組氨酸、I. lmg/mlL-組氨酸一鹽酸鹽、8. 8mg/ml NaCl和0. lmg/ml聚山梨酯80 (pH 6·0±0·5)或者是由其組成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體是單克隆抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體是IgG抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體是IgGl抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體是IgGl/λ抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體是人或人源化的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少6個(gè)月。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少9個(gè)月。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少I(mǎi)年。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少I(mǎi). 5年。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中,本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少2年。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少3年。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少4年。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中,本發(fā)明的藥物制劑在2-8° C下穩(wěn)定至少5年。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以在重復(fù)的凍融周期時(shí)表現(xiàn)出顯著的穩(wěn)定性，以及在這些處理之后，在融化后仍保持穩(wěn)定。一般而言，被冷凍的制劑被快速冷凍，例如冷凍于液氮內(nèi)?？梢栽谝欢ǖ臏囟确秶鷥?nèi)進(jìn)行融化，例如是從約0° C到約25° C，這是緩慢融化；或者是從約26° C到40° C，這是快速融化?！凹s”在此包括具體所述的范圍以及比該范圍的上限和/或下限大或小一些(5、4、3、2或I)攝氏度的范圍?？焖偃诨膶?shí)例是在37° C的水箱內(nèi)融化本發(fā)明的藥物制劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少I(mǎi)個(gè)凍融周期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少2個(gè)凍融周期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少3個(gè)凍融周期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少4個(gè)凍融周期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少5個(gè)凍融周期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物制劑中的抗體可以保持穩(wěn)定至少10個(gè)凍融周期。為了保持穩(wěn)定性，可能需要確定凍融本發(fā)明的藥物制劑的最佳方案，或者為了給將進(jìn)行特殊的凍融周期的抗體提供最大的穩(wěn)定性，可能需要鑒定本發(fā)明的藥物制劑。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，評(píng)價(jià)了這個(gè)參數(shù)。例如，可以在不同組合的各種凍融條件例如快速冷凍、緩慢冷凍、快速融化、緩慢融化下檢測(cè)本發(fā)明的藥物制劑的穩(wěn)定性，以確定生成最少的降解產(chǎn)物(即具有最大穩(wěn)定性)的方案。濃縮研究已經(jīng)顯示出在包括IOmM組氨酸緩沖液、150mM NaCl、和0. 01%聚山梨酯·80 (pH 6.0)的本發(fā)明的藥物制劑中的IgG/X抗體可以被濃縮到至少160mg/ml,且對(duì)純度(經(jīng)SEC-HPLC測(cè)定)和聚集(沒(méi)有觀察到顆粒)沒(méi)有不利的影響(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)。另外，觀察到濃縮增加了粘度。由于粘度的增加，因此增加了施用困難的可能性。研究已經(jīng)顯示在小于10秒鐘內(nèi)，經(jīng)30G1/2英寸針頭可以容易地注射粘度小于7. 75cP的樣品。如表X所示，甚至在IgGl/ A抗體的濃度為160mg/ml時(shí)，藥物制劑的粘度仍低于7. 75cP,因此仍能容易地經(jīng)注射器注射。表X :作為IgGl/ A抗體濃度的函數(shù)的粘度
濃度(mg/ml) 粘度(cP)
0.0093
~18790 97
35. 5I7T3
65. 7L48
79.21780
89.417%
~104. 02 38
~113. 227&8
~122.2m~128. O~3 43
~136. 53 89
~144.I4758
~161. 76 74可以用于體內(nèi)施用的制劑最優(yōu)選地是無(wú)菌的。通過(guò)在制劑制備之前或之后經(jīng)無(wú)菌濾膜的過(guò)濾可以容易地完成這一點(diǎn)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體被配制于IOmM檸檬酸鈉、I. 9%甘氨酸、0. 5%鹿糖、0. 01%聚山梨酯80(pH 6. 5±0. 3)內(nèi)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的抗體被配制于IOmM檸檬酸鈉、I. 9%甘氨酸、0. 5%蔗糖、0. 01%聚山梨酯80 (pH6. 5±0. 3)內(nèi)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體被配制于IOmM檸檬酸鈉、8%蔗糖、0. 04%(w/v)聚山梨酯80 (pH 6. 5±0.3)內(nèi)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于靜脈施用的本發(fā)明的抗體被配制于IOmM朽1檬酸鈉、8%鹿糖、0. 04%(w/v)聚山梨酯80(pH 6. 5±0. 3)內(nèi)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于皮下施用的本發(fā)明的抗體被配制于IOmM檸檬酸鈉、8% 蔗糖、0. 04%(w/v)聚山梨酯 80 (pH 6. 5 ±0.3)內(nèi)。一般而言，通過(guò)Neutrokine- a拮抗劑或其他本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑和液體載體或精細(xì)分離的固體載體或兩者均勻地和緊密地接觸來(lái)制備制劑。然后，如果需要，產(chǎn)物被成形為所需的劑型。優(yōu)選地，載體是腸外載體；更優(yōu)選地是與受體的血液等張的溶液。這些載體的實(shí)例包括水、鹽水、林格液、和葡萄糖溶液。非水性載體例如不揮發(fā)油和油酸乙酯以及脂質(zhì)體在此也是有用的載體。載體適當(dāng)?shù)睾休^少量的添加劑，例如增強(qiáng)等張性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)。這些物質(zhì)在其所采用的劑量和濃度時(shí)對(duì)于受體都是無(wú)毒的，并包括緩沖劑例如磷酸、檸檬酸、琥珀酸、乙酸和其他的有機(jī)酸或它們的鹽；抗氧化劑例如抗壞血酸；低分子量(少于約10個(gè)殘基)的多肽，例如聚精氨酸或三肽；蛋白例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物例如聚乙烯吡咯酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、或精氨酸；單糖、雙糖、和其他的碳水化合物包括纖維素或其衍生物、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、或糊精；抗衡離子例如鈉；防腐劑例如甲酚、苯酚、三氯丁醇、苯甲醇和對(duì)羥基苯甲酸酯；和/或非離子型表面活性劑例如聚山梨酯、聚羥亞烴或PEG。在這些載體中，包括免疫調(diào)節(jié)多肽的組合物通常被配制成濃度約為0. 001mg/ml到 100mg/ml,或 0. lmg/ml 到 100mg/ml,優(yōu)選地約為 l-10mg/ml 或 l-10mg/ml, pH 值約為 3到10、或3到8，更優(yōu)選地為5-8，最優(yōu)選地為6-7。要明白施用某些上面提及的賦形劑、載體或穩(wěn)定劑將造成多肽鹽的形成?？梢杂糜谥委熜允┯玫慕M合物最優(yōu)選地是無(wú)菌的。通過(guò)在制劑制備之前或之后經(jīng)無(wú)菌濾膜(例如，0.2微米膜)的過(guò)濾可以容易地完成這一點(diǎn)。治療性組合物常常被放置于具有無(wú)菌入口的容器內(nèi)，例如具有可被皮下注射針頭穿透的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或瓶子。包括可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物常常作為水溶液或作為用于重建的低壓凍干制劑儲(chǔ)存于單位劑量或多劑量容器內(nèi)，例如密封安瓿或瓶子。作為低壓凍干制劑的實(shí)例，用5ml無(wú)菌過(guò)濾的l%(w/v)水性Neutrokine-a多肽溶液填充IOml瓶子，將所形成的混合物低壓凍干。通過(guò)用抑菌的注射用水重建低壓凍干的Neutrokine-a多肽制備出輸注溶液。或者，包括可以用于本發(fā)明方法中的免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物可以以低壓凍干的形式儲(chǔ)存于單劑量容器內(nèi)。利用無(wú)菌的注射用載體重建輸注溶液。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑是放射性標(biāo)記的多肽例如放射性標(biāo)記形式的Neutrokine-a或抗⑶20抗體。這些包括放射性標(biāo)記分子的藥物組合物也可以包括輻射保護(hù)劑和血漿增溶劑例如抗壞血酸鈉、右旋糖酐-40、和甘油。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括碘化形式的Neutrokine-a多肽或其片段或變體，其被配制于10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40 (Genetran-40)中。
·
在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括至少lmg/mL碘化形式的SEQ ID NO:2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mMHEPES>4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐_40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括至少2mg/mL碘化形式的SEQ ID NO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括至少3mg/mL碘化形式的SEQ ID NO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES,4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括至少4mg/mL碘化形式的SEQ ID NO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mMHEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括約4. 6mg/mL碘化形式的SEQIDNO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3% (w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括約0. lmg/mL和20mg/mL之間的碘化形式的SEQ ID NO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES>4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括約lmg/mL和10mg/mL之間的碘化形式的SEQID N0:2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括約2mg/mL和8mg/mL之間的碘化形式的SEQ ID N0:2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mM HEPES、4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在具體的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括約3mg/mL和6mg/mL之間的碘化形式的SEQ ID NO: 2的第134-285位氨基酸殘基、10. OmM檸檬酸鈉、140mM氯化鈉、8. 7mMHEPES>4%(w/v)抗壞血酸鈉、3. 3%(w/v)右旋糖酐-40。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括抗Neutrokine-a抗體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括特異性結(jié)合Neutrokine- a的抗體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括拮抗性的抗Neutrokine-a抗體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括特異性結(jié)合Neutrokine-a以及中和Neutrokine-a的生物學(xué)活性的抗體。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括結(jié)合從細(xì)胞培養(yǎng)物中純化出的重組Neutrokine-a蛋白的抗體，其中所述重組Neutrokine-a蛋白是由至少編碼SEQ ID N0:2的第134到285位氨基酸的多核苷酸編碼的。在其他實(shí)施方式中，可以用于本發(fā)明方法中的組合物包括特異性結(jié)合Neutrokine- a的抗體，其中所述抗體結(jié)合從細(xì)胞培養(yǎng)物中純化出的重組Neutrokine-a蛋白，其中所述重組Neutrokine-a蛋白是由至少編碼SEQ ID N0:2的第134到285位氨基酸的多核苷酸編碼的?？梢钥诜?、直腸、腸外、皮下、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹腔內(nèi)、局部(例如經(jīng)粉末、軟骨、滴劑或經(jīng)皮貼劑)、口頰部(bucally)、或口腔或鼻腔噴霧(例如經(jīng)吸入吸入劑或粉末)施用含有免疫調(diào)節(jié)劑的藥物組合物。術(shù)語(yǔ)“腸外”在此指的是施用模式，其包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和輸注。·在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，皮下施用含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，靜脈內(nèi)施用含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。也可以用持續(xù)釋放系統(tǒng)施用含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。持續(xù)是否組合物的合適實(shí)例包括合適的聚合物材料(例如，成形物品形式例如膜或微膠囊的半滲透的聚合物基質(zhì))、合適的疏水性材料(例如可用油的乳劑)或離子交換樹(shù)脂、和略溶性衍生物(例如略溶性鹽)。持續(xù)釋放基質(zhì)包括多乳酸化合物(美國(guó)專利3，773，919、EP 58，481)、L-谷氨酸和 Y -乙基-L-谷氛酸鹽的共聚物(Sidman, U. et al.，Biopolymers22:547-556 (1983))、聚(2_ 輕乙基異丁烯酸)(R. Langer et al. , J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 (1981);和R. Langer, Chem. Tech. 12:98-105 (1982))乙烯乙酸乙烯酯(R. Langer et al.,同上)或聚-D- (-) -3-羥丁酸(EP 133，988)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物被配制于可生物降解的、聚合物的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，例如美國(guó)專利4，938，763,5, 278，201,5, 278，202,5, 324，519、5，340，849、和 5，487，897 以及國(guó)際出版物 W001/35929、W000/24374、和 W000/06117所述的那些轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，在此通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。在具體的實(shí)施方式中，利用 ATRiGEL Biodegradable System of Atrix Laboratories, Inc. (FortCollins, Colorado)制劑含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。在其他具體的實(shí)施方式中，利用購(gòu)自Alkermes, Inc. (Cambridge, MA)的PioLease 持續(xù)釋放系統(tǒng)制劑含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物?？梢杂糜谒幬镏苿┲械目缮锝到獾木酆衔锏膶?shí)例包括但不限于聚乳酸化合物、聚乙醇酸交酯、聚己酸內(nèi)酯、聚酐、聚酰胺、聚氨基甲酸酯、聚酯酰胺、聚正酯、聚二氧六環(huán)酮、縮醒樹(shù)脂、聚乙酰、聚碳酸鹽、聚正碳酸鹽、polyphosphazenes、聚輕基丁酸戍酯、聚輕基戊酸、聚烷撐草酸、聚烷撐琥珀酸、聚蘋(píng)果酸、聚氨基酸、聚甲基乙烯醚、聚蘋(píng)果酸酐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚羥基纖維素、甲殼素、殼聚糖和上述物質(zhì)的共聚物、三聚物或組合物或混合物。優(yōu)選的聚合物是那些具有較低的結(jié)晶度以及更高疏水性的聚合物。這些聚合物和共聚物比高結(jié)晶度的聚合物例如聚乙醇酸交酯和甲殼素在生物兼容性溶劑中具有更高的溶解度，所述聚合物也具有高水平的氫鍵。優(yōu)選的具有所需的溶解度參數(shù)的物質(zhì)是聚乳酸化合物、聚己酸內(nèi)酯、和這些聚合物和乙交酯的共聚物，其中有著更多的非結(jié)晶區(qū)域，以便增強(qiáng)溶解度。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以用于配制含有免疫調(diào)節(jié)劑的組合物的可生物降解的聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)?？梢孕揎椌酆衔镄阅芾绶肿恿俊⑹杷?、和丙交酯/乙交酯比例，以獲得所需的藥物釋放譜(見(jiàn)例如Ravivarapu et al.，Journalof Pharmaceutical Sciences89:732-741 (2000);在此通過(guò)引用將其內(nèi)容并入本申請(qǐng))。也優(yōu)選的是用于可生物降解的聚合物的溶劑是無(wú)毒的、水可混溶的和生物兼容的溶齊U。這種溶劑的實(shí)例包括但不限于N-甲基-2-吡咯酮、2-吡咯酮、C2到C6鏈烯醇、Cl到C15醇、二醇、三醇和四醇例如乙醇、甘油、丙二醇、丁醇；C3到C15烷基酮例如丙酮、二乙酮和甲乙酮；C3到C15酯例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乳酸乙酯；烷基酮例如甲乙酮；C1到C15酰胺例如二甲基酰胺、二甲乙酰胺和己內(nèi)酰胺；C3到C20醚例如四氫呋喃、或甘油醇縮丙酮(solketal) ;Tween、三醋精、碳酸丙烯、癸甲基亞砜、二甲基亞砜、油酸、I-十二燒基氮雜環(huán)庚燒-2-酮(l-dodecylazacycloheptan-2-one)。其他優(yōu)選的溶劑是節(jié)基醇、苯甲酸節(jié)酯、雙丙二醇、甘油、三丁酸甘油酯、油酸乙酯、甘油、糖原質(zhì)(glycofural)、十四烷酸異丙酯、棕·櫚酸異丙酯、油酸、聚乙二醇、碳酸丙烯、和枸櫞酸三乙酯。根據(jù)溶解能力以及它們的兼容性，最優(yōu)選的溶劑是N-甲基-2-吡咯酮、2-吡咯酮、二甲基亞砜、三醋精和碳酸丙烯。另外，含有免疫調(diào)節(jié)劑和可生物降解的聚合物的制劑也可以含有釋放速率調(diào)節(jié)劑和/或成孔劑。釋放速率調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于脂肪酸、甘油三酯、其他類似的疏水化合物、有機(jī)溶劑、成形化合物和親水性化合物。合適的釋放速率調(diào)節(jié)劑包括例如單_、雙和三羧酸的酯例如2-醋酸乙氧乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、己二酸二甲酯、丁二酸二甲酯、草酸二甲酯、檸檬酸二甲酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸乙酰三丁酯、檸檬酸乙酰三乙酯、甘油三乙酸酯、二(正丁基)癸二酸鹽(di (n-butyl) sebecate)等；多輕基醇例如丙二醇、聚乙二醇、甘油、山梨糖醇等；脂肪酸；甘油的三酯例如甘油三酯、環(huán)氧化大豆油、和其他的環(huán)氧化植物油；醇例如膽固醇；醇例如C6-C12鏈烯醇、2-乙氧基乙醇等。可以單獨(dú)地或聯(lián)合其他的這些物質(zhì)使用釋放速率調(diào)節(jié)齊U。釋放速率調(diào)節(jié)劑的合適組合包括但不限于甘油/丙烯乙二醇、山梨糖醇/甘油、乙撐氧化物/丙撐氧化物、丁烯乙二醇/己二酸等。優(yōu)選的釋放速率調(diào)節(jié)劑包括但不限于二甲基檸檬酸、三乙基檸檬酸、庚酸乙酯、甘油和己二醇?？梢杂糜诰酆衔锝M合物中的合適的成孔劑包括但不限于糖例如蔗糖和葡萄糖、鹽例如氯化鈉和碳酸鈉、聚合物例如羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙二醇、和聚乙烯吡咯酮?？梢蕴峁┙o定孔徑的固體結(jié)晶例如鹽或糖是優(yōu)選的。在具體的實(shí)施方式中，利用BEMA BioErodible Mucoadhesive System、MCA MucoCutaneous Absorption System、 SMP Solvent MicroParticle System、或 BCP BioCompatible Polymer System of Atrix Laboratories, Inc. (Fort Collins, Colorado)可以配制出含免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。持續(xù)釋放的組合物也包括脂質(zhì)體包埋的組合物(通常見(jiàn)于Langer, Science249: 1527-1533 (1990) ；Treat et al. , in Liposomes in the Therapy ofInfectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein and Fidler(eds. ), Liss,NewYork, pp. 317-327and 353-365(1989))。用已知的方法例如 DE 3, 218, 121 ；Epstein etal. , Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82: 3688-3692 (1985) ；Hwang et al. , Proc. Natl. Acad.Sci. (USA)77:4030-4034(1980) ；EP 52, 322 ；EP 36, 676 ；EP 88, 046 ；EP 143, 949 ；EP142，641 ;日本專利申請(qǐng)83-118008 ;美國(guó)專利 4，485，045和4，544，545 ;以及EP 102，324可以制備出脂質(zhì)體。脂質(zhì)體一般都是小的(約200-800埃米)單層類型的脂質(zhì)體，其中脂肪含量超過(guò)約30摩爾百分比膽固醇，調(diào)整所選比例，以便進(jìn)行最佳的免疫調(diào)節(jié)治療。在另一個(gè)實(shí)施方式中，持續(xù)釋放的組合物包括本領(lǐng)域已知的結(jié)晶制劑。