專利名稱：創(chuàng)傷后應激障礙的治療的制作方法
技術領域：
本文一般性地涉及治療創(chuàng)傷后應激障礙的方法，并且更特別地涉及使用化合物A 治療創(chuàng)傷后應激障礙的方法、抑制多巴胺羥化酶的方法。還提供了通過施用治療有效 量的化合物A改善患者恢復力的方法。還提供了通過給患者施用治療有效量的化合物A診 斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的方法，以及評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中的至少 一種的方法；以及如果化合物A降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一 種則診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的方法。
背景技術：
焦慮障礙是最常出現(xiàn)的具有極大經(jīng)濟負擔的精神疾病的障礙。除泛發(fā)性的焦慮障 礙外，它們還包括創(chuàng)傷后應激障礙、驚恐性障礙、強制性障礙和社交障礙以及其它恐怖癥。創(chuàng)傷后應激障礙可能是嚴重的并且是慢性的，一些研究表明在一般性人群中一生 的發(fā)病率為1. 3%至7. 8%。創(chuàng)傷后應激障礙通常隨之而來的是心理上使人痛苦的創(chuàng)傷性 事件。這些事件可例如包括好斗、恐怖事件、身體攻擊、性攻擊、機動車事故和自然災害。對 該事件的反應可包括強烈畏懼、無助或恐懼。大多數(shù)人隨著時間過去而從創(chuàng)傷性事件中恢 復并且恢復到正常生活。相反，在創(chuàng)傷后應激障礙患者中，癥狀會持續(xù)并且可能隨著時間而 惡化，妨礙了恢復到正常生活。心理療法是目前創(chuàng)傷后障礙治療的支柱。方法包括認知行為療法、暴露療法和 眼運動脫敏和重復處理。藥物療法可增加心理療法的效果。選擇性血清素再吸收抑制劑 (SSRI)，例如舍曲林(Zoloft )和帕羅西汀(Paxil ),是由美國食品藥品監(jiān)督管理局批準 用于治療PTSD的唯一藥物。許多不希望的副作用和特征與SSRI應用有關。這些包括對下 列情況的考慮藥物相互作用、胃腸道副作用、性欲副作用、自殺觀念、急性抗焦慮藥作用和 作用緩慢起效。一些三環(huán)抗抑郁藥(TCA)和單胺氧化酶抑制劑(MAOI)顯示具有一定的效 果，但是患者耐受性低，原因是副作用發(fā)生率高。MAOI具有飲食限制要求，并且與高血壓事 件有關。TCA具有抗膽堿能和心血管副作用。拉莫三嗪，一種鈉通道阻滯劑，在對照研究的 小規(guī)模安慰劑治療創(chuàng)傷后應激障礙中具有一定的效果。使用拉莫三嗪的困難在于需要有調(diào) 整(titration)，以及發(fā)展為Steven Johnson綜合征、生活恐嚇疹的風險，使之在治療應用 中是一種差的候選品。需要開發(fā)安全有效的創(chuàng)傷后應激障礙的治療法。多巴胺是一種兒茶酚胺神經(jīng)遞質(zhì)，其連同特異性多巴胺能受體一起主要發(fā)現(xiàn)于中 樞神經(jīng)系統(tǒng)中。去甲腎上腺素是一種循環(huán)兒茶酚胺，其在中樞和外周系統(tǒng)中作用于腎上腺 素能受體。多巴胺羥化酶(DBH)催化多巴胺向去甲腎上腺素的轉化，并且在中樞和外周交感神經(jīng)元中均有發(fā)現(xiàn)。DBH的抑制作用同時地通過阻斷其代謝提高多巴胺水平并通過 阻斷其合成降低去甲腎上腺素水平。內(nèi)匹司他((S)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟_1，2，3， 4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)是一種DBH抑制劑。發(fā)明概述本文提供了通過給患者施用治療有效量的化合物A治療診斷有創(chuàng)傷后應激障礙 的患者的方法。還提供了通過施用治療有效量的化合物A改善患者恢復力的方法。還提供了通過給患者施用治療有效量的化合物A診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的方 法，和評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中的至少一種的方法；以及如果化合物A 降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種則診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的 方法。


圖1顯示了個別酶分析法的細節(jié)。圖2顯示了內(nèi)匹司他對SHR的腸系膜動脈(a)、左心室(b)和大腦皮層(C)中的組 織去甲腎上腺素和多巴胺含量的作用。圖3顯示了內(nèi)匹司他對SHR的腸系膜動脈(a)、左心室(b)和大腦皮層(C)中的組 織多巴胺/去甲腎上腺素比率的作用。圖4顯示了內(nèi)匹司他對比格狗的腎動脈、左心室和大腦皮層中的組織去甲腎上腺 素和多巴胺含量的作用。圖5顯示了內(nèi)匹司他對比格狗的腎動脈、左心室和大腦皮層中的組織多巴胺/去 甲腎上腺素比率的作用。圖6顯示了內(nèi)匹司他對比格狗的去甲腎上腺素(a)的血漿濃度、多巴胺(b)血漿 濃度的以及多巴胺/去甲腎上腺素比率(c)的作用。圖7顯示了內(nèi)匹司他以及(R) -5-氨基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽以30mg. kg—1 ；po對SHR的腸系膜動脈、左心 室和大腦皮層中的去甲腎上腺素含量、多巴胺含量和多巴胺/去甲腎上腺素比率的作用。圖8顯示了 l、2a(內(nèi)匹司他)和2b ((R) _5_氨基甲基(5，7_ 二氟_1，2，3，4_四 氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)的結構。圖9顯示了化學反應流程。圖10顯示了一個表，其描述了內(nèi)匹司他對DBH和選擇的一系列酶和受體的內(nèi)匹司 他相互作用。圖11顯示了內(nèi)匹司他對SHR㈧和正常比格狗⑶的組織DA/NE比率的作用。圖12顯示了長期施用內(nèi)匹司他對正常比格狗中血漿DA/NE比率的作用。圖13顯示了 口服施用內(nèi)匹司他對SHR的平均動脈壓的作用。圖14顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用安慰劑達3個月獲得的。圖15顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用20mg的內(nèi)匹司他游離堿達3個月獲得的。圖16顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用40mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖17顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用60mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖18顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用80mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖19顯示了從仰臥CHF患者的外周靜脈采集的血漿樣品中的去甲腎上腺素和多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用120mg的內(nèi)匹司他游離堿 達3個月獲得的。圖20顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的去 甲腎上腺素的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用安慰劑達3個月獲 得的。圖21顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用安慰劑達3個月獲得的。圖22顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的去 甲腎上腺素的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用20mg的內(nèi)匹司他游 離堿達3個月獲得的。圖23顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用20mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖24顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的去 甲腎上腺素的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用40mg的內(nèi)匹司他游 離堿達3個月獲得的。圖25顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用40mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖26顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的去 甲腎上腺素的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用60mg的內(nèi)匹司他游 離堿達3個月獲得的。圖27顯示了從插入導管的CHF患者動脈性靜脈和冠狀竇采集的血漿樣品中的多 巴胺的游離堿的濃度(Pg/ml)，該濃度是在該患者每天口服施用60mg的內(nèi)匹司他游離堿達 3個月獲得的。圖28說明了應當從進一步的統(tǒng)計分析以及此作用的原因中扣除的數(shù)據(jù)。圖29顯示了大鼠內(nèi)匹司他的藥物代謝動力學參數(shù)。圖30顯示了在單次10mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雄性大鼠血漿內(nèi)匹司他的濃度。
圖31顯示了在單次30mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雄性大鼠血漿內(nèi)匹司他的濃度。圖32顯示了在單次100mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雄性大鼠血漿內(nèi)匹司他的濃度。圖33顯示了在單次10、30或100mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后大鼠血漿內(nèi)匹司他的 平均濃度。數(shù)值是每個時間點三只大鼠的平均值。圖34顯示了劑量與血漿中內(nèi)匹司他的AUC值之間的線性關系。圖35顯示了在單次30mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雌性大鼠血漿內(nèi)匹司他的濃度。圖36顯示了在單次10mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雄性大鼠血漿和腦中內(nèi)匹司他 的平均濃度。圖37顯示了在單次10mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后雄性大鼠腦中內(nèi)匹司他的濃度。圖38顯示了腸系膜動脈中的去甲腎上腺素濃度。圖39顯示了腸系膜動脈中的多巴胺濃度。圖40顯示了腸系膜動脈中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度。圖41顯示了大鼠左心室中的去甲腎上腺素水平。圖42顯示了大鼠左心室中的多巴胺水平。圖43顯示了大鼠左心室中的多巴胺/去甲腎上腺素水平。圖44顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的大腦皮層中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。 隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖45顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的大腦皮層中的去甲腎上腺素濃度(μ g/g濕 重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖46顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的大腦皮層中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度 (yg/yg濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖47顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的左心室中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。隔 離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖48顯示了顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的左心室中的去甲腎上腺素濃度(μ g/ g濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖49顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的左心室中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度 (yg/yg濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖50顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的腸系膜動脈中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。 隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖51顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的腸系膜動脈中的去甲腎上腺素濃度(μ g/g 濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖52顯示了以劑量函數(shù)繪圖的SHR的腸系膜動脈中的多巴胺/去甲腎上腺素濃 度(yg/yg濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η =9)圖53顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG400 dH20(l 1)載劑之后SHR的大腦皮層中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。隔離12小 時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖54顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的大腦皮層中的去甲腎上腺素(yg/g濕重)。隔離12 小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖55顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的大腦皮層中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度(yg/yg濕 重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)。圖56顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑SHR的左心室中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。隔離12小時三次 口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖57顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的左心室中的去甲腎上腺素濃度(μ g/g濕重)。隔離12 小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)圖58顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的左心室中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度(μ g/yg濕 重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)。圖59顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的腸系膜動脈中的多巴胺濃度(μ g/g濕重)。隔離12 小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)。圖60顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑SHR的腸系膜動脈中的去甲腎上腺素濃度(μ g/g濕重)。隔離12 小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)。圖61顯示了施用內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽、或dH20載劑、或SKF102698或PEG 400 dH20(l 1)載劑之后SHR的腸系膜動脈中的多巴胺/去甲腎上腺素濃度(μ g/μ g 濕重)。隔離12小時三次口服劑量施用的第三次之后的6小時采集組織。(η = 9)。圖62顯示了皮層、紋狀體和腸系膜動脈中的兒茶酚胺水平。圖63顯示了血清中的三碘甲腺原氨酸水平。圖64顯示了血清中的甲狀腺素水平。圖65顯示了狗腎髓質(zhì)中多巴胺和去甲腎上腺素的濃度對內(nèi)匹司他的應答。圖66顯示了狗腎皮質(zhì)中多巴胺和去甲腎上腺素的濃度對內(nèi)匹司他的應答。
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圖67顯示了安慰劑或內(nèi)匹司他對正常比格狗中血漿DA水平(pg/ml)的作用。圖68顯示了安慰劑或內(nèi)匹司他對正常比格狗中血漿NE水平(pg/ml)的作用。圖69顯示了安慰劑或內(nèi)匹司他對正常比格狗中血漿DA/NE比率的作用。圖70顯示了安慰劑或內(nèi)匹司他對正常比格狗中血漿EPI水平(pg/ml)的作用。圖71顯示了長期施用(14. 5天)內(nèi)匹司他對正常比格狗中NE、DA和EPI的血漿 水平的作用。N = 8只/組。*< 0.05，與安慰劑比較。圖72顯示了給比格狗口服施用RS 25560-197 (2mg/kg ；bid)達14. 5天后收集的 血漿樣品中的內(nèi)匹司他的游離堿和RS 47831的有效濃度(ng/ml)。圖73顯示了狗的腎動脈中的多巴胺水平。圖74顯示了狗的腎動脈中的去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/ kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0.01，與安慰劑比較 (均值士 SD)。圖75顯示了狗的腎動脈中的多巴胺水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠 囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p< 0.01，與安慰劑比較(均值 士 SD)。圖76顯示了狗的大腦皮層中的多巴胺水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠 囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p<0. 01 ；M 0. 05 < ρ < 0. 10， 與安慰劑比較(均值士 SD)。圖77顯示了狗的大腦皮層中的去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/ kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0.01，與安慰劑比較 (均值士 SD)。 圖78顯示了狗的大腦皮層中的多巴胺/去甲腎上腺素比率水平。給狗口服施用 0、5、15或30mg/kg膠囊b. i. d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0. 01， 與安慰劑比較(均值士 SD)。圖79顯示了狗的左心室中的多巴胺水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠 囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p< 0.01，與安慰劑比較(均值 士 SD)。圖80顯示了狗的左心室中的去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/ kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0.01，與安慰劑比較 (均值士 SD)。圖81顯示了狗的左心室中的多巴胺/去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15 或30mg/kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0. 01，與安慰 劑比較(均值士 SD)。圖82顯示了狗的腎皮質(zhì)中的多巴胺水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠 囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p< 0.01，與安慰劑比較(均值 士 SD)。圖83顯示了狗的腎皮質(zhì)中的去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/ kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0.01，與安慰劑比較 (均值士 SD)。
圖84顯示了狗的腎皮質(zhì)中的多巴胺/去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15 或30mg/kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0. 01，與安慰 劑比較(均值士 SD)。圖85顯示了狗的腎髓質(zhì)中的多巴胺水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠囊 b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p<0. 01 ；Μ,Ο. 05 < ρ < 0. 10，與 安慰劑比較(均值士 SD)。圖86顯示了狗的腎髓質(zhì)中的去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15或30mg/ kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0.01 ；Μ,Ο. 05 < ρ < 0. 10，與安慰劑比較(均值士 SD)。圖87顯示了狗的腎髓質(zhì)中的多巴胺/去甲腎上腺素水平。給狗口服施用0、5、15 或30mg/kg膠囊b. i.d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8，*p < 0. 01，與安慰 劑比較(均值士 SD)。圖88顯示了內(nèi)匹司他的組織濃度。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠囊 b. i. d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8 (僅為均值)。圖89顯示了內(nèi)匹司他第5天的血漿濃度。給狗口服施用0、5、15或30mg/kg膠囊 b. i. d.達4. 5天，最后施藥后6小時采集組織。N = 8 (僅為均值)。圖90顯示了內(nèi)匹司他第4天O-Shr血漿濃度的曲線下面積(AUC)。給狗口服施用 0、5、15 或 30mg/kg 膠囊 b. i.d.。N = 8(僅為均值)。圖91顯示了 β -腎上腺素能受體結合數(shù)據(jù)。圖92顯示了內(nèi)匹司他對酶活性的抑制％的作用。圖93顯示了牛DBH的活性，以抑制百分數(shù)表示，以抑制劑濃度的對數(shù)的函數(shù)繪圖。圖94顯示了人DBH的活性，以抑制百分數(shù)表示，以抑制劑濃度的對數(shù)的函數(shù)繪圖。圖95顯示了三種DBH抑制劑對牛和人DBH活性的IC50 (均值士 SE)。圖96顯示了抑制數(shù)據(jù)對牛DBH的Lineweaver-Burk圖(A)，以及表觀KM對抑制劑 濃度的圖(B)0圖97顯示了結合分析法中測定內(nèi)匹司他親和力的研究概要。圖98顯示了內(nèi)匹司他的受體概況。圖99顯示了直腸溫度概要(攝氏度)。圖100顯示了臨床觀察和行為學試驗的概要，針對載劑治療的動物。圖101顯示了臨床觀察和行為學試驗的概要，針對30mg/kg內(nèi)匹司他治療的動物。圖102顯示了臨床觀察和行為學試驗的概要，針對100mg/kg內(nèi)匹司他治療的動 物。圖103顯示了臨床觀察和行為學試驗的概要，針對300mg/kg內(nèi)匹司他治療的動 物。圖104顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗0. 5和1小時的水平活動。圖105顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗1. 5和2小時的水平活動。圖106顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗2. 5和3小時的水平活動。圖107顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗3. 5和4小時的水平活動。圖108顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗0. 5和1小時的運動數(shù)。
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圖109顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗1. 5和2小時的運動數(shù)。圖110顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗2. 5和3小時的運動數(shù)。圖111顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗3. 5和4小時的運動數(shù)。圖112顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗0. 5和1小時的休息時間(秒)。圖113顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗1. 5和2小時的休息時間(秒)。圖114顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗2. 5和3小時的休息時間(秒)。圖115顯示了內(nèi)匹司他運動活動試驗3. 5和4小時的休息時間(秒)。圖116顯示了 DBHI運動活動試驗水平活動。圖117顯示了 DBHI運動活動試驗運動數(shù)。圖118顯示了 DBHI運動活動試驗休息時間(秒)。圖119顯示了對最大驚恐反應的概要統(tǒng)計和顯著性評價。圖120顯示了對最大驚恐反應的概要統(tǒng)計和顯著性評價。圖121顯示了對最大驚恐反應的概要統(tǒng)計和顯著性評價。圖122顯示了對最大驚恐反應的概要統(tǒng)計和顯著性評價。圖123顯示了內(nèi)匹司他和H20與關于St Max的時間的比較。圖124顯示了內(nèi)匹司他和H20與關于St Avg的時間的比較。圖125顯示了 PEG和SKF與關于St Max的時間的比較。圖126顯示了 PEG和SKF與關于St Avg的時間的比較。圖127顯示了可樂定和H20與關于St Max的時間的比較。圖128顯示了可樂定和H20與關于St Avg的時間的比較。圖129顯示了對每只大鼠的預治療聽覺驚恐反應性和開始日期。圖130顯示了對每只大鼠的預治療聽覺驚恐反應性和開始日期。圖131顯示了 DBHIs內(nèi)匹司他和SKF 102698對身體中心溫度作用的缺乏。圖132顯示了基線和第1天的平均身體中心溫度(攝氏度)。圖133顯示了第5天和第1天的平均身體中心溫度(攝氏度)。圖134顯示了 SKF 102698自發(fā)運動活動的作用。圖135顯示了 0-15和15-30分鐘的自發(fā)運動活動。圖136顯示了 30-45和45-60分鐘的自發(fā)運動活動。圖137顯示了內(nèi)匹司他對自發(fā)運動活動的作用缺乏。圖138顯示了 DBHI化合物SKF 102698和內(nèi)匹司他對預脈沖抑制的作用缺乏。圖139顯示了針對大鼠預脈沖抑制百分數(shù)的概要統(tǒng)計和全部配對治療比較的P值。圖140顯示了在針對大鼠預脈沖抑制百分數(shù)的時間內(nèi)的概要統(tǒng)計和配對治療比 較的P-值(對于驚恐1-15)。圖141顯示了在針對大鼠預脈沖抑制百分數(shù)的時間內(nèi)的概要統(tǒng)計和配對治療比 較的P-值(對于驚恐31-45)。圖142顯示了由DBHI SKF-102698但不是由內(nèi)匹司他產(chǎn)生的聽覺驚恐反應性的降 低。圖143顯示了針對大鼠聽覺驚恐反應性的概要統(tǒng)計和全部配對治療比較的P-值。
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圖144顯示了在針對大鼠聽覺驚恐反應性的時間內(nèi)的概要統(tǒng)計和配對治療比較 的P-值(對于驚恐1-15)。圖145顯示了在針對大鼠聽覺驚恐反應性的時間內(nèi)的概要統(tǒng)計和配對治療比較 的P-值(對于驚恐31-45)。圖146顯示了 SKF 102698對體重變化的作用。圖147顯示了內(nèi)匹司他對體重變化的作用缺乏。圖148顯示了猴子口服投藥的結果。圖149顯示了猴子口服投藥的結果。圖150顯示了用于這些研究中的臨床等級評分表。圖151總結了在A、B、C和D組中動物的損傷一覽表。圖152總結了在A、B、C和D組中動物的損傷一覽表。圖153顯示了安慰劑治療的IRAM(A)和CRS(B)。圖 154 顯示了 B 組的 IRAM(A)和 CRS(B)。圖 155 顯示了 C 組的 IRAM(A)和 CRS(B)。圖 156 顯示了 D 組的 IRAM(A)和 CRS(B)。圖157顯示了安慰劑治療對內(nèi)匹司他的三個濃度的比較。圖158顯示了安慰劑治療對內(nèi)匹司他的三個濃度的比較。圖159顯示了 A組的MPTP-損傷后(預治療)CRS對左旋多巴和安慰劑治療的比較。圖160顯示了對A組的弗里德曼(Friedman)試驗和描述統(tǒng)計。圖161顯示了 A組的Durmett檢驗因果分析。圖162顯示了 B組的MPTP-損傷后(預治療)CRS對左旋多巴和內(nèi)匹司他治療的 比較。圖163顯示了 B組的弗里德曼試驗和描述統(tǒng)計。圖164顯示了 B組的Durmett檢驗因果分析。圖165顯示了 C組的MPTP-損傷后(預治療)CRS對左旋多巴和內(nèi)匹司他治療的 比較。圖166顯示了 C組的弗里德曼試驗和描述統(tǒng)計。圖167顯示了 C組的Dunnett檢驗因果分析。圖168顯示了 D組的MPTP-損傷后(預治療)CRS對左旋多巴和內(nèi)匹司他治療的 比較。圖169顯示了 D組的弗里德曼試驗和描述統(tǒng)計。圖170顯示了 D組的Dunnett檢驗因果分析。圖171顯示了各組的親和力計數(shù)測定。圖172針對各組的描述統(tǒng)計。圖173顯示了基礎心率和平均動脈壓。圖174顯示了內(nèi)匹司他在用SCH-23390或載劑預治療的清醒SHR中對心率的作用。圖175顯示了內(nèi)匹司他對用SCH-23390或載劑預治療的SHR的平均動脈壓的作
