專利名稱：取代的(*唑烷酮-5-基-甲基)-2-噻吩-酰胺和其在血液凝固領(lǐng)域中的應(yīng)用的制作方法
專利說(shuō)明取代的(唑烷酮-5-基-甲基)-2-噻吩-酰胺和其在血液凝固領(lǐng)域中的應(yīng)用 本發(fā)明涉及新的噁唑二酮，它們的制備方法，它們對(duì)于治療和/或預(yù)防疾病的應(yīng)用和它們對(duì)于制備用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是血栓栓塞病的藥物的應(yīng)用。
血液凝固是有機(jī)體的保護(hù)機(jī)制，其有助于迅速地和可靠地“封閉”血管壁中的缺陷。因此，可以避免或者保持最小限度失血。血管損傷后的止血主要受凝固體系影響，其中觸發(fā)酶催化級(jí)聯(lián)的血漿蛋白質(zhì)的絡(luò)合反應(yīng)。許多凝血因子在這種方法中涉及，每個(gè)因子在激活時(shí)將各自下一個(gè)非活性的前體轉(zhuǎn)化成為它的活性形式。在級(jí)聯(lián)的結(jié)尾出現(xiàn)可溶解的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成為不溶性血纖維蛋白，導(dǎo)致血塊的形成。在血凝中，傳統(tǒng)上區(qū)分內(nèi)在的和外來(lái)的體系，其在聯(lián)合反應(yīng)途徑中終止。這里，因子Xa和IIa(凝血酶)起關(guān)鍵作用。
因子Xa包裹兩種凝結(jié)路徑的信號(hào)，因?yàn)樗ㄟ^(guò)因子X的轉(zhuǎn)化由因子VIIa/組織因子(外來(lái)路徑)和通過(guò)tenase復(fù)合物(內(nèi)在路徑)形成。激活的絲氨酸蛋白酶Xa分解凝血酶原成凝血酶。
通過(guò)一串反應(yīng)，凝血酶?jìng)鬟f來(lái)自級(jí)聯(lián)的信號(hào)到血的凝結(jié)狀態(tài)。凝血酶直接分解纖維蛋白原成血纖維蛋白。它激活因子XIII，其對(duì)于穩(wěn)定血纖維蛋白凝結(jié)是需要的，成為因子XIIIa。另外，凝血酶是血小板凝聚(通過(guò)PAR-1激活)強(qiáng)有力的觸發(fā)器，其還相當(dāng)有助于止血。通過(guò)激活TAFI(凝血酶可激活的纖維蛋白溶解抑制劑)成TAFIa，在與血栓調(diào)節(jié)蛋白的配合物中凝血酶抑制凝塊的溶解。因子V和VIII的激活強(qiáng)化了凝血酶的產(chǎn)生并且因此又放大了凝固反應(yīng)；激活的蛋白質(zhì)C(在與血栓調(diào)節(jié)蛋白的配合物中產(chǎn)生)拮抗該增長(zhǎng)的凝血酶產(chǎn)生，因此預(yù)防過(guò)度止血(血栓形成)。
除在血中的無(wú)束縛的因子X和凝血酶外，束縛形式也是已知的。在血纖維蛋白凝塊形成期間，凝血酶和凝血酶原酶(在配合物中的因子Xa)束縛在血纖維蛋白骨架上。這些酶分子仍然是活性的并且不能被內(nèi)在的抗凝血酶III抑制。因此，用這樣的方式，凝塊仍然具有通常的凝結(jié)潛力。
在許多心血管和代謝失調(diào)期間，作為全身因素，例如高脂血癥，糖尿病或者抽煙的結(jié)果，由于因淤滯在血中的變化，例如心房纖維性顫動(dòng)，或者由于血管壁的病變，例如內(nèi)皮機(jī)能障礙或者動(dòng)脈粥樣硬化，存在凝結(jié)和血小板激活的增長(zhǎng)的趨勢(shì)。這些不需要的和過(guò)度的止血可以通過(guò)形成富血纖維蛋白-和血小板-的血栓導(dǎo)致伴隨危急生命狀態(tài)的血栓栓塞病和血栓形成的并發(fā)癥。
止血受配合物調(diào)節(jié)機(jī)制支配。不受控制的凝固體系的激活或者激活過(guò)程的缺陷抑制可能導(dǎo)致在血管(動(dòng)脈，靜脈，淋巴管)中局部的血栓形成或者栓塞或者心臟腔。這可能導(dǎo)致嚴(yán)重的血栓形成或者血栓栓塞病。另外，全身高凝固性可能導(dǎo)致在散布的內(nèi)滲凝結(jié)范圍內(nèi)的消耗性凝血病。此外在微血管病的溶血性貧血，體外循環(huán)系統(tǒng)，例如血液透析，以及修復(fù)的心瓣膜和支架中遇到血栓栓塞并發(fā)癥。
在大多數(shù)工業(yè)化國(guó)家中，血栓栓塞病是發(fā)病和死亡最常見的原因[Heart DiseaseA Textbook of Cardiovascular Medicine，EugeneBraunwald，第五版，1997，W.B.Saunders Company，費(fèi)城]。
在血栓栓塞和血栓形成病的治療和預(yù)防中，抗凝血?jiǎng)?，即用于抑制或者預(yù)防血凝的物質(zhì)，起重要作用。對(duì)于急性血栓栓塞或者血栓形成病-特別是其中需要快速和簡(jiǎn)單的減少或者調(diào)節(jié)抗凝的那些(例如急性冠狀動(dòng)脈綜合征，膿毒癥)-或者根據(jù)需要需要短期的預(yù)防抑制凝固體系的病癥(例如血液透析，心臟電復(fù)律(cardioconversion))的治療，腸外服用抗凝血?jiǎng)?br> 由現(xiàn)有技術(shù)已知的抗凝血?jiǎng)缫种苹蛘哳A(yù)防血凝的物質(zhì)，具有不同的、經(jīng)常是嚴(yán)重的缺點(diǎn)。因此，在實(shí)踐中，急性血栓形成/血栓栓塞病有效的和安全的治療方法或者預(yù)防常常被認(rèn)為是困難的和不能令人滿意的。
在血栓栓塞病的急性治療和預(yù)防中，首先使用靜脈內(nèi)或者皮下服用的肝素和低分子量的肝素(NMH)。肝素是動(dòng)物來(lái)源的高度硫酸酯化的葡糖胺聚糖的混合物(摩爾質(zhì)量3-40kDa，在15kDa下具有最高的頻率；例如從牛肺提取)，其中，取決于制備，大約30％起抗凝作用。因此，劑量是以單位的形式并且在患者中必須精確地控制。沒(méi)有監(jiān)控的不受控制的用藥導(dǎo)致劑量不足或者過(guò)量用藥的高風(fēng)險(xiǎn)和因此出血。低分子量肝素(NMH)由未分餾肝素(UFH)制備。關(guān)于它們的大小，它們最好明確定義，并且由于它們低的分子量大小，它們具有改進(jìn)的副作用性質(zhì)。
肝素在酶下不直接起作用，但是，通過(guò)與抗凝血酶III(AT(III))結(jié)合，促進(jìn)AT(III)與具有AT(III)結(jié)合部位的凝血因子的結(jié)合。這些特別地包括因子Xa和凝血酶(因子IIa)。盡管UFH的藥效對(duì)兩種酶是大約一樣的，NMH顯示有利于因子Xa轉(zhuǎn)移的活性譜，最終導(dǎo)致單純的五糖磺達(dá)肝素(fondaparinux)的因子Xa抑制。在某些方面，該間接機(jī)制是不利的 在與消耗性凝血病有關(guān)的疾病情況下，AT(III)的消耗導(dǎo)致肝素不再有效。相反通過(guò)服用肝素，最后儲(chǔ)備的游離的AT(III)由有機(jī)體除掉。
在血栓形成期間，凝血酶原酶(因子Xa)和凝血酶束縛在血栓上。這些凝結(jié)酶是活性的并且有助于血栓的進(jìn)一步的形成。因此，在降低動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)中，特別注意結(jié)合血栓的凝血酶或者因子Xa的抑制。AT(III)，作為蛋白質(zhì)，由于它的大小，不能抑制結(jié)合血栓的凝血因子。因此，對(duì)于肝素不可能有助于該風(fēng)險(xiǎn)的降低。
在用于治療疾病例如急性冠狀動(dòng)脈綜合征或者膿毒癥的應(yīng)用的范圍內(nèi)，如果治療可以短期中止，則這是特別有利的。UFH具有相對(duì)短的30-150分鐘的半衰期。此外，它們的作用可以被魚精蛋白硫酸鹽拮抗。不同的NMH，特別是磺達(dá)肝素的長(zhǎng)半衰期，其使得簡(jiǎn)單地調(diào)整對(duì)急性情景的治療幾乎不可能，在這里是不利的。另外，這些物質(zhì)的作用可以僅僅部分地被魚精蛋白硫酸鹽拮抗。
通常，當(dāng)服用UFH時(shí)，有高的出血危險(xiǎn)，其中特別地可能發(fā)生大腦出血和在胃腸道中的出血，并且可能有血小板減少，藥物性脫發(fā)(alopecia medicomentosa)或者骨質(zhì)疏松癥[Pschyrembel，Klinisches
，第257版，1994，Walter de GruyterVerlag，610頁(yè)，關(guān)鍵詞“heparin”；

Lexikon Chemie[

Chemical Encyclopaedia]，版本1.5，1998，Georg Thieme Verlag Stuttgart，關(guān)鍵詞“heparin”]。低分子量的肝素具有-雖然低發(fā)生率-相似的副作用譜-特別是就HIT-II的發(fā)生而言。
與心臟疾病或膿毒性疾病有關(guān)，可能有同時(shí)發(fā)生的-偶而急性的-腎功能障礙。在這些情境中，通過(guò)腎除去的物質(zhì)可能在身體內(nèi)積聚，導(dǎo)致顯著增長(zhǎng)的出血危險(xiǎn)。盡管在UFH情況下，不必調(diào)整劑量，NMH的劑量必須調(diào)整。對(duì)于患嚴(yán)重的腎功能障礙的病人不推薦磺達(dá)肝素。
另外使用的-雖然更不經(jīng)常-是水蛭素和由此衍生的合成產(chǎn)生的肽比伐盧定，以及低分子量的物質(zhì)阿加曲班。這些是顯示高出血危險(xiǎn)的直接的凝血酶抑制劑。在腎功能障礙情況下，水蛭素和比伐盧定的劑量必須調(diào)整。阿加曲班具有同等微弱的抗血栓形成作用并且是不充分水溶的。作為缺乏因子Xa抑制的結(jié)果，不可能在血栓內(nèi)和外抑制凝血酶產(chǎn)生，即在非常過(guò)度的凝固反應(yīng)情況下，存在這些物質(zhì)被“滴定光(titred out)”的危險(xiǎn)。
可以腸外服用的進(jìn)一步的物質(zhì)在開發(fā)中。這些是抑制因子Xa或者凝血酶，因此抑制凝血酶產(chǎn)生或者凝血酶活性的物質(zhì)。
另外，存在用于口腔治療或者為口腔治療開發(fā)的物質(zhì)。由于它們的活性性質(zhì)和物理化學(xué)性質(zhì)(差的可溶性，緩慢的開始作用，長(zhǎng)半衰期)，對(duì)于在急性情景下的治療，它們即使有也僅具有很少的用途。這種級(jí)別的抗凝血?jiǎng)┦蔷S生素K拮抗劑。這些包括，例如1，3-茚二酮，但是特別是化合物，例如殺鼠靈，苯并香豆素，雙香豆素及其他香豆素類衍生物，其在肝中未選擇地抑制某些依賴于維生素-K的凝血因子的各種產(chǎn)物的合成。由于作用機(jī)理，活性開始非常緩慢(等待時(shí)間到作用開始36到48小時(shí))。本化合物可以口服；然而，由于高出血危險(xiǎn)和窄的治療指數(shù)，需要患者復(fù)雜的單獨(dú)調(diào)整和觀察。另外，已經(jīng)描述了進(jìn)一步的副作用，例如胃腸功能失調(diào)，毛發(fā)損失和皮膚壞死。
對(duì)于口腔治療在開發(fā)中的其它的抗-凝血酶或者抗-因子-Xa的物質(zhì)具有對(duì)于非腸道治療太低的可溶性或者具有-其對(duì)于口腔治療是所希望的-長(zhǎng)半衰期，其使得對(duì)于改變不能快速反應(yīng)。
最近，已經(jīng)描述了方法，其中以各種混合比體外和體內(nèi)試驗(yàn)低分子量的凝血酶和因子Xa抑制劑。這里，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)協(xié)同潛力。他諾吉群是低分子量的物質(zhì)，其已經(jīng)被描述成體外抑制凝血酶和因子Xa，但是其對(duì)于凝血酶抑制具有強(qiáng)的選擇。他諾吉群的相當(dāng)大的部分通過(guò)腎無(wú)變化的地排泄，其使得很可能在腎功能不全的情況下劑量必須調(diào)整。
對(duì)于抗血栓形成的藥物，治療寬度具有最重要的重要性對(duì)于凝結(jié)抑制治療活性的劑量和可能發(fā)生出血的劑量之間的間距應(yīng)該盡可能地大以便以最小的危險(xiǎn)狀況獲得最大治療的活性。
如同用低分子量的凝血酶和因子Xa抑制劑的混合物的實(shí)驗(yàn)所示，抑制凝血酶和因子Xa的化合物，由于它們的雙重特性，具有特別強(qiáng)的協(xié)同作用，因此在控制血栓的形成中是特別有效的。用這樣的方式，該化合物抑制凝固級(jí)聯(lián)的兩種關(guān)鍵酶，沒(méi)有完全地阻遏個(gè)別的酶。因子Xa和凝血酶的剩余部分導(dǎo)致無(wú)損傷的止血并且因此特別有利的治療寬度。在兔子中的動(dòng)靜脈分流模型中，可以顯示選擇性因子Xa抑制劑PD0313052和選擇性凝血酶抑制因子阿加曲班的僅僅弱抗血栓形成活性的劑量的共服導(dǎo)致強(qiáng)超加性抗血栓形成的影響。另外，當(dāng)結(jié)合具有最大協(xié)同效應(yīng)的個(gè)別劑量時(shí)，沒(méi)有觀察到增加的出血。這些觀察使得得出結(jié)論相對(duì)抗血栓形成作用和出血危險(xiǎn)之間的間隔，凝血酶和因子Xa的同時(shí)抑制增加了治療寬度(Journal of Thrombosis and Haemostasis，4834-841)。
當(dāng)通過(guò)直接與單純的因子Xa和凝血酶抑制劑比較研究依賴于物質(zhì)濃度的凝血酶原時(shí)間時(shí)，該協(xié)同作用是特別明顯的。當(dāng)存在血栓形成的高風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，或者當(dāng)血栓的形成可能導(dǎo)致不治之癥時(shí)，這種對(duì)凝固級(jí)聯(lián)的兩種關(guān)鍵酶的強(qiáng)烈的影響被認(rèn)為是特別有利的。在急性冠狀動(dòng)脈綜合征類型的粥樣血栓形成疾病或者急性心肌梗塞后的情境情況下，兩者是相關(guān)的。
此外，與肝素對(duì)比，水蛭素和維生素K拮抗物，抑制凝血酶和因子Xa的化合物，相對(duì)于與血纖維蛋白凝塊結(jié)合的凝血因子也是活性的。已經(jīng)存在的凝塊的血栓形成的潛力的限制在預(yù)防動(dòng)脈阻塞中是臨界點(diǎn)。這通過(guò)抑制存在的凝血酶活性和在凝塊中的新的凝血酶的形成特別有效地獲得。盡管單純的凝血抑制因子不能通過(guò)包含與凝塊結(jié)合的因子Xa的凝血酶原酶配合物預(yù)防象雪崩的凝血酶產(chǎn)生并且通過(guò)大量產(chǎn)生的凝血酶在高度刺激的凝結(jié)中抑制效果可能因此補(bǔ)償過(guò)度，但是因子Xa抑制劑不能抑制已經(jīng)存在的凝血酶活性。既然抑制通過(guò)生理機(jī)制同樣是不可能的，該與凝塊結(jié)合的凝血酶形成特別大的危險(xiǎn)。相反，雙重化合物，即抑制凝血酶和因子Xa的化合物，能夠在凝塊上抑制凝血酶產(chǎn)生和凝血酶活性，因此還預(yù)防潛在的凝塊生長(zhǎng)。
在WO 01/47919中描述了作為非-肽的低分子量的因子Xa抑制劑的噁唑烷酮。
因此，本發(fā)明的目的是為了控制在人和動(dòng)物中的疾病，特別是血栓栓塞病提供雙重化合物，即抑制凝血酶和因子Xa和通過(guò)在凝塊上抑制凝血酶產(chǎn)生和凝血酶活性，預(yù)防它們的潛力增長(zhǎng)的化合物，其具有寬的治療范圍和優(yōu)良的在水和生理性介質(zhì)中的溶解性。
本發(fā)明提供了具有下式的化合物
其中 R1代表氯，三氟甲氧基，甲基，乙基，正-丙基，甲氧基，甲氧基甲基或者乙氧基甲基， R2代表氫或者甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字1，2，3或者4， m代表數(shù)字1或者2， R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R5代表氫，甲基或者乙基， 或者 R4和R5連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基(1，4-oxazepan-4-y1)環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R7代表氫，甲基或者乙基， R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
如果以下提到的式(I)包括的化合物還不是鹽，溶劑化物和鹽的溶劑化物，根據(jù)本發(fā)明的化合物是具有式(I)的化合物和它們的鹽，溶劑化物和鹽的溶劑化物，由式(I)包括的具有以下提到的式的化合物和它們的鹽，溶劑化物和鹽的溶劑化物和由式(I)包括的以下作為操作實(shí)施例提到的化合物和它們的鹽，溶劑化物和鹽的溶劑化物。
取決于它們的結(jié)構(gòu)，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以立體異構(gòu)的形式(對(duì)映異構(gòu)體，非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體)存在。因此，本發(fā)明包括對(duì)映異構(gòu)體或者非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體和它們各自的混合物。從這種對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體的混合物，可以以已知的方式分離立體異構(gòu)相同的組分。
如果根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以互變異構(gòu)形式存在，則本發(fā)明包括所有的互變異構(gòu)形式。
在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的鹽是根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽。本發(fā)明還包括本身不適于藥用，但是其可以例如用于分離或者提純根據(jù)本發(fā)明的化合物的鹽。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽包括無(wú)機(jī)酸，羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸，甲烷磺酸，乙烷磺酸，甲苯磺酸，苯磺酸，萘二磺酸，乙酸，三氟乙酸，丙酸，乳酸，酒石酸，蘋果酸，檸檬酸，富馬酸，馬來(lái)酸和苯甲酸的鹽。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽還包括常見的堿的鹽，例如和優(yōu)選，堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)，堿土金屬鹽(例如鈣鹽和鎂鹽)和銨鹽，所述銨鹽衍生自氨或者具有1到16個(gè)碳原子的有機(jī)胺，例如和優(yōu)選，乙胺，二乙胺，三乙胺，乙基二異丙胺，單乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，二環(huán)己胺，二甲氨基乙醇，普魯卡因，二芐胺，N-甲基嗎啉，精氨酸，賴氨酸，乙二胺和N-甲基哌啶。
在本發(fā)明的上下文中，溶劑化物是根據(jù)本發(fā)明的化合物的那些形式，其以固態(tài)或者液態(tài)通過(guò)與溶劑分子配位形成配合物。水合物是溶劑化物的特殊形式，其中與水配位。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的溶劑化物是水合物。
此外，本發(fā)明還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥物前體。術(shù)語(yǔ)“藥物前體”包括本身可以是生物學(xué)活性的或者非活動(dòng)性的但是其在身體內(nèi)停留期間被轉(zhuǎn)變成根據(jù)本發(fā)明的化合物(例如通過(guò)代謝或者水解)的化合物。
在可以代表R3的基團(tuán)的式中，分別標(biāo)有*的直線的端點(diǎn)不是碳原子或者CH2基團(tuán)，而是連接到與R3連接的原子的鍵的一部分。
