專利名稱：從壁虎中提取的抗腫瘤化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及從一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物及其制 備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，在針對(duì)眾多腫瘤患者尚缺乏有效治療手段的前提下，尋找高效低毒的藥物 對(duì)腫瘤癌的治療，具有重要的理論意義及應(yīng)用價(jià)值。壁虎是傳統(tǒng)的中藥材，中醫(yī)中有長期使用其治療癌腫的歷史。壁虎又名守宮、天 龍、蝎虎等，屬于爬行動(dòng)物門蜥蜴目壁虎科壁虎屬。性味成、寒、有小毒；主治祛風(fēng)、定驚、 散結(jié)、解毒。治中風(fēng)癱瘓，歷節(jié)風(fēng)痛，風(fēng)痰驚癇，瘰癘，惡瘡，破傷風(fēng)，癰瘡、胃嗝氣等癥。近十 幾年來大量的臨床報(bào)道證明，壁虎治療惡性腫瘤效果顯著。天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科的吳雄志從壁虎中分離獲得抗腫瘤活 性成分——守宮硫酸多糖，并發(fā)現(xiàn)其具有顯著抑制肝癌細(xì)胞生長的特性。而此次研究是以 肝癌細(xì)胞株作為體外預(yù)試驗(yàn)的，試驗(yàn)表明可以誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞分化成熟、抑制肝癌細(xì)胞增 殖，從而起到治療肝癌的效果。目前關(guān)于中藥壁虎的相關(guān)研究均未能得到準(zhǔn)確化學(xué)結(jié)構(gòu)的 單體化合物，且已經(jīng)得到的活性成分抗腫瘤作用不明顯。中國專利號(hào)“ZL200310105343.6”，專利名稱“一種抗癌新藥的制備方法”，方法 中采用從壁虎原料中提取抗癌成份，其抗癌活性成分為3. Omg/mL，抑瘤率為65. 9%，活性 成分抗腫瘤效果不夠顯著。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，另一目的是提供上述化合物 的制備方法，再一目的是提供上述化合物的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的的技術(shù)方案為本發(fā)明提供了從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于化合物具有(I)式所 示的基本骨架結(jié)構(gòu)
(I)式(I)中，C3為 R、C7*S 構(gòu)型，或 C3 為 S、C7*R 構(gòu)型。本發(fā)明還提供了從壁虎中提取的抗腫瘤化合物(I)式的衍生物，其特征在于該 抗腫瘤化合物(I)式的衍生物其分子量為253-341，該衍生物為通式(II)所示的化合物 式(ii)中，(2為1 或3構(gòu)型、(3為1 、(7為5、(8為1 、(9為3構(gòu)型，或(2為1 或3 構(gòu)型、c3為s、c7為r、c8為s、c9為r構(gòu)型，取代基ri可以是-c00ch3或_c00c2h5，r2、r3、r4、 r5、r6相同或不相同，可以分別是h、oh、ch3、c2h5、0ch3、0c2h5。有關(guān)通式⑴式的衍生物，即通式(ii)所示的各化合物如下表所列表1.式(ii)的各種化合物 通過上表可以看出，該抗腫瘤化合物，s卩(i)式的衍生物為咪唑衍生物。其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式I分子的碎片為 H H in0va-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式II分子的碎片為 in0va-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式III分子的碎片為 in0va-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式IV分子的碎片為 Hn Q
H3CH2C
IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果
其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式V分子的碎片為
S=7.65，單峰S=4.27,四重峰>H^-S=4.16,四重峰 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式VI分子的碎片為 H3C H3C 7^-0 H
3質(zhì)量為296
質(zhì)量為165 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式Y(jié)D分子的碎片為 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式VIII分子的碎片為 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果
其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式IX分子的碎片為 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式X分子的碎片為 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式XI分子的碎片為 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 其中經(jīng)安捷倫Q-T0F6510液質(zhì)聯(lián)用儀質(zhì)譜檢測(cè)，式XII分子的碎片為 h3co
質(zhì)量為284， IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果
IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果
質(zhì)量為180
質(zhì)量為164 IN0VA-600核磁共振儀的氫譜檢測(cè)結(jié)果 本發(fā)明提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，通式(I )之衍生物 即通式(II )所示的化合物的制備方法，包括以下步驟(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放24-72小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物， 用蒸餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋蟮谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入乙醇溶液，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁 虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐中的浸泡液，轉(zhuǎn)速控制在10000-20000r/min，時(shí)間控制 在2-5分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序?qū)⒅频玫姆鬯橐褐校尤胍掖既芤?，進(jìn)行浸泡和分離，制得提 取液；(4)萃取工序a、將制得的提取液，先加入水，混合均勻，再加入非極性有機(jī)溶劑，振搖、靜置分 層，取水相；b、將步驟a取得的水相，加入極性有機(jī)溶劑，振搖、靜置分層，取水相；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾至近干，然后進(jìn)行凍干，制得粗提取物， 該粗提取物包含通式(II )所示的化合物。上述制備方法中，進(jìn)一步的改進(jìn)，通式(I )之衍生物，即通式(II )所示化合物， 包括以下初純化和純化步驟(6. 1)制層析樣品初純化工序?qū)⒅频玫拇痔崛∥?，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，進(jìn)行凝膠過濾 層析或吸附層析，層析后，將收集到的樣品，進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后制 得初純化層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用 0.45um微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，收集6. 8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸 餾方式濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后即得。上述制備方法中，另一種改進(jìn)，通式(II )所示的化合物，包括以下初純化和純化 步驟(6. 2)高效液相色譜初純化工序a、將制得的粗提取物，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜過濾后進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析；色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng)相純水和乙腈，固定相選用C18填料，檢測(cè)波長 210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 5min、乙腈的比例為0 0%，5 lOmin、乙腈的比例為 0% 5%，10 15min、5% 10%，15 20min、10% 20%，20 21min、20 % 30 %，21 27min、30 % 30 %，27 28min、30 % 0. 00 %，28 38min、 0. 00%，層析柱10_X250_的C18反相柱，流速4. OOmL/min，加樣量為100 u L ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6 lOmin時(shí)的洗脫液，濃縮后進(jìn)行凍干，凍 干后制得第一步高效液相色譜初純化層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用 0.45um微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，收集6. 8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸 餾方式濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后即得。進(jìn)一步的方案，所述的步驟(3)中，浸泡和分離的次數(shù)為四次，每次具體操作如 下室溫下，加入乙醇溶液，進(jìn)行浸泡和抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng) 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得提取液，將四次提取液，混合均勻。但是上述浸泡和分離的次數(shù)并不限于四次，實(shí)質(zhì)本進(jìn)一步的方案四次的目的是盡 可能將有效成分進(jìn)行提取，實(shí)踐中可以采用1次或多次。所述步驟(2)中，所述的乙醇溶液，體積百分比濃度為60% -95%，其加入量為無 蹼壁虎原料質(zhì)量與乙醇溶液的體積之比為1 1 3。步驟(2)中，加入的浸泡罐中的浸泡液，其加入量為無蹼壁虎原料質(zhì)量與浸泡液 的體積之比1 0. 5 1. 5。步驟(3)中，所述浸泡加入的乙醇溶液，體積百分比濃度為60% -95%，其加入量 分別為無蹼壁虎原料質(zhì)量與乙醇溶液的體積之比為1 0.5 3。步驟(4)中，所述的加入水，加入量為提取液體積的1-4倍；步驟(4)中，加入的非極性有機(jī)溶劑，每次用量分別為提取液加入水后總體積的 1-2 倍。步驟(4)中，加入的極性有機(jī)溶劑，每次用量分別為水相體積的1-2倍。所述的凝膠過濾層析，凝膠的種類為葡聚糖凝膠和羥丙基葡聚糖凝膠；所述的吸附層析，吸附劑的種類為氧化鋁和硅膠。所述步驟(7)高效液相色譜工序中將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析的具體條件 如下所述的高效液相色譜工序中高效液相層析，色譜條件為柱溫32-36°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中 的一種，檢測(cè)波長:200-280nm,紫外光譜波長范圍200 380nm,梯度洗脫0 2. Omin、 乙腈的比例為 0 8%，0. 5 12min、為 2% 10%，8 15min、8% 30%，15 25min、 20% 35%，18 25min、30% 0. 00%，20 35min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為 10mm，長度為 150-300mm 的 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的一種反 相柱，流速4. 0-5. OmL/min,加樣量為 50-200 u L。所述的化合物作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的化合物可將其制備成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，也可 以制成注射用的溶液。本發(fā)明制備的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的臨床應(yīng)用可以用生理鹽水溶解， 再以注射方式使用或直接制成口服制劑。具體使用劑量根據(jù)疾病類型和病情等因素，酌量 使用，其日劑量為2-10mg，一天分1-3次服用。①主要用于治療胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、白血病、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種 常見惡性腫瘤的化學(xué)治療，抗腫瘤作用明顯，常規(guī)用量無骨髓抑制和重要臟器損害；此外， 由于該化合物能夠增加T細(xì)胞免疫，有較好的抗艾滋病作用。②具有良好的水溶性，常溫下，其溶解度可達(dá)到200毫克/毫升，而又可溶于95% 乙醇的白色晶體。③其抗腫瘤作用具有高效、廣譜、低毒的特點(diǎn)。④與其它抗腫瘤藥相比，抗腫瘤作用較強(qiáng)。


