專利名稱：鄰吡啶酰肼衍生物及其制法和藥物組合物與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式I和II所示的I-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽，及其制備方法，含有ー個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療與蛋白激酶有關(guān)的疾病如免疫失調(diào)和腫瘤疾病方面的用途。
背景技術(shù)：
最近幾年，由于對酶和其它ー些與疾病相關(guān)的生物分子的認(rèn)識的提高，極大地促進(jìn)了治療疾病的新藥的發(fā)現(xiàn)或發(fā)展，蛋白激酶就是ー種廣泛研究的重要的ー類，它是ー個大家族，與細(xì)胞內(nèi)各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的控制有夫。由于它們的結(jié)構(gòu)和催化功能的保守性它們被認(rèn)為從ー個共同的祖先基因進(jìn)化而來。幾乎所有激酶都含有ー個相似的250-300個氨基酸催化域。這些蛋白激酶按照磷酸化底物的不同被分成多個家族，如蛋白酪氨酸激酶，蛋 白絲氨酸/蘇氨酸激酶，類脂等。一般，蛋白激酶通過影響一個磷酰基從ー個核苷三磷酸轉(zhuǎn)移到ー個與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)的蛋白受體來介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些磷?；录鳛榉肿娱_關(guān)調(diào)節(jié)靶蛋白的生物功能，最終被激發(fā)對各種細(xì)胞外和其它刺激作出反應(yīng)。激酶存在于多層信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑中，受體酪氨酸激酶位于腫瘤血管生成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的上游及腫瘤細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的上游。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶位于腫瘤及腫瘤血管生成細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑的下游。研究表明通過在上游阻滯VEGFR及TOGF受體，在下游阻滯Raf/MEK/ERK，能夠同時減少腫瘤的血管生成并抑制腫瘤細(xì)胞的復(fù)制，從而阻礙腫瘤的生長。Raf激酶是由原癌基因raf編碼的蛋白產(chǎn)物，由648個氨基酸組成，分子量為70000 74000D，其結(jié)構(gòu)中含有3個保守區(qū)，分別為CRl (61 194D)、CR2 (254 269D)、CR3 (335 627D)。CRl位于其分子氨基端，富含半胱氨酸，含有鋅指樣結(jié)構(gòu)，與蛋白激酶C的配體結(jié)合區(qū)結(jié)構(gòu)相似，是活化的Ras與Raf-I蛋白激酶結(jié)合的主要部位。CR2亦靠近氨基端，富含絲氨酸和蘇氨酸。CR3位于其分子的羧基端，是蛋白激酶的催化功能區(qū)。作為Ras/Raf/MEK/ERK通路中的一個關(guān)鍵激酶，Raf可通過依賴或不依賴Ras的方式發(fā)揮其信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)作用。作為Raf激酶的下游底物，激活的MEK磷酸化ERK，調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能。一旦該通路發(fā)生過度激活，則引起細(xì)胞増殖加速與細(xì)胞生存期延長，從而導(dǎo)致腫瘤的生成。研究表明，80%以上的癌基因和原癌基因存在于人的癌編碼蛋白酪氨酸激酶(PTK)中，人類各種癌癥的產(chǎn)生和發(fā)展是和來自于蛋白酪氨酸激酶的異常細(xì)胞信號傳導(dǎo)有關(guān)的，惡性細(xì)胞的ー個主要特點是酪氨酸激酶活性的増加。因此，抑制酪氨酸激酶的活化或阻斷其信號傳導(dǎo)路徑成為控制腫瘤的新途徑。內(nèi)皮生長因子受體(EGFR)是ー種蛋白酪氨酸激酶受體(RTK),位于第7號染色體pl3 q22區(qū)，全長200kb，由28個外顯子組成，編碼1186個氨基酸，其糖蛋白分子量約170kDa，廣泛分布于除成熟骨骼肌細(xì)胞、體壁內(nèi)胚層和造血組織以外的所有組織細(xì)胞。EGFR家族有 4 個結(jié)構(gòu)相似的受體分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbtM (HER4)，同屬于受體酪氨酸激酶(RTKS)。它們都含有I個胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，I個跨膜結(jié)構(gòu)域和I個具有酪氨酸激酶活性的胞漿結(jié)構(gòu)域。其胞內(nèi)區(qū)域與erbB癌基因產(chǎn)物高度同源。EGFR的活化可以通過配體誘導(dǎo)的受體ニ聚化作用實現(xiàn)。ErbB受體家族中，除了 HER2タト，其他成員都有其相應(yīng)配體，各種各樣的配體是由對應(yīng)的跨膜蛋白前體經(jīng)過蛋白水解而來的，都有I個EGF樣結(jié)構(gòu)域。與EGFR特異性結(jié)合的配體包括表皮生長因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子a (TGFa )、雙向調(diào)節(jié)蛋白(AR)、P -細(xì)胞素(BTC)、肝素結(jié)合EGF樣生長因子(HB-EGF)、表皮調(diào)節(jié)素(EPR)等。胞外配體EGF(內(nèi)皮生長因子)與ErbB2特異性結(jié)合后引起ErbB2構(gòu)型改變，導(dǎo)致受體ニ聚化從而活化它們的胞漿位點。