專利名稱：超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及超氧化物歧化酶的一種在婦科醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的用途。
背景技術(shù)：
宮頸糜爛(cervical erosion)也叫宮頸柱狀上皮異位，是慢性宮頸炎的局部特征之一，長(zhǎng)期以來(lái)臨床醫(yī)生將慢性宮頸炎和宮頸糜爛視為同義詞。宮頸糜爛的發(fā)生是由于分娩、流產(chǎn)、產(chǎn)褥期感染或手術(shù)操作或機(jī)械刺激如性生活損傷宮頸，病原體侵入而引起感染導(dǎo)致的，是婦女的多發(fā)病和常見(jiàn)病。尤其是已婚、已生育過(guò)的婦女，幾乎60% 80%有不同程度的宮頸糜爛。宮頸糜爛的病因及病原體1、性傳播疾病病原體淋病奈瑟菌及沙眼衣原體，主要見(jiàn)于性傳播經(jīng)的高危人群；2、內(nèi)源性病原體部分宮頸炎的病原體與細(xì)菌性陰道病和生殖支原體感染有關(guān)。3、沙眼衣原體，及淋病奈瑟菌均感染宮頸管上皮，沿粘膜面擴(kuò)散引起淺層感染，病變以宮頸管明顯。除宮頸管柱狀上皮外，淋病奈瑟菌還經(jīng)常侵襲尿道移行上皮、尿道旁腺，及前庭大腺。宮頸糜爛可引起白帶增多、白帶帶血或性交后出血，常有腰酸背痛、月經(jīng)失調(diào)、不孕不育等。嚴(yán)重的宮頸糜爛如不予治療，少數(shù)可發(fā)生子宮頸癌前病變或子宮頸癌，嚴(yán)重危害廣大婦女的身體健康。目前治療此病的方法很多，但有的藥物療效欠佳，物理治療副作用較大，有可能會(huì)造成宮頸局部組織攣縮，瘢痕形成，并使陰道內(nèi)壁神經(jīng)靈敏度降低，且容易復(fù)發(fā)。也可能導(dǎo)致宮頸分泌腺閉鎖，使宮頸黏液發(fā)生改變而不孕，或造成分娩時(shí)宮頸擴(kuò)張障礙，分娩困難，因此未生育的患者不宜采用物理治療。醫(yī)學(xué)專家研究發(fā)現(xiàn)宮頸糜爛與人類乳頭瘤病毒(HPV)感染密切有關(guān)，所以積極治療宮頸糜爛可以減少宮頸癌的發(fā)病率。大量文獻(xiàn)資料和臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)自由基與炎癥有著密切的關(guān)系。炎癥反應(yīng)本是機(jī)體自我保護(hù)的正常防御反應(yīng)，但過(guò)度的炎癥反應(yīng)所產(chǎn)生的大量自由基會(huì)傷害機(jī)體自身的組織。自由基會(huì)誘導(dǎo)促炎癥細(xì)胞因子基因的表達(dá)，當(dāng)人體產(chǎn)生的自由基超出其自身清除能力時(shí)，就會(huì)加劇炎癥反應(yīng)。自由基的累積還會(huì)攻擊生命大分子(RSH)，使得皮膚粘膜組織損傷， 而且自由基的反應(yīng)是連鎖式的，使得組織損傷越來(lái)越嚴(yán)重。超氧化物歧化酶(英文名superoxide dismutase簡(jiǎn)稱SOD)是自由基的專業(yè)性高效率清除劑，其清除速率達(dá)到IO9M-1S.1,通過(guò)O2" + O2" + 2H+ SOD · O2 + H2O2超氧化物歧化酶的歧化反應(yīng)
來(lái)清除自由基，并清除吞噬細(xì)胞在吞噬細(xì)菌過(guò)程中所產(chǎn)生的自由基一炎癥的動(dòng)因一而達(dá)到消炎的作用。含銅與鋅超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和含鐵超氧化物歧化酶0^-SOD)因其內(nèi)均含S0D，因此，三者在學(xué)術(shù)上統(tǒng)稱為超氧化物歧化酶 (SOD)。超氧化物歧化酶的來(lái)源可以是動(dòng)物，也可以是植物。近些年，為彌補(bǔ)與完善超氧化物歧化酶(SOD)在一些方面的不足，人們對(duì)其進(jìn)行了各種修飾、重組等方法的嘗試和實(shí)驗(yàn)。 但無(wú)論是超氧化物歧化酶〔含銅與鋅超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含錳超氧化物歧化酶
