專利名稱：基于a-m模型的中藥新藥發(fā)現(xiàn)策略和藥物及其組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥新藥研發(fā)策略和基于該方法發(fā)現(xiàn)的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調(diào)節(jié)胃腸道機(jī)能和抗真菌活性，具體講就是基于藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。極大的降低了中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的難度，提高了中藥新藥發(fā)現(xiàn)的效率。
背景技術(shù)：
藥物研究是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，可以有多種不同方法、技術(shù)和策略，但都有一個(gè)共同的目標(biāo)，即開發(fā)新的治療疾病的藥物。數(shù)千年的臨床實(shí)踐已經(jīng)證實(shí)了中藥(包括復(fù)方)在臨床上的確切療效，但是由于其化學(xué)成份組成復(fù)雜性，中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究一直以米難獲突破。目前主流的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究方法仍以中藥化學(xué)、天然藥物化學(xué)方法為主，根據(jù)成分極性分段對(duì)有效成分進(jìn)行提取、分離，采用現(xiàn)代藥理模型進(jìn)行體內(nèi)外活性篩選，對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，這種方法已經(jīng)不能高效、便利的發(fā)現(xiàn)新藥和新先導(dǎo)化合物。對(duì)于中藥新藥開發(fā)的難點(diǎn)在于適合中藥自身特點(diǎn)的研發(fā)思路和策略，尋找新的研究方法和策略比具體的新技術(shù)和方案意義重大影響更加深遠(yuǎn)。新藥設(shè)計(jì)是指先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化的過(guò)程。新藥的設(shè)計(jì)是整個(gè)新藥創(chuàng)制流程中的關(guān)鍵步驟。是否能夠找到合適的候選藥物，則決定著該藥后期開發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)和最終能否上市注冊(cè)為新藥。經(jīng)典的天然產(chǎn)物設(shè)計(jì)，尤其是一些中藥有效成分或已上市的天然藥物是通過(guò)系統(tǒng)的提取和分離，將組分或單體富集，建立合適的體外活性評(píng)價(jià)模型系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)， 通過(guò)藥物化學(xué)技術(shù)對(duì)其進(jìn)一步結(jié)構(gòu)改造，以求獲得更高活性、更低毒性的藥物候選物。這一方法曾經(jīng)推動(dòng)我國(guó)中藥現(xiàn)代化的進(jìn)程。近百年來(lái)國(guó)內(nèi)外科學(xué)家從中藥中先后分離報(bào)道了幾千個(gè)單體化合物，并對(duì)其中許多成分進(jìn)行過(guò)生物活性研究，其中一些活性成分已被廣泛用于臨床。在傳統(tǒng)的藥物沒(méi)計(jì)流程中，對(duì)于候選化合物，最關(guān)心的往往是對(duì)于特定靶點(diǎn)的活性以及對(duì)于相關(guān)靶點(diǎn)的選擇性。至于這個(gè)化合物能否在腸道中溶解，能否通過(guò)腸道的黏膜細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，在肝臟的代謝和轉(zhuǎn)化情況，能否通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)有效部位等問(wèn)題，人們極少關(guān)注。此外，化合物是否能夠在體內(nèi)對(duì)靶點(diǎn)保持足夠長(zhǎng)的藥效而不被肝臟和腎臟降解或排出也是值得關(guān)注的問(wèn)題。組分中藥是以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ)，遵循方劑的配伍理論與原則，有效組分、有效部位或者提取物配伍而成的現(xiàn)代中藥；是運(yùn)用植物化學(xué)、現(xiàn)代分析技術(shù)等，將各種中藥材的有效組分、協(xié)同有效組分、有效部位或者定向提取物等都進(jìn)行分析、研究，基本搞清楚物質(zhì)基礎(chǔ)，然后按照中醫(yī)辨證施治的原則，進(jìn)行有效成分的組合和配方，成為現(xiàn)代新藥。