ErbB2的胞內(nèi)區(qū)域酪氨酸磷酸化后進(jìn)而活化第二信使轉(zhuǎn)導(dǎo)，通過MAPK(絲裂原蛋白激酶)途徑誘導(dǎo)細(xì)胞外信號的活化(調(diào)節(jié)激酶Erkl和Erl):通過I3DK (磷脂酰肌醇激酶)途徑活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子JAK ;進(jìn)一步啟動STATl、STATS3的轉(zhuǎn)錄活化子；另一方面，細(xì)胞內(nèi)信號通過6rb2(生長因子受體結(jié)合蛋白)活化下游的ERK(細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶)，進(jìn)而介導(dǎo)ATF，NF-kB，Ap-l，C-fos和C-Jun的轉(zhuǎn)錄活化。這些都是EGFR所介導(dǎo)的生長作用或致癌的基本下游途徑。異常的EGFR活化機(jī)制包括受體本身的擴(kuò)增、受體配體的過表達(dá)、活化突變以及負(fù)性調(diào)節(jié)途徑的缺乏，因此EGFR誘導(dǎo)癌癥至少通過3種機(jī)制EGFR配體的過表達(dá)，EGFR的擴(kuò)增或EGFR的突變活化。在這3種機(jī)制中，EGFR的突變活化是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞異常生物學(xué)行為的最主要因素。EGFR基因的某些突變會導(dǎo)致受體效果增強(qiáng)和持續(xù)時間的延長。Lynch等證明變異受體并不影響受體蛋白質(zhì)的穩(wěn) 定性，通過Tyrl068磷酸化測定EGFR活化發(fā)現(xiàn)，野生型受體的活化15min即下調(diào)，而變異受體表現(xiàn)出比正常EGFR高2倍的效應(yīng)，且超過3h的持續(xù)活化。EGFR突變并沒有影響腫瘤細(xì)胞與TKI (酪氨酸激酶抑制劑)結(jié)合的能力。TKI對那些因突變而導(dǎo)致EGFR活化的原因可以通過oncogeneaddiction模型來解釋。通過Ras.Raf-MEK. ERK1/ERK2、PI3K. Akt、STAT3/STAT5 通路，EGFR 突變高度激活下游信號，啟動 EGFR調(diào)節(jié)抗凋亡和生存信號，導(dǎo)致癌癥細(xì)胞變得依賴此信號以維持其生存--即具有癌基因(突變的EG依賴的特征；當(dāng)使用特異性TKI阻斷EGFR信號后，將消除其増殖性影響和輸出生存信號，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。因此認(rèn)為，癌癥細(xì)胞中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變異是出現(xiàn)藥物高敏感的基礎(chǔ)。相反，正常細(xì)胞或非EGFR依賴的腫瘤細(xì)胞(對Gefitinib、Erlotinib無反應(yīng))不受影響。因為生存還受其他基因驅(qū)使，或者在EGFR抑制后能被其他的RTK所彌補(bǔ)。在癌基因依賴模型中，細(xì)胞癌癥依賴的癌基因可以同時產(chǎn)生凋亡和生存2個信號的輸出。一般隋況下，癌基因被激活。生存信號占主導(dǎo)地位，而凋亡信號處于相對低水平，使癌癥細(xì)胞維持生長和増殖。當(dāng)癌基因急性失活后，在關(guān)鍵的窗ロ期，首先是生存迅速大幅度減弱。而凋亡信號緩慢下降。因此導(dǎo)致信號不平衡(凋亡信號占主導(dǎo))，啟動細(xì)胞發(fā)生不可逆的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)用酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼(gefitinib)/厄洛替尼(Erlotinib)治療NSCLC患者，大約10%患者表現(xiàn)出迅速而滿意的臨床效果，進(jìn)一歩研究發(fā)現(xiàn)這些患者絕大部分存在EGFR基因突變。在目前已知與EGFR-TKI (內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑)有關(guān)的基因突變局限于如下幾種G719X(18外顯子)，E746-A450缺失(19外顯子)，L858R(21外顯子)，L861Q(21 外顯子)，T790M(20 外顯子)和 D770-N771 (20 外顯子)。其中 E746-A450缺失和L858R的突變與TKI的療效高度相關(guān)。Mitsudomi T，Yatabe Y對568例非小細(xì)胞肺癌患者的分析結(jié)果在所有非小細(xì)胞肺癌患者中大約90%的EGFR基因突變集中于19或21外顯子中，其中19外顯子的缺失突變及21外顯子中的點突變的患者服用EGFR-TKI的有效率均達(dá)到70%以上。近來的研究提示，EGFR外顯子20的插人性突變(D770-N771)可以使受體對EGFR—TKI的敏感性降低100倍，臨床上也發(fā)現(xiàn)具有此突變的患者對EGFR—TKI治療反應(yīng)不明顯。對外顯子20的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行亞克隆分析發(fā)現(xiàn)，T790M突變是ー個堿基對發(fā)生從胞嘧啶核苷(C)到胸腺嘧啶核苷(T)的改變，在蛋白水平就是EGFR酪氨酸激酶功能域790位點的蘇氨酸被蛋氨酸取代CT790M)，這種突變可使EGFR重新處于被激活狀態(tài)，從而導(dǎo)致TKI的獲得性耐藥，耐藥的原因是突變導(dǎo)致EGFR結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使TKI與其結(jié)合出現(xiàn)位阻效應(yīng)。有研究提示KRAS突變可能是Gefitinib、Erlotinib原發(fā)耐藥的原因。Helenalinardou的Meta分析中總結(jié)了 1008例NSCLC患者的TKI治療效果，在發(fā)生K_ras突變的165名患者中，94%的患者對TKI治療無明顯反應(yīng)。一般來講，KRAS和EGFR突變NSCLC是相互排斥的.在不同的腫瘤亞型中存在明顯差異EGFR突變主要見于不吸煙者，而KRAS突變更常見于吸煙相關(guān)的癌癥。