附圖1、陰性對(duì)照腫瘤細(xì)胞凋亡率圖；附圖2、壁虎活性成分腫瘤細(xì)胞凋亡率圖；附圖3 陽性對(duì)照(5-FU)腫瘤細(xì)胞凋亡率圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。實(shí)施例1 一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，通式(I )之衍生物既 通式(II )所示的化合物，包括以下步驟(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放24-72小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食 物和廢棄物，用蒸餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋蟮谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入乙醇溶液，所述的乙醇溶液， 體積百分比濃度為95 %，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎和浸泡液轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中， 制得粉碎液；上述步驟中乙醇溶液體積百分比濃度為95%，經(jīng)試驗(yàn)證明在其它工藝條件和步驟 不變的前提下，乙醇溶液體積百分比濃度在60% -95%區(qū)間均可以達(dá)到制備的目的。(3)浸泡分離工序?qū)⒅频玫姆鬯橐褐校尤胍掖既芤?，進(jìn)行浸泡和分離，制得提 取液；本工序中具體的操作在本實(shí)施例采用浸泡和分離的次數(shù)為四次，每次具體操作如 下室溫下，加入乙醇溶液，其體積百分比濃度為80%，進(jìn)行浸泡和抽濾，分離出濾液和濾 渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 095 -0. 099Mpa之間，溫度控制在30 50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得提取液，將四次提取液，混合均勻。但是上述浸泡和分離的次數(shù)并不限于四次，實(shí)質(zhì)上四次的目的是盡可能將有效成分進(jìn)行提取，實(shí)踐中可以采用1次或多次也可。(4)萃取工序a、將制得的提取液，先加入水，混合均勻，再加入非極性有機(jī)溶劑正己燒，加入的 非極性有機(jī)溶劑，每次用量分別為提取液加入水后總體積的2倍，振搖、靜置分層，取水相， 再第二次加入非極性有機(jī)溶劑，振搖、靜置分層取水相，再第三次加入非極性有機(jī)溶劑，振 搖、靜置分層取水相；本實(shí)施例采用三次取水相，其目的為萃取充分，1-2次或其它次并不影響制備的最 終目的，而只是提取是否充分或提取過程的是否簡單。本實(shí)施例中的非極性有機(jī)溶劑正己烷也可以采用環(huán)己烷、庚烷均能達(dá)到制備的目 的。d、將步驟a取得的水相，加入極性有機(jī)溶劑二氯甲烷，加入的極性有機(jī)溶劑，每次 用量分別為水相體積的1-2倍，振搖、靜置分層取水相，第二次加入二氯甲烷，靜置分層，取 水相，再第三次加入二氯甲烷，靜置分層，取水相，制得萃取液；本實(shí)施例采用三次取水相，其目的為萃取充分，1-2次或其它次并不影響制備的最 終目的，而只是提取是否充分或提取過程的是否簡單。本實(shí)施例中的非極性有機(jī)溶劑二氯甲烷也可以采用三氯甲烷、乙醚均能達(dá)到制備 的目的。(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫海M(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 095 -0. 099Mpa之間，溫度控制 在40 55 °C，減壓蒸餾至近干，再將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_45°C _55°C進(jìn) 行凍干，然后進(jìn)行凍干，制得粗提取物，粗提取物中包含通式(II )所示的化合物，如下 該化合物分子量為253-341 ；式(II)中，(2為1 或3構(gòu)型、(3為1 、(7為5、(8為1 、(9為3構(gòu)型，或(2為1 或3 構(gòu)型、c3為S、C7為R、C8為S、C9為R構(gòu)型，取代基Ri可以是H、_C00CH3或_C00C2H5，R2、R3、 R4、R5、R6相同或不相同，可以分別是H、OH、CH3、C2H5、0CH3或0C2H5。該化合物具有(I )式所示的基本骨架結(jié)構(gòu)
(I)式(I )中，C3 為 R、C7*S 構(gòu)型，或 C3 為 S、C7*R 構(gòu)型。
本實(shí)施例采用上述工藝進(jìn)行，基于本發(fā)明技術(shù)方案公知的變化或簡單的改進(jìn)應(yīng)在 本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例2、通式(II )所示的化合物，包括以下初純化和純化步驟(6. 1)制層析樣品初純化工序?qū)?shí)施例1制得的粗提取物，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，制得濃度為 1. Og/mL的水溶液，取上清液，進(jìn)行層析分離后，將收集到的樣品，進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓 力控制在-0. 096Mpa以下，溫度控制在40°C 50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制 在-0. 099 -0. lOOMpa，溫度控制在_45°C _55°C，凍干后制得初純化層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，制得濃度為 1. Og/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 ym微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，層析的具體條件如下所述的高效液相色譜工序中高效液相層析，色譜條件為柱溫32-36°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的 一種，檢測(cè)波長200-280nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 2. Omin、乙腈 的比例為 0 8%，0. 5 12min、為 2% 10%，8 15min、8% 30%，15 25min、20% 35%，18 25min、30% 0. 00%，20 35min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為 10mm，長度為 150 300mm 的 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的一種反相柱，流 速4. 0-5. OmL/min,加樣量為 50-200 u L。收集6. 8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸餾方式濃縮，壓力控制 在-0. 096Mpa以下，溫度控制在約40°C 50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制 在-0. 099 -0. lOOMpa，溫度控制在_45°C _55°C，凍干后即得。該衍生物為通式(II )所示的化合物 式(II)中，(2為1 或3構(gòu)型、(3為1 、(7為5、(8為1 、(9為3構(gòu)型，或(2為1 或3 構(gòu)型、c3為S、C7為R、C8為S、C9為R構(gòu)型，取代基Ri可以是-C00CH3或_C00C2H5，R2、R3、R4、 R5、R6相同或不相同，可以分別是H、OH、CH3、C2H5、0CH3、0C2H5。實(shí)施例3、本實(shí)施例提供有別于實(shí)施例2的另一種制備方法，通式(II )所示的化 合物，包括以下初純化和純化步驟(6. 2)高效液相色譜初純化工序a、將實(shí)施例1制得的粗提取物，充分溶解后，靜置分層，制得濃度為1. Og/mL的水 溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜過濾后進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用C18填料，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯
R5 R6度洗脫0 5min、乙腈的比例為0 0%，5 lOmin、乙腈的比例為0% 5%，10 15min、 5% 10%，15 20min、10% 20%，20 21min、20% 30%，21 27min、30% 30%， 27 28min、30% 0. 00%，28 38min、0. 00%，層析柱10mmX 250mm 的 C18 反相柱，流 速4. OOmL/min,加樣量為 100 u L ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6 lOmin時(shí)的洗脫液，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在_0. lOOMpa，溫度控制 在-50°C，凍干后制得第一步高效液相色譜初純化層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，制得濃度為 1. 0g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 ym微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，所述步驟(7)高效液相色譜工序中將濾液進(jìn) 行高效液相層析法層析的具體條件如下所述的高效液相色譜工序中高效液相層析，色譜條件為柱溫32-36°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的 一種，檢測(cè)波長200-280nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 2. Omin、乙腈 的比例為 0 8%，0. 5 12min、為 2% 10%，8 15min、8% 30%，15 25min、20% 35%，18 25min、30% 0. 00%，20 35min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為 10mm，長度為 150 300mm 的 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的一種反相柱，流 速4. 0-5. OmL/min,加樣量為 50-200 u L。收集6. 8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸餾方式濃縮，壓力控制 在-0. 096Mpa以下，溫度控制在約40°C 50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制 在-0. 099 -0. lOOMpa，溫度控制在-45°C _55°C，凍干后即得，該衍生物為通式(II )所 示的化合物 式(II)中，(2為1 或3構(gòu)型、(3為1 、(7為5、(8為1 、(9為3構(gòu)型，或(2為1 或3 構(gòu)型、c3為S、C7為R、C8為S、C9為R構(gòu)型，取代基Ri可以是-C00CH3或_C00C2H5，R2、R3、R4、 R5、R6相同或不相同，可以分別是H、OH、CH3、C2H5、0CH3、0C2H5。實(shí)施例4、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法，該衍生物 為抗腫瘤化合物衍生物II，分子量為267，分子式為CnH13N303S。包括以下步驟(1)凈化工序?qū)⑶锛静东@的活無蹼壁虎存放24-72小時(shí)，使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢 棄物，蒸餾水清洗，晾干，稱重；(2)粉碎工序