除少數(shù)局部用藥物外，藥物要發(fā)生藥效作用，大多數(shù)口服藥物要通過(guò)胃腸道吸收進(jìn)入血液循環(huán)達(dá)到靶組織部位發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。因此，中藥藥效作用物質(zhì)基礎(chǔ)首先是能通被腸道吸收進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的成分，而且這些成分還必須有較好的藥代特性。前期研究表明，中藥成分復(fù)雜，單一一味中藥成分多達(dá)千種，復(fù)方配伍之后成分就更多更加復(fù)雜；但是這些成分中能被吸收入血的占少數(shù)，吸收入血的成分中有一些也不具備合適的藥代特性而發(fā)揮藥效作用。所以，基于A-M模型的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究大大降低了研究的難度艾葉為菊科植物艾的干燥葉，能散寒止痛，溫經(jīng)止血。用于少腹冷痛，經(jīng)寒不調(diào)，溫經(jīng)上血；廣泛用于婦科溫經(jīng)上痛和止血。艾葉散(《圣惠》卷七十九)主治產(chǎn)后膿血痢久不愈，不思飲食，漸加羸瘦。艾葉散組成艾葉1兩(微炒)，黃柏3分(涂蜜微炙，銼)，赤芍藥3分，黃連3分(去須，微炒)，地榆3分(挫)，甘草半兩(炙微赤，銼)，干姜半兩(炮裂，銼)，阿膠3分(搗碎，炒令黃燥)。金鈴散(《素問(wèn)病機(jī)氣宜保命集》卷中金鈴子散，金鈴子，玄胡各1兩)疏肝泄熱， 行氣止痛。治肝氣不舒，氣郁化火，致患心腹脅肋諸痛，臨床上主要用于治療肝郁化火諸痛證的代表方劑。博落回(Macleaya cordata)是罌粟科博落回屬的一種多年生草本植物，全草帶根入藥，有大毒，可治跌打損傷、惡瘡和蜂螫傷等。由于含有多種生物堿，博落回提取物還可用為農(nóng)藥和抗菌消炎藥。上述三者(艾葉散、金鈴子散和博落回)的應(yīng)用一直以來(lái)都是停留在傳統(tǒng)的藥物形態(tài)(直接藥材入藥)，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚，臨床療效尚無(wú)大規(guī)模的詢證醫(yī)學(xué)的證據(jù)來(lái)支持?，F(xiàn)代科技的發(fā)展要求我們來(lái)挖掘和豐富傳統(tǒng)中藥的內(nèi)涵，三氧化二砷(俗稱砒霜)治療急性早幼粒細(xì)胞性白血病(APL)分子機(jī)制和臨床循證醫(yī)學(xué)研究便是一個(gè)很好的例證。因此，建立適合于中藥新藥的基于A-M模型的新藥發(fā)現(xiàn)策略對(duì)于指導(dǎo)新藥發(fā)現(xiàn)十分必要，同時(shí)在基本搞清藥效物質(zhì)基礎(chǔ)上進(jìn)行中藥新藥開發(fā)還有利于傳統(tǒng)中藥被國(guó)際社會(huì)接受、進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)。為了有效的進(jìn)行中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究加快中藥新藥開發(fā)，本發(fā)明人提供了一種新的適合于復(fù)雜體系中藥的研究策略利方法，并基于這一方法進(jìn)行了部分方劑和草藥的研本發(fā)明人還發(fā)明了針對(duì)胃腸機(jī)能調(diào)節(jié)和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、 草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明目的在于提供一種適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)的方法和策略；以及基于該方法的針對(duì)胃腸機(jī)能調(diào)節(jié)和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。技術(shù)方案本發(fā)明提供一種適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)的方法和策略。其特征在于基于藥物的吸收和代謝(A-M)從中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)出發(fā)，以此為突破點(diǎn)和基礎(chǔ)指導(dǎo)中藥新藥開發(fā)和設(shè)計(jì)新藥。簡(jiǎn)述如下1.制備A-M模型，并對(duì)模型的性能進(jìn)行驗(yàn)證2.將傳統(tǒng)中藥方劑或者適合的給藥形式(包括中藥提取物)加到A-M系統(tǒng)中3.分析和定量A-M系統(tǒng)中被吸收和代謝組分4.對(duì)吸收和代謝組分進(jìn)行與方劑功能主治相關(guān)聯(lián)的活性確認(rèn)和比較
