專利名稱：一種貓棒束孢菌絲體的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及貓棒束孢真菌菌絲體的用途，具體是在制備治療順鉬引起的急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
貓棒束孢(Isaria felina)是從天然冬蟲夏草子實(shí)體中經(jīng)菌種分離培養(yǎng)獲得的一種可工業(yè)化生產(chǎn)的菌株，在分類上屬于半知菌綱、叢梗孢目、棒束孢屬。經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所郭英蘭教授鑒定為Isaria felina (DC. :Fr) Fr，該菌種已被中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏(保藏號(hào)CGMCC NO. 0706)，并取得國(guó)家發(fā)明專利。Deffieux Gerard 等人(J Antibiot(Tokyo) · 1981，34(10) :1261-1265.)從 Isaria felina中提取分離得到環(huán)羧酚酸肽結(jié)構(gòu)的殺蟲劑Isariins B，C和D，并對(duì) Isariins B, C 和 D 的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定(J Antibiot (Tokyo). 1981，34 (10) 1266-1270.)。 郭永霞從貓棒束孢菌絲體中分離純化得到具有抗真菌作用的環(huán)縮肽isarfelin，并對(duì) isarfelin進(jìn)行了理化性質(zhì)的分析、結(jié)構(gòu)鑒定，并發(fā)現(xiàn)isarfelin具有抑制細(xì)菌、抵抗真菌的活性(郭永霞.貓棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分離純化及特性的研究[博士論文].北京中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005)。Ikumoto等研究發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草、蛹蟲草及貓棒束孢的浸出液對(duì)離體心房有負(fù)收縮效應(yīng)，同時(shí)對(duì)電刺激回腸的收縮反應(yīng)及人血小板的凝結(jié)有抑制作用(Journal of the Pharmaceutical Society of Japan，1991，111 (9) 504-509)。目前尚未見到關(guān)于貓棒束孢在治療腎功能損傷方面的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種貓棒束孢菌絲體在制備治療順鉬引起的急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所涉及的貓棒束孢菌是從天然冬蟲夏草子實(shí)體中經(jīng)分離培養(yǎng)獲得，該菌株保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC N0. 0706。本發(fā)明使用的貓棒束孢菌絲體可按專利號(hào)ZL02103669. 1的方法培養(yǎng)得到。本發(fā)明貓棒束孢菌絲體在制備治療順鉬引起的急性腎功能損傷藥物中的應(yīng)用將貓棒束孢菌絲體干燥粉碎后用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠注射順鉬、患者使用順鉬化療后其血清中CRE和BUN水平明顯升高，說明順鉬對(duì)小鼠及化療患者均可引起急性腎損傷，小鼠在灌胃貓棒束孢菌絲體干粉、順鉬化療患者服用貓棒束孢菌絲體干粉后其血清中CRE和BUN水平均明顯下降，表明貓棒束孢菌絲體對(duì)順鉬引起的急性腎損傷有顯著的治療作用。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，貓棒束孢菌絲體對(duì)順鉬引起的小鼠急性腎衰有很好的治療作用，對(duì)臨床化療中因順鉬引起的急性腎損傷有很好的治療效果，表明貓棒束孢菌絲體是一種具有良好開發(fā)前景的抗腎損傷的藥物，該藥物可作為順鉬化療治療中的輔助藥物。


圖1注射順鉬后小鼠體重變化情況；圖2A為正常組腎臟病理圖；圖2B為模型組腎臟病理圖腎小管變性壞死，上皮細(xì)胞渾濁腫脹，輕度纖維增生；圖2C為模型組腎臟病理圖腎小管變性壞死，出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)灶；圖2D為IF給藥組腎臟病理圖腎小管基本正常，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.材料和方法1.1動(dòng)物、藥品與試劑昆明小鼠，雄性，體重23_26g，由山西省腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心繁殖，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (晉)2007-0001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK (晉)2007-0002。