專利名稱：瘢痕疙瘩治療法的制作方法
瘢痕瘡瘡治療法在先串請信息本申請要求2010年6月28日提交的美國臨時專利申請61/359，053的優(yōu)先權。
背景技術：
粘連是在腹腔內形成的纖維組織的異常沉積。腹部的粘連是小腸梗阻和女性不孕的一種常見病因(Thompson 和 Whawell, 1995，Br J Surg 82:3-5; Thompson, 1995, Lancet346:382;Ellis, 1997, Eur J Surg Suppl 577:5-9)。所述腹膜由兩個間皮層組成，它們主要包圍嵌入于疏松結締組織中的脂肪細胞，也包圍單核吞噬細胞的聚集物。大網膜是所述腹膜最大的部分，其大小在300gm至2000gm之間，表面積在300cm2至1500cm2之間。所述網膜具有豐富的血管供應且?guī)в性S多特征性毛細血管卷積(capillary convolutions),由于與腎小球的相似,這些毛細血管卷積被稱為網膜小球(omental glomeruli)。這些毛細血管床直接位于所述間皮下(Ackermann等，1991，Acta Anat (Basel) 140:146_9)。粘連形成的原因是主要在術后發(fā)生的腹膜損傷的纖維修復。手術后粘連形成的相關因素包括創(chuàng)傷、熱損傷、感染、缺血和異物。與粘連形成相關的其他因素包括緊縫合，其中在縫合的腹膜內的張力會產生缺血和磨損。暴露于異物也可能促使粘連的形成，例如手套的滑石粉和粉末，腹部包裹物的線頭或一次性紙質物件(Menzies, 1992, Surg Annu 24:27-45; Bridges 等,1965, ActaAnat (Basel)61:203-12;Drollette 和 Badawy, 1992，J Reprod Med 37:107-21)。嗜中性白血球減少癥與粘連的低發(fā)生率相關，并且可能在手術后粘連的調節(jié)中起了作用(Vural等，1999，Hum Reprod 14:49-54)。粘連的形成始于腹膜遭受的損傷，該損傷因有害刺激造成，包括細菌、化學毒性、缺血、機械，或僅由暴露后的干燥造成(Williams和White, 1986, CurrProbl Surg23:789-865;Di jkstra 等，2000，Scand J Gastroenterol Suppl 232:52-9)。所述損傷導致炎癥反應，其可發(fā)展為纖維蛋白沉積和隨后的纖維蛋白的粘連。若所述的纖維蛋白粘連沒有在所述損傷的第一天內被降解，則修復細胞，包括纖維母細胞，則擴散進纖維蛋白基質中將其轉變?yōu)橛谰眯岳w維粘連。這個過程在所述損傷的一周內完成。因此，纖維蛋白沉積和分解的平衡在腹膜修復和粘連形成的早期起了重要作用(Dkstra等，2000; Vipond等，1990，Lancet 335:1120-2;WhawelI 和 Thompson, 1995，Eur J Surg 161:315-8)。谷氨酰胺是一種條件必需氨基酸，在某些生理情況下，人體不能合成其足夠的量(Smith, 1990，J Parenter Enteral Nutr 14:40S-44S;Lacey 和 Wilmore, 1990，NutrRev 48:297-39)，這些情況如大手術、休克、外傷和嚴重的敗血癥。細胞外谷氨酰胺的減少會損害巨噬細胞和其他免疫細胞的功能，從而導致骨骼肌中蛋白質降解的增加(Newsholme, 1996, Experientia 52:455-9)。巨卩遼細胞是非常活躍的細胞(每分鐘10次的ATP周轉及每分鐘5次的氧氣消耗)，其對谷氨酰胺具有高的接納容量并將之以谷氨酸的形式捕獲，其作為一個細胞內儲存庫用于能量形成，以及為生物合成提供前體。小鼠腹膜巨噬細胞已經示出，通過谷氨酰胺降解過程它們可以利用大量的谷氨酰胺，即使它們被看作是終末分化細胞(Newsholme 等,1985, Biosci Rep 5:393-400; Newsholme等，1985，Q J ExpPhysiol 70:473-89)。