在仍一個(gè)其他的實(shí)施方式中，用泵轉(zhuǎn)運(yùn)包括免疫調(diào)節(jié)劑的組合物(見(jiàn)Langer,同上；Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201(1987) ；Buchwald et al. , Surgery88:507(1980) ；Saudek et al.，N. Engl. J. Med. 321:574 (1989))。在Langer的綜述中討論了其他的控制釋放系統(tǒng)(Science249:1527-1533(1990))。對(duì)于腸外施用而言，在一個(gè)實(shí)施方式中，一般通過(guò)混合所需純度的、單位劑量的可·注射形式(溶液、懸浮液或乳劑)的免疫調(diào)節(jié)劑和可藥用載體即在所采用的劑量和濃度時(shí)對(duì)受體無(wú)毒的并且與制劑的其他組分相兼容的載體來(lái)配制免疫調(diào)節(jié)劑。例如，當(dāng)活性組分是免疫調(diào)節(jié)蛋白時(shí)，制劑優(yōu)選地不包括氧化劑和已知對(duì)多肽有害的其他化合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可能需要將藥物化合物或組合物局部施用到所需治療的區(qū)域；通過(guò)例如但非限制方式的手術(shù)期間的局部輸注、局部應(yīng)用例如在手術(shù)后聯(lián)合傷口敷料的應(yīng)用、通過(guò)注射、通過(guò)導(dǎo)管方式、通過(guò)栓劑方式、或通過(guò)植入物方式(所述植入物可以是多孔的、非多孔的或凝膠的物質(zhì)，包括膜例如唾液酸鹽膜或?yàn)V膜)可以實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。優(yōu)選地，當(dāng)施用蛋白包括本發(fā)明的抗體時(shí)，必須仔細(xì)地使用蛋白所不會(huì)吸附的材料。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用載體特別是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)免疫調(diào)節(jié)劑(見(jiàn)Langer, Science 249:1527-1533 (1990) ；Treat et al. , in Liposomes in the Therapyof Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler(eds. ), Liss, NewYork, pp. 353-365 (1989) ；Lopez-Berestein,出處同上，pp. 317-327)。仍在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以用控制釋放系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以施用泵(見(jiàn)Langer,同上；Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed.Eng. 14:201 (1987) ；Buchwald et al. , Surgery 88:507 (1980) ；Saudek et al. , N.Engl. J. Med. 321:574 (1989)) 0在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以使用聚合物材料(見(jiàn)Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds. )，CRCPress, Boca Raton,Florida(1974) ；Controlled Drug Bioavailability, Drug ProductDesign and Performance, Smolen and Ball(eds. ), Wiley, New York(1984) ；Rangerand Peppas, J. , Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 (1983);也見(jiàn)于 Levy etal., Science 228:190 (1985) ；During et al. , Ann. Neurol. 25:351 (1989) ；Howard etal. , J. Neurosurg. 71:105 (1989))。仍在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以將控制釋放系統(tǒng)放置于治療祀點(diǎn)即腦部的近端，因此只需要全身劑量的一部分(見(jiàn)例如Goodson, in MedicalApplications of Controlled Release,同上，vol. 2，pp. 115-138 (1984))。在Langer的綜述中討論了其他的控制釋放系統(tǒng)(Science249:1527-1533(1990))。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，其中本發(fā)明的化合物是編碼蛋白的核酸，可以體內(nèi)施用核酸，以促進(jìn)其所編碼蛋白的表達(dá)，通過(guò)構(gòu)建其作為合適的核酸表達(dá)載體的一部分以及通過(guò)使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(見(jiàn)美國(guó)專利4，980，286)或者通過(guò)直接注射、或通過(guò)使用微粒轟擊(例如基因槍，Biolisitic, Dupont)、或者通過(guò)脂質(zhì)涂層或細(xì)胞表面受體或轉(zhuǎn)染劑、或者通過(guò)使用與已知能進(jìn)入核內(nèi)的同源異型盒樣肽(見(jiàn)例如Joliot et al. , Proc. Natl. Acad.Sci. USA 88:1864-1868(1991))相連的核酸等都可以使用所述化合物，使得其成為細(xì)胞內(nèi)部分?；蛘撸ㄟ^(guò)同源重組可以細(xì)胞內(nèi)引入核酸，并將其整合于宿主細(xì)胞DNA內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。本發(fā)明也提供了藥物組合物。這些組合物包括治療有效量的化合物和可藥用載體。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“可藥用”表示經(jīng)聯(lián)邦或州政府的監(jiān)督機(jī)構(gòu)認(rèn)證了的或美國(guó)藥典或其他普遍公認(rèn)的動(dòng)物應(yīng)用且特別是人類應(yīng)用的藥典中所列出的。術(shù)語(yǔ)“載體”指的是與治療藥物一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。這些藥物載體可以是無(wú)菌液體例如水和油，包括那些石油、動(dòng)物、蔬菜或合成來(lái)源的油例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)靜脈內(nèi)施用藥物組合物時(shí)，水是優(yōu)選的載體。鹽溶液和水性葡萄糖和甘油溶液也可以被采用為液體載體，特別是可注射溶液。合適的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，組合物也可以含有少量的濕化劑或乳化劑、·或PH緩沖劑。這些組合物可以采用溶液、懸浮液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、粉末、持續(xù)釋放制劑等的形式。和傳統(tǒng)的結(jié)合劑和載體例如甘油三酯一起，組合物可以被配制成栓劑?？诜苿┛梢园?biāo)準(zhǔn)載體例如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素碳酸鎂等。在 E. W. Martin 的“Remington, s Pharmaceutical Sciences”中描述了合適的藥物載體的實(shí)例。這些組合物含有治療有效量的化合物，優(yōu)選地是純化形式的化合物以及合適量的載體，以便提供適合于施用給患者的形式。制劑應(yīng)當(dāng)符合施用模式。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)常規(guī)方法將組合物配制成適用于靜脈施用給人體的藥物組合物。用于靜脈施用的組合物通常是無(wú)菌等張水性緩沖液的溶液。如果需要，組合物也可以包括增溶劑和局麻藥例如利多卡因，以便減輕注射部位的疼痛。一般而言，可以分開(kāi)地或混合一起提供單位劑量形式的組分，例如以標(biāo)注有活性劑的量的熔封容器例如安瓿或Sachette內(nèi)的干燥低壓凍干粉末或無(wú)水濃縮物的形式提供。如果通過(guò)輸注施用組合物，可以用含有無(wú)菌的藥用級(jí)水或鹽水的輸注瓶來(lái)調(diào)配組合物。如果通過(guò)注射施用組合物，可以提供一安瓿的無(wú)菌注射用水或鹽水，使得可以在施用之前混合組分。免疫調(diào)節(jié)劑可以被配制成中性的或鹽的形式?？伤幱玫柠}包括那些用陰離子例如那些源自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的陰離子所形成的鹽，以及那些用陽(yáng)離子例如那些源自鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的陽(yáng)離子所形成的鹽。用標(biāo)準(zhǔn)的臨床技術(shù)可以確定在在此所述的方法中能有效的免疫調(diào)節(jié)劑的量。另夕卜，可以任選地采用體外檢測(cè)法，有助于鑒定出最佳劑量范圍。制劑中所采用的精確劑量也取決于施用途徑和疾病或病變的嚴(yán)重度，應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)學(xué)從業(yè)人員的判斷和每個(gè)患者的情況來(lái)決定所述劑量。從源自體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)的劑量-效應(yīng)曲線中可以推算出有效劑量。對(duì)于抗體而言,施用給患者的劑量通常是0. lmg/kg到100mg/kg患者體重。優(yōu)選地，施用給患者的劑量是在0. lmg/kg到20mg/kg患者體重之間，更優(yōu)選地是在0. lmg/kg到lOmg/kg患者體重之間。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，給患者靜脈內(nèi)施用1、4、10、或20mgkg的劑量。一般而言，人類抗體比來(lái)自其他物種的抗體在人體內(nèi)具有更長(zhǎng)的半衰期，因?yàn)槿梭w對(duì)外來(lái)多肽的免疫應(yīng)答。因此，更低劑量的人類抗體和更少頻率的施用常常是可能的。此外，通過(guò)經(jīng)修飾例如脂質(zhì)化來(lái)增強(qiáng)抗體的攝取和組織滲透(例如進(jìn)入到腦內(nèi))可以減少本發(fā)明的抗體的施用劑量和頻率。作為一般的建議，每劑量中腸外施用的多肽的總體藥用有效量是在約lmg/kg/天到10mg/kg/天患者體重的范圍之內(nèi)，盡管如上所述，但是這應(yīng)當(dāng)取決于治療判斷。更優(yōu)選地，這個(gè)劑量至少是0. 01mg/kg/天,對(duì)于人而言,最優(yōu)選的是在約0. 01和lmg/kg/天之間。在另一個(gè)實(shí)施方式中，施用給人的多肽的劑量是在0. 0001和0. 045mg/kg/天之間，優(yōu)選地劑量是在0. 0045和0. 045mg/kg/天之間，更優(yōu)選地，人類的劑量是在約45微克/kg/天，小鼠的劑量約為3mg/kg/天。如果持續(xù)給藥，通常以約I微克/kg/小時(shí)到約50微克/kg/小時(shí)的劑量速度施用·多肽，或者通過(guò)每天I到4次注射或者通過(guò)連續(xù)皮下輸注例如使用迷你泵施用多肽。也可以采用靜脈內(nèi)用袋裝溶液。所需治療的長(zhǎng)度以便觀察治療后應(yīng)答發(fā)生的變化和間隔有所不同，這取決于所需的效應(yīng)?？梢砸赃B續(xù)輸注、每天多次注射(例如每天3次或更多次，或每天兩次)、每天單次、或間斷注射(例如每天兩次、一天一次、隔天一次、每周兩次、每周一次、每月一次、每月兩次和每季度一次)的形式施用包括免疫調(diào)節(jié)劑的組合物。如果持續(xù)給藥，通常以約0. 001微克/kg/小時(shí)到約10微克/kg/小時(shí)到約50微克/kg/小時(shí)的劑量速度施用多肽，或者通過(guò)每天I到4次注射或者通過(guò)連續(xù)皮下輸注例如使用迷你泵施用多肽。通過(guò)本領(lǐng)域人員公知的方法可以確定所施用的包括免疫調(diào)節(jié)劑的組合物的有效劑量，其中所涉及到的參數(shù)是生物學(xué)半衰期、生物可利用度和毒性。這些確定方法是在本領(lǐng)域的熟練人員的能力范圍之內(nèi)，特別是結(jié)合在此所提供的詳細(xì)闡述。生物體對(duì)免疫調(diào)節(jié)劑的生物暴露在確定治療和/或藥物有效劑量方案方面也發(fā)揮著重要作用。劑量的變異例如相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)反復(fù)施用相當(dāng)?shù)蛣┝康拿庖哒{(diào)節(jié)劑可以具有作用，所述作用與在相當(dāng)短的一段時(shí)間內(nèi)反復(fù)施用相當(dāng)高劑量的免疫調(diào)節(jié)劑所獲得的作用在治療學(xué)上和/或藥學(xué)上是可區(qū)分的。利用Freireich, E. J ，等(Cancer Chemotherapy Reports 50 (4) : 219-44 (1966))所提供的等效體表面積劑量轉(zhuǎn)換系數(shù)，本領(lǐng)域人員能夠便利地將從在給定的應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑的試驗(yàn)系統(tǒng)中獲得的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成在另一個(gè)試驗(yàn)系統(tǒng)中每個(gè)劑量所施用的免疫調(diào)節(jié)劑的藥物有效量的準(zhǔn)確估計(jì)值。利用Freireich等提供的轉(zhuǎn)換系數(shù)，通過(guò)在小鼠中施用免疫調(diào)節(jié)劑所獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)例如可以被轉(zhuǎn)換成Neutrokine-a在大鼠、猴、狗和人中的藥物有效量的準(zhǔn)確估計(jì)值。下面的轉(zhuǎn)換表(表III)是Freireich等所提供的數(shù)據(jù)的概述。表III給出了用于將從一個(gè)物種中的用mg/kg表示的劑量轉(zhuǎn)換成在表中所列出的另一個(gè)物種中的用mg/kg所表示的等效體表面積劑量。表III :等效體表面積劑量轉(zhuǎn)換系數(shù)。--到--
小鼠大鼠猴狗人
從 (20g)(150g)(3.5kg)(8kg)(60kg)
小鼠 I1/21/41/61/12
大鼠 2I1/21/41/7
猶42I3/51/3
狗645/3I1/2
A12732I·
因此，例如利用表III所提供的轉(zhuǎn)換系數(shù)，小鼠中的劑量50mg/kg可以轉(zhuǎn)換成猴中的近似劑量12. 5mg/kg,因?yàn)?50mg/kg)x(l/4)=12. 5mg/kg。作為額外的實(shí)例，小鼠中的劑量0. 02,0. 08,0. 8、2、和8mg/kg分別等效于人中的有效劑量I. 667微克/kg、6. 67微克/kg、66. 7 微克 /kg、166. 7 微克 /g、和 0. 667mg/kg。在某些實(shí)施方式中，涉及施用放射性標(biāo)記形式的Neutrokine- a或抗Neutrokine-a抗體。所應(yīng)用的放射性劑量基本上都是不同的。可以施用劑量約為0.1到約100mCi/70kg體重的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine-a抗體組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以施用劑量約為0. I到約50mCi/70kg體重的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine-a抗體組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以施用劑量約為0. 1,0. 5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90 或 100mCi/70kg 體重的放射性標(biāo)記的 Neutrokine-a 或抗 Neutrokine-a 抗體組合物?？梢允┯脛┝考s為0. I到約10mCi/kg體重的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine- a抗體組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以施用劑量約為0. 25到約5mCi/kg體重的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine-a抗體組合物。在具體的實(shí)施方式中，可以施用劑量約為0. 35、0. 70、I. 35、I. 70、2. O、2. 5或3. OmCi/kg體重的放射性標(biāo)記的Neutrokine- a 或抗 Neutrokine-a 抗體組合物?？梢允┯脛┝考s為I到約50mCi/m2的放射性標(biāo)記的Neutrokine- a或抗Neutrokine- a抗體組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以施用劑量約為10到約30mCi/m2的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine-a抗體組合物。在具體的實(shí)施方式中，可以施用劑量約為10、15、20、25、或30mCi/m2的放射性標(biāo)記的Neutrokine-a或抗Neutrokine- a抗體組合物。放射性標(biāo)記的Neutrokine- a或抗Neutrokine- a抗體組合物中的總 Neutrokine-a 蛋白、Neutrokine-a SV 蛋白、抗 Neutrokine-a 抗體和 / 或抗Neutrokine- a SV抗體的濃度也可以有所不同，例如從約I微克/kg到約lmg/kg。在具體的實(shí)施方式中，放射性標(biāo)記的Neutrokine- a或抗Neutrokine- a抗體組合物中的 Neutrokine-a 蛋白、Neutrokine-a SV 蛋白、抗 Neutrokine-a 抗體和 / 或抗Neutrokine-a SV 抗體的總濃度可以約為 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100 微克 /kg。例如，已知淋巴瘤是放射敏感的腫瘤。對(duì)于免疫診斷性顯像而言，可以施用復(fù)合物的示蹤標(biāo)記，通常用約I到60mCi放射性同位素標(biāo)記l-20mgNeutrokine-a蛋白。劑量有時(shí)候取決于用于顯像的同位素；范圍中的上限量?jī)?yōu)選地是40到60mCi，可以使用99mTc ；范圍中的下限量?jī)?yōu)選地是l_20mCi，可以使用mIn。對(duì)于顯像目的而言，可以給予對(duì)象約I到約30mgNeutrokine-a復(fù)合物。對(duì)于放射性免疫治療目的而言,可以給對(duì)象施用足量的Neutrokine-a復(fù)合物,使得所接受到的全身劑量最高到IlOOcGy,但優(yōu)選地小于或等于500cGy。施用給對(duì)象的 Neutrokine-a 蛋白包括 Neutrokine-a 蛋白、Neutrokine-a 綴合物和Neutrokine-a復(fù)合物的總量范圍可以從I. 0微克/kg到I. Omg/kg患者體重。在另一個(gè)實(shí)施方式中，施用給對(duì)象的Neutrokine- a蛋白的總量范圍可以從20微克/g到100微克/g患者體重。估計(jì)約825mCi的131I可以給整個(gè)人體提供近似500cGy的放射性強(qiáng)度的量。所施用的放射性強(qiáng)度的量部分取決于所選的放射性同位素。對(duì)于9°Y治療，認(rèn)為從約I到約200mCi量的放射性強(qiáng)度是合適的，其中優(yōu)選的量是I到150mCi，以及I到IOOmCi (例如60mCi)是最優(yōu)選的。從所施用的放射性強(qiáng)度中估計(jì)出組織劑量的優(yōu)選方法是用示蹤劑量進(jìn)行顯像或其他的藥物動(dòng)力學(xué)方案，以便獲得對(duì)預(yù)定的放射量測(cè)定值的估計(jì)。在確定所施用給個(gè)體的·放射性藥物的合適劑量中，必須要考慮到相對(duì)于這種器官的最大耐受量的單個(gè)器官所接受到的福射的量。這些信息對(duì)于本領(lǐng)域人員是已知的，例如見(jiàn)Emami et al. , InternationalJournal of Radiation Oncology, Biology, Physics 21 : 109-22 (1991)；和Meredith, Cancer Biotherapy &Radiopharmaceuticals 17:83-99 (2002),在此通過(guò)引用將兩者的全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)?！案邉┝俊狈桨?，例如全身施用200到600cGy (或更高)的量，可能需要骨髓取代方案的支持，因?yàn)楣撬枋怯捎诙拘远拗屏溯椛鋭┝康慕M織。在具體的實(shí)施方式中，患者接受了組合物(例如特異性結(jié)合Neutrokine-a的抗體或本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的其他免疫調(diào)節(jié)劑)的多次施用。一組多次施用被稱作一個(gè)周期。單個(gè)周期可以包括例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多次施用。對(duì)于任何一次施用而言，其劑量可以是固定的或者是不同的，以便容許實(shí)現(xiàn)最初的藥物負(fù)荷和/或補(bǔ)償了在體重、體表面積、疾病活動(dòng)度、疾病應(yīng)答性、藥物耐受性、恢復(fù)時(shí)間、PK參數(shù)、和/或藥理學(xué)應(yīng)答方面的患者特異性差異。在給定周期內(nèi)的任何兩次施用之間的時(shí)間可以是固定的或者是不同的，以便適應(yīng)在疾病活動(dòng)度、疾病應(yīng)答性、藥物耐受性、恢復(fù)時(shí)間、PK參數(shù)和/或藥理學(xué)應(yīng)答方面的患者特異性差異。在具體的實(shí)施方式中，患者被給予了初治的負(fù)荷劑量，所述劑量是隨后施用中所給予的量的兩倍。在其他的實(shí)施方式中，任何兩次施用之間的時(shí)間可以是1、2、3、4、5、6、或7天(I周)或更長(zhǎng)。在具體的實(shí)施方式中，任何兩次施用之間的時(shí)間可以是1、2、3、4、5、6、7、或8周(或更長(zhǎng))?；颊呖梢越邮芏鄠€(gè)周期的治療。如果需要超過(guò)I個(gè)以上的周期，任何兩個(gè)治療周期之間的時(shí)間可以是固定的或不同的，以便適應(yīng)在疾病活動(dòng)度、疾病應(yīng)答性、藥物耐受性、恢復(fù)時(shí)間、PK參數(shù)和/或藥理學(xué)應(yīng)答方面的患者特異性差異。在具體的實(shí)施方式中，任何兩個(gè)周期之間的時(shí)間可以是1、2、3、4、5或6周或更長(zhǎng)。在具體的實(shí)施方式中，任何兩個(gè)周期之間的時(shí)間可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個(gè)月或更長(zhǎng)。在具體的實(shí)施方式中，任何兩個(gè)周期之間的時(shí)間可以是1、2、3、4、5年或更長(zhǎng)。在具體的實(shí)施方式中，患者接受了最初的彈丸式施用，隨后接受了 I個(gè)或多個(gè)周期的治療。