12用。圖176顯示了四組大鼠在藥物治療開始前當天的平均血壓。圖177顯示了四組大鼠在藥物治療開始前當天的心率。圖178顯示了四組大鼠在藥物治療開始前當天的運動活動(任意單位)。圖179顯示了藥物治療第1天的四組大鼠的平均血壓。圖180顯示了藥物治療第2天的四組大鼠的平均血壓。圖181顯示了藥物治療第3天的四組大鼠的平均血壓。圖182顯示了藥物治療第7天的四組大鼠的平均血壓。圖183顯示了藥物治療第2天的四組大鼠的心率。圖184顯示了藥物治療第3天的四組大鼠的運動活動(任意單位)。圖185顯示了在首先的6天治療期間四組大鼠的體重變化。圖186顯示了每個時間點時平均血壓的顯著水平。圖187顯示了每個時間點時平均血壓的顯著水平。詳細描述如本文使用的，下列單詞和短語通常將具有下述含義，除非它們使用的上下文顯 示有另外的范圍。如本文使用的，“化合物A”包括內(nèi)匹司他(((S)-5_氨基甲基-l-(5，7-二氟-1， 2,3,4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽))、((R) _5_氨基甲基(5， 7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)及其混合物和其 藥學可接受的鹽。“藥學可接受的鹽”包括但不限于無機酸的鹽，例如鹽酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽 (diphosphate)、氫溴酸鹽、硫酸鹽、亞磺酸鹽(sulf inate)、硝酸鹽等鹽；以及有機酸的鹽， 例如蘋果酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、枸櫞酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、甲磺 酸鹽、對甲苯磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽以及烷酸鹽例如乙酸 鹽、H00C-(CH2)n-C00H其中η為0-4的鹽等鹽。此外，如果化合物是以酸加成鹽獲得的，則可通過將該酸鹽的溶液堿化而獲得游 離堿。相反，如果該產(chǎn)物為游離堿，則加成鹽特別是藥學可接受的加成鹽可根據(jù)用于從堿化 合物制備酸加成鹽的常規(guī)操作程序，通過將該游離堿溶解于適宜的有機溶劑中再用酸處理 該溶液來制備。本領域技術人員理解各種可用于制備非毒性藥學可接受的加成鹽的合成方 法。如本文使用的，術語“治療”是指疾病或障礙的至少一種體征、癥狀或征候群有益 地改變的任何方式，以便預防或延緩發(fā)病、降低發(fā)病率或頻率、降低嚴重度和強度、延緩進 程、防止復發(fā)、或者改善癥狀或者與該疾病或障礙相關的癥狀。例如，在創(chuàng)傷后應激障礙中， 治療該障礙可以在某些實施方案中引起創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一 種的頻率和強度中的至少一種降低。如本文使用的，短語“診斷有創(chuàng)傷后應激障礙(PTSD) ”是指具有創(chuàng)傷后應激障礙的 體征、癥狀或征候群表征，創(chuàng)傷性事件引發(fā)的精神病障礙。此創(chuàng)傷性事件的非限制性實例包 括好斗、恐怖事件、身體攻擊、性攻擊、機動車事故和自然災害。精神障礙的診斷和統(tǒng)計手冊-IV-修訂本(DSM-IV-TR)，一本羅列了精神障礙的分類和標準的精神衛(wèi)生職業(yè)手冊，將創(chuàng)傷后應激障礙分類為焦慮障礙。根據(jù)DSM-IV-TR，PTSD 診斷可以構成，如果1.患者經(jīng)歷、目睹或者面臨一種或多種與現(xiàn)實的或威迫的死亡或者嚴重損傷有 關的事件，或者對自身或其它的身體完整性的恐嚇，以及與強烈畏懼、無助或恐懼有關的響 應；2.創(chuàng)傷性事件的結果是，患者經(jīng)歷至少1種再經(jīng)歷/侵擾癥狀，3種回避/麻木癥 狀，和2種覺醒過度癥狀，并且該癥狀的持續(xù)時間達1個月以上；以及3.該癥狀在社會、職業(yè)或者其它發(fā)揮功能的其它重要領域引起臨床顯著的痛苦或 者損傷。在某些實施方案中，如果患者的障礙達到DSM-IV-TR標準，則該患者被診斷有創(chuàng) 傷后應激障礙。在某些實施方案中，如果患者具有創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中 的至少一種，則該患者被診斷有創(chuàng)傷后應激障礙。在某些實施方案中，評分表被用于測定創(chuàng) 傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群，并且根據(jù)使用此評分表測定結果診斷為創(chuàng)傷后應激 障礙。在某些實施方案中，根據(jù)評分表的“得分”被用于診斷或評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、 癥狀或征候群。在某些實施方案中，“得分”可以度量創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群 的頻率、強度或嚴重度中的至少一種。如本文使用的，術語“評分表”是指一種測定患者創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或 征候群中的至少一種的方法。在某些實施方案中，評分表可以是訪談表或問卷表。評分 表的非限制性實例是臨床-用藥PTSD評分表(CAPS)、臨床-用藥PTSD評分表第2部分 (CAPS-2)、兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分表(CAPS-CA)、事件評分表的影響(IES)、 事件評分表的影響-修訂本(IES-R)、臨床綜合印象評分表(CGI)、疾病的臨床綜合印象嚴 重度(CGI-S)、臨床綜合印象改進(CGI-I)、PTSD評分表的Duke綜合等級(DGRP)、PTSD評 分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I)、漢密爾頓焦慮評分表(HAM-A) ,PTSD的結構性訪談表 (SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、PTSD癥狀評分表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談 表(MINI)、Montgomery-人Sberg抑郁等級評分表(MADRS)、Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓 抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾頓抑郁等級評分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老 年人抑郁清單(⑶S-30)和兒童抑郁指數(shù)(⑶I)。如本文使用的，術語“體征”和“體征”是指障礙的客觀發(fā)現(xiàn)。在某些實施方案中， 體征是障礙的生理現(xiàn)象或者反應。在某些實施方案中，體征可以是指心率和節(jié)律、體溫、呼 吸的模式和頻率、血壓。在某些實施方案中，體征可能與癥狀有關。在某些實施方案中，體 征可能是癥狀的表征。如本文使用的，術語”癥狀”和“癥狀”是指表征障礙的主觀指征。創(chuàng)傷后應激障 礙的癥狀可以是指例如但不限于復發(fā)性和侵入性創(chuàng)傷記憶、創(chuàng)傷性事件的復發(fā)性和痛苦夢 想、創(chuàng)傷性事件復發(fā)時的行為或情感、與創(chuàng)傷提醒物接觸時的痛苦、與創(chuàng)傷提醒物接觸時的 生理反應、回避與創(chuàng)傷有關的思考或情感的努力、回避活動或情境的努力、無能力回憶創(chuàng)傷 或創(chuàng)傷局面、顯著減少對重大活動的興趣、與其它人分離或疏遠的情感、受限制的愛好范 圍、前途渺茫的感覺、社交性焦慮、對生疏環(huán)境的焦慮、入睡或睡眠困難、易激惹或怒氣爆 發(fā)、集中精力困難、警覺過度、以及夸張的驚恐反應。在某些實施方案中，潛在的危險刺激可 引起覺醒過度或焦慮。在某些實施方案中，該生理反應顯示下列的至少一種呼吸異常、心
14率節(jié)律異常、血壓異常、特殊感覺的功能異常、以及感覺器官的功能異常。在某些實施方案 中，可能發(fā)生受限制的影響范圍，其特征為減少或限制范圍或者情感強度或情感展示，并且 前途渺茫的感覺可能在人們對將會沒有職業(yè)、婚姻、子女或正常壽命的思考中顯現(xiàn)。在某些 實施方案中，兒童和青少年可能具有創(chuàng)傷后應激障礙的癥狀例如，例如且不限于，分裂或激 動行為、表達創(chuàng)傷局面的重復演示、缺乏認可內(nèi)容的可怕夢想、以及特殊創(chuàng)傷的再展示。在 某些實施方案中，癥狀可以是與記憶恢復有關的應激。如本文使用的，術語“征候群”是指一組體征、癥狀，或者是指一組體征和癥狀，它 們因其相互關系或因其同時發(fā)生而成集合。例如，在某些實施方案中，創(chuàng)傷后應激障礙特征 為三種征候群再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度。如本文使用的，術語“再經(jīng)歷/侵擾”是指下列的至少一種復發(fā)性和侵入性創(chuàng)傷 記憶、創(chuàng)傷性事件的復發(fā)性和痛苦夢想、創(chuàng)傷性事件復發(fā)時的行為或情感、與創(chuàng)傷提醒物接 觸時的痛苦、以及與創(chuàng)傷提醒物接觸時的生理反應。在某些實施方案中，該生理反應顯示下 列的至少一種呼吸異常、心率節(jié)律異常、血壓異常、特殊感覺的功能異常、以及感覺器官的 功能異常。如本文使用的，術語“回避/麻木”是指下列的至少一種回避與創(chuàng)傷有關的思考 或情感的努力、回避活動或情境的努力、無能力回憶創(chuàng)傷或創(chuàng)傷局面、顯著減少對重大活動 的興趣、與其它人分離或疏遠的情感、受限制的愛好范圍、和前途渺茫的感覺?？赡馨l(fā)生限 制范圍的影響，其特征為減少或限制范圍或者情感強度或情感展示。前途渺茫的感覺可能 在人們對將會沒有職業(yè)、婚姻、子女或正常壽命的思考中顯現(xiàn)?；乇?麻木亦可能在社交性 焦慮和對生疏環(huán)境的焦慮中顯示出來。如本文使用的，術語“覺醒過度”是指下列的至少一種入睡或睡眠困難、易激惹或 怒氣爆發(fā)、集中精力困難、警覺過度、以及夸張的驚恐反應。潛在的危險刺激可引起覺醒過 度或焦慮。如本文使用的，術語“顯著地”是指一組觀察或發(fā)現(xiàn)，它們有太過接近的相互關系 而不會因偶然而發(fā)生。例如，在某些實施方案中，“顯著改變”、“顯著減少”和“顯著增加”是 指不會因偶然而發(fā)生的變化或效果。在某些實施方案中，統(tǒng)計學方法可被用于確定一種觀 察是否可以是指“顯著地”改變、減少、增加或變化。診斷有創(chuàng)傷后應激障礙的患者可感受“受保護”、不自在、和強烈的焦慮。抑郁、 焦慮、恐慌發(fā)作和雙相性精神障礙經(jīng)常與創(chuàng)傷后應激障礙有關。酒精和藥物濫用也是常見 的。在某些實施方案中，與創(chuàng)傷后應激障礙有關(cormorbid)的障礙可包括例如但不限于 抑郁、酒精濫用和藥物濫用。如本文使用的，術語“臨床-用藥PTSD評分表(CAPS) ”是指一種針對創(chuàng)傷后應激綜 合征的診斷和評價的度量。該CAPS是一種30個項目結構的訪談，其與針對PTSD的DSM-IV 標準相符。此種度量法的不同版本已被開發(fā)。如本文使用的，術語“臨床-用藥PTSD評分表-第1部分(CAPS-I) ”是CAPS的一 種版本，其評價當前的和一生的PTSD，并且亦被稱為CAPS-DX (對于診斷)。如本文使用的，術語“臨床-用藥PTSD評分表-第2部分(CAPS-2) ”是指CAPS的 一種版本，其用于評價創(chuàng)傷后應激障礙患者一周的癥狀情況，并且亦被稱為CAPS-SX(對于 癥狀)。
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如本文使用的，術語“兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分表(CAPS-CA) ”是指針 對兒童和青少年開發(fā)的一種CAPS的版本。如本文使用的，術語“事件評分表的影響(IES) ”是指由MardiHorowitz、Nancy Wilner和William Alvarez開發(fā)的一種評分表，以度量與特定事件有關的主觀應激。它是 一種自我報道的評價法，并且可用于進行經(jīng)時監(jiān)測患者的狀態(tài)。如本文使用的，術語“事件評分表的影響_修訂本(IES-R) ”是指由Daniel S. Weiss和Charles Marmar開發(fā)的一種IES版本，以評價PTSD的覺醒過度征候群。如本文使用的，術語“臨床綜合印象評分表(CGI) ”是指一種用于進行精神病學評 價的評分表?；颊弑皇茉L，并且CGI被用于度量疾病的嚴重度(CGI-S)、總體改善(CGI-I) 和效能指數(shù)?；颊弋斍鞍Y狀的評價。通常，其與范圍為得分1(正常)至7(極壞)的7-點評分 表相關。將患者疾病的嚴重度與其它患者疾病的嚴重度比較。例如，該CGI-S得分可用于 測定用化合物A治療之后患者的病情，并且可以比較該治療前和治療后的得分。如本文使用的，術語“臨床綜合印象改進(CGI-I) ”是指患者當前病情與其基礎病 情的比較。通常，其與范圍為1 (非常大的改善)至7 (非常大的惡化)的7-點評分表相關。 該CGI-I得分可用于測定例如在對化合物A治療的應答中創(chuàng)傷后應激障礙的改善。如本文使用的，術語“效能指數(shù)”是指由CGI得到的得分，并且用當前治療益處與 副作用嚴重度的比率比較患者基礎病情。通常，其與范圍為1(無)至4(優(yōu)于治療效果) 的4-點評分表相關。在評價創(chuàng)傷后應激障礙中，該效能指數(shù)可以，例如，評價用例如化合物 A的治療法治療的風險-利益。如本文使用的，術語“PTSD評分表的Duke綜合等級(DGRP) ”是指一種評分表，其 測定針對三種PTSD征候群再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度以及全部PTSD嚴重度 的每一個的嚴重度和改善。如本文使用的，術語“PTSD評分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I) ”是指一種評分 表，其在例如針對創(chuàng)傷后應激障礙的化合物A的治療的應答中用于區(qū)別應答者(1 (非常大 的改善)和2(很大的改善)的DGRP-I)和無應答者(DGRP-I > 2)。如本文使用的，術語“漢密爾頓焦慮評分表(HAM-A) ”是指一種由Max Hamilton于 1959年開發(fā)的評分表，其用于診斷和定量焦慮和創(chuàng)傷后應激障礙的癥狀。其由14個項目 組成，各自由一系列癥狀定義。針對確定項目得分開發(fā)了非標準化的調(diào)查問題以從患者或 行為特別指南引出信息。每個項目與范圍為0(不存在)至4(嚴重)的5-點評分表相關。 這些項目包括評價焦慮心境、恐懼、智力效果、身體不適例如肌肉、心血管癥狀、緊張、失眠、 情感低落、身體感覺不適、呼吸癥狀、胃腸癥狀、自律癥狀、泌尿生殖器癥狀以及評價當時的 行為。例如，HAM-A得分的減少表明例如創(chuàng)傷后應激障礙的障礙的改善。如本文使用的，術語“PTSD的結構性訪談表(SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、 PTSD癥狀評分表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談表(MINI) ,Montgomery- Asberg抑 郁等級評分表(MADRS)、Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾 頓抑郁等級評分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老年人抑郁清單(GDS-30)和兒童抑郁 指數(shù)(CDI) ”是指診斷、評價、測定創(chuàng)傷后應激障礙、焦慮或抑郁的體征、癥狀、征候群的另外 的評分表。
如本文使用的，術語“得分”是指測定精神病癥狀、焦慮或創(chuàng)傷后應激障礙的至少 一種體征、癥狀或征候群的得分中測定的至少一個項目或參數(shù)的得分。在某些實施方案中， 得分測定體征、癥狀、征候群、相關癥狀或者對創(chuàng)傷后應激障礙的日常生活的影響的頻率、 強度或嚴重度。在某些實施方案中，評價創(chuàng)傷后應激障礙的“得分”可以例如通過針對創(chuàng)傷 后應激障礙的治療來顯著改變。如本文使用的，術語“終點得分”是指評價治療期間或治療后取得的創(chuàng)傷后應激障 礙的文書中的得分。如本文使用的，術語“基礎得分”是指治療開始之前評價創(chuàng)傷后應激障礙的文書中 的得分。如本文使用的，術語“全部得分”是指評價創(chuàng)傷后應激障礙的文書中的得分總和。 在某些實施方案中，全部得分是癥狀、征候群、相關癥狀、對日常生活的影響、效果和改善的 至少一種的得分總和。如本文使用的，術語“復發(fā)”是指患者疾病或障礙的至少一種癥狀的重新出現(xiàn)或者
T^ ο如本文使用的，短語“治療有效量”是指足以提供關于疾病、障礙或病情的至少一 種體征、癥狀或相關癥狀的治療結果的量。例如，該疾病、障礙或病情是PTSD。如本文使用的，短語“改善恢復力”是指增加患者經(jīng)歷創(chuàng)傷性事件而不蒙受創(chuàng)傷后 應激障礙痛苦或者有較少事件后癥狀或者破壞正常正常的日常生活活動的能力。在某些實 施方案中，改善恢復力可在某些實施方案中降低創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群的 至少一種。如本文使用的，術語“共同施用”是指針對第一藥劑的給藥方案，其與第二藥劑的 給藥方案重疊；或者是指同時施用第一藥劑和第二藥劑。給藥方案是由給藥量、頻率和持續(xù) 時間來表征的。如果在第一藥劑的第一次施用開始與第二次施用開始期間兩個給藥方案重 疊，則施用第二藥劑。如本文使用的，術語“藥劑”是指一種物質(zhì)，其包括但不限于化合物例如小分子或 者復合有機化合物，蛋白質(zhì)例如抗體或抗體片段或者包含抗體片段的蛋白質(zhì)，或者遺傳構 造生物體中的DNA或mRNA水平起效的遺傳構造。如本文使用的，術語“多巴胺羥化酶活性”是指由多巴胺β羥化酶介導的多 巴胺到去甲腎上腺素的轉化。多巴胺羥化酶的活性可通過測定多巴胺或去甲腎上腺素 水平來評價。如本文使用的，術語“調(diào)節(jié)”是指改變或變更活性、功能或性能。例如，一種藥劑可 以通過使因子水平升高或降低而調(diào)節(jié)因子的水平。如本文使用的，術語兒茶酚胺是指一種化合物，其含有與兒茶酚部分連接的胺基 團，并且其可用作激素或神經(jīng)遞質(zhì)。示例而非限制性的，多巴胺和去甲腎上腺素是兒茶酚 胺。本文提供了治療診斷有創(chuàng)傷后應激障礙的患者的方法。該方法包括給患者施用治 療有效量的化合物Α。在某些實施方案中，該方法進一步包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥 劑，該其它藥劑選自苯并二氮$類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去甲腎上腺素再吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺1A(5HT1A) 拮抗劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷A2A受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑(ΜΑ0Ι)、鈉 (Na)通道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周α腎上腺素受體拮抗劑、中樞α腎上腺素激 動劑、中樞或外周β腎上腺素受體拮抗劑、NK-I受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 (CRF)拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗劑、Y-氨基 丁酸(GABA)激動劑和部分D2激動劑。 在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是SSRI，其選自帕羅西汀、舍曲林、西酞 普蘭、依他普侖和氟西汀。 在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是SNRI，其選自度洛西汀、米氮平和文拉法辛。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是NRI，其選自丁氨苯丙酮和阿托西汀。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是雙硫侖。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是腺苷Α2Α受體拮抗劑伊曲茶堿 (istradefylline)。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是鈉通道阻滯劑，其選自拉莫三嗪、卡馬 西平、奧卡西平和丙戊酸鹽。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是鈣通道阻滯劑，其選自拉莫三嗪和卡 馬西平。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是中樞和外周α腎上腺素受體拮抗劑 哌唑嗪。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是中樞α腎上腺素激動劑可樂定。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是中樞或外周β腎上腺素受體拮抗劑 普萘洛爾。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是非典型抗抑郁藥/抗精神病藥，其選 自奧氮平(olanz印ine)、利培酮和喹硫平。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是三環(huán)類，其選自阿米替林、阿莫沙平、 地昔帕明、多塞平、丙米嗪、去甲替林、普羅瑞林和曲米帕明。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是抗驚厥劑，其選自拉莫三嗪、卡馬西 平、奧卡西平、丙戊酸鹽、托吡酯和左乙拉西坦。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是谷氨酸鹽拮抗劑托吡酯。在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是GABA激動劑，其選自丙戊酸鹽和托吡在某些實施方案中，該至少一種其它藥劑是部分D2激動劑阿立哌唑。在某些實施方案中，該患者具有至少一種兒茶酚胺的異常腦水平。在某些實施方案中，該化合物A降低患者腦中多巴胺β羥化酶活性。在某些實施方案中，該化合物A調(diào)節(jié)患者至少一種兒茶酚胺的腦水平。在某些實施方案中，該至少一種兒茶酚胺是去甲腎上腺素，并且該化合物A降低 患者去甲腎上腺素腦水平。在某些實施方案中，該至少一種兒茶酚胺是多巴胺，并且該化合物A升高患者多
18巴胺腦水平。在某些實施方案中，該化合物A降低患者與記憶恢復有關的應激。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種癥狀的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種征候群的頻 率和強度中的至少一種，其中該征候群選自再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度。在某些實施方案中，該再經(jīng)歷/侵擾包括下列的至少一種復發(fā)性和侵入性創(chuàng)傷 記憶、創(chuàng)傷性事件的復發(fā)性和痛苦夢想、創(chuàng)傷性事件復發(fā)時的行為或情感、與創(chuàng)傷提醒物接 觸時的痛苦、以及與創(chuàng)傷提醒物接觸時的生理反應。在某些實施方案中，該生理反應包括下列的至少一種呼吸異常、心率節(jié)律異常、 血壓異常、至少一種特殊感覺的功能異常、以及至少一種感覺器官的功能異常。在某些實施方案中，該至少一種特殊感覺選自視覺、聽覺、觸覺、嗅覺、味覺和感覺。在某些實施方案中，該至少一種感覺器官選自眼、耳、皮膚、鼻、舌和咽。在某些實施方案中，該回避/麻木包括下列的至少一種回避與創(chuàng)傷有關的思考 或情感的努力、回避活動或情境的努力、無能力回憶創(chuàng)傷或創(chuàng)傷局面、顯著減少對重大活動 的興趣、與其它人分離或疏遠的情感、受限制的愛好范圍、前途渺茫的感覺、社交性焦慮、以 及與生疏環(huán)境有關的焦慮。在某些實施方案中，該覺醒過度包括下列的至少一種入睡或睡眠困難、易激惹或 怒氣爆發(fā)、集中精力困難、警覺過度、夸張的驚恐反應、以及來自潛在的危險刺激的焦慮。在某些實施方案中，該化合物A不會降低患者對潛在的危險刺激適當和迅速應答 的身體能力。在某些實施方案中，該化合物A通過降低與記憶恢復有關的應激降低保持睡眠的 困難。在某些實施方案中，該患者是兒童或青少年。在某些實施方案中，該化合物A降低患者創(chuàng)傷后應激障礙的至少一種體征或癥狀 的頻率和強度中的至少一種，其中該體征或癥狀選自分裂或激動行為、表達創(chuàng)傷局面的重 復演示、缺乏認可內(nèi)容的可怕夢想、以及特殊創(chuàng)傷的再展示。在某些實施方案中，該化合物A降低患者與選自藥物濫用、酒精濫用和抑郁的創(chuàng) 傷后應激障礙同時發(fā)生的至少一種障礙的發(fā)生率。在某些實施方案中，該化合物A被一天一次或兩次施用于患者。在某些實施方案中，該化合物A不會引起下列的至少一種困倦、疲倦、或者精神 和身體能力的改變。在某些實施方案中，該化合物A在創(chuàng)傷性事件之前或者創(chuàng)傷性事件之后立即被施 用于患者。在某些實施方案中，創(chuàng)傷后應激綜合征的至少一種體征、癥狀或征候群用下列的 至少一種來診斷或評價臨床-用藥PTSD評分表(CAPS)、臨床-用藥PTSD評分表第2部分(CAPS-2)、兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分表(CAPS-CA)、事件評分表的影響(IES)、 事件評分表的影響-修訂本(IES-R)、臨床綜合印象評分表(CGI)、疾病的臨床綜合印象嚴 重度(CGI-S)、臨床綜合印象改進(CGI-I)、PTSD評分表的Duke綜合等級(DGRP)、PTSD評 分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I)、漢密爾頓焦慮評分表(HAM-A) ,PTSD的結構性訪談表 (SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、PTSD癥狀評分表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談 表(MINI) ,Montgomery-人Sberg抑郁等級評分表(MADRS)、Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓 抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾頓抑郁等級評分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老 年人抑郁清單(⑶S-30)和兒童抑郁指數(shù)(⑶I)。在某些實施方案中，該化合物A顯著改變下列至少一種的得分CAPS、CAPS-2、 CAPS-CA, IES、IES-R、CGI、CGI-S、CGI-I、DGRP, DGRP-I, HAM-A、SI-PTSD, PTSD-I, PSS-I, MADRS、BDI、HAM-D、RHRSD、MDI、⑶S-30 和 CDI。在某些實施方案中，該化合物A與基礎得分比較顯著降低了下列至少一種的終點 得分CAPS、CAPS-2、IES、IES-R 禾口 HAMA。在某些實施方案中，該化合物A顯著增加了對CGI-I響應的比率，該CGI-I具有 CGI-I得分為1(非常大的改善)和2(很大的改善)中的至少一個。在某些實施方案中，該化合物A增加在具有1 (非常大的改善)或2 (很大的改善) 的至少一個的DGRP-I得分的DGRP-I中應答者的比率。在某些實施方案中，CAPS和CAP-2的至少一種的至少65的全部得分是創(chuàng)傷后應 激障礙的表征。在某些實施方案中，HAM-A的至少18的全部得分是焦慮障礙的表征。在某些實施方案中，CGI-I和DGRP-I的至少一種的至少3的得分是創(chuàng)傷后應激障 礙的表征。還提供了治療患者創(chuàng)傷后應激障礙的方法。該方法包括對有創(chuàng)傷后應激障礙的患 者進行診斷；給患者施用治療有效量的化合物A ；對創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群 中的至少一種進行評價；以及如果化合物A降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群 中的至少一種則確定該創(chuàng)傷后應激綜合征被改善。在某些實施方案中，該方法包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥劑，該其 它藥劑選自苯并二氮革類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去甲腎上腺素再 吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺1A(5HT1A)拮抗 劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷A2A受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑(ΜΑ0Ι)、鈉(Na)通 道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周α腎上腺素受體拮抗劑、中樞α腎上腺素激動劑、 中樞或外周β腎上腺素受體拮抗劑、NK-I受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF) 拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗劑、Y “氨基丁酸 (GABA)激動劑和部分D2激動劑。