將凈化后1kg的壁虎，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為90%的乙醇溶液1. 5 升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐中的浸泡液1升， 轉(zhuǎn)速控制在lOOOOr/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液1. 5升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡24小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在45°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡24小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa,溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二 次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa之間，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇， 制得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 15升，水0. 15升，混合均勻，再加入正己烷0. 3升，振搖3分鐘，靜 置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 3升振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入 正己烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 3升，振搖3分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 3 升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 095Mpa，溫度控制在50°C，濃縮 至近干，再將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在-50°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)葡聚糖G-25凝膠層析a、將制得的粗提取物，加入純凈水，攪拌8分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得濃度 為1. Og/mL的水溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的葡聚糖G-25凝膠層析柱，層析柱規(guī)格 為26 X 600mm，葡聚糖G-25凝膠的用量為90g，加樣濃度為1. 0g/mL的水溶液12mL ；b、用蒸餾水進(jìn)行洗脫，洗脫液的洗脫速度為2 3滴/秒，棄去開始收集的70mL洗 脫液，此后每收集30mL作為一個(gè)樣品，依次按收集先后順序進(jìn)行編號(hào)，共收集20個(gè)樣品；c、將收集到的12 14#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度控制在45°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_50°C，凍干后 制得層析后的樣品；(7)高效液相色譜工序a、將凍干后制得層析后的樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充分溶解后，靜置分 層，制成濃度為0. 8g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜過 濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng) 相純水和乙腈，固定相選用C18，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度 洗脫0 0. 5min、乙腈的比例為0 5%，0. 5 lOmin、乙腈的比例為5% 10%，10 13min、10 % 30 %，13 19min、30 % 30 %，19 20min、30 % 0. 00 %，20 28min、 0. 00%，層析柱內(nèi)徑為lOmmX 250mm的C18反相柱，流速4. 76mL/min，加樣量為200 yl ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于8. 8 9. 9min時(shí)的洗脫液，濃縮干燥壓力控 制在-0. 092Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在_0. 099Mpa，溫度控 制在-45°C，凍干后即得。本實(shí)施例得到的抗腫瘤化合物II，分子量為267，分子式為CnH13N303S。實(shí)施例5、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⑶锛静东@的活無蹼壁虎存放36小時(shí)，使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄 物，蒸餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋?kg重量的壁虎，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為95%的乙醇溶 液1升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐中的浸泡液 0. 5升，轉(zhuǎn)速控制在20000r/min，時(shí)間控制在5分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為95%乙醇溶液1. 0升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 097Mpa，溫度控制在35°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為95%乙醇溶液2. 0升，室溫 下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡26小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa,溫度控制在30°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二 次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為95%乙醇溶液2. 0升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在30°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 0升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa，溫度控制在30°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 05升，先加入水0. 2升，混合均勻，再加入正己烷0. 5升，振搖2分 鐘，靜置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 5升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三 次加入正己烷0.5升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 5升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 5升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 5 升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫海M(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在55°C，濃縮 至近干，將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_55°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)制層析樣品工序a、將制得的粗提取物，加入純凈水，攪拌2分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得濃度 為1. 5g/mL的水溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的葡聚糖LH-20凝膠層析柱，層析柱規(guī) 格為26 X 600mm，葡聚糖LH-20凝膠的用量為100g，加樣濃度為1. 5g/mL的水溶液12mL ；b、用蒸餾水進(jìn)行洗脫，洗脫速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，棄去 開始收集的70mL洗脫液，再收集30mL洗脫液作為樣品1#，收集樣品1#后，再收集30mL洗 脫液作為樣品2#，收集樣品2#后，再用體積百分比濃度為50%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫 速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，每收集30mL作為一個(gè)樣品，依次按收集的 先后順序?qū)⑹占臉悠愤M(jìn)行編號(hào)，共收集20個(gè)樣品，c、將收集到的11 13#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在_0.096Mpa以 下，溫度控制在40°C -50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099—0. lOOMpa，溫度 控制在_45°C -55°C，凍干后制得層析樣品。(7)高效液相色譜工序a、將凍干后制得層析樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充分溶解后，靜置分層，制 成濃度約為0. 5g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 ym微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C8柱層析，色譜條件為柱溫32°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用C8，檢測(cè)波長250nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫 0 2min、乙腈的比例為0 2%，2 12min、乙腈的比例為2% 8%，12 15min、8% 15%, 13 19min、15% 30%，19 20min、30% 0. 00%, 20 30min、0. 00%，層析柱 內(nèi)徑為lOmmX300mm的C8反相柱，流速4. OmL/min，加樣量為150u 1 ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6. 8 7. 4min時(shí)的洗脫液，濃縮干燥，即得。本實(shí)施例得到的衍生物I，分子量為253分子式為C1(1HnN303S。實(shí)施例6、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放24小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物，用蒸 餾水清洗，晾干；