3(Mn-SOD)和含鐵超氧化物歧化酶( ^-SOD)〕，以及經(jīng)修飾或重組的S0D，它們共同的作用底物為超氧自由基(O2)，其催化的反應(yīng)為Of + O2" + 2H+__SOD ·02 + H2O2。根據(jù)一般酶活力測(cè)定的常規(guī)，多以一定時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的生成量或底物的消耗量作為酶活性單位，因此，無(wú)論是采用連苯三酚、腎上腺素等自氧化反應(yīng)方法進(jìn)行檢測(cè)，只有能體現(xiàn)出一定的酶活性單位，才能作為確定與判斷該類物質(zhì)的重要依據(jù)。眾多研究表明，超氧化物歧化酶在預(yù)防和治療放射性粘膜損傷，人體自由基氧化引發(fā)的皮膚受損的各種表現(xiàn)癥狀，人體免疫失衡所致病癥引起的各類皮膚損傷，以及關(guān)節(jié)炎等無(wú)菌性炎癥的治療方面有作用，有些研究已進(jìn)入不同的臨床研究階段。迄今國(guó)內(nèi)未見(jiàn)有關(guān)通過(guò)對(duì)患者經(jīng)陰道局部給藥的方式，使用一定劑量的超氧化物歧化酶，能夠迅速修復(fù)婦女宮頸及陰道糜爛的研究報(bào)告，也未見(jiàn)到國(guó)外該方面的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用。超氧化物歧化酶在陰道局部給藥的條件下，能夠迅速修復(fù)婦女宮頸及陰道的糜爛部位，加速愈合。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物片劑，一片含有效成份超氧化物歧化酶 (Cu-Zn-SOD) 10000國(guó)際單位，由超氧化物歧化酶20mg(原料為500國(guó)際單位/mg)、藥用淀粉479mg，防腐劑lmg，混合均勻，壓片后獲得500mg/片的片劑。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物硬膠囊，一粒含有效成份超氧化物歧化酶 (Mn-SOD) 10000國(guó)際單位，由超氧化物歧化酶1. 67mg(原料為6000國(guó)際單位/mg)、藥用淀粉497mg，防腐劑1. 23mg,混合均勻，混合均勻后裝入空心膠囊，制成500mg/粒的硬膠囊。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物軟膠囊，一粒含有效成份超氧化物歧化酶 (Fe-SOD) 10000國(guó)際單位，由超氧化物歧化酶lmg(原料為10000國(guó)際單位/mg)、聚乙二醇 200 M9mg，置入以明膠、甘油(1 0.4)制成的軟膠囊皮，制成250mg/粒軟膠囊。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物軟膏，即20g的軟膏制劑中含超氧化物歧化酶30000國(guó)際單位(原料為100國(guó)際單位/mg)，它由如下比例構(gòu)成超氧化物歧化酶 0. 015%,0. 2%卡波姆、5% 10%甘油、94. 885% 87. 985%純化水。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物栓劑，即2g/枚的栓劑中含超氧化物歧化酶 10000國(guó)際單位(原料為20000國(guó)際單位/mg)，它由如下比例構(gòu)成超氧化物歧化酶0. 5mg、 1799. 5mg聚乙二醇4000、200mg聚乙二醇400，經(jīng)混合溶解，倒入栓模，制成栓劑。一種治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物水劑，即IOOmL/瓶的水劑中含超氧化物歧化酶3000000國(guó)際單位(原料為30000國(guó)際單位/mg)，它由如下比例構(gòu)成超氧化物歧化酶lOOmg、純化水IOOmL,經(jīng)混合溶解，裝瓶制成水劑。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)1、依照本發(fā)明內(nèi)容制備成的含超氧化物歧化酶30000國(guó)際單位/ml水劑(原料為 30000國(guó)際單位/mg)在室溫下放置一年后，以連苯三酚法進(jìn)行活力檢測(cè)，結(jié)果為含超氧化物歧化酶四580國(guó)際單位/mL，pH值為，6. 0 ；2、依照本發(fā)明內(nèi)容制備成的含超氧化物歧化酶30000國(guó)際單位/ml水劑(原料為