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種癥狀的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種征候群的頻率和強度中的至少一種，其中該征候群選自再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度。在某些實施方案中，創(chuàng)傷后應激綜合征的至少一種體征、癥狀或征候群用下列的 至少一種來診斷或評價臨床-用藥PTSD評分表(CAPS)、臨床-用藥PTSD評分表第2部分 (CAPS-2)、兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分表(CAPS-CA)、事件評分表的影響(IES)、 事件評分表的影響-修訂本(IES-R)、臨床綜合印象評分表(CGI)、疾病的臨床綜合印象嚴 重度(CGI-S)、臨床綜合印象改進(CGI-I)、PTSD評分表的Duke綜合等級(DGRP)、PTSD評 分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I)、漢密爾頓焦慮評分表(HAM-A) ,PTSD的結構性訪談表 (SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、PTSD癥狀評分表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談 表(MINI) ,Montgomery-人Sberg抑郁等級評分表(MADRS)、Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓 抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾頓抑郁等級評分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老 年人抑郁清單(⑶S-30)和兒童抑郁指數(shù)(⑶I)。還提供了改善患者恢復力的方法。該方法包括施用治療有效量的化合物A。在某些實施方案中，該方法包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥劑，該其 它藥劑選自苯并二氮革類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去甲腎上腺素再 吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺1Α(5ΗΤ1Α)拮抗 劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷Α2Α受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑(ΜΑ0Ι)、鈉(Na)通 道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周α腎上腺素受體拮抗劑、中樞α腎上腺素激動劑、 中樞或外周β腎上腺素受體拮抗劑、NK-I受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF) 拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗劑、Y “氨基丁酸 (GABA)激動劑和部分D2激動劑。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種癥狀的頻率 和強度中的至少一種。在某些實施方案中，該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種征候群的頻 率和強度中的至少一種，其中該征候群選自再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度。在某些實施方案中，創(chuàng)傷后應激綜合征的至少一種體征、癥狀或征候群用下列的 至少一種來診斷或評價臨床-用藥PTSD評分表(CAPS)、臨床-用藥PTSD評分表第2部分 (CAPS-2)、兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分表(CAPS-CA)、事件評分表的影響(IES)、 事件評分表的影響-修訂本(IES-R)、臨床綜合印象評分表(CGI)、疾病的臨床綜合印象嚴 重度(CGI-S)、臨床綜合印象改進(CGI-I)、PTSD評分表的Duke綜合等級(DGRP)、PTSD評 分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I)、漢密爾頓焦慮評分表(HAM-A) ,PTSD的結構性訪談表 (SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、PTSD癥狀評分表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談 表(MINI) ,Montgomery-人Sberg抑郁等級評分表(MADRS)、Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓 抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾頓抑郁等級評分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老 年人抑郁清單(⑶S-30)和兒童抑郁指數(shù)(⑶I)。還提供了診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的方法。該方法包括給患者施用治療有效量的 化合物A和評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中的至少一種；以及如果化合物A降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種則診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙。在某些實施方案中，該患者是兒童、青少年或成人。多種評分表可以評價創(chuàng)傷后應激障礙(PTSD)以及盧非酰胺(rufinamde)和其它 治療法對該障礙的治療和預防的作用。它們是，例如但不限于，臨床-用藥PTSD評分表 (CAPS)、臨床-用藥PTSD評分表第2部分(CAPS-2)、兒童和青少年的臨床-用藥PTSD評分 表(CAPS-CA)、事件評分表的影響(IES)、事件評分表的影響-修訂本(IES-R)、臨床綜合印 象評分表(CGI)、疾病的臨床綜合印象嚴重度(CGI-S)、臨床綜合印象改進(CGI-I)、PTSD評 分表的Duke綜合等級(DGRP) ,PTSD評分表的Duke綜合等級改進(DGRP-I)、漢密爾頓焦慮 評分表(HAM-A)、PTSD的結構性訪談表(SI-PTSD)、PTSD訪談表(PTSD-I)、PTSD癥狀評分 表(PSS-I)、小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談表(MINI)、Montgomery-人Sberg抑郁等級評分表 (MADRS) ,Beck抑郁清單(BDI)、漢密爾頓抑郁評分表(HAM-D)、修訂的漢密爾頓抑郁等級評 分表(RHRSD)、成年人抑郁清單(MDI)、老年人抑郁清單(⑶S-30)和兒童抑郁指數(shù)(⑶I)。 這些方法通常通過訪談表或問卷表來評價的。在某些實施方案中，并非使用評分表的所有 部分。在某些實施方案中，該評分表被用于診斷和評價體征、癥狀、相關癥狀、或?qū)TSD的 日常生活的影響。在某些實施方案中，一個或多個評分表被用于診斷、評價或確認患者的創(chuàng) 傷后應激障礙。在某些實施方案中，評分表將通過對體征、癥狀或征候群的頻率和強度中的 至少一種進行打分來測定體征、癥狀、征候群。用于創(chuàng)傷后應激障礙評價的評分表的實例是各種版本的CAPS，包括CAPS、CAPS-I 和CAPS-2，其得分為17種下列項目的核心PTSD癥狀1.復發(fā)性和侵入性創(chuàng)傷記憶2.與創(chuàng)傷提醒物接觸時的痛苦3.事件復發(fā)時的行為或情感4.事件的復發(fā)性和痛苦夢想5.避免思考或情感的努力6.避免活動或情境的努力7.無能力回憶創(chuàng)傷或創(chuàng)傷局面8.顯著減少對重大活動的興趣9.與其它人分離或疏遠的情感10.受限制的愛好范圍11.前途渺茫的感覺12.入睡或睡眠困難13.易激惹或怒氣爆發(fā)14.集中精力困難15.警覺過度16.夸張的驚恐反應17.生理反應性問題還針對于癥狀對社會和職業(yè)功能或者日常生活的影響、自從以前施用CAPS 以來癥狀的改善、全部應答有效性、全部PTSD嚴重性、以及相關癥狀的頻率和強度。這些項 目是
18.對社會功能的影響19.對職業(yè)功能的影響20.總體改善(從早期測定時期以后)21.等級有效性22.總體改善23.因忠實或疏忽產(chǎn)生的內(nèi)疚24.幸存者內(nèi)疚25.殺人傾向(Homicidality)26.權威的幻滅27.絕望的感覺28.記憶缺陷29.悲傷和抑郁30.挫敗的感覺為了評價癥狀的頻率，交談者遵循標準問題，必要時澄清或重述。示例而非限制 性的標準問題是你曾經(jīng)有創(chuàng)傷性事件的不希望的回憶嗎？它們例如是什么？你記起了什 么？如果問題需要重述，則該交談者可以問例如以下的問題它們曾是在你覺醒或者僅是 在睡夢中時發(fā)生嗎？或者在過去的一個月(周)你多久會有一次這些記憶？得分0表示頻 率為從無，1表示1或2次，2表示一周1或2次，3表示一周若干次，4表示幾乎每天都有。為了評價癥狀的強度，交談者可以提出下列示例而非限制性的標準問題這些記 憶引起你多大的痛苦或不適？你是否能夠?qū)⑺鼈冎糜谀愕木裰饣蛘咚伎家恍┢渌鼏?題？你嘗試過多大努力？它們多大程度干擾你的生活？得分0表示為無，1表示輕的、最小 的痛苦或者活動中斷，2表示中度的、痛苦清楚地存在但仍然能夠控制的，一些活動中斷，3 表示嚴重的、相當大的痛苦，難以消除記憶，活動明顯中斷，4表示極度的、使人無能力的痛 苦，不能消除記憶，不能連續(xù)活動。在某些實施方案中，如果具有至少1的頻率以及至少2的強度時根據(jù)存在的癥狀 使用的該評分規(guī)則計數(shù)。在某些實施方案中，嚴重度得分是通過對每種癥狀總計頻率和強 度等級來計算。在某些實施方案中，根據(jù)CAPS版本計算所有項目的總體或全部得分。在某些實施 方案中，針對每一征候群計算總得分。在某些實施方案中，針對PTSD的核心癥狀計算總得 分。在某些實施方案中，將終點得分與基礎得分進行比較以確定創(chuàng)傷后應激障礙的嚴重度 的變化。在某些實施方案中，終點得分與基礎得分比較顯著降低被認為是PTSD的改善。在 某些實施方案中，CAPS、CAPS-1、CAPS-2或CAPS-CA的全部得分大于65是PTSD的表征。另一實例是IES，其評價15個項目7個項目測定干擾癥狀，8個項目測定回避癥 狀。自我評價的項目提問下列注釋的每一個正確的頻率有多少當我不想要時我考慮它，當 我考慮它或者想起它時我避免使我自己不安，我試圖從記憶中除去它，由于有關進入我心 中的圖像或者思想使我難以入睡或者保持睡眠，我有有關它的強烈情感的波動，我已夢到 了它，我遠離它的提醒物，它覺得它未發(fā)生或者不是真的，我試圖不談起它，關于它的圖像 進入我的腦海中，其它事情使我想起它，我注意到我仍然有許多關于它的情感但我不處理 它們，我試圖不想它，任何提醒物使得回憶起它們的情感，以及我的情感有些麻本木。這些
23項目通常與四點評分表有關0 ( 一點也不)、1 (很少)、3 (有時)和5 (經(jīng)常)。得分總數(shù)提 供了癥狀嚴重度或者全部主觀應激的全面評價。已經(jīng)提議，從0至8的得分處于亞臨床的 范圍，9-25為輕度的范圍，26-43為中等范圍，以及大于44為應激的嚴重范圍。在某些實施方案中，計算IES中的全部項目的總體或全部得分。在某些實施方案 中，對于每一征候群計算總得分。在某些實施方案中，將終點得分與基礎得分進行比較以確 定PTSD嚴重度的改變。在某些實施方案中，與基礎得分比較終點得分減少30%被認為PTSD 改善。IES-R，IES的一種版本，通過分解原始IES項目來改變IES，我難以入睡或者保持 睡眠分解成以下兩項我難以入睡以及我難以保持睡眠，并添加6個項目到該IES項目中。 這些添加的項目是我感到易怒和生氣，我神經(jīng)質(zhì)并且容易震驚，我發(fā)現(xiàn)我自己的行為或 情感雖然那時我恢復了，我集中精力困難，它的提醒物使得我有身體反應例如出汗、呼吸困 難、惡心或心跳加劇，以及我感到警醒或者警戒。該評分系統(tǒng)亦變?yōu)? ( —點也不)、1 (有一 些)、2(適度的)、3(完全有一點)和4(極度地)。在某些實施方案中，計算IES-R中的全部項目的總體或全部得分。在某些實施方 案中，對于每一征候群計算總得分。在某些實施方案中，將終點得分與基礎得分進行比較以 確定創(chuàng)傷后應激障礙嚴重度的改變。在某些實施方案中，在IES-R中與基礎得分比較終點 得分顯著減少被認為是創(chuàng)傷后應激障礙的改善。在DGRP-I評分表中，化合物A在治療創(chuàng)傷后應激障礙中的效果可通過測定在具有 1(非常大的改善)或2(很大的改善)的DGRP-I的DGRP-I中應答者的比率增加來評價。 在某些實施方案中，在DGRP-I中至少3的得分是創(chuàng)傷后應激的表征。在CGI中，化合物A治療創(chuàng)傷后應激障礙的效果可通過CGI-S、CGI-I和效能指數(shù) 來評價。例如，在某些實施方案中，治療之后具有1(非常大的改善)或2(很大的改善)的 CGI-I的CGI-I中應答者的比率增加表明該治療是有效的。在某些實施方案中，在CGI-I中 至少3的得分是創(chuàng)傷后應激障礙的表征。在某些實施方案中，在CGI中該效能指數(shù)可測定 化合物A用于治療創(chuàng)傷后應激障礙的效能。在HAMA-A中，為了評價焦慮或創(chuàng)傷后應激障礙，通常計算HAM-A中全部項目的總 體或全部得分。在某些實施方案中，HAM-A中將終點得分與基礎得分比較以確定焦慮和創(chuàng) 傷后應激障礙的嚴重度的改變。在某些實施方案中，HAM-A中與基礎得分比較終點得分顯 著減少被認為是焦慮和創(chuàng)傷后應激障礙的改善。在某些實施方案中，HAM-A中至少18的全 部得分是焦慮和創(chuàng)傷后應激障礙的表征。通常，化合物A或藥學可接受的衍生物將以治療有效量被施用，可以單獨或者與 另一治療劑組合施用。藥物組合物將是有用的，例如用于治療創(chuàng)傷后應激障礙。藥學可接受的衍生物包括酸、堿、烯醇醚和酯、酯、水合物、溶劑合物、和前藥形式。 選擇該衍生物以使得其藥動學性質(zhì)在至少一個性質(zhì)方面與相應中性藥劑相比更優(yōu)。該化合 物A可在形成之前被衍生化?；衔顰或藥學可接受的衍生物的治療有效量可以廣泛地改變，這取決于創(chuàng)傷后 應激障礙的嚴重度、受試者的年齡和相對健康、使用的化合物的效能以及其它因素。在某些 實施方案中，治療有效量為約0. 1毫克/kg(mg/kg)體重/天至約50mg/kg體重/天。在其 它實施方案中，該量為約1.0至約10mg/kg/天。因此，在某些實施方案中，對于70kg人的
24治療有效量為約7. 0至約3500mg/天，而在其它實施方案中，其為約70至約700mg/天。不需要過多的試驗并依賴個人知識以及本申請的公開內(nèi)容，治療此類疾病的領域 的技術人員將能夠確定化合物A用于創(chuàng)傷后應激障礙的治療有效量。通常，示例而非限制 性的，化合物A將以藥物組合物通過下列途徑之一施用口服、全身(例如，經(jīng)皮、鼻內(nèi)或通 過栓劑)或胃腸外(例如，肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下)。組合物可以示例而非限制性的采用下列 形式片劑、丸劑、膠囊劑、半固體、粉末、緩釋制劑、溶液、混懸液、酏劑、氣霧劑或任何其它 適宜的組合物，并且通常包含化合物A以及至少一種藥學可接受的賦形劑?？山邮艿馁x形 劑示例而非限制性的是無毒性的、輔助施用、并且不會不利地影響化合物的治療益處。此 類賦形劑可以是，例如，任何固體、液體、半固體，或者在氣霧劑組合物的情況下的氣體賦形 劑，該氣體賦形劑通常是本領域技術人員可得到的。固體藥物賦形劑示例而非限制性地包括淀粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、 明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂奶粉 等等。液體和半固體賦形劑可選自例如但不限于水、乙醇、甘油、丙二醇以及各種油類，包括 石油、動物、植物或合成來源的那些(例如，花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等)。優(yōu)選的液 體載體，特別是對于注射用溶液，示例而非限制性地包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和乙二醇 類。可以將壓縮氣體用于分散化合物呈氣霧形式。適用于此目的的惰性氣體示例而非限制 性的是氮氣、二氧化碳、氧化亞氮等。此外，藥學制劑可以示例而非限制性的含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化 劑、增甜劑、著色劑、調(diào)味劑、用于改變滲透壓的鹽類、緩沖劑、掩蔽劑或抗氧劑。在某些實施 方案中，它們還可以含有其它治療上有用的物質(zhì)，其它適宜的藥學載體以及它們的配方描 述于A. R. Alfonso Remington' s Pharmaceutical Sciences 1985，17th ed. Easton，Pa. Mack Publishing Company。化合物A在組合物中的量可以廣泛的改變，這取決于例如制劑類型、單位劑量大 小、賦形劑種類以及藥物科學領域技術人員已知的其它因素。通常，最終組合物將包含10% w至90% w的化合物，優(yōu)選25% w至75% w，其余為一種或多種賦形劑。優(yōu)選地，該藥物組 合物以單位劑量形式施用以用于連續(xù)治療，或者當特別需要癥狀的緩解時以單位劑量形式 任意施用?；衔顰或其藥學可接受的衍生物是與一種或多種上述藥劑同時、之前或之后施用。本發(fā)明通過以下非限制性實施例作進一步說明。 實施例實施例1進行臨床研究以證實化合物A在治療創(chuàng)傷后應激障礙(PTSD)中的效能和耐受性。該研究設計包括化合物A的8-周隨機、雙盲、安慰劑對照治療試驗以用于治療 PTSD。在簽署知情同意書并符合入組/排除標準之后，患者隨機接受化合物A或安慰劑 達8-周時間。研究期間，藥師保留隨機化記錄并確證安慰劑或化合物A(二者是外觀相似 的片劑)的順序?；颊叩陌Y狀、副作用和順應性每兩周評價一次。
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根據(jù)癥狀和副作用的出現(xiàn)，研究者可以以20_40mg增量增加藥物，只要能夠耐受， 直到達到最大治療益處。給藥為每天一次，除非每天兩次有較好耐受。順應性是在第4周 和第8周通過藥丸計數(shù)來評價的。在臨床就診期間給予患者支持性臨床治療。在緊急情況下一天24小時可通過電 話聯(lián)系到研究者。如果需要則可以更加經(jīng)常地探視患者。通過下列評價評分表測定效能功能總體評價(GAF)臨床醫(yī)生給藥的PTSD評分表(CAPS)疾病的臨床綜合印象嚴重度(CGI-S)臨床綜合印象改善(CGI-I)Davidson 創(chuàng)傷評分表(DTS)。漢密爾頓焦慮評分表(Ham-A)Montgomery-Asberg 抑郁等級評分表(MADRS)治療結果PTSD等級評分表(T0P-8)受試者入組標準是通過小型國際神經(jīng)精神醫(yī)學訪談表(MINI)和CAPS確認的PTSD的診斷年齡13歲或更大前4周無物質(zhì)濫用或依賴性(尼古丁和咖啡因除外)2周未用精神藥物(除外的是，氟西汀為4周)臨床正常的身體和實驗室檢查(允許將肝功能檢查(LFT)增加到正常限度的2. 5 倍。)可能懷孕(childbearing)的婦女必需使用醫(yī)學認可的節(jié)育方法，例如避孕套、節(jié) 育藥丸、D印o-Provera、或有殺精子劑的隔膜簽署知情同意書男性或女性，任何人種或倫理起源受試者排除標準為雙向性情感I型障礙、精神病或認知障礙的生活史活躍的自殺、殺人或精神病藥敏史，針對化合物A不穩(wěn)定的一般醫(yī)學條件關于自殺觀念的MADRS的#10號問題的得分彡6懷孕婦女、研究期間計劃懷孕或哺乳的婦女滿足僅一項退出標準即要求退出該研究。退出標準為該研究完成對化合物A或安慰劑治療的嚴重和不能耐受的副作用自殺觀念、殺人觀念或精神病癥狀的急性發(fā)展通過CGI-I中的得分7(非常多的惡化)測定的癥狀惡化參與者明確要求退出該研究需要額外的、除該研究方案中的特定的研究藥物或輔助藥物外的精神藥物，以用
26于控制受試者的精神病癥狀受試者在該研究過程中懷孕研究者判斷患者繼續(xù)在該研究中不再有最佳益處實施例2進行臨床研究以證實化合物A在預防PTSD中的效能和耐受性。該研究設計包括化合物A預防PTSD的開放-終結的(open-ended)隨機、雙盲、安 慰劑對照治療試驗。在簽署知情同意書并符合入組/排除標準之后，患者隨機接受化合物A 對安慰劑達8-周時間。研究期間，藥師保留隨機化記錄并確證安慰劑或化合物A( 二者是 外觀相似的片劑)的順序?；颊叩陌Y狀、副作用和順應性每兩周評價一次。根據(jù)癥狀和副作用的出現(xiàn)，研究者可以以20_40mg增量增加藥物，只要能夠耐受， 直到達到最大治療益處。給藥為每天一次，除非每天兩次有較好耐受。順應性是在第4周 和第8周通過藥丸計數(shù)來評價的。在臨床就診期間對患者給予支持性的臨床處理。在緊急情況下一天24小時可通 過電話聯(lián)系到研究者。如果需要則可以更加經(jīng)常地探視患者。通過下列評價評分表測定效能功能總體評價(GAF) 臨床醫(yī)生給藥的PTSD評分表(CAPS)疾病的臨床綜合印象嚴重度(CGI-S)臨床綜合印象改善(CGI-I)Davidson 創(chuàng)傷評分表(DTS)。漢密爾頓焦慮評分表(Ham-A)Montgomery-Asberg 抑郁等級評分表(MADRS)治療結果PTSD等級評分表(T0P-8)診斷和統(tǒng)計手冊IV(DSM-IV)受試者入組標準是PTSD的缺乏，通過MINI和CAPS確認年齡13歲或更大前4周無物質(zhì)濫用/依賴性(尼古丁和咖啡因除外)2周未用精神藥物(除外的是，氟西汀為4周)臨床正常的身體和實驗室檢查(允許將LFT增加到正常限度的2. 5倍。)可能懷孕的婦女必需使用醫(yī)學認可的節(jié)育方法(例如避孕套、節(jié)育藥丸、 D印o-Provera、或有殺精子劑的隔膜)簽署知情同意書男性或女性，任何人種或倫理起源排除標準是PTSD 的病史雙向性情感I型障礙、精神病或認知障礙的生活史活躍的自殺、殺人或精神病藥敏史，針對化合物A
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不穩(wěn)定的一般醫(yī)學條件關于自殺觀念的MADRS的#10號問題的得分彡6懷孕婦女、研究期間計劃懷孕或哺乳的婦女滿足僅一項退出標準即要求退出該研究。退出標準為該研究完成對化合物A或安慰劑治療的嚴重和不能耐受的副作用自殺觀念、殺人觀念或精神病癥狀的急性發(fā)展體征或癥狀的出現(xiàn)與PTSD的診斷相一致。參與者明確要求退出該研究需要額外的、除該研究方案中的特定的研究藥物或輔助藥物外的精神藥物，以用 于控制受試者的精神病癥狀。受試者在該研究過程中懷孕。研究者判斷患者繼續(xù)在該研究中不再有最佳益處。實施例3執(zhí)行臨床研究以證實化合物A組合治療法在PTSD治療中的效能和耐受性。該研究設計包括化合物A用于PTSD治療的8_周隨機、雙盲、安慰劑對照治療試 驗。在簽署知情同意書并符合入組/排除標準之后，患者隨機接受化合物A或安慰劑達 8-周時間?；颊咭嗫山邮苤委熡行┝康倪哌蜞?、丙戊酸鹽、卡馬西平或托吡酯并聯(lián)用化合 物A或安慰劑。研究期間，藥師保留隨機化記錄并確證安慰劑或化合物A( 二者是外觀相似的片 劑)的順序?；颊叩陌Y狀、副作用和順應性每兩周評價一次。根據(jù)癥狀和副作用的出現(xiàn)，研 究者以20_40mg增量增加藥物，只要能夠耐受，直到達到最大治療益處。給藥為每天一次， 除非每天兩次有較好耐受。順應性是在第4周和第8周通過藥丸計數(shù)來評價的。在臨床就診期間對患者給予支持性的臨床處理。在緊急情況下一天24小時可通 過電話聯(lián)系到研究者。如果需要則可以更加經(jīng)常地探視患者。通過下列評價評分表測定效能功能總體評價(GAF)臨床醫(yī)生給藥的PTSD評分表(CAPS)疾病的臨床綜合印象嚴重度(CGI-S)臨床綜合印象改善(CGI-I)Davidson 創(chuàng)傷評分表(DTS)。漢密爾頓焦慮評分表(Ham-A)Montgomery-Asberg 抑郁等級評分表(MADRS)治療結果PTSD等級評分表(T0P-8)受試者入組標準是PTSD的診斷，通過MINI和CAPS確認年齡13歲或更大前4周無物質(zhì)濫用/依賴性(尼古丁和咖啡因除外)2周未用精神藥物(除外的是，氟西汀為4周)
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臨床正常的身體和實驗室檢查(允許將LFT增加到正常限度的2. 5倍。)可能懷孕的婦女必需使用醫(yī)學認可的節(jié)育方法(例如避孕套、節(jié)育藥丸、 D印o-Provera、或有殺精子劑的隔膜)簽署知情同意書男性或女性，任何人種或倫理起源受試者排除標準為雙向性情感I型障礙、精神病或認知障礙的生活史活躍的自殺、殺人或精神病藥敏史，針對化合物A不穩(wěn)定的一般醫(yī)學條件關于自殺觀念的MADRS的#10號問題的得分彡6懷孕婦女、研究期間計劃懷孕或哺乳的婦女滿足僅一項退出標準即要求退出該研究。退出標準為該研究完成對化合物A或安慰劑治療的嚴重和不能耐受的副作用自殺觀念、殺人觀念或精神病癥狀的急性發(fā)展通過CGI-I中的得分7(非常多的惡化)測定的癥狀惡化參與者明確要求退出該研究需要額外的、除該研究方案中的特定的研究藥物或輔助藥物外的精神藥物，以用 于控制受試者的精神病癥狀受試者在該研究過程中懷孕研究者判斷患者繼續(xù)在該研究中不再有最佳益處實旋例4進行臨床研究以證實化合物A在治療兒童PTSD中的效能和耐受性。該研究設計包括化合物A用于治療PTSD的8_周隨機、雙盲、安慰劑對照治療試驗。在簽署知情同意書并符合入組/排除標準之后，患者隨機接受化合物A或安慰劑 達8-周時間。研究期間，藥師保留隨機化記錄并確證安慰劑或化合物A(二者是外觀相似 的片劑)的順序?；颊叩陌Y狀、副作用和順應性每兩周評價一次。根據(jù)癥狀和副作用的出現(xiàn)，研究者可以以20_40mg增量增加藥物，只要能夠耐受， 直到達到最大治療益處。給藥為每天一次，除非每天兩次有較好耐受。順應性是在第4周 和第8周通過藥丸計數(shù)來評價的。在臨床就診期間對患者給予支持性的臨床處理。在緊急情況下一天24小時可通 過電話聯(lián)系到研究者。如果需要則可以更加經(jīng)常地探視患者。通過下列評價評分表測定效能功能總體評價(GAF)臨床醫(yī)生給藥的PTSD評分表(CAPS)臨床醫(yī)生給藥的PTSD評分表(CAPS-CA)疾病的臨床綜合印象嚴重度(CGI-S)
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臨床綜合印象改善(CGI-I)Davidson 創(chuàng)傷評分表(DTS)。漢密爾頓焦慮評分表(Ham-A)Montgomery-Asberg 抑郁等級評分表(MADRS)治療結果PTSD等級評分表(T0P-8)受試者入組標準是PTSD的診斷，通過MINI和CAPS確認12歲或更小前4周無物質(zhì)濫用/依賴性(尼古丁和咖啡因除外)2周未用精神藥物(除外的是，氟西汀為4周)臨床正常的身體和實驗室檢查(允許將LFT增加到正常限度的2. 5倍。)可能懷孕的婦女必需使用醫(yī)學認可的節(jié)育方法(例如避孕套、節(jié)育藥丸、 D印o-Provera、或有殺精子劑的隔膜)簽署知情同意書男性或女性，任何人種或倫理起源受試者排除標準為雙向性情感I型障礙、精神病或認知障礙的生活史活躍的自殺、殺人或精神病藥敏史，針對化合物A不穩(wěn)定的一般醫(yī)學條件關于自殺觀念的MADRS的#10號問題的得分彡6懷孕婦女、研究期間計劃懷孕或哺乳的婦女滿足僅一項退出標準即要求退出該研究。退出標準為該研究完成對化合物A或安慰劑治療的嚴重和不能耐受的副作用自殺觀念、殺人觀念或精神病癥狀的急性發(fā)展通過CGI-I中的得分7(非常多的惡化)測定的癥狀惡化。參與者明確要求退出該研究需要額外的、除該研究方案中的特定的研究藥物或輔助藥物外的精神藥物，以用 于控制受試者的精神病癥狀受試者在該研究過程中懷孕研究者判斷患者繼續(xù)在該研究中不再有最佳益處實施例5牛和人多巴胺-β _羥化酶活性是通過酪胺到酚乙醇胺的轉化來分析的。牛腎上 腺多巴胺-β-羥化酶得自Sigma Chemicals (St Louis，M0，USA)，而人多巴胺-β -羥化酶 是從成神經(jīng)細胞瘤細胞系SK-N-SH的培養(yǎng)基中純化的。該分析是在ρΗ 5. 2和32°C下在介質(zhì) 中進行的，該介質(zhì)含有0. 125M NaAcUOmM富馬酸鹽、0. 5-2 μ M CuS04、0. Img. πιΓ1過氧化氫 酶、0. ImM酪胺和4mM抗壞血酸。在典型的分析中，0. 5-1毫單位的酶被加至反應混合物中， 接著加入含有過氧化氫酶、酪胺和抗壞血酸的底物混合物以引發(fā)反應(終體積為200 μ 1)。
30使樣品與或不與適宜濃度的內(nèi)匹司他(S-對映體)或(R)_5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1， 2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3-二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽(R-對映體)在37°C下孵育 30-40分鐘。通過終止溶液將反應猝滅，該終止溶液含有25mM EDTA和240 μ M 3-羥酪胺 (內(nèi)標)。通過反相高壓液相色譜法(HPLC)使用280ηΜ處的紫外檢測針對酚乙醇胺進行樣 品分析。進行HPLC色譜運行，流速為1ml. mirT1，使用LiChroCART 125-4RP-18柱，等度洗 脫使用IOmM酸性酸、IOmM 1-庚烷磺酸、12mM磷酸四丁基銨和10%甲醇。根據(jù)對照計算剩 余百分活性，使用內(nèi)標校正并擬合成非線性四參數(shù)濃度-應答曲線。內(nèi)匹司他對12種選擇的酶和受體的活性使用建立的分析法測定。個別受體放射 配體結合試驗的細節(jié)可見于Wong et al(1993)。每種酶分析法的根本原理的簡要說明給 于圖1。通過迭代曲線擬合成四參數(shù)邏輯方程來分析結合數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程 從IC5tl值計算Ki值。酶抑制活性表示為IC5tl(產(chǎn)生50%酶活性的抑制所需的濃度)。雄 性 SHR(15-16 周齡，Charles River, Wilmington, MA, USA)被用于該研究。在研究當天， 動物稱重，并隨機分為在間隔12小時的三個連續(xù)時間給予載劑(對照)或適宜劑量的內(nèi) 匹司他(3，10，30 或 IOOmg. kg、po)或(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3-二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽(SOmg.kg^po)。在第三次給藥之后6小 時，大鼠用氟烷處死，斷頭并迅速收集組織(大腦皮層、腸系膜動脈和左心室)，稱重，冰冷 的高氯酸中(0.4M)，在液氮中冷凍，并保存于-70°C，直至后續(xù)分析。為了定量去甲腎上腺 素和多巴胺濃度，在4°C下，通過短暫的聲處理將組織勻漿，再在13，OOOrpm下離心30分鐘。 使用電化學檢測經(jīng)HPLC針對去甲腎上腺素和多巴胺分析摻入3，4- 二羥基芐胺(內(nèi)標)的 上清。雄性比格狗(10_16kg，MarshallFarms USA Inc，North Rose, NY, USA)被用于該 研究。在研究當天，對狗稱重并隨機分派口服給予空膠囊(對照)或適宜劑量的內(nèi)匹司他 (0. 05，0. 5，1. 5或5mg. kg—1 ；po,b. i. d.)達5天。在第5天第一次給藥之后6小時，將狗用 戊巴比妥處以安樂死，并迅速收集組織(大腦皮層、腎動脈、左心室)。隨后并如上文所述處 理組織，并對去甲腎上腺素和多巴胺進行分析。雄性比格狗被隨機分派口服給予空膠囊(對照)或內(nèi)匹司他Omg.kg—1，po, b. i. d.)達15天。第一次給藥后6小時，每天抽取靜脈血樣品，用于測定多巴胺和去甲腎上 腺素的血漿濃度。將樣品收集到含有肝素和谷胱甘肽的試管中，在_4°C下離心，再將分離的 血漿保存于-70°C，直到分析。合成內(nèi)匹司他((S)-5_氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘_2_基)_1， 3-二氫咪唑-2-硫酮鹽酸鹽)和相應的R-對映體((R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2， 3,4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)。在涉及SHR的研究中，將藥 物溶解于蒸餾水中，并用灌食針口服給予。在狗研究中，將藥物填充到膠囊中，并口服給藥。 所有劑量均以游離堿當量表示。所有數(shù)據(jù)表示為均值士 s. e. m。組織和血漿兒茶酚胺數(shù)據(jù)分析分別使用非參數(shù)單 因素方差分析(ANOVA)或雙因素AN0VA，接著使用FisherLSD檢驗進行配對比較。P < 0. 05 被認為是統(tǒng)計學顯著的。內(nèi)匹司他(S-對映體)和(R)-5_氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽(R-對映體)產(chǎn)生牛和人多巴胺_ β _羥