優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表氯，三氟甲氧基，甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫或者甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n是數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R5代表氫，甲基或者乙基， 或者 R4和R5連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R7代表氫，甲基或者乙基， R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫或者甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n是數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R5代表氫，甲基或者乙基， R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R7代表氫，甲基或者乙基， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表氫，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R5代表氫， R6代表氫，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R7代表氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字2， m代表數(shù)字1， R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R5代表氫， R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R7代表氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基或者甲氧基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字2， m代表數(shù)字1， R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R5代表氫， R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R7代表氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n是數(shù)字2， R4是2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R5是氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字2， R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R5代表氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， m代表數(shù)字1， R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基， R7代表氫， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中n代表數(shù)字2。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中m代表數(shù)字1。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R1代表甲基，甲氧基或者甲氧基甲基。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R2代表氫。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R1代表甲基和R2代表氫。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R1代表甲基和R2代表甲基。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R5代表氫。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中R7代表氫。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫或者甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R5代表氫，甲基或者乙基， 或者 R4和R5連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， R6代表甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R7代表氫，甲基或者乙基， R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表甲基，乙基或者環(huán)丙基， R5代表氫，甲基或者乙基， 或者 R4和R5連同它們連接的氮原子形成嗎啉-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， R6代表環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-甲氧基乙-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基， R7代表氫，甲基或者乙基， R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)或者4-甲基哌嗪-1-基， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還優(yōu)選具有式(I)的化合物，其中 R1代表甲基，甲氧基或者甲氧基甲基， R2代表氫， 或者 R1代表甲基， R2代表甲基， 和 R3代表具有下式的基團(tuán)
其中 *是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)， n代表數(shù)字1，2或者3， m代表數(shù)字1或者2， R4代表甲基或者環(huán)丙基， R5代表氫或者甲基， 或者 R4和R5連同它們連接的氮原子形成4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)， R6代表環(huán)丙基，環(huán)丁基或者2-甲氧基乙-1-基， R7代表氫或者甲基， R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)或者2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)或者4-甲基哌嗪-1-基， 和它們的鹽，它們的溶劑化物和它們的鹽的溶劑化物。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲氧基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例6中描述。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥乙基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]乙基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例9中描述。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例10中描述。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例21中描述。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥乙基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例37中描述。
還特別的優(yōu)選具有下式的化合物5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
和它的鹽，它的溶劑化物和它的鹽的溶劑化物。該化合物在實(shí)施例38中描述。
在各個(gè)基團(tuán)組合或者優(yōu)選的的組合中詳細(xì)給出的特定的基團(tuán)定義，獨(dú)立于各自給出的基團(tuán)的組合，還任意被任何其他組合的基團(tuán)定義替換。
非常特別優(yōu)選以上提到的兩個(gè)或多個(gè)優(yōu)選的范圍的組合。
此外本發(fā)明提供了制備具有式(I)的化合物，或者其鹽，溶劑化物或者鹽的溶劑化物的方法，其中 [A]具有下式的化合物
其中n，R1和R2具有以上給出的意思，和 X代表羥基或者溴， 與具有下式的化合物反應(yīng)
其中R4和R5具有以上給出的意思， 以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中n，R1，R2，R4和R5具有以上給出的意思， 或者 [B]具有下式的化合物
其中m，R1和R2具有以上給出的意思，和 Y代表羥基或者氯， 與具有下式的化合物反應(yīng)
其中R6和R7具有以上給出的意思， 以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中m，R1，R2，R6和R7具有以上給出的意思。
具有式(Ia)和(Ib)的化合物形成具有式(I)的化合物。
鹽的游離堿可以例如在添加堿的情況下通過(guò)在使用乙腈/水梯度的反相柱上色譜分離獲得，特別是通過(guò)利用RP18 Phenomenex Luna C18(2)柱和作為堿的二乙胺，或者通過(guò)在有機(jī)溶劑中溶解鹽和用堿式鹽例如碳酸氫鈉的水溶液提取。
此外本發(fā)明提供了制備具有式(I)的化合物或者其溶劑化物的方法，其中化合物的鹽或者化合物的鹽的溶劑化物通過(guò)在添加堿的情況下層析轉(zhuǎn)化成化合物。
如果X是羥基，根據(jù)方法[A]的反應(yīng)通常在惰性溶劑中在三氟甲烷磺酸酸酐存在的條件下，如果合適在堿存在的條件下，優(yōu)選在從-78℃到室溫溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如二氯甲烷，乙醚，硝基甲烷，1，2-二氯乙烷或者乙腈；優(yōu)選二氯甲烷。
堿是例如2，6-二甲基吡啶，吡啶，2，6-二-叔-丁基-4-甲基吡啶，二異丙基乙胺，2，6-盧剔啶，三甲胺，優(yōu)選2，6-二甲基吡啶。
如果X是溴，根據(jù)方法[A]的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，優(yōu)選在從-78℃到室溫溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如二甲基甲酰胺。
如果Y是羥基，根據(jù)方法[B]的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在三氟甲烷磺酸酸酐存在的條件下，如合適在堿存在的條件下，優(yōu)選在從-78℃到室溫溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如二氯甲烷，乙醚，硝基甲烷，1，2-二氯乙烷或者乙腈；優(yōu)選二氯甲烷。
堿是例如2，6-二甲基吡啶，吡啶，2，6-二-叔-丁基-4-甲基吡啶，二異丙基乙胺，2，6-盧剔啶，三甲胺，優(yōu)選2，6-二甲基吡啶。
如果Y是氯，根據(jù)方法[B]的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，如合適在鹵鹽存在的條件下，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如1，2-二甲氧基乙烷。
鹵鹽是例如碘化鈉。
具有式(III)和(V)的化合物是已知的或者可以根據(jù)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
具有式(II)的化合物，其中X代表羥基，是已知的或者可以如下制備通過(guò)具有下式的化合物
在第一步中與具有下式的化合物反應(yīng)
其中n，R1和R2具有以上給出的意思， 以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中n，R1和R2具有以上給出的意思， 在第二步中，在光氣或者光氣等同物例如羰二咪唑(CDI)存在的條件下環(huán)化， 和，在第三步中，除去甲硅烷基基團(tuán)，產(chǎn)生具有式(II)的化合物。
第一步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在路易斯酸存在的條件下，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如極性質(zhì)子惰性溶劑，例如乙腈，丁腈，二氯甲烷或者氯仿；優(yōu)選乙腈。
路易斯酸是例如高氯酸鎂，三氟甲烷磺酸鐿(III)，溴化鋰，三氟甲磺酸鎂或者三氯化鋁；優(yōu)選高氯酸鎂。
第二步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在堿存在的條件下，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如極性質(zhì)子惰性溶劑，例如乙腈或者丁腈。
堿是例如強(qiáng)叔胺堿，例如4-N，N-二甲基氨基吡啶。
優(yōu)選與作為碳酸等同物的N，N′-羰二咪唑反應(yīng)，伴隨添加作為堿的4-N，N-二甲基氨基吡啶。
第三步的反應(yīng)通過(guò)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如通過(guò)在溶劑例如四氫呋喃中與氟化四丁銨反應(yīng)，或者通過(guò)在甲醇中與氯化氫反應(yīng)，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
具有式(VI)的化合物是已知的或者可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
在替換方法中，具有式(II)的化合物，其中X代表羥基，可以通過(guò)具有下式的化合物
其中n，R1和R2具有以上給出的意思， 與具有下式的化合物反應(yīng)
其中 Q代表鹵素，優(yōu)選溴或者氯，或者羥基， 接著除去甲硅烷基基團(tuán)制備。
如果Q是鹵素，反應(yīng)通常在惰性溶劑中，如合適在堿存在的條件下，優(yōu)選在從-30℃到50℃溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如四氫呋喃，二氯甲烷，吡啶，二噁烷或者二甲基甲酰胺，優(yōu)選四氫呋喃或者二氯甲烷。
堿是例如三乙胺，二異丙基乙胺或者N-甲基嗎啉；優(yōu)選二異丙基乙胺。
如果Q是羥基，反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在脫水劑存在的條件下，如合適在堿存在的條件下，優(yōu)選在從-30℃到50℃溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如鹵代烴，例如二氯甲烷或者三氯甲烷，碳?xì)浠衔铮绫?，硝基甲烷，二噁烷，二甲基甲酰胺或者乙腈。同樣可以使用溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或者二甲基甲酰胺。
這里，合適的脫水劑是，例如，碳化二亞胺，例如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二異丙基-，N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-環(huán)己基碳二亞胺-N′-丙基氧甲基-聚苯乙烯(PS-碳化二亞胺)或者羰基化合物，例如羰二咪唑，或者1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物，例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或者2-叔-丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或者酰氨基化合物，例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或者丙烷磷酸酸酐，或者氯甲酸異丁酯，或者雙(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯或者苯并三唑基氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，或者O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓(uronium)六氟磷酸鹽(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽TPTU)或者O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或者1-羥基苯并三唑(HOBt)，或者苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)，或者N-羥基琥珀酰亞胺，或者這些與堿的混合物。
堿是例如堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或者碳酸鉀，或者碳酸氫鈉或者碳酸氫鉀，或者有機(jī)堿，例如三烷基胺，例如三乙胺，N-甲基嗎啉，N-甲基哌啶，4-二甲基氨基吡啶或者二異丙基乙胺。
與HATU或者與EDC的縮合優(yōu)選在HOBt存在的條件下進(jìn)行。
甲硅烷基基團(tuán)通過(guò)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，例如通過(guò)在溶劑例如四氫呋喃中與氟化四丁銨反應(yīng)，或者通過(guò)在甲醇中與氯化氫反應(yīng)，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下除去。
具有式(XVII)的化合物是已知的或者可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
具有式(II)的化合物，其中X代表溴，是已知的或者可以通過(guò)具有式(II)的化合物，其中X代表羥基，與亞硫酰溴反應(yīng)制備，如在實(shí)施例11A中描述。
具有式(VII)的化合物是已知的或者可以通過(guò)具有下式的化合物還原硝基基團(tuán)制備
其中n，R1和R2具有以上給出的意思， 反應(yīng)通常在惰性溶劑中，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在從大氣壓到3巴下使用還原劑進(jìn)行。
還原劑是例如在活性炭上的鈀和氫，二氯化錫，三氯化鈦或者甲酸銨和在乙醇和乙酸乙酯的混合物中的在活性炭上的鈀；優(yōu)選在活性炭上的鈀和氫或者二氯化錫。
惰性溶劑是例如醚，例如乙醚，甲基叔丁基醚，1，2-二甲氧基乙烷，二噁烷，四氫呋喃，乙二醇二甲醚或者二甘醇二甲醚，醇，例如甲醇，乙醇，正-丙醇，異丙醇，正-丁醇或者叔-丁醇，碳?xì)浠衔?，例如苯，二甲苯，甲苯，己烷，環(huán)己烷或者礦物油餾分，或者其它的溶劑，例如二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，乙腈或者吡啶；優(yōu)選的溶劑是四氫呋喃，甲醇，乙醇，異丙醇或者，在二氯化錫情況下，是二甲基甲酰胺。
具有式(IX)的化合物是已知的，可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成或者可以類似于在實(shí)施例部分中描述的方法制備。
具有式(IV)的化合物，其中Y代表氯，是已知的或者可以通過(guò)具有下式的化合物