430000國(guó)際單位/mg)在40°C 士0. 5°C恒溫保持180天，以腎上腺素法進(jìn)行活力檢測(cè)，結(jié)果為含超氧化物歧化酶53880國(guó)際單位/mL，pH值為5. 9 ；此結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明制備成的水劑在不同保存條件下，活力均無(wú)較大變化，pH值穩(wěn)定且呈中性，能夠符合與滿足作為藥物及制劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)要求。陰道刺激、致敏檢驗(yàn)按照生物評(píng)價(jià)學(xué)規(guī)定的要求，對(duì)本發(fā)明片劑分別進(jìn)行陰道刺激、致敏項(xiàng)目的檢驗(yàn)。 檢驗(yàn)結(jié)果表明，陰道刺激指數(shù)為0，無(wú)致敏反應(yīng)。急性毒性、局部刺激性及過(guò)敏性的實(shí)驗(yàn)觀察本發(fā)明栓劑的急性毒性、黏膜刺激性以及皮膚過(guò)敏反應(yīng)。方法參照中藥新藥研究指導(dǎo)原則，采用最大給藥量試驗(yàn)觀察陰道給藥后動(dòng)物短期內(nèi)出現(xiàn)的急性毒性反應(yīng)及其程度，結(jié)合一般情況觀察與組織病理學(xué)檢查綜合判斷陰道黏膜發(fā)生的局部刺激性反應(yīng)，對(duì)豚鼠皮膚多次局部涂抹致敏，觀察其過(guò)敏反應(yīng)。局部刺激性實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物一般狀況良好，未發(fā)生全身反應(yīng)甚至死亡情況，給藥局部陰黏膜未見(jiàn)紅斑、水腫等刺激反應(yīng)，組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)陰道黏膜未見(jiàn)損傷性變化及大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；對(duì)豚鼠皮膚的多次刺激致敏試驗(yàn)顯示藥物無(wú)致敏性。全身急性毒性試驗(yàn)證明小鼠靜脈注射LD50為4. 16g/Kg。結(jié)論本發(fā)明的栓劑經(jīng)陰道局部用藥無(wú)明顯毒性及刺激性，其臨床使用安全可靠。細(xì)胞毒性試驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)采用GB/T16886第5部分細(xì)胞毒性測(cè)試-體外法，對(duì)本發(fā)明片劑進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，樣品浸提液與生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)(37°C 5% C02)24h后，分別觀察細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞裂解情況，采用MTT法測(cè)定供試品的潛在細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示24h時(shí)，100% 樣品提取液的細(xì)胞活力為79. 8%，分級(jí)為1級(jí)，50%的提取液的相對(duì)細(xì)胞活力為85. 8%，分級(jí)為1級(jí)，而陰性對(duì)照的細(xì)胞活力為98. 3%，分級(jí)為1級(jí)，陽(yáng)性對(duì)照的細(xì)胞活力為1. 5%，分級(jí)為4級(jí)。提示供試樣品對(duì)L-9^細(xì)胞無(wú)毒性影響。臨床應(yīng)用試驗(yàn)1、資料和方法1. 1 一般資料在婦科門診確診為宮頸糜爛的已婚婦女90例，年齡22至45歲，平均年齡30歲。白帶多呈乳白粘稠樣，黃色膿性或血性，容易出現(xiàn)接觸性出血，輕癥患者僅感覺(jué)腰酸或下腹墜張感。重者患者則出現(xiàn)較嚴(yán)重的腰痛及下腹痛，月經(jīng)前和性交尤為嚴(yán)重。