31化酶活性的濃度_依賴性抑制。針對內(nèi)匹司他計算的IC5tl，牛和人酶分別為8. 5士0. SnM和 9. 0士0. 8nM。(R) -5-氨基甲基 (5，7- 二氟-1,2,3,4-四氫萘-2-基)_2，3- 二氫-2-硫 代-IH-咪唑鹽酸鹽此之于內(nèi)匹司他效能稍低(牛和人酶的IC5tl分別為25. 1 士0.6nM和 18. 3 士 0. 6nM)。對于一系列其它酶(酪氨酸羥化酶、乙酰CoA合成酶、?；鵆oA-膽固醇乙基轉移 酶、Ca2+/鈣調(diào)蛋白激酶II、環(huán)氧酶-I、HMG-CoA還原酶、中性肽鏈內(nèi)切酶、氧化氮合成酶、磷 酸二酯酶III、磷脂酶A2和蛋白激酶C)和神經(jīng)遞質(zhì)受體(α 1Α、α 1Β、α 2Α、α 2Β、β i和β 2腎 上腺素受體、M1蕈毒堿受體、D1和D2多巴胺受體、μ阿片受體、5-Η \Α、5-ΗΤ2Α和5_HT2e血清 素受體)，內(nèi)匹司他具有可忽略不計的親和力(IC5tl或Ki > 10 μ M)。對照動物中的基礎組織兒茶酚胺含量(μ g. g-1濕重)如下腸系膜動脈(去甲腎 上腺素，10. 40士 1.03 ；多巴胺，0. 25士0. 02)，左心室(去甲腎上腺素，1. 30士0. 06 ；多巴胺， 0.02士0.00)以及大腦皮層(去甲腎上腺素，0.76士0.03 ；多巴胺，0. 14士0. 01)。在三種被 研究的組織中，內(nèi)匹司他產(chǎn)生劑量依賴性的去甲腎上腺素含量降低以及多巴胺含量和多巴 胺/去甲腎上腺素比率升高(圖2和3)。圖2顯示了內(nèi)匹司他在SHR中的腸系膜動脈(A)、 左心室(B)和大腦皮層(C)中對組織去甲腎上腺素(0)和多巴胺(口)含量的作用。數(shù)據(jù) 表示為均值士s. e.m;n = 7-9只/組。*p < 0. 05，與對照(0)比較。圖3顯示了內(nèi)匹司他 在SHR中的腸系膜動脈(0)、左心室(口 )和大腦皮層(Δ )中對組織多巴胺/去甲腎上腺 素比率的作用。數(shù)據(jù)表示為均值士 s. e.m，η = 7-9只/組。*ρ<0.05，與對照(0)比較。在腸系膜動脈和左心室中的劑量為彡3mg. kg—1時，但在大腦皮層中的劑量僅為30 和IOOmg. kg—1時，這些變化達到了統(tǒng)計學顯著性(ρ < 0. 05)。在研究的最高劑量時(IOOmg. kg_\ po)，在腸系膜動脈、左心室和大腦皮層中，去甲腎上腺素降低分別為47%、35%、42%， 多巴胺增加分別為820%、800%和86%。當在30mg. kg—1，po試驗時，與R-對映體((R) -5-氨 基甲基-1-(5，7- 二氟-1，2，3,4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽) 相比，S-對映體(內(nèi)匹司他)在腸系膜動脈和左心室中，在兒茶酚胺含量上得到顯著更大 的改變(圖7)。圖7顯示了內(nèi)匹司他和(R)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽在30mg. kg—1 ；po時在SHR的腸系膜動脈、 左心室和大腦皮層中，對去甲腎上腺素含量、多巴胺含量和多巴胺/去甲腎上腺素比率的 作用。數(shù)據(jù)表示為平均值+/-sem。η = 9只/組。*ρ < 0. 05，與對照比較 ’#ρ < 0. 05，與 內(nèi)匹司他比較。在對照動物中基礎組織兒茶酚胺含量(yg.g—1濕重)如下腎動脈(去甲腎上 腺素，10. 7 士 1.05 ；多巴胺，0. 22 士 0.01)、左心室(去甲腎上腺素，2. 11 士 0. 18 ；多巴胺， 0.07士0.03)和大腦皮層(去甲腎上腺素，0.26士0.02 ；多巴胺，0.03士0.00)。當與對照動 物比較時，在被研究的三種組織中，內(nèi)匹司他產(chǎn)生了劑量依賴性的去甲腎上腺素含量降低 以及多巴胺含量和多巴胺/去甲腎上腺素比率升高(圖4和5)。圖4顯示了在比格狗的腎 動脈(A)、左心室(B)和大腦皮層(C)中，內(nèi)匹司他對組織去甲腎上腺素(0)和多巴胺(口) 含量的作用。數(shù)據(jù)表示為均值士 s.e.m;n = 8只/組。*p< 0.05，與對照(0)比較。圖5 顯示了在比格狗的腎動脈(0)、左心室(口)和大腦皮層(Δ )中，內(nèi)匹司他對組織多巴胺 /去甲腎上腺素比率的作用。數(shù)據(jù)表示為均值士s.e.m，n = 8只/組。*p<0.05，與對照 (0)比較。
32
在三種組織中在> 0. lmg. kg—1.天―1的劑量下，這些變化達到了統(tǒng)計學顯著性(ρ < 0. 05)。在腎動脈、左心室和大腦皮層中，在研究的最高劑量時(5mg. kg-1，b. i. d.，po)， 去甲腎上腺素降低分別為88%、91%和96%，多巴胺增加分別為627%,700%^P 166%。 在兩組動物中兒茶酚胺的基線濃度相互間無顯著性差異血漿去甲腎上腺素和多巴胺濃 度，在對照組中分別為460. 3 士 59. 6和34. 4 士 11. 9pg. ml—1，在內(nèi)匹司他-治療中分別為 401. 9士25. 5 和 41. 1 士8. Spg.mr1。當與對照組比較時，內(nèi)匹司他(2mg. kg^b. i.d，po)產(chǎn) 生了顯著的去甲腎上腺素血漿濃度降低以及多巴胺和多巴胺/去甲腎上腺素比率血漿濃 度升高(圖6)。圖6顯示了在比格狗中內(nèi)匹司他對去甲腎上腺素(A)、多巴胺⑶和多巴 胺/去甲腎上腺素比率(C)的血漿濃度的作用。對照狗(0)；內(nèi)匹司他治療狗(·)。數(shù)據(jù) 表示為均值士 s.e.m;n = 8只/組。*p < 0.05，與對照比較。在給藥第6天觀察到去甲 腎上腺素的血漿濃度峰值降低(52% )，而在給藥第7天觀察到多巴胺的血漿濃度峰值增加 (646% )。通過藥理學方式交感神經(jīng)功能的抑制調(diào)節(jié)作用對于充血性心力衰竭的治療是 引人注目的治療靶標，原因是此系統(tǒng)被提高的活性與該疾病的進行性惡化有關。本研究 的目的是藥理學表征內(nèi)匹司他的作用，該內(nèi)匹司他是一種在交感神經(jīng)中通過抑制多巴 胺_ β _羥化酶調(diào)節(jié)去甲腎上腺素合成的化合物。內(nèi)匹司他顯示是體外人和牛多巴胺_羥化酶的有效抑制劑。該化合物的抑制 作用是立體特異性的，因為S-對映體(內(nèi)匹司他)比R-對映體((R)_5-氨基甲基-1-(5， 7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)勉強但顯著地更 有效。內(nèi)匹司他對多巴胺_羥化酶顯示出高度的選擇性，因為該化合物對12種其它酶 和13種神經(jīng)遞質(zhì)受體具有可以忽略的親和力。在收到去甲腎上腺素能神經(jīng)感應的組織中，多巴胺羥化酶的體內(nèi)抑制作用 期望產(chǎn)生高水平的底物(多巴胺)和低水平的產(chǎn)物(去甲腎上腺素)。這種期望已在試驗 中證實，所述試驗研究了內(nèi)匹司他對在體內(nèi)的中樞和外周組織中兒茶酚胺水平的作用。在 SHR和比格狗中，內(nèi)匹司他在外周(腸系膜或腎動脈，左心室)和中樞(大腦皮層)組織中 產(chǎn)生劑量依賴性的去甲腎上腺素含量降低以及多巴胺含量升高。在此方面，(R)_5-氨基甲 基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽比內(nèi)匹 司他的效能低，這與前面的對映體對該酶的較低IC5tl相一致。盡管多巴胺/去甲腎上腺素 比率亦有升高，但并未顯示出化學計量的用多巴胺替代去甲腎上腺素。此發(fā)現(xiàn)最有可能的 解釋是，多巴胺的組織水平已被低估，原因是多巴胺的神經(jīng)元內(nèi)代謝。內(nèi)匹司他改變大腦皮層中兒茶酚胺水平的能力表明，藥物確實穿透了血腦屏障。 在狗中，大腦皮層中的兒茶酚胺改變量顯示出與外周組織相似。然而，在SHR中，內(nèi)匹司他 在低劑量下(彡IOmg. kg—1)在外周組織中產(chǎn)生去甲腎上腺素和多巴胺含量的顯著改變，但 未影響大腦皮層中的兒茶酚胺。這表明，至少在SHR中，該藥物確實具有適度的外周選擇 性。我們還顯示，內(nèi)匹司他減弱了交感神經(jīng)介導的心血管反應并降低了 SHR中的血壓，但不 影響運動活動(Hegde et al. , 1996 a & b)；這些發(fā)現(xiàn)將在另外的文稿中報道。血漿去甲腎上腺素濃度提供全面的交感神經(jīng)活性的有用度量法，盡管此參數(shù)可能 受兒茶酚胺的神經(jīng)元攝取和代謝清除改變的影響。血漿中去甲腎上腺素的基線濃度在狗中 令人驚奇地升高了，并且有可能是一種由放血取血操作誘導的初始應激的反射。然而，與對照組相比，內(nèi)匹司他產(chǎn)生了血漿去甲腎上腺素濃度的顯著降低，這與減少遞質(zhì)合成和釋放 相一致，盡管不會扣減間接作用，該間接作用繼發(fā)于神經(jīng)元攝取或代謝清除的促進作用。由 于釋放的去甲腎上腺素代表小部分的總神經(jīng)元去甲腎上腺素貯藏，僅在現(xiàn)有貯藏的兒茶酚 胺充分耗盡之后，去甲腎上腺素生物合成的抑制劑才會影響去甲腎上腺素釋放。相應地，在 給予內(nèi)匹司他4天以前血漿去甲腎上腺素濃度降低不會達到統(tǒng)計學顯著性，這表明交感神 經(jīng)系統(tǒng)逐漸調(diào)節(jié)作用。應當理解，單獨的血漿去甲腎上腺素濃度的測定不能用來解釋去甲 腎上腺素釋放的區(qū)別性差異(Esler et al.，1984)，這強調(diào)了在將來的研究中，進行器官特 異性去甲腎上腺素外流速率測定的需要。身體成長的證據(jù)表明，充血性心力衰竭中的交感神經(jīng)系統(tǒng)長期激活是一種適應不 良行為反應。此爭論由顯示卡地洛爾在充血性心力衰竭患者關于長期發(fā)病率和死亡率中的 有益效果的臨床試驗所支持。然而，應當指出，大多數(shù)患者確實需要某種水平的交感神經(jīng)驅(qū) 動，以支持心血管內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。確實，β-阻滯劑包括卡地洛爾的治療價值可以受它們趨向 于引起血液動力學惡化特別是在治療開始期間的限制。這種不希望的作用，它們是由交感 神經(jīng)支持的突然停藥所引起，需要小心劑量調(diào)整。多巴胺羥化酶的抑制劑例如內(nèi)匹司 他可能由于下列原因而缺乏這種不需要的作用。首先，此類藥物可能會減弱但不會消除去 甲腎上腺素釋放；其次，它們產(chǎn)生該系統(tǒng)的逐漸調(diào)整從而消除對劑量調(diào)整的需求。內(nèi)匹司他 超出β _阻滯劑的其它優(yōu)點在于，它提高多巴胺水平，該多巴胺水平通過多巴胺受體的激 動作用可能對腎功能例如腎血管舒張、利尿和尿鈉排泄有有益的作用?？傊?，內(nèi)匹司他是一種有效的、選擇性的并且口服有效的多巴胺羥化酶抑制 劑，其可能在與交感神經(jīng)系統(tǒng)過度活化有關的心血管障礙的治療中有價值。實施例6內(nèi)匹司他(2a)的合成(圖8和圖9)。給自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常狗口服 施用2a會產(chǎn)生有效的并且劑量依賴性的增加在外周動脈(腎或腸系膜)、左心室和大腦皮 層中的組織多巴胺(DA)/去甲腎上腺素(NE)比率。給正常狗長期口服施用2a還會產(chǎn)生了 血漿DA/NE比率的持續(xù)增加。在清醒SHR中，急性口服施用2a產(chǎn)生劑量依賴性的和長效的 (> 4h)抗高血壓作用，并且還減弱了節(jié)前交感神經(jīng)刺激的加壓應答。血清T3和T4水平不 受劑量(6.2mg/kg，po，b. i.d.達10天)影響，該劑量升高了腸系膜動脈中的多巴胺/去甲 腎上腺素比率。根據(jù)其有效調(diào)節(jié)交感神經(jīng)驅(qū)動心血管組織的能力，2a目前用于治療充血性 心力衰竭臨床評價法。充血性心力衰竭(CHF)在美國是死亡率的首要因素。CHF的特征是交感神經(jīng)系統(tǒng) (SNS)和腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的顯著激活。這兩種神經(jīng)激素系統(tǒng)的同時激活越來 越與CHF的永存(perpetuation)和發(fā)展(progression)有關。阻斷這些神經(jīng)激素系統(tǒng)的 作用的治療干涉有可能有利地改變CHF的自然歷史。事實上，阻斷血管緊張素II形成的血 管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑顯示出降低CHF患者的發(fā)病率和死亡率。然而，ACE抑制劑 具有有限的間接的減弱該SNS的能力。用腎上腺素受體拮抗劑抑制SNS是一種目前在 臨床評價中的有希望的方法。直接調(diào)節(jié)SNS的選擇性策略是通過多巴胺β-羥化酶(DBH) 的抑制來抑制去甲腎上腺素(NE)生物合成，該酶發(fā)揮從NE到多巴胺(DA)的轉化的作用。 DBH的抑制作用將有望降低NE的組織水平并升高DA的組織水平，從而增加組織DA/NE比 率。此方法具有超過腎上腺素受體拮抗劑的潛在益處，例如降低α-腎上腺素受體的
34刺激以及提高DA水平，這可以產(chǎn)生腎臟血管舒張、尿鈉排泄和降低醛固酮釋放。以前的DBH 抑制劑例如鐮胞菌酸和SKF 102698具有例如低效價和特異性的缺點，這排除了它們在心 力衰竭方面的臨床開發(fā)。本實施例顯示2a (內(nèi)匹司他)相對于SKF 10269是一種有效的和選擇性的DBH抑 制劑。2a的制備(流程I)是在Terashima7描述的條件下基于四氫萘酮3(得自3，5_ 二氟 苯基乙酰氯與乙烯在CH2Cl2中在-65°C下的AlCl3-催化的Friedel-Crafts反應)的手性還 原(LAH，(-) -1R，2S-N-甲基麻黃堿，2-乙基氨基吡啶)，得到R- (+) _四氫萘酚4a (92-95 % ee)。4a到R- (+)-甲磺酸酯5a的轉化，接著與疊氮化鈉反應，得到疊氮化物6a和二氫化萘 7的混合物(9 1)。將該疊氮化物氫化，產(chǎn)物用無水HCl處理，得到S-(-)-胺鹽酸鹽8a， 通過Strecker反應(甲醛亞硫酸氫鹽復合物和KCN)轉化成S_(_)_氨基腈9a。雜環(huán)IOa 的形成是通過氨基腈9a的相繼二甲?；又罄m(xù)用硫氰酸處理而實現(xiàn)的。腈完全水解得 到相似量的伯胺11a。腈IOa到胺2a的還原(93-96% ee)是使用LAH/THF實現(xiàn)的。該對 映體2b(91. 6% ee)通過同樣的上述途徑使用(+)_1S，2R_N_甲基麻黃堿作為手性助劑在酮 3的Terashima還原中得到。在4a，b以及由此2a，b中的手性中心的絕對構型基于以前描 述的S-(-)-2-四氫萘酚的先前文獻。四氫萘2a 被證實是牛(IC50 = 8. 5 士0. 8nM)和人(IC50 = 9. 0 士0. 8nM)DBH 的競爭 性抑制劑。R-對映體 2b (IC50S = 25. 1 士0. 6ηΜ ;18· 3 士0. 6nM)和 1 (IC50S = 67. 0 士4. 2nM ； 85.0士3.7nM)分別是牛和人酶較低的有效抑制劑?；衔?a對一系列其它酶和神經(jīng)遞質(zhì) 受體顯示出弱的親和力(圖10)。這些數(shù)據(jù)表明，2a在體外是一種有效的和高度選擇性的 DBH的抑制劑。此外，S-對映體比R-對映體效價高約2-3倍，這表明具有立體選擇性。2a、2b和1的體內(nèi)生物化學作用是在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常比格狗中評 價的?？诜┯?a在SHR(圖11A)和狗(圖11B)中的動脈(腸系膜或腎)、左心室和大 腦皮層中產(chǎn)生劑量依賴性的DA/NE比率增加。在試驗的最大劑量下(在SHR中為IOOmg/ kg，在狗中為5mg/kg)，在動脈、左心室和大腦皮層中，DA/NE比率的最大增加分別為14、11 和3. 2倍(在SHR中)以及95、151和80倍(在狗中)。當在SHR中以30mg/kg試驗時，在 腸系膜動脈、左心室和大腦皮層中，SKF 102698(1)增加DA/NE比率分別為5. 5-倍、3. 5-倍 和2. 7-倍，而2a在相同劑量時增加比率分別為8. 3,7. 5和1. 5倍。在SHR中，在腸系膜動 脈、左心室和大腦皮層中，30mg/kg的R-對映體2b在DA/NE比率方面分別僅產(chǎn)生2. 6,3. 5 和1. 1倍增加。這些數(shù)據(jù)表明，2a在SHR和狗中均產(chǎn)生了期望的生物化學作用，但是在后一 種物種中更為有效。此外，在SHR中，2a比其R-對映體2b和SKF 102698 (1)在SHR中更有 效。2a(14. 5天治療)對血漿DA/NE比率的長期作用在正常狗中進行研究。口服施用 2a(2mg/kg ；b. i. d)產(chǎn)生DA/NE比率的顯著增加，在約6_7天時達到其峰效應，然后在7_14 天平臺延至新的穩(wěn)態(tài)(圖12)。2a的體內(nèi)血液動力學活性在清醒的、束縛的SHR中進行進一步評價，該SHR是一 種對心血管組織具有高度交感神經(jīng)驅(qū)動的模型。口服給予2a導致劑量依賴性的抗高血壓 作用(圖13)。平均血壓53士4mmHg的最大降低(33%降低，相對于載劑對照)在10mg/kg 劑量下觀察到。該應答出現(xiàn)緩慢，在3-4h達到其平臺。在最高劑量(30mg/kg)下抗高血壓 效能喪失的確切理由目前尚不清楚。除了在10和30mg/kg下仍然稍有顯著降低(分別為
359.8和10.5%)外，心率未受明顯影響。根據(jù)本研究，將大鼠腦脊髓刺毀，2a對脊髓的節(jié)前 神經(jīng)刺激(PNS)的加壓應答的作用是在給藥后5小時評價的。頻率-加壓應答曲線以劑量 依賴性方式顯著向右偏移(P < 0. 05)(在頻率-應答曲線中最大偏移 5倍)。對PNS的 心率應答無顯著影響。這些數(shù)據(jù)表明，2a抑制對脈管系統(tǒng)的交感神經(jīng)驅(qū)動，并且是其在SHR 中的抗高血壓作用的可能機制。由于2a的雜環(huán)部分在結構上與甲巰咪唑相似，該甲巰咪唑是一種已知有 效的哺乳動物甲狀腺功能的抑制劑，以2.0和6. 2mg/kg, po, b. i.d的劑量在碘缺乏 Sprague-Dawley大鼠(η = 9-12)中評價2a對甲狀腺功能的作用達10天。甲巰咪唑(lmg/ kg, po, b. i.d.)，用作陽性對照，在給藥后4小時造成顯著減少T3的血清水平(第3天， 31 %，ρ < 0. 05 ；第7和9天，42%和44%，ρ < 0. 01)和T4的血清水平(第3和7天，46% 和58%，ρ < 0.01)，而2a顯示在整個研究中無顯著作用(第3、7和9天)。2a的兩個劑 量顯著升高腸系膜動脈中的DA/NE比率(ρ < 0. 01，相對于載劑對照)，但在第10天在最終 給藥后4小時在皮質(zhì)中未顯示升高。本研究發(fā)現(xiàn)表明，2a(內(nèi)匹司他)是一種有效的、選擇性的并且口服有效的DBH的 抑制劑。該化合物在動物模型中還沒有顯著的行為作用，并且這些發(fā)現(xiàn)將是未來發(fā)表的論 題。由于化合物2a(內(nèi)匹司他)有效調(diào)節(jié)對心血管組織的交感神經(jīng)驅(qū)動，它是目前進行針 對CHF治療的開發(fā)。圖 9 顯示了 a(a)i =SOCl2 ；ii =AlCl3, CH2Cl2,乙烯，-65°C ； (b) (-)_1R，2S-N-甲基 麻黃堿，2-乙基氨基吡啶，IM LAH/Et20, < -60°C用于R-對映體或(+)_1S，2R_N-甲基麻黃 堿,2-乙基氨基吡啶，IM LAH/Et20, < _60°C用于 S-對映體；(c)MsCl,Et2O,Et3N,-15°C ； (d) NaN3, DMS0，50°C ； (e) i =H2,10% Pd/C, Et0Ac，60psi ；ii :1M HCl/Et20 ； (f)NaOH,甲醛-亞 硫酸氫鈉復合物，KCN, H2O, 50-80 0C ； (g) i 甲酸正丁酯，120°C ；ii :t_BuOK，甲酸乙酯， THF, -15°C ；iii :1M HCl, EtOH, KSCN ； (h) i :1M LAH/THF, 20°C ；ii :HC1/Et20, MeOH0圖10顯示了描述內(nèi)匹司他對DBH和一系列選擇的酶和受體的相互作用的表格。圖11 :(A)_在自發(fā)性高血壓大鼠中2a對組織DA/NE比率的作用。動物口服給藥， 間隔12小時，第三次給藥后6小時收集組織。*p<0.05，與安慰劑(載劑)比較。(B)-在正常比格狗中2a對組織DA/NE比率的作用。動物口服給藥，一天2次，達 4. 5天，在第5天第一次給藥后6小時收集組織。*p< 0.05，與安慰劑(空膠囊)比較。DA和NE濃度是通過HPLC用電化學檢測分析的。所有數(shù)據(jù)表示為均值士平均標 準誤。η = 9/組。圖12 在正常比格狗中長期施用2a對血漿DA/NE比率的作用。動物口服給藥， b. i.d.，達14. 5天。在每一天第一次給藥后6小時采集血樣。與安慰劑組相比，在所有時 間點2a產(chǎn)生DA/NE比率的顯著(ρ < 0. 05)增加。血漿中的DA和NE濃度是通過HPLC用 電化學檢測分析的。所有數(shù)據(jù)表示為均值士平均標準誤。η = 8/組。圖13 口服施用2a對清醒的、束縛的自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的平均動脈壓的作 用。SHR輕輕用醚麻醉，再用儀器測定動脈壓并施用藥物。將動物置于固定器上并使之恢 復30-40分鐘。獲得基線測定后，用載劑或適宜劑量的2a 口服治療動物，持續(xù)記錄血液動 力學參數(shù)達 4h。除了 0. 3mg/kg(180、210 和 240min)和 lmg/kg (30、210 和 240min)以外，在 全部劑量和時間點，2a產(chǎn)生平均動脈血壓的顯著降低.(ρ <0.05)。所有數(shù)據(jù)表示為均值士平均標準誤。η = 6-8/組。在Uni-MeltThomas Hoover毛細管熔點儀或帶有Mettler FP90 處理器的Mettler FB 81HT池上測定熔點，未作校正。質(zhì)譜用Firmigan MAT8230 (對于電子沖擊或化學電離) 或Finnigan MAT TSQ70 (對于 LSIMS)光譜儀獲得。1H NMR光譜是在Bruker ACF300, AM300, AMX300或EM390光譜儀上記錄的，化學位移以根據(jù)四甲基甲硅烷作為內(nèi)標的ρρπι(δ)給出。 IR光譜是在Nicolet SPC FT-IR光譜儀記錄的。UV光譜是在Varian Cary 3 UV-可見光 譜儀，Leeman Labs Inc.上記錄的。在Perkin-Elmer Model 141旋光計上測定旋光度。手 性 HPLC 測定是在 RegisChiral AGP 柱(4. 6x1 OOmm)上使用 2% 乙腈-98% 20mM KH2PO4(pH 4. 7)以lmL/min在20°C下洗脫進行的。5，7_ 二氟-2-四氫萘酮(3)。將SOCl2 (IOOmL)以一份加至3，5_ 二氟苯基乙 酸(100g，0.58mol)中，攪拌15h之后，在減壓下蒸發(fā)揮發(fā)性物質(zhì)。將所得油狀酰氯溶解 于CH2Cl2 (200mL)，再滴加至機械攪拌的AlCl3 (154g，l. 16mol)在CH2Cl2 (1.0L)中的混懸 液中。在干冰/丙酮浴中將該攪拌的混懸液冷卻至_65°C的內(nèi)部溫度，再將該酰氯溶液以 保持內(nèi)部溫度< -60°C的速度添加。添加完畢后，在_65°C下快速使乙烯氣體鼓泡通過該 反應混合物達lOmin。使反應混合物在攪拌下溫熱至0°C經(jīng)2h，然后冷卻至-10°C，再用 H20(500mL)處理，處理方式是先滴加，接著快速添加。分離有機層，用鹽水(IOOmL)洗滌， 用MgSO4干燥。減壓蒸發(fā)得到黑色油狀殘余物，使其在Kugelrohr上在真空下蒸餾，收集沸 點在90-110°C (1.0至0.7mm Hg)之間的物質(zhì)。將蒸餾物在100_105°C (0. 3mm Hg)下重蒸 溜，得到 3 為白色固體，(73. 6g,0. 40mol ；70% ) :mp 46°C ;IR(KBr) 1705cm-1 ；1H NMR(CDCl3) δ 2. 55(t, J = 7· 5Hz，2H)，3· 10(t，J = 7. 5Hz，2H)，3· 58 (s，2H)，6· 70 (m，2H) ；MS m/z 182 (M+)。針對下式的分析計算值 C10H8F2O :C，65. 93 ；H, 4. 42。實測值=C, 65. 54 ；H, 4. 42。(R)-(+)_2-羥基-5，7-二氟-1，2，3，4-四氫化萘(4a)。將㈠_1R，2S-N-甲基 麻黃堿(81.3g,0. 454mol)在無水Et2O(LlL)中的溶液滴加(45min)至1. OM在Et2O中 的氫化鋁鋰(416mL，0.416mol)中，滴加速度為充分保持輕微回流。添加完畢后，使反應混 合物在回流下加熱達lh，然后使之冷卻至室溫。加入2-乙基氨基吡啶(lllg，0.98mole) 在無水Et2O(IOOmL)中的溶液(45min)，加入速度為使得保持輕微回流。使反應混合物在 回流下加熱另外lh，在此期間出現(xiàn)微黃綠色混懸物。使用干冰-丙酮浴將該混合物冷卻 至-65°C的內(nèi)部溫度，再滴加5，7-二氟-2-四氫萘酮(23. 0g, 126mmol)在Et20(125mL)中 的溶液，滴加速度為保持內(nèi)部溫度低于_60°C。添加完畢后，將該混合物在_65°C至_68°C 下攪拌3h，再保持內(nèi)部溫度低于-60°C下通過添加MeOH(IOOmL)猝滅。在_65°C下將反應 攪拌另外lOmin，再使之溫熱至約-20°C。然后以限制溫度< 35°C的速度加入3N HCl溶液 (2L)。在以增加的速度攪拌以達到全部溶解之后，將各層分離，再將醚層用鹽水(200mL) 洗滌，干燥(MgS04)。將該醚溶液在減壓下蒸發(fā)，再將殘余物溶解于溫熱的Et2O(20mL)中， 接著添加己烷(200mL)。將該種子溶液在冰浴中冷卻，并維持在0°C下達lh，此時收集所 得沉積的結晶，再在真空下干燥，得到醇4a(10.9g，47%) :mp 85°C ； [ α ] 25D+38. 1° (c = 1.83，CHCl3) ；93. 4% ee，通過手性 HPLC =1H NMR(CDCl3) δ 1. 70 (br s，1H)，1. 76-1. 88 (m， 2H)，1. 99-2. 06(m，2H)，2· 63-3. 08(m，3H)，4· 15 (m, 1Η)，6· 60 (m, 2Η)。針對下式的分析計算 值 CiqHiqF2O :C，65. 21 ；H，5. 47。實測值C，65. 38 :H，5. 42。(S)-對映體 4b 的光譜是相同的 mp 84-85 0C ；[a ]25D_37. 8° (c = 1. 24，CHCl3) ；92. 4% ee，通過手性 HPLC。針對下式的分析計算值 CiqHiqF2O :C，65. 21 ；H, 5. 47.實測值=C, 65. 47 ；H, 5. 39。(R)-⑴-2-甲磺酰氧基-5，7_ 二氟-1，2，3，4-四氫化萘(5a)。使用冰-MeOH浴 將 R-(+)_5，7- 二氟-2-四氫萘酚 4a(59. 0g,320mmol)和 Et3N(74. 2mL，53. 9g,530mmol) 在無水Et20(l. 78L)中的溶液冷卻(_15°C )，再在氬氣和攪拌下用MsCl(37.2mL，55.3g， 480mmol)處理5-lOmin。5h后反應完全(通過TLC測定)，加入水以溶解該固體。加入少 量的EtOAc以幫助完全溶解該固體。分離有機相，接著用IN HCl、NaHCO3水溶液、鹽水洗 滌，用MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到灰-白色固體5a(87. lg，332mmol)，其直接用于下一步 驟。將少許樣品與i-Pr2O研磨，得到分析樣品:mp 78. 8-80. 5°C; [ α ]25D+16. 8° (c = 1. 86， CHCl3) ；1H 匪R δ 2. 13-2. 28 (m, 2H)，2. 78-2. 96 (m, 2H)，3. 07 (s, 3H)，3. 09 (dd, J = 17. IHz, 4. 7，1H)，3. 20 (dd, J = 17. 2，4. 7Hz，1H)，5. 20 (m，1H)，6. 67 (m，2H)。針對下式的分析計算值 C11H12F2O3S :C，50.37 ;H，4. 61。實測值C，50. 41 ；H，4.64。(S)-對映體 5b 的光譜是相同的 mp 79. 9-80. 9°C; [ α ]25D-16. 6° (c = 2. 23，CHCl3)。針對下式的分析計算值 C11H12F2O3S =C, 50. 37 ；H, 4. 61.實測值C，50. 41 ；H, 4. 65。(S)-㈠-2-氨基-5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫化萘鹽酸鹽(8a)。在攪拌下將疊氮化 鈉(40. Og, 0. 62mol)加至DMSO(IL)中，直到獲得澄清溶液。將甲磺酸酯5a(138g，0. 53mol) 以一份加入，再將該混合物在501和N2氣氛下加熱16h。將反應混合物用H2O(LSL)稀釋， 再用戊烷(4x250mL)萃取，接著相繼用H2O(2xl00mL)、鹽水(IOOmL)洗滌該合并的戊烷萃 取物，用MgSO4干燥。減壓下蒸發(fā)溶劑，得到揮發(fā)性油，將其迅速在硅膠上使用戊烷作為洗 脫液進行色譜層析，得到二氫化萘7(8.50g，51.2mmOl)為揮發(fā)性油狀物。進一步用戊烷/ CH2Cl2 (9 1)洗脫，得到疊氮化物 6a(101g，483mmol)為無色油狀物=IR(CHCl3) 2103CHT1 ； m/z 171 (M+)。使該疊氮化物 6a 溶解于 EtOAc (1200mL)，再用 10% Pd/C(6g)在 2. 5LParr 瓶 中(60psi)氫化6h。每一個小時以后，將瓶子抽空，再重新裝填氫氣以除去形成的N2。將 所得混合物通過硅藻土過濾，與醚制HCl (IN, 500mL)攪拌，濾出細沉淀，再用EtOAc洗滌，然 后用無水醚洗滌。(過濾進行約4h)。將該潮濕的固體轉移到圓底燒瓶中，再在真空中除 去剩余溶劑，得到白色固體 3(90. 4g，412mmol ；77. 9% ) :mp > 280°C ； [ α ]25D-60. 2° (c =