這些巨噬細胞以高的蛋白分泌率和膜再生率為特征(Werb 和 Conn, 1972，J Biol Chem 247:2439-46; Ardawi 和 Newsholme, 1983，BiochemJ212:835-42)。雖然在人骨骼肌中谷氨酰胺構成了大于>50 %的非結合氨基酸庫，但在分解代謝事件后，如大手術(Vinnars等，1975，Ann Surg 182:665-671)和創(chuàng)傷(Roth, 1985，Z Exp Chir Transplant Kunstliche Organe 18:150-6;Fukuzawa等，1995，Transplantation 59:6-9),血液和組織中的谷氨酰胺被發(fā)現迅速減少。谷氨酰胺是安全的、易吸收，并且無副作用記錄。谷氨酰胺能促進傷口愈合是總所周知的。谷氨酰胺及其二肽已被用于危重病人腸外與腸內補充成分。Fukuzawa等人的一項近期研究得出的結論是谷氨酰胺能同時提高手術后患者的中性粒細胞的吞噬功能及活性氧中間體(ROI)的生產。在一項隨機的前瞻性研究中，Morlion等人使用谷氨酰胺二肽作為全腸外營養(yǎng)(TPN)，得出結論在腹部手術后，補充組縮短了手術后住院時間，并改善免疫狀態(tài)和氮平衡(Moriion 等，1998，Ann Surg 227:302-8)。
丙氨酰-谷氨酰胺和甘氨酰-谷氨酰胺是兩個谷氨酰胺的二肽，由于它們比游離的谷氨酰胺具有更高的溶解度和化學穩(wěn)定性，它們已經在臨床上應用(Moriion等，1998，Ann Surg 227:302-8;Furst 等，1989，Metabolism 38:67-72;Karner和 Roth, 1989，MetaboIism 38:73-7;Babst 等，1993，J Parenter EnteralNutr 17:566-74;Nordfjeld 等，1983，J Clin Hosp Pharm 8:265-74;CardonaPera, 1998, NutrHosp 13:8-20)。腸內補充丙氨酰-谷氨酰胺，而非谷氨酰胺+丙氨酸混合物提高了腸道適應性，這可由腸切除術后肽轉運增加來證明(Satoh等，2003，J MoiMedl2:615-20)。丙氨酰-谷氨酰胺還可以防止腸道損傷，這可由以下事實證明CPM施用后，肽轉運表達增加且血衆(zhòng)谷氨酰胺濃度升高(Satoh等，2003, JGastroenterol Hepatol18:719-25)。單獨的丙氨酰-谷氨酰胺最近第一次在術后病人腸內應用，并被報道為是安全的(Obayan, A. O. E.，Oxidative Stress:NaturalHistory and Modulation in Surgeryand Trauma Patients,(薩斯嘻徹溫大學:2004)。發(fā)明概述根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種治療或預防或預防性治療瘢痕疙瘩疤痕的方法，包括在瘢痕疙瘩疤痕形成處或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成處外用給藥有效劑量的谷氨酰胺源。在一個優(yōu)選的實施例中，提供了一種治療或預防或預防性治療瘢痕疙瘩疤痕的方法，包括在瘢痕疙瘩疤痕形成處或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成處外用給藥有效劑量的處于有機凝膠內的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。在本發(fā)明的又一個方面，提供了一種藥物組合物，其包括被設置為外用給藥的谷氨酰胺源。在一個優(yōu)選的實施例中，所述藥物組合物包括處于有機凝膠中的L-丙氨酰-L-谷