其中白帶異常48例腰骶痛18例，下腹痛18例，接觸性出血6例。輕度糜爛50例，中度糜爛 20例，重度糜爛20例?；颊咴陆?jīng)周期正常，經(jīng)期正常，治療前均做宮頸刮片及陰道鏡活檢檢查，以排除癌變可能。1. 2診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)宮頸糜爛深淺程度分為3型為單純性糜爛、顆粒性糜爛、乳突型糜爛。根據(jù)糜爛面積大小將糜爛分為3度輕度指糜爛面積小于整個(gè)宮頸面積的1/3，中度指糜爛面積小于整個(gè)宮頸面積1/3-2/3，重度指糜爛面積占整個(gè)宮頸面積的2/3以上。1. 3給藥材料本發(fā)明的片劑、一次性指套及陰道給藥推進(jìn)器組成。1. 4治療方法患者均與月經(jīng)干凈后1-2天開(kāi)始使用。排空小便，用蘇打水清洗外陰，取平臥位，用指套或?qū)⒀b有上述片劑的陰道推進(jìn)器，緩慢插入陰道深部，把上述放入陰道深部。一日2-3次，重度30天一個(gè)療程，中度20天一個(gè)療程，輕度15天一個(gè)療程。治療期間禁止性生活和盆浴，避免劇烈運(yùn)動(dòng)，月經(jīng)期停藥。
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1. 5觀察內(nèi)容詳細(xì)記錄治療前后癥狀改變，宮頸糜爛面積和深度的變化，以及不良反應(yīng)。1. 6療效判定標(biāo)準(zhǔn)痊愈子宮頸光滑，糜爛面消失。顯效糜爛面積縮小大于50% 或2度好轉(zhuǎn)為1度，3度好轉(zhuǎn)為2度。有效2度、3度糜爛面積縮小，但好轉(zhuǎn)不足1度；1度糜爛面積縮小小于50% ；糜爛面無(wú)縮小，但顆粒型變?yōu)閱渭冃?，乳頭狀變?yōu)轭w粒型。無(wú)效 糜爛面無(wú)變化或有發(fā)展。1. 7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用卡方檢驗(yàn)X2。2、臨床統(tǒng)計(jì)結(jié)果治療前后臨床癥狀改善情況，見(jiàn)表1。表1治療前后臨床癥狀改善情況(例)
類別白帶異常腰骶痛下腹痛接觸性出血治療前4818180治療后4320消失率(％)928389100注P < 0. 01，表1數(shù)據(jù)顯示，宮頸糜爛用本發(fā)明片劑治療后臨床癥狀消失率均在 83%以上，臨床效果顯著。治療前后宮頸糜爛局部改善情況，見(jiàn)表2表2治療前后宮頸糜爛局部改善情況
分度N治愈顯效有效無(wú)效總有效率1度5050 0 001002度2016 2 201003度2012 3 3290注表2數(shù)據(jù)顯示宮頸糜爛用用本發(fā)明片劑治療后總有效率> 97%，臨床效果顯
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者O不良反應(yīng)有3例患者在使用的頭2-3天稍有灼熱感或陰道分泌物增多，未加處理，癥狀自然消失，屬正常反應(yīng)。大量文獻(xiàn)資料和臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)自由基與婦科炎癥有著密切的關(guān)系，婦科炎癥是困擾現(xiàn)代女性的一大頑疾。據(jù)世界衛(wèi)生組織對(duì)中國(guó)婦女的調(diào)查我國(guó)育齡女性約為1. 5 2億，其中約41%的女性患有不同程度的婦科炎癥。炎癥反應(yīng)本是機(jī)體自我保護(hù)的正常防御反應(yīng)，但過(guò)度的炎癥反應(yīng)所產(chǎn)生的大量自由基會(huì)傷害機(jī)體自身的組織。自由基會(huì)誘導(dǎo)促炎癥細(xì)胞因子基因的表達(dá)，當(dāng)人體產(chǎn)生的自由基超出其自身清除能力時(shí)，就會(huì)加劇炎癥反應(yīng)。自由基對(duì)人體的損害主要有三個(gè)方面一、使細(xì)胞膜被破壞；二、使血清抗蛋白酶失去活性；三、損傷基因?qū)е录?xì)胞變異的出現(xiàn)和蓄積。宮頸由于炎癥的刺激程度不同，臨床癥狀有不同的表現(xiàn)形式。宮頸處粘膜柱狀上皮生長(zhǎng)較慢，上皮平坦，外表光滑即為單純性糜爛；