2.68，MeOH) ；1H NMR(d6-DMS0) δ 1. 79 (m, 1H)，2. 33 (m, 1H)，2. 63 (m, 1H)，2. 83-2. 92 (m. 2H)，
3.14 (dd, J = 16. 7,5. OHz, 1H)，3. 46 (m, 1H) ,6. 93 (d, J = 9. 4Hz, 1H)，7. 00 (dt, J = 9. 4， 2. 5Ηζ，1Η)。針對下式的分析計算值 CltlH12ClF2N :C，54. 68 ；H, 5. 51 ；N，6. 37。實測值=C, 54.31 ；H, 5. 52 ；N，6. 44。(R)-對映體 8b 的光譜是相同的:mp > 280°C ； [ α ]25D+58. 5° (c =1. 63，Me0H)。針對下式的分析計算值 C10H12ClF2N =C, 54. 68 ；H, 5. 51 ；N, 6. 37.實測值=C, 54. 64 ；H, 5. 51 ；N, 6. 40。(S)-(-)_(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)(氰基甲基)胺(9a)。將胺鹽 酸鹽 8a(50. 27g，229mmol) ffi NaOH(10. 0g. 250mmol)在水(150mL)中的溶液處理，接著用 足以獲得溶液的少許額外的NaOH小球處理。加入另外的水(300mL)，再將該混合物置于 50°C浴中，再用甲醛亞硫酸氫鈉復合物(30.8g，230mmol)處理。在將該混合物攪拌30min 后，加入KCN(15.0g，230mmOl)。在80°C下將反應混合物攪拌另外lh，冷卻至室溫，再用 EtOAc萃取，得到油(51. 3g)，其固化。TLC(5% MeOH-CH2Cl2)顯示約10-15 %的起始胺剩 余。硅膠色譜層析，得到9a(39. 4g)和起始游離胺(7. 12g)，其在空氣中迅速形成鹽。使此 胺循環(huán)，得到另外 5. 35g 的產(chǎn)物。合并產(chǎn)率(44. 8g,202mmol ；87. 5% ) :mp 73. 1-76. 5°C ；
38[a]25D-58.0° (c = 1. 63，CHCl3)；力匪 R (CDCl3) δ 1. 50 (br s，1H)，1. 70 (m，1H)，2. 05 (m， 1H)，2. 55-3. 04 (m, 4H)，3. 22 (m, 1H)，3. 70 (s, 2H)，6. 62 (m, 2H) ；MSm/z 222 (M+)。針對下式 的分析計算值 C12H12F2N2 :C,64. 85 ；H, 5. 44 ；N，12. 60.實測值=C, 65. 07 ；H, 5. 47 ；N，12. 44。 (R)-對映體 9b 的光譜是相同的:mp 64. 4-73. 6°C ； [ a ]25D+52. 3° (c = 2. 12，CHCl3)。針 對下式的分析計算值 C12H12F2N2 :C，64. 85 ；H, 5. 44 ；N, 12. 60.實測值=C, 65. 14 ；H, 5. 54 ；N,
12.53。(S) _ (_) -1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-5-氰基-2，3- 二氫 _2_ 硫 代-IH-咪唑(IOa) ο將在甲酸丁酯(240mL)中的腈9a (44. 7g，201mmol)在回流(120 °C 浴)和N2加熱19h，然后在減壓下除去溶劑。加入甲苯，蒸發(fā)以除去最終殘余的溶劑，再在 高真空下將該殘余物干燥，得到油狀物(53. 2g)。將在無水THF(935mL)中的所得甲酰胺和 甲酸乙酯(48. 7mL，44. 7g，604mmol)在冰/Me0H(_15°C )中冷卻，攪拌同時經(jīng)20min加入 t-BuOK(lM，在THF中，302mL，302mmol)。在反應攪拌18h后，蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解于IN HCl (990mL)和乙醇(497mL)中，再用KSCN(78. lg,804mmol)處理。在85°C下將該混合物攪 拌135min，然后置于冰浴中，得到沉淀物。將該過濾的固體以在10% MeOH/CH2Cl2中的漿液 加載到充滿己烷的硅膠(Ikg)柱中。用10%丙酮/CH2Cl2洗脫，得到10a(18. 05g，62. Immol ； 30. 8 % ) :m. ρ· 240. 7-249. 2 "C ； [￥]25D -69.1° (c = 1· 18，DMS0) ；1H NMR(d6-DMS0) δ 2. 18 (br m, 1H)，2. 47 (m, 1H)，2. 75 (m, 1H)，3. 03-3. 35 (m, 3H)，5. 19 (m, 1H)，6. 94 (d, J = 9. 3Hz, 1H) ,7. 03 (dt, J = 9. 3,2. 4Hz, 1H) ,8. 29 (s, 1H), 13. 3(br s, 1H) ；MS m/z 291 (M+)。 針對下式的分析計算值 C14H11F2N3S :C, 57. 72 ；H, 3. 80 ；N, 14. 42.實測值C，57. 82 ；H, 3. 92 ； Ν，14·37·(用 1 1 MeOH/CH2Cl2 進一步洗脫柱子，得到伯胺 Ila :mp 261. 9-262. 7 °C ； [VJ25D -90.5° (c = 0. 398) ； IR (KBr) 1593，1630cm-1 ；1H NMR (d6-DMS0) δ 2. 14 (m, 1H)， 2. 15-2. 28 (m, 1H)，2. 74-3. 05 (m, 4H)，5. 64 (m, 1H)，6. 90 (d, J = 9. 2Hz, 1H)，7. 05 (dt. J = 9. 5,2. 4Hz, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,9. 70 (br s, 1H), 13. 7(br s, 1H) ；MS m/z 309 (if)。針對下式的 分析計算值C14H13F2N3OS ·0. 25H20 :C，53. 57 ；Η，4· 33 ；N, 13. 39。實測值-.C, 53. 32 ；H, 3. 96 :Ν，
13.24。(R)-對映體 IOb 的光譜是相同的mp243. 1-244. 7V ；[Vj250 +74.9。(c = 2. 14， DMS0)。針對下式的分析計算值 C14H11F2N3S =C, 57. 72 ；H, 3. 80 ；N, 14. 42。實測值=C, 57. 85 ； H, 3. 85 ；N, 14. 45。(S) -1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-5-氨基甲基-2，3- 二氫 _2_ 硫 代-IH-咪唑。將在THF(75mL)中的上述腈(5. 00g，17. 2mmol)在氬氣下在冰浴中攪拌，直 到獲得均勻溶液。歷經(jīng)IOmin滴加LAH/THF的溶液(1M，34. 3mL, 34. 3mmol)，然后將該溶液 在0°C下攪拌30min，再使其恢復到室溫達1. 5h。使反應再次冷卻至0°C，再用飽和酒石酸 鉀鈉處理，直到該混合物變得可自由攪拌。加入另外的酒石酸溶液(30mL)，接著加入10% Me0H/CH2Cl2(200mL)，再將該混合物攪拌15min，再用水(100-150mL)處理。分離有機層，水 相用10% Me0H/CH2Cl2(2X125mL)萃取。將合并的萃取物洗滌，干燥(MgSO4)，再蒸發(fā)。使 殘余物(5. 2g)在硅膠上用5% MeOH/CH2Cl2洗脫進行色譜層析，得到2a為游離胺(2. 92g，
9. 89讓ol ；58% ) :mp 170°C ；[V]25D -11.0° (c = 1. 59，DMSO)。針對下式的分析計算值
C14H15F2N3S · 0. 25H20 :C，56. 07 ；H, 5. 21 ；N, 14. 01。實測值:C，56. 11 ；H, 5. 10 ；N, 14. 14。(S)-1-(5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘 _2_ 基)_5_ 氨基甲基 _2，3_ 二氫-39
2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽(2a)。通過添加醚制HCl (1M，20mL，20mmol)至游離胺 2a(3. 12g,10. 6mmol)中來制備該鹽酸鹽，該游離胺2a已通過溫熱溶解在Me0H(250mL)中。 在減壓下部分除去溶劑，再通過與EtOAc共同蒸發(fā)若干次而不蒸干來置換。將所得沉淀物 用Et0Ac(150mL)和醚(150mL)處理，濾出，用醚洗滌，再在氮氣下然后在高真空和78°C下 干燥 20h，得到該鹽酸鹽(3. 87g) :mp 245°C (dec) ； [a]25D+9. 65° (c = 1. 70，DMS0) ； (93% ee，通過手性 HPLC) ；1H NMR (Τ = 320° K, DMS0) δ 2. 07 (m，1H)，2. 68-3. 08 (m，4H)，4. 09 (m， 3H)，4. 77 (m, 1H)，6. 84 (m, 2H)，7. 05 (s, 1H)，8. 57 (br s，3H)，12. 4(br s, 1H)。針對下式的分 析計算值 C14H16ClF2N3S · 0. 5H20 :C，49. 33 ；Η，5· 03 ；N, 12. 33。實測值:C，49. 44 ；H, 4. 96 ；N, 12. I8。(R)-對映體沘的光譜是相同的；mp 261-263°C;[V]25d_10.8o (c = L 43,DMS0)， 91. 6% ee，通過手性 HPLC。針對下式的分析計算值 C14H16ClF2N3S · 0. 35H20 :C，49. 73 ；H, 4. 98 ；N, 12. 42。實測值C，49. 80 ；H, 4. 93 ；N, 12. 39。DBH活性的體外分析。DBH活性是通過測定酪胺到酚乙醇胺的轉化進行分析的。來 自腎上腺的牛DBH得自Sigma Chemical Co (St Louis，M0)。人分泌的DBH是從成神經(jīng)細胞 瘤細胞系SK-N-SH的培養(yǎng)基中純化的。該分析在pH 5. 2和32°C下，在0. 125M NaOAcUOmM 富馬酸鹽、0. 5-2 μ M CUS04、0. lmg/mL過氧化氫酶、0. ImM酪胺和4mM抗壞血酸中進行。在典 型的分析中，0. 5-1毫單位的酶被加至反應混合物中，然后加入含有過氧化氫酶、酪胺和抗 壞血酸的底物混合物以引發(fā)反應(終體積為200 μ L)。使樣品與或不與適宜濃度的抑制劑 在37°C下孵育30-40min。通過終止溶液將反應猝滅，該終止溶液含有25mM EDTA和240 μ M 3-羥酪胺(內(nèi)標)。通過反相HPLC使用UV檢測于280ηΜ處針對酚乙醇胺進行樣品分析。 剩余百分活性基于對照(無抑制劑)計算，使用內(nèi)標校正并擬合成非線性4-參數(shù)濃度-應 答曲線，獲得IC5tl值。選擇的酶和神經(jīng)遞質(zhì)受體的體外分析。2a對11種不同酶的活性是使用建立的分 析法(PanLabs Inc, Foster City, CA)測定的。2a對13種選擇的受體的親和力是通過放 射配體結合試驗使用標準過濾技術和膜制備來測定的。結合數(shù)據(jù)是通過迭代曲線擬合成四 參數(shù)邏輯方程來分析的。使用Cheng-Prusoff方程計算Ki值。在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常狗中的體內(nèi)生物化學研究。雄性SHR(15_16周 齡，Charles River, Wilmington, ΜΑ)被用于該研究。在研究當天，動物稱重并隨機分組為 接受安慰劑(載劑)或適宜劑量的2a，2b或1。每只大鼠口服給藥三次，間隔12h，在早晨 開始。在第三次給藥后6h，使大鼠用氟烷麻醉，斷頭，迅速采集組織(大腦皮層、腸系膜動 脈和左心室)，稱重，置于冰冷的0. 4M高氯酸中，在液氮中冷凍，并保存于-70°C，直到分析。 使用電化學檢測經(jīng)HPLC分析組織NE和DA濃度。雄性比格狗(10-16kg，MarshallFarms USA Inc,North Rose，NY)被用于該研究。 在研究當天，狗被隨機分組為接受安慰劑(空膠囊)或適宜劑量的2a。每只狗一天兩次給 藥達4.5天。在第5天第一次給藥后6h，將狗用戊巴比妥處以安樂死，采集組織(大腦皮 層、腎動脈、左心室)，稱重，置于冰冷的0. 4M高氯酸中，在液氮中冷凍，并保存于-70°C，直 到分析。使用電化學檢測經(jīng)HPLC分析組織NE和DA濃度。在狗中進行單獨研究以測定長期施用2a對血漿DA/NE比率的作用。動物被隨機分 組為接受口服安慰劑(空膠囊)或2a(2mg/kg，b. i. d)達14. 5天。每天抽取血樣，第一次 給藥后6h，測定DA和NE的血漿濃度。將樣品收集到含有肝素和谷胱甘肽試管中，在_4°C
40下離心，再在-70°C保存，直到分析。在SHR中的血液動力學研究。雄性SHR(I5_16周齡)被用于該研究。使動物用醚 輕輕麻醉，再對左側股動脈和靜脈插入導管以分別用于測定血壓和施用藥物。將動物置于 固定器上并使之恢復30-40min。獲得基線測定之后，使動物口服給予載劑或適宜劑量的2a 治療，并連續(xù)記錄血液動力學參數(shù)達4h。然后使動物用戊巴比妥麻醉，置于加熱墊(37°C) 上，再用Harvard嚙齒動物通風裝置通風。施用阿托品(lmg/kg，iv)和筒箭毒堿(lmg/kg， iv)之后，用不銹鋼桿通過眼的眼眶使動物腦脊髓刺毀。該腦脊髓刺毀桿用80V的Ims脈沖 以不同頻率(0. 15，0. 45，1.5，5，15Hz)進行電刺激，獲得頻率-加壓應答曲線。實施例7多巴胺和去甲腎上腺素的濃度在從充血性心力衰竭(CHF)患者采集的942個血漿 樣品中進行測定。研究目的是1.評價不同劑量的內(nèi)匹司他在4周之后對跨心肌(transmyocardial)(動脈-冠 狀竇)和冠狀竇兒茶酚胺水平的作用，以及評價內(nèi)匹司他經(jīng)12周的安全性和耐受性。2.評價內(nèi)匹司他對下列基線變化的作用a) 4周和12周之后的血漿(靜脈)兒茶酚胺水平b) 4周和12周之后的生命質(zhì)量(QoL)、CHF癥狀、整體評價和NYHA分類c)4周之后的血液動力學參數(shù)，包括心輸出量、全身血管阻力、MVO2、肺動脈壓、和 肺動脈楔壓d)住院治療以及經(jīng)12周CHF治療的藥物劑量變化e)4周和12周時的血壓和心率f) 4周和12周之后的6分鐘步行試驗g) 12周時的左心室射血分數(shù)、左心室收縮末期壓和左心室舒張末期容積。在第4和12周期間給藥后2小時，從患者外周血管采集血樣，同時讓他們仰臥。來 自仰臥患者的其它樣品在第0天(即給藥開始之前的那天)在與給藥后2小時相應的時間 采集。此外，一組患者在第4周期間在給藥后2小時以及在第0天(即給藥開始之前的那 天)在與給藥后2小時相應的時間進行右側心臟和冠狀竇導管插入術。從這些患者的動脈 血管和冠狀竇采集三份血液樣品。多巴胺和去甲腎上腺素的游離堿的濃度是通過放射酶促法測定的。該方法包括使 血漿樣品與兒茶酚-0-甲基轉移酶和氚化S-腺苷基蛋氨酸孵育。孵育完畢后，將0-甲基化 兒茶酚胺類從血漿中通過液/液萃取法萃取，然后通過薄層色譜法分離。標記各種兒茶酚 胺的相關譜帶，然后刮入到閃爍瓶中用于計數(shù)。該方法的定量限為Ipg多巴胺或去甲腎上 腺素/mL血漿。使用0.045mL至ImL的整份，線性范圍為1至333000pg多巴胺或去甲腎上 腺素/mL血漿。該方法的完整描述可見于Benedict等人的出版物"同時估計血漿、尿和組 織中的多巴胺、去甲腎上腺素和腎上腺素的放射酶促微量分析法"(Clinical Chemistry, Vol. 31，No. 11，1985，pp. 1861-1864)。將采集的人血漿樣品用作質(zhì)量控制樣品(QC)，并在該方法常規(guī)使用期間的每一天 單次(singlicate)分析，以監(jiān)測該方法的性能。分析結果已被非隨機化，并提供于圖14-27。樣品分析完成后，回顧結果。圖28顯 示了一個表，該表說明了應當從進一步的統(tǒng)計分析以及此作用的原因中扣除的數(shù)據(jù)。
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實施例8用內(nèi)匹司他進行臨床前體外和體內(nèi)藥理學研究。該體外研究評價了該化合物抑制 DBH活性的能力以及其對選擇的受體的結合親和力。該體內(nèi)研究分為四類1)生物化學作 用(即降低組織去甲腎上腺素水平和增加多巴胺水平的能力)、2)對甲狀腺功能的作用、3) 心血管作用、和4)行為作用。內(nèi)匹司他是牛和人DBH的有效抑制劑。內(nèi)匹司他對人DBH的IC5tl為9nM(CL 6960)， 顯著低于DBH抑制劑SKF102698 (85nM)的IC50 0 RS-內(nèi)匹司他的S對映體(表示為RS-內(nèi) 匹司他-197)比表示為(R)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3_二 氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽的R對映體(18nM)更有效。以選擇的受體篩選內(nèi)匹司他的結合親和力。內(nèi)匹司他顯示出對M1、D1和D2、以及 5HT1A,2A和2C的結合親和力低于5. 0。內(nèi)匹司他在大鼠和猴中的N-乙?；x物顯示出相 似缺乏對這些受體的結合親和力。因此內(nèi)匹司他及其主要代謝物RS-47831-007對上文所 列受體不是有效抑制劑。相對血壓正常的Wistar-Kyoto大鼠而言，體外對苯腎上腺素的主動脈收縮反應 在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)中被減弱。在SHR中用內(nèi)匹司他(10mg/kg，p.o.)每日治療21 天會使苯腎上腺素應答恢復至與該Wistar-Kyoto大鼠相似的值?？偟膩碚f，內(nèi)匹司他在大鼠和狗中是一種有效的DBH的抑制劑。在兩種物種的心 臟、腸系膜或腎動脈以及大腦皮層中，口服或靜脈施用會造成顯著的(P < 0. 05)組織去甲 腎上腺素減少、多巴胺增加、和多巴胺/去甲腎上腺素水平增加。在用雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的研究中，在以6. 2mg/kg 口服或i. v.施用后 從0. 5至4小時，在腸系膜動脈中，內(nèi)匹司他顯著減少去甲腎上腺素并增加多巴胺以及多巴 胺/去甲腎上腺素比率。這些參數(shù)的顯著變化亦間隔12小時給予兩次i. ν注射(15mg/kg) 的第2次之后6小時，在雄性Sprague-Dawley大鼠的左心室中觀察到。組織兒茶酚胺的24 小時過程是在雄性SHR中在分別口服施用10或30mg/kg之后進行了研究。多巴胺/去甲 腎上腺素比率的增加在1小時時是顯著的，并且長期持續(xù)(12小時，10mg/kg，腸系膜動脈； 以及24小時，30mg/kg，左心室)。腸系膜動脈多巴胺和去甲腎上腺素水平的顯著變化在10 天給予雄性Sprague-Dawley大鼠2. O和6. 2mg/kg p. ο. b. i. d.之后觀察到。在大腦皮層 中觀察到無顯著作用。以1或10mg/kg/d p. ο.給藥SHR達7或25天已顯著增加在腸系膜 動脈和大腦皮層中的多巴胺和多巴胺/去甲腎上腺素比率?？偟膩碚f，在急性或慢性(多 達25天)給藥大鼠的腸系膜動脈中，內(nèi)匹司他造成顯著的去甲腎上腺素減少以及多巴胺和 多巴胺/去甲腎上腺素比率的升高。當在單次口服給藥0. 3、1、3、10、30和100mg/kg之后6小時評價時，發(fā)現(xiàn)內(nèi)匹司他 對雄性SHR和Sprague-Dawley大鼠的作用呈劑量響應性。在SHR中，0. 3mg/kg的劑量在腸 系膜動脈中、3. Omg/kg的劑量在左心室中、以及10mg/kg的劑量在大腦皮層中，多巴胺/去 甲腎上腺素比率有顯著變化。在Sprague-Dawley大鼠，3. Omg/kg在腸系膜動脈中、1. Omg/ kg在左心室中、以及100mg/kg在大腦皮層中，多巴胺/去甲腎上腺素比率有顯著增加。在 SHR的第二個劑量應答研究中，以3. 0,10,30或100mg/kg間隔12小時給藥三次，第三次給 藥后6小時收集組織。內(nèi)匹司他在左心室和腸系膜動脈中引起顯著的劑量依賴性的去甲腎 上腺素(10mg/kg)減少以及多巴胺(3. Omg/kg)和多巴胺/去甲腎上腺素比率(3. Omg/kg)
42增加。內(nèi)匹司他在大腦皮層中對多巴胺和去甲腎上腺素濃度以及多巴胺/去甲腎上腺素比 率的作用僅在30和100mg/kg時是顯著的。在通過飲用水(0. 3,0. 6和1. Omg/ml)給予內(nèi) 匹司他達7天的雌性Wistar大鼠中見到有在左心室中的類似顯著的劑量-應答作用?？?之，內(nèi)匹司他在大鼠大腦皮層(60-100mg/kg/d)中比在左心室和腸系膜動脈(l-6mg/kg/d) 中抑制DBH的效能低。在間隔12小時給藥(30mg/kg p. ο.)三次之后，在SHR的左心室和腸系膜動脈中， 內(nèi)匹司他(S對映體)比R對映體顯著更有效。在以30mg/kg單次給藥或三次給藥之后，在 SHR的左心室和腸系膜動脈中，在減少去甲腎上腺素以及增加多巴胺和多巴胺/去甲腎上 腺素比率方面，內(nèi)匹司他比DBH抑制劑SKF102698顯著更有效。從這些體內(nèi)研究中產(chǎn)生的左 心室和腸系膜動脈中的效能關系與使用純化的DBH(參見上文)從體外研究獲得的效能關 系強烈的平行。然而，在大腦皮層中，在減少去甲腎上腺素水平以及增加多巴胺水平方面， 內(nèi)匹司他比SKF 102698具有顯著更低的作用。去甲腎上腺素顯示出刺激腎素釋放以及增 加血漿腎素活性。因此，評價用內(nèi)匹司他減少去甲腎上腺素水平是否會導致血漿腎素活性 的減少是令人感興趣的。然而，內(nèi)匹司他(30和100mg/kg/d p. ο.達5天)在雄性SHR中 不會改變血漿腎素活性。因此，當以降低組織去甲腎上腺素水平的劑量給予時，內(nèi)匹司他不 會改變SHR中的血漿腎素活性。雄性比格狗十二指腸內(nèi)施用30mg/kg 5小時之后，在腸系膜動脈中，內(nèi)匹司他造 成顯著的減少去甲腎上腺素水平以及增加多巴胺/去甲腎上腺素比率，但是不會改變多巴 胺水平。當內(nèi)匹司他給予雄性比格狗達4. 5天(5、15和30mg/kg b. i. d.，或10、30和60mg/ kg/d)時，在腎動脈、腎皮質(zhì)和腎髓質(zhì)中，顯著地減少去甲腎上腺素以及增加多巴胺和多巴 胺/去甲腎上腺素比率，在10mg/kg/d應答開始時到延長至60mg/kg/d有一平臺。在左心 室中觀察到類似結果，不同的是多巴胺無顯著增加。在大腦皮層中，在30和60mg/kg/d下 去甲腎上腺素顯著減少，在全部劑量下多巴胺和多巴胺/去甲腎上腺素比率顯著增加?？?之，在狗中在至少10mg/kg/d的劑量下，內(nèi)匹司他是一種有效的口服有活性的DBH抑制劑。內(nèi)匹司他具有與甲巰咪唑類似的結構，該甲巰咪唑是一種體內(nèi)甲狀腺過氧化酶的 有效抑制劑。在4或12.4mg/kg/d，p.o.的內(nèi)匹司他劑量在用低碘飲食喂養(yǎng)并給藥10天的 雄性Sprague-Dawley大鼠中對三碘甲腺原氨酸(三碘甲腺原氨酸)或甲狀腺素的血清水 平無作用，而甲巰咪唑(2mg/kg/d)顯著降低了三碘甲腺原氨酸或甲狀腺素的血清水平。因 此，與甲巰咪唑不同，內(nèi)匹司他不會影響三碘甲腺原氨酸或甲狀腺素的血清水平。內(nèi)匹司他在清醒的、束縛的SHR中誘發(fā)顯著的抗高血壓作用達至多4小時 (1. 0-30mg/kg, p. ο.)，并且顯著降低了心率(10和30mg/kg)。內(nèi)匹司他在清醒的、束縛的 SHR中的抗高血壓作用(10mg/kg，p. ο.)未能通過用多巴胺受體(DA-I)拮抗劑SCH-23390 預治療來減弱。內(nèi)匹司他(10mg/kg)還在清醒的、束縛的血壓正常的Wistar-Kyoto大鼠中 在給藥后4小時降低了血壓；然而壓力減少比之于用SHR(-46mmHg)更少(-13mmHg)。概括 地講，內(nèi)匹司他在SHR和血壓正常的大鼠引起血壓減少，盡管該抗高血壓作用在SHR中更顯 著。在SHR中的抗高血壓作用未顯示出通過DA-I受體介導。在腦脊髓刺毀的SHR中在給藥(3mg/kg p. ο.)后5小時，內(nèi)匹司他還對節(jié)前神經(jīng) 刺激的高血壓和節(jié)前神經(jīng)刺激顯著減弱。因此，內(nèi)匹司他在對交感神經(jīng)刺激的反應中減少 了血壓的上升。
麻醉的SHR用內(nèi)匹司他(3. Omg/kg, i. v.)急性靜脈治療在3小時時間減少了平均 動脈壓，但未降低腎血流量或者改變鈉或鉀的尿生成或尿排泄。給藥后計算的腎血管阻力 減少。試圖使用DA-I拮抗劑SCH-23390來評價內(nèi)匹司他的腎臟舒血管作用是否是由DA-I 受體介導。然而此化合物在單獨給藥時降低了血壓，這使得結果不可解釋?？偟膩碚f，內(nèi)匹 司他在麻醉SHR中不會損傷腎功能，并且不會減少腎血流量，盡管它會引起動脈血壓降低。用內(nèi)匹司他(1和10mg/kg，p.o.)每日治療SHR達21天不會像由尾縛帶方法測定 的那樣改變心率或收縮壓。然而，當大鼠被束縛并且它們的血壓直接通過動脈套管測定時， 內(nèi)匹司他(10mg/kg，p. ο.)誘發(fā)顯著的抗高血壓作用。在有無線電遙測血壓換能器的SHR工具中用30和100mg/kg/d的劑量達30天，內(nèi) 匹司他顯著降低血壓，但在3和10mg/kg/d時觀察到未產(chǎn)生顯著作用。在單次給藥后，30和 100mg/kg/d的作用持續(xù)經(jīng)歷24-小時時間，并且在30天的作用未降低。心率未增加，運動 活動未受影響。未能降低血壓的血管緊張素轉化酶抑制劑依那普利的劑量(lmg/kg，p.o.) 與內(nèi)匹司他(30mg/kg)的組合在給藥30天引起內(nèi)匹司他抗高血壓作用的增強，并導致左心 室質(zhì)量顯著減少。左心室質(zhì)量的減少在單獨用依那普利時未發(fā)生。因此，用內(nèi)匹司他30和 100mg/kg/d治療SHR 30天導致血壓減少，并且當與依那普利組合時，在左心室質(zhì)量減少的 同時有另外的血壓減少。在有無線電遙測血壓換能器的血壓正常的Wistar大鼠工具中，以30和100mg/kg/ d給藥7天，內(nèi)匹司他的血壓降低作用低于在SHR中觀察到的作用。在30mg/kg/d時，血壓峰 值減少為-IOmmHg,與此相比在SHR中為-20。在100mg/kg/d時，血壓峰值減少為_17mmHg， 與此相比在SHR中為-42。因此，在SHR中比在血壓正常的大鼠中內(nèi)匹司他具有更大的血壓 降低作用。正常麻醉狗研究顯示在急性靜脈給藥(l-10mg/kg i. v.)后沒有內(nèi)匹司他的心血 管作用，在給藥后至多達5小時，動脈血壓、左心室壓(包括峰dp/dt)、心率、心輸出量或腎 血流量無變化。單次給藥(3-30mg/kg i. v.)后，在慢性工具化、清醒狗研究中觀察到類似 的作用缺乏達12小時。在給予麻醉雄性比格狗長達5小時之后，內(nèi)匹司他(30mg/kg，十二指腸內(nèi))未顯著 抑制對直接腎神經(jīng)刺激反應的腎血流量減少，也未顯著抑制對頸動脈閉塞反應的動脈血壓 增加。然而，在腸系膜動脈中在給藥后5小時，內(nèi)匹司他引起顯著的去甲腎上腺素水平降低 以及多巴胺/去甲腎上腺素比率增加，但未引起多巴胺水平增加。因此，盡管組織去甲腎上 腺素水平顯著降低，但是未顯著抑制交感神經(jīng)-誘發(fā)的功能反應。當內(nèi)匹司他以10mg/kg/d給予雄性比格狗4. 5天時，無統(tǒng)計學顯著的減少血壓和 心率，增加對麻醉動物頸動脈閉塞應答增加。內(nèi)匹司他治療顯著降低了對i. v.酪胺攻擊應 答的心率增加，但僅產(chǎn)生輕微的和非顯著的血壓增加的抑制作用。因此，以顯示導致組織去 甲腎上腺素水平最大減少的劑量長期給予內(nèi)匹司他對交感神經(jīng)誘發(fā)的功能應答沒有較大 的抑制劑作用。小鼠急性給予1. 0-30mg/kg, p. ο.后內(nèi)匹司他未引起對總的運動行為的顯著作 用，并且不會影響小鼠活動能力(10-100mg/kg i.p·)。大鼠急性施用不會影響活動能力或 聽覺驚恐反應性(3-100mg/kg i.p.)。以10、30和100mg/kg/d，p. ο. (AT 6867)給藥10天在大鼠中觀察到?jīng)]有行為影響。直腸溫度也未受影響。通過用DBH抑制劑SKF102698(100mg/kg/d，p.o.)治療，以及通 過中樞作用a-腎上腺素激動劑可樂定(20mg/kg，b. i. d.，p. ο.)，顯著降低了運動活動和聽 覺驚跳反射。在給予SHR(3-100mg/kg/d，p.o.) (AT 6829)達30天后運動活動也未受影響。 因此，內(nèi)匹司他不會引起大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導的行為影響的可檢測的變化。內(nèi)匹司他是人DBH體外以及大鼠和狗體內(nèi)的有效競爭性抑制劑。在大鼠中，以 6mg/kg/d的劑量用內(nèi)匹司他口服治療產(chǎn)生了心臟和腸系膜動脈中DBH抑制作用的顯著證 據(jù)。與另一DBH抑制劑SKF 102698相反，相對于大腦皮層而言，內(nèi)匹司他顯示出對左心室和 腸系膜動脈的一定選擇性。在大鼠中用內(nèi)匹司他觀察到無行為影響。在狗中，在心臟、腎動 脈和腎臟中，10mg/kg/d出現(xiàn)DBH抑制的平臺作用；未鑒別到顯著作用的最小劑量。在SHR 中，內(nèi)匹司他顯著減少對交感神經(jīng)刺激的高血壓反應(3mg/kg p.o.)，并且其每天一次給藥 (30mg/kg/d p. ο.)達30天時自始至終顯著降低了血壓?？傊瑑?nèi)匹司他是調(diào)節(jié)交感神經(jīng)系 統(tǒng)作用的有效DBH抑制劑。實施例9這里描述的本研究設計來評價內(nèi)匹司他較高口服劑量的藥物代謝動力學，以比較 雄性和雌性大鼠中的藥物代謝動力學，以及通過對腦中內(nèi)匹司他的水平定量來測定內(nèi)匹司 他進入CNS中的滲透作用。使重量為180_220g的雄性大鼠(Crl ⑶BR Vaf+)在給藥之前禁食過夜，直到給 藥后4小時。使劑量配制在含有2% 1-羥丙基甲基纖維素(50厘泊粘度)、1%苯甲醇和 0. 6% Tween 80 (均得自 Sigma ChemicalCompany)的水中。對于 10、30 和 100mg/kg 劑量， 藥物在該劑量溶液中的濃度分別為5、15和50mg/ml，并且通過液相色譜法(LC)確認。5mg/ ml劑量為澄清溶液，更高濃度為半透明混懸液。給藥體積為2. OmlAg0在給藥后的各時間， 用肝素化注射器通過心臟穿刺獲得血液樣品，通過離心制備血漿。外科手術切斷大鼠的腦， 并將全部樣品冷凍于-20°C，直到分析。使等份樣品(0.05或0.5ml)與內(nèi)標(50 μ 1甲醇，其中含有5 μ g/ml內(nèi)匹司他 的單氟類似物以及5mg/ml 二硫蘇糖醇)混合。將樣品與200mM磷酸鈉緩沖液，pH 7.0， (0. 5ml)混合，再用3ml乙酸乙酯/己烷(1/1，ν/ν)萃取。含有分析物的有機相用250 μ 1的 250mM乙酸反萃取，再通過LC分析100 μ 1等份的水相。該LC系統(tǒng)在室溫下使用Keystone HypersilBDS 15cm C8柱。流動相A為含有5mM十二烷基磺酸的12. 5mM磷酸鉀，pH 3.0，流 動相B為乙腈。溶劑組成為40% B，并以lml/min的流速泵入。在261nm處通過UV吸收檢 測。分析物濃度是根據(jù)由增加已知濃度分析物的未治療大鼠血漿的分析生成的標準曲線測 得的。血漿濃度數(shù)據(jù)表示為yg(游離堿)/ml。使腦用鹽水短暫地清洗，在紙毛巾上吸干，然后稱重(1.5_2.0g)。加入內(nèi)標 (50 μ 1甲醇，其中含有20μ g/ml內(nèi)匹司他的單氟類似物)，使腦在含有0. 5mg/ml 二硫蘇糖 醇的5ml的200mM磷酸鈉，pH 7. 0中勻漿。將等份勻漿物(2ml)用IOml的乙酸乙酯/己 烷(1/1，ν/ν)萃取。使該有機相用150 μ 1的250mM乙酸輕輕反萃取。向水相添加100 μ 1甲醇之后(分析任何乳液)，如針對血漿所述通過LC分析 ιοομ 等份。腦中水平表示為yg(游離堿)/g腦組織。藥物代謝動力學參數(shù)由平均血漿濃度計算。血漿半衰期(Tv2)計算為0. 693/ β， 其中β是通過log血漿濃度對在該數(shù)據(jù)末端直線部分之內(nèi)的時間數(shù)據(jù)的線性回歸測得的消除速率常數(shù)。從0至最終可定量血漿濃度的時間的血漿濃度對時間曲線下面積(AUC)是 通過梯形法計算的。從0至無窮的AUC(AUCg)計算為AUC總=AUC(0-C最后)+C最后/β，其中C最后是最后可定量的血漿濃度。圖29顯示了大鼠血漿和腦中內(nèi)匹司他的藥物代謝動力學參數(shù)。給予10、30或100mg/kg單次口服劑量的雄性大鼠血漿中內(nèi)匹司他的濃度顯示于 圖30-32，并繪制于圖33中。血漿中內(nèi)匹司他濃度隨劑量增加而增加，并且AUC總與劑量之 間的關系呈線性(圖34)。消除半衰期在較高劑量下顯示稍微增加(10、30和100mg/kg 口 服劑量給予雄性大鼠之后分別為1. 70,2. 09和3. 88hr)。30mg/kg內(nèi)匹司他口服給予雌性大 鼠之后，內(nèi)匹司他的血漿AUC@在雌性大鼠中比在給予等效劑量內(nèi)匹司他的雄性大鼠中高 77% (圖33和35)。腦中內(nèi)匹司他水平(表示為yg/g)起初低于血漿中的水平(表示為 yg/ml)。然而，從給藥后向前2小時，腦中內(nèi)匹司他濃度超過血漿中的濃度(圖36-37)。雄性大鼠內(nèi)匹司他的血漿水平隨10至100mg/kg之間劑量增加而線性增力口，基于 AUC貞的值。30mg/kg 口服劑量后，內(nèi)匹司他的血漿水平在雌性大鼠中比在雄性大鼠中高。給雄性大鼠施用10mg/kg內(nèi)匹司他口服劑量后，腦中內(nèi)匹司他水平在最初低于血 漿中的水平，但是向前2小時起腦中內(nèi)匹司他水平高于血漿中的。實施例10本項研究的目的是測定單次口服給予自發(fā)性高血壓大鼠后，內(nèi)匹司他(10mg/kg) 對腸系膜動脈中多巴胺和去甲腎上腺素水平作用的24小時時間過程。單次口服施用內(nèi)匹 司他(10mg/kg)或載劑(dH20;10ml/kg)后，在1、2、4、6、8、12、16和24小時測定兒茶酚胺 水平。16-17周齡，體重300-400克的雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)不限制食物和水。對 動物稱重并隨機分配，研究之前的下午，給以下治療組(η = 9/組)之一在1，2，4，6，8， 12，16或24小時單次口服施用內(nèi)匹司他10mg/kg或單次口服施用載劑(10ml/kg)，直到被 處死° 內(nèi)匹司^也是由 the Instituteof Organic Chemistry, Syntex Discovery Research 以鹽酸鹽合成的，并且得自Syntex Central Compound Inventory。將內(nèi)匹司他溶解于載 劑(dH20)中，得到可以10ml/kg重復體積施用口服劑量。內(nèi)匹司他的全部劑量是以游離堿 當量施用的，并且在施用的早晨配制。處死的早晨，動物每分鐘給藥。在施用后1，2，4，6，8， 12，16和24小時，9只治療動物和9只載劑動物用氟烷麻醉，斷頭，再迅速采集左心室和腸 系膜動脈并稱重。將該腸系膜動脈置于在離心管中的0. 5ml的0.4M高氯酸中，將左心室置 于空冷管(cryotube)中。立即使兩種組織在液氮中冷凍，并保存于_70°C。使用HPLC以電 化學檢測測定腸系膜動脈兒茶酚胺水平。在斷頭時，通過將血從尸體引流到含有肝素的管 中來取血漿樣品，再在4°C下離心。在每個時間點使每一治療組與載劑比較。進行結果TRT、HARVEST及其相互作用的 雙因素方差分析(ANOVA)。因子TRT的單因素ANOVA是針對每一采集時間進行的。在每一 時間點治療動物與載劑動物之間的配對分析是使用Fisher' s LSD策略進行的，以控制試 驗-方法錯誤率。僅在4小時時間點去甲腎上腺素值顯著(p<0.05)低于載劑。在6小 時時間點水平勉強的(0.05 <p<0. 1)低(圖38)。在2和6hr采集時間多巴胺水平顯著 (P < 0. 05)高于載劑的多巴胺水平(圖39)。在1、2、4、6和12小時時間點，多巴胺/去甲