在一個(gè)實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用包括給患者靜脈內(nèi)施用劑量為大于或等于2mg/kg的Neutrokine-a的抗體拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用包括給患者靜脈內(nèi)施用劑量為大于或等于5mg/kg的Neutrokine-a的抗體拮抗劑。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用是給患者靜脈內(nèi)施用劑量為大于或等于10mg/kg的Neutrokine- a的抗體拮抗劑。在其他的實(shí)施方式中,最初的彈丸式施用是給患者靜脈內(nèi)施用劑量為大于或等于15mg/kg的Neutrokine-a的抗體拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用包括給患者靜脈內(nèi)施用劑量為大于或等于20mg/kg的Neutrokine- a的抗體拮抗劑。在其他的實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用包括抗CD20抗體。在其他的實(shí)施方式中，最初的彈丸式施用包括B細(xì)胞耗竭劑。本發(fā)明也提供了包括一個(gè)或多個(gè)填滿藥物組合物的一種或多種組分的容器的藥物包或試劑盒。任選地，與這些容器相伴隨的可以是政府監(jiān)督部門(mén)所規(guī)定的關(guān)于藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售方面的通知，該通知反映了用于人體施用的藥品或生物產(chǎn)品的·生產(chǎn)、使用或銷售的監(jiān)督部門(mén)的認(rèn)證?？梢詥为?dú)地或聯(lián)合其他的治療藥物一起施用免疫調(diào)節(jié)劑，所述其他的治療藥物包括但不限于一種或多種其他的免疫調(diào)節(jié)劑、化療藥物、抗生素、抗病毒藥、留體類或非甾體類抗炎藥、傳統(tǒng)的免疫治療劑和細(xì)胞因子?？梢园殡S地例如作為混合物、分離地但同時(shí)地或同步地、或次序地施用所述組合。這包括其中組合藥物被作為治療混合物一起施用的情況，也包括其中組合藥物被分離地但同時(shí)地施用例如經(jīng)分離的靜脈通路進(jìn)入到同一個(gè)體體內(nèi)的過(guò)程?！敖M合”施用還包括分離地先施用其中一種化合物或藥物，隨后施用第二種化合物或藥物。在隨后的段落中，闡述了可以聯(lián)合其他的化合物施用免疫調(diào)節(jié)劑。在某些情況中，其他的化合物本身也是一種免疫調(diào)節(jié)劑。那些段落中的闡述被計(jì)劃用于傳達(dá)一種觀點(diǎn)，即特異地涉及結(jié)合本發(fā)明的方法可以聯(lián)合施用兩種或更多種不同的免疫調(diào)節(jié)劑。例如，特異地涉及結(jié)合本發(fā)明的方法可以聯(lián)合抗⑶20抗體聯(lián)合使用抗Neutrokine-a抗體?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的傳統(tǒng)的非特異性免疫抑制劑包括但不限于類固醇、環(huán)孢菌素、環(huán)孢菌素類似物、環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰胺IV、甲基潑尼松龍、潑尼松龍、硫唑嘌呤、FK506U5-脫氧精胍菌素、和其他通過(guò)抑制效應(yīng)T細(xì)胞的功能而發(fā)揮作用的免疫抑制齊U。可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的其他免疫抑制劑包括但不限于潑尼松龍、甲氨喋呤、沙利度胺、甲氧沙林、雷帕霉素、來(lái)氟米特、咪唑立賓(BREDININ )、布喹那、脫氧精胍菌素、和Azaspirane(SKF 105685)。在具體的實(shí)施方式中，可以聯(lián)合免疫抑制劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的免疫抑制制劑包括但不限于0RTH0CL0NE O KT 3 (莫羅單抗-⑶3)、SANDIMMUNE 、NE0RAL 、SANGDYA (環(huán)孢菌素)、PROG RAF (M506、他克莫司)、CELLCEPT (霉酚酸酯，其活性代謝物是霉酚酸)、IMURAN (硫唑嘌呤)、糖皮質(zhì)激素、腎上腺皮質(zhì)類固醇例如DELTAS0NE (潑尼松)和HYDELTRAS0L (潑尼松龍)、F0LEX 和MEXATE (氨甲蝶呤)、0XS0RALEN-ULTRA (甲氧沙林)和RAPAMUNE (西羅莫司)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，可以用免疫抑制劑阻止對(duì)器官或骨髓抑制的排異。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合類固醇激素治療施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的類固醇包括但不限于口服糖皮質(zhì)激素、潑尼松、和甲基潑尼松龍(例如IV甲基潑尼松龍)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合潑尼松施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)進(jìn)一步的具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合潑尼松和免疫抑制劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑和潑尼松一起施用的免疫抑制劑是那些在此所述的免疫抑制劑，包括但不限于硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺和環(huán)磷酰胺IV。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合甲基潑尼松龍施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)進(jìn)一步具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合甲基潑尼松龍和免疫抑制劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑和甲基潑尼松龍一起施用的免疫抑制劑是那些在此所述的免疫抑制劑，包括但不限于硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺和環(huán)磷酰胺IV。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗瘧藥施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以與免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的抗瘧藥包括但不限于羥氯喹(例如PLAQUENIL )、氯喹、和/或奎那克林。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，聯(lián)合NSAID施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)非排他的實(shí)施方式中，聯(lián)合1、2、3、4、5、10、或更多種以下藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑NRD-101 (Hoechst Marion Roussel)、雙氯酌■酸(Dimethaid)、本嗯丙酸鉀·(Monsanto)、美卡舍明(Chiron)、T_614(Toyama)、培美曲塞二鈉(Eli Lilly)、阿曲留通(Abbott)、伐地考昔(Monsanto)、伊爾替酸(Byk Gulden)、Campath> AGM-1470 (Takeda)、CDP-571(Celltech Chiroscience)、CM-IOl(CarboMed)、ML-3000 (Merckle)、CB-2431 (KS Biomedix)、CBF-BS2 (KS Biomedix)、IL-IRa 基因治療(Valentis)、JTE-522 (Japan Tobacco)、紫杉醇(Angiotech)、DW-166HC (Dong ffha) > darbufelonemesylate (Warner-Lambert)、可溶性 TNF 受體 I (synergen ；Amgen)、IPR-6001 (Institutefor Pharmaceutical Research)、 托卡特(Hoffman-La Roche)、 EF-5(ScotiaPharmaceuticals)、BIIL_284(Boehringer IngeIheim)、BIIF_1149(BoehringerIngelheim)、LeukoVax (Inflammatics)、MK-663 (Merck)、ST-1482 (Sigma-Tau)、 和butixocort propionate (WarnerLambert)。在一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合一種或多種以下藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑英夫利昔單抗(也稱作 Remicade Centocor, Inc.)、托卡特(Roche, R0-32-3555)、來(lái)氟米特(也稱作Arava ,來(lái)自Hoechst Marion Roussel)、Kineret (IL-l受:體措抗劑，也稱作阿那白滯素。來(lái)自 Amgen, Inc.)、SCIO-469 (p38 激酶抑制劑，來(lái)自 Scios, Inc) >Humira (來(lái)自 Abbott實(shí)驗(yàn)室的阿達(dá)木單抗)、和/或ASLERA (普拉雄酮，脫氫表雄酮，GL701，來(lái)自GenelabsTechnologies Inc)。在另一個(gè)實(shí)施方式匯總，可以聯(lián)合1、2、3、4、5、或更多種以下藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑氨甲蝶呤、柳氮磺吡啶、硫代硫酸金鈉、金諾芬、環(huán)孢菌素、青霉胺、硫唑嘌呤、抗瘧藥(如在此所述)、環(huán)磷酰胺、瘤可然、金制劑、ENBREL (依那西普)、抗TNF抗體、LJP394(LaJolla Pharmaceutical Company, San Diego, California)、和潑尼松龍。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合抗瘧藥、氨甲蝶呤、抗TNF抗體、ENBRELtmJP /或柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合甲氨喋呤施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合抗TNF抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合甲氨喋呤和抗TNF抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)特?cái)?shù)的實(shí)施方式中，聯(lián)合甲氨喋呤、抗TNF抗體、和柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合ENBREL 施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合ENBREL 和甲氨喋呤施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合ENBREL 、甲氨喋呤和柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合ENBREL 、和柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在其他的實(shí)施方式中，一種或多種抗瘧藥與其中一種上述的組合一起組合施用。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗瘧藥(例如羥氯喹)、ENBREL 、甲氨喋呤和柳氮磺吡啶施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗瘧藥(例如羥氯喹)、ENBREL 、柳氮磺吡啶、抗TNF抗體、和甲氨喋呤施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合一種或多種靜脈用免疫球蛋白制品施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑施用的靜脈用免疫球蛋白制品包括但不限于GAMMAR 、IVEEGAM 、SANDOGLOBULIN , GAMMAGARD S/D 、和 GAMMUNE 。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，在移植治療(例如骨髓移植)中，聯(lián)合靜脈用免疫球蛋白制品施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗炎藥施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗炎藥包括但不限于糖皮質(zhì)激素和非留體類抗炎藥、氨基芳香羧酸衍生物、芳香乙酸衍生物、芳香丁酸衍生物、芳香羧酸衍生物、芳香丙酸衍生物、吡唑、吡唑酮、水楊酸衍生物、Thiazinecarboxamides、e_乙酰氨基己酸、S-腺苷甲硫氨酸、3_氨基_4_輕丁酸、·阿米西群、芐達(dá)酸、芐達(dá)明、布可龍、聯(lián)苯吡胺、地他唑、依莫法宗、愈創(chuàng)藍(lán)油烴、萘普酮、尼美舒利、奧古蛋白、奧沙西羅、瑞尼托林、哌異n惡唑、哌酰苯廂、普羅喹宗、胺丙n惡二唑、和替尼達(dá)普。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗CD4抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗CD4抗體的共施用被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗CD4抗體的共施用被用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗IL-15抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗IL-15抗體的共施用被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗IL-15抗體的共施用被用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合CTLA4-Ig和LEA29Y施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和CTLA4-Ig和LEA29Y的共施用被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和CTLA4-Ig和LEA29Y的共施用被用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗IL-6受體抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗IL-6受體抗體的共施用被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗IL-6受體抗體的共施用被用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗C5(補(bǔ)體組分)抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗C5抗體的共施用被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗C5抗體的共施用被用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在具體的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合補(bǔ)體級(jí)聯(lián)抑制劑施用免疫調(diào)節(jié)劑。補(bǔ)體級(jí)聯(lián)抑制劑包括但不限于抗裂解素抗體(Gliatech)、TP-10，重組可溶性I型補(bǔ)體受體(AVANTImmunotheragenetics Inc. ) ;Pexelizmab，補(bǔ)體 C5 抑制劑(Alexion PharmaceuticalsInc.);和561. 1，組織補(bǔ)體部分C5裂解成其促炎癥組分的單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和補(bǔ)體級(jí)聯(lián)抑制劑的共施用被用于治療炎癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和/或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合化療藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以與免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的化療藥物包括但不限于抗生素衍生物(例如阿霉素、博萊霉素、柔紅霉素、和更生霉素)；抗雌激素藥(例如他莫昔芬)；抗代謝藥(例如氟尿嘧啶、5-FU、甲氨喋呤、脫氧氟尿甙、干擾素a-2b、谷氨酸、光輝霉素、巰基嘌呤、和6-硫代鳥(niǎo)嘌呤)；細(xì)胞毒藥物(例如卡氮芥、BCNU、環(huán)己亞硝脲、CCNU、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、雌氮芥、羥基脲、甲基芐肼、絲裂霉素、白消安、順鉬和硫酸長(zhǎng)春新堿)；激素(例如甲羥孕酮、雌二醇氮芥磷酸鈉、乙炔雌二醇、雌二醇、醋酸甲地孕酮、甲睪酮、二磷酸己烯雌酚、氯烯雌醚和睪內(nèi)酯)；氮芥衍生物(例如馬法蘭、瘤可然、雙氯乙基甲胺(氮芥)和塞替派)；類固醇和組合物(例如倍他米松磷酸鈉)；和其他藥物(例如達(dá)卡巴嗪、天冬酰胺酶、硫酸長(zhǎng)春新堿、硫酸長(zhǎng)春花堿和足葉乙甙)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合CHOP (環(huán)磷酰胺、阿霉素、長(zhǎng)春新堿和潑尼松)或聯(lián)合一種或多種CHOP中的組分施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合抗CD20抗體例如人單克隆抗CD20抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，聯(lián)合抗CD20抗體和CHOP,或抗⑶20抗體和一種或多種CHOP組分的任一組合(特別是環(huán)磷酰胺和/或潑尼松)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合利妥昔單抗施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，與利妥昔單抗和CHOP，或利妥昔單抗和一種或多種CHOP組分的任一組合(特別是環(huán)磷酰胺和/或潑尼松)一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)·合托西莫單抗(來(lái)自 Coulter Pharmaceuticals, San Francisco, CA 的抗 CD2O 抗體)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，與托西莫單抗和CHOP，或托西莫單抗和一種或多種CHOP組分的任一組合(特別是環(huán)磷酰胺和/或潑尼松)一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。托西莫單抗可以任選地與mI相連接?？耿?0抗體可以任選地與放射性同位素、毒素或細(xì)胞毒前體藥物相連接。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合Zevalin 施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，與Zevalin 和CH0P，或Zevalin 和一種或多種CHOP組分的任一組合(特別是環(huán)磷酰胺和/或潑尼松)一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。Zevalin 可以與一種或多種放射性同位素相連接。特別優(yōu)選的同位素是9°Y和mIn。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合利妥昔單抗(Rituxan )和/或Ibritumomab Tiuxetan(Zevalin ,例如(In-Ill)Ibritumomab Tiuxetan 或(Y-90) Ibritumomab Tiuxetan)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合施用利妥昔單抗和/或IbritumomabTiuxetan和免疫調(diào)節(jié)劑來(lái)治療非霍奇金淋巴瘤。在具體的實(shí)施方式中，施用免疫調(diào)節(jié)劑作為在疾病發(fā)作例如狼瘡發(fā)作后補(bǔ)充抗CD20施用的長(zhǎng)期治療。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合甲磺酸伊馬替尼(格列衛(wèi)⑩4-[(4-Methyl-l-piperazinyl)methyl]-N-[4-methyl_3-[[4_(3-pyridinyl)-2-pyrimidinyl] amino]-phenyl]benzamide methanesulfonate)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合硼替佐米(萬(wàn)珂 [ (IR) -3-methyl-l-[[ (2S) -1-oxo-3-phenyl-2-[ (pyraziny I carbonyl) amino] propyl] amino] butyl] boronic acid)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合阿倫珠單抗(Campatli )施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合磷酸氟達(dá)拉濱(福達(dá)華 :^- !!!^]!^。!!^]^，]-；^!!!^0-9- (5-0-phosphono- ^ -D-arabinofuranosyl) (2_f luoro-ara-AMP))施用免疫調(diào)節(jié)劑。
可以聯(lián)合一種或多種用于治療多發(fā)性骨髓瘤的治療藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑，所述藥物包括但不限于烷化劑、蒽環(huán)類、卡氮芥(DTI-015、BCNU, BiCNU, Gliadel Wafer )、環(huán)磷酰胺(Cytoxan 、Neosar 、CTX)、地塞米松(Decadron )、阿霉素(Adriamyc in 、Doxil 、 Rubex )、馬法蘭(L-PAM、Alkeran 、苯丙酸氮芥)、潑尼松、沙利度胺和長(zhǎng)春新堿(Oncovorin 、Onco TCS 、VCR、Leurocristine )。可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療多發(fā)性骨髓瘤的治療藥物的優(yōu)選組合包括但不限于環(huán)磷酰胺+潑尼松、馬法蘭+潑尼松(MP)、長(zhǎng)春新堿+阿霉素 +地塞米松(VAD)、長(zhǎng)春新堿+卡氮芥+馬法蘭+環(huán)磷酰胺+潑尼松(VBMCP,M2方案)、和長(zhǎng)春新堿+馬法蘭+環(huán)磷酰胺+潑尼松和長(zhǎng)春新堿+卡氮芥+阿霉素+潑尼松的交替方案(VMCP/VBAP)。可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的一種或多種用于治療非霍奇金淋巴瘤的治療藥物包括但不限于2-氯脫氧腺苷、阿米斯丁( Ethyol 、Ethiofos 、WR-272)、貝沙羅汀(Targretin 、Targretin gel 、Targretin oral 、LGD1069)、博萊霉素(Blenoxane )、白消安(Busulfex .、Myleran )、卡鉬(Paraplatin 、CBDCA)、卡氮·芥(DTI-015、BCNU、BiCNU、Gliadel Wafer )、瘤可然(Leukeran )、順鉬(piatinol 、CDDP)、克拉屈濱(2-CdA、Leustatin )、環(huán)磷酰胺(Cytoxan 、Neosar 、CTX)、阿糖胞苷(Cytosar-U 、ara-C、胞嘧啶阿糖核苷、DepoCyt )、達(dá)卡巴嗪(DTIC)、柔紅霉素(Daunomycin、DaunoXome 、柔紅霉素 、Cerubidine )、Denileukin diftitox (Ontak )、地塞米松(Decadron )、甲擴(kuò)酸多拉司瓊(Anzemet )、阿素(Aclriamycin 、Doxil 、Rubex )、促紅細(xì)胞生成素(EPO 、Epogen 、Procrit )、磷酸 Al n 丨 乙 i \K, (Etopophos )、依][泊式(VP-16、Vepesid )、氟達(dá)拉濱(Fludara 、FAMP)、Granisetron (Kytril )、氫化可的松、去甲基柔紅霉素(Idamycin 、DMDR> IDA)、異環(huán)磷酰胺(IFEX )、干擾素(j (AH.afero.ne 、Alpha-1 F(S)).、. I.擾素 a 2a(Intron A⑩)、氮芥(Nitrogen Mustard、HN2, Mustargen )、馬法蘭(L-PAM、Alkeran .苯丙酸氮芥)、甲氨喋呤 (MTX、Mexate 、Folex )、甲基潑尼松龍(Solumedrol )、米托蒽醌(Novantrone 、DHAD)、Ondansetron (Zofran )、噴司他丁(Nipent 、2-脫氧柯福霉素)、過(guò)磷酸胺(4-氫過(guò)氧化環(huán)憐酸胺，4-HC)、潑尼松、甲基節(jié)肼(Matulane )、利妥昔單抗 (Rituxan 、抗CD20單抗)、塞替派(三亞以及硫化磷酰胺、Thioplex )、拓?fù)涮婵?Hycamtin 、SK&F-104864、NSC-609699, Evotopin )、長(zhǎng)春花堿(Velban 、VLB)、長(zhǎng)春新堿(Oncovin 、0ncoTCS 、VCR、Leurocristine )和長(zhǎng)春地辛(Eldisine 、Fildesin⑧)?