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5.確定方劑的功能主治相關(guān)活性成分的種類及種類間的數(shù)量關(guān)系、即確定藥效物質(zhì)群6.以藥效物質(zhì)群為目標(biāo)，采用現(xiàn)代化學(xué)定向提取、分離純化或其它方法制備7.通過(guò)工業(yè)化制備藥效物質(zhì)群后，進(jìn)行候選藥物新藥系統(tǒng)研究。本發(fā)明提供了系列方劑和中草藥在基于上述方法篩選和發(fā)現(xiàn)的新中藥組合物 (包括中藥有效組分及組合物、中藥有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)，驗(yàn)證了基于A-M模型的中藥新藥發(fā)現(xiàn)策略和方法的可行性。詳述如下1.按照常規(guī)方法制備外翻腸囊和肝微粒體肝微粒體的制各①健康Wistar大鼠禁食Mh，脫頸處死；②打開開腹腔，細(xì)塑料管插入肝門靜脈，通過(guò)蠕動(dòng)泵將冰冷的KCL溶液灌洗肝臟至土黃色；③然后摘除肝臟，加入磷酸緩沖液攪勻，勻漿；取肝勻漿組織于4°C，IOOOOXg離心20min，取上清液，105000 Xg離心兩次，分別為60min和20min，分別得沉淀，為微粒體。 將微粒體板重懸于磷酸緩沖液中，分裝于-80°C保存，測(cè)定肝微粒體蛋白含量備用。腸外翻球囊的制備參照大鼠經(jīng)典腸外翻實(shí)驗(yàn)[WilsonT H,Wiseman G. The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of substances from the mucosal to the serosal surface [J]. J Physiol, 1954,123(1) :116]大鼠，實(shí)驗(yàn)前 12h 禁食，自由飲水。脫頸處死，打開腹腔，迅速取出約IOcm長(zhǎng)的十二指腸、空腸、回腸、7cm結(jié)腸各段。放入冰Tyrode液中，沖洗，剝離腸系膜和脂肪。將腸管翻轉(zhuǎn)，結(jié)扎腸段下端，使之形成囊狀腸管。2. A-M體系構(gòu)建和藥物加入向上述腸囊內(nèi)注入2mL特定濃度肝微粒體的Tyrode液，作為代謝體系。將其放入已有Tyrode液的麥?zhǔn)显〔壑?，?shí)驗(yàn)過(guò)程中保持37°C恒溫，并向浴槽中通入95% O2/5% CO2. 平衡5min后，注入配制好的不同濃度的藥液(艾葉散、金鈴子散和博落回提取物)50mL，在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)從腸囊內(nèi)取樣。腸管球囊作為離體腸吸收體系。3. A-M體系中藥物吸收和代謝組分分析取樣在4°C條件下離心或者其他適當(dāng)方法處理，HPLC-LC分析吸收成分和代謝成分的種類和數(shù)量，并確定主要相關(guān)組分的藥代參數(shù)。4.對(duì)吸收和代謝組分進(jìn)行與方劑功能主治相關(guān)聯(lián)的活性確認(rèn)和比較艾葉散的主要功能散寒止痛、溫經(jīng)止血，主治少腹冷痛、經(jīng)寒不調(diào)，為婦科痛證之要藥。金鈴子散是治療肝郁化火諸痛證的代表方劑，疏肝泄熱，活血止痛。用于胸腹脅肋疼痛，也可用于痛經(jīng)和疝痛以及胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎、慢性肝炎、膽囊炎等屬肝郁化火者。博落回功能散瘀、祛風(fēng)、解毒、止痛、殺蟲。臨床曾用于各種致病微生物所致的感染。 艾葉散和金鈴子散在臨床上均有用于胃腸疾病的治療，因此確定調(diào)節(jié)胃腸機(jī)能作為其主要目標(biāo)活性、進(jìn)行離體和在體試驗(yàn)篩選和確認(rèn)藥效組分群(或部位)。觀察主要艾葉散和金鈴子散有效組分群對(duì)離體大鼠胃條平滑肌自發(fā)性收縮活動(dòng)以及賢上腺素、去甲賢上腺素引起離體鼠胃條平滑肌舒張的影響，同時(shí)還觀察各藥物對(duì)5-羥色胺引起大鼠胃條收縮的影響。 大鼠禁食48h，用鐵棒猛擊枕骨致昏迷后，立即剖開腹腔，取出胃立即放入克氏液中，沿胃小彎剪開胃腔，去除胃粘膜，并在胃底部橫向剪下胃肌條，將胃肌條放入37攝氏度的氏液中并通以C0295 %和5 % 02，穩(wěn)定20min后，用二道生理記錄儀記錄正常值后，分別加入不同劑量的上述組分，記錄腸道平滑肌在加入藥物后收縮活動(dòng)。