46腎上腺素比率顯著(P < 0. 05)高于載劑治療的動物的比率(圖40)。通常，在自發(fā)性高血壓大鼠單次口服施用10mg/kg之后，在給藥后1、2、4、6、8、12、 16或24小時，內(nèi)匹司他對腸系膜動脈去甲腎上腺素或多巴胺水平具有很少統(tǒng)計學顯著作 用。然而，在治療的第一個12小時幾乎全部觀察到多巴胺/去甲腎上腺素比率連貫的增加。 在16和24采集時間，觀察到在這三個參數(shù)中任一個都沒變化。實施例11本項研究的目的是測定靜脈內(nèi)施用內(nèi)匹司他(下文稱為內(nèi)匹司他)對 Sprague-Dawley大鼠左心室中多巴胺和去甲腎上腺素水平的作用。使動物接受靜脈(iv) 施用(間隔12小時)載劑(75%丙二醇+25% DMSO ；1. 0ml/kg)或15mg/kg的內(nèi)匹司他。 在最后化合物施用之后6小時測定組織去甲腎上腺素和多巴胺水平。16-17周齡，體重300-400克的雄性Sprague-Dawley大鼠不限制食物和水。對動物 稱重并隨機分配，研究之前的下午，給以下治療組(η = 10/組)之一載劑(1. 0ml/kg)或內(nèi) 匹司他 15mg/kg。內(nèi)匹司他是由 thelnstitute of Organic Chemistry, Syntex Discovery Research合成的，并且得自Syntex Central Compound Inventory。將內(nèi)匹司他溶解于適 量載劑(75%丙二醇+25% DMS0)中，獲得1. 0ml/kg的給藥體積。內(nèi)匹司他是以游離堿當 量施用的，并且在首次施用之前的下午配制。采集之前的下午每只大鼠iv尾靜脈給藥。下一早晨之后12小時重復給藥。最后 施用之后6小時，大鼠用氟烷麻醉，斷頭，再迅速采集左心室并稱重。將該心室置于1. Oml 冰冷的0.4M高氯酸中。使組織立即在液氮中冷凍，并保存于-70°C。通過高效液相色譜法 使用電化學檢測分析組織多巴胺和去甲腎上腺素濃度。對去甲腎上腺素以治療的主要作用進行單因素方差分析(ANOVA)。針對多巴胺以 及它們主要由于各治療組之間異質(zhì)性方差的比率進行Kruskal-Wallis。接著在內(nèi)匹司他治 療大鼠和載劑治療大鼠之間使用Fisher' s LSD檢驗進行配對比較。在所有P-值上進行 Bonferroni調(diào)節(jié)，以確保5%的全部試驗-方法1型錯誤率。與載劑治療的動物相比，以15mg/kg施用內(nèi)匹司他顯著(ρ < 0.01)減小去甲腎 上腺素水平51% (圖41)，顯著(ρ<0.01)增加多巴胺水平472% (圖42)，并且顯著(ρ <0.01)增加多巴胺/去甲腎上腺素比1117% (圖43)。總之，靜脈內(nèi)施用內(nèi)匹司他造成Sprague-Dawley大鼠左心室中DBH的顯著抑制作用。實施例12本項研究評價內(nèi)匹司他在改變雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)皮層、左心室和腸系 膜動脈中的多巴胺和去甲腎上腺素水平的作用。動物以3、10、30或100mg/kg p. ο.給藥三 次，間隔12小時。本項研究還比較了 S對映體(內(nèi)匹司他)與R對映體((R)-5-氨基甲基-1-(5， 7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)給藥三次(30mg/ kg)以后的效果。本項研究還比較了內(nèi)匹司他與SKF102698( —種先前顯示在大鼠中口服有效的 DBH抑制劑)的作用。制備化合物并以游離堿等當量施用。內(nèi)匹司他，(R)-5_氨基甲基-l-(5，7-二
47氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽以及SKF 102698得自 Syntex Central Compound Inventory。將內(nèi)匹司他溶解于適量載劑(內(nèi)匹司他用dH20， SKF102698 用 PEG 400 dH20, 50 50(體積體積))中。將 3、10、30 和 100mg/kg 的內(nèi) 匹司他以及30mg/kg SKF 102698的劑量制備于10. 0ml/kg給藥體積中。15-16周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR) (Charles River Labs)不限制食物和水。 動物稱重并隨機分派到下列治療組之一 1)蒸餾水載劑(dH20)，或3、10、30的100mg/kg的 內(nèi)匹司他，2)在蒸餾水中的30mg/kg的(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3-二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽，或3) PEG 400 dH20載劑或30mg/kg的 RS-2643 1-000。每只大鼠口服給藥(p. ο.，使用灌食針)三次，間隔12小時，在早晨開始。 第三次給藥后6小時，將大鼠用氟烷麻醉，斷頭，再迅速采集皮層、腸系膜動脈和左心室，稱 重，置于冰冷的0. 4Μ高氯酸中，在液氮中冷凍，并保存于-70°C。通過高效液相色譜法和電 化學檢測分析組織多巴胺和去甲腎上腺素濃度。進行四輪統(tǒng)計分析。第一輪比較用不同劑量的內(nèi)匹司他和30mg/kg的(R)_5_氨 基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽治 療的大鼠與載劑對照動物。用因子劑量和封閉因子天對每種組織和物種分別進行非參數(shù) 單因素方差分析(ANOVA)。報告總結果。每種劑量的治療和對照之間的配對分析是使用 Durmett’ s檢驗進行的，以控制試驗-方法錯誤率。使用非參數(shù)t_檢驗，第二統(tǒng)計學檢驗比 較SKF102698與PEG-ClH2O載劑治療的組。使用非參數(shù)t-檢驗，第三統(tǒng)計學檢驗比較30mg/kg 的(R) -5-氨基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪 唑鹽酸鹽與內(nèi)匹司他。第四統(tǒng)計分析比較30mg/kg的RS25560-197與SKF 102698。由于使 用兩種不同載劑，開發(fā)線性對比法，其計算以下差值的差值變化=(30mg/kg-載劑)內(nèi)匹司他_(30mg/kg-載劑)SKF102698通過SAS程序普通線性模型對均勻至零來檢驗此新變量。圖中的全部數(shù)據(jù)是出現(xiàn)的士標準差。 在30和100mg/kg的內(nèi)匹司他的劑量下，與載劑相比，大腦皮層中的多巴胺濃度顯 著(P < 0. 05)更高(圖44)，去甲腎上腺素濃度顯著(ρ < 0. 05)更低(圖45)，并且多巴 胺/去甲腎上腺素比率顯著(P < 0. 05)更高(圖46)。在3、10、30和100mg/kg的劑量下，與載劑相比，左心室中的多巴胺濃度顯著(ρ <0. 05)更高(圖47)。在10、30和100mg/kg的劑量下，與載劑相比，去甲腎上腺素濃度顯 著(ρ <0.05)更低(圖48)。在3、10、30和100mg/kg內(nèi)匹司他的劑量下，與載劑相比，左 心室中的多巴胺/去甲腎上腺素比率顯著(ρ <0.05)更高(圖49)。在3、10、30和100mg/kg的劑量下，與載劑相比，SHR的腸系膜動脈中的多巴胺濃 度顯著(P < 0. 05)更高(圖50)。在10、30和100mg/kg，去甲腎上腺素濃度不顯著(ρ > 0.05)低于載劑(圖51)。在內(nèi)匹司他的所有劑量下，與載劑相比，腸系膜動脈中的多巴胺 /去甲腎上腺素比率顯著(P < 0. 05)更高(圖52)。在大腦皮層中，與用載劑治療相比，(R)-5-氨基甲基-1-(5，7-二氟-1，2，3，4-四 氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽造成多巴胺(圖53)和去甲腎上腺素 (圖54)均顯著增加(ρ <0.01)，并且對多巴胺/去甲腎上腺素比率無作用(圖55)。與 (R) -5-氨基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽相比，用內(nèi)匹司他顯著降低去甲腎上腺素水平(P < 0.01)(圖54)。在左心室中，與用載劑治療相比，(R) -5-氨基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽造成多巴胺(圖56)和多巴胺/去甲腎上 腺素比率(圖58)顯著增加(ρ < 0.01)，但未顯著降低去甲腎上腺素水平(圖57)。在降 低去甲腎上腺素水平(圖57)以及增加多巴胺和多巴胺/去甲腎上腺素比率(圖56和58) 中，內(nèi)匹司他比(R) -5-氨基甲基-1- (5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫 代-IH-咪唑鹽酸鹽顯著更有效(ρ < 0. 01)。在腸系膜動脈中，與用載劑治療相比，(R)-5_氨基甲基-l-(5，7-二氟_1，2，3， 4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽造成多巴胺(圖59)以及多巴胺 /去甲腎上腺素比率(圖61)顯著增加(ρ <0.01)，但未顯著降低去甲腎上腺素水平(圖 60)。在降低去甲腎上腺素水平(圖60)以及增加多巴胺和多巴胺/去甲腎上腺素比率(圖 59和61)中，內(nèi)匹司他比(R)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘_2_基)_2， 3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽顯著更有效(ρ < 0. 01)。在大腦皮層中比較30mg/kg的內(nèi)匹司他與SKF102698，對于30mg/kg劑量的SKF 102698，與載劑相比，皮層中的多巴胺濃度顯著更高(ρ <0.01)(圖53)。對于SKF102698 而言比之于對內(nèi)匹司他而言，增加以上載劑更多(P < 0. 01)。對于SKF102698而言比之于 載劑，去甲腎上腺素濃度顯著更低；并且對于SKF102698而言比之于對內(nèi)匹司他而言，該減 少更大(P < 0. 01)(圖44)。對于SKF102698而言比之于載劑，皮層中的多巴胺/去甲腎 上腺素比率顯著(P < 0. 01)更大(圖55)；并且對于SKF102698而言比之于對內(nèi)匹司他而 言，增加以上載劑更多(P <0.01)。對于SKF102698而言比之于載劑，左心室中的多巴胺濃度顯著更大(ρ < 0. 01) (圖56)；并且對于內(nèi)匹司他而言比之于對SKF 102698而言，增加以上載劑更多(ρ <0.01)。去甲腎上腺素濃度用SKF 102698治療時與載劑沒有差異；然而，相對于載劑，用 內(nèi)匹司他比SKF 102698治療顯著降低去甲腎上腺素(ρ < 0. 01)(圖57)。對于SKF102698 而言比之于載劑，左心室中的多巴胺/去甲腎上腺素比率顯著(ρ <0.05)更高(圖58)； 并且對于內(nèi)匹司他而言比之于對SKF 102698而言，增加以上載劑更多(ρ < 0. 05)。對于SKF102698而言比之于載劑，腸系膜動脈中的多巴胺濃度顯著更高(圖59)； 并且對于內(nèi)匹司他而言比之于對SKF 102698而言，增加以上載劑更多。去甲腎上腺素濃度 用SKF 102698治療時比用載劑顯著更低；并且相對于載劑，用內(nèi)匹司他比SKF 102698治療 顯著降低去甲腎上腺素(圖60)。對于SKF102698而言比之于載劑，左心室中的多巴胺/去 甲腎上腺素比率顯著更高(圖61)；并且對于內(nèi)匹司他而言比之于對SKF 102698而言，增 加以上載劑更多?？傊?，該數(shù)據(jù)顯示，在12小時間隔三次口服劑量施用的第三次施用之后6小時，在 SHR的腸系膜動脈、左心室和大腦皮層中，內(nèi)匹司他是DBH體內(nèi)的有效抑制劑。在所有三種 組織中，30mg/kg，S對映體內(nèi)匹司他比R對映體((R) -5-氨基甲基(5，7- 二氟-1，2，3， 4_四氫萘-2-基)-2，3-二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽)更有效。此外，以30mg/kg三次 劑量施用經(jīng)24小時之后，在腸系膜動脈和左心室中，內(nèi)匹司他比SKF 102698更有效，但在 大腦皮層中效果更低。實施例13
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制備內(nèi)匹司他，并以游離堿等當量施用。將內(nèi)匹司他和甲巰咪唑溶解于載劑 (66. 7%丙二醇33.3% dH20)中，得到適宜濃度的給藥溶液，使得全部劑量可以以1.0ml/ kg體積施用。在治療之前，給重量為180-200克的雄性Sprague-Dawley大鼠用缺碘飲食 (Purina，5891C，Lot 1478,0. 066士0. 042mg碘/kg樣品)不限制喂養(yǎng)14天。動物稱重并 隨機分派到以下治療組之一(η = 12/組)內(nèi)匹司他2. Omg/kg，內(nèi)匹司他6. 2mg/kg, R，甲 巰咪唑lmg/kg，或載劑lml/kg。每組大鼠在晚上接著在早上口服給藥，約12小時間隔，連 續(xù)10天。在第10天，在第二次給藥后4小時，大鼠用氟烷麻醉，斷頭，采集皮層、紋狀體和腸 系膜動脈，稱重。甲巰咪唑組未采集組織樣品，因為它們僅用作測定甲狀腺功能的陽性對 照。將腸系膜動脈、皮層和紋狀體立即置于0. 4M冰冷的高氯酸中，并在同一天使用HPLC分 析去甲腎上腺素和多巴胺水平。在第_3、0、3、7和9天(第0天是給藥的第一天)取眼眶血樣。使用放射免疫法 針對T3和T4水平分析血清樣品。為了統(tǒng)計學評估T3和T4水平的變化，從第_3天時間點根據(jù)基線計算變化。進行受 試者中非參數(shù)雙因素方差分析(ANOVA)。還進行單因素AN0VA，以檢測與對照出現(xiàn)的是否有 顯著差異。使用Fisher' s LSD策略進行對照和各治療組之間的配對分析，以控制試驗-方 法錯誤率。對于兒茶酚胺水平的統(tǒng)計分析，進行具有因子DOSE的單因素AN0VA。在每一給 藥時的治療和對照之間的配對分析是使用Fisher' s LSD策略進行的，以控制試驗-方法 錯誤率。內(nèi)匹司他以2. 0和6. 2mg/kg的劑量治療的動物中，與載劑對照相比，皮層中的去 甲腎上腺素水平無顯著(P > 0. 05)差異。與載劑對照相比，在2. 0和6. 2mg/kg給藥組腸 系膜動脈中的去甲腎上腺素水平顯著(P < 0. 05)更低，在2. 0和6. 2mg/kg兩個給藥組紋 狀體中的去甲腎上腺素水平勉強(P < 0. 10)更低(圖62)。在2. 0或6. 2mg/kg劑量組的內(nèi)匹司他中，全部三種組織中的多巴胺水平與載劑對 照無顯著(P > 0. 05)差異(圖62)。在2. 0和6. 2mg/kg RS_25560_197的皮層和紋狀體中的多巴胺/去甲腎上腺素比 率與載劑對照無顯著(P > 0. 05)差異，而在2. 0和6. 2mg/kg內(nèi)匹司他的腸系膜動脈中的 該比率顯著(P < 0. 05)高于載劑對照(圖62)。2. 0或6. 2mg/kg內(nèi)匹司他均未通過改變大鼠血清中的游離T3或總T4水平影響甲 狀腺功能。與載劑對照相比，陽性對照1. Omg/kg的甲巰咪唑的劑量顯著地(ρ < 0. 05)降 低所有治療日的T3水平(圖63)以及第3天和第7天的T4水平(圖64)。甲巰咪唑治療 動物的T4水平僅在第9天勉強(ρ < 0. 10)更低。與載劑相比，內(nèi)匹司他(2. 0或6. 2mg/kg)未引起多巴胺或去甲腎上腺素水平或 多巴胺/去甲腎上腺素比率的任何顯著(p>0.05)改變。在紋狀體中，去甲腎上腺素水 平勉強顯著(P < 0. 10)減少在6. 2mg/kg劑量組中觀察到，但未觀察到其它顯著變化。與 載劑相比，在腸系膜動脈中，2. 0和6. 2mg/kg的內(nèi)匹司他均產(chǎn)生顯著(ρ < 0. 05)更低的去 甲腎上腺素水平以及顯著(P<0. 05)更高的多巴胺/去甲腎上腺素比率，未觀察到多巴胺 水平的顯著變化。因此，內(nèi)匹司他顯示在體內(nèi)是一種有效的多巴胺羥化酶的抑制劑，
50Sprague-Dawley大鼠10天給藥之后在腸系膜動脈中比在大腦皮層或紋狀體中更為有效。實施例14進行本項研究以測定給予內(nèi)匹司他狗的腎髓質(zhì)和腎皮質(zhì)中的多巴胺和去甲腎上 腺素濃度。成年雄性比格狗被隨機分派到8只狗/組的四個組，并通過口服施用給予內(nèi)匹 司他。以置于單個膠囊中的內(nèi)匹司他5、15和30mg/kg的劑量投藥。載劑為空膠囊。每只 狗每天早晨和下午接受2次給藥(間隔8-10小時)達4天。在第5天，每只狗在早晨接受 單次給藥，最后一次給藥6小時后使狗安樂死。迅速采集腎髓質(zhì)和腎皮質(zhì)的樣品，稱重，置 于冰冷的0. 4M高氯酸中，在液氮中冷凍，并保存于-70°C。為了定量去甲腎上腺素(NE)和多巴胺(D)的濃度，通過0.4M高氯酸中短暫聲處 理將組織勻漿。聲處理后，在4°C下使該勻漿物以13，OOOrpm在微量離心管(microfuge)中 離心30分鐘。移取等份的每個上清液，再摻入3，4-二羥基芐胺(DHBA)作為內(nèi)標。使來自 每個樣品的萃取物使用電化學檢測進行HPLC分離。方法的定量限為2. Ong/mL，對于各分析 物的線性范圍為2. Ong/mL至400ng/mL。分析結果提供于圖65和66。將每個分析物測定標準化為組織樣品的重量，并且表 示為每克組織的分析物yg數(shù)。該表包含從每只狗獲得的多巴胺、去甲腎上腺素的濃度以 及多巴胺濃度比去甲腎上腺素濃度的比率(D/NE)。此外，對于各治療組提供每一分析物計 算的平均和標準差以及D/NE比率。實施例15重量為9-16kg的雄性比格狗(Marshall farms, North Rose, NY)被用于該研究。 使動物不限制飲水，并且每天一次在 10. 00ΑΜ進食。動物被隨機分派到下列治療組之一 (η = 8只/組)安慰劑(空膠囊)或2mg/kgb. i. d(4mg/kg/天)的內(nèi)匹司他。每只動物 每天在早晨和下午(間隔8-10小時)接受2次給藥。在AM給藥后6小時抽取每天的血樣 (IOml)，以供內(nèi)匹司他和兒茶酚胺的血漿水平的測定。將樣品收集到含有肝素和谷胱甘肽 的試管中，在收集的1小時以內(nèi)在_4°C下離心。分離血漿，分成兩個樣品，一個用于測定血 W L茶酚胺，另一個用于分析內(nèi)匹司他。在稍后的點上認為有必要分析組織兒茶酚胺時，在研究結束時還從狗中取組織樣 品。在第15天，AM給藥后6小時，取最終血液樣品(10ml)。將狗用戊巴比妥鈉(40mg/kg， iv)麻醉，置于尸體剖檢臺上，再第二次注射戊巴比妥(80mg/kg，iv)實施安樂死。進行快速 兩側穿胸廓切開術以及剖腹術。活組織檢查取自腎動脈和左心室。打開顱骨以暴露大腦皮 層的額葉，進行活組織檢查。將組織樣品稱重，置于冰冷的0.4M高氯酸中，在液氮中冷凍， 并保存于-70°C，直到分析。使用電化學檢測經(jīng)HPLC分析血漿NE、DA和EPI。使用電化學檢測經(jīng)HPLC測定內(nèi) 匹司他的血漿濃度。Box-Cox變換法表明，該對數(shù)是一種適宜的變量穩(wěn)定變換法；因此所有分析對 log-值進行。在第10天第1只狗的DA濃度的BQL(定量限以下)定義為0;1η(0)設定為 沒有。使用混合模型(使用PROC MIXED)進行分析，固定天數(shù)和治療分類變量，治療中的狗 為隨機因子。對于該固定效應，包括了天數(shù)和治療之間的相互作用，因為藥物與安慰劑組之 間的差異是天天在變化的。使用CONTRAST聲明計算對比度，其恰當?shù)乜紤]到每一特定對比 度誤差項目。特別地，包括治療組比藥物組的該對比度使用狗對于其誤差項的方差，而用于
51建立穩(wěn)態(tài)的比較均在狗比較之中并且要求該誤差方差。使用Helmert變換法(cf. SAS PROC GLM手冊)計算穩(wěn)態(tài)時期。這些變換比較各 治療均值與以下時間點治療均值的平均值。該穩(wěn)態(tài)時期定義為在Hehnert對比為統(tǒng)計學顯 著的最大時間之后的第一時間點開始。然而，由于此方法可能不能檢測平滑變化過程，正如 可能在此情況下出現(xiàn)的，還計算了穩(wěn)態(tài)期間的分析物濃度的斜率。對于每只狗分別計算穩(wěn) 態(tài)期間的斜率，得到每只動物一個斜率。然后計算對于斜率的單變量統(tǒng)計，用標準理論置信 區(qū)間建立平均斜率，并檢驗斜率等于0的假設，并且計算其標準理論ρ-值。使用此斜率分 析，其基于測定穩(wěn)態(tài)期間是否是改變濃度的時間。當與安慰劑組比較時，內(nèi)匹司他(2mg/kg，bid)產(chǎn)生了顯著減少血漿NE (2. 1倍) 和EPI (1.91倍)，以及顯著增加血漿DA (7. 5倍)和DA/NE比率(13. 6倍)(參見圖67-71)。 分別在第6天和第8天觀察到血漿NE和EPI的峰減少，而分別在第7天和第6天觀察到血 漿DA和DA/NE比率的峰增加。對血漿NE、DA和EPI的作用分別在給藥后約4、8和6天達 到穩(wěn)態(tài)。在給藥后所有天中，血漿DA和DA/NE比率中的變化均顯著不同于安慰劑的。在給 藥后4-9天以及11-13天，血漿NE變化顯著不同于安慰劑的。在給藥后7-9天以及第12 天，血漿EPI變化顯著不同于安慰劑的。施用內(nèi)匹司他(2mg/kg，bid)在所有天中均產(chǎn)生顯著的藥物血漿水平(圖72)。在 給藥后2天觀察到峰水平。在任一天均未檢測到顯著水平的內(nèi)匹司他的N-乙?；x產(chǎn) 物。長期(14. 5天)施用內(nèi)匹司他(2mg/kg，bid, po)產(chǎn)生了血漿NE和EPI的顯著減 少以及血漿DA和DA/NE比率的顯著增加。這些變化反映了交感腎上腺系統(tǒng)通過抑制多巴 胺-β-羥化酶的抑制作用。實施例16對內(nèi)匹司他稱重，并置于膠囊(大小為13-Torpac ；East Hanover, NJ)中，得到每 粒膠囊5、15和30mg/kg的劑量(b. i. d.給予，得到10、30和60mg/kg/天的劑量)。初始狗 體重用于確定每只動物的劑量。接受Omg/kg/天的狗接受空膠囊(安慰劑)。內(nèi)匹司他的 所有給藥均以游離堿當量施用。體重為10_12kg的32只雄性比格狗被隨機分派到以下4個治療組之一(η = 8/ 組)Omg/kg/ 天(安慰劑)UOmg/kg/ 天(5mg/kg b. i. d.)、30mg/kg (15mg/kg b. i. d.)或 60mg/kg/天(30mg/kg b. i. d.)的內(nèi)匹司他。狗編號為1-16的分派到給藥組A，狗編號為 17-32的分派到給藥組B。每天用16只研究動物經(jīng)2天進行用于組織采集的最終手術。在 第一化合物施用之前2或3天對每只狗稱重，剃光覆蓋每只狗頭靜脈、隱靜脈和頸靜脈上的 皮膚區(qū)域。每二次給藥8-lOhr后給藥包括口服施用一粒膠囊。在第1-3天按時間表給狗 用藥。在第4天，AM給藥之前，3ml血得自頸靜脈以用于測定基線血漿化合物水平。然后給 狗施用AM劑量，并在給藥后1、2、4和8小時收集另外3ml血液樣品以用于測定血漿化合物 水平。將血液樣品置于含有肝素的試管中，在4°C下離心，再保存于-20°C，直到分析。然后 按時間表施用PM劑量。在手術當天按時間表施用AM劑量。AM劑量以后約6hr，從頸靜脈 取最終3ml血液樣品，以用于測定血漿化合物水平。然后在頭或隱靜脈中iv給予戊巴比妥 Na ( 40mg/kg)將狗麻醉，送到尸體剖檢室，在這里給予另外劑量的戊巴比妥Na ( SOmg/ kg, iv)。然后迅速采集左心室、腎動脈、腎、腎髓質(zhì)、腎皮質(zhì)和大腦皮層，稱重，置于2ml冰冷的0. 4M高氯酸中，在液氮中冷凍，并保存于-70°C，直到對兒茶酚胺使用電化學檢測經(jīng)HPLC 進行分析。將所有組織分成2份，將第二份立即在液氮中冷凍，并保存于-70°C以用于測定 組織化合物水平。將取自左心室的第三個透壁樣品立即在液氮中冷凍，并保存于-70°C以用 于受體結合研究。將心室在50mM Tris_HCl、5mM Na2EDTA 緩沖溶液(pH 7. 4，4°C )中使用 Polytron P-IO組織破碎器(設定10，2x15秒破碎)勻漿。將勻漿以500xg離心10分鐘，將上清液 保存在冰中。通過重新混懸將該片狀沉淀物洗滌，以500xg離心，合并上清液。將該合并的 上清液以48，OOOxg離心20分鐘。通過重新混懸將該片狀沉淀物洗滌，在勻漿緩沖液中離 心1次，再在50mM Tris-HCl，0. 5mM EDTA緩沖溶液(pH 7. 4，4°C )中離心2次。將膜保存 于-70°C直至需要用。使用在含有50mM Tris_HCl、0. 5mM EDTA(pH 7. 4，32°C)的緩沖液中 的[3H]CGP-12177進行飽和試驗。通過IOuM異丙腎上腺素確定非特異性結合。總結合、非 特異性結合和總計數(shù)管設置成8個濃度的[3H]CGP-12177，范圍為0.016nM至2nM。將樣品 在32°C下孵育60分鐘。將樣品經(jīng)0. 1% PEI預處理的GF/B玻璃纖維濾器使用Brandel細 胞收集器過濾。用室溫水洗滌樣品三次達3秒。將水溶膠閃爍液加至每個小瓶中，再通過液 體閃爍計數(shù)測定放射活性。在首次將總配體濃度轉換成游離配體濃度(總-結合=游離) 之后分析飽和結合等溫線。對每種組織完成個別的飽和等溫線。使用Bio-Rad蛋白結合法 并使用Y-球蛋白作為標準對蛋白分析膜。受體密度表示為，每mg蛋白，各治療組的平均 值。通過比較內(nèi)匹司他-治療的組與安慰劑(對照)治療的組來分析組織兒茶酚胺水平。 對各組織和各兒茶酚胺測量值分別進行具有因子DOSE的非參數(shù)單因素方差分析(ANOVA)。 在各劑量下治療和對照之間的配對分析是使用Durmett' s檢驗進行的，以控制試驗-方法 錯誤率。進行Student-Neuman-Kuels和Fisher' s LSD檢驗當作驗證。以2種方式進行 組織和血漿化合物水平的分析。首先，進行個別t-檢驗，以比較各劑量水平與各參數(shù)配對 劑量的因素化水平。例如，在特定組織或血漿中以10mg/kg存在的化合物水平應與在30mg/ kg組中觀察到的化合物水平比較3次。另外，在單因素ANOVA的情況下對全部三個劑量計 算線性正交比較。配對t-檢驗用于測定載劑治療的組與10mg/kg/天內(nèi)匹司他組之間結合 的任何差異。在腎動脈中，以10、30和60mg/kg/天的劑量施用內(nèi)匹司他分別顯著地(ρ < 0. 01) 使去甲腎上腺素水平減少86%、81%和85% (圖73)。多巴胺水平在10、30和60mg/kg/天 的劑量下分別顯著地(P < 0.01)增加180%、273%和268% (圖74)。與安慰劑相比，10、 30和60mg/kg/天內(nèi)匹司他的劑量分別顯著地(p<0.01)使多巴胺/去甲腎上腺素比率增 加1711%、1767%和1944% (圖75)。施用10和60mg/kg/天內(nèi)匹司他之后，在大腦皮層 中，多巴胺水平分別顯著地(P<0.01)增加632%和411% (圖76)。多巴胺/去甲腎上腺 素比率顯著地(ρ < 0.01)在10mg/kg/天內(nèi)匹司他之后增加531%，并且在施用60mg/kg/ 天內(nèi)匹司他之后增加612% (圖78)。