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療非霍奇金淋巴瘤的治療藥物的優(yōu)選組合包括但不限于阿霉素 +博萊霉素+長(zhǎng)春花堿+達(dá)卡巴嗪(ABVD)、抗獨(dú)特型抗體治療(BsAb) +干擾素阿爾法、抗獨(dú)特型抗體治療(BsAb) +瘤可然、抗獨(dú)特型抗體治療(BsAb)+白介素-2、BCNU (卡氮芥)+足葉乙甙+Ara-C (阿糖胞苷)+馬法蘭(BEAM)、博萊霉素+足葉乙甙+阿霉素+環(huán)磷酰胺+長(zhǎng)春新堿+甲基芐肼+潑尼松(BEAC0PP)、薯司他丁 +長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷酰胺+BCNU(卡氮芥)+VP-16(足葉乙甙)(CBV)、環(huán)磷酰胺+長(zhǎng)春新堿+潑尼松(CVP)、環(huán)磷酰胺+阿霉素 (羥基柔紅霉素)+長(zhǎng)春新堿(Oncovorin) +潑尼松(CHOP)、環(huán)磷酰胺+諾消靈 (米托蒽醌)+長(zhǎng)春新堿(Oncovorin) +潑尼松(CNOP)、環(huán)磷酰胺+阿霉素+鬼臼噻吩甙+潑尼松、環(huán)磷酰胺+阿霉素 (羥基柔紅霉素)+長(zhǎng)春新堿(Oncovorin) +潑尼松+利妥昔單抗(CHOP+利妥昔單抗)、環(huán)磷酰胺+阿霉素+鬼白噻吩甙+潑尼松+干擾素阿爾法、阿糖胞苷+博萊霉素+長(zhǎng)春新堿+米托蒽醌(CytaBOM)、地塞米松+阿糖胞苷+順鉬(DHAP)、地塞米松+異環(huán)磷酰胺+順鉬+足葉乙甙(DICE)、阿霉素+長(zhǎng)春花堿+氮芥+長(zhǎng)春新堿+博萊霉素+足葉乙甙+潑尼松(Stanford V)、足葉乙甙+長(zhǎng)春花堿+阿霉素(EVA)、足葉乙甙+甲基潑尼松+阿糖胞苷+順鉬(ESHAP)、足葉乙甙+潑尼松+異環(huán)磷酰胺+順鉬(EPIC)、氟達(dá)拉濱+米托蒽醌+地塞米松(FMD)、氟達(dá)拉濱+地塞米松+阿糖胞苷(ara-C) +順鉬(Piatinol ) (FluDAP)、異環(huán)磷酰胺+順鉬+足葉乙甙(ICE)、氮芥+ Oncovin (長(zhǎng)春新堿)+甲基芐肼+潑尼松(MOPP)、美司那+異環(huán)磷酰胺+去甲基柔紅霉素+足葉乙甙(MIZE)、甲氨喋呤+四氫葉酸解救+博萊霉素+阿霉素+環(huán)磷酰胺+Oncovorin+地塞米松(m-BACOD)、潑尼松+甲氨喋呤+阿霉素+環(huán)磷酰胺+足葉乙甙(ProMACE)、塞替派+白消安+環(huán)磷酰胺、塞替派+白消安+馬法蘭、拓?fù)涮婵?紫杉醇、和長(zhǎng)春新堿(Oncovin ) +阿霉素 +地塞米松(VAD)?？梢月?lián)合免疫抑制劑施用的用于治療非霍奇金淋巴瘤的治療藥物的更多的實(shí)·例包括但不限于A007(4-4’ -二羥基二苯甲酮-2，4- 二硝基苯腙)、AG-2034(AG-2024、AG-2032、GARFT[甘氨酰胺核糖核苷轉(zhuǎn)甲酰酶]抑制劑)、阿地白介素(IL-2,Proleukin )、阿倫珠單抗(Campatli )、阿利維甲酸(Panretin 、LGN-1057)、六甲蜜胺(Hexalen 、六甲密胺、Hexastat )、氨基喜樹(shù)堿(9-AC、9-氨基喜樹(shù)堿、NSC 603071)、抗0)19/⑶3單抗(抗⑶19/⑶3scFv、抗NHL單抗)、抗獨(dú)特型抗體治療(BsAb)、阿糖鳥(niǎo)嘌呤(Ara-G, GW506U78)、三氧化二砷(Trisenox 、ATO)、B43-染料木黃酮(抗 CD 19 抗體/染料木黃酮綴合物)、B7抗體綴合物、Betathine (Beta-LT)、BlyS拮抗劑、薯司他丁 -1( Bryoslatin 、BMY-45618、NSC-339555)、CHML (Cytotropic HeterogeneousMolecular Lipids)、氯法拉濱(氯-氟-araA)、達(dá)珠單抗(Zenapax' )、縮酹酸肽(FR901228、FK228)、多拉司他汀-10(D0LA_10、NSC-376128)、表柔比星(Ellence 、EPI、4’ 表-阿霉素)、Epratuzumab ( Lymphocide 、人源化抗 CD22, HAT)、Fly3/flk2 配體(Mobista )、G3l39 (Genasense 、GentaAnticode 、反義 Bcl-2) >HulDlO (抗 HLA-DR單抗、SMART1D 10)、HumaLYM (抗 CD20 單抗)、Ibritumomab tiuxetan (Zevalin )、干擾* y (y-干擾素、Gamma 100 、Y-IF)、依立替康(Camptosar 、CPT-11、Topotecin 、CaptoCPT-1)、ISIS-2053、ISIS-3521 (反義 PKC- a )、Lmb_2 免疫毒素(抗 CD25 重組免疫毒素、抗 Tac(Fv)-PE38)、Leuvectin (cytofectin+IL-2 基因、IL-2 基因治療)、Lym-I (131I LYM-1)、淋巴瘤疫苗(Genitope)、萘拉濱(化合物 506、U78)、Neugene 化合物(Oncomyc-NG 、Resten-NG 、反義 myc)、NovoMAb-G2scFv(NovoMAb-G2IgM)、06-benzylguanine (BG> Procept. )、草酸鉬(E丨oxatine' 、Eloxatin )、紫杉醇(Paxene 、Taxo勵(lì))、紫杉醇-DHA (Taxoprexin )、培得星(BCX-34、PNP 抑制劑)、Rebeccamycin 和 Rebeccamycin 類似物、SCH-66336、索布佐生(MST-16、Perazolill )、SU5416 ( Semaxanib 、VEGF 抑制劑)、TER-286、沙利度胺、TNP-470 (AGM-1470)、托西莫單抗(Bexxar )、Valspodar (PSC 833)、Vaxid (B細(xì)胞淋巴瘤DNA疫苗)、長(zhǎng)春瑞濱(Navelbine )、WFlO (巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)劑)和 XR-9576 (XR-9351、P-糖蛋白 /MDR 抑制劑)。
可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的一種或多種用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物包括但不限于安吖啶、卡鉬(Paraplatin 、CBDCA)、卡氮芥(DTI-015、BCNU, BiCNU、Gliadel Wafer )、CholecaliferoI、環(huán)憐酸胺(Cytoxan 、Neosar 、CTX)、阿糖胞苷(Cytosar-U 、ara-c、阿糖胞苷、DepoCyt )、柔紅霉素(Daunomycin、DaxmoXome 、柔紅霉素 .Cerubidine )、地塞米松(Decadron )、阿霉素(Adriamycin 、Doxil 、Rubex )、足葉乙甙(VP-l6、Vepesid )、非格司亭 (Neupogen 、G-CSF、Leukine )、氟達(dá)拉濱(Fludara 、FAMP)、去甲基柔紅霉素(Idamycin 、DMDR、IDA)、異環(huán)磷酰胺(IFEX )、甲磺酸伊馬替尼(STI-571、imatinib 、Glivec 、Gleevee 、Abl 酪氨酸激酶抑制劑)、干擾素Y (Gamma-干擾素、Gamma 100 、Gamma-IF)、L-天冬酰胺酶(Elspar 、Crastinin 、天冬酰胺酶medac 、Kidroiase )、巰基嘌呤(6-巰基嘌呤、6-MP)、甲氨喋呤 (MTX、Mexate 、Folex )、米托蒽醌(Novantrone 、DHAD)、Pegaspargase (Oncospar )、潑尼松、維甲酸、鬼臼噻吩甙(VM-26、Vumon )、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-硫鳥(niǎo)嘌呤、6-TG)、拓?fù)涮婵?Hycamtin 、SK&F-104864、NSC-609699,Evotopin )、維甲酸(Retin-A 、Atragen 、ATRA、Vesanoid )和長(zhǎng)春新堿(Oncovorin 、Onco TCS 、VCR>Leiiroci'istine@)(.·可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物的更多的實(shí)例包括但不限于氨基喜樹(shù)堿(9-AC、9-氨基喜樹(shù)堿、NSC603071)、氨基蝶呤、Annamycin(AR-522、annamycin LF> Aronex )、阿糖鳥(niǎo)嘌呤(Ara_G、GW506U78、Nelzarabine )、三氧化二砷(Trisenox 、ATO、Atrivex )、B43-染料木黃酮(抗⑶19抗體/染料木黃酮綴合物)、B43-PAP (抗⑶19Ab/美洲商陸抗病毒蛋白綴合物)、Cordyc印in、CS-682、地西他濱(5-雜氮-2’ -脫氧胞苷)、多拉司他汀-10 (D0LA-10、NSC-376128)、G3139 ( Genasense 、GentaAnticode_ 、反義 Bcl-2)、伊羅夫文(MGI-114、Ivofulvan、?；幌╊愃莆?、MS-209、丁酸苯酯、奎寧、TNP-470(AGM-1470、夫馬潔林)、Trimetrexate (Neutrexin )、Troxacitabine (BCH-204、BCH_4556、Troxatyl )、UCN-Ol (7-羥基星孢素)、WHI-P131和WTl疫苗?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物的優(yōu)選組合包括但不限于卡鉬+米托蒽醌、卡氮芥+環(huán)磷酰胺+足葉乙甙、阿糖胞苷+柔紅霉素、阿糖胞苷+阿霉素、阿糖胞苷+去甲基柔紅霉素、阿糖胞苷+干擾素Y、阿糖胞苷+L-天冬酰胺酶、阿糖胞苷+米托蒽醌、阿糖胞苷+氟達(dá)拉濱和米托蒽醌、足葉乙甙+阿糖胞苷、足葉乙甙+異環(huán)磷酰胺、足葉乙甙+米托蒽醌、異環(huán)磷酰胺+足葉乙甙+米托蒽醌、異環(huán)磷酰胺+鬼臼噻吩甙、甲氨喋呤+巰基嘌呤、甲氨喋呤+巰基嘌呤+長(zhǎng)春新堿+潑尼松、丁酸苯酯+阿糖胞苷、丁酸苯酯+足葉乙甙、丁酸苯酯+拓?fù)涮婵?、丁酸苯?維甲酸、奎寧+阿霉素、奎寧+米托蒽醌+阿糖胞苷、硫鳥(niǎo)嘌呤+阿糖胞苷+安吖啶、硫鳥(niǎo)嘌呤+足葉乙甙+去甲基柔紅霉素、硫鳥(niǎo)嘌呤+維甲酸+CholecaliferoI、長(zhǎng)春新堿+潑尼松、長(zhǎng)春新堿+潑尼松和L-天冬酰胺酶、長(zhǎng)春新堿+地塞米松/潑尼松+天冬酰胺酶+柔紅霉素/阿霉素、長(zhǎng)春新堿+地塞米松/潑尼松+天冬酰胺酶+柔紅霉素/阿霉素+非格司亭、長(zhǎng)春新堿+地塞米松/潑尼松+天冬酰胺酶+柔紅霉素/阿霉素+環(huán)磷酰胺+甲氨喋呤、和長(zhǎng)春新堿+地塞米松/潑尼松+天冬酰胺酶+柔紅霉素/阿霉素+環(huán)磷酰胺+甲氨喋呤+非格司亭。
可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的一種或多種用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物包括但不限于瘤可然(Leukeran )、克拉屈濱(2-CdA、Leustatin )、環(huán)磷酰胺(Cytoxan 、Neosar 、CTX)、阿糖胞苷(Cytosar- U 、ara-C、胞卩密唳阿糖核苷、DepoCyt 、Cytarabine ocfosfate、ara-CMP)、阿霉素(Adriamycin' 、Doxil . Rubex )、氟達(dá)拉濱(Fiudara 、FAMP)、噴司他丁(Nipent 、2-脫氧助間型霉素)、潑尼松和長(zhǎng)春新堿(Oncovorin 、Onco TCS 、VCR、Leu.rocrist.ine )?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物的更多的實(shí)例包括但不限于阿倫珠單抗(Campath )、氨基喜樹(shù)堿(9-AC、9-氨基喜樹(shù)堿、NSC603071)、氨基蝶呤、Annamycin (AR-522、annamycin LF、Aixniex )、阿糖鳥(niǎo)嘿呤(Ara_G、GW506U78 IMelzarabine 、化合物 506U78)、三氧化二砷(Trisenox 、ATO、Atrivex )、薯司他丁 -I ( Bryostatin 、BMY-45618、NSC-339555)、CS-682、多拉司他汀-10 (D0LA-10、NSC-376128)、非格司亭(Neupogen 、G-CSF、Leukine)、Flavopiridol (NSC-649890,HMR-1275)、G3139 (Genasense⑧ XientaAnticode 、反義 Bcl-2)、伊羅夫文(MGI-114、·Ivofulvan、?；幌╊愃莆?、MS-209、丁酸苯酯、利妥昔單抗 (Rituxan 、抗⑶20單抗)、沙利度胺、Theophylline、TNP-470 (AGM-1470、夫馬潔林)、UCN_01 (7-羥基星孢素)和WHI-P131。可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病的治療藥物的優(yōu)選組合包括但不限于氟達(dá)拉濱+潑尼松、和環(huán)磷酰胺+阿霉素+長(zhǎng)春新堿+潑尼松(CHOP)。在另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合細(xì)胞因子施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的細(xì)胞因子包括但不限于 GM-CSF、G-CSF、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、抗 CD40、CD40L、IFN-a、IFN-^、IFN- y , TNF- a、和 TNF-P。在另一個(gè)實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑可以與任何一種白介素一起施用，包括但不限于IL-Ia、IL-I P、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-IU IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19，IL-20、IL-21、和IL-22。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，聯(lián)合IL4和ILlO施用免疫調(diào)節(jié)劑。發(fā)明者已經(jīng)觀察到IL4和ILlO都能增強(qiáng)Neutrokine-a介導(dǎo)的B細(xì)胞增殖。在體外，發(fā)明者已經(jīng)觀察到IFNy和IL-IO增加了單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞表面表達(dá)的Neutrokine-a (通過(guò)培養(yǎng)原代單核細(xì)胞和20ng/mL M-CSF12-15天獲得巨噬細(xì)胞)，其中IL-4處理減少了單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞表面表達(dá)的Neutrokine-a。與IL-IO —起施用IL-4造成了對(duì)IL-IO誘導(dǎo)的細(xì)胞表面表達(dá)Neutrokine-a的完全抑制。與IFNy —起施用IL-4造成了細(xì)胞表面表達(dá)Neutrokine-a的增加。與未處理的巨噬細(xì)胞相比較，用IFN-Y和IL-IO處理巨噬細(xì)胞造成了釋放到培養(yǎng)基內(nèi)的可溶性(活性)Neutrokine- a的量增加了 3倍。在另外的實(shí)施方式中，和趨化因子一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，與趨化因子￠-8、趨化因子￠-1，、和/或巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-4 一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，與趨化因子P -8 一起施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合IL-4拮抗劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的IL-4拮抗劑包括但不限于可溶性IL-4受體多肽、多聚體形式的可溶性IL-4受體多肽、結(jié)合IL-4受體且不傳導(dǎo)經(jīng)IL-4引發(fā)的生物學(xué)信號(hào)的抗IL-4受體抗體、阻斷IL-4和一種或多種IL-4受體結(jié)合的抗IL-4抗體、和結(jié)合IL-4受體且不傳導(dǎo)經(jīng)IL-4引發(fā)的生物學(xué)信號(hào)的IL-4的突變蛋白。優(yōu)選地，本發(fā)明所采用的抗體是單克隆抗體(包括抗體片段，例如在此所述的那些片段)。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合造血生長(zhǎng)因子施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以與免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的造血生長(zhǎng)因子包括但不限于LEUKINETM(SARGRAM0STIM )和NEUPOGEN (非格司亭 )。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合成纖維生長(zhǎng)因子施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的成纖維生長(zhǎng)因子包括但不限于FGF-1、FGF-2、FGF-3、FGF-4、FGF-5、FGF-6、FGF-7、FGF-8、FGF-9、FGF-10、FGF-11、FGF-12、FGF-13、FGF-14、和 FGF-15。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗高血壓藥施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的抗高血壓藥包括但不限于鈣離子拮抗劑例如硝苯地平(ADALAT 、PROCARDIA )、周圍血管擴(kuò)張劑例如肼屈嗪(APRES0LINE )、貝塔腎上腺素能阻斷劑例如普萘洛爾(INDERAL )、a / P 腎上腺素能阻斷劑例如 labetolol (N0RM0DYNE ,TRANDATE )、·抑制血管緊張素II生成的藥物例如卡托普利(CAPOTEN )、直接抑制血管緊張素II活性的藥物例如氯沙坦(C0ZAAR )、和噻嗪類利尿劑例如氫氯噻嗪(HYDRODIURIL 、ESIDREX )?？梢詥为?dú)地或聯(lián)合其他佐劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑施用的佐劑包括但不限于明帆、明帆加脫氧膽酸(ImmunoAg)、MTP-PE (Biocine Corp.)、QS21(Genentech, Inc.)、BCG、和MPL。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合QS-21施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑施用的更多的佐劑包括但不限于單磷酸類脂免疫調(diào)節(jié)劑、AdjuVax100a、QS-21、QS-18、CRL1005、鋁鹽、MF-59、和Virosomal佐劑技術(shù)。可以與免疫調(diào)節(jié)劑施用的疫苗包括但不限于針對(duì)性保護(hù)MMR (麻疹、腮腺炎、風(fēng)疹)、脊髓灰質(zhì)炎、水痘、破傷風(fēng)/白喉、甲型肝炎、乙型肝炎、流感嗜血桿菌B、百日咳、肺炎、流感、Lyme病、輪狀病毒、霍亂、黃熱病、日本腦炎、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、傷寒、和百日咳、和或PNEUM0VAX-23 的疫苗。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合PNEUM0VAX-23 使用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合TNF家族的另一個(gè)成員施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以與免疫調(diào)節(jié)劑施用的TNF、TNF相關(guān)分子或TNF樣分子包括但不限于可溶形式的TNF-a、淋巴毒素-a (LT- a，也稱作 TNF- P )、LT- P (見(jiàn)于復(fù)合異三聚體 LT- a 2_ 3 )、OPGL, FasL, CD27L、CD30L、CD40L、4-1BBL、DcR3、0X40L、TNF- y (國(guó)際出版物 WO 96/14328)、TRAIL/AM-1 (國(guó)際出版物 WO 97/33899)、LIGHT/AIM-II (國(guó)際出版物 WO 97/34911)、APRIL (J. Exp.Med. 188(6) : 1185-1190)、endokine-a (國(guó)際出版物 WO 98/07880)、FASTR/TR6 (國(guó)際出版物 TO 98/30694)、護(hù)骨蛋白(OPG)、和 Neutrokine-a (國(guó)際出版物 WO 98/18921)、0X40、和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、和可溶形式的Fas、⑶30、⑶27、⑶40和4-IBB、TR2 (國(guó)際出版物W096/34095)、DR3 (國(guó)際出版物 WO 97/33904)、TRAIL-R1/DR4 (國(guó)際出版物 WO 98/32856)、TRAIL-R3、TR5(國(guó)際出版物 WO 98/30693)、TR6 (國(guó)際出版物 WO 98/30694)、TRAIL-R2/TR7(國(guó)際出版物TO 98/41629)、TRANK、TR9 (國(guó)際出版物TO 98/56892)、TRAIL_R4/TR10 (國(guó)際出版物 WO 98/54202)、312C2(國(guó)際出版物 WO 98/06842)、和 TR12。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合一種或多種Neutrokine- a受體(例如TACI、BCMA和BAFF-R)施用免疫調(diào)節(jié)劑。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，Neutrokine-a受體是可溶性的。在其他優(yōu)選的實(shí)施方式中，Neutrokine-a受體與免疫球蛋白分子的Fe區(qū)例如IgG分子的Fe區(qū)相融合。例如，TACI的第1-154位氨基酸殘基(GenBank編號(hào)AAC51790)、BCMA的第1_48位氨基酸(GenBank 編號(hào) NP_001183)或 BAFF-R 的第 I 到 81 位氨基酸(GenBank 編號(hào) NP 443177)可以與IgG分子的Fe區(qū)融合，并與另一種本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的BAFF-R-Fc蛋白是與IgGl免疫球蛋白分子的Fe區(qū)融合的SEQ ID NO: 10的第I到70位氨基酸。任選地，BAFF-R中的第20位氨基酸(纈氨酸)被天冬酰胺取代，BAFF-R中的第27位氨基酸(亮氨酸)被脯氨酸取代。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗CD40L抗體和/或抗CD40抗體施用免疫調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)另外的實(shí)施方式中，單獨(dú)地或聯(lián)合抗血管生成劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗血管生成劑包括但不限于血管生成抑制因子(Entremed、Rockville、MD)、肌I丐蛋白-I (Boston Life Sciences, Boston, MA)、抗侵襲因子、維甲酸及其衍生物、紫杉醇(Taxol)、舒拉明、金屬蛋白酶I組織抑制物、金屬蛋白酶-2組織抑制物、VEGI、纖溶酶·原活化因子抑制劑-I、纖溶酶原活化因子抑制劑_2、和各種形式的更輕的“d組”過(guò)渡金屬。更輕的“d族”過(guò)渡金屬包括例如釩、鑰、鎢、鈦、鈮、和鉭種類。這些過(guò)渡金屬種類可以形成過(guò)渡金屬?gòu)?fù)合物。合適的上面提及的過(guò)渡金屬種類的復(fù)合物包括氧絡(luò)過(guò)渡金屬?gòu)?fù)合物。釩復(fù)合物的代表性實(shí)例包括氧絡(luò)釩復(fù)合物例如釩酸和氧釩復(fù)合物。合適的釩酸復(fù)合物包括偏釩酸和正釩酸復(fù)合物例如偏釩酸銨、偏釩酸鈉和正釩酸鈉。合適的氧釩復(fù)合物包括例如氧釩乙酰丙酮酯和硫酸氧釩包括硫酸氧釩水合物例如硫酸氧釩單水和三水合物。鎢和鑰復(fù)合物的代表性實(shí)例也包括氧絡(luò)復(fù)合物。合適的氧絡(luò)鎢復(fù)合物包括鎢酸和氧化鎢復(fù)合物。合適的鎢酸復(fù)合物包括鎢酸銨、鎢酸鈣、鎢酸鈉二水合物、和鎢酸。合適的氧化鶴包括氧化鶴(IV)和氧化鶴(VI)。合適的氧絡(luò)鑰復(fù)合物包括鑰酸、氧化鑰、和氧鑰基復(fù)合物。合適的鑰酸復(fù)合物包括鑰酸銨及其水合物、鑰酸鈉及其水合物、和鑰酸鉀及其水合物。合適的氧化鑰包括氧化酶(VI)、氧化鑰(VI)和鑰酸。合適的氧鑰基復(fù)合物包括例如氧鑰基乙酰丙酮。其他合適的鎢和鑰復(fù)合物包括源自例如甘油、酒石酸和糖的氫氧衍生物。在本發(fā)明中，也可以利用多種其他的抗血管生成因子。代表性的實(shí)例包括但不限于血小板因子4、硫酸魚(yú)精蛋白、硫酸甲殼素衍生物(由母螃蟹殼制成MMurata etal.，Cancer Res. 51:22-26，1991)、硫酸多糖肽聚糖復(fù)合物(SP-PG)(類固醇例如雌激素和枸櫞酸他莫昔芬的存在可以增強(qiáng)這種化合物的功能)、十字孢堿、基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)劑包括例如脯氨酸類似物、順式羥脯氨酸、d，L-3，4_脫氫脯氨酸、硫代脯氨酸、a, a-聯(lián)吡啶、氨基丙腈延胡索酸、4-丙基-5-(4-吡啶基)-2 (3H)-噁唑酮、甲氨喋呤、米托蒽醌、肝素、干擾素、血清 3 2 微球蛋白、chMP(Pavloff et al.，J. Bio. Chem. 267:17321-17326，1992)、糜蛋白酶抑制素(Tomkinson et al. , Biochem J. 286:475-480，1992)、環(huán)糊精十四硫酸酯、Eponemycin、喜樹(shù)喊、夫馬潔林(Ingber et al. , Nature 348:555-557，1990)、硫代蘋(píng)果酸金鈉(“GST”;Matsubara and Ziff, J. Clin. Invest. 79:1440-1446, 1987)、血清抗膠原酶、a 2-抗血纖維蛋白酶(Holmes et al.，J. Biol. Chem. 262 (4) : 1659-1664，1987)、比生群(National Cancer Institute)、氯苯扎利二鈉(N- (2) -carboxyphenyl-4-chloroanthronilie acid disodium 或“CCA”(Takeuchi et al. , Agents Actions 36:312-316，1992))、和金屬蛋白酶抑制劑例如BB94。在本發(fā)明中也可以利用的其他的抗血管生成因子包括沙利度胺(Celgene, Warren, NJ) > Angiostatic steroid、AGM-1470 (H. Brem and J. Folkman JPediatr. Surg. 28:445-51 (1993))、整聯(lián)蛋白 a v 0 3 拮抗劑(C. Storgard et al. , J Clin.Invest. 103:47-54 (1999))> Carboxynaminolmidazole> Carboxyamidotriazole (CAI)(National Cancer Institute, Bethesda,MD)、Conbretastatin A_4 (CA4P)(OXiGENE, Boston, MA)> 角 S 胺(Magainin Pharmaceuticals, Plymouth Meeting, PA)、TNP-470(Tap Pharmaceuticals, Deerfield, IL)> ZD-OlOl (AstraZeneca, London,UK)、APRA(CT2584)、氟草胺、Byrostatin-1 (SC339555)、CGP-41251 (PKC 412)、CM101、右雷佐生(ICRF187)、DMXAA、內(nèi)皮抑素、Flavopridiol、染料木黃酮(Genestein)、GTE、ImmTher>Iressa(ZD 1839)、奧曲妝(Somatostatin) >Panretin>PenaciIlamine>Photopoint>PI-88>普啉司他(AG-3340)Purlytin、Suradista(FCE26644)、他莫昔芬(Nolvadex)、他扎羅汀、四硫鑰酸鹽、希羅達(dá)(Capecitabine)、和5_氟尿卩密唳。