氨酰胺。優(yōu)詵的實施例描述除非另有定義，此處使用的技術和科學術語與本發(fā)明所屬領域技術人員通常理解的一致。盡管任何與在此描述的類似或等同的方法和材料可以應用于本發(fā)明或測試本發(fā)明，然而優(yōu)選的實施例在此被描述。以下提及的公開文件以引用的方法并入本文。如本文所用，術語“谷氨酰胺源’包括L-谷氨酰胺和其生理學上可接受的鹽，以及包含L-谷氨酰胺的多肽，例如含谷氨酰胺的二肽或谷氨酰胺二肽，例如那些在本領域中公知的和在此處討論的。而在本發(fā)明中可能使用L-谷氨酰胺，該氨基酸具有相對低的水溶解度(20° C時36g/L)，并且在滅菌和長期貯存過程中傾向分解。本發(fā)明也可以使用可被代謝以提供L-谷氨酰胺的含L-谷氨酰胺的二肽。這種二肽的例子包括，但絕不限于丙氨酰-二肽和甘二肽。因此，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施例中，L-谷氨酰胺或含有谷氨酰胺的二肽，例如丙氨酰-二肽和甘二肽被施于需要治療的個體，如本文所討論的。優(yōu)選地，相比于L-谷氨酰胺，這些肽會表現出更高的水溶解度。通常情況下，這些肽也將表現出在滅菌和儲藏中增加的抗分解能力。本發(fā)明中使用的兩個這樣的肽是包含L-谷氨酰胺及L-丙氨酸或甘氨酸的二肽，所述的二肽丙氨酰-谷氨酰胺(谷氨酰胺殘基在C端位置)具有高的水溶解度(568g/L)。甘氨酰-谷氨酰胺(谷氨酰胺殘基在C端位置)也顯示了其相對于谷氨酰胺具有更高的水溶解度(154g/L)。后面兩個二肽在熱滅菌和長期貯存過程中均顯示了足 夠的穩(wěn)定性。如本文所用，“有機凝膠”是指一種非晶性的、非?；療峥赡娴?non-glassythermoreversible)(熱塑性)固體材料,該固體材料由一種陷入在三維交聯網絡中的液體有機相組成。這樣的固體材料的一個說明性例子可以是嵌入了明膠的膠囊。所述的液體可以是，例如，有機溶劑、礦物油或植物油。藥學上可接受的L-谷氨酰胺和含L-谷氨酰胺的肽(包括丙氨酰-谷氨酰胺)制劑是市售的。此外，在本發(fā)明中使用的含L-谷氨酰胺的肽也可以根據已知的方法合成，并且純化和滅菌以供藥用。正如在2007年2月15日出版的PCT申請W02007/016791和2008年8月21日出版的PCT申請W02008/098364中所討論的，這兩者都通過引用的方式全文并入本文，這兩者已經發(fā)現，腹膜內給藥谷氨酰胺源將減少手術后粘連的形成。如在其中所討論的，早先涉及谷氨酰胺給藥的治療方法的給藥方式為腸內給藥(如以食品補充的形式)或通過靜脈途徑(如全腸外營養(yǎng)制劑給藥)的腸外給藥。如上所述，粘連是作為手術后身體愈合過程中的一個自然部分。作為該過程的一部分，機體將纖維蛋白沉積到受傷組織上。所述的纖維蛋白像膠一樣封住受損處并促進細胞基質沉積，但也可能導致本該分離而不彼此相互粘著的組織通過粘附而聚在一起。值得注意的是，雖然該粘附研究表明AG調制纖維原細胞的行為，在此研究之前，沒有證據表明AG可以用于治療疤痕形成。正如對于本領域的技術人員而言將是顯而易見的，任何腹膜損傷可以導致纖維粘連。正如在我們較早的專利申請中所討論的，所述谷氨酰胺需要被差異地配方以用于腹膜應用，特別地，增稠，以比適合于靜脈給藥的劑型具有更大的粘度。具體而言，所述谷氨酰胺被期望一次給藥，以特別防止或減少損傷或傷害后的粘連形成，例如，手術。瘢痕疙瘩和瘢痕疙瘩傷疤在另一方面是由肉芽組織(III型膠原)過度生長引起的。在恢復的皮膚損傷處，也可能在其所延伸的正常皮膚上，所述瘢痕疙瘩典型地形成堅固的、橡膠似的病變或光澤的纖維結節(jié)。所述瘢痕疙瘩也可以伴隨有身體的不適，例如，嚴重的痕癢和刺痛。具體而言，瘢痕疙瘩的特征在于一個帶有過多細胞外基質成分沉積的非典型纖維母細胞集合，所述的細胞外基質成分尤其是膠原、纖連蛋白、彈性蛋白和蛋白聚糖。此外，作為本領域的技術人員所理解的，這樣的增稠的制劑不適于經皮膚給藥。纖維蛋白是一種在正常凝血中形成的纖維狀的、不溶性的蛋白質，這也是凝塊的本質。