在這2個劑量下去甲腎上腺素水平未受顯著(p> 0.01)影響(圖77)。與安慰劑相比，在30mg/kg/天下，去甲腎上腺素顯著(ρ < 0. 01)降低 63%,比率顯著(ρ < 0.01)升高86%，而多巴胺水平勉強(0.05 < ρ < 0. 10)增加174% (圖76-78)。在10、30和60mg/kg/天內(nèi)匹司他之后，在左心室中，去甲腎上腺素水平分別 顯著(ρ <0.01)減少85%、58%和79% (圖80)。與安慰劑動物相比，多巴胺/去甲腎上 腺素比率分別顯著(P < 0. 01)增加852%、279%禾口 607% (圖81)。在10、30和60mg/kg/天內(nèi)匹司他的劑量下未觀察到多巴胺水平顯著變化(圖79)。在腎皮質(zhì)中，與安慰劑相比，在10、30和60mg/kg/天內(nèi)匹司他給藥后，去甲腎上腺 素水平分別顯著減少(ρ < 0.01)86%、66%和85% (圖83)。在這些劑量下，多巴胺水平 分別顯著(ρ < 0. 01)增加156%、502%和208% (圖82)。在10，30和60mg/kg/天的劑 量下，多巴胺/去甲腎上腺素比率分別顯著(ρ <0.01)增加1653%、1440%和1693% (圖 84)。在腎髓質(zhì)中，與安慰劑相比，在10、30和60mg/kg/天內(nèi)匹司他的劑量下，多巴胺/去甲 腎上腺素比率分別顯著(p<0.01)增加555%、636%和677% (圖87)。在30mg/kg/天下 多巴胺水平顯著(P < 0. 01)增加522%，并且在10和60mg/kg/天下分別勉強(0. 05 < ρ < 0. 10)增加150%和156% (圖85)。與安慰劑相比，去甲腎上腺素水平在施用10mg/kg/ 天內(nèi)匹司他后顯著(ρ <0.01)減少72%，并且在60mg/kg/天之后勉強(0. 05 < ρ < 0. 10) 減少69% (圖86)。統(tǒng)計分析顯示，第4天獲得的血漿中內(nèi)匹司他濃度以及第5天獲得的組織和血漿 中內(nèi)匹司他濃度在每一劑量水平與其配對劑量的因素化水平之間是呈劑量比例的。因此， 劑量點確定為線性的，但以下是例外的(顯著性結果表明此類數(shù)據(jù)是非線性的)腎髓質(zhì)=3X10 < 30 (ρ < 0. 05)腎髓質(zhì)6Χ10 < 60 (ρ = 0. 077)血菜(第4 天)=2X30 > 60 (ρ = 0. 076)在第5天，所有檢測的組織中內(nèi)匹司他的水平比血漿中的更高(圖88-90)。該結果證明10mg/kg/天內(nèi)匹司他治療的組與載劑治療的組之間的左心室樣品無 差異(圖91)。實施例17評價內(nèi)匹司他對一系列酶的活性，所述的酶包括酪氨酸羥化酶、NO合成酶、磷酸二 酯酶III、磷脂酶A2、中性肽鏈內(nèi)切酶、Ca2+/鈣調(diào)蛋白激酶II、乙酰CoA合成酶、?；鵆oA-膽 固醇乙基轉移酶、HMG-CoA還原酶、蛋白激酶(非選擇性的)和環(huán)氧酶-I。圖92中所示，內(nèi) 匹司他對全部研究的12種酶具有> 10 μ M的IC5tl，因此是一種高度選擇性的(> 1000-倍) 多巴胺-β-羥化酶的抑制劑。實施例18來自腎上腺的牛DBH得自Sigma Chemicals (St. Louis, MO)。人分泌的DBH是從 成神經(jīng)細胞瘤細胞系SK-N-SH的培養(yǎng)基純化的，并且被用于獲得抑制數(shù)據(jù)。制備含有25ml 凝膠的晶狀體凝集素-瓊脂糖柱，并用50mM KH2PO4, pH 6. 5,0. 5M NaCl平衡。用35ml的 在50mMKH2P04,pH 6. 5,0. 5M NaCl中的10%甲基α，D-甘露吡喃糖苷以0. 5ml/min洗脫該 柱子。收集含有最大酶活性的級分，再用超過濾器(Amicon)攪拌池使用YM30膜濃縮。通 過與50mM KH2PO4, pH 6. 5,0. IM NaCl進行緩沖溶液交換以除去甲基α，D-甘露吡喃糖苷。 將該濃縮的酶溶液分等份，并保存于_25°C。HPLC分析用于測定DBH活性，其中使用酪胺和抗壞血酸作為底物。該方法基 于通過反相HPLC色譜法分離和定量酪胺和酚乙醇胺(Feilchenfeld，N. B.，Richter, H. & Waddell, W. H. (1982).Anal. Biochem :A time-resolved assay of dopamine β -hydroxylase activity utilizatinghigh-pressure liquid chromatography.122 124-128)。在 pH 5. 2 和 37°C 下，在 0. 125M NaAc、IOmM 富馬酸鹽、0. 5 2. 0 μ M CuSO4,0. lmg/ml 過氧化氧醇(6, 500u,Boeringer Mannheim, Indianapolis, IN) >0. ImM酷胺禾口 4mM 抗壞血酸中進行該分析。在典型的分析中，0. 5-1. 0毫單位的酶被加至反應混合物中，然后 加入含有過氧化氫酶、酪胺和抗壞血酸的底物混合物以引發(fā)反應(最終體積200μ 1)。使樣 品在37°C下孵育30 40分鐘。通過含有25mM EDTA和240 μ M 3-羥酪胺(內(nèi)標)的終止 溶液將反應猝滅。將樣品(150 μ 1)加載到Gilson自動采樣器上，并通過HPLC使用UV檢 測于 280ηΜ 處分析。使用 PC-1000 軟件(Thermo Separationsproducts, Fremont, CA)進行 積分和數(shù)據(jù)分析。進行HPLC運行，流速為lml/min，使用LiChroCART 125-4RP-18柱，等度 洗脫使用IOmM酸性酸、IOmM 1_庚烷磺酸、12mM磷酸四丁基銨和10%甲醇。基于無抑制劑 的對照計算剩余百分活性，使用內(nèi)標校正并擬合成非線性4參數(shù)劑量應答曲線，以獲得IC5tl 值。[14C]-酪胺的純化。[14C]酪胺鹽酸鹽是通過C18輕負荷柱(兩個柱合并成一個 柱)純化，將該柱子用2ml的Me0H，2ml的5OmM KH2PO4, pH2. 3，30%乙腈，然后用4ml的5OmM KH2PO4, pH 2. 3 洗滌。使用多頭抽真空裝置(Speed Mate 30, from Applied Separations) 洗滌，并通過真空洗脫該柱子。加載[14C]酪胺之后，將柱子用6ml的50mM KH2PO4,pH2. 3洗 滌，再用含有30%乙腈的2ml的50mM KH2PO4洗脫。將洗脫物冷凍干燥以除去乙腈，重新混 懸于H2O,再保存于-20°C。通過放射活性方法的酶分析法。酶活性是使用[14C]酪胺作為底物進行分析的，并 且用C18柱分離該產(chǎn)物。該分析是在含有IOOmM NaAc,pH5. 2、IOmM富馬酸、0. 5μΜ CuSO4, 4mM抗壞血酸、0. lmg/ml過氧化氫酶和不同濃度的酪胺的200ml體積中進行的。每一反應的 總計數(shù)為 150，OOOcpm。在37°C下，使牛DBH(每一反應為0. 18ng)與在反應緩沖溶液中的 酪胺和抑制劑混合。通過添加抗壞血酸/過氧化氫酶混合物引發(fā)反應，并在37°C下孵育30 分鐘。通過添加100ml的25mM EDTA、50mM KH2PO4,pH 2. 3來終止反應。將全部混合物加載 到C18輕荷載柱(兩個柱合并成一個柱)中，將該柱子預先用MeOH洗滌，再用50mMKH2P04， PH 2. 3平衡。用Iml的KH2PO4,pH 2. 3緩沖溶液兩次，接著用2ml的相同緩沖溶液，洗脫到 閃爍瓶中。將ReadySafe閃爍液(16ml)加至閃爍瓶中，針對14C放射活性對樣品計數(shù)。使用0、l、2、4、8nM的內(nèi)匹司他濃度以研究以下酪胺濃度的抑制動力學0. 5、1、2、 3、4mM。該14C計數(shù)在如上文所述進行的各反應中是相同的。使用無酶的空白對照來獲得背 景。對背景校正數(shù)據(jù)，轉換為以nmol/min為單位的活性，并繪圖(1/V vs 1/S)。Km'是由 斜率計算的，并且使用Y截距和線性回歸來獲得Ki值。SKF102698、內(nèi)匹司他和(R) _5_ 氨基甲基-1_(5，7_ 二氟 _1，2，3，4-四氫 萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽抑制人和牛DBH的IC5tl值是在pH 5. 2和 37°C下，使用HPLC分析法以0. ImM酪胺、4mM抗壞血酸的底物濃度來獲得的。全部三個化合 物對牛和人酶均產(chǎn)生DBH活性的劑量依賴性抑制作用(圖93和94)。內(nèi)匹司他、(R)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3_二 氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽和SKF102698的IC5tl值給于圖95。S對映體(內(nèi)匹司他)比 R對映體((R) -5-氨基甲基-1- (5，7- 二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3- 二氫-2-硫 代-IH-咪唑鹽酸鹽更有效，抑制牛DBH時效率為3-倍，抑制人酶時效率為2-倍。內(nèi)匹司 他比SKF 102698更有效，抑制牛酶時效率為8-倍，抑制人DBH時效率為9-倍。圖96顯示了對牛DBH的抑制數(shù)據(jù)的Lineweaver-Burk圖(上格)，以及表觀Km對抑制劑濃度的圖(下格)。從該圖中確定Km為0.6mM。內(nèi)匹司他(I-SnM)弓丨起Km的較大 偏移，這可能預示其為一種競爭性抑制劑。內(nèi)匹司他對牛DBH的抑制作用顯示與酪胺有競 爭性。4. 7士0. 4nM的Ki是通過線性回歸計算的。內(nèi)匹司他是人和牛DBH的有效抑制劑。其效能比SKF102698大8_9_倍。內(nèi)匹司他 (S對映體)的效能比(R)-5-氨基甲基-l-(5，7-二氟-1，2，3，4-四氫萘-2-基)-2，3_ 二 氫-2-硫代-IH-咪唑鹽酸鹽(R對映體)大2-3倍。內(nèi)匹司他對牛DBH的抑制作用顯示與 酪胺有競爭性，Ki為4. 7 士 0. 4nM。實施例19內(nèi)匹司他的親和力是在圖97中概述的結合分析法中測定的。使用標準放射配體 過濾結合法。通過迭代曲線擬合成四參數(shù)邏輯方程分析競爭結合數(shù)據(jù)。直接獲得Hill系數(shù)和 IC50O競爭配體的pKi (Ki的-log)是從IC5tl值使用Cheng-Prusoff方程計算的。內(nèi)匹司他具有對α工受體的中等親和力(6. 9-6. 7的pKi)。對全部其它檢測受體 的親和力相對較低(PKi < 6. 2)(圖98)。實施例20載劑和內(nèi)匹司他一水合物粉末得自the Center for PharmaceuticalDevelopment, Syntex Preclinical Research and Development。在給藥 時，60-mg/ml內(nèi)匹司他制劑是通過將載劑與內(nèi)匹司他粉末混合，接著振搖來制備的。6-和 20-mg/ml內(nèi)匹司他制劑是通過將60-mg/ml制劑用載劑稀釋來制備的。復溶的內(nèi)匹司他制 劑在使用期間保持效價。含水載劑和內(nèi)匹司他制劑含有羥丙基甲基纖維素、苯甲醇和聚山 梨酯80。根據(jù)急性毒性研究選擇劑量，在該急性毒性研究中給小鼠施用250、1000或 2500mg/kg內(nèi)匹司他的單次口服劑量。毒性和死亡的臨床體征出現(xiàn)在1000和2500mg/kg。載劑或內(nèi)匹司他制劑的單次口服劑量是通過強飼法給每只小鼠使用嚙齒動物插 管器來施用的。選擇該口服途徑是由于它是一種計劃的臨床施用途徑。給藥體積是基于給 藥前記錄的個體體積來計算的(體重數(shù)據(jù)未在本報告中列表)。給藥前2. 5至3. 5小時停 止給予小鼠食物和水，而不是試驗方案中說明的1.5小時。此偏差不會影響該研究的完整 性。在給藥之前記錄臨床觀察。在給藥后開始的60分鐘，每一治療組中的小鼠各自針 對臨床觀察和試驗方案說明的行為學試驗經(jīng)約10分鐘的間隔評價至多3組1O 30-mg/kg組 中的一只小鼠以及100-mg/kg組中的一只小鼠在給藥后死亡，將它們從該研究中排除。使 存活小鼠安樂死，并在觀察/試驗期間結束時從該研究中排除。各組中的6只雄性小鼠各自通過強飼法施用單次口服劑量0(載劑)、30、100或 300mg/kg的內(nèi)匹司他。臨床觀察和行為學試驗是在施用試驗制劑之后60分鐘開始的。在 觀察期間結束時，使全部存活小鼠安樂死，并從該研究中排除。與載劑對照組相比，較低體溫出現(xiàn)在30-、100-和300-mg/kg組中。未出現(xiàn)治療相 關的臨床或嚴重的行為變化。直腸體溫數(shù)據(jù)總結于圖99 ；觀察和行為學試驗數(shù)據(jù)總結于圖 100。未出現(xiàn)治療相關的臨床或嚴重的行為變化。(參見圖101-103)異常群居成群(列為 其它反應)在100-mg/kg組的小鼠中出現(xiàn)，但在300-mg/kg組的小鼠中未出現(xiàn)；認為此發(fā)現(xiàn)是偶然的。在100-mg/kg組中有1只小鼠的臨床/行為變化包括不活動、異常步態(tài)和姿勢、 誘發(fā)的活動減少、異常被動性以及溫和/持續(xù)發(fā)聲；這些變化不歸因于內(nèi)匹司他。在30-和 100-mg/kg組中各有一只小鼠在給藥后死亡；認為該死亡是偶然的，并且將該小鼠從該研 究中排除。實施例21本項研究的目的是確定DBHIs SKF-102698和內(nèi)匹司他是否會產(chǎn)生活動能力或聽 覺驚恐反應性的變化。這些行為的變化可以因此反映出這些化合物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的活性。成年雄性Sprague Dawley 大鼠(在研究日為 250_350g)得自 CharlesRivers Labs0使大鼠住宿于正常亮/暗循環(huán)中，亮光在0900Hrs至2100Hrs之間。使動物成對 住宿于標準金屬網(wǎng)籠中，并且不限制食物和水?；顒幽芰杏蒔lexiglas 盒組成，測得 18〃 X18"，高 12〃。環(huán)繞該Plexiglas 盒的是 Omnitech Digiscan 監(jiān)視器(型號 #RXXCM 16)，該監(jiān)視器組成為1英寸照相光線(photobeam)的ban和每盒編號32的光敏器件。照 相光線中斷的次數(shù)是通過Omnitech Digiscan分析儀(型號#DCM_8)進行分析的。使動物 在封閉的房間中進行試驗，運行白噪聲發(fā)生器以掩蓋外來噪音。聽覺驚恐反應性試驗是在8 個 SR-Lab (San Diego Instruments, SanDiego, CA)自 動試驗裝置中進行的。將大鼠分別置于Plexiglas 圓筒(IOcm直徑)中，該圓筒位于通風 減聲區(qū)域中。聽覺噪音爆發(fā)(具有ι毫秒上升時間和衰減時間的寬頻帶噪聲)是通過在動 物之上30cm安裝的揚聲器提供的。壓電加速計將受試者的運動轉換成評分表中O至4095 的任意電壓。藥物施用之前，72只大鼠各自置于驚恐裝置中，5分鐘適應期之后，給它們提供每 隔20秒的聽覺噪音爆發(fā)達15分鐘(總計45次驚恐)。通過取驚恐次數(shù)11至45的平均 值對每只大鼠計算平均驚恐(前10次驚恐被忽視)。然后將這些大鼠中的64只置于8個 治療組之一，使得每組具有相似的平均驚恐值。這8個治療組如下SKF-102698 (100mg/kg) 及其載劑(50%水/50%聚乙二醇)，可樂定(40yg/kg)，內(nèi)匹司他(3、10、30和100mg/kg)， 和它們的載劑dH20。以前的工作顯示這種匹配操作最適合用于驚恐，因為在大鼠之間的驚 恐反應有顯著差異性，但在大鼠中從一天到次日有高度的一致性。此試驗操作后的每一天，給8只大鼠(來自8個治療組中每一組的一只大鼠)注射 分派給它們的治療藥物，并立即分別置于運動活動盒中。對大鼠運動活動監(jiān)測4小時。然 后，將大鼠置于轉換籠達15分鐘。在此15分鐘開始時，將分派可樂定治療的大鼠再接受一 次40yg/kg的注射。然后，將大鼠置于驚恐裝置中，5分鐘適應期后，每隔1分鐘給它們提 供90dB噪音爆發(fā)達4小時。為評價運動活動，測定了水平活動(照相光線中斷的次數(shù))、運動次數(shù)以及休息時 間。分別分析各參數(shù)。在每一時間間隔(或稱為樣品)，使用分級數(shù)據(jù)進行雙因素方差分 析(ANOVA)(非參數(shù)技術)，以測定白天封閉的治療效果。4個RS-治療的組與載劑對照的 配對比較亦使用Durmett ‘ st-檢驗進行。為評價驚恐反應性，對于200毫秒立即成功的驚恐，通過給每只驚恐大鼠經(jīng)完整 的200毫秒施加平均力，并測定最大力。對每一試驗(TRIALN)的每一治療(TREAT)計算
57該平均的最大值和平均電壓(MAXMEAN和AVGMEAN)，然后將這些值對各治療的試驗次數(shù)繪 圖。將該圖附加到報告中。試驗1-60設定為時間=1，試驗61-120設定為時間=2，試驗 121-180設定為時間=3，試驗181-240設定為時間=4。在每一時間中并對每一治療計算 該平均的最大值和平均驚恐反應。然后將該平均值用于統(tǒng)計分析。使用協(xié)方差分析法來分 析驚恐反應。研究者對在時間內(nèi)的治療比較感興趣，但對治療中的時間作用不感興趣。因 此，通過時間來分析驚恐反應。該模型包括大鼠試驗當天(日期)的項目、基線驚恐反應和 治療。日期為封閉因子，基線驚恐反應為協(xié)同變異。對于上述每一目的有三個分別的模型。 使用Durmett' s程序?qū)⒆兓瘎┝康膬?nèi)匹司他與載劑進行比較，以使控制多重比較。3個參數(shù)(水平活動、運動次數(shù)和休息時間)的分析結果提供于圖104-115。治療 組各參數(shù)對時間的圖顯示于圖116-118。當四個內(nèi)匹司他_治療的組與載劑_治療的對照組比較時，在這3個參數(shù)的任一 個中，在任意的檢查時間，沒有全部的非配對顯著差異。當與載劑_治療的對照比較時，可樂定_治療的組在2和2. 5小時有顯著更多的 水平活動，在2小時有顯著更多的運動，并且在2小時有顯著更少的休息時間(全部的ρ < 0. 05，分別參見圖104-115)。表明在1小時時可樂定-治療的組比載劑-治療的對照組 有顯著更多的休息時間(P < 0. 05)。當與載劑-治療的對照比較時，SKF-102698-治療的組在2. 5小時有顯著更少 的水平活動和顯著更少的運動(二者ρ < 0.05，參見圖104-115)。表明1.5和4小時時 SKF-102698-治療的組比載劑-治療的對照組有顯著更多的運動(二者ρ < 0. 05)。在 休息時間方面，在任何檢查時間均檢測到SKF-102698與載劑之間無顯著差異(參見圖 104-115)。通常，在最初2小時水平活動和運動次數(shù)減少，并在最后2小時保持為低點。類似 地，在最初2小時休息時間增加，并在最后2小時保持為升高的。在大鼠中，內(nèi)匹司他對活動能力沒有顯著作用。在水平活動、運動次數(shù)或休息時間 方面，在任何檢查時間，用3、10、30或100mg/kg的內(nèi)匹司他治療的動物與載劑-治療的對 照動物無顯著差異。在1小時時，用α 2-腎上腺素受體激動劑可樂定治療的動物比載劑_治療的對照 有顯著更多的休息時間。然而在2小時時，用可樂定治療的動物比載劑-治療的對照有顯 著更多的水平活動和運動，以及更少的休息時間。在2. 5小時時，用SKF-102698治療的動物比載劑-治療的對照有顯著更少的水平 活動和運動。在1. 5和4小時時，與載劑-治療的對照相比，用SKF-102698治療的大鼠有 顯著更多的運動。在休息時間方面，在檢查的任意時間，檢測到SKF-102698和對照之間無
顯著差異。在驚恐反應方面，內(nèi)匹司他和載劑的總治療作用對任一種應答在任何時間均不 顯著(ρ > 0. 05)。在時間2時平均驚恐反應的總治療作用勉強顯著(ρ = 0. 0703)，并且 Dunnett' s檢驗顯示內(nèi)匹司他30mg/kg比載劑組有顯著更高的平均驚恐反應(ρ < 0. 05)。 基線平均驚恐反應在時間3和4時對兩種應答是統(tǒng)計學顯著的(ρ彡0.05)；在時間1和2時 對最大驚恐反應是勉強顯著的，并且在時間2時對平均驚恐反應是勉強顯著的(ρ ( 0. 10)。圖123-124顯示了這5個治療組的每一組平均的最大和平均驚恐反應與時間比較。SKF-102698 (100mg/kg)在任意時間對于任一驚恐反應測定與載劑無統(tǒng)計學顯著差異。圖125和126顯示了 SKF-102698和載劑的平均的最大和平均驚恐反應的時間過程?？蓸范ㄔ跁r間1比載劑有統(tǒng)計學顯著更低的最大和平均驚恐反應(P < 0. 01)，并 且在時間2僅對平均驚恐有統(tǒng)計學顯著降低(ρ = 0. 0352)。對于可樂定組，時間2的最大 驚恐反應以及時間3的平均驚恐反應比水組勉強顯著更低。圖127-128顯示對于可樂定和水，平均的最大和平均驚恐反應的時間過程。當與載劑相比時，在任意時間，以3、10、30或100mg/kg施用的內(nèi)匹司他在大鼠中 未顯示最大或平均驚恐反應的作用。在所有時間對于兩種驚恐反應，SKF-102698行為類似 于載劑(PEG)。可樂定在較早時間成功地降低了最大和平均驚恐反應二者，并且在后面的時 間行為類似于載劑。圖119-122顯示了最大驚恐反應的概要統(tǒng)計和顯著性評價。實施例22檢查了內(nèi)匹司他長期給藥的作用。在第一給藥日之前的3至13天之間，將大鼠置 于驚恐裝置中，5分鐘適應期之后，給它們提供平均每分鐘一次的IlSdB噪音爆發(fā)(使用變 量試驗間間隔范圍為30至90秒)達20分鐘。測定驚恐反應，并對每只大鼠計算最后20 次驚恐反應的均值。大鼠隨機置于8個治療組之一中(內(nèi)匹司他5、15或50mg/kg，bid; SKF-102698, 50mg/kg, bid ；可樂定，20ug/kg，bid ；d_ 安非他明，2mg/kg，bid ；dH20 或環(huán)糊精 (SKF-102698的載劑)。通過口服強飼法以lOml/kg給藥體積給大鼠給藥。大鼠每天在早 晨和晚上給藥達10天。在早晨和晚上給藥之間的時間為6至10小時。先前研究顯示，這 種匹配操作對于聽覺驚恐反應性是最適宜的，因為大鼠之間在驚恐反應方面有顯著的變異 性，但是在大鼠內(nèi)從一天到次日有高度的一致性。由于在同一天不可能測試全部96只大鼠(8個治療組，η = 12)，對給藥時間表交 錯使得每一天僅有8只大鼠進行測試。這8只大鼠的12個組各自由來自8個治療組的每 一組的一只大鼠組成，使得該治療組與日期平衡交叉。此外，全部治療組與8個運動活動室 平衡交叉，然而，治療組不與驚恐室平衡交叉。以下行為學試驗在長期給藥期間和之后施藥；身體中心溫度、運動活動、聽覺驚恐 反應性和聽覺驚恐的預脈沖抑制。使動物在有白噪聲發(fā)生器運行的封閉室中試驗。運動活動試驗是在身體中心溫度 讀數(shù)之后立即進行的，該讀數(shù)是在給藥第10天進行(內(nèi)匹司他和SKF-102698在早晨每日 給藥之后約3小時又35分鐘，以及在給藥第10天每天施用可樂定和d-安非他明之前20 分鐘)。運動活動試驗進行1小時。在每一試驗期之前對每一運動活動室運行診斷程序， 以確保照相光線和光敏器件操作適當。運動活動顯示對中樞多巴胺水平變化敏感(Dietze and Kuschinsky, 1994)，其使得此行為學試驗是一種體內(nèi)DBHI作用的潛在的敏感分析法。 D-安非他明被用作此分析法的陽性對照。大鼠身體中心溫度是通過將2cm直腸探條插入到每只大鼠的直腸中來獲得的。 每只大鼠的身體中心溫度測定三次，計算三次讀數(shù)的平均值。身體中心溫度計數(shù)的獲得是在長期給藥時間表第10天之前立即(獲得基線)；在給藥第1、5和10日，內(nèi)匹司他和 SKF-102698的早晨每日給藥之后3. 5小時，以及每日施用可樂定和d_安非他明之前15分 鐘。身體中心溫度顯示對多巴胺和去甲腎上腺素水平均敏感，其使得此行為學試驗是一種 體內(nèi)DBHI作用的潛在的敏感分析法?？蓸范?一種α 2激動劑)和d-安非他明(一種多 巴胺釋放劑)被用作此分析法的陽性對照。聽覺驚恐反應性(由迅速開始的強烈噪音爆發(fā)引起的一系列肌肉收縮)和預脈沖 抑制(通過分析任何驚恐反應性減少測定的感覺運動門控，其是在非驚恐刺激之前即刻驚 恐刺激時發(fā)生的)均在8個SR-Lab (SanDiego Instruments, San Diego, CA)試驗裝置中 進行測定。將大鼠分別置于Plexiglas圓筒(IOcm直徑)中，該圓筒位于通風減聲區(qū)域中。 聽覺噪音爆發(fā)(具有1毫秒上升時間和衰減時間的寬頻帶噪聲)是通過在動物之上30cm 安裝的揚聲器提供的。此外，在全部試驗期間自始至終，這些揚聲器產(chǎn)生68dB水平的背景 噪音。附著在plexiglas圓筒以下的壓電加速計將受試者的運動轉換成電壓，然后將其檢 波并通過裝配SR-Lab軟件和界面集成的PC計算機的數(shù)字化(在0至4095的評分表中)。 分貝計用于將8個試驗裝置中的每一個的揚聲器標準化為平均的士 1%。此外，SR-Lab標 準化裝置用于將8個驚恐檢測裝置中的每一個標準化為平均的士2%。進行驚恐反應性和 預脈沖抑制試驗同時立即改變運動活動試驗(在給藥第10天，內(nèi)匹司他和SKF-102698早 晨每日注射之后約4小時又40分鐘，以及補充施用可樂定和d-安非他明之后10分鐘)。 該驚恐反應性和預脈沖抑制試驗包括將各大鼠分別置于SR-Lab試驗裝置中，5分鐘適應期 之后，給大鼠以平均每分鐘一次提供三種不同類型的噪音爆發(fā)之一(和驚恐反應測定)(使 用變量試驗內(nèi)間隔范圍為30至90秒)達1小時(60次總噪音爆發(fā)和驚恐反應)。三種不 同類型的噪音爆發(fā)包括高聲噪音爆發(fā)(118dB)，和相對完全(quite)的噪音爆發(fā)(77dB)，高 聲噪音爆發(fā)之前100毫秒的完全爆發(fā)(預脈沖抑制試驗)。這些試驗是以假隨機順序提供 的。預脈沖抑制已顯示對中腦邊緣多巴胺水平的變化敏感。此外，聽覺驚恐反應性亦顯示 對多巴胺和去甲腎上腺素水平的變化敏感，這使得這些行為學試驗是一種體內(nèi)DBHI作用 的潛在的敏感分析法。可樂定和d-安非他明用作聽覺驚恐反應性和聽覺驚恐的預脈沖抑 制試驗的陽性對照。每日行為學試驗的時間表如下。在t = 0時，注射DBHI。在3. 5小時時，測定中 心體溫。在3小時35分鐘，評價運動活動。在4小時40分鐘，評價驚恐反應性和預脈沖抑 制。從每個試驗時間的每個受試者取三個溫度讀數(shù)。然后計算這三個讀數(shù)的平均值。通過計算在試驗期間受試者打斷的照相光線的總次數(shù)來獲得每只大鼠自發(fā)運動。針對刺激出現(xiàn)之后40毫秒窗口在每個試驗期間測定受試者的反應。每個驚恐反 應是通過取每次噪音爆發(fā)之后立即開始的40個讀數(shù)(每毫秒一次)的均值來計算的。聽 覺驚恐反應性是通過測定針對每個受試者由IlSdB聽覺爆發(fā)引發(fā)的驚恐的平均應答來計 算的。預脈沖抑制值是通過對每只大鼠將77dB脈沖-IlSdB脈沖配對的試驗引發(fā)的平均驚 恐反應(上文所述預脈沖抑制)被IlSdB單獨試驗的相減，然后此值除以IlSdb單獨試驗 的值，即([IlSdB試驗值-預脈沖抑制試驗值]+IlSdb試驗值)。具有治療主作用的全部單因素ANOVA是在各時間針對每只動物基于基線的變化 來進行的。接著針對各重要性的比較進行t-檢驗。
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針對每只動物每15min測定自發(fā)運動活動達1小時。分別分析每個時間間斷(每 15min)。進行Kruskal-Wallis檢驗(非參數(shù)技術)，以檢驗治療組之間的差異。如果未檢 測到總體的顯著性差異，則針對多重比較進行Bonferroni' s調(diào)整。在每一治療中(TRIALN)，針對每一治療(TREAT)和試驗類型(TRIALT)計算平均的 平均電壓(AVGMEAN)和平均百分預脈沖抑制(RATIO)。預脈沖抑制值是通過對每只大鼠將 77dB脈沖-IlSdB脈沖配對的試驗引發(fā)的平均驚恐反應(上文所述預脈沖抑制)被IlSdB 單獨試驗的相減，然后此值除以IlSdb單獨試驗的值，S卩([IlSdB試驗值-預脈沖抑制試驗 值]+118db試驗值)。將這些值對每一治療的試驗編號以及試驗類型進行繪圖，這些圖附入報告中。注 意，該圖上的y-軸改變。試驗1-15相應于時間1，試驗16-30相應于時間2，試驗31-45相 應于時間3，試驗46-60相應于時間4。對于每一治療，顯示動物的平均的百分預脈沖抑制 和平均的平均驚恐對TIME的圖亦附上。平均驚恐反應和百分預脈沖抑制是使用方差分析進行分析的。該模型包括治療期 限、入組治療的動物、時間和經(jīng)時相互作用的治療。使用誤差限對入組治療的動物檢驗治療 作用。研究了總治療作用和經(jīng)時治療作用。Fisher' s最低顯著性差異的方法用于調(diào)整 多重比較。如果該總治療作用和經(jīng)時治療作用不顯著(P-值> 0. 05)，則進行Bonferroni 調(diào)整。如果該總治療作用不顯著，則該調(diào)整施用于特定的配對比較。此外，如果該特定的 配對治療作用不顯著(P-值>0.05)，則還將該調(diào)整用于時間內(nèi)的治療作用。如果總治療 和經(jīng)時治療作用二者均不顯著(p-值〉0. 05)，則針對單個比較在時間內(nèi)和經(jīng)時平均進行 Bonferroni 調(diào)整。對每只動物為本分析計算給藥前體重的變化。反復測定雙因素ANOVA被用于治療 總作用、時間和經(jīng)時相互作用的治療。然后進行單因素ANOVAS以檢查每天的治療作用。圖129-130顯示了對每只大鼠的預治療聽覺驚恐反應性和開始日期。圖131顯示，除了陽性對照(d-安非他明和可樂定)在長期給藥的第一天顯著增 加身體中心溫度，無其它化合物在任何時間對身體中心溫度有任何顯著作用。圖132-133 包含每一治療在各時間的平均身體中心溫度、中心體溫根據(jù)基線的平均變化，和顯著性結^ ο如圖134所示，d-安非他明組在檢查的所有時間均比載劑對照有顯著更高的活動 能力。然而，可樂定組在檢查的任何時間與載劑對照無顯著性差異。在最初45分鐘(即樣 品1-3)，SKF 102698 50mg/kgb. i. d.組比其載劑對照有顯著更低的活動能力，但在45分鐘 之后無顯著性(參見圖135-136)。圖137亦顯示，內(nèi)匹司他在檢查的任何時間無總體顯著治療作用。配對比較顯示， 在檢查的任何時間，無內(nèi)匹司他-治療的組與載劑對照有顯著性差異。此外，在檢查的任何 時間，兩個載劑對照之間無顯著性差異((dH20和SKF的載劑)(參見圖135和圖136)。如圖138所示，無治療組在預脈沖抑制方面產(chǎn)生任何顯著變化。對于SKF 102698 組和環(huán)糊精組，總體時間作用是統(tǒng)計學顯著的(ρ = 0.0001)。對于環(huán)糊精對比dH20，經(jīng)時 相互作用治療是統(tǒng)計學顯著的(P = 0.0283)，但其它無顯著性。對于重要性的任何比較， 治療作用無顯著性。然而，與環(huán)糊精組相比，SKF組具有勉強更高的百分預脈沖抑制(ρ = 0. 0782)(參見圖 139)。
在時間1和2中，可樂定組比載劑對照恰好有顯著更高的百分預脈沖抑制，并且在 時間3和4期間與載劑無顯著不同(參見圖140-141)。在任何時間與它們本身的載劑相 比，d-安非他明和SKF 102698均無顯著差異。在任何時間與dH20相比，沒有內(nèi)匹司他給藥