·
可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗血管生成劑可以通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮作用，所述機(jī)制包括但不限于抑制細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白裂解、阻斷內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)粘附分子的功能、拮抗血管生成誘導(dǎo)劑例如生長(zhǎng)因子的功能、和抑制增殖性內(nèi)皮細(xì)胞所表達(dá)的整聯(lián)蛋白受體。干擾細(xì)胞外基質(zhì)蛋白裂解并可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗血管生成劑的實(shí)例包括但不限于AG-3340 (Agouron, LaJolla,CA)、BAY-12-9566 (Bayer, West Haven, CT)、BMS-275291 (Bristol MyersSquibb, Princeton, NJ) > CGS-27032A (Novartis, East Hanover, NJ) > 馬立馬司他(British Biotech, Oxford, UK)、和 Metastat (Aeterna, St-Foy, Quebec)。通過(guò)阻斷內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)粘附分子的功能而發(fā)揮作用以及可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗血管生成抑制劑的實(shí)例包括但不限于EMD-121974 (Merck KcgaA Darmstadt, Germany)和 Vitaxin (Ixsys, La Jolla, CA/Medimmune, Gaithersburg, MD)。通過(guò)直接拮抗或抑制血管生成誘導(dǎo)物而發(fā)揮作用以及可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的抗血管生成劑的實(shí)例包括但不限于 Angiozyme (Ribozyme, Boulder, CO)、抗 VEGF 抗體(Genentech, S. SanFrancisco, CA)、PTK-787/ZK-225846 (Novartis, Basel, Switzerland)、SU-IOl (Sugen, S.San Francisco, CA)、SU-5416(Sugen/Pharmacia Upjohn, Bridgewater, NJ) > 和SU-6668 (Sugen)。其他抗血管生成劑的作用是間接抑制血管生成?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的血管生成的間接抑制劑的實(shí)例包括但不限于IM-862 (Cytran, Kirkland, WA)、干擾素 _a、IL-12(Roche, Nutley,NJ)> 和 Pentosan polysulfate (GeorgetownUniversity, Washington, DC)。在具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗血管生成劑的聯(lián)合應(yīng)用被用于治療、預(yù)防、和/或改善自身免疫病例如在此所述的自身免疫病。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗血管生成劑的聯(lián)合應(yīng)用被用于治療、預(yù)防、和/或改善關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)更具體的實(shí)施方式中，免疫調(diào)節(jié)劑和抗血管生成劑的聯(lián)合應(yīng)用被用于治療、預(yù)防、和/或改善類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合抗凝劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的抗凝劑包括但不限于肝素、華法林和阿司匹林。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合肝素和/或華法林施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合華法林施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合華法林和阿司匹林施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合肝素施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合肝素和阿司匹林施用免疫調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聯(lián)合抑制抗心磷脂抗體生成的藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑。在具體的實(shí)施方式中，聯(lián)合阻斷和/或降低抗心磷脂抗體結(jié)合磷脂結(jié)合性血漿蛋白P 2-糖蛋白I (b2GPI)的能力的藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí)施方式中，聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑、核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、和/或蛋白酶抑制劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑包括但不限于RETR0VIR (齊多夫定/AZT)、VIDEX (雙脫氧腺苷/ddl)、HIVID (扎西他濱 /ddC)、ZERIT (司他夫定 /d4T)、EPIVIR (拉米夫定 /3TC)、和 C0MBIVIR (齊多夫定/拉米夫定)?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑包括但不限于VIRAMUNE (奈韋拉平)、RESCRIPT0R (地拉夫定)、和SUSTIVA (依法韋侖)?？梢月?lián)合·免疫調(diào)節(jié)劑施用的蛋白酶抑制劑包括但不限于CRIXIVAN (印地那韋)、N0RVIR (利托那韋)、INVIRASE (沙奎那韋)、和VIRACEPT (那非那韋)。在某些實(shí)施方式中，聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑、核苷/核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)、和/或蛋白酶抑制劑(PI)施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的NRTIs包括但不限于RETR0VIR (齊多夫定/AZT)、VIDEX (雙脫氧腺苷 /ddl)、HIVID (扎西他濱 /ddC)、ZERIT (司他夫定 /d4T)、EPIVIR (拉米夫定 /3TC)、和C0MBIVIR (齊多夫定/拉米夫定)?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的NNRTIs包括但不限于VIRAMUNE (奈韋拉平)、RESCRIPT0R (地拉夫定)、和SUSTIVA (依法韋侖)?？梢月?lián)合免疫調(diào)節(jié)劑施用的PIs包括但不限于CRIXIVAN (印地那韋)、N0RVIR (利托那韋)、INVIRASE (沙奎那韋)、和VIRACEPT (那非那韋)。其他的NRTI 包括 L0DEN0SINE (F-ddA ;酸穩(wěn)定的腺苷 NRTI ；Triangle/Abbott)、C0VIRACIL (恩曲他濱/FTC ;結(jié)構(gòu)上類似于拉米夫定(3TC)，但是體外活性是拉米夫定的3到10倍；Triangle/Abbott)、d0TC(BCH-10652 ;也在結(jié)構(gòu)上類似于拉米夫定，但是仍保留了抗大部分拉米夫定耐藥性分離株的活性；Biochem Pharma)、阿德福韋(FDA拒絕批準(zhǔn)其用于抗HIV治療；Gilead Sciences)、PREVE0N (阿德福韋二匹福酯；阿德福韋的活性前體藥物；其活性形式為 PMEA-pp)、TEN0F0VIR (bis-POCPMPA, PMPA 前體藥物；Gilead)、DAPD/DXG (DAPD 的活性代謝物；Triangle/Abbott)、D-D4FC (類似于 3TC，具有抗 AZT/3TC耐藥病毒的活性)、GW420867X (Glaxo Wellcome)、ZIAGEN (阿巴卡韋 /159U89 ；GlaxoWellcome Inc.)、CS-87 (3，疊氮基-2，，3，-雙脫氧尿苷；W0 99/66936)、和 ^ -L-FD4C 及3-L-FddC的攜帶S-?；?2-硫乙基(S-acyl-2-thioethyl，SATE)的前體藥物形式(W098/17281)。其他的NNRTI 包括 C0ACTIN0N (乙米韋林 /MKC-442、HEPT 型的強(qiáng) NNRTI ；Triangle/Abbott)、CAPRAVIRINE (AG-1549/S-1153，下一代的具有抗含 K103N 突變的病毒活性的NNRTI ；Agouron)、PNU_142721 (具有比其前身地拉夫定高20到50倍的活性，并能抗K104N 突變體 Pharmacia & Upjohn)、DPC-961 和 DPC-963 (被設(shè)計(jì)成抗具有 K103N 突變的病毒的依法韋侖的第二代衍生物；DuPont)、GW-420867X(具有比HBY097高25倍的活性，并能抗K103N突變體；Glaxo Wellcome)、CALANOLIDE A (來(lái)自橡膠樹(shù)的天然存在的物質(zhì)；能抗含 Y181C 和 K103N 突變的病毒);和 Propolis (WO 99/49830)。其他的蛋白酶抑制劑包括L0PINAVIR (ABT378/r ；Abbott Laboratories)、BMS-232632 (一種氮雜肽；Bristol-Myres Squibb)、TIPRANAVIR (PNU-140690,非肽的二氧卩比略麗；Pharmacia &Upjohn)、PD-178390 (非妝的二氧卩比略麗；Parke_Davis)、BMS232632( 一種氮雜肽；Bristol-Myers Squibb)、L-756, 423(印地那韋類似物；Merck)、DMP-450(環(huán)狀尿素復(fù)合物；Avid & DuPont)、AG-1776 (具有體外抗蛋白酶抑制劑耐藥病毒活性的肽模擬物；Agouron)、VX-175/GW-433908 (安潑那韋的磷酸前體藥物；Vertex &Glaxo Welcome)、CGP61755 (Ciba)、和 AGENERASE (安潑那韋；Glaxo Wellcome Inc.)。其他的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑包括融合抑制劑/gp41結(jié)合劑。融合抑制劑/gp41結(jié)合劑包括T-20(來(lái)自HIV gp41跨膜蛋白外功能區(qū)的第643到678位氨基酸的肽，其與靜止?fàn)顟B(tài)的gp41結(jié)合，并阻止其轉(zhuǎn)化成融合狀態(tài)Jrimeris)和T-1249 (第二代融合抑制劑；Trimeris)?！て渌目鼓孓D(zhuǎn)錄病毒劑包括融合抑制劑/趨化因子受體拮抗劑。融合抑制劑/趨化因子受體拮抗劑包括CXCR4拮抗劑例如AMD3100(bicyclam)、SDF-I及其類似物、和ALX40-4C (陽(yáng)離子肽)、T22 (18個(gè)氨基酸的肽；Trimeris)、和T22類似物T134和T140 ；CCR5拮抗劑例如 RANTES (9-68)、A0P-RANTES、NNY-RANTES、和 TAK-779 ;和 CCR5/CXCR4 拮抗劑例如NSC 651016(偏端霉素類似物)。也包括CCR2B、CCR3、和CCR6拮抗劑。趨化因子受體激動(dòng)劑例如RANTES、SDF-UMIP-I a ,MIP-I ^等也抑制融合。其他的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑包括整合酶抑制劑。整合酶抑制劑包括二咖啡酰奎寧酸(DFQA)、L-菊苣酸(一種二咖啡酰酒石酸(DCTA))、喹唑啉(QLC)和相關(guān)的蒽醌、ZINTEVIR (AR 177，寡核苷酸，可能作用于細(xì)胞表面而不是真正的整合酶抑制劑；Arondex)、萘酚例如在WO 98/50347中所述的那些萘酚。其他的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑包括羥基脲樣化合物例如BCX_34(嘌呤核苷磷酸化酶，Biocryst)、核苷酸還原酶抑制劑例如DID0X (Molecules for Health)、次黃嘌呤單磷酸脫氫酶(MPDH)抑制劑例如VX-497 (Vertex)、和霉酚酸例如CellC印t (霉酚酸酯；Roche)。其他的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑包括病毒整合酶的抑制劑、病毒基因組核轉(zhuǎn)位的抑制劑例如亞芳基雙(甲基酮)化合物、HIV進(jìn)入的抑制劑例如A0P-RANTES、NNY-RANTES、RANTES-IgG融合蛋白、RANTES和氨基葡聚糖(GAG)的可溶性復(fù)合物、和AMD-3100 ;核衣殼鋅指抑制劑例如二噻烷化合物；HIV Tat和Rev的靶點(diǎn)；以及藥物增強(qiáng)劑例如ABT-378。其他的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療和輔助治療包括細(xì)胞因子和淋巴因子例如MIP-I a、MIP-I ^、SDF-I a、IL-2、PR0LEUKIN (阿地白介素 /L2-7001 ；Chiron)、IL-4, IL-8,IL-10、IL-12、和 IL-13 ;干擾素例如 IFN-a 2a ;TNF、NFk B、GM-CSF, M-CSF、和 IL-IO 的拮抗劑；調(diào)控免疫激活的藥物例如環(huán)孢菌素和潑尼松；疫苗例如RemuneTM(HIV免疫原)、APL 400-003 (Apollon)、重組 gpl20 和片段、二價(jià)(B/E)重組包膜糖蛋白、rgpl20CM235、MNrgp 120、SF-2rgp 120、gp 120/ 可溶性 CD4 復(fù)合物、De I ta JR-FL 蛋白、源自非連續(xù)的 gp 120C3/C4區(qū)的分支合成肽、融合-互補(bǔ)免疫原、和Gag、Pol、Nef、及Tat疫苗；基因治療例如遺傳抑制子元件(GSE ；W0 98/54366)、和細(xì)胞內(nèi)趨化因子(intrakine)(靶向于ER阻斷新合成的CCR5的表面表達(dá)的遺傳學(xué)修飾的CC趨化因子(Yang et al.，PNAS94:11567-72 (1997)；Chen et al.，Nat. Med. 3:1110-16 (1997)));抗體例如抗 CXCR4 抗體 12G5、抗 CCR5 抗體2D7、5C7、PA8、PA9、PA10、PAlU PA12、和 PA14、抗 CD4 抗體 Q4120 和 RPA-T4、抗 CCR3 抗體7B11、抗 gpl20 抗體 17b、48d、447-52D、257-D、268-D 和 50. I、抗 Tat 抗體、抗 TNF-a 抗體、和單克隆抗體33A、芳香烴(AH)受體激動(dòng)劑和拮抗劑例如T⑶D、3，3’，4，4’，5-五氯聯(lián)苯、3，3’，4，4’-四氯乙烷、和a-萘黃酮(WO 98/30213)、和抗氧化劑例如Y-L-谷氨酰-L-半胱氨酸乙酯(\ -GCE ；W099/56764)。在其他實(shí)施方式中，可以聯(lián)合抗機(jī)會(huì)性感染藥物施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑的抗機(jī)會(huì)性感染藥物包括但不限于TRMETHOPRM-SULFAMETHOXAZOLE 、DAPSONE 、PENTAMIDINE 、ATOVAQUONE 、IS0NIAZID 、RIFAMPIN 、PYRAZINAMIDE ,ETHAMBUT0L 、 RIFABUTIN 、 CLARITHROMYCIN 、 AZITHROMYCIN 、 GANCICLOVIR 、F0SCARNET 、CID0F0VIR 、FLUCONAZOLE , ITRACONAZOLE 、KET0C0NAZ0LE 、ACYCLOVIR 、FAMCICOLVIR 、PYRMETHAMINE 、LEUC0V0RIN 、NEUPOGEN (非格司亭 /G-CSF)、和LEUKINE (sargramostim/GM-CSF)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和TRIMETH0PRIM-SULFAMETH0XAZ0LE . DAPSONE , PENTAMIDINE 、和 / 或 AT0VAQU0NE 的·任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性卡氏肺孢子菌肺炎感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和 isoniazid 、rifampin 、PyrazinamidetmJP / 或 ethambutol 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性鳥(niǎo)型分枝桿菌復(fù)合物感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和RIFABUTIN 、CLARITHROMYCIN 、和/或AZITHROMYCIN 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性結(jié)核分枝桿菌感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和GANCICLOVIR 、F0SCARNET 、和/或CID0F0VIR 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性巨細(xì)胞病毒感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和FLUCONAZOLE 、ITRACONAZOLE 、和/或KET0C0NAZ0LE 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性真菌感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和ACYCLOVIR 和/或FAMCIC0LVIR 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性I型和/11型單純皰疹病毒感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和pyrmethaminets^p /或leucovorin 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性鼠弓形體感染。在另一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用免疫調(diào)節(jié)劑和LEUC0V0RIN 和/或NEUPOGEN 的任一組合預(yù)防性治療、預(yù)防、和/或診斷機(jī)會(huì)性細(xì)菌感染。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗病毒劑施用免疫調(diào)節(jié)劑?？梢耘c免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的抗病毒劑包括但不限于阿昔洛韋、利巴韋林、金剛烷胺和金剛乙胺(remantidine)。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方式中，聯(lián)合抗生素施用免疫調(diào)節(jié)劑。可以與免疫調(diào)節(jié)劑一起施用的抗生素包括但不限于阿莫西林、氨基糖甙、^ -內(nèi)酰胺類(糖肽)、^ -內(nèi)酰胺酶、克林霉素、氯霉素、頭孢菌素、環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星、紅霉素、氟喹諾酮、大環(huán)內(nèi)酯、甲硝唑、青霉素、喹諾酮、利福平、鏈霉素、磺胺、四環(huán)素、甲氧芐胺嘧啶、甲氧芐胺嘧啶-硫酸甲氧芐啶、和萬(wàn)古霉素。另外，可以單獨(dú)地或聯(lián)合其他的治療方案施用免疫調(diào)節(jié)劑，所述治療方案包括但不限于放射治療?？梢源涡虻睾?或同步地施用這些組合治療。試劑盒本發(fā)明也提供了包括一個(gè)或多個(gè)填充了一種或多種藥物組合物的組分的容器的藥物袋或試劑盒。任選地，與這些容器相伴隨的可以是政府監(jiān)督部門(mén)所規(guī)定的關(guān)于藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售方面的通知，該通知反映了用于人體施用的藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售的監(jiān)督部門(mén)的認(rèn)證。另外，可以采用與其他治療化合物組合的本發(fā)明的多肽。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，試劑盒含有政府監(jiān)督部門(mén)所規(guī)定的關(guān)于藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售方面的通知，該通知反映了用于人體施用的藥品或生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售的監(jiān)督部門(mén)認(rèn)證了其在ANA滴度大于或等于1:80和/或血漿或血清抗dsDNA抗體大于或等于30IU的患者中的應(yīng)用。實(shí)施例雖然已經(jīng)廣泛地描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域人員參照下面的實(shí)施例將更容易理解本發(fā)明，所述實(shí)施例在此只是舉例說(shuō)明的目的，并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)施例I :應(yīng)用中和Neutrokine-a蛋白的抗體(Belimumab (貝利單抗))治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的臨床試驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)