纖維蛋白由纖維蛋白原形成，纖維蛋白原是一種在肝臟中產生的可溶的血漿糖蛋白。膠原蛋白是一組天然存在的蛋白，也是結締組織、皮膚、腱、軟骨和骨的主要蛋白質。然而，發(fā)明人之一對減少疤痕制劑的興趣由來已久，并且AG在減少粘連形成這方面的性質吸引了該發(fā)明人。該發(fā)明人被選為用AG嘗試治療瘢痕疙瘩疤痕，盡管所知的困難 是關于超過了一定的大小閾值的組合物跨皮膚屏障傳遞至新生皮膚發(fā)生處的真皮。令人驚訝的是，發(fā)現經皮膚給藥含有20-25%的AG(其分子量為217. 22)是有效的，如下面所討論。因此，在一個優(yōu)選的實施例中，提供了一種藥物組合物用于治療、預防和/或預防性治療瘢痕疙瘩疤痕，其含有有效劑量的AG或其它合適的含甘油酯的二肽，例如，但決不限于丙氨酰二肽和甘二肽。一些實施例中，AG的“有效劑量”是這樣一種足夠的量，即對比于受類似損傷但未經處理而形成的疤痕，其可以減少損傷處瘢痕疙瘩疤痕形成和/或疤痕的嚴重程度。在一些實施例中，有效劑量可以是，AG占5-35%、5-30%、10-35%、10-30%，5-25 %、10-25 %或20-25 %。在一個優(yōu)選的實施例中，所述藥物組合物包括有效劑量的AG和有機凝膠，如下面所討論。正如本領域技術人員可以理解的，對一種藥物組合物的配方重制，使之從腹膜間給藥模式轉變?yōu)槠つw給藥模式不是一件簡單的事情。具體而言，不僅是添加劑不同，在一種情況下，該組合物被一次給藥，而在另一種情況下(真皮地)，所述組合物根據病人的需求被頻繁地給藥。所述氨基酸谷氨酰胺已被廣泛研究，并已被證明在治療嚴重疾病、損傷、創(chuàng)傷、燒傷，并在治療癌癥相關副作用，以及手術后患者傷口愈合中是有用的。因為它通常是在肝臟和肺產生，因此它不被視為一種必需氨基酸。當身體緊張時，其會釋放皮質醇到血流。高皮質醇水平可以降低身體內谷氨酰胺的儲存，而谷氨酰胺是腸上皮細胞、淋巴細胞和巨噬細胞這些在特有的傷口愈合中必要細胞的主要燃料來源。當人體緊張時，身體對谷氨酰胺的需求超出了本身對其的合成能力，因此需要補給。從歷史上看，有機凝膠已被用來作為一種外用載體，該載體允許將生物活性物質遞送進入皮膚更深層，因此在各種情況下，允許了一種非侵入性的、方便和不利事件相對不發(fā)生的治療選擇。正如上面所討論的，丙氨酰-谷氨酰胺和甘氨酰-谷氨酰胺相比于谷氨酰胺具更高的溶解度和化學穩(wěn)定性，并因此可以更自由地溶解在有機凝膠的水相中。這允許了谷氨酰胺能以更高的濃度跨皮膚屏障進入疤痕形成位點。如果沒有使用正確的運輸方式如有機凝膠，便沒有理由期望單獨使用所述腹膜劑型清洗傷口能有與活性成分一樣的效果，丙氨酰-谷氨酰胺，將不能到達涉及傷疤形成的皮膚層。配方中，當混入了常規(guī)的外用乳脂(topical cream),不會具有與混入了有機凝膠如Lipoderm (經皮給藥載體，PCCA專用配方)或Transdel (經皮給藥乳脂)一樣的效果。普朗尼克(pluronic)凝膠的其他例子包括，但絕不限于Diffusimax 和PL0 。其它合適的凝膠對于本領域技術人員將是顯而易見的。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種治療或預防或預防性治療或減少瘢痕疙瘩疤痕嚴重性的方法，其包括在瘢痕疙瘩疤痕形成位點或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成位點外用給藥有效劑量的谷氨酰胺源。值得注意的是，對于疤痕的“減少嚴重性”指的是相對于未經處理的且具有相同時期和嚴重性的疤痕，“平坦化”或其他改善疤痕外觀，如在此論述的。在一個優(yōu)選的實施例中，提供了一種治療或預防或預防性治療或減少瘢痕疙瘩疤痕嚴重性的方法，包括在瘢痕疙瘩疤痕形成處或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成處外用給藥有效劑量的處于有機凝膠內的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。