其中R1和R2具有以上給出的意思，和 A代表甲基或者(2-甲氧基乙氧基)甲基， 在第一步中通過(guò)除去甲氧基-或者(2-甲氧基乙氧基)甲氧基基團(tuán)，以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中R1和R2具有以上給出的意思， 和，在第二步中，與具有下式的化合物反應(yīng)制備
其中m具有以上給出的意思，和 E代表溴或者碘。
如果A代表甲基，第一步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在三溴化物存在的條件下，優(yōu)選在從-78℃到室溫溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如二氯甲烷或者1，2-二氯乙烷；優(yōu)選二氯甲烷。
如果A是(2-甲氧基乙氧基)甲基，第一步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在三氟乙酸存在的條件下，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。
惰性溶劑是例如二氯甲烷或者1，2-二氯乙烷；優(yōu)選二氯甲烷。
第二步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中在堿存在的條件下，優(yōu)選在從室溫到溶劑的回流溫度范圍在大氣壓下進(jìn)行。如合適，該反應(yīng)在微波中進(jìn)行。
惰性溶劑是例如N，N-二甲基甲酰胺或者1-甲基-2-吡咯烷；優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺。
堿是例如堿金屬碳酸鹽，例如碳酸銫，碳酸鈉或者碳酸鉀。
具有式(XII)的化合物是已知的或者可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
具有式(IV)的化合物，其中Y代表羥基，是已知的或者可以通過(guò)在以上給出的合成的第二步中具有式(XI)的化合物與(2-溴乙氧基)(叔-丁基)二甲基甲硅烷反應(yīng)，并接著除去甲硅烷基基團(tuán)制備。
具有式(X)的化合物是已知的或者可以通過(guò)在第一步中具有式(VI)的化合物與具有下式的化合物反應(yīng)制備
其中R1和R2具有以上給出的意思，和 A代表甲基或者代表(2-甲氧基乙氧基)甲基， 以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中R1和R2具有以上給出的意思，和 A代表甲基或者代表(2-甲氧基乙氧基)甲基， 和，在第二步中，在光氣或者光氣等同物例如羰二咪唑(CDI)存在的條件下環(huán)化，以產(chǎn)生具有式(X)的化合物。
第一步的反應(yīng)根據(jù)針對(duì)具有式(VI)的化合物與具有式(VII)的化合物的反應(yīng)以產(chǎn)生具有式(VIII)的化合物描述的方法進(jìn)行。
第二步的反應(yīng)根據(jù)針對(duì)具有式(VIII)的化合物的反應(yīng)以產(chǎn)生具有式(II)的化合物描述的方法進(jìn)行。
具有式(XIII)的化合物是已知的或者可以通過(guò)還原具有下式的化合物中的硝基基團(tuán)制備
其中R1和R2具有以上給出的意思，和 A代表甲基或者代表(2-甲氧基乙氧基)甲基。
反應(yīng)根據(jù)針對(duì)具有式(IX)的化合物的反應(yīng)以產(chǎn)生具有式(VII)的化合物描述的方法進(jìn)行。
具有式(XV)的化合物是已知的或者可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
具有式(XVI)的化合物是已知的或者可以通過(guò)由具有下式的化合物除去鄰苯二甲酰亞胺保護(hù)基制備
其中n，R1和R2具有以上給出的意思。
反應(yīng)通常使用甲胺水溶液或者在乙醇中的水合肼的溶液，優(yōu)選使用甲胺水溶液在溶劑的回流下在大氣壓下進(jìn)行。
具有式(XVIII)的化合物是已知的或者可以通過(guò)在第一步中具有式(VII)的化合物與具有下式的化合物反應(yīng)
以產(chǎn)生具有下式的化合物制備
其中n，R1和R2具有以上給出的意思， 和，在第二步中，在光氣或者光氣等同物例如羰二咪唑(CDI)存在的條件下環(huán)化，以產(chǎn)生具有式(XVIII)的化合物。
第一步的反應(yīng)根據(jù)針對(duì)具有式(VI)的化合物與具有式(VII)的化合物的反應(yīng)以產(chǎn)生具有式(VIII)的化合物描述的方法進(jìn)行。
第二步的反應(yīng)根據(jù)針對(duì)具有式(VIII)的化合物的反應(yīng)以產(chǎn)生具有式(II)的化合物描述的方法進(jìn)行。
具有式(XIX)的化合物是已知的或者可以通過(guò)已知的方法由相應(yīng)起始化合物合成。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的制備可以通過(guò)以下合成方案解釋 方案1
方案2
根據(jù)本發(fā)明的化合物具有不可預(yù)見的有用的藥理學(xué)活性譜。
因此它們適于用作用于治療和/或預(yù)防人和動(dòng)物的疾病的藥物。
根據(jù)本發(fā)明的化合物是特別地作為抗凝固劑的凝血因子Xa和凝血酶(因子IIa)的雙重抑制劑。該化合物抑制凝血酶和因子Xa，通過(guò)在凝塊上抑制凝血酶產(chǎn)生和活性而預(yù)防它們的潛在生長(zhǎng)并且具有寬的治療范圍(Fenster)。
另外，根據(jù)本發(fā)明的化合物具有有利的物理化學(xué)性質(zhì)，例如優(yōu)良的在水和生理性介質(zhì)中的溶解性，這對(duì)于它們的治療應(yīng)用是有利的。
本發(fā)明此外提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于治療和/或預(yù)防疾病，優(yōu)選血栓栓塞病和/或血栓栓塞并發(fā)癥的應(yīng)用。
在本發(fā)明的意義上“血栓栓塞病”特別地是疾病，例如具有ST段升高(STEMI)和沒(méi)有ST段升高(非-STEMI)的心肌梗死，穩(wěn)定型心絞痛，不穩(wěn)定型心絞痛，冠狀動(dòng)脈介入例如血管成形術(shù)或者主動(dòng)脈冠狀動(dòng)脈旁路后的再閉塞和再狹窄，周圍動(dòng)脈阻塞病，肺栓塞，深靜脈血栓和腎靜脈血栓，暫時(shí)的缺血性發(fā)病以及血栓性和血栓栓塞中風(fēng)。
因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物還適合于在患有急性，周期性或者持續(xù)性賁門心律不齊，例如心房纖維性顫動(dòng)的病人，和遭受心臟復(fù)律的那些人中，此外在患有心瓣膜疾病或者患有人工心臟瓣膜的病人中預(yù)防和治療心原性血栓栓塞，例如大腦缺血，中風(fēng)和全身血栓栓塞和缺血，。
此外在微血管病溶血性貧血，體外循環(huán)系統(tǒng)，例如血液透析，和修復(fù)的心瓣膜中遇到血栓栓塞并發(fā)癥。
此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物還適合于預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的血管疾病和炎性的疾病，例如運(yùn)動(dòng)器官的風(fēng)濕病，和另外還適合于預(yù)防和/或治療阿爾茨海默氏病。此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于微血管病，與年齡有關(guān)的斑變性，糖尿病性視網(wǎng)膜病，糖尿病性腎病和其它的微血管疾病可以用于抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移灶的形成，和對(duì)于腫瘤病人，特別地遭受大外科手術(shù)或者化療或者放療的那些人還可以適合于預(yù)防和治療血栓栓塞并發(fā)癥，例如靜脈血栓栓塞。
此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物還適合于預(yù)防和/或治療肺高壓。
術(shù)語(yǔ)“肺高壓”包括某些形式的肺高壓，如例如世界衛(wèi)生組織(WHO)(Clinical Classification of Pulmonary Hypertension，威尼斯2003)所確定。可以提到的例子是肺動(dòng)脈高壓，與左心的疾病有關(guān)的肺高壓，與肺疾病和/或缺氧有關(guān)的肺高壓和由于慢性血栓栓塞的肺高壓(CTEPH)。
“肺動(dòng)脈高壓”包括自發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(IPAH，正式地也稱為原發(fā)性肺高壓)，家族性肺動(dòng)脈高壓(FPAH)和相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓(APAH)，其與膠原酶(collagenoses)，先天全身肺分流缺陷(congenitalsystemic-pulmonary shunt vitia)，門脈高壓，HIV感染，某些藥和藥物的攝入，與其它的疾病(甲狀腺疾病，糖原貯藏變質(zhì)，高雪病(MorbusGaucher)，遺傳性毛細(xì)管擴(kuò)張，血紅蛋白病，脊髓增生病，脾切除術(shù))，與具有重要的靜脈/毛細(xì)管影響的疾病，例如肺-靜脈閉塞疾病和肺-毛細(xì)管血管瘤，和新生兒的持續(xù)肺高壓有關(guān)。
與左心的疾病有關(guān)的肺高壓包括患病的左心房或者心室和二尖瓣或者主動(dòng)脈瓣膜缺陷。
與肺疾病和/或氧不足有關(guān)的肺高壓包括慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，睡眠呼吸暫停綜合征，肺泡換氣過(guò)低，慢性高山病和內(nèi)在缺陷。
由于慢性血栓栓塞的肺高壓(CTEPH)包括近側(cè)肺動(dòng)脈的血栓栓塞閉塞，遠(yuǎn)側(cè)肺動(dòng)脈的血栓栓塞閉塞和非-血栓性的肺栓塞(腫瘤，寄生蟲，異物)。
本發(fā)明此外提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于制備用于治療和/或預(yù)防與結(jié)節(jié)病，組織細(xì)胞增多病X和淋巴管肌瘤病有關(guān)的肺高壓的藥物的應(yīng)用。
此外，根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)還可能適于治療肺和肝纖維化。
此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物還可適于治療和/或預(yù)防膿毒癥(或者敗血病)，全身炎癥綜合征(SIRS)，膿毒性臟器功能障礙，膿毒性臟器衰竭和多臟器衰竭，急性呼吸困難綜合征(ARDS)，急性肺損傷(ALI)，膿毒性休克，DIC(彌漫性血管內(nèi)凝血或者消耗性凝血病)和/或膿毒性臟器衰竭。
“膿毒癥”定義為存在傳染和全身性炎性反應(yīng)綜合征(在下文稱為“SIRS”)。SIRS與傳染，和其它的情況例如損傷，燒傷，休克，手術(shù)，缺血，胰腺炎，復(fù)活或者腫瘤有關(guān)地發(fā)生。來(lái)自1992的ACCP/SCCMConsensus Conference Committee的定義(Crit Care Med 1992；20864-874)描述了診斷“SIRS”需要的診斷癥狀和測(cè)量參數(shù)(尤其是體溫變化，速脈，呼吸困難和變化的血像)。后者(2001)SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis Definitions Conference基本上遵守該標(biāo)準(zhǔn)，但是細(xì)調(diào)了細(xì)節(jié)(Levy等，Crit Care Med 2003；311250-1256)。
在膿毒癥的過(guò)程中，在各種臟器中可能存在具有微血栓形成的凝固系統(tǒng)(彌漫性血管內(nèi)凝血或者消耗性凝血病，在下文稱為“DIC”)的全身化激活和續(xù)發(fā)性出血并發(fā)癥。此外，可能存在內(nèi)皮損傷，伴隨增加的血管滲透性和液體和蛋白質(zhì)滲出到血管外的腔。隨著膿毒癥進(jìn)展，可能存在臟器的衰竭(例如腎衰竭，肝功能衰竭，呼吸衰竭，中樞神經(jīng)疾病和/或心血管衰竭)或者多臟器衰竭?！澳摱拘孕菘恕敝感枰委煹难獕哼^(guò)低的開始，該血壓過(guò)低進(jìn)一步促進(jìn)臟器損傷并與病狀的預(yù)斷的惡化有關(guān)。
病菌可以是細(xì)菌(革蘭氏陰性和格蘭氏陽(yáng)性)，真菌，病毒和/或真核生物。傳入點(diǎn)或者初次感染可以是例如肺炎，尿路感染或者腹膜炎。感染可以但不是必定與菌血癥有關(guān)。
DIC和/或SIRS可在膿毒癥期間，但也可因?yàn)槭中g(shù)，腫瘤疾病，燒傷或者其它的損傷發(fā)生。在DIC中，在損傷的內(nèi)皮細(xì)胞表面，異物或者損傷的血管外組織的表面存在凝結(jié)體系的大量激活。結(jié)果，在各種臟器的小血管中存在血凝和相關(guān)的缺氧和隨后的臟器功能障礙。其次，存在凝血因子(例如因子X，凝血酶原和纖維蛋白原)和血小板消耗，其減少了血凝固能力并且可能導(dǎo)致嚴(yán)重的出血。
膿毒癥的治療首先當(dāng)然是除去易傳染的原因，例如通過(guò)手術(shù)病灶的再建和抗菌。其次，在于受感染的器官系統(tǒng)的臨時(shí)的充分的醫(yī)學(xué)支持。例如，在以下出版物(Dellinger等，Crit Care Med 2004；32858-873)中已經(jīng)描述了該疾病的各個(gè)階段的治療。用于DIC，沒(méi)有已經(jīng)證明的有效治療。
本發(fā)明此外提供了包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和一種或者多種進(jìn)一步的活性物質(zhì)，特別是用于治療和/或預(yù)防以上提到的疾病的藥物。示范性的和優(yōu)選的活性物質(zhì)組合是 ·抗生素療法 各種抗生素或者殺真菌藥物組合作為計(jì)劃治療(在由細(xì)菌引起的診斷出現(xiàn)前)或者作為專門治療是合適的。
·液體治療 例如晶體或者膠體。
·血管升壓藥 例如去甲腎上腺素，多巴胺或者血管升壓素 ·變力治療 例如多巴酚丁胺 ·皮質(zhì)類甾醇 例如氫化可的松，或者氟氫可的松 ·重組人活化蛋白C Xigris ·血液制品 例如紅血球濃縮液，血小板濃縮液，促紅細(xì)胞生成因子或者新鮮冰凍血漿 ·在膿毒癥-引起的急性肺損傷(ALI)或者急性呼吸困難綜合征(ARDS)情況下人工通氣 例如，允許高碳酸血癥，減少潮氣量 ·鎮(zhèn)靜，止痛和神經(jīng)肌肉阻斷 鎮(zhèn)靜例如安定，氯羥去甲安定，咪達(dá)唑侖或者異丙酚。鴉片樣物質(zhì)例如芬太尼，氫化嗎啡酮，咖啡，哌替啶或者雷米芬他尼。NSAID例如酮咯酸，布洛芬或者撲熱息痛。神經(jīng)肌肉阻斷例如泮庫(kù)胺 ·葡萄糖控制 例如胰島素，葡萄糖 ·腎替代療法 例如連續(xù)靜脈-靜脈血液過(guò)濾或者周期性的血液透析。用于腎保護(hù)的低劑量的多巴胺。
·抗凝血?jiǎng)├缬糜谘A(yù)防或者腎替代療法，例如未分餾肝素，低分子量肝素，類肝素，水蛭素，比伐盧定或者阿加曲班。
·重碳酸鹽療法 ·應(yīng)激性潰瘍預(yù)防 例如H2-受體抑制物，抗酸藥 另外，根據(jù)本發(fā)明的化合物還可以用于預(yù)防半體內(nèi)(ex vivo)凝固，例如用于保存血和血漿制品，用于導(dǎo)管和其它的醫(yī)學(xué)設(shè)備和儀器的清理/預(yù)處理，用于涂覆體內(nèi)或者半體內(nèi)使用的醫(yī)學(xué)設(shè)備和儀器的合成表面或者用于包括因子Xa和/或因子IIa的生物樣品。
本發(fā)明此外提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于治療和/或預(yù)防疾病，特別是以上提到的疾病的應(yīng)用。
本發(fā)明此外提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于制備用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是以上提到的疾病的藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明此外提供了使用抗凝有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物治療和/或預(yù)防疾病，特別是以上提到的疾病的方法。
本發(fā)明此外提供了用于預(yù)防體內(nèi)，特別是在包含因子Xa和/或因子IIa的庫(kù)血或者生物樣品中血凝固的方法，該方法特征在于添加抗凝有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明此外提供了包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和一種或者多種進(jìn)一步的活性物質(zhì)，特別是用于治療和/或預(yù)防以上提到的疾病的藥物。例如和優(yōu)選，可以提到以下活性物質(zhì)或者組合 ·降脂物質(zhì)，特別是HMG-CoA-(3-羥基-3甲基戊二?；?輔酶A)還原酶抑制劑，例如洛弗斯特丁(Mevacor；US 4,231,938)，斯伐他汀(Zocor；US 4,444,784)，普伐他汀(Pravachol；US 4,346,227)，氟伐他汀(Lescol；US 5,354,772)和阿托伐他汀(Lipitor；US 5,273,995)； ·冠狀動(dòng)脈療法/血管擴(kuò)張藥，特別是ACE(血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶)抑制劑，例如卡托普利，賴諾普利，依那普利，雷米普利，西拉普利，苯那普利，福辛普利，喹那普利和培哚普利，或者AII(血管緊張素II)受體拮抗劑，例如恩布沙坦(US 5,863,930)，氯沙坦，纈沙坦，厄貝沙坦，坎地沙坦，依普羅沙坦和替米沙坦，或者β-腎上腺素能受體拮抗劑，例如卡維地洛，阿普洛爾，比索洛爾，醋丁洛爾，阿替洛爾，倍他索洛爾，卡替洛爾，美托洛爾，納多洛爾，噴布洛爾，吲哚洛爾，萘異丙促胺和噻嗎洛爾，或者α-1-腎上腺素能受體拮抗劑，比如哌唑嗪(prazosine)，bunazosine，多沙唑嗪(doxazosine)和特拉唑嗪(terazosine)，或者利尿劑，例如雙氫氯噻嗪，呋喃苯胺酸，丁尿胺，吡咯他尼，torasemide，氨氯吡脒和雙肼酞嗪，或者鈣通道阻滯劑，例如維拉帕米和地爾硫

或者二氫吡啶衍生物，例如硝苯地平(心痛定)和尼群地平(Bayotensin)，或者硝基制劑，例如5-一硝酸異山梨糖醇酯，二硝酸異山梨醇酯和甘油三硝酸酯，或者引起環(huán)鳥苷酸(cGMP)增加的物質(zhì)，例如可溶解的鳥苷酸環(huán)化酶的激活劑(WO98/16223，WO 98/16507，WO 98/23619，WO 00/06567，WO00/06568，WO 00/06569，WO 00/21954，WO 00/66582，WO01/17998，WO 01/19776，WO 01/19355，WO 01/19780，WO01/19778，WO 07/045366，WO 07/045367，WO 07/045369，WO07/045370，WO 07/045433)； ·血纖維蛋白溶解酶原活化劑(溶栓劑/纖溶劑)和促進(jìn)血栓溶解/纖維蛋白溶解的化合物，例如血纖蛋白溶酶原激活物抑制劑的抑制劑(PAI抑制劑)或者凝血酶-活化的纖維蛋白溶解抑制劑的抑制劑TAFI抑制劑)，例如組織纖溶酶原激活物(t-PA)，鏈激酶，瑞替普酶和尿激酶； ·抗凝物質(zhì)(抗凝血?jiǎng)?，例如肝素(UFH)，低分子量的肝素(NMH)，例如亭扎肝素，舍托肝素，帕肝素，那曲肝素，阿地肝素，依諾肝素，瑞肝素，達(dá)肝素，達(dá)那肝素， AVE 5026(Sanofi-Aventis，Company Presentation 2008年二月12日)， M118(Momenta Pharmaceuticals Inc，Press Release 2008年二月14日)， ORG42675(Organon International Inc，Company World EideWebsite 2007年四月)， 和直接凝血抑制因子(DTI)，例如 Exanta(ximelagatran)