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一個(gè)前瞻性、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照試驗(yàn)是關(guān)于SLE標(biāo)準(zhǔn)治療基礎(chǔ)上加入Belimumab (中和Neutrokine-a的抗體)治療SLE的研究?？偣踩脒x了 449例符合ACR標(biāo)準(zhǔn)(Tan et al. , Arthritis Rheum. 25:1271-7, (1982);和 Hochberg et al. , ArthritisRheum. 40:1725, (1997))、具有可測(cè)定的自身抗體的病史以及篩選時(shí)SELENA SLEDAI評(píng)分彡4的SLE對(duì)象。在第O、14、28天,然后每28天靜脈內(nèi)施用研究藥物(l、4、10mg/kg Belimumab)或安慰劑，共52周。給完成52周治療的對(duì)象進(jìn)行是否繼續(xù)24周延長(zhǎng)期研究的選擇。Be Iimumab被配制于IOmM檸檬酸鈉、1. 9%甘油、0. 5%蔗糖、0. 01% (w/v)聚山梨酯80 (pH6. 5 ± 0. 3)。接受安慰劑的對(duì)象也接受沒(méi)有Belimumab的制劑(IOmM檸檬酸鈉、I. 9%甘油、0. 5%蔗糖、0. 01% (w/v)聚山梨酯 80(pH6. 5±0. 3))。每隔 I 到 2 個(gè)月用 SELENASLEDAI (SS)、SLE FlareIndex、醫(yī)師整體評(píng)價(jià)(PGA)評(píng)價(jià)療效。也規(guī)律地評(píng)價(jià)BILAG和SF-36疾病活動(dòng)度評(píng)分。預(yù)定的主要療效終點(diǎn)是24周時(shí)SS評(píng)分的下降百分比以及52周內(nèi)如SLE發(fā)作指數(shù)所定義的至發(fā)作時(shí)間。生物學(xué)標(biāo)記物包括ANA、抗dsDNA抗體(Ab)、C3/C4、Ig同種型、和周圍B細(xì)胞FACS0 每隔 I 到 2 個(gè)月用 4 色 FACS (CD19、CD20、CD27、CD69、CD38、CD138 和 CD45)分析 B細(xì)胞。在同一次隨訪中獲得血清自身抗體水平包括抗dsDNA Ab、Ig同種型、總蛋白和白蛋白水平。用似然比卡方分析、Wilcoxon檢驗(yàn)或t-檢驗(yàn)分析生物學(xué)標(biāo)記物的變化。在本研究中，對(duì)象的平均年齡為42歲；這些對(duì)象中的平均SLE患病時(shí)間為8. 8年。這些對(duì)象中的基線疾病活動(dòng)性水平是相當(dāng)高的，接近67%的對(duì)象的SS評(píng)分為8分或更高(平均SS評(píng)分為9. 6)。93%本研究入選的對(duì)象都是女性。70%的對(duì)象是白種人；24%的對(duì)象是非裔美國(guó)人；3%的對(duì)象是亞洲裔；以及18%的對(duì)象是西班牙裔(重疊分類)。98%的對(duì)象具有歷史記錄的ANA陽(yáng)性，以及71. 5%的對(duì)象在入選時(shí)為ANA+(篩選時(shí)/第0天ANA滴度>1:80和/或抗dsDNA Ab彡30IU/ml)。50%對(duì)象在入選時(shí)的抗dsDNA滴度彡30IU/ml。基線時(shí)最常見(jiàn)的用于SLE治療的藥物包括以下藥物類固醇(接近70%對(duì)象)、氨基喹啉(例如抗瘧藥)(70%)、⑶X-2抑制劑(28%) ,C0X-1抑制劑(26%)、硫唑嘌呤(20%)、甲氨喋呤(16%)、和霉酚酸酯(16%)。在基線時(shí)，分別有34%和42%的試驗(yàn)組和安慰劑組對(duì)象接受了有臨床意義劑量的全身糖皮質(zhì)激素(定義為>7. 5mg/天的潑尼松或等效劑量的其他糖皮質(zhì)激素)。試驗(yàn)組間的基線表征或完成率方面都沒(méi)有顯著差異(81%完成試驗(yàn))。
雖然主要療效終點(diǎn)沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，但是在ANA+對(duì)象中，第52周時(shí)SS評(píng)分被顯著地降低了 29%(p=0. 0435,見(jiàn)圖I)。利用24周基線,減少了 Belimumab對(duì)象在第24到52周期間的SLE發(fā)作(log rank p=0. 036)。雖然沒(méi)有觀察到BILAG組合數(shù)字評(píng)分(通過(guò)按照以下方法將器官系統(tǒng)分級(jí)轉(zhuǎn)化成數(shù)字評(píng)分計(jì)算出BILAG組合)，但是在ANA+對(duì)象中，對(duì)8個(gè)單個(gè)器官區(qū)評(píng)分的分析發(fā)現(xiàn)第52周時(shí)經(jīng)Belimumab治療的對(duì)象的兩個(gè)器官區(qū)評(píng)分有著更少的增加(骨骼肌肉，P〈0. 008 ;神經(jīng)，p〈0. 038)以及三個(gè)器官區(qū)的評(píng)分有向更少增加的趨勢(shì)(心血管和呼吸，P=O. 06 ;全身，p=0. 15 ;腎臟，p〈0. 15)。至第16周(p=0. 016)到第52周(p〈0. 002 ;總活性與安慰劑相比)時(shí)都改善了 PGA評(píng)分。因此是有改善的，盡管安慰劑組的潑尼松劑量與Belimumab治療組相比是增加的(增加到大于7. 5mg/天，15%對(duì)7%)。在ANA+對(duì)象中，早在第8周時(shí)就觀察到了潑尼松增加(從低劑量< 7.5mg/天到高劑量>7. 5mg/天)的頻率的顯著下降(在第8-12周時(shí)以及第32到40周時(shí)p〈0. 05)。沒(méi)有劑量應(yīng)答性的療效，說(shuō)明所有的劑量都有著相等的活性。在安全性方面包括不良事件(AE)、AE嚴(yán)重性、感染或?qū)嶒?yàn)室毒性，在所有Belimumab和安慰劑組的比較中都沒(méi)有觀察到臨床顯著的差異。Belimumab組對(duì)象出現(xiàn)胸膜炎的更少(3. 3%對(duì)8%, p〈0. 05),而出現(xiàn)蕁麻疫更·多(4%對(duì)0%，p〈0. 05)。輸注反應(yīng)少見(jiàn)，只報(bào)道了 I例嚴(yán)重事件。在I例對(duì)象(lmg/kg)中觀察到了對(duì)Belimumab的免疫原性。如表IX所示，在第52周時(shí)對(duì)ANA+對(duì)象的分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于安慰劑而言，Belimumab治療造成了疾病的顯著穩(wěn)定，如BILAG指數(shù)(第3行)和PGA (第4行)所測(cè)定的那樣。此外，也用組合應(yīng)答終點(diǎn)(第I行)分析了試驗(yàn)治療組中的應(yīng)答率，所述終點(diǎn)組合了經(jīng)SS評(píng)分測(cè)定到的整體疾病活動(dòng)度的測(cè)量值和經(jīng)PGA疾病活動(dòng)度指數(shù)測(cè)定到的患者總體狀態(tài)的測(cè)定值以及經(jīng)BILAG評(píng)分表測(cè)定到的特殊器官系統(tǒng)病變的測(cè)量值。如果患者的SELENA SLEDAI評(píng)分減少彡4分，其PGA評(píng)分沒(méi)有惡化(定義為PGA評(píng)分增加〈O. 3分)以及任一特定器官系統(tǒng)沒(méi)有惡化(定義為沒(méi)有新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或沒(méi)有2個(gè)新的BILAGB器官區(qū)評(píng)分)，那么在組合終點(diǎn)中患者就被認(rèn)為是應(yīng)答于所述治療。利用上面所述的組合終點(diǎn)，對(duì)ANA+對(duì)象的分析發(fā)現(xiàn)對(duì)Belimumab的顯著應(yīng)答(p=0. 0058)。 另外，在ANA+對(duì)象中，在治療早期就觀察到了 PGA和SF-36體能組分評(píng)分(SF-36PCS)的顯著改善。與ANA+安慰劑治療的對(duì)象相比較，經(jīng)Belimumab治療的ANA+對(duì)象最早在第4周時(shí)就顯示出了基線PGA變化平均百分比的顯著改善(p〈0.05)。與ANA+安慰劑治療的對(duì)象相比較，經(jīng)Belimumab治療的ANA+對(duì)象在第8周、16周、48周和52周時(shí)也顯示出了基線PGA變化平均百分比數(shù)值的顯著改善(第8、16周和48周時(shí)p〈0. 05 ;第52周時(shí)p〈0. 01)。與ANA+對(duì)象安慰劑治療組相比較，平均SF-36PCS也顯示出經(jīng)Belimumab治療的ANA+對(duì)象在第12周、24周、48周和52周時(shí)的生活質(zhì)量的顯著改善(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都p<0. 05)。在整個(gè)研究期間觀察到了 Belimumab治療對(duì)象中的B細(xì)胞數(shù)目的顯著減少(用中位基線數(shù)目改變百分比表示)，包括CD19+B細(xì)胞(在第8到52周期間所取的每個(gè)測(cè)量值都是P〈0. 01)、活化B細(xì)胞(⑶20+/⑶69+ ;在第8到52周期間所取的每個(gè)測(cè)量值都是p〈0. 01)、純真B細(xì)胞(⑶20+/⑶27-，在第8到52周期間所取的每個(gè)測(cè)量值都是p〈0. 01)、和漿細(xì)胞樣B細(xì)胞(⑶20+/⑶138+ ;在第16到52周期間所取的每個(gè)測(cè)量值都是p〈0. 01)。在第24周時(shí)對(duì)B細(xì)胞數(shù)目的測(cè)量證實(shí)，與安慰劑治療的對(duì)象相比較，Belimumab (所有治療的匯總)顯著地降低了第24周時(shí)的B細(xì)胞。在第24周時(shí)，觀察到細(xì)胞數(shù)目的顯著下降(用中位基線數(shù)目改變百分比表示)，包括⑶19+B細(xì)胞、活化B細(xì)胞(⑶20+/⑶69+)、純真B細(xì)胞(⑶20+/⑶27-)、和漿細(xì)胞樣B細(xì)胞(⑶20+/⑶138+)。Belimumab (組合了所有治療)顯著地降低了第52周時(shí)的B細(xì)胞(中位值)。在第52周時(shí)，組合所有治療組的中位CD20+B細(xì)胞的改變百分比是54%*，早在第8周時(shí)就觀察到了顯著下降(p〈0.0001)。在第52周時(shí)，組合所有治療組的中位漿細(xì)胞樣B細(xì)胞(⑶20+/⑶138+)的改變百分比是62%*。在第52周時(shí)，組合所有治療組的中位活化B細(xì)胞(⑶20+/⑶69+B細(xì)胞)變化百分比是70%* (*均為p〈0. 02)。在第52周時(shí)，顯著地減少了⑶19+B細(xì)胞和純真B細(xì)胞(CD20+/CD27-)，同時(shí)保留了記憶細(xì)胞群。相反地，在Belimumab治療對(duì)象中，第52周時(shí)的漿細(xì)胞比基線(2.7%)增加了 72. 5%，而安慰劑/標(biāo)準(zhǔn)治療組中只有30. 6%(p=0. 02)。另外，Belimumab誘導(dǎo)的B細(xì)胞數(shù)目的減少一直持續(xù)到了第76周。在第76周時(shí)，組合所有治療組的中位CD20+B細(xì)胞的改變百分比是61%。在第76周時(shí)，組合所有治療組的中位漿細(xì)胞樣B細(xì)胞(⑶20+/⑶138+)的改變百分比是60%。在第76周時(shí)，組合所有治療組的中位活化B細(xì)胞(⑶20+/⑶69+B細(xì)胞)變化百分比是84%。在Belimumab治療對(duì)象和安慰劑治療對(duì)象的比較中，早在第4周就觀察到了 Belimumab顯著地降低了入選時(shí)抗dsDNA滴度彡30IU/ml的對(duì)象體內(nèi)的抗dsDNA·滴度(用中位基線改變百分比表示)(在第4到12周期間得到的每個(gè)測(cè)定值為p〈0. 01 ;在第16到24周期間得到的每個(gè)測(cè)定值為p〈0. 03 ;在第32到52周期間得到的每個(gè)測(cè)定值為p〈0. 01)。在第52周時(shí)Belimumab降低了抗dsDNA Ab 30%(p〈0. 002，基線陽(yáng)性)，而安慰劑組為9%。該作用得到了保持，因?yàn)榈?6周的測(cè)量值顯示出抗dsDNA Ab降低了 28%。與安慰劑治療的對(duì)照相比較，在Belimumab治療對(duì)象中，早在第8周時(shí)就證實(shí)了 Belimumab誘導(dǎo)的血清IgG、IgA、IgE、和IgM水平的顯著降低(用中位基線改變百分比表示)(p〈0. 0001)。在第52周時(shí)，降低了血清IgG、IgA、IgE、和IgM水平(分別是10%、14%、34%和29%)。所述降低持續(xù)到了第76周(分別是12%、15%、35%和34%)。此外，對(duì)于那些基線時(shí)Ig同種型水平增高的對(duì)象，41%接受Belimumab治療的對(duì)象(52/128，p=0. 0014)恢復(fù)到了正常的Ig同種型水平，而只有16%(7/45)對(duì)照對(duì)象恢復(fù)到了正常水平。在Belimumab治療組中的基線低C4補(bǔ)體水平的患者中，對(duì)于在第4到52周期間得到的所有測(cè)量值都觀察到了 C4補(bǔ)體水平的顯著增加(用中位基線改變百分比表示)。在第52周時(shí)，Belimumab治療組中的C4增加了33%(p=0. 0126,低基線C4水平)。Belimumab作用再一次得到了保持,Belimumab治療組第76周時(shí)的C4提高到了 46%。在第52周時(shí)，與安慰劑組相比較(3. 5%，2/58)，14. 5%(24/165)接受Belimumab的抗dsDNA+對(duì)象轉(zhuǎn)變成了陰性(p=0. 012)。在第76周時(shí)，又有3個(gè)接受Belimumab的抗dsDNA+對(duì)象轉(zhuǎn)變成了陰性。Belimumab是被很好耐受的，并顯示出了顯著的生物學(xué)活性。Belimumab提高了PGA評(píng)分、降低了 B細(xì)胞數(shù)目、增加了 C4、減少了抗dsDNA，和降低/正?；?Ig同種型水平。Belimumab延遲了 6個(gè)月后的發(fā)作發(fā)生。在入選時(shí)ANA陽(yáng)性的對(duì)象中，顯著地提高了第52周時(shí)的SS評(píng)分。最后，組合應(yīng)答終點(diǎn)顯示出了 ANA+對(duì)象對(duì)Belimumab治療的顯著應(yīng)答(見(jiàn)表IX)。表IX :ANA+對(duì)象在第52周時(shí)的應(yīng)答率安慰劑1,04.010.0總活性 P ffl
N=86mg/kgmg/kgmg/kgN=235
M=78N=79N=78
1應(yīng)答率(SELENA SLEDAI 評(píng)分減少Si 4 分， 25383436108 0.0058 BILAG 指數(shù)沒(méi)有惡化(沒(méi)有新的 BILAG A 器官(29.1%)(48.7%)(43.0%)(46 )(46.0%)
區(qū)評(píng)分或沒(méi)有2個(gè)新的BILAG B器宵bi評(píng)分)，
PGA評(píng)分沒(méi)有惡化(增加<0.3分)的對(duì)象％)
2SELENA SLEDAI 評(píng)分減少S 4 分的對(duì)象0Z034413837116 0.1169· (39.5%)(52.6%)(48.1%)(47.4%)(49.4%)
3BILAG指數(shù)沒(méi)有惡化(沒(méi)有新的BILAG A器官 70697571215 0.0152 區(qū)評(píng)分或沒(méi)有 2 個(gè)新的 BILAG B 器官區(qū)評(píng)分)(81.4%)(88.5%)(94.9%)(91.0%)(91.5%)
的對(duì)象％
4PGA I平分沒(méi)冇惡化(增加<0.3分)的對(duì)象％66707072212 0.0027
(76.7%)(89.7%)(88.6%)(92.3%)(90.2%)aP值來(lái)自組合的總活性與安慰劑組之間的配對(duì)比較的似然比檢驗(yàn)。實(shí)施例2 : SELENA SLEDAI蛋白尿評(píng)分腎功能不全常常與系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)。本領(lǐng)域人員知道多種可以用于評(píng)價(jià)腎功能的標(biāo)準(zhǔn)措施，例如進(jìn)展至終末期腎病時(shí)間、血清肌酐持續(xù)倍增時(shí)間、肌酐清除率、碘酞酸清除率、單次尿液樣品中的蛋白濃度和24小時(shí)尿液樣品中的蛋白濃度。從“ 24小時(shí)尿液樣品”中計(jì)算出的蛋白尿變化是SELENA SLEDAI所評(píng)分的項(xiàng)目之一?？梢杂帽绢I(lǐng)域任一已知的方法進(jìn)行蛋白尿測(cè)量。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，收集單次尿液樣品，并測(cè)定出蛋白量和/或肌酐清除率，見(jiàn)例如Lemann, et al.，ClinChem. , 33:297-9，1987和 Schwab, et al. , Arch Intern Med. ,May;147(5):943-4，1987。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，收集24小時(shí)的尿液，并測(cè)定出蛋白量和/或肌酐清除率。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，收集單次尿液樣品，測(cè)定出蛋白量與肌酐清除率量的比值，用該比值估計(jì)出24小時(shí)尿液樣品中的蛋白量，見(jiàn)例如Ruggenenti, et al. , BMJ. 316(7130) :504-9，1998。因此，在這個(gè)實(shí)施例中，“24小時(shí)尿液樣品”可以表示基于24小時(shí)尿液樣品的尿液中的蛋白克數(shù)或?qū)?4小時(shí)尿液樣品中的蛋白克數(shù)的估計(jì)值。對(duì)24小時(shí)尿液樣品中的蛋白克數(shù)的估計(jì)可以依據(jù)例如單次尿液樣品中的蛋白量與單次尿液樣品中的肌酐清除率量的比值。在標(biāo)準(zhǔn)的SELENA SLEDAI評(píng)分系統(tǒng)中，表現(xiàn)出新出現(xiàn)的蛋白尿或者近期蛋白尿的增加(造成了最近24小時(shí)尿液樣品中的蛋白尿數(shù)值比在緊鄰的前一 24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值高出至少0.5g)的患者被記為所發(fā)表的SELENA SLEDAI評(píng)分表中的蛋白尿 4 分，見(jiàn)例如 Bombardier, et al. , Arthritis Rheum. Jun; 35 (6) : 630-40，1992。因此，在標(biāo)準(zhǔn)的SELENASLEDAI評(píng)分系統(tǒng)下，只要24小時(shí)尿液樣品中的蛋白尿不持續(xù)增加>0. 5g，那么基線被記為蛋白尿4分的對(duì)象在隨后的隨訪中就會(huì)出現(xiàn)SELENA SLEDAI的改善(即甚至在面臨著穩(wěn)定的蛋白尿或蛋白尿增加< 0. 5g/24時(shí)，患者的總分都可以減去4分)。下面描述了對(duì)SELENA SLEDAI蛋白尿評(píng)分規(guī)則的修飾。和標(biāo)準(zhǔn)的SELENA SLEDAI評(píng)分系統(tǒng)一樣，表現(xiàn)出新出現(xiàn)的蛋白尿或者近期蛋白尿的增加(造成了最近24小時(shí)尿液樣品中的蛋白尿數(shù)值比在緊鄰的前一 24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值高出至少0. 5g)的患者被記為蛋白尿4分。此外如果患者的蛋白尿數(shù)值沒(méi)有改善(即，當(dāng)前24小時(shí)尿液樣品中的蛋白尿沒(méi)有比緊鄰的前一 24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值減少至少0. 5g)，則患者繼續(xù)被記為蛋白尿4分。但是如果患者的蛋白尿數(shù)值得到了改善(即當(dāng)前24小時(shí)尿液樣品中的蛋白尿比緊鄰的前一 24小時(shí)尿液樣品中測(cè)定到的蛋白尿數(shù)值降低至少0. 5g)，則患者被記為蛋白尿0分。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，緊鄰的前一蛋白尿測(cè)量值是在當(dāng)前測(cè)量前< 26周內(nèi)的24小時(shí)尿液樣品中得到的測(cè)量值。實(shí)施例3 :應(yīng)用中和Neutrokine-a蛋白的抗體(Belimumab)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(SLE)的臨床試驗(yàn)結(jié)果的總結(jié)在患有RA的對(duì)象中進(jìn)行了一項(xiàng)2期、多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照研究。對(duì)象被·隨機(jī)分為4個(gè)治療組(安慰劑組、lmg/kg、4mg/kg和10mg/kg)。在第O、14、28天,然后每28天施用l、4、10mg/kgBelimumab或安慰劑,共24周。之后是任選的24周延伸期。Belimumab被配制于IOmM檸檬酸鈉、I. 9%甘油、0. 5%蔗糖、0. 01%(w/v)聚山梨酯80 (pH6. 5±0. 3)。接受安慰劑的對(duì)象也接受沒(méi)有Belimumab的制劑(IOmM檸檬酸鈉、I. 9%甘油、0. 5%蔗糖、0.01%(w/v)聚山梨酯80(pH6. 5±0. 3))?？偣?83例對(duì)象參加了該研究。在24周的研究治療期內(nèi)給214例對(duì)象施用了 1、4、或10mg/kg的Belimumab。99例對(duì)象接受了安慰劑。在lmg/kg治療組(p=0. 0097)以及組合所有積極治療組(p=0. 0213)中都獲得了統(tǒng)計(jì)學(xué)更優(yōu)的ACR20應(yīng)答。ACR20是美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)開(kāi)放的用于評(píng)價(jià)患者對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的應(yīng)答的指數(shù)。ACR20應(yīng)答被定義成除了 5個(gè)其他的癥狀或疾病表現(xiàn)評(píng)價(jià)(即患者疼痛評(píng)價(jià)、患者整體評(píng)價(jià)、體能整體評(píng)價(jià)、患者自我評(píng)價(jià)的殘疾、急性期反應(yīng)物(ESR或CRP))中的3個(gè)評(píng)價(jià)改善了至少20%外，壓痛關(guān)節(jié)數(shù)目和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)目至少減少了 20%。此外，在利用Bonferroni closed方法進(jìn)行的多個(gè)比較的調(diào)整之后，lmg/kg治療組的結(jié)果仍是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(P〈0. 0166)。和SLE對(duì)象一樣，Belimumab與基線自身抗體陽(yáng)性疾病(類風(fēng)濕因子(RF)或抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP))的對(duì)象以及基線C反應(yīng)蛋白(CRP)陽(yáng)性的對(duì)象中的ACR20應(yīng)答的提高相關(guān)。觀察到了生物學(xué)活性，包括統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的CD20+B細(xì)胞、純真B細(xì)胞、活化B細(xì)胞和RF的降低；記憶細(xì)胞在治療第一個(gè)月內(nèi)的增多以及在持續(xù)治療期間的緩慢減少。所有劑量的Belimumab都能被很好的耐受。在本研究中，療效、安全性或生物學(xué)標(biāo)記物作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系并不明顯。研究延伸期的持續(xù)治療能被很好的耐受。在第48周時(shí)，ACR20應(yīng)答增加了近40%。隨著治療的持續(xù)，增加并保持了對(duì)生物學(xué)標(biāo)記物的作用，同時(shí)記憶細(xì)胞數(shù)目繼續(xù)降低到基線水平。本研究中的血清濃度是在根據(jù)I期數(shù)據(jù)所預(yù)期到的范圍之內(nèi)，相伴的藥物(例如甲氨喋呤、來(lái)氟米特或輕氯喹)對(duì)Belimumab的暴露都沒(méi)有顯著影響。實(shí)施例4 Neutrokine- a通過(guò)兩條獨(dú)立的信號(hào)傳導(dǎo)途徑延長(zhǎng)了 B細(xì)胞壽命Neutrokine-a 也稱作 BLyS (B 淋巴細(xì)胞刺激物)、BAFF、TALL-1、THANK、TNFSF13B和zTNF4是靜止周圍B淋巴細(xì)胞存活的關(guān)鍵因子(Rolink, A. G. , and Melchers, F. (2002).Curr Opin Immunol 14,266-275)。