(2)粉碎工序?qū)艋笠还镏亓康谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為60%的乙醇 溶液1升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，添加入浸泡罐內(nèi)浸泡液 0. 5升，轉(zhuǎn)速控制在15000r/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入剩余的浸泡液和補(bǔ)充加入體積百分比濃度為60%乙醇 溶液1升，室溫下，進(jìn)行第一次浸泡，浸泡20小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離 出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力控制在-0. 095Mpa，溫度控制在55°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃 縮至除去乙醇，制得一次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第二次浸泡，浸泡21小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀，壓力在-0. 095Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二次 提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第三次浸泡，浸泡22小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 097Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得三 次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第四次浸泡，浸泡23小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa之間，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制 得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 1升，先加入水0.2升，混合均勻，再加入正己烷0.6升，振搖1分鐘， 靜置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 6升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加 入正己烷0. 6升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 6升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 6升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 6 升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度控制在40°C，濃縮 至近干，將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在-45°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)制層析樣品工序a、將制得的粗提取物，加入95 %乙醇，攪拌15分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得 濃度為0. 5g/mL的乙醇溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的A1203層析柱，層析柱規(guī)格為 26X600mm, 100 200目規(guī)格的A1203固體300g，加樣濃度為0. 5g/mL的水溶液16mL ；b、A1203層析柱的裝填A(yù)1203用無水乙醇浸泡，充分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌中逐量將 ai203與乙醇的混懸液加入層析管中，直至將層析管裝滿；
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c、開始先用95%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫過程中樣品的黃色逐漸下移，當(dāng)黃色移至層 析管底部時(shí)，此時(shí)大約已接收到200mL的95%乙醇洗脫液，棄去該部分洗脫液，開始接收作 為樣品的洗脫液，每接收200mL作為一個(gè)樣品，依次編號(hào)；1#樣品接收完畢后，改用90%的 乙醇進(jìn)行洗脫，2#樣品接收完畢后，改用85%的乙醇進(jìn)行洗脫，3#樣品接收完畢后，改用 80%的乙醇進(jìn)行洗脫，5#樣品接收完畢后，改用70%的乙醇進(jìn)行洗脫，7#樣品接收完畢后， 改用60%的乙醇進(jìn)行洗脫，9#樣品接收完畢后，改用50%的乙醇進(jìn)行洗脫，11#樣品接收完 畢后，改用蒸餾水進(jìn)行洗脫，13#樣品接收完畢后，繼續(xù)用1000mL蒸餾水進(jìn)行洗脫，此后接 受的1000mL洗脫液作為14#樣品，共收集14個(gè)樣品；d、收集到的10 12#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度 控制在-50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099，溫度控制在_55°C，凍干后制得 層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的A1203吸附層析后的10 12#樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充 分溶解后，靜置分層，制得濃度約為1. 5g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用 0.45um微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18-EPS柱層析，色譜條件為柱溫38°C， 流動(dòng)相純水和乙腈，固定相選用C18-EPS，檢測(cè)波長254nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫:0 2min、乙腈的比例為0 8%，2 lOmin、乙腈的比例為8% 10%, 10 13min、10 % 30 %，13 19min、30 % 30 %，19 20min、30 % 0. 00 %，20 28min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為10mmX 150mm的C18-EPS反相柱，流速4. 2mL/min，加樣量 為 100ii L ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于9. 1 9. 9min時(shí)的洗脫液，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在_0. lOOMpa，溫度控制 在-50°C，凍干后即得。本實(shí)施例得到的化合物IV，分子量309，分子式為C14H19N303S，實(shí)施例7、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放60小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物，用蒸 餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋?kg重量的壁虎，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為80%的乙醇溶 液1. 5升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐內(nèi)浸泡液1 升，轉(zhuǎn)速控制在15000r/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液1. 5升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡22小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 095Mpa，溫度控制在35°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡24小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 095Mpa，溫度控制在36°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二 次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 097Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 1升，先加入水0.3升，混合均勻，再加入正己烷0.4升，振搖2分鐘， 靜置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 4升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加 入正己烷0. 4升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 4升，振搖3分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 4升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 4 升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 098Mpa，溫度控制在45°C，濃縮 至近干，將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_55°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)制層析樣品工序a、將制得的粗提取物，加入95 %乙醇，攪拌14分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得 濃度為0. 5g/mL的乙醇溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的硅膠層析柱，層析柱規(guī)格為 26 X 600mm, 160 200目規(guī)格的硅膠300g，加樣濃度為濃度為0. 5g/mL的乙醇溶液10mL ；b、硅膠層析柱的裝填硅膠用95%乙醇浸泡，充分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌中逐量將 ai203與乙醇溶液的混懸液加入層析管中，直至將層析管裝滿；c、開始先用95%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫過程中樣品的黃色逐漸下移，當(dāng)黃色移至層 析管底部時(shí)，此時(shí)大約已接收到200mL的95%乙醇洗脫液，棄去該部分洗脫液，開始接收作 為樣品的洗脫液，每接收200mL作為一個(gè)樣品，依次編號(hào)；1#樣品接收完畢后，改用90%的 乙醇進(jìn)行洗脫，2#樣品接收完畢后，改用85%的乙醇進(jìn)行洗脫，3#樣品接收完畢后，改用 80%的乙醇進(jìn)行洗脫，5#樣品接收完畢后，改用70%的乙醇進(jìn)行洗脫，7#樣品接收完畢后， 改用60%的乙醇進(jìn)行洗脫，9#樣品接收完畢后，改用50%的乙醇進(jìn)行洗脫，11#樣品接收完 畢后，改用蒸餾水進(jìn)行洗脫，13#樣品接收完畢后，繼續(xù)用800mL蒸餾水進(jìn)行洗脫，此后接受 的800mL洗脫液作為14#樣品，共收集14個(gè)樣品；d、收集到的10 11#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度 控制在-50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099，溫度控制在_55°C，凍干后制得層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的硅膠吸附層析后的10 11#樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充分 溶解后，靜置分層，制得濃度約為1. 5g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用 0. 