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N-({7-[(5-氯-1H-吲哚-2-基)磺?；鵠-5-氧代-1′-丙酰四氫-8aH-螺[1，3-噁唑并-[3，2-a]吡嗪-2，4′-哌啶]-8a-基}甲基)-N-甲基甘氨酸[WO 2006/106804]
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AVE3247[Sanofi Aventis Company Presentation，巴黎2007，二月13日]， SAR377142(SSR-7142)[Sanofi Aventis Company Presentation，巴黎2007，二月13日]， HMR-2906[XVIIth Congress of the International Society forThrombosis and Haemostasis，Washington D.C.，USA，1999年8月14-21日；Generating greater value from our products and pipeline.Aventis SACompany Presentation，2004年2月5日]， idraparinux[Harry R.Büller等Blood，2006，108，摘要571(ASH 2006)]和 fondaparinux； ·抑制血小板聚集的物質(zhì)(血小板聚集抑制劑，凝血細(xì)胞聚集抑制劑)，例如乙酰水楊酸(例如阿斯匹林)，噻氯匹定(抵克立得)，氯吡格列(波立維)和普拉格雷； ·纖維蛋白原受體拮抗劑(糖蛋白-IIb/IIIa拮抗劑)，例如阿昔單抗，依替巴肽，替羅非班，拉米非班，來(lái)達(dá)非班和夫雷非班； ·和抗心律失常藥。
本發(fā)明進(jìn)一步的涉及包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物，通常連同一種或者多種惰性的、無(wú)毒的、藥理學(xué)合適的賦形劑的藥物，和涉及其對(duì)于以上提到的目的的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以全身和/或局部起作用。為此目的，它們可以以合適的方式例如通過(guò)口，非腸道，肺，鼻，舌下，舌，頰，直腸，真皮，經(jīng)皮，結(jié)膜，耳路徑或者作為植入物或者支架服用。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以適合于這些給藥途徑的形式服用。
適合于口服的是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)作用并且迅速地和/或以改進(jìn)的方式傳遞根據(jù)本發(fā)明的化合物，和包含以結(jié)晶的和/或無(wú)定形的和/或溶解的形式的根據(jù)本發(fā)明的化合物的服用形式，例如片劑(無(wú)涂層的或者有涂層的片劑，例如具有不能溶解的或者伴隨延遲和控制釋放根據(jù)本發(fā)明的化合物溶解的腸溶衣或者涂層)，在口中迅速地分解的片劑，或者膜/薄片(Oblaten)，膜/凍干物，膠囊(例如硬的或者軟的明膠膠囊)，糖衣片，顆粒，丸，粉末，乳劑，懸浮液，煙霧劑或者溶液。
腸胃外投藥可以以避免吸收步驟(例如靜脈內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，心內(nèi)，脊柱內(nèi)或者腰內(nèi))或者同時(shí)包括吸收(例如肌內(nèi)，皮下，皮內(nèi)，經(jīng)皮或者腹內(nèi))地進(jìn)行。適合于腸胃外投藥的服用形式特別地是用于注射的制劑和以溶液形式的浸劑，懸浮液，乳劑，凍干物或者無(wú)菌的粉末。
適合于其它給藥途徑的例如是用于吸入(尤其是粉末吸入器，噴霧器)的藥物形式，滴鼻劑，溶液或者噴霧劑；用于舌，舌下或者頰服用的片劑，膜/薄片或者膠囊，栓劑，用于耳或者眼的制劑，陰道膠囊，水懸浮液(洗液，搖動(dòng)混合物)，親油性的懸浮液，軟膏，乳膏，經(jīng)皮吸收劑型(例如貼劑)，乳劑，糊劑，泡沫，撲粉，植入物或者支架。
優(yōu)選口服或者腸胃外投藥，特別是口服。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以轉(zhuǎn)變?yōu)樗龅姆眯问?。這可以以本身已知的方式通過(guò)與惰性的、無(wú)毒的、藥理學(xué)合適的賦形劑混合進(jìn)行。這些賦形劑尤其是包括載體(例如微晶纖維素，乳糖，甘露糖醇)，溶劑(例如液體聚乙二醇)，乳化劑和分散劑或者潤(rùn)濕劑(例如十二烷基硫酸鈉，聚氧失水山梨糖醇油酸酯)，粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑，例如抗壞血酸)，著色劑(例如無(wú)機(jī)顏料，例如鐵氧化物)和掩蔽香料和/或增味劑。
通常已經(jīng)證明腸胃外投藥量大約0.001-5mg/kg，優(yōu)選大約0.01-1mg/kg體重對(duì)于取得有效結(jié)果是有利的?？诜┝渴谴蠹s0.01-100mg/kg，優(yōu)選大約0.01-20mg/kg，和非常特別優(yōu)選0.1-10mg/kg體重。
然而適當(dāng)時(shí)偏離所述的特別是依賴于體重，給藥途徑，個(gè)體對(duì)于活性成分的反應(yīng)，制劑的性質(zhì)和服用發(fā)生的時(shí)間或者間隔的量可能是必要的。因此，在一些情況下設(shè)法服用小于以上提到的最低量可能是足夠的，而在另一些情況下必須超過(guò)所述的上限。如果更大量服用，一天內(nèi)將這些劃分成為許多獨(dú)立的劑量可能是合理的。
以下示范性的操作實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明。本發(fā)明不局限于該實(shí)施例。
在以下試驗(yàn)和實(shí)施例中百分比數(shù)據(jù)是重量百分率；份是重量份，除非另外指明。對(duì)于液體/液體溶液的溶劑比，稀釋率和濃度數(shù)據(jù)在每一種情況下是基于體積。
A.實(shí)施例 縮寫 CDI羰二咪唑 d 雙峰(在NMR中) TLC薄層色譜 DCI直接化學(xué)電離(在MS中) dd 雙二重峰(在NMR中) DMAP 4-二甲基氨基吡啶 DMFN，N-二甲基甲酰胺 DMSO 二甲基亞砜 d 天 eq.等同物 ESI電噴射離子化作用(在MS中) h 小時(shí) HPLC 高壓高效液相色譜 LC-MS 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 m 多峰(在NMR中) min分鐘 MS 質(zhì)譜 NMR核磁共振譜 RP 反相(在HPLC中) RT 室溫 Rt 駐留時(shí)間(在HPLC中) s 單峰(在NMR中) THF四氫呋喃 LC-MS和HPLC方法 方法1(HPLC)儀器具有DAD檢測(cè)的HP 1100；柱Kromasil100RP-18，60mm×2.1mm，3.5μm；流動(dòng)相A5ml高氯酸(70％濃度)/l水，流動(dòng)相B乙腈；梯度0min 2％B，0.5min 2％B，4.5min 90％B，6.5min 90％B，6.7min 2％B，7.5min 2％B；流速0.75ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)UV 210nm。
方法2(HPLC)儀器具有DAD檢測(cè)的HP 1100；柱Kromasil100RP-18，60mm×2.1mm，3.5μm；流動(dòng)相A5ml高氯酸(70％濃度)/l水，流動(dòng)相B乙腈；梯度0min 2％B，0.5min 2％B，4.5min 90％B，9min 90％B，9.2min 2％B，10min 2％B；流速0.75ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)UV 210nm。
方法3(LC-MS)MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型Waters Alliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min2ml/min；烘箱(Ofen)50℃；UV檢測(cè)210nm。
方法4(LC-MS)MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型HP 1100 Series；UV DAD；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RPMercury 20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm。
方法5(LC-MS)儀器具有HPLC Agilent Serie 1100的MicromassQuattro LCZ；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)208-400nm。
方法6(LC-MS)MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型HP 1100 Series；UV DAD；柱Phenomenex Gemini 3μ 30mm×3.00mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min5％A；流速0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm。
方法7(LC-MS)儀器具有HPLC Agilent Serie 1100的MicromassP1atform LCZ；柱Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 100％A→0.2min 100％A→2.9min 30％A→3.1min10％A→5.5min 10％A；烘箱50℃；流速0.8ml/min；UV檢測(cè)210nm。
方法8(LC-MS)MS儀器類型Waters ZQ；HPLC儀器類型Waters Alliance 2795；柱Phenomenex Onyx Monolithic C18，100mm×3mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2min 65％A→4.5min 5％A→6min5％A；流速2ml/min；烘箱40℃；UV檢測(cè)210nm。
方法9(GC-MS)儀器Micromass GCT，GC6890；柱RestekRTX-35MS，30m×250μm×0.25μm；恒定氦流速0.88ml/min；烘箱60℃；進(jìn)口250℃；梯度60℃(維持0.30min)，50℃/min→120℃，16℃/min→250℃，30℃/min→300℃(維持1.7min)。
方法10(GC-MS)儀器Micromass GCT，GC6890；柱RestekRTX-35，15m×200μm×0.33μm；恒定氦流速0.88ml/min；烘箱70℃；進(jìn)口250℃；梯度70℃，30℃/min→310℃(維持3min)。
方法11(LC-MS)儀器具有HPLC Agilent Serie 1100的MicromassQuattro LCZ；柱Phenomenex Onyx Monolithic C18，100mm×3mm流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→2min 65％A→4.5min 5％A→6min 5％A；流速2ml/min；烘箱40℃；UV檢測(cè)208-400nm。
方法12(LC-MS)儀器具有HPLC Agilent Serie 1100的MicromassQuattro LCZ；柱Phenomenex Synergi 2.5μMAX-RP 100A Mercury20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→0.1min 90％A→3.0min5％A→4.0min 5％A→4.1min 90％A；流速2ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)208-400nm。
方法13(LC-MS)MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型Waters Alliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100AMercury 20mm×4mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→0.1min 90％A→3.0min 5％A→4.0min 5％A→4.01min 90％A；流速2ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm。
方法14(LC-MS)儀器具有Waters UPLC Acquity的MicromassQuattro Premier；柱Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50mm×1mm；流動(dòng)相A1l水+0.5ml 50％濃度甲酸，流動(dòng)相B1l乙腈+0.5ml 50％濃度甲酸；梯度0.0min 90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；流速0.33ml/min；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm。
起始化合物 實(shí)施例1A 5-氯-N-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲基]噻吩-2-甲酰胺
實(shí)施例1A如在WO 04/101557(實(shí)施例6A)中描述制備。
實(shí)施例2A 3-(羥基甲基)吡啶-2(1H)-酮
在RT下，向10.0g(71.9mmol)2-羥基煙酸在100ml甲苯中的懸浮液中添加23.2g(144mmol)六甲基二硅烷和0.781g(7.19mmol)三甲基氯硅烷，并且混合物在110℃下用KPG攪拌器攪拌30min?；旌衔镏罄鋮s到-40℃，并向溶液中滴加22.5g(158mmol)1摩爾濃度的二異丁基氫化鋁在二氯甲烷中的溶液。混合物到RT，在RT下攪拌18h和最后，在-10℃下，用稀鹽酸調(diào)整到pH＝4，并添加500ml甲醇，使得溫度不超過(guò)-10℃。濾掉形成的沉淀，向?yàn)V液中添加100ml水，混合物在50℃下攪拌1h并濾掉沉淀。濃縮濾液產(chǎn)生8.55g(理論的95％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)11.53(br.s，1H)，7.40(d，1H)，7.25(d，1H)，6.19(dd，1H)，5.00(t，1H)，4.28(d，2H). HPLC(方法1)Rt＝0.27min. MS(ESIpos，m/z)148(M+Na)+. 實(shí)施例3A 3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-2(1H)-酮
在RT下，向在19ml DMF中的1.00g(7.99mmol)來(lái)自實(shí)施例2A的化合物中添加0.65g(9.59mmol)咪唑，2.42g(8.79mmol)叔-丁基二苯基氯硅烷和0.10g(0.80mmol)DMAP，并且混合物攪拌18h。之后添加180ml水，并且混合物在0℃下保持3h。過(guò)濾后，獲得的殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(乙酸乙酯/乙基二甲基胺1000∶1)。這產(chǎn)生801mg(理論的27％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)11.61(br.s，1H)，7.69-7.52(m，5H)，7.51-7.38(m，6H)，7.30(d，1H)，6.29(dd，1H)，4.51(s，2H)，1.05(s，9H). HPLC(方法2)Rt＝5.27min. MS(DCI，m/z)364(M+H)+. 實(shí)施例4A 3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1-(2-氯-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
在0℃下，向在21ml DMF中的1.08g(2.97mmol)來(lái)自實(shí)施例3A的化合物中添加0.500g(4.46mmol)叔-丁醇鉀，并且混合物在室溫下攪拌30min。添加0.571g(3.27mmol)2-氯-1-氟-4-硝基苯，并且混合物在RT下攪拌。4.5h后，添加200ml水，并且混合物之后用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌和之后通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，在減壓下除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。這產(chǎn)生872mg(理論的56％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.52(d，1H)，8.32(dd，1H)，7.85(d，1H)，7.76(dd，1H)，7.68-7.63(m，4H)，7.59-7.55(m，1H)，7.54-7.41(m，6H)，6.54(dd，1H)，4.56(br.s，2H)，1.07(s，9H). HPLC(方法2)Rt＝6.05min. MS(DCI，m/z)519(M+H)+. 實(shí)施例5A 1-(4-氨基-2-氯苯基)-3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-2(1H)-酮
800mg(1.54mmol)來(lái)自實(shí)施例4A的化合物溶于48ml THF。之后添加50mg(0.05mmol)在炭上的鈀，并且混合物在RT下在大氣壓下在氫氛中氫化。之后過(guò)濾混合物，濾餅用THF洗滌并且濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物(純度95％)沒(méi)有進(jìn)一步提純地進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法1)Rt＝5.55min. MS(ESIpos，m/z)489(M+H)+. 實(shí)施例6A N-{[(5S)-3-{4-[3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-氯-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5-氯噻吩-2-甲酰胺
向789mg(1.61mmol)來(lái)自實(shí)施例5A的化合物在24ml乙腈中的溶液中添加386mg(1.77mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。向該懸浮液中添加540mg(2.42mmol)高氯酸鎂。在RT下19h后，添加193mg(0.952mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物，并且在RT下繼續(xù)再攪拌30h。之后添加523mg(2.46mmol)1，1′-羰二咪唑和19mg(0.09mmol)DMAP，并且混合物在60℃下加熱。21h后，混合物用水，飽和氯化鈉水溶液和乙酸乙酯稀釋。含水相用乙酸乙酯提取兩次，并且合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，除去溶劑并且殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶1)。這產(chǎn)生533mg(理論的45％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.97(t，1H)，7.85(dd，1H)，7.73(dd，1H)，7.70-7.63(m，5H)，7.58(dd，1H)，7.53-7.38(m，8H)，7.19(d，1H)，6.47(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.55(br.s，2H)，4.24(dd，1H)，3.89(dd，1H)，3.65-3.58(m，2H)，1.07(s，9H). HPLC(方法2)Rt＝6.07min. MS(ESIpos，m/z)732(M+H)+. 實(shí)施例7A 3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