通過(guò)經(jīng)祀向基因缺失或引入可溶性誘館受體生成的Neutrokine-a缺陷小鼠有著邊緣帶和濾泡B細(xì)胞(主要的成熟外周B細(xì)胞群)的嚴(yán)重缺陷的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)很好地證實(shí)了 Neutrokine-a在純真B細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面的重要性(Gross, J. A. , et al. (2001). Immunity 15, 289-302 ；Schiemann, B. , et al. (2001).Science293, 2111-2114)。相反地,轉(zhuǎn)基因造成的Neutrokine- a的異位表達(dá)明顯延長(zhǎng)了濾泡和邊緣帶外周B細(xì)胞的壽命，且不影響T細(xì)胞、BI細(xì)胞、早期(Tl)過(guò)渡外周B細(xì)胞、或骨髓中的發(fā)育 B 細(xì)胞(Mackay, F.，et al (2003). Annu Rev TmmunoI 21，231-264)。對(duì)于多種 B 細(xì)胞腫瘤的維持，Neutrokine-a也是所必需的，失調(diào)的Neutrokine-a刺激拯救了自身反應(yīng)性B細(xì)胞，使得其避免被缺失，據(jù)此促進(jìn)了自身抗體的生成(Kalled，S. L. (2005). ImmunolRev 204,43-54)。因此，Neutrokine-a在正常B細(xì)胞和致病B細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面都起到了關(guān)鍵作用。本實(shí)施例詳細(xì)地描述了所進(jìn)行的試驗(yàn)的結(jié)果，以便了解Neutookine-a促進(jìn)B細(xì)胞存活的機(jī)理。試驗(yàn)方案小鼠從紐約Paul Rothman Columbia大學(xué)的Pim-l+/_2+/_品系中生成了Pim-l+/+2+/\ Pim-r/_2+/\ Pim-l+/+2^ 和 Pim-1+2+ 小鼠。C57BL/6 (B6);來(lái)自 BarHarbor ME 的 Jackson 實(shí)驗(yàn)室或者來(lái)自 National Cancer Institute Production·Program, NCI-Fredrick, Fredrick MD。根據(jù)研究所動(dòng)物飼養(yǎng)和使用委員會(huì)指南將動(dòng)物喂養(yǎng)并保養(yǎng)于賓夕法尼亞大學(xué)、哈佛醫(yī)學(xué)院或麻省醫(yī)學(xué)院。B細(xì)胞純化用抗thyl. 2和對(duì)脾細(xì)胞的補(bǔ)體處理以及隨后通過(guò)用逐步percoll梯度純化剩余B細(xì)胞和在60%_70%界面收集細(xì)胞來(lái)獲得脾臟B細(xì)胞。在一些試驗(yàn)中，通過(guò)陽(yáng)性選擇和用生物素化的抗⑶23抗體(BDBiosciences-Pharmingen, San Diego CA)和抗生物素蛋白鏈菌素涂層的微珠(Miltenyi Biotec, Auburn CA)磁分離脾細(xì)胞懸浮液來(lái)獲得⑶23+B細(xì)胞。⑶23+B細(xì)胞是不被Percoll尺寸選擇的，因?yàn)轶w內(nèi)的環(huán)境活化造成了⑶23的丟失。通過(guò)抗體和Percoll制備的B細(xì)胞是>90%B220+，而CD23+B細(xì)胞是>95%純度。細(xì)胞培養(yǎng)將純化的B細(xì)胞或⑶23+B細(xì)胞培養(yǎng)在加有2-巰基乙醇、MEM-非必需氨基酸、谷氨酰胺、青霉素和鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基，CM)中。對(duì)于B細(xì)胞存活和其他的檢測(cè)而言，使用50-100ng/ml在Human Genome Sciences, Rockville MD中制備出的重組人 Neutrokine-a。FLAG 標(biāo)簽的人 Neutrokine-a 來(lái)自 Dartmouth MedicalSchool 的 Randolph Noelle 博士。小鼠 Neutrokine-a 購(gòu)自 Alexis Biochemicals, SanDiego CA ;干擾素 a (IFN- a )購(gòu)自 PBL Biomedical, Piscataway, NJ0 向培養(yǎng)物中加入終濃度為50nM的來(lái)自溶解于甲醇的母液的雷帕霉素。在使用雷帕霉素的試驗(yàn)中，用甲醇作為對(duì)照載體處理對(duì)照B細(xì)胞。對(duì)于動(dòng)力學(xué)檢測(cè)而言，制備B細(xì)胞并在4° C冷卻過(guò)夜。然后按每個(gè)樣品5-6x IO6個(gè)B細(xì)胞將其加入到已經(jīng)5微克/ml單克隆的抗FLAG M2抗體(Sigma)涂層的，經(jīng)1%BSA PBS洗滌、封閉的，隨后在洗滌和添加細(xì)胞前I個(gè)小時(shí)加入每孔2ug FLAG標(biāo)簽的人Neutrokine- a的24孔板內(nèi)。未刺激的對(duì)照B細(xì)胞是那些加入到孔內(nèi)的僅經(jīng)抗FLAG抗體處理過(guò)的B細(xì)胞。通過(guò)與被加入到動(dòng)力學(xué)檢測(cè)緩沖液(Hank平衡鹽溶液加上2%BSA)中的抗小鼠IgM(5微克/ml)、抗CD40 (0. 5微克/ml)或100ng/ml重組人Neutrokine- a的孵育也活化了 B細(xì)胞。抗體和Western印跡法小鼠抗Pim2 (1D12)、Piml (19F7)、山羊抗肌動(dòng)蛋白(1-19)、抗小鼠Ig、抗兔Ig和與HRP結(jié)合的抗山羊Ig抗體都來(lái)自Santa CruzBiotechnology, Santa Cruz CA。兔抗憐酸絲氨酸473Akt、憐酸蘇氨酸389p70S6激酶、磷酸蘇氨酸 24/32FKHR/FKRHL1、phosphoGSK3、GSK、p70S6K、FKHR 和 Akt 都購(gòu)自 CellSignaling, Beverly MA。兔抗小鼠 Mcl-1 購(gòu)自 Rockland, Wilmington MA。通過(guò)在冰冷的PBS中洗滌B細(xì)胞并將其裂解在加有蛋白酶抑制劑(minitab，Roche, Indianapolis IN)和磷酸酶抑制劑雞尾酒I和II(Sigma)的RIPA(150mM NaCl、1%NP_40、0. 5%脫氧膽酸鈉、0. l%SDS、50mM Tris,pH8. 0)中制備出全細(xì)胞裂解液。將10_50ug蛋白溶解于4_12%NuPagebis-tris聚丙烯酰胺凝膠(Invitrogen, Carlsbad CA)上，并將其轉(zhuǎn)移到硝基纖維素。用3%BSA(Sigma，無(wú)IgG)、0. 2%Tween-20PBS封閉印跡，并在與相同緩沖液中的第一抗體4° C下孵育過(guò)夜。用PBS-0. 2%Tween-20洗滌印跡，并與綴合有HRP的第二抗體孵育，用ECLpIus (Amersham Bioscience, Piscataway NJ)顯影。通過(guò)在加有 1%SDS 和 IOOuM 疏基乙醇的PBS中65° C下孵育20分鐘將印跡剝離進(jìn)行再探針化。然后如上洗滌和封閉印跡。存活檢測(cè)在37° C CM下將5x 106/ml B細(xì)胞培養(yǎng)在24板培養(yǎng)皿內(nèi)。向B細(xì)胞中加入50-100ng/ml Neutrokine-a、50nM雷帕霉素、200U人IFN或這些試劑的組合。在用試驗(yàn)添加物培養(yǎng)之前I個(gè)小時(shí)，用50nM雷帕霉素或載體預(yù)處理B細(xì)胞，在培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)之后加入新鮮的雷帕霉素。每天通過(guò)用苔盼蘭排除法計(jì)數(shù)存活細(xì)胞來(lái)監(jiān)測(cè)存活率，每個(gè)測(cè)定·都重復(fù)二次。結(jié)果對(duì)Neutrokine-a如何促進(jìn)B細(xì)胞存活的機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)Neutrokine-a激活了B細(xì)胞中的Akt/mTOR途徑。用100ng/ml重組人或小鼠Neutrokine-a或抗Ig (陽(yáng)性對(duì)照)在37° C、傳代培養(yǎng)基中刺激純化B細(xì)胞0、5、20、60、或120分鐘。從冰冷樣品中制備出裂解液，并用Western印跡法分析。如通過(guò)Akt的絲氨酸473和蘇氨酸308的磷酸化的增加所測(cè)定的那樣，重組Neutrokine-a對(duì)原代B細(xì)胞的這種刺激造成了 Akt途徑的活化。其中用板結(jié)合的FLAG標(biāo)簽的Neutrokine- a、可溶性Neutrokine- a (100ng/ml)或0. 5微克/ml抗⑶40 (陽(yáng)性對(duì)照)刺激純化B細(xì)胞的附加試驗(yàn)顯示出Akt本身已經(jīng)被活化，如Akt底物GSK ^和上游轉(zhuǎn)輪因子F0X01和F0X03a的磷酸化所示。mTOR是Akt主要的下游效應(yīng)物。通過(guò)mTOR底物(p70S6激酶和翻譯抑制物4E-BP1)的磷酸化也顯示出在Neutrokine-a刺激之后活化了原代B細(xì)胞中的mTOR。Western印跡法研究了磷酸化模式。雷帕霉素是mTOR的強(qiáng)抑制劑以及B細(xì)胞增殖和分化的強(qiáng)抑制素。在有或沒(méi)有100ng/ml Neutrokine- a、載體或50nM雷帕霉素的情況下培養(yǎng)來(lái)自正常供體的小靜止B細(xì)胞，所述雷帕霉素被用于培養(yǎng)前預(yù)處理B細(xì)胞，在開(kāi)始培養(yǎng)后被直接加入到培養(yǎng)內(nèi)，并每隔2天再添加一次。在第4天確定活細(xì)胞數(shù)目?？侭或⑶23+B細(xì)胞與Neutrokine-a及雷帕霉素的共培養(yǎng)沒(méi)有阻止Neutrokine-a介導(dǎo)的存活促進(jìn)作用，如在培養(yǎng)后第4天所出現(xiàn)的活細(xì)胞數(shù)目所測(cè)定的那樣。這個(gè)結(jié)果表明在Neutrokine-a處理過(guò)的B細(xì)胞中可能活化了另一條存活途徑。Pims是一個(gè)三種絲氨酸/蘇氨酸的激酶家族，其提供了耐雷帕霉素的凋亡保護(hù)作用，所述凋亡保護(hù)作用是多種激活劑在造血細(xì)胞中所誘導(dǎo)出的(Fox，C.J.，et al., (2003).Genes Dev 17，1841-1854和 Fox, C. J.，et al. , (2005) J Exp Med 201，259-266) Jestern印跡顯示在用100ng/ml Neutrokine- a處理2天之后，原代B細(xì)胞上調(diào)了 Piml和Pim2表達(dá)。為了研究Piml和2是否涉及Neutrokine-a介導(dǎo)的B細(xì)胞存活，將來(lái)自野生型、或Pim r/+2v+雜合體、Piml+2+雙重缺陷或Pim 2缺陷(Pim 1+2+)供體中的CD23+B細(xì)胞與載體、lOOng/ml rhuNeutrokine- a以及有或沒(méi)有50nM雷帕霉素在CM中培養(yǎng)4天。每天都用苔盼蘭排除法確定生活力。有趣的是，當(dāng)暴露于Neutrokine-a時(shí)，來(lái)自Piml和Pim2雙重缺陷小鼠的B細(xì)胞(Pim-l+2+B細(xì)胞)的確顯示出了存活增強(qiáng)。如果mTOR和Piml和2在不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中運(yùn)作，每個(gè)途徑都介導(dǎo)了 Neutrokine-a對(duì)細(xì)胞存活的促進(jìn)作用，這就可以解釋上述結(jié)果。為了檢驗(yàn)是否涉及兩個(gè)分離的途徑理論，檢查了雷帕霉素對(duì)Neutrokine-a介導(dǎo)的Pim-l+2+B細(xì)胞存活的作用。雷帕霉素的加入消除了 Neutrokine-a增強(qiáng)Pim-l+2+B細(xì)胞中的B細(xì)胞存活的能力。進(jìn)一步的研究顯示Pim-l+h+B細(xì)胞(只有Pim2功能缺陷)和Pim-l+2+B細(xì)胞一樣對(duì)雷帕霉素敏感，說(shuō)明Piml對(duì)于Neutrokine-a對(duì)B細(xì)胞存活的作用并非是必需的?？偠灾?這些數(shù)據(jù)顯示有兩條獨(dú)立的途徑來(lái)介導(dǎo)Neutrokine-a介導(dǎo)的生存，每條途徑都單獨(dú)地足以介導(dǎo)Neutrokine- a的這種活性。進(jìn)一步的試驗(yàn)表明B細(xì)胞存活的有效增強(qiáng)(抗凋亡保護(hù)誘導(dǎo))需要Mcl-l、Bcl-2家族成員的表達(dá)，所述成員在促進(jìn)外周B和T細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面起到了作用(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)?！ひ虼耍梢杂冒╝kt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物來(lái)模擬Neutrokine- a拮抗劑所誘導(dǎo)的作用。因此,包括Akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物可以被用作抑制B細(xì)胞存活或治療一種或多種在此所述的疾病或病變的Neutrokine-a拮抗劑。例如,可以用包括akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物縮短B細(xì)胞壽命。另外，可以用包括akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物治療自身免疫病。在具體的實(shí)施方式中，可以用包括akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物治療B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫病。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用包括akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物治療其中自身抗體流行的自身免疫病。在具體的實(shí)施方式中，可以用包括akt/mTOR途徑的抑制劑(例如雷帕霉素)和Pim2途徑的抑制劑的組合物治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、干燥綜合征、I型糖尿病、特發(fā)性血小板減少性紫癜、格林-巴利綜合征、Hashimoto甲狀腺炎或Grave病。另外,可以用包括Mcl-I抑制劑的組合物模擬Neutrokine- a拮抗劑誘導(dǎo)的作用。因此，包括Mcl-I抑制劑的組合物可以被用作抑制B細(xì)胞存活或治療一種或多種在此所述的疾病或病變的Neutrokine-a拮抗劑。例如，可以用包括Mcl-I抑制劑的組合物縮短B細(xì)胞壽命。另外，可以用包括Mcl-I抑制劑的組合物治療自身免疫病?？梢杂冒∕cl-I抑制劑的組合物治療B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫病。在其他具體的實(shí)施方式中，可以用包括Mcl-I抑制劑的組合物治療其中自身抗體流行的自身免疫病。在具體的實(shí)施方式中，可以用包括Mcl-I抑制劑的組合物治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、干燥綜合征、I型糖尿病、特發(fā)性血小板減少性紫癜、格林-巴利綜合征、Hashimoto甲狀腺炎或Grave病。實(shí)施例5 :抗體制劑的表征用通過(guò)差示掃描測(cè)熱法對(duì)制劑于IOmM組氨酸和IOmM檸檬酸緩沖液中的lmg/mlIgG/X抗體的分析來(lái)評(píng)價(jià)每個(gè)制劑中的抗體的熱穩(wěn)定性。用于本研究中的特殊抗體是特異于Neutrokine-a并能夠中和Neutrokine-a活性的IgGl/入抗體。分析發(fā)現(xiàn)pH范圍為6.0-7. 5內(nèi)的兩種緩沖液的解鏈溫度最高，更高的解鏈溫度一般表示更高的熱穩(wěn)定性。在這個(gè)PH范圍之內(nèi)，檸檬酸緩沖液的解鏈溫度比組氨酸緩沖液高2° C，說(shuō)明檸檬酸緩沖液可能生成了更穩(wěn)定的抗體制劑。但是，組氨酸緩沖液中的抗體比檸檬酸緩沖液中的抗體有著更高的熱可逆性。這表明抗體在組氨酸中有著更高的生物物理穩(wěn)定性，盡管其有著更低的解鏈溫度。對(duì)抗體制劑的穩(wěn)定性研究證實(shí)了這一點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)在2-8° C下儲(chǔ)存18個(gè)月時(shí)，IOmM組氨酸比IOmM檸檬酸造成了更少的聚集。在穩(wěn)定性研究期間，用重復(fù)pH測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)兩種緩沖液的緩沖能力。除了能給抗體提供更高的生物物理穩(wěn)定性外，PH6. 0-6. 5的組氨酸表現(xiàn)出比PH范圍為6. 5-7. 0的檸檬酸提供了更大的緩沖能力。在18個(gè)月穩(wěn)定性研究中，組氨酸在所測(cè)試的所有溫度(2-8° C、25° C、和40° C)下始終保持穩(wěn)定的pH值。相反地，檸檬酸制劑在更高的溫度下有著更廣的變異(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)。實(shí)施例6 :抗體制劑的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究為了測(cè)定抗體制劑的儲(chǔ)存期限，進(jìn)行了對(duì)制劑于IOmM組氨酸、150mM NaCl、0. 01%(w/v)聚山梨酯80 (pH 6.0)中的100mg/ml抗體的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究。用于本研究中·的特殊抗體是特異于Neutrokine-a并能夠中和Neutrokine-a活性的IgGl/X抗體。將5ml玻璃瓶?jī)?nèi)的2ml抗體制劑在-80° C、2_8° C、25° C和40° C直立存放24個(gè)月。用儲(chǔ)存在-80° C的樣品作為對(duì)照，用儲(chǔ)存在2-8° C的樣品測(cè)定儲(chǔ)存期限，以及用儲(chǔ)存在加速條件(25° C和40° C)下的樣品監(jiān)測(cè)所發(fā)生的任何可能的降解途徑。在24個(gè)月內(nèi)，用多個(gè)檢測(cè)法定期地分析樣品，包括肉眼觀察、pH值、濃度、SDS-PAGE、SEC-HPLC、離子交換HPLC(IE-HPLC)、生物檢測(cè)法、毛細(xì)血管等電聚焦(cIEF)、肽譜法、RP-HPLC和ISOQU ANT'經(jīng)SEC-HPLC、IE-HPLC 和 RP-HPLC 對(duì)在 2_8。C 和-80° C 儲(chǔ)存 24 個(gè)月的樣品的分析發(fā)現(xiàn)所有的三個(gè)方法得到的結(jié)果事實(shí)上是相當(dāng)?shù)?，只看到了很小的差別。2-8° C樣品的SEC-HPLC純度的降低率為每個(gè)月近似0. 03%,早期洗脫的IE-HPLC峰(最可能是由于脫酰胺作用)的增加率為每個(gè)月0. 14%(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)。在儲(chǔ)存24個(gè)月后，2-8° C樣品在抗體的聚集(<1%)、脫酰胺( 4%)和氧化(1%)方面值顯示出很少的改變。但是對(duì)儲(chǔ)存在加速條件下的樣品的所有檢測(cè)都觀察到了顯著的降解。在加速條件下經(jīng)SEC-HPLC觀察到的降解包括聚集和片段化。IE-HPLC檢測(cè)顯示出加速調(diào)價(jià)下的儲(chǔ)存造成了早期洗脫峰的增力口。肽譜法觀察到了 25。C時(shí)的脫酰胺和片段化；觀察到了 40° C時(shí)的脫酰胺、氧化、片段化以及天冬氨酸向異天冬氨酸的重排。因此，100mg/ml藥物制劑中的IgGl/X抗體至少可以在2-8° C穩(wěn)定儲(chǔ)存24個(gè)月。實(shí)施例7 :測(cè)定對(duì)Neutrokine-a-Neutrokine-a受體相互作用的抑制作用的體外檢測(cè)法下面描述了能夠用于測(cè)定化合物是否用作為Neutrokine-a拮抗劑的檢測(cè)法。具體地，本檢測(cè)法測(cè)定是化合物抑制可溶性Neutrokine- a與其IM9細(xì)胞上的同源受體結(jié)合的能力。生物素化Neutrokine- a的制備利用slide-a-lyzer盒(Pierce),用50mM碳酸氫鈉(碳酸氫鈉)在4° C下透析100微克人或小鼠Neutrokine-a過(guò)夜。次日，將NHS-生物素(Pierce)溶解于DMS0，濃度為13.3mg/ml。然后將其加入到Neutrokine-a內(nèi)，生物素與Neutrokine-a的摩爾比為20 :1，混合并在冰上孵育2個(gè)小時(shí)。然后，利用slide-a-lyzer框，用無(wú)菌PBS (Sigma)在4° C下透析生物素化的Neutrokine-a過(guò)夜。利用受體結(jié)合抑制檢測(cè)法(見(jiàn)下)驗(yàn)證生物素化的Neutrokine-a的生物學(xué)活性。IM9細(xì)胞的培養(yǎng)IM9細(xì)胞是表達(dá)Neutrokine-a受體的人B淋巴細(xì)胞系。將頂9細(xì)胞維護(hù)于加有4mM L-谷氨酰胺、10%FCS、10U青霉素、100g/ml鏈霉素的RPMI-1640內(nèi)(所有制劑都來(lái)自Sigma)。從冷凍的母液中融化得到這些細(xì)胞，并在培養(yǎng)5天后當(dāng)其密度達(dá)到4-8x 105/ml時(shí)，將其用于檢測(cè)。受體結(jié)合抑制檢測(cè)法用每孔100微升1:10稀釋的聚L賴氨酸(Sigma) PBS溶液在室溫下涂層平底96孔板(Costar) I個(gè)小時(shí)。然后用水洗滌板兩次,容許其風(fēng)干,并在4° C下放置過(guò)夜。然后向每個(gè)孔內(nèi)加入100微升IM9細(xì)胞(106/ml RPMI-1640培養(yǎng)基)。然后將板在3200rpm下離心·5分鐘，以便沉淀細(xì)胞。仔細(xì)地抽吸出培養(yǎng)基，向每個(gè)孔內(nèi)加入200微升MPBS (含3%Marvel封閉液的PBS)。然后容許板在室溫下被封閉I個(gè)小時(shí)。在一個(gè)分離的96孔板內(nèi)，向每個(gè)孔內(nèi)加入10微升生物素化的Neutrokine- a (162. 5ng/ml) MPBS溶液，終濃度為25ng/ml。向每個(gè)孔內(nèi)加入55微升各種測(cè)試化合物。每個(gè)孔內(nèi)的終體積為65微升。優(yōu)選地，測(cè)試化合物也稀釋于MPBS。然后將板在室溫下孵育30分鐘。用PBS洗滌頂9涂層的板兩次，輕輕敲打板，并立刻加入50微升噬菌體/生物素化Neutrokine- a混合物，并在室溫下孵育I個(gè)小時(shí)。將板在PBST中洗滌三次，在PBS中洗滌三次，輕輕敲打板，向每個(gè)孔內(nèi)加入50微升按1:1000稀釋于產(chǎn)商的檢測(cè)緩沖液中的抗生物素鏈菌素-Delfia(Wallac)。然后將板在室溫下孵育I個(gè)小時(shí)，用Delfia洗滌溶液(Wallac)洗滌6次。在輕輕敲打板板之后，加入每孔100微升Delfia增強(qiáng)溶液(Wallac)。輕輕地敲打板，以便有助于微粒形成，在室溫下孵育10分鐘，用Wallac 1420工作站讀出6520nm處的突光。本檢測(cè)所包含的合適對(duì)照是只包括生物素化Neutrokine-a以證實(shí)本檢測(cè)中的生物素化Neutrokine- a與其受體的最大結(jié)合的樣品以及不包含生物素化Neutrokine- a以證實(shí)本檢測(cè)中的背景信號(hào)的樣品。其他有用的對(duì)照是非Neutrokine-a特異的、或“無(wú)關(guān)的”化合物(與測(cè)試化合物結(jié)構(gòu)相似的但相信其不會(huì)與Neutrokine-a或其中一種Neutrokine-a受體相互作用的化合物。如果測(cè)試化合物是IgGl同種型的抗Neutrokine- a抗體,合適的“無(wú)關(guān)對(duì)照”是另一種吧非特異于Neutrokine-a或其中一種受體的IgGl抗體。實(shí)施例8 :用于體外篩選Neutrokine- a拮抗分子的人B細(xì)胞增殖檢測(cè)法通過(guò)混合等體積的Neutrokine-a、應(yīng)答細(xì)胞、和假定拮抗劑(每種都被制備成3X母液)在96孔板內(nèi)進(jìn)行用于評(píng)價(jià)假定Neutrokine-a拮抗劑的作用的生物檢測(cè)，每個(gè)檢測(cè)
重復(fù)3次。用MACS(抗⑶3剝奪)從人扁桃體中純化出B淋巴細(xì)胞，洗滌，并將其重懸于完全培養(yǎng)基(CM) (RPMI1640和含100U/ml青霉素、100 u g/ml鏈霉素、4mM谷氨酰胺、5x KT5M￠-巰基乙醇的10%FBS)，細(xì)胞濃度為每毫升3x IO6個(gè)細(xì)胞。向細(xì)胞內(nèi)加入3X濃度(3X=母液的I 33, 333稀釋液)的金黃色葡萄球菌CowanI (SAC, CalBiochem)。