45um微孔濾膜過濾后進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C8-EPS柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng) 相純水和乙腈，固定相選用C8-EPS，檢測(cè)波長250nm，紫外光譜波長范圍200 380nm， 梯度洗脫0 2min、乙腈的比例為0 3%，2 10mi n、乙腈的比例為3% 7%，10 13min、7 % 20 %，13 19min、20 % 30 %，19 20min、30 % 0. 00 %，20 30min、 0. 00%，層析柱10mmX 250mm 的 C8-EPS 反相柱，流速4. OOmL/min，加樣量為 80 u 1 ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于7. 5 8-3min時(shí)的洗脫液，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在_0. lOOMpa，溫度控制 在_50°C，凍干后制得層析樣品。本實(shí)施例得到的化合物VL分子量為327，分子式為C13H17N305S，實(shí)施例8、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放72小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物，用蒸 餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋笠还镏亓康谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為80%的乙醇 溶液1.5升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐內(nèi)浸泡 液1升，轉(zhuǎn)速控制在15000r/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液1. 5升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡22小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 095Mpa，溫度控制在35°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫 下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡24小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 095Mpa,溫度控制在36°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二 次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 097Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為80%乙醇溶液3. 0升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 四次提取液；
e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序 a、取提取液0. 1升，先加入水0.3升，混合均勻，再加入正己烷0.4升，振搖2分鐘， 靜置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 4升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加 入正己烷0. 4升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 4升，振搖3分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 4升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 4 升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 098Mpa，溫度控制在45°C，濃縮 至近干，將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_55°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)高效液相色譜預(yù)純化工序a、將制得的粗提取物，加純凈水?dāng)嚢? 10分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得濃 度約為1. Og/mL的水溶液樣品，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾后 進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用C18填料，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯 度洗脫0 5min、乙腈的比例為0 0%，5 lOmin、乙腈的比例為0% 5%，10 15min、 5% 10%，15 20min、10% 20%，20 21min、20% 30%，21 27min、30% 30%， 27 28min、30% 0. 00%，28 38min、0. 00%，層析柱IOmmX 250mm 的 C18 反相柱，流 速4. OOmL/min，加樣量為 100 μ 1 ；C、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6 IOmin時(shí)的洗脫液為3#樣品，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. lOOMpa，溫度控制 在-50°C，凍干后制得第一步高效液相色譜預(yù)純化樣品。(7)高效液相色譜工序a、將得到的高效液相色譜預(yù)純化樣品加入純凈水，攪拌5分鐘，充分溶解后，靜置 分層，制得濃度約為1. 0g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 μ m微孔濾膜 過濾后進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18-EPS柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流 動(dòng)相純水和乙腈，固定相選用C18-EPS填料，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 0. 5min、乙腈的比例為0 5%，0· 5 lOmin、乙腈的比例為5%~ 8 %，10 13min、8 % 10 %，13 14min、10 % 30 %，14 20min、30 % 30 %，20 21min、30% 0. 00%，21 31min、0. 00%，層析柱IOmmX 250mm 的 C18-EPS 反相柱，流速 4. 00mL/min，加樣量為 100 μ 1 ；C、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于8. 6 9. 5min時(shí)的洗脫液，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. lOOMpa，溫度控制 在-50°C，凍干后制得。本實(shí)施例制得的化合物通，分子量為297，分子式為C12H15N3O4S15
實(shí)施例9、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⑶锛静东@的活無蹼壁虎存放72小時(shí)，使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄 物，蒸餾水清洗，晾干，稱重。(2)粉碎工序?qū)艋笠还镏亓康谋诨ⅲD(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為90%的乙醇 溶液1. 5升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐中的浸 泡液1升，轉(zhuǎn)速控制在lOOOOr/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液1. 5升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡24小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在45°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡24小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二 次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa之間，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇， 制得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 15升，水0. 15升，混合均勻，再加入正己烷0. 3升，振搖3分鐘，靜 置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 3升振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入 正己烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相；d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 3升，振搖3分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 3 升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫海M(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 095，溫度控制在50°C，濃縮至近 干，再將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在-50°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)葡聚糖LH-20凝膠層析a、將制得的粗提取物，加入純凈水，攪拌2分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得濃度為0. 8g/mL的水溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的葡聚糖LH-20凝膠層析柱，層析柱規(guī) 格為26 X 600mm，葡聚糖LH-20凝膠的用量為90g，加樣量為濃度為0. 8g/mL的水溶液15mL ； b、用蒸餾水進(jìn)行洗脫，洗脫速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，棄去 開始收集的70mL洗脫液，再收集20mL洗脫液作為樣品1#，收集樣品1#后，再收集2OmL洗 脫液作為樣品2#，收集樣品2#后，再用體積百分比濃度為50%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫 速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，每收集20mL作為一個(gè)樣品，依次按收集的 先后順序?qū)⑹占臉悠愤M(jìn)行編號(hào)，共收集30個(gè)樣品，C、將收集到的13 15#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在_0.096Mpa以 下，溫度控制在40°C -50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099—0. lOOMpa，溫度 控制在_45°C -55°C，凍干后制得層析樣品。(7)高效液相色譜工序a、將凍干后制得層析后的樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充分溶解后，靜置分 層，制成濃度約為0. 8g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 μ m微孔濾膜過 濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析，色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng) 相純水和乙腈，固定相選用C18，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度 洗脫0 0. 