類似于實(shí)施例4A，1.50g(4.13mmol)來(lái)自實(shí)施例3A的化合物與704mg(4.54mmol)2-氟-5-硝基甲苯反應(yīng)。這產(chǎn)生570mg(理論的28％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.29(d，1H)，8.17(dd，1H)，7.76(dd，1H)，7.67-7.63(m，4H)，7.57(d，1H)，7.53(dd，1H)，7.51-7.41(m，6H)，6.52(t，1H)，4.63-4.51(m，2H)，2.12(s，3H)，1.07(s，9H). HPLC(方法4)Rt＝3.39min. MS(ESIpos，m/z)499(M+H)+. 實(shí)施例8A 1-(4-氨基-2-甲基苯基)-3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-2(1H)-酮
555mg(1.11mmol)來(lái)自實(shí)施例7A的化合物溶于15ml THF，添加150mg在活性炭上的鈀并且在大氣壓下在氫氛中氫化混合物直到已經(jīng)吸收理論量的氫。濾掉催化劑，其在減壓下濃縮后產(chǎn)生520mg(理論的99％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)7.70-7.63(m，5H)，7.51-7.41(m，6H)，7.40-7.36(m，1H)，6.78(d，1H)，6.47-6.41(m，2H)，6.38(t，1H)，5.22(s，broad，2H)，4.59-4.48(m，2H)，1.81(s，3H)，1.06(s，9H). HPLC(方法5)Rt＝3.20min. MS(ESIpos，m/z)469(M+H)+. 實(shí)施例9A N-[((5S)-3-{4-[3-({[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]-5-氯噻吩-2-甲酰胺
522mg(1.11mmol)來(lái)自實(shí)施例8A的化合物溶于10ml乙腈，并在0℃下添加266mg(1.22mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。添加373mg(1.67mmol)高氯酸鎂，并且混合物在RT下攪拌20h。然后添加271mg(1.67mmol)1，1′-羰二咪唑和14mg(0.11mmol)DMAP，并且反應(yīng)混合物在60℃下加熱20h?；旌衔锶缓笤跍p壓下濃縮，并添加水和叔-丁基甲醚。混合物用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過(guò)制備的HPLC提純。這產(chǎn)生562mg(理論的71％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.97(t，1H)，7.74-7.63(m，6H)，7.58-7.41(m，9H)，7.23(d，1H)，7.19(d，1H)，6.45(t，1H)，4.89-4.80(m，1H)，4.58-4.49(m，2H)，4.21(t，1H)，3.90-3.83(m，1H)，3.63-3.58(m，2H)，1.98(s，3H)，1.07(s，9H). HPLC(方法4)Rt＝3.39min. MS(ESIpos，m/z)712/714(35Cl/37Cl)(M+H)+. 實(shí)施例10A 5-氯-N-[((5S)-3-{4-[3-(羥甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
530mg(0.74mmol)來(lái)自實(shí)施例9A的化合物溶于9ml THF。添加1.5ml 1摩爾濃度的氟化四丁銨在THF中的的溶液，并且混合物在RT下攪拌30min。添加少許水，濃縮混合物并且產(chǎn)物通過(guò)制備的HPLC提純。這產(chǎn)生335mg(理論的93％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)9.00(t，1H)，7.70(d，1H)，7.55-7.49(m，3H)，7.39(d，1H)，7.23(d，1H)，7.20(d，1H)，6.36(t，1H)，5.14(s，broad，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.38-4.29(m，2H)，4.22(t，1H)，3.91-3.85(m，1H)，3.62(t，2H)，2.01(s，3H). HPLC(方法3)Rt＝1.66min. MS(ESIpos，m/z)474/476(35Cl/37Cl)(M+H)+. 實(shí)施例11A N-{[(5S)-3-{4-[3-(溴甲基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5-氯噻吩-2-甲酰胺
50mg(0.11mmol)來(lái)自實(shí)施例10A的產(chǎn)物溶于1ml二氯甲烷。添加0.024ml(0.32mmol)亞硫酰溴，并且混合物在RT下攪拌1.5h?；旌衔镉?ml甲醇和3ml二氯甲烷稀釋，并且然后在減壓下除去溶劑。粗產(chǎn)物沒(méi)有進(jìn)一步提純地進(jìn)一步反應(yīng)。
實(shí)施例12A 3-溴-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
44.5g(280mmol)3-溴吡啶-2(1H)-酮溶于750ml無(wú)水二甲基亞砜，并在室溫下分批添加33.4g(298mmol)叔-丁醇鉀。懸浮液在該溫度下攪拌1h，然后添加38.5g(280mmol)1-氟-2-甲基-4-硝基苯并且反應(yīng)溶液在80℃下加熱20h。使溶液冷卻并小心地用水稀釋。濾掉產(chǎn)生的晶狀沉淀，用少許水洗滌并在減壓下干燥。這產(chǎn)生62g(理論的80％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.34(d，1H)，8.21(dd，1H)，8.10(dd，1H)，7.71-7.63(m，2H)，6.36(t，1H)，2.17(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.72min MS(ESIpos)m/z＝309(M+H)+ 實(shí)施例13A 1-(2-甲基-4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶-2(1H)-酮
50g(162mmol)來(lái)自實(shí)施例12A的化合物溶于700ml無(wú)水二噁烷，添加62g(194mmol)三丁基乙烯基錫和4.7g(4mmol)四(三苯基啉)鈀并且混合物在回流下加熱15h。使混合物冷卻并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濾餅再用乙酸乙酯洗滌并且合并的濾液在減壓下蒸干。殘余物被置于硅膠并且在800g硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。這產(chǎn)生27g(理論的62％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.35(d，1H)，8.2(dd，1H)，7.75(dd，1H)，7.60(d，1H)，7.55(dd，1H)，6.75(dd，1H)，6.45(t，1H)，6.15(dd，1H)，5.30(dd，1H)，2.17(s，3H). LC-MS(方法4)Rt＝1.86min MS(ESIpos)m/z＝257(M+H)+ 實(shí)施例14A 3-(2-羥基乙基)-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
伴隨冰-冷卻，在45min期間內(nèi)向38g(148mmol)來(lái)自實(shí)施例13A的化合物添加40g(326mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷在650ml四氫呋喃中的溶液?；旌衔镌谠摐囟认略贁嚢枰恍r(shí)，然后在15min期間內(nèi)添加30g(747mmol)氫氧化鈉在740ml水中的溶液。添加151ml 30％濃度的過(guò)氧化氫溶液以便溫度不超過(guò)30℃。添加結(jié)束后，除去冷卻并且繼續(xù)再攪拌30min?；旌衔锒啻斡靡宜嵋阴ヌ崛?，合并的有機(jī)相用780g(1.63mol)亞硫酸氫鈉的溶液洗滌，分離掉有機(jī)相并且含水相再次用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鎂干燥并且在減壓下蒸干。殘余物被置于硅膠并且使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生38mg(理論的93％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.33(d，1H)，8.18(d，1H)，7.57(d，1H)，7.48-7.40(m，2H)，6.33(t，1H)，4.58(t，1H)，3.62-3.50(m，2H)，2.62(t，2H)，2.15(s，3H). LC-MS(方法6)Rt＝1.57min MS(ESIpos)m/z＝275(M+H)+ 實(shí)施例15A 3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
38g(138mmol)來(lái)自實(shí)施例14A的化合物溶于200ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺，并在0℃下添加12.2g(198mmol)咪唑，和分批地添加46g(135mmol)叔-丁基(氯)二苯基硅烷。混合物攪拌過(guò)夜后，用水稀釋并用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)。殘余物被置于硅膠并使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生62g(理論的88％)期望產(chǎn)物。
LC-MS(方法5)Rt＝3.18min MS(ESIpos)m/z＝483(M+H)+ 實(shí)施例16A 1-(4-氨基-2-甲基苯基)-3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(1H)-酮
62g(121mmol)來(lái)自實(shí)施例15A的化合物溶于2l乙醇和乙酸乙酯的1∶1混合物，添加46g(726mmol)甲酸銨和0.6g在炭上的鈀?；旌衔镌?0℃下加熱。45min后，使混合物冷卻并通過(guò)硅膠過(guò)濾。濾餅用乙酸乙酯洗滌并且濾液在減壓下蒸干。這產(chǎn)生36g(理論的61％)期望產(chǎn)物。
LC-MS(方法7)Rt＝1.84min MS(ESIpos)m/z＝221(M+H)+ 實(shí)施例17A N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]-5-氯噻吩-2-甲酰胺
35.6g(74.1mmol)來(lái)自實(shí)施例16A的化合物溶于800ml無(wú)水乙睛，并且在0℃下添加19g(89mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。添加25g(110mmol)高氯酸鎂，除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌15h。添加24mg(148mmol)1，1-羰二咪唑和180mg(1.4mmol)N，N-二甲基氨基吡啶，并且混合物在回流下加熱2h。使混合物冷卻并且在減壓下餾出溶劑。殘余物然后在乙酸乙酯中吸收并用水和三次用飽和氯化鈉溶液洗滌。通過(guò)硫酸鎂干燥后，過(guò)濾混合物并在減壓下蒸干。殘余物被置于硅膠并使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生46.4g(理論的84％)期望產(chǎn)物。
LC-MS(方法5)Rt＝3.31min MS(ESIpos)m/z＝700(M+H)+ 實(shí)施例18A 5-氯-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-羥基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
伴隨冰-冷卻，向43.8g(60.3mmol)來(lái)自實(shí)施例17A的化合物中加入400ml 1.25N在甲醇中的鹽酸。1h后，混合物用二氯甲烷稀釋，然后分離掉含水相。有機(jī)相用水洗滌兩次，通過(guò)硫酸鈉干燥并且，過(guò)濾后，在減壓下濃縮至干。殘余物被置于硅膠并且使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生19.6g(理論的66％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.70(d，1H)，7.55-7.47(m，2H)，7.40(dd，1H)，7.35(dd，1H)，7.25-7.17(m，2H)，6.26(t，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.60(t，1H)，4.22(t，1H)，3.92-3.84(m，1H)，3.66-3.54(m，4H)，2.60(t，2H)，2.01(s，3H). LC-MS(方法5)Rt＝1.87min MS(ESIpos)m/z＝488(M+H)+ 實(shí)施例19A 3-溴-1-(2-甲氧基4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
70g(403mmol)3-溴吡啶-2(1H)-酮溶于1l無(wú)水二甲基亞砜，并在室溫下添加54g(484mmol)叔-丁醇鉀。懸浮液在該溫度下攪拌1h。添加69g(403mmol)1-氟-2-甲氧基-4-硝基苯，并且反應(yīng)溶液在80℃下加熱20h。小心地，混合物用5l水稀釋。濾掉沉淀的固體，用水洗滌并在減壓下干燥。這產(chǎn)生103g(理論的72％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.05(dd，1H)，8.1(d，1H)，7.95(dd，1H)，7.7(d，1H)，7.6(dd，1H)，6.3(t，1H)，3.9(s，3H). MS(ESIpos)m/z＝342(M+NH4)+ 實(shí)施例20A 1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶-2(1H)-酮
100g(308mmol)來(lái)自實(shí)施例19A的化合物溶于1.4l無(wú)水二噁烷，并添加8.9g(7.7mmol)四(三苯基膦)鈀和117g(370mmol)三丁基乙烯基錫?；旌衔镌诨亓飨录訜?6h。然后使反應(yīng)溶液冷卻并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮至干。殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。添加石油醚直到開始結(jié)晶。濾掉晶體并在減壓下干燥。這產(chǎn)生37g(理論的41％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.0(m，2H)，7.7(m，2H)，7.5(dd，1H)，6.7(q，1H)，6.4(t，1H)，6.1(dd，1H)，5.3(dd，1H)，3.9(s，3H). MS(ESIpos)m/z＝273(M+H)+ 實(shí)施例21A 3-(2-羥乙基)-1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
在0℃下，在45min期間內(nèi)向37g(136mmol)來(lái)自實(shí)施例20A的化合物中添加36g(299mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷在600ml四氫呋喃中的溶液。在該溫度下再過(guò)一小時(shí)后，在15min期間內(nèi)添加27g(680mmol)氫氧化鈉的溶液(在水中1N)。混合物再攪拌5min，之后添加120ml 30％濃度過(guò)氧化氫溶液，使得溫度不超過(guò)30℃。除去冷卻，并且混合物再攪拌30min。多次用乙酸乙酯提取混合物，合并的有機(jī)相用730g(1.50mol)亞硫酸氫鈉的溶液洗滌，分離掉有機(jī)相并且含水相用乙酸乙酯再提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鎂干燥并且在減壓下蒸干。在硅膠上吸收殘余物并且使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并產(chǎn)物級(jí)分并且在減壓下蒸干。為了結(jié)晶，添加叔-丁基甲醚。濾掉晶體并且在減壓下干燥。這產(chǎn)生24g(理論的60％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.0(d，1H)，7.95(dd，1H)，7.6(d，1H)，7.4(d，1H)，6.35(t，1H)，4.6(t，1H)，3.9(s，3H)，3.55(m，2H)，2.6(m，2H). MS(ESIpos)m/z＝291(M+H)+ 實(shí)施例22A 3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
24g(81mmol)來(lái)自實(shí)施例21A的化合物溶于200ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺，添加7.2g(106mmol)咪唑和27g(98mmol)叔-丁基(氯)二苯基硅烷。16h后，混合物用1.2l水稀釋并且用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌兩次，通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮。為了結(jié)晶，添加叔-丁基甲醚，并濾掉產(chǎn)生的晶體和在減壓下干燥。這產(chǎn)生30g(理論的67％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.0(d，1H)，7.95(dd，1H)，7.6-7.5(m，5H)，7.5-7.4(m，8H)，6.35(t，1H)，3.8(m，5H)，2.7(m，2H)，1.0(s，9H). 實(shí)施例23A 1-(4-氨基-2-甲基苯基)-3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(1H)-酮