因為KRAS突變總是發(fā)生于具有野生型EGFR的NSCLC中，所以難以區(qū)分對EGFR-TKI不敏感到底是因為KRAS突變，還是因為無EGFR突變。血管內(nèi)皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)家族包含有3種亞型，即VEGFR-1 (同時也可以寫作Flt-1)、VEGFR-2 (KDR/Flk-1)和VEGFR-3(Flt — 4)，此外，還有神經(jīng)菌毛蛋白(neuropilin) I和2兩個協(xié)同受體。其中VEGFR-I主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞，可與VEGF-A、VEGF-B和PlGF結(jié)合，主要與造血干細(xì)胞的生長調(diào)節(jié)有夫。VEGFR-2主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴內(nèi)皮細(xì)胞中，可以與VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E結(jié)合。VEGF刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加血管通透性和新血管生成的作用主要通過結(jié)合和激活VEGFR-2來實現(xiàn).與VEGFR-2相比，VEGFR-I與VEGF的親和カ高10倍，但調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的活性低很多，可能是對VEGFR-2活性具有負(fù)向調(diào)節(jié)作用。VEGFR-3主要表達(dá)在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，能與VEGF-C和VEGF-D結(jié)合，調(diào)控淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的生長。研究表明當(dāng)腫瘤直徑大于2mm時，需要有新生血管來提供營養(yǎng)物質(zhì)和排泄代謝廢物。VEGF/VEGFR信號通路在腫瘤血管的生成中起關(guān)鍵性作用，可以通過阻斷或干擾VEGF/VEGFR信號通路抑制血管的新生，以達(dá)到控制腫瘤的生長的療效。與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物相比，以VEGF/VEGFR-2為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物有很大的優(yōu)勢.在正常生理條件下，血管新生只在創(chuàng)傷愈合和月經(jīng)周期等生理活動中起作用，所以使用抗血管生成藥物治療腫瘤，對人體毒性作用小，血管內(nèi)皮細(xì)胞與血液直接接觸，使藥物更加容易到達(dá)作用位點.通過目前對VEGF/VEGFR信號通路作用機(jī)制的了解，可以得到以下幾種可能的抑制劑研究方向
a.利用單克隆抗體抑制VEGF或VEGFR，使其不能特異性結(jié)合，阻斷信號傳導(dǎo)。當(dāng)然也可以利用基因技術(shù)抑制它們的表達(dá)，減弱其活性。b.設(shè)計特定的小分子抑制劑，結(jié)合到VEGFR胞外VEGF結(jié)合區(qū)域，競爭性拮抗VEGF，同理，也可以是結(jié)合到VEGF上VEGFR的特定結(jié)合域，競爭性拮抗VEGFR。c.抑制VEGFR的胞內(nèi)激酶域，主要是ATP的結(jié)合位點，競爭性地拮抗ATP，使其無法提供磷酸基。d.抑制胞內(nèi)的VEGFR下游信號的關(guān)鍵性蛋白.考慮到患者的依從性，能ロ服的小分子抑制劑可能具有良好的前景。血小板衍生生長因子(platelet, derived growth factor, F1DGF)是誘導(dǎo)和促進(jìn)血管形成作用最強(qiáng)、最專ー的血管生長因子之一。TOGF主要通過與TOGF受體(TOGFR)結(jié)合，進(jìn)而激活蛋白激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而發(fā)揮作用。TOGFR由a和P兩種亞基構(gòu)成，共有3種ニ聚體O3DGFR-a a、a 00 ￠)，其中0 ^ ニ聚體受體(I3DGFR-P)最為重要，其分子量約為 180 190ku,屬于酪氨酸激酶受體(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。F1DGFR 在腫瘤形成和發(fā)展過程中也起著重要的作用。PDGFR- ^的過度表達(dá)或過度活化均能刺激腫瘤內(nèi)血管生成，促進(jìn)腫瘤生長。PDGFR-^是腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的分子標(biāo)志之一，在腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)，并與某些腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。MWroGFR-P是ー個較為理想的腫瘤靶向治療靶標(biāo)。Raf激酶及其介導(dǎo)的Raf/MEK/ERK通路在腫瘤進(jìn)展及轉(zhuǎn)移過程中具有顯著作用，且與諸多生長因子包括表皮生長因子(EGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及血小板生長因子(PDGF)等密切相關(guān)。人們想了多種辦法來調(diào)節(jié)這一條通路，其中包括抑制Ras蛋白的法尼基化、抑制Rat" -I激酶(也稱C-RAF激酶)的表達(dá)、抑制Raf激酶和MEK激酶的活性。上述的方法不僅抑制了 ERK的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而且成功抑制了異種移植腫瘤的生長。此外，現(xiàn)有證據(jù)顯示，大部分腫瘤并非由単一信號傳導(dǎo)通路所支配，針對多靶點進(jìn)行抑制可能取得更大療效。