5min、乙腈的比例為0 5%，0. 5 lOmin、乙腈的比例為5% 10%，10 13min、10 % 30 %，13 19min、30 % 30 %，19 20min、30 % 0. 00 %，20 28min、 0. 00%，層析柱內(nèi)徑為IOmmX 250mm的C18反相柱，流速4. 76mL/min，加樣量為200 μ L ；C、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于11. 6 12. 6min時(shí)的洗脫液，濃縮干燥壓力 控制在-0. 092Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099Mpa，溫度 控制在_45°C，凍干后即得。本實(shí)施例制得的化合物X，分子量為323，分子式為C15H21N3O3S,實(shí)施例10、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⑶锛静东@的活無蹼壁虎存放72小時(shí)，使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄 物，蒸餾水清洗，晾干，稱重。(2)粉碎工序?qū)艋笠还镏亓康谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為90%的乙醇 溶液1. 5升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，再加入浸泡罐中的浸 泡液1升，轉(zhuǎn)速控制在lOOOOr/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液1. 5升，室溫下，進(jìn)行 第一次浸泡，浸泡24小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在45°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得一 次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第二次浸泡，浸泡24小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二次提取液；c、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第三次浸泡，浸泡25小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得 三次提取液；d、將步驟(c)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為90%乙醇溶液2. 5升，室溫 下，進(jìn)行第四次浸泡，浸泡26小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力在-0. 099Mpa之間，溫度控制在40°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇， 制得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 15升，水0. 15升，混合均勻，再加入正己烷0. 3升，振搖3分鐘，靜 置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 3升振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入 正己烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相；
d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 3升，振搖3分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 3升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 3 升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 095，溫度控制在50°C，濃縮至近 干，再將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在-50°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)葡聚糖LH-20凝膠層析a、將制得的粗提取物，加入純凈水，攪拌2分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得濃度 為0. 8g/mL的水溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的葡聚糖LH-20凝膠層析柱，層析柱規(guī) 格為26 X 600mm，葡聚糖LH-20凝膠的用量為90g，加樣量為濃度為0. 8g/mL的水溶液15mL ；b、用蒸餾水進(jìn)行洗脫，洗脫速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，棄去 開始收集的70mL洗脫液，再收集20mL洗脫液作為樣品1#，收集樣品1#后，再收集20mL洗 脫液作為樣品2#，收集樣品2#后，再用體積百分比濃度為50%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫 速度為3 4滴/秒，洗脫的同時(shí)并收集洗脫液，每收集20mL作為一個(gè)樣品，依次按收集的 先后順序?qū)⑹占臉悠愤M(jìn)行編號(hào)，共收集30個(gè)樣品，c、將收集到的13 15#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在_0.096Mpa以 下，溫度控制在40°C -50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099—0. lOOMpa，溫度 控制在_45°C -55°C，凍干后制得層析樣品。(7)高效液相色譜工序a、將凍干后制得層析后的樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充分溶解后，靜置分 層，制成濃度約為0. 8g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用0. 45 y m微孔濾膜過 濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18_NH2柱層析，色譜條件為柱溫35°C， 流動(dòng)相純水和乙腈，固定相選用C18-NH2，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 0. 5min、乙腈的比例為0 5%，0· 5 lOmin、乙腈的比例為5%~ 10%，10 13min、10% 30%，13 19min、30% 30%，19 20min、30% 0. 00%，20 28min、0. 00%,層析柱內(nèi)徑為10_X 250mm的C18-NH2反相柱，流速4. 76mL/min,加樣量為 200 μ L ；C、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6. 8 7. 5min時(shí)的洗脫液，濃縮干燥壓力控 制在-0. 092Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控 制在-45°C，凍干后即得。
本實(shí)施例制得的化合物XL分子量為313，分子式為C12H15N3O5S,實(shí)施例11、本實(shí)施例提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤衍生物的制備方法(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放48小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物，用蒸 餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋笠还镏亓康谋诨ⅲD(zhuǎn)入浸泡罐中，加入體積百分比濃度為60%的乙醇 溶液1升，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，添加入浸泡罐內(nèi)浸泡液 0. 5升，轉(zhuǎn)速控制在15000r/min，時(shí)間控制在2分鐘，制得粉碎液；(3)浸泡分離工序a、將制得的粉碎液中，加入剩余的浸泡液和補(bǔ)充加入體積百分比濃度為60%乙醇 溶液1升，室溫下，進(jìn)行第一次浸泡，浸泡20小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離 出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，壓力控制在-0. 095Mpa，溫度控制在55°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃 縮至除去乙醇，制得一次提取液；b、將步驟(a)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第二次浸泡，浸泡21小時(shí)，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀，壓力在-0. 095Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得二次 提取液；C、將步驟(b)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第三次浸泡，浸泡22小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 097Mpa，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得三 次提取液；d、將步驟(C)分離出的濾渣，加入體積百分比濃度為60%乙醇溶液2升，室溫下， 進(jìn)行第四次浸泡，浸泡23小時(shí)后，進(jìn)行抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，壓力在-0. 098Mpa之間，溫度控制在50°C，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制 得四次提取液；e、將制得的一次提取液、二次提取液、三次提取液和四次提取液，混合均勻，制得 提取液。(4)萃取工序a、取提取液0. 1升，先加入水0.2升，混合均勻，再加入正己烷0.6升，振搖1分鐘， 靜置分層，取水相，再第二次加入正己烷0. 6升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加 入正己烷0. 6升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相；
d、將步驟a取得的水相，再加入二氯甲烷0. 6升，振搖2分鐘，靜置分層，取水相， 再第二次加入二氯甲烷0. 6升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，再第三次加入二氯甲烷0. 6 升，振搖1分鐘，靜置分層，取水相，制得萃取液；(5)減壓蒸 餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫海M(jìn)行減壓蒸餾，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度控制在40°C，濃縮 至近干，將壓力控制在-0. 099Mpa，溫度控制在_45°C，進(jìn)行凍干，凍干后，制得粗提取物；(6)制層析樣品工序a、將制得的粗提取物，加入95 %乙醇，攪拌15分鐘，充分溶解后，靜置分層，制得 濃度為0. 5g/mL的乙醇溶液，取上清液，加樣于事先準(zhǔn)備好的Al2O3層析柱，層析柱規(guī)格為 26X600mm, 100 200目規(guī)格的Al2O3固體300g，加樣濃度為0. 5g/mL的水溶液IOmL ；b、Al2O3層析柱的裝填=Al2O3用無水乙醇浸泡，充分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌中逐量將 Al2O3與乙醇的混懸液加入層析管中，直至將層析管裝滿；C、開始先用95%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫過程中樣品的黃色逐漸下移，當(dāng)黃色移至層 析管底部時(shí)，此時(shí)大約已接收到200mL的95%乙醇洗脫液，棄去該部分洗脫液，開始接收作 為樣品的洗脫液，每接收200mL作為一個(gè)樣品，依次編號(hào)；1#樣品接收完畢后，改用90%的 乙醇進(jìn)行洗脫，2#樣品接收完畢后，改用85%的乙醇進(jìn)行洗脫，3#樣品接收完畢后，改用 80%的乙醇進(jìn)行洗脫，5#樣品接收完畢后，改用70%的乙醇進(jìn)行洗脫，7#樣品接收完畢后， 改用60%的乙醇進(jìn)行洗脫，9#樣品接收完畢后，改用50%的乙醇進(jìn)行洗脫，11#樣品接收完 畢后，改用蒸餾水進(jìn)行洗脫，13#樣品接收完畢后，繼續(xù)用IOOOmL蒸餾水進(jìn)行洗脫，此后接 受的IOOOmL洗脫液作為14#樣品，共收集14個(gè)樣品；d、收集到的10 12#樣品，分別進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，壓力控制在-0. 