25g(48mmol)來(lái)自實(shí)施例22A的化合物溶于800ml乙醇和乙酸乙酯的1∶1混合物，并且添加18g(286mmol)甲酸銨和800mg在炭上的鈀?；旌衔镌?0℃下加熱。60min后，使混合物冷卻并通過(guò)硅膠過(guò)濾。濾餅再用乙酸乙酯洗滌，并且濾液在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生27g(理論的98％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝7.6(m，4H)，7.4(m，6H)，7.3(dd，1H)，7.25(dd，1H)，6.75(d，1H)，6.3(d，1H)，6.2(dd，1H)，6.1(t，1H)，5.3(b，2H)，3.8(m，2H)，3.6(s，3H)，2.7(m，2H)，1.0(s，9H). MS(ESIpos)m/z＝499(M+H)+ 實(shí)施例24A N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲氧基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5-氯噻吩-2-甲酰胺
29g(58mmol)來(lái)自實(shí)施例23A的化合物溶于600ml無(wú)水乙睛，并且在0℃下添加15g(69mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。添加19g(87mmol)高氯酸鎂，除去冷卻并且混合物在RT下攪拌15h。之后添加19.0g(116mmol)1，1-羰二咪唑和141mg(1.21mmol)N，N-二甲基氨基吡啶，并且在回流下加熱混合物。2h后，使混合物冷卻并且在減壓下餾出溶劑。殘余物在乙酸乙酯中吸收并且用水和三次用飽和氯化鈉溶液洗滌。通過(guò)硫酸鎂干燥后，過(guò)濾混合物并且在減壓下蒸干。殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生37g(理論的85％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝9.0(t，1H)，7.7(d，1H)，7.6(m，4H)，7.5-7.3(m，9H)，7.2(m，2H)，7.1(m，1H)，6.2(t，1H)，4.8(m，1H)，4.4(t，1H)，3.9(m，1H)，3.8(b，2H)，3.7(s，3H)，3.65(m，2H)，2.7(m，2H)，1.0(s，9H). LC-MS(方法8)Rt＝4.53min MS(ESIpos)m/z＝742(M+H)+ 實(shí)施例25A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-羥乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲氧基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
在0℃下，37g(49mmol)來(lái)自實(shí)施例24A的化合物溶于313ml在甲醇中的1.25N鹽酸。1h后，在減壓下蒸發(fā)溶液并用二氯甲烷稀釋。有機(jī)相用水洗滌兩次，通過(guò)硫酸鎂干燥并且，過(guò)濾后，在減壓下蒸干。殘余物在硅膠上使用二氯甲烷和甲醇梯度色譜分離。合并產(chǎn)物級(jí)分并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生19g(理論的78％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.00(t，1H)，7.70(d，1H)，7.45(d，1H)，7.35(dd，1H)，7.30(dd，1H)，7.25(d，1H)，7.20(d，1H)，7.15-7.08(m，1H)，6.19(t，1H)，4.91-4.83(m，1H)，4.60(t，1H)，4.25(t，1H)，3.94-3.87(m，1H)，3.73(s，3H)，3.66-3.53(m，4H)，2.62-2.55(m，2H). MS(ESIpos)m/z＝504(M+H)+ 實(shí)施例26A 2-(溴甲基)-1-氟-4-硝基苯
186g(1.20mol)2-氟-5-硝基甲苯溶于1.21四氯化碳，并添加214g(1.20mol)N-溴代琥珀酰亞胺。添加19.7g(120mmol)偶氮二異丁腈，并且混合物在回流下加熱。16h后，使混合物冷卻，過(guò)濾并在減壓下蒸干。殘余物溶于300ml二氯甲烷，并添加300g海沙?；旌衔锶缓笤俅卧跍p壓下濃縮至干，并且殘余物被置于1kg硅膠吸附塔。產(chǎn)物使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的20∶1混合物色譜分離，并且產(chǎn)物級(jí)分在減壓下蒸干。用環(huán)己烷使殘余物結(jié)晶并在減壓下干燥。這產(chǎn)生92g(理論的32％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.57-8.52(m，1H)，8.33-8.27(m，1H)，7.56(t，1H)，4.62(s，2H). GC-MS(方法9)Rt＝7.79min MS(ESIpos)m/z＝154(M-Br)+ 實(shí)施例27A 1-氟-2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯
30g(128mmol)來(lái)自實(shí)施例26A的化合物溶于1.3l無(wú)水甲苯，并添加45g(192mmol)氧化銀(I)和24.6g(769mmol)無(wú)水甲醇。混合物在60℃下加熱16h。然后使混合物冷卻并通過(guò)硅膠過(guò)濾。產(chǎn)物使用環(huán)己烷和和環(huán)己烷/乙酸乙酯25∶1梯度分級(jí)洗脫。產(chǎn)物級(jí)分在減壓下蒸干并且在減壓下干燥。這產(chǎn)生17g(理論的72％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.41-8.36(m，1H)，8.22-8.16(m，1H)，7.26(t，1H)，4.58(s，2H)，3.49(s，3H). GC-MS(方法9)Rt＝6.52min MS(ESIpos)m/z＝154(M-OCH3)+ 實(shí)施例28A 3-溴-1-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]吡啶-2(1H)-酮
38g(391mmol)3-溴-2-羥基吡啶溶于1250ml無(wú)水二甲基亞砜，并且分批添加53g(469mmol)叔-丁醇鉀?；旌衔镌贁嚢枰恍r(shí)，并然后添加72.4g(391mmol)來(lái)自實(shí)施例27A的化合物。添加結(jié)束后，混合物在80℃下加熱3h。然后使混合物冷卻，并且在室溫下繼續(xù)再攪拌16h。反應(yīng)溶液然后冷卻到15℃，并且在該溫度下用1N鹽酸小心地調(diào)整pH到pH＝3。添加4l水，并且混合物用2l乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌并且通過(guò)硫酸鎂干燥。溶液然后在減壓下蒸干，并添加叔-丁基甲醚用于結(jié)晶。濾掉晶體并且在減壓下干燥。這產(chǎn)生94g(理論的71％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.37(d，1H)，8.33(dd，1H)，8.10(dd，1H)，7.73-7.67(m，2H)，6.35(t，1H)，4.3(q，2H)，3.3(s，3H). LC-MS(方法6)Rt＝1.88min MS(ESIpos)m/z＝339(M+H+)+ 實(shí)施例29A 1-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]-3-乙烯基吡啶-2(1H)-酮
94g(277mmol)來(lái)自實(shí)施例28A的化合物溶于1.2l無(wú)水二噁烷，并在室溫下添加8g(6.9mmol)四(三苯基啉)鈀(0)，緩慢地添加105g(333mmol)三丁基乙烯基錫，并且添加結(jié)束后，混合物在回流下加熱21h。使反應(yīng)溶液冷卻并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濾餅再用乙酸乙酯洗滌并且合并的有機(jī)濾液在減壓下濃縮至干。剩余的殘余物溶于二氯甲烷并置于硅藻土。產(chǎn)物在1.2kg硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生23g(理論的29％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.36(d，1H)，8.31(dd，1H)，7.77(dd，1H)，7.67(d，1H)，7.56(dd，1H)，6.80-6.71(m，1H)，6.45(t，1H)，6.14(dd，1H)，5.33(dd，1H)，4.37-4.22(m，2H)，3.26(s，3H). LC-MS(方法6)Rt＝2.07min MS(ESIpos)m/z＝387(M+H+)+ 實(shí)施例30A 3-(2-羥基乙基)-1-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]吡啶-2(1H)-酮
23g(80mmol)來(lái)自實(shí)施例29A的化合物溶于80ml無(wú)水四氫呋喃并且冷卻到5℃。在15min期間內(nèi)，添加21g(176mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷(在四氫呋喃中0.5M溶液)。除去冷卻，并且混合物在室溫下再攪拌2h?；旌衔锶缓笤俅卫鋮s到5℃，并且添加400ml 1N氫氧化鈉水溶液。添加結(jié)束后，在該溫度下分批添加81ml 30％濃度過(guò)氧化氫溶液。用500ml乙酸乙酯稀釋后，混合物用32ml 40％濃度亞硫酸氫鈉溶液洗滌以毀滅過(guò)氧化物。分離掉有機(jī)相，并且含水相用乙酸乙酯提取四次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鎂干燥和，過(guò)濾后，在減壓下濃縮至干。殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并且在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生20g(理論的77％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.36(d，1H)，8.30(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.45(d，1H)，6.33(t，1H)，4.60(t，1H)，4.35-4.20(m，2H)，3.62-3.55(m，2H)，3.32(s，3H)，2.62(t，2H). LC-MS(方法8)Rt＝1.60min MS(ESIpos)m/z＝305(M+H+)+ 實(shí)施例31A 3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]吡啶-2(1H)-酮
20g(65mmol)來(lái)自實(shí)施例30A的化合物溶于75ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺，并且，伴隨冰-冷卻，首先添加5.3g(78mmol)咪唑和然后，在3min期間內(nèi)分批添加19g(72mmol)叔-丁基二苯基氯硅烷。除去冷卻，并且混合物在室溫下再攪拌19h。反應(yīng)溶液用乙酸乙酯稀釋并且用水洗滌三次和用飽和氯化鈉溶液兩次。混合物然后通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并且在減壓下濃縮至干。向殘余物中加入叔-丁基甲醚，并且濾掉產(chǎn)生的晶體和在減壓下干燥。這產(chǎn)生39g(理論的90％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.35(d，1H)，8.31(dd，1H)，7.65-7.35(m，13H)，6.35(t，1H)，4.32-4.14(m，2H)，3.92-3.80(m，2H)，3.32(s，3H)，2.78-2.71(m，2H)，0.97(s，9H). LC-MS(方法8)Rt＝4.59min MS(ESIpos)m/z＝543(M+H+)+ 實(shí)施例32A 1-[4-氨基-2-(甲氧基甲基)苯基]-3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(1H)-酮
25g(48mmol)來(lái)自實(shí)施例31A的化合物溶于500ml乙酸乙酯和500ml乙醇。添加18g(286mmol)甲酸銨和1g在炭上的鈀，并且混合物在回流下加熱45min。然后使反應(yīng)溶液冷卻并通過(guò)硅膠過(guò)濾。濾液在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生25g(理論的100％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝7.65-7.20(m，12H)，6.79(d，1H)，6.68(d，1H)，6.54(dd，1H)，6.20(t，1H)，5.46-5.25(m，2H)，4.04-3.91(m，2H)，3.87-3.77(m，2H)，3.07(s，3H)，2.75-2.68(m，2H)，0.95(s，9H). LC-MS(方法6)Rt＝3.22min MS(ESIpos)m/z＝513(M+H+)+ 實(shí)施例33A N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基-甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5-氯噻吩-2-甲酰胺
25g(47mmol)來(lái)自實(shí)施例32A的化合物溶于500ml無(wú)水乙睛，并添加15g(61mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物和16g(71mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?h，并且然后再添加1g(4.1mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。21h后，添加15.3g(95mmol)羰二咪唑和116mg(0.65mmol)4-二甲基氨基吡啶，并且混合物在回流下加熱3.5h。然后在減壓下除去溶劑，并且殘余物在800ml乙酸乙酯中吸收。溶液用水和兩次用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鎂干燥和然后在減壓下濃縮。殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯梯度分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分和在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生26.5g(理論的72％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.00(t，1H)，7.73-7.35(m，15H)，7.23(d，1H)，7.19(d，1H)，6.28(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.28-3.80(m，6H)，3.62(t，2H)，3.11(s，3H)，2.79-2.71(m，2H)，0.97(s，9H). LC-MS(方法6)Rt＝3.39min MS(ESIpos)m/z＝756(M+H+)+ 實(shí)施例34A N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基-甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5-氯噻吩-2-甲酰胺
伴隨冰-冷卻，向27g(34mmol)來(lái)自實(shí)施例33A的化合物中加入135ml 1.25N在甲醇中的鹽酸?；旌衔镌谠摐囟认略贁嚢?5min。伴隨冰-冷卻，混合物使用1N氫氧化鈉水溶液調(diào)整到pH 7，并且冷的溶液多次用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌和通過(guò)硫酸鎂干燥。混合物在減壓下蒸干，并且殘余物在硅膠上使用二氯甲烷和甲醇梯度色譜分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分和在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生16.4g(理論的89％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.72-7.66(m，2H)，7.62-7.56(m，1H)，7.40(dd，1H)，7.36(dd，1H)，7.27(d，1H)，7.20(d，1H)，6.25(t，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.60(t，1H)，4.27-4.08(m，3H)，3.94-3.87(m，1H)，3.65-3.55(m，4H)，3.18(s，3H)，2.60(t，2H). LC-MS(方法6)Rt＝1.96min MS(ESIpos)m/z＝518(M+H+)+ 實(shí)施例35A 3-烯丙基-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
在已經(jīng)通過(guò)加熱干燥的燒瓶中，開始向30ml脫氣THF中加入1.50g(4.85mmol)來(lái)自實(shí)施例12A的化合物，1.44g(9.46mmol)氟化銫和0.56g(0.48mmol)四(三苯基膦)鈀(0)。滴加2.04g(12.1mmol)2-烯丙基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷(dioxaborolan)在5ml脫氣THF中的溶液，并且混合物在回流下加熱過(guò)夜?；旌衔锶缓笥枚燃淄橄♂?，并添加水。相分離后，含水相用二氯甲烷提取三次。合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。產(chǎn)物通過(guò)在硅膠上層析提純，產(chǎn)生1.18g(理論的62％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.31(d，1H)，8.18(dd，1H)，7.57(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.44-7.38(m，1H)，6.35(t，1H)，5.96(dddd，1H)，5.16-5.06(m，2H)，3.20(d，2H)，2.15(s，3H). HPLC(方法2)Rt＝4.05min. MS(ESIpos，m/z)271(M+H)+. 實(shí)施例36A 3-(3-羥基丙基)-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
在0℃下，緩慢地向在4ml THF中的1.00g(3.70mmol)來(lái)自實(shí)施例35A的化合物中滴加18.5ml(9.25mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷在THF中的0.5摩爾濃度溶液。在室溫下一小時(shí)后，混合物再次冷卻到0℃，并滴加18.5ml(18.5mmol)氫氧化鈉在水中的1摩爾濃度溶液?；旌衔镌?℃下再攪拌30min，并且然后添加3.24ml 30％濃度過(guò)氧化氫溶液，使得溫度不超過(guò)30℃?；旌衔锇殡S冰-冷卻攪拌30min，并且然后添加乙酸乙酯和然后11g(40mmol)亞硫酸氫鈉溶液。分離掉有機(jī)相，并且含水相用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥和然后在減壓下蒸干。殘余物在硅膠上色譜分離(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶4)。這產(chǎn)生1.03g(理論的83％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.31(d，1H)，8.18(dd，1H)，7.66-7.51(m，1H)，7.47-7.38(m，2H)，6.33(t，1H)，4.46(t，1H)，3.46-3.38(q，2H)，2.52-2.45(m，2H)，2.15(s，3H)，1.73-1.62(m，2H). HPLC(方法1)Rt＝3.51min. MS(DCI，m/z)＝289(M+H)+ 實(shí)施例37A 1-(4-氨基-2-甲基苯基)-3-(3-羥基丙基)吡啶-2(1H)-酮