組有顯著差異。如圖142所示，在聽覺驚恐反應性方面僅SKF 102698治療組產(chǎn)生顯著變化。對于 重要性的全部比較，總體時間作用是統(tǒng)計學顯著的(全部ρ = 0.0001)。對于安非他明與 dH20、可樂定與dH20以及環(huán)糊精與dH20的比較，經(jīng)時相互作用治療是統(tǒng)計學顯著的(全部 P < 0. 05)，但其它無顯著性。對于SKF 102698 50mg/kgb. i. d.對比環(huán)糊精(ρ = 0. 0007) 以及對于內(nèi)匹司他 50mg/kg b. i. d.對比 SKF 102698 50mg/kg b. i. d. (ρ = 0. 0047)，治療 作用是顯著的，但其它無顯著性(參見圖143)。SKF 102698 50mg/kgb. i. d.組與環(huán)糊精相 比有顯著更低的驚恐反應，并且與內(nèi)匹司他50mg/kgb. i.d.組相比亦有顯著更低的驚恐反 應。在任何時間SKF 102698 (50mg/kgb. i. d.)組比環(huán)糊精組有顯著更低的驚恐反應 (參見表144-145)。在時間1和3期間，內(nèi)匹司他(50mg/kgb. i.d.)組比SKF 102698 (50mg/ kg b. i.d.)組有顯著更高的驚恐反應。未檢測到有其它顯著性差異。在給藥前基線組之間體重方面無總體或配對顯著性差異。如圖146-147所示，d-安非他明組與載劑對照相比從給藥前在體重方面有顯著更 小的變化(p<0.01)。當在各個日內(nèi)分析時，在4-10治療日，載劑對照與安非他明組相比 從給藥前在體重方面有顯著更大的增加。然而，在檢查的任何時間，可樂定組與載劑對照無 顯著差異。如圖146所示，SKF 102698 (50mg/kgb. i.d.)組與其載劑對照(SKF-載劑)相 比從給藥前基線在體重方面顯示顯著更小的增加(ρ <0.01)。當在各個日內(nèi)分析時，在第 2-10天治療時，SKF-載劑對照與SKF 102698組相比從給藥前在體重方面有顯著更大的增 加，但第3天和第6天除外。重要的是，在任何日期，SKF-載劑與載劑對照組之間在體重方 面的變化無差異。如圖147所示，在檢查的任何時間，對于內(nèi)匹司他任何劑量沒有總體的顯著治療 作用。在檢查的任何時間，配對比較顯示沒有內(nèi)匹司他-治療的組與載劑對照是顯著不同 的。有趣的是，關于體重變化方面，在SKF 102698 (50mg/kg b. i. d.)組與內(nèi)匹司他(50mg/ kg b. i.d.)組之間有顯著的(ρ <0.05)總體差異。當在各個日內(nèi)分析時，在第7-9天SKF 102698 (50mg/kg b. i. d.)組比內(nèi)匹司他(50mg/kg b. i. d.)組有顯著更低的體重。實施例231-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)購自 RBI，Inc，(Natick，MA)。為了 施藥，以濃度2mg/ml (游離堿)將MPTP混懸于水中，再以等于各動物重量(kg)的體積皮下 注射。例如，950克動物接受2mg/ml的MPTP的0. 95ml注射，得到每一注射最終為2. Omg/
kg ο二十七(27)只成熟松鼠猴(Saimiri sciureus)用于本研究，其中16只雌性和11 只雄性。使這些猴子保持在13h/llh亮-暗循環(huán)中，不限制食物和水。用于本研究的所有 操作遵循NIH指南，并且經(jīng)動物養(yǎng)護和使用學會委員會(IACUC)批準。動物分別居住并且 在開始行為研究之前容許有最低一個月適應成遷居者。這些研究中使用總計6只松鼠猴，3只未受傷害，3只受傷害(3個月前接受2mg/
62kg MPTP)。為了測定藥物內(nèi)匹司他的最佳施用途徑，檢查了三種不同的方法，它們包括(i) 插入物治療法、(ii) 口服灌注法、和(ii) 口服強飼法。(i)RS溶液(5mg/ml)在藥用蜀葵中 的插入物在3只未受傷害的猴子中試驗，證明這是一種差的藥物施用途徑，原因是可能由 于不利的味道使動物不能攝入治療物。(ii)藥物(0. 5、2和5mg/kg)進入3只未受傷害的 和3只受傷害的猴子口中的口服灌注注射亦是不能接受的途徑，因為在最高藥物濃度下動 物容易吐出該溶液。(iii) 口服強飼法施用是在最高劑量(5mg/kg)下在3只MPTP-傷害的 猴子中進行，并且很好地被接受。這些結果(口服灌注和口服強飼法投藥)總結于圖148和圖149。這些研究中使用總計6只松鼠猴，3只未受傷害，3只受傷害(3個月前接受2mg/kg MPTP)。動物每天2次接受0. 5，2. 0,或5. Omg/kg濃度的藥物(IOam和2pm)，共計5天，在 不同劑量水平之間有2天的清洗期。藥物施用是通過0. 5,2. 0和5. Omg/kg劑量口服灌注 法，以及5. Omg/kg劑量口服強飼法。在這兩個較低劑量下藥物耐受良好。一只未受傷害的 猴子接受5. Omg/kg，其在施藥的最后兩天有輕度的褐色稀糞，停藥一天即消退。這些結果總 結于圖148和149。本項研究中使用總計24只松鼠猴(Saimiri sciureus)，14只雌性，10只雄性。將 這24只動物隨機分派到4個治療組之一，6動物只/組。各組包括如下(I)A組安慰劑； (2) B 組lmg/kg/ 天；(3) C 組:4mg/kg/ 天；和(4) D 組1 Omg/kg/ 天。在 B 組中，在 MPTP-傷 害后1只動物急劇死亡，未予替換。傷害之前，使用紅外活動監(jiān)視(IRAM)籠使動物進行自發(fā)運動活動的定量評價。全 部記錄期間長為60分鐘，在2周時間歷經(jīng)10個期間。動物行為亦通過1至3個臨床評定 者使用帕金森臨床等級評分表(CRS)進行評價，每天一次(中午12點到下午1點)，達到連 續(xù)3至5天。正常動物在CRS中通常得分不大于3 (參見圖150關于這些研究中使用的臨 床等級評分表)?；顒颖O(jiān)視(IRAM)和臨床等級評分二者確立了每只動物的平均基線活動。通過皮下注射施用濃度2. Omg/kg的MPTP(游離堿)使動物受傷害使之成為帕金 森狀態(tài)(參見圖151-156)。MPTP傷害后行為評價是在最后的MPTP-傷害之后2至4周進 行的。通過60-分鐘期間的IRAM監(jiān)視活動能力，達3至5天。在3至5天期間通過1至3 個個別的等級評價臨床行為(CAS)。在某些情況下，動物需要另外劑量的MPTP(2mg/kg)來獲得足夠程度的傷害，以顯 示帕金森癥狀，其定義為平均的總臨床等級評價得分大于3。在開始該有效性研究的3周內(nèi)，全部動物接受最終的MPTP后行為評價(IRAM和 CRS)。該最終的MPTP后評價被用于確立基線臨床帕金森狀態(tài)，并且用作用于統(tǒng)計分析的預 治療值。動物測試對左旋多巴的應答和藥物內(nèi)匹司他的有效性。在最后MPTP給藥之后4至 12周進行試驗。24只松鼠猴被隨機分派到4組:A組(6只動物)接受安慰劑(水)治療； B組(5只動物)接受lmg/kg/天的藥物內(nèi)匹司(0. 5mg/kg,每天兩次)；C組(6只動物)接 受4mg/kg/天(2mg/kg，每天兩次)；以及D組(6只動物)接受10mg/kg/天(5mg/kg，每天 兩次)。左旋多巴以2. 5、5或7. 5mg/kg的濃度通過口服強飼法每天兩次施用(在IOam和 2pm)達連續(xù)7天。通過IRAM和CRS測定行為。在治療最后4天早晨IOam給藥后進行臨床等級評價60至90分鐘。評定者(1至3個個體)不清楚不同的治療組。在藥物治療的最 后2至5天2pm施藥后立即進行IRAM評價達90分鐘。各個治療劑量之間有最少2天的清 洗期。左旋多巴給藥后，接著至少2天的清洗期，然后施用藥物內(nèi)匹司他或水(作為安慰 劑)達12天。通過口服強飼法在IOam和2pm每天兩次施用藥物。通過IRAM和CRS對行 為評分。在藥物治療的最后5天，在IOam內(nèi)匹司他給藥后60至90分鐘，在早晨進行CRS。 評定者(1至3個個體)不清楚不同的治療組。在藥物治療的最后5天2pm施藥后立即進 行IRAM評價達90分鐘。在松鼠猴中進行藥物代謝動力學研究以測定內(nèi)匹司他的血漿濃度。本項研究與安 全性和耐受性研究同時進行。使用3只MPTP-傷害的松鼠猴(#353、358和374)。收集Iml 血液(取自各動物的股靜脈)用于分析。內(nèi)匹司他以1、4和10mg/kg的濃度施用5天，各 藥物濃度之間有2天的清洗期。在第一次給藥之前1小時收集血液用于分析以建立基線， 并且在各不同藥物水平的此第一次給藥后6小時收集血液用于分析。進行第二個藥物代謝動力學研究以確定內(nèi)匹司他的穩(wěn)態(tài)血漿水平。本項研究與有 效性研究同時進行，在該有效性研究中使動物在三個不同藥物濃度的每個濃度下進行試驗 達12天。從股靜脈抽取血液1ml，取血時間是第1天第一次給藥后6小時，然后是第7天第 一次給藥后6小時，最后是第12天第一次給藥后6小時?；€血漿水平是對給藥之前的那 周收集的樣品測定的。對各動物計算MPTP-傷害前和傷害后的平均活動能力。MPTP-傷害前基線是通過 將10個1小時監(jiān)測期平均來確定的。MPTP后(預治療)行為評價是在開始有效性研究的 3周內(nèi)獲得的。MPTP-傷害后活動能力是通過將3至5個1小時監(jiān)測期(IRAMS)平均來確 定的?；顒颖O(jiān)測報告為“運動次/10分鐘”。得分高的認為是更快的動物。Wilcoxon體征 秩和檢驗被用于比較每組動物(A組至D組)的MPTP-傷害前和傷害后活動。(b)臨床等級 評價得分在該CRS中，MPTP-傷害前的動物沒有得分大于3的。通過將1至3個單獨評定 者根據(jù)連續(xù)3至5天的數(shù)據(jù)的總CRS平均，在開始有效性研究的3周內(nèi)測定MPTP后臨床等 級評價得分。評定每只動物的8種帕金森特征，總得分來自這8個特征的總和。對于每只動物， 獲得每個給藥的單個臨床等級評價得分，其方式是將經(jīng)連續(xù)多個給藥(劑量相同)日進行 的全部評定者(1至3名)的臨床等級評價得分平均。將該平均CRS用于統(tǒng)計分析。得分 低的認為帕金森行為狀態(tài)較少。統(tǒng)計分析包括(1)使用Kruskal-Wallis (非參數(shù)方差分析)比較安慰劑與1、4和10mg/kg/天 的內(nèi)匹司他的平均CRS。使用經(jīng)各動物最終MPTP后評分校正的各試驗藥物濃度的平均CRS 來重復此比較。校正的臨床得分是各濃度試驗藥物的臨床得分，其為MPTP后臨床得分的比率。(2)使用弗里德曼氏分析(非參數(shù)方差分析，重復測定)，MPTP傷害后(預治療)對 于2. 5、5. 0和7. 5mg/kg左旋多巴和安慰劑治療的平均CRS之間配對比較。對1、4和IOmg/ kg濃度的內(nèi)匹司他進行相同分析。需要時進行非參數(shù)數(shù)據(jù)的Durmett氏因果分析。在每一藥物水平之后，每隔10分鐘監(jiān)測IRAM活動能力最小90分鐘。評分越高則認為動物更快(較少帕金森)。統(tǒng)計分析包括描述統(tǒng)計以及安慰劑和1、4和10mg/kg的試驗藥物的各個10分鐘 數(shù)據(jù)組的平均值繪圖。然后檢查該圖以鑒別任何趨勢。未進行進一步的統(tǒng)計分析，因為根 據(jù)圖分析測定到?jīng)]有差異。比較MPTP傷害后(預治療)對2. 5，5.0，and 7. 5mg/kg左旋多巴和內(nèi)匹司他(1、 4、10mg/kg/天或安慰劑)的統(tǒng)計分析未予進行，原因是IRAM數(shù)據(jù)收集不足。在MPTP后僅 收集60分鐘時間，相比之下內(nèi)匹司他為90分鐘。IRAM(活動監(jiān)測)和CRS (臨床等級評分表)二者均用于評價各松鼠猴的MPTP-傷 害的程度。下列部分將這些顯示IRAM和CRS的A組至D組的結果列成表?？偟膩碚f，由 IRAM測定的活動能力在組內(nèi)基線(MPTP-傷害前)與MPTP-傷害后之間無顯著性差異，原因 是各動物的高度變異的RAM結果。該CBS結果顯示了 MPTP傷害前和MPTP-傷害后狀態(tài)之 間的差異。在CRS中MPTP-傷害前的動物得分不大于3。MPTP-損傷后動物均得分大于3。 所有組(A至D)具有的平均CRS范圍為8至10，其超出24分的總計可能的CRS得分。圖153A顯示了 A組結果安慰劑治療。傷害前和傷害后IRAM組之間沒有顯著性 差異，原因是每只動物每10分鐘的運動是有高度差異的。Wilcoxon體征秩和檢驗W= 19， N = 6, P <0.06接受零假設。圖153B顯示了臨床等級得分(GRS)。A組的平均GRS為8. 9，范圍為4. 8至15. 4。 全部動物均顯示MPTP傷害后的臨床等級評價得分基本上增加。正常動物(未受傷害的) 通常具有低于3的得分。圖154A和B顯示B組的結果lmg/kg/天治療。傷害前和傷害后IRAM組之間沒 有顯著性差異，原因是每只動物每10分鐘的運動是有高度差異的。Wilcoxon體征秩和檢 驗W = 9，N = 5，P < 0. 06接受零假設臨床等級得分(CRS)。B組的平均CRS為10. 32，范 圍為4. 3至16. 1。全部動物均顯示MPTP傷害后的臨床等級評價得分基本上增加。正常動 物(未受傷害的)通常具有低于3的得分。圖155顯示了 C組的結果4mg/kg/天治療。傷害前和傷害后IRAM組之間沒有顯 著性差異，原因是每只動物每10分鐘的運動是有高度差異的。Wilcoxon體征秩和檢驗
=17，N = 6，P > 0.06接受零假設。C組的平均CRS為8. 97，范圍為6. 5至17. 3。全部動 物均顯示MPTP傷害后的臨床等級評價得分基本上增加。正常動物(未受傷害的)通常具 有低于3的得分。圖156顯示了 D組的結果10mg/kg/天治療。傷害前和傷害后IRAM組之間沒有 顯著性差異，原因是每只動物每10分鐘的運動是有高度差異的。Wilcoxon體征秩和檢驗 W =21, N = 6, P >0.06接受零假設。全部動物均顯示MPTP傷害后的臨床等級評價得分 基本上增加。C組的平均CRS為8. 02，范圍為4.0至15. 6。正常動物(未受傷害的)通常 具有低于3的得分。在MPTP-傷害的松鼠猴中，安慰劑治療與三種不同濃度的內(nèi)匹司他(l，4，10mg/ kg/天)之間沒有可檢測到的差異。4和10mg/kg/天的內(nèi)匹司他與安慰劑均顯示超出MPTP 后(預治療)狀態(tài)的顯著改善。當與MPTP后(預治療)比較時，所有組的動物用5mg/kg 和7. 6mg/kg左旋多巴均顯示出顯著改善，例外的是7. 5mg/kg劑量的C組和5mg/kg/劑量 的B組。當與MPTP后比較時，在2. 5mg/kg左旋多巴時沒有動物組證明有顯著改善。
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圖157-170顯示了治療組與左旋多巴的比較、弗里德曼試驗結果、描述統(tǒng)計和 Dunnett檢驗因果分析。圖171-172顯示了安慰劑治療的活動監(jiān)測與所有其它濃度內(nèi)匹司他之間在給藥 后時間點10至90分鐘時的比較。對各個藥物劑量水平繪制10分鐘間隔。當與安慰劑比 較時，以4和10mg/kg/天劑量水平的藥物(內(nèi)匹司他)治療無差異。lmg/kg/天動物比安 慰劑治療緩慢。根據(jù)4個不同治療組(1、4和10mg/kg的內(nèi)匹司他和安慰劑)的非配對比 較分析，在PD的MPTP-傷害的非-人靈長類動物模型中，與安慰劑(水治療)相比，內(nèi)匹司 他對帕金森癥狀未產(chǎn)生顯著作用。根據(jù)動物的配對比較分析，(治療前和治療后檢查的相 同組動物)，與MPTP傷害后相比，4和10mg/kg/天濃度的內(nèi)匹司他顯示對帕金森癥狀的顯 著作用(預治療評價)。安慰劑具有邊緣顯著作用。使用相同的配對比較，與MPTP傷害后 狀態(tài)相比，在全部組中5和7. 5mg/kg的左旋多巴證明有顯著作用，但B組(5mg/kg左旋多 巴無作用)和C組(7.5mg/kg左旋多巴無作用)動物除外。然而，2.5mg/kg的左旋多巴證 明無顯著作用。本項研究還證實，當使用少數(shù)動物時，與非配對研究設計相比，通過比較相同動物 治療前和治療后來減少動物與動物之間的差異性的配對分析更加適用于檢測藥物作用顯著性。實施例24使雄性自發(fā)性高血壓大鼠(280_345g;Charles River Labs, Kingston, NY)禁食 過夜，然后用醚麻醉。用PE50管對股動脈和股靜脈插管，以分別用于記錄血壓和施用化合 物。然后將動物置于MAYO固定器并使它們的腳松松地綁在固定器上。肝素化鹽水(50單 位肝素鈉/ml)用于在整個試驗中保持各插管的暢通。使用安裝在IBM個人計算機上的 ModularInstruments MI2 BioR印ort 軟件連續(xù)記錄以下參數(shù)平均動脈壓(MAP)、心率 (HR)、以及各參數(shù)在該試驗中的特定時間點隨基線的變化。在使用當天將全部化合物溶解。使內(nèi)匹司他溶解于去離子水(載劑)中得到Img/ ml的游離堿濃度。內(nèi)匹司他或載劑的口服給藥體積為10ml/kg。使SCH-23390溶解于鹽水 (載劑)中得到0.2mg/ml的游離堿濃度。內(nèi)匹司他或鹽水以1. 0ml/kg的體積靜脈內(nèi)推注， 接著用0. 2ml等滲鹽水沖洗。手術操作之后，給予各動物最少1小時的恢復期。動物被隨機分派到4個治療 組載劑(iv)/載劑(Po)；載劑(iv)/內(nèi)匹司他(po) ；SCH-23390(iv)/載劑(po)；或 SCH-23390 (iv) /內(nèi)匹司他(po)。一旦動物安穩(wěn)下來(最少1小時)，通過在15min期 間取各參數(shù)的平均值測定基線血壓和心率。一旦基線血壓和心率確定，動物靜脈給予 SCH-23390 (200 μ g/kg)或載劑(鹽水。lml/kg)。15分鐘之后，動物口服給予內(nèi)匹司他 (10mg/kg)或載劑(去離子水，10ml/kg)。在靜脈給藥之前對記錄的參數(shù)測定15min，以確定基線血壓和心率。然后將在靜脈 內(nèi)施用SCH-23390或載劑后5、10和15min測定記錄的參數(shù)?？诜┯脙?nèi)匹司他或載劑之 后，在 15、30、60、90、120、150、180、210和 240min 測定記錄的參數(shù)。在試驗結束時，使各動物用氟烷麻醉，并通過斷頭處以安樂死。切出皮層、左心室 (apex)和腸系膜動脈，稱重，并固定在0.4M高氯酸中。然后使組織在液氮中冷凍，并保存 于-70°C。在隨后日期將對這些組織進行生物化學分析，以測定兒茶酚胺水平(特別是，多巴胺和去甲腎上腺素)。分析結果將在隨后日期報告。分別分析血壓和心率。通過方差分 析(ANOVA)用治療作用、時間及其相互作用分析血壓和心率隨基線的變化。對iv后時期以 及口服后時期均進行本項分析。通過ANOVA以對時間的主要作用在各時間進行進一步的分 析。當總治療作用不顯著時，在各ANOVA之后通過具有Bonferroni校正的Fisher’ s LSD 策略進行配對比較。通過具有主治療作用的ANOVA和以后的配對比較進行另外的分析以比較各治療 組的基線平均值。進行SCH-23390(iv)/載劑(po)對載劑(iv)/載劑(po)、載劑(iv)/內(nèi) 匹司他(po)對載劑(iv)/載劑(po)、以及SCH-23390(iv)/內(nèi)匹司他(po)對載劑(iv)/內(nèi) 匹司他(Po)的比較。各治療組之間的基礎心率或平均動脈壓無顯著差異(圖173)。與載劑對照相比，在口服后期間120min和240min，用SCH-23390靜脈治療導致心 率顯著降低(P < 0. 05)(圖174)。內(nèi)匹司他沒有像載劑治療動物中觀察到的那樣多的降低 心率。這在給藥后150和180min時是統(tǒng)計學顯著的(ρ < 0. 05)(圖174)。應當指出，此試 驗過程中觀察到心率方面的巨大的差異性。與接受載劑的動物相比，iv后期15min期間，靜脈內(nèi)施用SCH-23390使平均動脈 壓產(chǎn)生小量(5 士 ImmHg)但顯著的降低(ρ < 0. 05)(圖175)。用內(nèi)匹司他口服治療到給 藥后30min引起平均動脈壓的顯著降低(ρ <0.05)，這在該試驗期間持續(xù)(圖175)。用 SCH-23390預治療未顯著降低內(nèi)匹司他單獨施用觀察到的抗高血壓作用(圖175)。實施例25使用15周齡的雄性Crl :C0BS(WI)BR大鼠。給24只大鼠長期植入遙測植入物 (TA11PA-C40, Data Sciences, Inc.，St. Paul, MN)以用于測定動脈血壓、心率和運動活動。 使大鼠用戊巴比妥鈉(60mg/kg，ip)麻醉，并剃光其腹部。在無菌狀態(tài)下，在正中線作一切 口。暴露腹主動脈，插入遙測發(fā)射機設備的導管。在將該傳感器縫合到該腹部肌肉中后，使 皮膚閉合。使每只大鼠恢復至少2周，然后進行藥物施用。在開始試驗前三天，將大鼠隨機 分派到4個治療組中載劑(ρ· ο.)、胼屈嗪(10mg/kg，p. ο.)、內(nèi)匹司他(30mg/kg，p. ο.)、內(nèi) 匹司他(100mg/kg, ρ. ο.)。監(jiān)測收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均血壓(MBP)、心率(HR)、和運動活動(MA)。確 定了這些參數(shù)的給藥前值以后，各組大鼠接受7天的載劑、內(nèi)匹司他或胼屈嗪的每日治療。 關于MBP、HR和MA的典型的給藥前數(shù)據(jù)提供于圖176-178。內(nèi)匹司他和胼屈嗪二者均制備于含有微量Tween 80的水中。全部劑量均是以 10ml/kg 口服給予大鼠，并且表示為游離堿當量。使用計算機數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)以連續(xù)采集關于SBP、DBP、MBP、HR和MA的數(shù)據(jù)。每 隔5min采集每只大鼠的數(shù)據(jù)達10秒。然后將它們每小時取平均，并計算平均值的標準誤 (SE)。在本報告中，僅提供MBP、HR和MA的數(shù)據(jù)。為清楚起見，圖中略去了 SE棒和顯著性 水平的標記(參見圖186關于盧非酰胺治療大鼠的MBP的各時間點的顯著性水平，以及圖 187關于胼屈嗪治療大鼠的MBP的各時間點的顯著性水平)。每日記錄體重。全部值均表示為平均值士SEM。統(tǒng)計學顯著定義為小于0. 05的ρ水平。分別分析MBP、HR和MA的數(shù)據(jù)。每個分析針對每天測定的26個時間點進行。使 用具有治療主作用和時間及其相互作用的雙因素AN0VA。如果檢測到總治療作用或顯著相互作用，則將進行各時間點的一系列單因素AN0VA。在各時間點的配對比較是使用Durm氏 方法進行的。如果未檢測到總治療作用，則與對照的配對差異將通過使用Bonferroni調(diào)節(jié) 法調(diào)節(jié)臨界值來進行。對于體重，將關于與給藥前變化的雙因素ANOVA用于分析治療的總作用、天、和經(jīng) 天相互作用的治療。然后對每一天進行單因素AN0VA，使用Durm氏方法和Fisher’ s LSD 策略進行藥物_治療組與載劑對照的配對比較，以調(diào)節(jié)多重比較?？诜┯?0mg/kg的內(nèi)匹司他(下文表示的所有給藥均為po)在第1天傾向于緩 慢降低血壓，但不會誘發(fā)連貫的低血壓作用(圖179)。隨著該作用的發(fā)展，-IOmmHg的峰值 低血壓作用在第2天第13小時觀察到(圖180)。在整個研究中還誘發(fā)類似程度的抗高血 壓作用。在100mg/kg時，在第1天給藥之后22hr，化合物誘發(fā)-IlmmHg的峰值抗高血壓反 應(P < 0. 01 ；圖179)。在第3天MBP連續(xù)降低并達到其約-17mmHg的最低點(ρ < 0. 01 ； 圖181)。在整個研究中該MBP保持低點(參見圖182，第7天)。10mg/kg的胼屈嗪引起立即的低血壓作用，這在IOhr時消退(圖179)。在第1天 給藥后Ihr內(nèi)，觀察到在MBP方面有-24mmHg的最大降低(ρ < 0. 01)(圖179)。在整個研 究中觀察到了類似短暫的低血壓作用(參見圖179-182)。30和100mg/kg的內(nèi)匹司他在第1天未連貫地影響HR。然而，在第2天，100mg/kg 的內(nèi)匹司他在給藥后3小時引起-100b/mm的心動過緩應答(圖183)。在第3_7天觀察到 顯著的但較低斷言性的心動過緩應答。相比之下，在整個研究中，10mg/kg的胼屈嗪誘發(fā)不同程度的心動過速(參見圖 183)。在整個研究中，沒有一種藥物治療顯示出對MA的連貫的作用(例如，參見圖184， 第3天)。與載劑治療相比，沒有一種藥物治療具有對體重的任何作用(ρ < 0. 05 ；圖185)。 盡管用100mg/kg的內(nèi)匹司他容易在第3天降低體重，但其無統(tǒng)計學顯著性。對于相關領域技術人員而言顯而易見的是，對本文描述的方法和應用的其它適當 修飾和改編是適宜的，并且可以實現(xiàn)而不會脫離本發(fā)明或其任何實施方案的范圍。雖然本 發(fā)明已結合某些實施方案進行了描述，其并不欲意將本發(fā)明限制到所述的具體形式，相反， 其將涵蓋此類替換物、修飾物和等價物，同樣地，其可以包括在如以下權利要求所定義的本 發(fā)明精神和范圍內(nèi)。
權利要求
治療診斷有創(chuàng)傷后應激障礙的患者的方法，其包括給患者施用治療有效量的化合物A。
2.權利要求1的方法，其中該方法進一步包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥 劑，該其它藥劑選自苯并二氮$類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去甲腎上 腺素再吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺1A(5HT1A) 拮抗劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷A2A受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑(MA0I)、鈉 (Na)通道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周a腎上腺素受體拮抗劑、中樞a腎上腺素激 動劑、中樞或外周0腎上腺素受體拮抗劑、NK-1受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 (CRF)拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗劑、氨基 丁酸(GABA)激動劑和部分D2激動劑。
3.權利要求2的方法，其中該至少一種其它藥劑是SSRI，其選自帕羅西汀、舍曲林、西 酞普蘭、依他普侖和氟西汀。
4.權利要求2的方法，其中該至少一種其它藥劑是SNRI，其選自度洛西汀、米氮平和文 拉法辛。
5.權利要求2的方法，其中該至少一種其它藥劑是NRI，其選自丁氨苯丙酮和阿托西汀。
6.權利要求2的方法，其中該至少一種其它藥劑是多巴胺羥化酶抑制劑雙硫侖。
7.權利要求1的方法，其中該患者具有至少一種兒茶酚胺的異常腦水平。
8.權利要求1的方法，其中該化合物A降低患者腦中多巴胺0羥化酶活性。
9.權利要求1的方法，其中該化合物A調(diào)節(jié)患者至少一種兒茶酚胺的腦水平。
10.權利要求1的方法，其中該化合物A降低患者與記憶恢復有關的應激。
11.權利要求1的方法，其中該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的頻 率和強度中的至少一種。
12.權利要求1的方法，其中該患者是兒童或青少年。
13.權利要求12的方法，其中該化合物A降低患者創(chuàng)傷后應激障礙的至少一種體征或 癥狀的頻率和強度中的至少一種，其中該體征或癥狀選自分裂或激動行為、表達創(chuàng)傷局面 的重復演示、缺乏認可內(nèi)容的可怕夢想、以及特殊創(chuàng)傷的再展示。
14.權利要求1的方法，其中該化合物A降低患者與選自藥物濫用、酒精濫用和抑郁的 創(chuàng)傷后應激障礙同時發(fā)生的至少一種障礙的發(fā)生率。
15.治療患者的創(chuàng)傷后應激障礙的方法，其包括 對創(chuàng)傷后應激障礙患者進行診斷；給患者施用治療有效量的化合物A ；對創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種進行評價；以及 如果該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種，則確定該 創(chuàng)傷后應激綜合征被改善。
16.權利要求15的方法，其中該方法進一步包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥劑，該其它藥劑選自苯并二氮罩類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去 甲腎上腺素再吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺1A(5HT1A)拮抗劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷A2A受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑 (MA0I)、鈉(Na)通道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周a腎上腺素受體拮抗劑、中樞a 腎上腺素激動劑、中樞或外周0腎上腺素受體拮抗劑、NK-1受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激 素釋放因子(CRF)拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗 劑、氨基丁酸(GABA)激動劑和部分D2激動劑。
17.權利要求15的方法，其中該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的 頻率和強度中的至少一種。
18.權利要求15的方法，其中該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種癥狀的 頻率和強度中的至少一種。
19.權利要求15的方法，其中該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種征候群 的頻率和強度中的至少一種，其中該征候群選自再經(jīng)歷/侵擾、回避/麻木、和覺醒過度。
20.改善患者恢復力的方法，其包括施用治療有效量的化合物A。
21.權利要求20的方法，其中該方法進一步包括共同施用治療有效量的至少一種其它藥劑，該其它藥劑選自苯并二氮|類、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、血清素-去甲腎上腺素再吸收抑制劑(SNRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、血清素5-羥色胺 1A(5HT1A)拮抗劑、多巴胺羥化酶抑制劑、腺苷A2A受體拮抗劑、單胺氧化酶抑制劑 (MA0I)、鈉(Na)通道阻滯劑、鈣通道阻滯劑、中樞和外周a腎上腺素受體拮抗劑、中樞a 腎上腺素激動劑、中樞或外周0腎上腺素受體拮抗劑、NK-1受體拮抗劑、促腎上腺皮質(zhì)激 素釋放因子(CRF)拮抗劑、非典型性抗抑郁藥/抗精神病藥、三環(huán)類、抗驚厥劑、谷氨酸拮抗 劑、氨基丁酸(GABA)激動劑和部分D2激動劑。
22.權利要求20的方法，其中該化合物A降低創(chuàng)傷后應激障礙患者的至少一種體征的 頻率和強度中的至少一種。
23.診斷患者的創(chuàng)傷后應激障礙的方法，其包括 給患者施用治療有效量的化合物A，和評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中的至少一種；以及 如果化合物A降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種則診斷患者 創(chuàng)傷后應激障礙。
24.權利要求23的方法，其中該患者是兒童、青少年或成人。
全文摘要
本文提供了通過給患者施用治療有效量的化合物A治療診斷有創(chuàng)傷后應激障礙的患者的方法。還提供了通過施用治療有效量的化合物A改善患者恢復力的方法。還提供了通過給患者施用治療有效量的化合物A診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙，和評價創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀或征候群中的至少一種；以及如果化合物A降低了創(chuàng)傷后應激障礙的體征、癥狀和征候群中的至少一種則診斷患者創(chuàng)傷后應激障礙的方法。
文檔編號A61K31/535GK101951912SQ200880108123
公開日2011年1月19日 申請日期2008年7月23日 優(yōu)先權日2007年7月23日
發(fā)明者M·莫蘭, T·沃伊沃德 申請人:辛諾西亞治療公司