096Mpa，溫度 控制在_50°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. 099，溫度控制在_55°C，凍干后制得 層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的Al2O3吸附層析后的10 12#樣品，加入純凈水，攪拌10分鐘，充 分溶解后，靜置分層，制得濃度約為1. 5g/mL的水溶液，棄去不溶的固體物，取上清液，用 0. 45 μ m微孔濾膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18-AQ柱層析，色譜條件為柱溫38°C， 流動(dòng)相純水和乙腈，固定相選用C18-AQ，檢測(cè)波長254nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫:0 2min、乙腈的比例為0 8%，2 IOmiru乙腈的比例為8% 10%, 10 13min、10 % 30 %，13 19min、30 % 30 %，19 20min、30 % 0. OO %，20 28min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為IOmmX 150mm的C18-AQ反相柱，流速4. 2mL/min，加樣量為 ΙΟΟμ L ；C、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于10. 1 10. 9min時(shí)的洗脫液，壓力控制 在-0. 099Mpa，溫度控制在40°C，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干的壓力控制在-0. lOOMpa，溫度控制 在-50°C，凍干后即得。本實(shí)施例得到的化合物XIII，分子量325，分子式為C14H19N3O4S,實(shí)施例12、實(shí)施例1中化合物的臨床藥效觀察自1997年10月至2000年3月間，治療的晚期肺癌病例中，86例非小細(xì)胞性肺癌報(bào)告如下下文中壁虎活性成分是指實(shí)施例1中制備的化合物。男性71例，女15例；年齡在28-81歲之間；臨床分期:III a49例，III b29例，
病理類型鱗癌46例，腺癌40例；壁虎活性成分+西醫(yī)即經(jīng)典西醫(yī)治療效果不佳 而后改用壁虎活性成分治療的53例，單用壁虎活性成分33例。診斷所有的壁虎活性成分治療病例須有可靠的影像定性、定位診斷和病理診斷， 病理標(biāo)本的取得主要是支氣管鏡和肺穿刺，透視導(dǎo)引和CT導(dǎo)引。第一次診斷須有CT片并 參照1988美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)發(fā)表的肺癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。治療口服壁虎活性成分脂質(zhì)體顆粒劑10mg/次，1次/日。復(fù)查停藥后10天復(fù)查平片或CT ；肝功、腎功、血常規(guī)等。療效評(píng)價(jià)緩解率根據(jù)1978年全國抗腫瘤藥物療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，參考國外藥物治 療癌癥療效評(píng)定方法和標(biāo)準(zhǔn)審定療效。生活質(zhì)量用Karnofsky法進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果一、腫塊改變表10兩治療組腫塊大小改變(CR，PR, MR, P，S) 注(1)、括號(hào)內(nèi)為占總例數(shù)的百分?jǐn)?shù)。(2)、大小是根據(jù)服藥兩個(gè)療程后停藥10天的CT或X線片與原片對(duì)照所的。腫塊變化規(guī)律是經(jīng)部分病例的多次CT檢查發(fā)現(xiàn)腫塊首先不縮小，僅表現(xiàn)為CT值 下降，而后腫塊逐漸變小。而且壁虎活性成分II +西醫(yī)組較單用壁虎活性成分組更明顯。二、生活質(zhì)量Karnofsky 評(píng)分壁虎活性成分+西醫(yī)組用藥前為41. 7士3. 4分，服藥30天后為69. 6士5. 0分兩 者對(duì)照有顯著差異性(P < 0. 005)。壁虎活性成分組用藥前為59. 5士5. 3分，服藥30天后為73. 6士4. 2分兩者對(duì)照 有顯著差異性(P < 0. 005)。三、生存時(shí)間壁虎活性成分+西醫(yī)組生存時(shí)間為15. 6士2. 2個(gè)月；單用壁虎活性成分組為 13. 6 士 1. 8。結(jié)論晚期肺癌臨床常見，治療組存活時(shí)間高于非治療組，治療組的平均存活時(shí)間 為2. 5個(gè)月-8. 6個(gè)月不等。兩組(壁虎活性成分+西醫(yī)組和單用天壁虎活性成分)平均生存時(shí)間分別為15. 6和13. 6個(gè)月，均高于放化療組。經(jīng)典的西醫(yī)治療在延長病人生存時(shí) 間時(shí)多以降低病人生活質(zhì)量為代價(jià)，尤其是近期生存質(zhì)量。壁虎活性成分治療病人在腫瘤 得到控制時(shí)，病人的身體情況多同步好轉(zhuǎn)。病人生活質(zhì)量可作為腫瘤控制情況的參考指標(biāo)。 壁虎活性成分治療腫瘤瘤體大小的完全緩解率為7. 0%以上，有效率為96. 6%以上。以上 臨床觀察證明抗腫瘤化合物粗提物有明顯抗腫瘤作用。
實(shí)施例13、8種抗腫瘤化合物對(duì)三個(gè)不同腫瘤細(xì)胞的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)方法將腫瘤細(xì)胞用含10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期 的細(xì)胞，0. 25%胰蛋白酶消化后以3X IO3個(gè)/孔接種于96孔板，補(bǔ)充培養(yǎng)液至每孔200 μ L， 置于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組加入10 μ g單體化合物，用無血清培養(yǎng)基 稀釋，0. 22 μ m的無菌微孔濾膜過濾。設(shè)加入等量PBS為空白對(duì)照組。在擬定的測(cè)量時(shí)間即 培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后，首先倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)并拍照，然后每孔加入5mg/ mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔 內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入150μ L DMS0，震蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解后，以自動(dòng)酶標(biāo)儀 測(cè)量570mn處吸光度。腫瘤細(xì)胞生長抑制率計(jì)算公式如下腫瘤細(xì)胞存活率(％ )=加藥孔的實(shí)際OD值/陰性對(duì)照孔的OD值腫瘤細(xì)胞生長抑制率(％ ) = 100% -細(xì)胞存活率結(jié)果如下表各種化合物對(duì)7402肝癌細(xì)胞的抑制率 各種化合物對(duì)PG肺癌細(xì)胞的抑制率 各種化合物對(duì)HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制率 結(jié)論從表中可見，體外抑瘤實(shí)驗(yàn)證明8種不同化合物均對(duì)三種不同的腫瘤細(xì)胞 均有明顯的抑制作用。實(shí)施例14、大腸癌雞胚尿囊膜移植模型證明抗腫瘤化合物衍生物II抗血管生成作 用(1)觀察雞胚尿囊膜血管發(fā)育的動(dòng)態(tài)變化，明確建立大腸癌雞胚尿囊膜移植模型 的最適條件。選擇最高成瘤率時(shí)接種HT-29細(xì)胞的最低數(shù)量作為模型建立的理想接種細(xì)胞 數(shù)量；將相同理想數(shù)量的HT-29細(xì)胞接種于不同日齡雞胚尿囊膜的相對(duì)無血管區(qū)，確定最 佳接種胚齡；將理想數(shù)量的細(xì)胞接種到最適日齡雞胚尿囊膜的相對(duì)無血管區(qū)，了解大腸癌 雞胚尿囊膜移植模型的瘤體生長和血管生成變化規(guī)律。(2)抗腫瘤機(jī)制探討抗腫瘤化合物II設(shè)高、中、低3個(gè)濃度給藥組，PBS做空白對(duì)照組，恩度為陽性對(duì)照 組，VEGF為陰性對(duì)照組，共6個(gè)組。選擇已接種HT-29細(xì)胞3天后的成瘤雞胚，在成瘤處放 置預(yù)處理的明膠海綿，將實(shí)驗(yàn)組藥物和對(duì)照組PBS各取10 y L分別加于各組的明膠海綿上， 孵育5天，固定取膜，觀察不同實(shí)驗(yàn)組血管形成特征，計(jì)算所選區(qū)域血管面積比，并計(jì)算血 管生成抑制率。取瘤體組織固定，石蠟包埋、常規(guī)石蠟切片，HE染色法觀察瘤體的組織學(xué)特 征，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)組織增殖細(xì)胞核抗原PCNA的表達(dá)?？鼓[瘤化合物II可抑制大腸癌雞胚尿囊膜移植模型的血管生成，抗腫瘤化合物II 抗腫瘤的機(jī)制可能并不是通過直接抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。因此，抗腫瘤化合物II抑制腫瘤 的機(jī)制是通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，進(jìn)而抑制腫瘤組織血管形成，也進(jìn)一步抑制腫瘤 生長。表2 抗腫瘤化合物II干預(yù)大腸癌雞胚尿囊膜抑制模型血管生成的實(shí)驗(yàn)分組。 表3 不同濃度抗腫瘤化合物II在不同時(shí)間MTT法測(cè)算的細(xì)胞抑制率。 注對(duì)ΗΤ-29ΜΤΤ 試驗(yàn)結(jié)果 OD 值(570nm)。表4:不同濃度抗腫瘤化合物II對(duì)雞胚尿囊膜移植模型誘導(dǎo)的血管生成的影響
(？“)。 注經(jīng)方差分析檢驗(yàn)，*與PBS對(duì)照組相比較P < 0. 05。實(shí)施例15、流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗腫瘤化合物II、IV、VD誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用取對(duì)數(shù)生長期H印G-2細(xì)胞，用含10%的小牛血清的PRMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成 1 X IO5個(gè)· ΙΛ每培養(yǎng)瓶加入稀釋好的細(xì)胞4mL，陽性對(duì)照加入ImL 5-FU250mg/mL,實(shí)驗(yàn)組 各加入ImL II、IV、Vn號(hào)化合物，使其終濃度為0.2mg/mL，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照，用195yL細(xì)胞 懸液加入5 μ LAnnexin-V-FITC,混勻標(biāo)記，室溫溫浴20min，用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞1次，再 用190 μ LBindingBuffer緩沖液重懸，然后再加5 μ L碘化丙啶，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋 亡檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見下表。流式細(xì)胞儀為美國Becton Dickinson公司生產(chǎn)的FACSCalibur 型。Annexin-V-FITC和PI雙陰性為活細(xì)胞；Annexin-V-FITC陽性而PI陰性為早期凋亡細(xì) 胞；Annexin-V-FITC和PI雙陽性為晚期凋亡細(xì)胞；Annexin-V-FITC陰性而PI陽性為壞死 細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)中各活性化合物與對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果證明壁虎活性成分有很強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力；其抗腫 瘤機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。