6柱狀上皮生長(zhǎng)速度快，形成腺體增生時(shí)為腺樣糜爛。如果腺體擴(kuò)張則可為濾泡型糜爛同時(shí)伴間質(zhì)增生，形成小的突起，被覆柱狀上皮不均則形成乳頭狀糜爛，上述類型常可混合發(fā)生，一般分輕度、中度、重度三個(gè)等級(jí)。宮頸黏膜皺襞豐富，感染不易徹底消除，又因?qū)m頸結(jié)締組織多，口服等全身用藥效果欠佳，諸多因素造成炎癥遷延。其次，重度宮頸糜爛也是導(dǎo)致宮頸癌的關(guān)鍵因素。目前，針對(duì)育齡期婦女的宮頸輕度糜爛，包括一些生理性因素導(dǎo)致的糜爛，缺乏有效的治療方法和手段，需等發(fā)展到了中至重度糜爛，經(jīng)確診系宮頸癌病變除外，則可做一些物理治療，現(xiàn)在用得比較多的是微波、激光、冷凍、射頻消融。療效是肯定的， 但術(shù)后陰道分泌物增多和出血，患者比較痛苦，難以接受，尤其是夏季，給生活帶來(lái)不便。因此對(duì)慢性宮頸炎的治療也受到婦科工作者的關(guān)注。超氧化物歧化酶是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消除生物體在新陳代謝中，特別是炎性反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，是使超氧陰離子自由基((V)轉(zhuǎn)變?yōu)镠2A和&的歧化反應(yīng)O02-+2H+— H》2+02)的生物催化劑，對(duì)細(xì)胞和生物起保護(hù)作用。本發(fā)明從炎癥產(chǎn)生的根本動(dòng)因出發(fā)，通過(guò)外源性地補(bǔ)充自由基高效清除劑，切斷炎癥產(chǎn)生的根本動(dòng)因，加速創(chuàng)口的愈合，促進(jìn)人體主動(dòng)修復(fù)，且愈合面無(wú)疤痕形成。避免了過(guò)量西藥造成的毒副作用和抗菌素濫用后的藥物失效，也避免了物理治療給患者身體帶來(lái)的痛苦和粘連產(chǎn)生的嚴(yán)重后遺癥。本發(fā)明在臨床觀察中療效顯著，能夠迅速減輕或消除婦女宮頸，修復(fù)糜爛部位，加速愈合。在臨床觀察中還發(fā)現(xiàn)，宮頸糜爛伴陰道炎或伴陰道炎性糜爛的患者，經(jīng)局部給藥使用后，陰道炎或伴陰道炎性糜爛均全部好轉(zhuǎn)，部分患者痊愈，且患者無(wú)損傷無(wú)痛苦，無(wú)明顯的不良反應(yīng)，安全性好，不影響生活工作，治療操作簡(jiǎn)單。
權(quán)利要求
1.超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的超氧化物歧化酶包括含銅與鋅超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、含錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和含鐵超氧化物歧化酶(i^e-SOD)。
3.如權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的超氧化物歧化酶包括重組的超氧化物歧化酶、修飾的超氧化物歧化酶以及呈現(xiàn)超氧化物歧化酶活性的衍生物。
4.如權(quán)利要求1所述的超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于超氧化物歧化酶由一種或多種載體或者賦形劑組成，活性單位為100 30000U/mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了超氧化物歧化酶在制備治療宮頸糜爛及陰道炎疾病藥物中的應(yīng)用，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明了超氧化物歧化酶能切斷炎癥產(chǎn)生的根本動(dòng)因，加速創(chuàng)口的愈合，促進(jìn)人體主動(dòng)修復(fù)，應(yīng)用在治療宮頸糜爛藥物中臨床癥狀消失率均在97％以上，效果非常顯著。
文檔編號(hào)A61P15/00GK102225196SQ20111016184
公開(kāi)日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月4日
發(fā)明者張若冰, 曾贛閩 申請(qǐng)人:江西美康高科有限公司