值得注意的是，關于瘢痕疙瘩疤痕形成的“預防性治療”是指向一個部位施用所述組合物，而該部位近期發(fā)生了損傷，該損傷被懷疑能導致形成瘢痕疙瘩疤痕，或該損傷具有導致形成瘢痕疙瘩疤痕的風險。可選擇地,該組合物可施用在這樣一個部位,該部位處瘢痕疙瘩疤痕已經在分子水平上產生卻還未發(fā)展成為可見的疤痕，或即將產生的疤痕形成的任何可見標志。在本發(fā)明的另一個方面，提供了一種被配方或設置為外用給藥的包括谷氨酰胺源的藥物組合物。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物包含處于有機凝膠內的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。在一個優(yōu)選的實施例中，配方如下二甲基砜5g曲尼司特0.4況菠蘿蛋白酶2gL-丙氨酰-L-谷氨酰胺IOgVersabase 乳脂 qs IOOg正如本領域的技術人員所理解的，該配方將產生一個10% AG組合物。在其它實施例中，AG的添加量可以變化，以生產這樣的組合物，例如為5-35 % >5-30 %、10-35 %、10-30 %、5-25 %、10-25 %或 20-25 % AG,如本文所討論的。本發(fā)明現在將通過實施例進行說明，然而，本發(fā)明并不限于這些實施例。實施例1一個個體被嚴重燒傷，而她的眉毛上了蠟。其眼瞼呈一級燒傷。按照以上方法制備的藥膏被施用。該藥膏每天施用兩次至三次，施用三天。由于該燒傷程度、泛紅、腫脹和觸摸疼痛，可預計會脫皮，但是并未出現脫皮。施用該藥膏幾天后，并未出現燒傷跡象。實施例2一個有瘢痕疙瘩疤痕史的個人，受傷后立即在一塊皮膚區(qū)域應用了如上所述的外用組合物。傷口位于前臂且有Icm長幾毫米深。盡管事實上，此人已經有瘢痕疙瘩疤痕史，令人驚訝的是，相比于根據病史所預期的結果，受傷部位形成的疤痕減少了。具體來說，雖然有一些變色，這很可能是因為傷害發(fā)生時病人處在陽光之下，疤痕平，這與預期的相反。雖然上面已經描述了本發(fā)明優(yōu)選的實施 例，將被認可和理解的是，可以在其中做出各種修改，并且附屬的權利要求旨在覆蓋全部落入本發(fā)明的精神和范圍內的修改。
權利要求
1.一種治療或預防或預防性治療瘢痕疙瘩疤痕的方法，包括在瘢痕疙瘩疤痕形成處或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成處外用給藥有效劑量的谷氨酰胺源。
2.一種治療或預防或預防性治療瘢痕疙瘩疤痕的方法，包括在瘢痕疙瘩疤痕形成處或潛在的瘢痕疙瘩疤痕形成處外用給藥有效劑量的處于有機凝膠內的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。
3.—種藥物組合物，包括被配方為外用給藥的谷氨酰胺源。
4.根據權利要求3所述的藥物組合物，其中所述的谷氨酰胺源是L-丙氨酰-L-谷氨酰 胺。
5.根據權利要求4所述的藥物組合物，其中所述的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺懸浮于有機凝膠中。
全文摘要
由于對減少疤痕制劑的興趣由來已久，丙氨酰-谷氨酰胺被用于測試對瘢痕疙瘩疤痕的治療能力，盡管所知的困難是關于超過了一定的大小閾值的組合物跨皮膚屏障傳遞至新生皮膚發(fā)生處的真皮。令人驚訝的是，我們發(fā)現皮膚給藥丙氨酰-谷氨酰胺制劑對于減少瘢痕疙瘩疤痕嚴重性和/或預防瘢痕疙瘩疤痕形成是有效的。
文檔編號A61K9/10GK103002903SQ201180031168
公開日2013年3月27日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權日2010年6月28日
發(fā)明者阿德博拉O.E.·奧巴揚, 桑吉·辛格, 布倫達·科倫·喬伊斯·尤德斯基 申請人:Ade 治療公司