475mg(1.65mmol)來(lái)自實(shí)施例36A的化合物溶于48ml THF。然后添加50mg(0.05mmol)在炭上的鈀，并且在RT下在氫氛中在大氣壓下氫化混合物。然后過(guò)濾混合物，濾餅用THF洗滌三次并且濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物沒(méi)有進(jìn)一步提純地進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法1)Rt＝2.82min. MS(DCI，m/z)259(M+H)+. 實(shí)施例38A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(3-羥基丙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
580mg(2.24mmol)來(lái)自實(shí)施例37A的化合物溶于12.7ml無(wú)水乙睛，并且添加538mg(2.47mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物和751mg(3.37mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5h。然后添加437mg(2.69mmol)羰二咪唑和27mg(0.23mmol)4-二甲基氨基吡啶，并且混合物在回流下加熱18h。然后向100ml水中加入混合物，并且混合物用50ml乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相然后用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥和然后在減壓下濃縮。殘余物通過(guò)制備的HPLC提純。這產(chǎn)生175mg(理論的16％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，7.70(d，1H)，7.57-7.47(m，2H)，7.40-7.31(m，2H)，7.23(d，1H)，7.20(d，1H)，6.26(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.46(dd，1H)，4.22(t，1H)，3.91-3.85(m，1H)，3.62(t，2H)，3.42(ddd，2H)，3.31(s，1H)，2.48-2.42(m，1H)，2.01(s，3H)，1.67(ddd，2H). HPLC(方法2)Rt＝3.92min MS(DCI，m/z)＝502(M+H)+ 實(shí)施例39A 3-甲氧基-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
28.5g(228mol)3-甲氧基吡啶-2(1H)-酮溶于850ml二甲基亞砜，并在RT下添加31g(273mmol)叔-丁醇鉀。懸浮液在RT下攪拌30min，和然后添加35g(228mmol)1-氟-2-甲基-4-硝基苯，并且反應(yīng)溶液在80℃下加熱20h。溶液然后小心地用1l水稀釋并使用1N鹽酸調(diào)整到pH 1-2。溶液多次用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)提取物用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾和在減壓下蒸發(fā)。獲得的固體用少量叔-丁基甲醚洗滌，濾掉并在減壓下干燥。這產(chǎn)生42.8g(理論的72％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.35(d，1H)，8.18(dd，1H)，7.57(d，1H)，7.13(dd，1H)，6.95(dd，1H)，6.32(t，1H)，3.75(s，3H)，2.25(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.45min MS(ESIpos)m/z＝261(M+H)+ 實(shí)施例40A 3-羥基-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
23.3g(90mmol)實(shí)施例39A溶于730ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到0℃。在10分鐘期間內(nèi)，滴加224ml(224mmol)在二氯甲烷中的1N三溴化硼溶液，混合物然后在該溫度下再攪拌1.5h。向反應(yīng)中加入200ml水，并且含水相用二氯甲烷提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濾掉。溶劑在減壓下除去，并且獲得的固體用叔-丁基甲醚洗滌并濾掉。這產(chǎn)生20.1g(理論的91％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.50(s，1H)，8.42(d，1H)，8.20(dd，1H)，7.6(d，1H)，7.05(d，1H)，6.85(dd，1H)，6.25(t，1H)，2.25(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.45min MS(ESIpos)m/z＝246(M+H)+ 實(shí)施例41A 3-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]-1-(2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
10.0g(41mmol)實(shí)施例40A溶于無(wú)水二氯甲烷，并添加13.6g(89mmol)1，8-二氮雜雙環(huán)(5.4.0)十一碳-7-烯。在25℃下，分批地向該溶液中緩慢地添加8.6g(69mmol)1-(氯甲氧基)-2-甲氧基乙烷，在過(guò)一小時(shí)后。溶液通過(guò)硅膠過(guò)濾并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生20.1g(理論的91％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.32(d，1H)，8.19(dd，1H)，7.6(d，1H)，7.22(dd，1H)，7.15(dd，1H)，6.3(t，1H)，5.25(s，2H)，3.78-3.72(m，2H)，3.51-3.45(m，2H)，3.23(s，3H)，2.15(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.79min MS(ESIpos)m/z＝335(M+H)+ 實(shí)施例42A 1-(4-氨基-2-甲基苯基)-3-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]吡啶-2(1H)-酮
12g(36mmol)實(shí)施例41A溶于1.2l乙酸乙酯和乙醇的1∶1混合物，并添加0.1當(dāng)量在炭上的鈀和11.3g(180mmol)甲酸銨?；旌衔镌?0℃下加熱兩小時(shí)。使混合物冷卻并通過(guò)硅膠過(guò)濾，并且在減壓下除去溶劑。這產(chǎn)生10.6g(理論的88％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝7.12-7.05(m，1H)，6.80(d，1H)，6.51-6.42(m，2H)，6.17(t，1H)，5.21(s，2H)，3.76-3.71(m，2H)，3.49-3.45(m，2H)，3.23(s，3H)，1.85(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.10min MS(ESIpos)m/z＝305(M+H)+ 實(shí)施例43A 5-氯-N-[((5S)-3-{4-[3-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
9.2g(30mmol)實(shí)施例42A溶于580ml乙腈并且冷卻到0℃。在該溫度下，添加7.3g(34mmol)實(shí)施例1A，并且混合物然后再攪拌10分鐘。添加10.2g(46mmol)高氯酸鎂，除去冷卻并且混合物再攪拌17h。然后添加14.8g(91mmol)羰二咪唑和0.37g(3mmol N，N-4-二甲基氨基吡啶，并且混合物在60℃下加熱4h。冷卻后，混合物在RT下再攪拌16h和然后在減壓下蒸干。向殘余物中加入1N鹽酸和乙酸乙酯，并且劇烈攪拌混合物。15min后，相分離，含水相用乙酸乙酯提取三次并且合并有機(jī)相。用飽和氯化鈉溶液洗滌后，干燥混合物并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生17.2g(理論的95％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.0(t，1H)，7.70(d，1H)，7.56-7.49(m，2H)，7.26(d，1H)，7.20(d，1H)，6.95(dd，1H)，6.80(dd，1H)，6.20(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.24(t，1H)，3.92-3.85(m，1H)，3.70-3.55(m，3H)，3.52-3.25(m，2H)，2.55(s，3H)，2.08-2.02(m，3H)，1.91(s，3H). LC-MS(方法4)Rt＝2.13min MS(ESIpos)m/z＝548(M+H)+ 實(shí)施例44A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-羥基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3-甲基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
18g(33mmol)實(shí)施例43A溶于50ml三氟乙酸并再攪拌3h，混合物然后在減壓下蒸干。殘余物(22.3g)每份2g，每種情況溶于8.5ml二甲基亞砜，并使用水/乙腈梯度通過(guò)制備HPLC提純。合并產(chǎn)物級(jí)分并除去乙腈，并且過(guò)濾形成的晶體。濾液用乙酸乙酯提取，并且合并乙酸乙酯相，用飽和氯化鈉溶液洗滌，干燥和在減壓下蒸發(fā)。殘余物與晶體合并并在減壓下干燥。這產(chǎn)生9.95g(理論的65％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.2(br.s，1H)，9.00(t，1H)，7.70(d，1H)，7.56-7.48(m，2H)，7.26(d，1H)，7.20(d，1H)，6.95(dd，1H)，6.86(dd，1H)，6.2(t，1H)，4.92-4.80(m，1H)，4.22(t，1H)，3.92-3.82(m，1H)，3.62(t，2H)，2.04(s，3H). LC-MS(方法4)Rt＝2.09min MS(ESIpos)m/z＝460(M+H)+ 實(shí)施例45A 5-氯-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-羥基乙氧基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
2.0g(4.35mmol)實(shí)施例44A溶于9ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺，添加3.6g(26.1mmol)碳酸鉀并且混合物再攪拌30min?；旌衔镌儆?ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺稀釋，添加3.1g(13.05mmol)(2-溴乙氧基)(叔-丁基)二甲基甲硅烷并且混合物在60℃下加熱7h.。使混合物冷卻，過(guò)濾并使用水/乙腈梯度通過(guò)制備HPLC提純。產(chǎn)物級(jí)分在減壓下蒸干，并且殘余物在減壓下干燥。這產(chǎn)生1.17g(理論的53％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.00(t，1H)，7.70(d，1H)，7.55-7.48(m，2H)，7.25-7.18(m，2H)，7.05(dd，1H)，6.93(dd，1H)，6.22(t，1H)，4.91(t，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.22(t，1H)，4.00-3.85(m，3H)，3.75-3.70(m，2H)，3.61(t，2H)，2.0(s，3H). LC-MS(方法5)Rt＝1.93min MS(ESIpos)m/z＝504(M+H)+ 實(shí)施例46A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-氯乙氧基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
4.5g(7.5mmol)實(shí)施例44A和1.4g(9.8mmol)2-氯溴乙烷(2-chloroethyl bromide)溶于45ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺，并且添加3.1g(22.6mmol)碳酸鉀。反應(yīng)被分成三個(gè)反應(yīng)管形瓶(Reaktionsvials)并且在80℃下在微波爐(300W)中攪拌40分鐘。在三份中，向冷卻的反應(yīng)管形瓶中加入總共1.4g(9.8mmol)2-氯溴乙烷，并且混合物在80℃下在微波爐(300W)中再攪拌60分鐘。向反應(yīng)中加入水，混合物用二氯甲烷提取并且分離的有機(jī)相用1N鹽酸和飽和氯化鈉溶液洗滌。二氯甲烷相通過(guò)硫酸鈉干燥，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上餾出溶劑。殘余物然后在硅膠60上使用流動(dòng)相二氯甲烷/乙腈10/1色譜分離，用二氯甲烷/甲醇10/1沖洗。包含產(chǎn)物的級(jí)分濃縮至干。使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC精制產(chǎn)生1.4g產(chǎn)物(理論的35％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.96(t，1H)，7.69(d，1H)，7.55-7.46(m，2H)，7.23(d，1H)，7.20(d，1H)，7.12(d，1H)，6.98(d，1H)，6.23(t，1H)，4.86(m，1H)，4.32-4.17(m，3H)，3.97(m，2H)，3.92-3.84(m，1H)，3.62(t，2H)，2.01(s，3H). LC-MS(方法6)Rt＝2.31min，2.36min MS(ESIpos)m/z＝522(M+H)+ 實(shí)施例47A (2-氟-5-硝基芐基)(三苯基)溴化鎓
20g(85.5mmol)來(lái)自實(shí)施例26A的化合物溶于250ml無(wú)水甲苯，并添加22.4g(85.5mmol)三苯膦。溶液在回流下加熱16h，導(dǎo)致沉淀的形成。使混合物冷卻，并且濾掉沉淀。用乙醚洗滌后，沉淀在減壓下干燥。這產(chǎn)生39g(理論的92％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.30-8.23(m，1H)，7.98-7.88(m，4H)，7.81-7.70(m，12H)，7.45(t，1H)，5.32(d，2H). 實(shí)施例48A 1-氟-4-硝基-2-[丙-1-烯-1-基]苯
在10℃下，向13.5g(27.3mmol)來(lái)自實(shí)施例47A的化合物在145ml二噁烷中的溶液中滴加5.99g(32.7mmol)雙(三甲基甲硅烷基)氨基鈉?；旌衔镌谠摐囟认聰嚢?h。然后添加2.40g(54.5mmol)乙醛在5ml二噁烷中的溶液，并且反應(yīng)在RT下攪拌1h。然后添加400ml水，混合物用二氯甲烷提取三次并且合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次。通過(guò)硫酸鈉干燥和隨后過(guò)濾后，在減壓下除去溶劑。產(chǎn)物通過(guò)在硅膠上層析提純(流動(dòng)相∶環(huán)己烷/乙酸乙酯＝40∶1)。這產(chǎn)生5.2g(理論的100％)作為E/Z異構(gòu)體混合物的期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.47-8.05(m，2H)，7.58-7.42(m，1H)，6.70-6.05(m，2H)，1.90-1.78(m，3H). GC-MS(方法10)Rt＝2.64and 2.70min MS(ESIpos)m/z＝181(M+H+)+ 實(shí)施例49A 3-甲氧基-1-{4-硝基-2-[丙-1-烯-1-基]苯基}吡啶-2(1H)-酮
14.0g(111.9mmol)3-甲氧基吡啶-2(1H)-酮溶于350ml二甲基亞砜，添加15.4g(134.3mmol)叔-丁醇鉀并且懸浮液在室溫下攪拌30分鐘。向反應(yīng)混合物中加入20.2g(111.9mmol)實(shí)施例48A?；旌衔锛訜岬?0℃并在該溫度下攪拌12小時(shí)。使用150ml1N鹽酸和輕微冷卻，反應(yīng)調(diào)整到pH 3，混合物用800ml水稀釋并用二氯甲烷提取并且有機(jī)相先后用水和飽和氯化鈉溶液洗滌。二氯甲烷相然后通過(guò)硫酸鈉干燥，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。用叔-丁基甲醚再結(jié)晶后，殘余物產(chǎn)生17.9g產(chǎn)物(理論的45％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.50(d，0.75H)，8.17(dd，0.25H)，8.22-8.13(m，1H)，7.17(d，0.25H)，7.57(d，0.75H)，7.09(dd，1H)，6.96(dd，0.75H)6.91(d，0.25H)，6.59(m，0.75H)，6.35-6.23(m，1H)，6.09-5.85(m，1.25H)，3.78(s，2.25H)，3.75(s，0.75H)，1.81(dd，2.25H)，1.73(dd，0.75H). LC-MS(方法3)Rt＝2.75min，2.79min MS(ESIpos)m/z＝273(M+H)+ 實(shí)施例50A 3-羥基-1-{4-硝基-2-[丙-1-烯-1-基]苯基}吡啶-2(1H)-酮
17.8g(50.6mmol)實(shí)施例49A溶于300ml二氯甲烷。向冰-冷卻的溶液中滴加溶于100ml二氯甲烷的31.7g(126.5mmol)三溴化硼，并且混合物在0℃下攪拌1.5小時(shí)。向攪拌的反應(yīng)中加入冰?；旌衔锶缓笥盟♂尣⑶译S后多次用二氯甲烷/甲醇10/1和氯仿提取。合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上餾出溶劑。用叔-丁基甲醚/二氯甲烷(10/1)再結(jié)晶后，殘余物產(chǎn)生9.4g產(chǎn)物(理論的67％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)9.43(br.s，1H)，8.50(d，0.75H)，8.27(dd，0.25H)，8.22-8.13(m，1H)，7.19(d，0.25H)，7.59(d，0.75H)，6.99(dd，1H)，6.85(d，0.75H)6.81(d，0.25H)，6.58(m，0.75H)，6.31-6.19(m，1H)，6.11-5.85(m，1.25H)，1.81(dd，2.25H)，1.73(dd，0.75H). LC-MS(方法3)Rt＝1.78min MS(ESIpos)m/z＝287(M+H)+ 實(shí)施例51A 3-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]-1-{4-硝基-2-[丙-1-烯-1-基]苯基}吡啶-2(1H)-酮