觀察艾葉散和金鈴子散主要有效組分群對(duì)小鼠鎮(zhèn)痛和抗炎作用。?？寡讓?shí)驗(yàn)小鼠按體重隨機(jī)分成正常對(duì)照組，艾葉散和金鈴子散有效組分群大、中、 小3個(gè)劑量組(相當(dāng)于6. 8g生藥/kg，3. 4g生藥/kg和1. 7g生藥/kg)，各組每日經(jīng)口給予相應(yīng)的藥物一次(0.2mL/10g)，空白組給予相同劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥3天。并于第3 天藥后40min，各鼠由尾靜脈注入0. 5%伊文斯藍(lán)0. lml/10g,隨即腹腔內(nèi)注射0. 6%的HAc 溶液0. lml/10g, 30min后將小鼠脫頸椎處死，腹腔內(nèi)注入生理鹽水5mL，輕揉數(shù)下，剪開腹部，用吸管吸出洗滌液，3000r. min離心15min，取上清液于590nm處測(cè)定吸光度，以O(shè)D值高低表示抗炎作用的強(qiáng)弱。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥與上相同，在對(duì)小鼠腹腔內(nèi)注射0. 6 %的HAc溶液 0. lml/10g以后，觀察20分鐘內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)，以腹腔內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高為陽(yáng)性指標(biāo)。并計(jì)算藥物對(duì)扭體反應(yīng)得抑制率。
權(quán)利要求
1.基于藥物吸收-代謝(A-M)模型的適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)和新藥設(shè)計(jì)的方法和策略。
2.基于權(quán)利要求1所述的方法的川楝子提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、延胡索提取物(有效組分及組合物、 有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、金鈴子散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
3.基于權(quán)利要求1所述的方法的艾葉提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃柏提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃連提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、地榆提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、赤芍提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)艾葉散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
4.基于權(quán)利要求1所述的方法的博落回提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
5.用于預(yù)防和治療胃腸疾病的組合物，其中所含權(quán)利要求2和3任何一項(xiàng)或幾項(xiàng)所述的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
6.用于預(yù)防和治療真菌感染相關(guān)疾病的組合物，其中所含權(quán)利要求4所述任一的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥新藥研發(fā)策略和基于該方法發(fā)現(xiàn)的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調(diào)節(jié)胃腸道機(jī)能和抗真菌活性，具體講就是基于藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和中草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。基于本發(fā)明的中藥新藥具有藥效物質(zhì)基礎(chǔ)基本明確的特點(diǎn)，因此質(zhì)量控制就有針對(duì)性很，能被國(guó)際市場(chǎng)廣泛接受。
文檔編號(hào)A61P31/10GK102445513SQ201110282220
公開日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月22日
發(fā)明者成龍 申請(qǐng)人:成龍