許多疾病是和蛋白激酶介導(dǎo)事件引發(fā)的不正常的細(xì)胞反應(yīng)相關(guān)聯(lián)的。這些疾病包 括，但不限于，腫瘤，炎癥疾病，免疫疾病，骨疾病，代謝疾病，神經(jīng)疾病，心腦血管疾病，激素相關(guān)的疾病等。因此發(fā)現(xiàn)和尋找蛋白激酶抑制劑作為治療藥物是非常必要的。雖然許多發(fā)明對本領(lǐng)域作出了很大貢獻(xiàn)，但為改進(jìn)藥物治療效果，本領(lǐng)域仍在繼續(xù)研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉肼羰基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽。本發(fā)明的另一目的在于提供I- (4-氯-3-三氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2_異丙叉肼擬基)卩比唳~4~氧基)苯基)服和I- (4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2-異丙基餅擬基)批唳_4_氧基)苯基)服的制備方法。本發(fā)明的再一目的在于提供ー種含有1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)卩比唳-4-氧基)苯基)服和1-(4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2-異丙基肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲這種化合物的藥物組合物。本發(fā)明的又一目的在于提供該類化合物在抗癌，及與蛋白激酶相關(guān)疾病的藥物中的用途。為了完成本發(fā)明之目的，可采用如下技術(shù)方案本發(fā)明是涉及具有下列結(jié)構(gòu)的I-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2_異丙叉餅擬基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)批唳~4~氧基)苯基)服
CF3O 'Y"CF3O
III或其可藥用鹽。本發(fā)明還公開了制備本發(fā)明化合物的方法，包括如下步驟
I)路線 I
權(quán)利要求
1.式I和II所不的1-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)P比ロ定-4-氧基)苯基)服和1-(4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)P比啶-4-氧基)苯基)脲及其可藥用鹽
2.依據(jù)權(quán)利要求I的化合物其可藥用鹽，其特征在于，所述的可藥用鹽選自鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，甲磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，こ酸鹽，三氟こ酸鹽，水楊酸鹽，氨基酸鹽，枸杞酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽。
3.制備權(quán)利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
4.制備權(quán)利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
5.制備權(quán)利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
6.ー種藥物的組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽和制劑學(xué)可接受的載體。
7.權(quán)利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預(yù)防和治療與蛋白激酶有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預(yù)防和治療與酪氨酸激酶有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預(yù)防和治療與Raf 激酶有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求10的應(yīng)用，其特征在于，所述的與Raf 激酶有關(guān)的疾病是腫瘤，免疫失調(diào)、神經(jīng)疾病。
11.根據(jù)權(quán)利要求11的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤疾病是肝癌，腎癌，肺癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌及乳腺癌，卵巣癌，扁平細(xì)胞癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，頭頸部癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I和II所示的1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲和1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽，及其制備方法，含有一個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療與蛋白激酶有關(guān)的疾病如免疫失調(diào)和腫瘤疾病方面的用途。
文檔編號A61P35/00GK102786469SQ20111012911
公開日2012年11月21日 申請日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者馮志強(qiáng), 唐克, 李燕, 田康, 陳曉光 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所