貓棒束孢菌絲體(IF)可由專利號(hào)ZL02103669. 1的方法培養(yǎng)。培養(yǎng)基蛋白胨 0.6%,酵母膏 1.2%，蔗糖 2.4%，MgSO4O. 05 %，KH2PO4O. 1 %，飽和 NaHCO3 溶液；培養(yǎng)方法 3只西林瓶菌種(0. 5g/瓶)接種于6只3000mL三角瓶，裝量500mL/瓶，牛皮紙封口，于 180r/min、26. 5°C條件下培養(yǎng)2_3d，收獲，發(fā)酵液于2000r/min離心5min，得菌絲體，于80°C 烘Mh，測(cè)干重，菌絲體得率為4. 8g/500mL。所得菌絲體干燥粉碎后用于實(shí)驗(yàn)研究。順鉬，南京制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20100702。1.2動(dòng)物分組及給藥雄性昆明小鼠74只，隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，IF給藥高、 中、低劑量組，正常對(duì)照組為10只小鼠，其余各組為16只小鼠。模型對(duì)照組及各IF給藥組動(dòng)物一次性腹腔注射順鉬10mg/kg(lmL/100g)以造成小鼠急性腎損傷模型，正常對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水；IF給藥高、中、低劑量組動(dòng)物在注射順鉬之后連續(xù)每日灌胃給予IF 7d，灌胃量分別為1000mg/kg、500mg/kg，250mg/kg,正常對(duì)照組及模型對(duì)照組灌胃給予等量蒸餾水(lmL/100g)。1. 3 一般情況觀察實(shí)驗(yàn)過程中觀察小鼠皮毛色澤、精神狀態(tài)、進(jìn)食進(jìn)水情況、存活率及體重變化等一般情況。1. 4血清生化指標(biāo)測(cè)定給藥結(jié)束后Mh，稱重小鼠，腹腔注射戊巴比妥鈉(60mg/kg)麻醉小鼠，摘眼球取血，3000r/min離心，分離血清，使用全自動(dòng)生化分析儀(荷蘭威圖，儀器型號(hào)SELECTRA-E ； 儀器編號(hào)GLP-ZB-001)測(cè)定血清BUN和CRE含量。1. 5臟器指數(shù)與腎臟病理學(xué)檢查取血后剖取小鼠左腎、右腎、肝臟、脾臟及胸腺，計(jì)算各臟器指數(shù)；觀察比較兩組動(dòng)物腎臟外觀；取左腎，剝除外膜，以10%甲醛固定過夜，常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片、HE 染色，鏡下觀察腎臟病理改變。
1. 6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，采用SPSS17. 0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用最小顯著差異法(LSD)，取α =0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2.結(jié)果2. 1動(dòng)物的一般情況各造模組小鼠在注射順鉬后體重明顯下降，到第5天體重下降至最低點(diǎn)，之后體重開始恢復(fù)(見圖1)。與正常對(duì)照組相比，造模組小鼠進(jìn)食量和飲水量均明顯減少，5d后進(jìn)食量和飲水量開始增加，皮毛松散、無光澤，體重下降明顯(見表1)。各IF給藥組較模型對(duì)照組小鼠狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增加，皮毛略有光澤。正常對(duì)照組動(dòng)物無死亡現(xiàn)象發(fā)生，各造模組動(dòng)物有一定量的死亡，且模型對(duì)照組動(dòng)物死亡數(shù)最多，表明順鉬對(duì)小鼠造成了一定的傷害，各IF給藥組動(dòng)物死亡數(shù)量有所減少，說明IF對(duì)由順鉬致小鼠傷害有一定的保護(hù)作用。表1.小鼠存活率及體重變化情況([士 S )
權(quán)利要求
1.貓棒束孢菌絲體在制備治療順鉬引起的急性腎功能損傷的藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的貓棒束孢菌絲體在制備治療順鉬引起的急性腎功能損傷的藥物中的應(yīng)用，所述的貓棒束孢其保藏號(hào)為CGMCC NO. 0706。
全文摘要
本發(fā)明公開了貓棒束孢真菌絲體在制備治療順鉑引起的急性腎損傷藥物中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠注射順鉑、患者使用順鉑化療后其血清中CRE和BUN水平明顯升高，說明順鉑對(duì)小鼠及化療患者均可引起急性腎損傷，注射順鉑小鼠在灌胃貓棒束孢菌絲體干粉、順鉑化療患者服用貓棒束孢菌絲體干粉后其血清中CRE和BUN水平均明顯下降，表明貓棒束孢菌絲體對(duì)順鉑引起的急性腎損傷有顯著的治療作用。本發(fā)明提供了貓棒束孢真菌絲體在制備治療順鉑引起的急性腎損傷藥物中的應(yīng)用，貓棒束孢菌絲體可進(jìn)一步開發(fā)成為順鉑化療治療中的輔助藥物。
文檔編號(hào)A61K35/06GK102228471SQ20111017542
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月27日
發(fā)明者任連生, 張生萬, 楊喜花 申請(qǐng)人:山西大學(xué)