同時(shí)，用CM制備出8個(gè)系列的潛在拮抗劑的稀釋液(3倍)，使得稀釋的拮抗劑是本檢測(cè)中測(cè)試終濃度的3X。例如，被常規(guī)測(cè)試的抗體的起始終濃度為10微克/mL，稀釋到約 I.5ng/mL。用CM 制備人 r Neutrokine-a ,使得其在 CM 中的濃度為 3X (3X=300ng/mL、30ng/mL、和3ng/mL)。用一些濃度的Neutrokine-a常規(guī)測(cè)試潛在的拮抗劑，以避免由于不可預(yù)計(jì)的低親和力或者拮抗劑濃度造成的假陰性結(jié)果。然后向含有50微升細(xì)胞混合物的孔內(nèi)加入50微升稀釋的拮抗劑和50微升稀釋的 Neutrokine-a 。然后將細(xì)胞在非常潮濕的孵箱內(nèi)孵育72個(gè)小時(shí)(37° C、5%C02)。在72個(gè)小時(shí)之后，向細(xì)胞內(nèi)加入0. 5 u Ci/孔3H-胸腺嘧啶(6. 7Ci/mmol)，并再孵育24個(gè)小時(shí)。用Tomtec細(xì)胞收集器收集板，用TopCount Scintillation計(jì)數(shù)器(Packard)計(jì)數(shù)出過(guò)濾器中的細(xì)胞·數(shù)。本檢測(cè)所包含的合適對(duì)照是其中不含拮抗劑以證實(shí)本檢測(cè)中的最大程度的3H-胸腺嘧啶摻和的樣品以及不含Neutrokine-a以證實(shí)本檢測(cè)中的背景信號(hào)的樣品。其他有用的對(duì)照是非Neutrokine-a特異的、或“無(wú)關(guān)的”化合物(與測(cè)試化合物結(jié)構(gòu)相似的但相信其不會(huì)與Neutrokine-a或其中一種Neutrokine-a受體相互作用的化合物。如果測(cè)試化合物是IgGl同種型的抗Neutrokine-a抗體，合適的“無(wú)關(guān)對(duì)照”是另一種非特異于Neutrokine- a或其中一種受體的IgGl抗體。本領(lǐng)域人員知道可以對(duì)本檢測(cè)進(jìn)行修飾，例如在步驟的次序或施用的試劑方面都可以修飾。作為一個(gè)特殊的實(shí)施例，可以用抗IgM取代SAC預(yù)處理B細(xì)胞。本領(lǐng)域人員也知道可以用其他檢測(cè)法測(cè)試化合物作為Neutrokine-a拮抗劑的能力。實(shí)施例9 :用于體外篩選Neutrokine- a拮抗劑分子的小鼠B細(xì)胞增殖檢測(cè)為了確定潛在的Neutrokine-a拮抗劑是否能夠抑制Neutrokine-a介導(dǎo)的B細(xì)胞增殖，進(jìn)行了小鼠脾細(xì)胞增殖檢測(cè)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，通過(guò)用25g針頭和IOml完全培養(yǎng)基(RPMI1640和含100U/ml青霉素、100 u g/ml鏈霉素、4mM谷氨酰胺、5x KT5M ^ -巰基乙醇的10%FBS)沖洗脾臟分離出小鼠脾細(xì)胞。細(xì)胞流經(jīng)100微米尼龍濾膜，以便去除細(xì)胞團(tuán)。然后在室溫下400xg ficoll離心細(xì)胞懸浮液25分鐘(I個(gè)15ml圓錐管/脾臟；3ml ficol、IOml細(xì)胞懸浮液/脾臟；Ficol 1083來(lái)自Sigma)。將所回收到的細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中洗滌3次，并計(jì)數(shù)。然后將所回收到的細(xì)胞在含3X SAC (3X=1:33, 333母液稀釋；母液是10%來(lái)自Calbiochem的金黃色葡萄球菌(CowanI菌株)的懸浮液)的完全培養(yǎng)基中被稀釋到濃度為3xl06/ml。對(duì)于每個(gè)抗體而言，將50微升濃度為30 ii g/ml、3. 0 ii g/ml、和0. 3 ii g/ml的抗體稀釋液分配到96孔板的單個(gè)孔內(nèi)，重復(fù)3次。用不含抗體(和人同種型對(duì)照(商品化購(gòu)買(mǎi))，如果需要)的培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。用完全培養(yǎng)基將Neutrokine-a蛋白稀釋到濃度為300ng/ml、90ng/ml和30ng/ml o然后將50微升每種Neutrokine-a稀釋液加入到板的抗體稀釋液系列中。然后將含有抗體和Neutrokine-a稀釋液的板在37° C、5%C02下孵育30分鐘，之后向每個(gè)孔內(nèi)加入50微升含SAC的脾細(xì)胞懸浮液。然后孵育板72個(gè)小時(shí)(37° C、5%C02)。在72個(gè)小時(shí)之后，向每個(gè)孔內(nèi)加入50 ill含0.5 ii Ci/孔3H-胸腺嘧啶(6. 7Ci/mmol, Amersham)的完全培養(yǎng)基，并將細(xì)胞再孵育24個(gè)小時(shí)(37° C、5%C02)。用Tomtec細(xì)胞收集器收集板，用TopCount Scintillation計(jì)數(shù)器(Packard)計(jì)數(shù)出過(guò)濾器中的細(xì)胞數(shù)。本領(lǐng)域人員知道可以對(duì)本檢測(cè)進(jìn)行修飾，例如在步驟的次序或施用的試劑方面都可以修飾。作為具體的實(shí)例，可以用抗IgM取代SAC預(yù)處理B細(xì)胞。本領(lǐng)域人員也知道可以用其他檢測(cè)法測(cè)試化合物作為Neutrokine-a拮抗劑的能力。顯而易見(jiàn)的是可以用不同于在先前的描述和實(shí)施例中特殊描述的方式實(shí)踐本發(fā)明。根據(jù)上面的教義對(duì)本發(fā)明的多種修飾和變異都是可能的，并因此是在附錄的權(quán)利要求書(shū)的范圍之內(nèi)。通過(guò)引用將在此所引用的所有出版物(包括專利、專利申請(qǐng)、雜志文章、實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)、書(shū)籍或其他文檔)的所有內(nèi)容都并入本申請(qǐng)。此外，通過(guò)引用將在此所提交的計(jì)算機(jī)和紙件形式的序列表的全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)。另外，在此通過(guò)引用將下面的每個(gè)美國(guó)臨時(shí)和非臨時(shí)專利申請(qǐng)和國(guó)際專利申請(qǐng)的全部·內(nèi)容(包括說(shuō)明書(shū)、序列表和附圖)都并入本申請(qǐng)2005年10月13日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/725，625,2005 年 11 月 14 日提交的 60/735，967,2006 年 2 月 27 日提交的 60/776，664、2006年3月13日提交的60/781，387,2006年3月31日提交的60/787，557,2006年5月4日提交的60/797，360,2006年6月20日提交的60/814，870,2006年6月22日提交的60/815，558、2006 年 6 月 23 日提交的 60/815，827、2006 年 7 月 31 日提交的 60/834，150、2005 年 10 月 13 日提交的 60/725，626,2005 年 11 月 14 日提交的 60/735，988,2006 年 2月27日提交的60/776，665、2006年5月4日提交的60/797，351、2006年6月20日提交的 60/814，869,2006 年 6 月 22 日提交的 60/815，559,2006 年 7 月 31 提交的 60/834，152、2005 年 10 月 13 日提交的 60/725，627、2005 年 11 月 14 日提交的 60/735，964、2006 年 2 月27日提交的60/776，658、2005年10月13日提交的60/725，629、2005年11月14日提交的60/735，963,2006 年 2 月 27 日提交的 60/776，660,2005 年 10 月 13 日提交的 60/725，628、2005年11月14日提交的60/735，987,2006年2月27日提交的60/776，659,2004年2月11日提交的60/543，261,2004年6月18日提交的60/580，387,2004年10月12日提交的60/617，191、2002 年 4 月 I 日提交的 60/368，548、2001 年 12 月 7 日提交的 60/336，726,2001年11月16日提交的60/331，478,2001年10月31日提交的60/330，835,2001年10月18日提交的60/329，747、和2001年10月17日提交的60/329，508,2000年8月15日提交的60/225，628,2000 年 8 月 23 日提交的 60/227，008,2000 年 9 月 22 日提交的 60/234，338、2000 年 10 月 17 日提交的 60/240，806,2000 年 11 月 30 日提交的 60/250，020,2001 年 3月6日提交的60/276，248、2001年5月25日提交的60/293，499、2001年6月7日提交的60/296，122、2001 年 7 月 13 日提交的 60/304，809、1999 年 3 月 2 日提交的 60/122，388、1999年3月12日提交的60/124，097、2000年3月26日提交的60/126，599、1999年4月2日提交的 60/127，598、1999 年 4 月 16 日提交的 60/130，412、1999 年 4 月 23 日提交的 60/130，696、1999年4月27日提交的60/131，278、1999年4月29日提交的60/131，673、1999年5月28日提交的60/136,784、1999年7月6日提交的60/142，659、1999年7月27日提交的60/145，824、1999 年 11 月 24 日提交的 60/167，239、1999 年 12 月 3 日提交的 60/168，624、1999年12月16日提交的60/171，108,1999年12月23日提交的60/176，015、以及1997年I月14日提交的60/036，100 ;美國(guó)非臨時(shí)申請(qǐng)2005年2月10日提交的11/054，539、2003 年 12 月 19 日提交的 10/739，042,2003 年 12 月 16 日提交的 10/735，865,2002 年 10月16日提交的10/270，487、2001年8月14日提交的09/929，493、2000年6月8日提交的 09/588，947,2000 年 6 月 8 日提交的 09/589，285,2000 年 6 月 8 日提交的 09/589，286、2000年6月8日提交的09/589，287,2000年6月8日提交的09/589，288,2000年2月22日提交的09/507，968、1999年2月23日提交的09/255，794以及1998年I月12日提交的09/005,874 ;國(guó)際專利申請(qǐng)2001年8月15日提交的PCT/US01/25549、2000年2月22日提交的 PCT/US00/04336、以及 1996 年 10 月 25 日提交的 PCT/US96/17957?！?br> 權(quán)利要求
1.Neutrokine-α拮抗劑在制備用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的藥物組合物中的用途，所述患者在其血漿或血清中具有ANA滴度彡1:80或抗dsDNA抗體彡30IU/mL，其中所述拮抗劑以治療有效量施用； 并且其中所述拮抗劑是抗Neutrokine-α抗體,其包含選自由以下各項(xiàng)所組成的組的VH CDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDRUVL CDR2 和 VL CDR3 的氨基酸序列(a)SEQ ID NO: 13 的 VH CDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ;(b)SEQID NO:14 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3;(c)SEQID NO:15 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3;(d)SEQID NO: 16 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(e)SEQID NO: 17 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(f)SEQID NO:18 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3；(g)SEQID NO: 19 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:20 的 VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3 ;和(h)SEQID NO:2IVH CDRUVH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:22 的 VL CDRUVL CDR2 和VL CDR3。
2.Neutrokine-α拮抗劑在制備用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的藥物組合物中的用途，其中在確定所述患者在其血漿或血清中具有ANA滴度> 1:80或抗dsDNA抗體^ 30IU/mL之后以治療有效量施用所述拮抗劑； 其中所述拮抗劑是抗Neutrokine-α抗體,其包含選自由以下各項(xiàng)所組成的組的VHCDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDRUVL CDR2 和 VLCDR3 的氨基酸序列(a)SEQ ID NO: 13 的 VH CDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(b)SEQID NO: 14 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ;(c)SEQID NO: 15 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(d)SEQID NO: 16 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(e)SEQID NO: 17 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(f)SEQID NO:18 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3；(g)SEQID NO: 19 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:20 的 VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3 ;和(h)SEQID NO:2IVH CDRUVH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:22 的 VL CDRUVL CDR2 和VL CDR3。
3.權(quán)利要求2的用途，其中在確定患者具有選自由以下各項(xiàng)組成的組中的至少一個(gè)特征之后施用所述Neutrokine-α拮抗劑(a)SELENA SLEDAI 評(píng)分彡 6 ； (b)其血漿或血清中降低的C3補(bǔ)體因子水平； (c)其血漿或血清中降低的C4補(bǔ)體因子水平； (d)患者正在接受>7. 5毫克/天的潑尼松；和 (e)患者正在接受或者先前曾接受過(guò)用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的免疫抑制治療。
4.Neutrokine-α拮抗劑在制備用于減少施用給系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的糖皮質(zhì)激素的頻率或量的藥物組合物中的用途，其中將所述拮抗劑以治療有效量施用于所述患者。
5.權(quán)利要求4的用途，其中在確定患者具有選自由以下各項(xiàng)組成的組中的至少一個(gè)特征之后施用所述Neutrokine-α拮抗劑(a)ANA滴度彡 1:80 ； (b)其血漿或血清中抗dsDNA抗體彡30IU/mL；(c)SELENASLEDAI 評(píng)分彡 6 ； (d)其血漿或血清中降低的C3補(bǔ)體因子水平； (e)其血漿或血清中降低的C4補(bǔ)體因子水平； (f)患者正在接受>7. 5毫克/天的潑尼松；和 (g)患者正在接受或者先前曾接受過(guò)用于治療狼瘡相關(guān)癥狀的免疫抑制治療。
6.確定狼瘡患者是否應(yīng)答于藥物治療的體外方法，包括 (a)在施用藥物治療之前確定患者的SELENASLEDAI、BILAG和PGA評(píng)分； (b)施用藥物治療；和 (c)在施用藥物治療后確定患者的SELENASLEDAI, BILAG和PGA評(píng)分； 其中如果在步驟(c)中確定的SELENA SLEDAI評(píng)分比在步驟(a)中確定的SELENASLEDAI評(píng)分少4分或更多分；與在步驟(a)中確定的BILAG評(píng)分相比較，在步驟(c)中確定的BILAG指數(shù)評(píng)分不包括新的BILAG A器官區(qū)評(píng)分或2個(gè)新的BILAG B器官區(qū)評(píng)分；以及在步驟(c)中確定的PGA評(píng)分比在步驟(a)中確定的PGA評(píng)分高〈O. 3， 則認(rèn)為患者已經(jīng)應(yīng)答于藥物治療。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述藥物治療是包含Neutrokine-α拮抗劑的藥物組合物。
8.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的用途，其中所述患者在其血漿或血清中具有ANA滴度>1:80和彡30IU/mL的抗dsDNA抗體。
9.權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)的用途，其中在確定患者的血漿或血清中具有低于90mg/dL的C3補(bǔ)體因子之后施用所述Neutrokine- α拮抗劑。
10.權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)的用途，其中在確定患者的血漿或血清中具有低于16mg/dL的C4補(bǔ)體因子之后施用所述Neutrokine- α拮抗劑。
11.權(quán)利要求2、3和5中任一項(xiàng)的用途，其中依據(jù)患者的病歷記錄或者實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)來(lái)進(jìn)行所述的確定。
12.權(quán)利要求4的用途，其中所述糖皮質(zhì)激素選自由潑尼松、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍和地塞米松所組成的組。
13.權(quán)利要求12的用途，其中糖皮質(zhì)激素是潑尼松，并且施用給患者的潑尼松的量被降低至少25%到彡7. 5mg/天。
14.權(quán)利要求4或7的用途或方法，其中所述拮抗劑是蛋白質(zhì)，其包含TACI的Neutrokine- α 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO: 6)、BCMA 的 Neutrokine-α 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(SEQ IDNO: 8)、BAFF-R 的 Neutrokine-α 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO: 10)或者具有 SEQ ID NO: 26 的第2到70位氨基酸殘基的氨基酸序列的所述BAFF-R Neutrokine-a結(jié)合結(jié)構(gòu)域的變體。
15.權(quán)利要求4或7的用途或方法,其中所述拮抗劑是Neutrokine-α結(jié)合肽、肽抗體、Neutrokine- α蛋白變體或抗Neutrokine-α受體抗體。
16.權(quán)利要求15的用途或方法，其中Neutrokine-a蛋白變體作為顯性負(fù)調(diào)控物起作用。
17.權(quán)利要求4或7的用途或方法,其中所述拮抗劑是抗Neutrokine-α抗體。
18.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體包含選自由以下各項(xiàng)所組成的組中的一組VH和VL結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列 (a)SEQ ID NO: 13的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (b)SEQ ID NO: 14的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (c)SEQ ID NO: 15的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (d)SEQ ID NO: 16的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (e)SEQ ID NO: 17的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (f)SEQ ID NO: 18的VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域； (g)SEQ ID NO: 19的VH結(jié)構(gòu)域和SEQ ID NO: 20的VL結(jié)構(gòu)域；和(h)SEQ ID NO:21 的 VH 結(jié)構(gòu)域和 SEQ ID NO:22 的 VL 結(jié)構(gòu)域。
19.權(quán)利要求18的用途或方法，其中所述抗體包含SEQID NO: 17的VH和VL結(jié)構(gòu)域。
20.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體包含選自由以下各項(xiàng)所組成的組的VHCDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDRUVL CDR2 和 VL CDR3 的氨基酸序列(a)SEQ ID NO: 13 的 VH CDRUVH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(b)SEQID NO: 14 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(c)SEQID NO: 15 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(d)SEQID NO: 16 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ；(e)SEQID NO: 17 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2 和 VL CDR3 ;(f)SEQID NO:18 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3；(g)SEQID NO: 19 的 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:20 的 VL CDR1、VL CDR2和 VL CDR3 ;和(h)SEQID NO:2IVH CDRUVH CDR2、VH CDR3，和 SEQ IDNO:22 的 VL CDRUVL CDR2 和VL CDR3。
21.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體中和Neutrokine-α。
22.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體抑制Neutrokine-α結(jié)合其受體。
23.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體抑制B細(xì)胞增殖。
24.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體抑制B細(xì)胞存活。
25.權(quán)利要求17的用途或方法，其中所述抗體抑制免疫球蛋白產(chǎn)生。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療自身抗體陽(yáng)性疾病患者的方法和組合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療其ANA滴度為1:80或更高和/或血漿或血清中抗dsDNA抗體大于或等于30IU/ml的患者的方法，包括施用治療有效量的免疫調(diào)節(jié)劑例如Neutrokine-α拮抗劑。另外還提供減少施用給患者的糖皮質(zhì)激素的頻率和/或量的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，患者患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡。本發(fā)明也提供確定狼瘡患者是否應(yīng)答于藥物治療的方法。
文檔編號(hào)A61P19/04GK102784392SQ20121028868
公開(kāi)日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2006年10月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月13日
發(fā)明者D·奧登海姆爾, M·D·珀金斯, M·謝弗瑞爾, W·弗里穆特, 鐘振劭 申請(qǐng)人:人體基因組科學(xué)有限公司