實(shí)施例16、抗腫瘤化合物I、II、VD化合物的體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)CT-26細(xì)胞，于37°C含5% CO2 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至小鼠結(jié)腸癌CT-26細(xì)胞株對(duì)數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞接種，以1. 5X IOVmL 的密度0. 2mL接種于BALB/c小鼠右側(cè)腋部皮下。荷瘤5天后，30只小鼠均見米粒大小腫瘤長出，30只荷瘤小鼠隨機(jī)分成5組，于荷瘤第5天分別在左側(cè)腋部皮下注射生理鹽水(空 白組)、內(nèi)皮抑素(陽性對(duì)照組MlOyg/天/只)，(I、Π、ΥΠ號(hào)化合物實(shí)驗(yàn)組)低劑量 (0. Iyg/天/只)，中劑量(0.2yg/天/只)及高劑量(0.5yg/天/只)各0. lmL。連續(xù) 用藥14天后，MR活體觀察腫瘤生長狀況，評(píng)價(jià)治療效果。16天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死小鼠，稱取 瘤重及測(cè)量腫瘤大小并進(jìn)行病理及免疫組化檢測(cè)。腫瘤抑制率各組小鼠治療16天后各實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積及瘤重的抑制率見下表。I、II、VD號(hào)化合物不同劑量藥物組與內(nèi)皮抑素組的抑瘤率 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，壁虎活性成分高中低劑量組的腫瘤抑制率和抗腫瘤血管生成能力 均高于內(nèi)皮抑素組(組間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
權(quán)利要求
從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物具有(I)式所示的基本骨架結(jié)構(gòu)式(I)中，C3為R、C7為S構(gòu)型，或C3為S、C7為R構(gòu)型。FSA00000136886000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物為通 式(II)所示的化合物 該化合物分子量為253-341 ；式(II)中，C2為R或S構(gòu)型、C3為R、C7為S、C8為R、C9為S構(gòu)型，或C2為R或S構(gòu)型、 C3 為 S、C7 為 R、C8 為 S、C9 為 R 構(gòu)型，取代基 Ri 可以是 H、_C00CH3 或 _C00C2H5，R2、R3、R4、R5、 R6相同或不相同，可以分別是H、OH、CH3、C2H5、0CH3或0C2H5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式I所示的化合物
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物為式II所示的化合物
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式IV所示的化合物 分子量為309
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式VII所示的化合物 分子量為327
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物為式VIII所示的化合物 分子量為297
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式X所示的化合物 分子量為323
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式XII所示的化合物
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物 為式XIII所示的化合物
11.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于制備通式(II)所示的化合物，包括以下步驟(1)凈化工序?qū)⒉东@的活無蹼壁虎存放24-72小時(shí)使其消化、排盡體內(nèi)已有的食物和廢棄物，用蒸 餾水清洗，晾干；(2)粉碎工序?qū)艋蟮谋诨?，轉(zhuǎn)入浸泡罐中，加入乙醇溶液，進(jìn)行浸泡，浸泡壁虎致死后，將壁虎和 浸泡液轉(zhuǎn)入高速搗碎機(jī)中，轉(zhuǎn)速控制在10000-20000r/min，時(shí)間控制在2_5分鐘，制得粉碎 液；(3)浸泡分離工序?qū)⒅频玫姆鬯橐褐校尤胍掖既芤?，進(jìn)行浸泡和分離，制得提取液；(4)萃取工序a、將制得的提取液，先加入水，混合均勻，再加入非極性有機(jī)溶劑，振搖、靜置分層，取 水相；b、將步驟a取得的水相，加入極性有機(jī)溶劑，振搖、靜置分層，取水相；(5)減壓蒸餾濃縮、凍干工序?qū)⒅频玫妮腿∫?，進(jìn)行減壓蒸餾，減壓蒸餾至近干，然后進(jìn)行凍干，制得粗提取物，即包 含通式(II)所示化合物的混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于制備通式(II)所示的化合物，包括以下初純化和純化步驟(6. 1)制層析樣品初純化工序?qū)⒅频玫拇痔崛∥?，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，進(jìn)行層析，層析后， 將收集到的樣品，進(jìn)行減壓蒸餾濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后制得初純化層析樣品；(7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用微孔濾 膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，收集6.8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸餾方 式濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后即得。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于制備通式(II)所示的化合物，包括以下初純化和純化步驟(6. 2)高效液相色譜初純化工序a、將制得的粗提取物，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用微孔濾膜過濾后進(jìn)樣；b、將濾液進(jìn)行高效液相色譜半制備C18柱層析；其色譜條件為柱溫35°C，流動(dòng)相 純水和乙腈，固定相選用C18填料，檢測(cè)波長210nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯 度洗脫0 5min、乙腈的比例為0 0%，5 lOmin、乙腈的比例為0% 5%，10 15min、5% 10%，15 20min、10% 20%，20 21min、20% 30%，21 27min、30% 30%， 27 28min、30% 0. 00%，28 38min、0. 00%，層析柱10mmX 250mm 的 C18 反相柱，流 速4. 00mL/min,加樣量為 100 u L ；c、按上述色譜條件進(jìn)行層析，收集于6 lOmin時(shí)的洗脫液，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后 制得第一步高效液相色譜初純化層析樣品； (7)高效液相色譜工序a、將制得的初純化層析樣品，加入純凈水，充分溶解后，靜置分層，取上清液，用微孔濾 膜過濾；b、將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析，收集6.8 13. Omin時(shí)的洗脫液，進(jìn)行減壓蒸餾方 式濃縮，濃縮后進(jìn)行凍干，凍干后即得。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于所述的步驟(3)中，浸泡和分離的次數(shù)為四次，每次具體操作如下室溫下，加入乙醇溶液，進(jìn)行浸泡和抽濾，分離出濾液和濾渣，將分離出的濾液，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀，進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮至除去乙醇，制得提取液，將四次提取液，混合均勻。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于所述步驟(2)中，所述的乙醇溶液，體積百分比濃度為60% -95%。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于步驟(2)中，加入的浸泡罐中的浸泡液。
17.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于步驟(3)中，所述浸泡加入的乙醇溶液，體積百分比濃度為60% -95%。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在于步驟(4)中，所述的加入水，加入量為提取液體積的1-4倍；步驟(4)中，加入的非極性有機(jī)溶劑，每次用量分別為提取液加入水后總體積的1-2倍。步驟(4)中，加入的極性有機(jī)溶劑，每次用量分別為水相體積的1-2倍。
19.根據(jù)權(quán)利要求12所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特征在 于所述的凝膠過濾層析，凝膠的種類為葡聚糖凝膠和羥丙基葡聚糖凝膠；所述的吸附層析，吸附劑的種類為氧化鋁和硅膠。
20.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法，其特 征在于所述步驟(7)高效液相色譜工序中將濾液進(jìn)行高效液相層析法層析的具體條件如 下所述的高效液相色譜工序中高效液相層析，色譜條件為柱溫32-36°C，流動(dòng)相純水 和乙腈，固定相選用 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的一 種，檢測(cè)波長200-280nm，紫外光譜波長范圍200 380nm，梯度洗脫0 2. Omin、乙腈的 比例為 0 8%，0. 5 12min、為 2% 10%，8 15min、8% 30%，15 25min、20% 35%，18 25min、30% 0. 00%，20 35min、0. 00%，層析柱內(nèi)徑為 10mm，長度為 150 300mm 的 C18、C8、C18-EPS、C8-EPS、C18-AQ、C8-AQ、C18_NH2 或 C8_NH2 中的一種反相柱，流 速4. 0-5. OmL/min,加樣量為 50-200 u L。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-10其中之一所述的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，其特征在于 所述的化合物作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物，還提供一種從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的制備方法以及所述的化合物作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用，本發(fā)明制備的從壁虎中提取的抗腫瘤化合物的臨床應(yīng)用，可以用生理鹽水溶解，再以注射方式使用或直接制成口服制劑，主要用于治療胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、白血病、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤的化學(xué)治療，抗腫瘤作用明顯，常規(guī)用量無骨髓抑制和重要臟器損害；此外，由于該化合物能夠增加T細(xì)胞免疫，有較好的抗艾滋病作用。
文檔編號(hào)A61K31/547GK101875661SQ20101018161
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2010年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月25日
發(fā)明者康建功, 張仕狀, 李耀輝, 盛繼文, 程鑫, 高志琴 申請(qǐng)人:張仕狀