15.0g(48.9mmol)實(shí)施例50A溶于700ml二氯甲烷，并添加16.4g(107mmol)1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯。向水冷的混合物中滴加100ml二氯甲烷和10.4g(83.2mmol)1-(氯甲氧基)-2-甲氧基乙烷的溶液，并且混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。為了后處理，反應(yīng)溶液直接置于硅膠60并且使用環(huán)己烷和乙酸乙酯(2/1→1/2)流動(dòng)相梯度色譜分離。這產(chǎn)生9.6g(理論的43％)產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.50(d，0.5H)，8.27(dd，0.5H)，8.22-8.13(m，1H)，7.19(d，0.5H)，7.59(d，0.5H)，7.23-7.10(m，2H)，6.58(m，0.5H)6.85-6.25(m，1H)，6.60-5.85(m，1.5H)，5.28(s，1H)，5.23(s，1H)，3.75(m，2H)，3.48(m，2H)，3.25(s，3H)，1.80(dd，1.5H)，1.72(dd，1.5H). LC-MS(方法6)Rt＝2.09min MS(ESIpos)m/z＝361(M+H)+ 實(shí)施例52A 1-(4-氨基-2-丙基苯基)-3-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]吡啶-2(1H)-酮
2.9g(7.0mmol)實(shí)施例51A溶于56ml乙酸乙酯和35ml乙醇的混合物，并且先后添加2.2g(35.0mmol)甲酸銨和催化量的在炭上的10％的鈀。反應(yīng)在80℃下攪拌2小時(shí)。為了后處理，冷卻的懸浮液通過(guò)硅膠60過(guò)濾，濾餅用乙醇洗滌并且濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干。殘余物溶于56ml乙酸乙酯和35ml乙醇的混合物，并添加2.2g(35.0mmol)甲酸銨和催化量的在炭上的10％的鈀。24小時(shí)反應(yīng)時(shí)間下和在80℃溫度下，起始材料完全還原。冷卻的懸浮液再次通過(guò)硅膠60過(guò)濾，用乙醇洗脫，并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。這產(chǎn)生3.0g粗產(chǎn)物 LC-MS(方法6)Rt＝1.73min，1.81min MS(ESIpos)m/z＝333(M+H)+ 實(shí)施例53A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-羥基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3-丙基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
3.0g(9.0mmol)實(shí)施例52A溶于125ml乙腈。向冰-冷卻的溶液中加入2.6g(9.9mmol)實(shí)施例1A，混合物攪拌10min并且然后分批地添加3.0g(13.5mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜，并且然后添加4.4g(27.1mmol)1，1-羰二咪唑和0.1g(0.9mmol)4-二甲基氨基吡啶。在60℃下4小時(shí)后，過(guò)濾懸浮液，用乙腈洗滌濾渣并且濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干。殘余物在乙酸乙酯中吸收并用50ml 1N鹽酸提取，酸性含水相多次用乙酸乙酯提取并且合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌。然后通過(guò)硫酸鈉干燥乙酸乙酯相，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC精制產(chǎn)生1.1g(理論的19％)產(chǎn)物。
LC-MS(方法11)Rt＝3.26min MS(ESIpos)m/z＝488(M+H)+ 實(shí)施例54A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-氯乙氧基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-丙基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
241mg(0.50mmol)實(shí)施例53A和270mg(1.4mmol)1-氯-2-碘乙烷溶于9ml N，N-二甲基甲酰胺，并添加131mg(0.90mmol)碳酸鉀。反應(yīng)在60℃下攪拌4小時(shí)。為了后處理，向懸浮液中加入水，并且混合物用二氯甲烷提取。分離的有機(jī)相先后用1N鹽酸和飽和氯化鈉溶液洗滌，然后通過(guò)氯化鈉干燥，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。在減壓下干燥殘余物產(chǎn)生30mg(理論的12％)產(chǎn)物。
LC-MS(方法6)Rt＝2.36min MS(ESIpos)m/z＝550(M+H)+ 實(shí)施例55A 1-(4-氨基-2-丙基苯基)-3-甲氧基吡啶-2(1H)-酮
27.0g(87.7mmol)實(shí)施例49A溶于702ml乙酸乙酯和441ml乙醇，添加16.6g(263mmol)甲酸銨和0.093g(0.09mmol)鈀/炭(10％)并且混合物在80℃下攪拌16h。因?yàn)椴煌耆D(zhuǎn)化，添加5.5g(87mmol)甲酸銨和0.03g(0.03mmol)鈀/炭(10％)。在80℃下再攪拌16h后，再添加相同的量，并且混合物在80℃下攪拌16h。為了后處理，使反應(yīng)溶液達(dá)到室溫并且通過(guò)硅膠玻璃料(silica gel frit)。濾餅再用乙醇洗滌，濾液在減壓下濃縮并且殘余物在硅膠60上使用二氯甲烷和甲醇(100/1→30/1)梯度色譜分離。這產(chǎn)生17.3g產(chǎn)物；然而，該產(chǎn)物的1H-NMR譜仍然包含包含雙鍵的中間體的信號(hào)。因此，含雜質(zhì)的材料溶于360ml乙酸乙酯和226ml乙醇，添加12.8g(202mmol)甲酸銨和0.072g(0.07mmol)鈀/炭(10％)，并且混合物在80℃下攪拌36h。冷卻后，混合物通過(guò)硅膠玻璃料過(guò)濾，濾餅再用乙醇洗滌并且濾液在減壓下濃縮。殘余物在硅膠60上使用二氯甲烷和甲醇(100/1→10/1)梯度色譜分離。這產(chǎn)生8.35g產(chǎn)物(理論的47％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)6.97(dd，1H)，6.85(dd，1H)，6.75(d，1H)，6.50(d，1H)，6.45(dd，1H)，6.15(t，1H)，5.22(s，2H)3.71(s，3H)，2.12(t，2H)，1.45-1.30(m，2H)，0.76(t，3H). LC-MS(方法6)Rt＝1.53min MS(ESIpos)m/z＝259(M+H)+. 實(shí)施例56A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-甲氧基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3-丙基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
1.00g(3.87mmol)實(shí)施例55A溶于23.5ml無(wú)水乙睛，并添加926mg(4.26mmol)實(shí)施例1A和1.30g(5.81mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5h。然后添加1.57g(9.68mmol)羰二咪唑和47mg(0.38mmol)4-二甲基氨基吡啶，并且混合物在60℃下攪拌4h和然后在RT下攪拌18h?；旌衔锶缓笥?00ml水和150ml乙酸乙酯稀釋，并且含水相用150ml乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相。通過(guò)硫酸鈉干燥和在減壓下濃縮，并且獲得的殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/甲醇20∶1)。這產(chǎn)生1.81g(理論的92％)期望產(chǎn)物 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，7.70(d，1H)，7.58-7.47(m，2H)，7.26-7.15(m，2H)，7.04(dd，1H)，6.90(dd，1H)，6.23(dd，1H)，4.91-4.81(m，1H)，4.23(dd，1H)，3.93-3.85(m，1H)，3.74(s，3H)，3.62(dd，2H)，2.31-2.23(m，2H)，1.50-1.36(m，2H)，0.78(t，3H). HPLC(方法2)Rt＝4.19min MS(ESI pos，m/z)＝502(M+H)+ 實(shí)施例57A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-羥基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3-丙基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
1.79g(3.56mmol)實(shí)施例56A溶于104ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃。在該溫度下，滴加28.5ml(28.5mmol)在二氯甲烷中的1N三溴化硼溶液，使得溫度不超過(guò)-65℃?；旌衔镌?78℃下攪拌2h和然后在RT下攪拌1h和然后小心地加入到200ml飽和碳酸氫鈉水溶液中。相分離后，含水相用二氯甲烷提取三次，合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸干。這產(chǎn)生1.75g(理論的97％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.21(s，1H)，8.99(t，1H)，7.70(d，1H)，7.56-7.47(m，2H)，7.29-7.15(m，2H)，6.94(dd，1H)，6.80(dd，1H)，6.19(dd，1H)，4.91-4.81(m，1H)，4.23(dd，1H)，3.93-3.85(m，1H)，3.62(dd，2H)，2.35-2.26(m，2H)，1.50-1.36(m，2H)，0.78(t，3H). HPLC(方法2)Rt＝4.21min MS(DCI)m/z＝488(M+H)+ 實(shí)施例58A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-氯乙氧基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-丙基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
1.70g(3.48mmol)實(shí)施例57A和2.49g(17.4mmol)1-溴-2-氯乙烷溶于55ml 1-甲基-2-吡咯烷酮。向溶液中加入2.27g(6.96mmol)碳酸銫，并且混合物在60℃下攪拌2小時(shí)。然后添加500ml水，100ml飽和氯化鈉水溶液和200ml叔-丁基甲醚和200ml乙酸乙酯。相分離后，含水相用200ml乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相先后用1N氫氧化鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌和然后通過(guò)硫酸鈉干燥，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/乙醇40∶1)。這產(chǎn)生1.78g(理論的85％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，7.70(d，1H)，7.56-7.47(m，2H)，7.29-7.13(m，2H)，7.12(dd，1H)，6.99(dd，1H)，6.22(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.30-4.14(m，1H)，3.98-3.85(m，1H)，3.61(dd，2H)，2.35-2.26(m，2H)，2.18(t，2H)，1.95-1.85(m，2H)，1.50-1.36(m，2H)，0.78(t，3H). HPLC(方法2)Rt＝4.44min MS(ESIpos)m/z＝550(M+H)+ 實(shí)施例59A 3-溴-1-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
2.81g(16.1mmol)3-溴吡啶-2(1H)-酮(O.S.Tee，M.Pavent，J.Am.Chem.Soc.1982，104，4142-4146。)溶于100ml DMF?；旌衔锢鋮s到0℃，并添加2.71g(24.2mmol)叔-丁醇鉀。除去冰浴，并且混合物在室溫下攪拌30min。添加3.00g(17.7mmol)1-氟-2，5-二甲基-4-硝基苯，并且混合物在80℃下攪拌18h，在100℃下攪拌36h和在120℃下攪拌18h。然后向水中加入混合物并且用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯4∶1)。這產(chǎn)生2.04g(理論的38％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.19(s，2H)，8.14(dd，1H)，7.62(dd，1H)，6.43(t，1H)，2.11(s，6H). HPLC(方法1)Rt＝4.13min. MS(ESIpos，m/z)323(M+H)+. 可選擇的合成 150g(750mmol)3-溴吡啶-2(1H)-酮(O.S.Tee，M.Pavent，J.Am.Chem.Soc.1982，104，4142-4146。)和207g(1.50mol)碳酸鉀溶于2.9l二甲基亞砜并加熱到120℃。在該溫度下，在60min期間內(nèi)滴加317g(750mmol)1-氟-2，5-二甲基-4-硝基苯在700ml二甲基亞砜中的溶液，并且混合物在120℃下攪拌3.5h。冷卻后，反應(yīng)溶液攪拌成水/鹽酸混合物?；旌衔镉靡宜嵋阴ヌ崛?，相分離并且含水相再次用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相然后用水洗滌。相分離，并且有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮后，殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷，然后乙酸乙酯/二氯甲烷1∶20)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分，除去溶劑并且將殘余物與乙醚一同研磨。這產(chǎn)生112g(理論的46％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.19(s，2H)，8.14(dd，1H)，7.62(dd，1H)，6.43(t，1H)，2.11(s，6H). HPLC(方法13)Rt＝1.59min. MS(ESIpos，m/z)323(M+H)+. 實(shí)施例60A 1-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶-2(1H)-酮
2.00g(6.19mmol)來(lái)自實(shí)施例59A的化合物溶于31ml無(wú)水二噁烷，添加2.36g(7.42mmol)三丁基乙烯基錫和143mg(0.124mmol)四(三苯基啉)鈀并且混合物在100℃下攪拌5h。使混合物冷卻并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。濾餅用乙酸乙酯洗滌三次，并且合并的濾液在減壓下濃縮至干。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯4∶1)。這產(chǎn)生846mg(理論的51％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.17(s，2H)，7.78(dd，1H)，7.48(dd，1H)，6.75(dd，1H)，6.48(dd，1H)，6.14(dd，1H)，5.33(dd，1H)，2.10(s，6H). HPLC(方法1)Rt＝4.25min MS(ESIpos)m/z＝271(M+H)+ 可選擇的合成 132g(408mmol)來(lái)自實(shí)施例59A的化合物(可選擇的合成)溶于1.27l無(wú)水二噁烷，添加136g(428mmol)三丁基乙烯基錫和9.44g(8.17mmol)四(三苯基啉)鈀并且混合物在100℃下攪拌4h?；旌衔锢鋮s并通過(guò)硅藻土地濾。減壓下濃縮至干。殘余物溶于二氯甲烷并通過(guò)在硅膠上層析提純(石油醚/乙酸乙酯9∶1，然后8∶2，然后7∶3)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分，除去溶劑并且殘余物與石油醚/乙醚(10∶1)一起研磨。這產(chǎn)生83g(理論的75％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.17(s，2H)，7.78(dd，1H)，7.48(dd，1H)，6.75(dd，1H)，6.48(dd，1H)，6.14(dd，1H)，5.33(dd，1H)，2.10(s，6H). HPLC(方法13)Rt＝1.70min MS(ESIpos)m/z＝271(M+H)+ 實(shí)施例61A 1-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)-3-(2-羥基乙基)吡啶-2(1H)-酮
伴隨冰-冷卻，向800mg(2.96mmol)來(lái)自實(shí)施例60A的化合物中加入902mg(7.40mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷在14.8ml四氫呋喃中的溶液?；旌衔镌谑覝叵略贁嚢?h和然后冷卻到0℃，并在15min期間內(nèi)添加591mg(14.8mmol)氫氧化鈉的水溶液。添加2.60ml 30％濃度過(guò)氧化氫溶液，使得溫度不超過(guò)30℃。添加結(jié)束后，混合物在0℃下攪拌30min。伴隨冰-冷卻，向反應(yīng)混合物中加入8.73g(32.6mol)亞硫酸氫鈉在12ml水中的溶液?；旌衔镉?0ml乙酸乙酯稀釋，分離有機(jī)相并且含水相用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸干。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶2)。這產(chǎn)生765mg(理論的89％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.15(s，2H)，7.46(dd，1H)，7.35(dd，1H)，6.37(dd，1H)，4.62(dd，1H)，4.25(d，1H)，2.62(dd，2H)，2.08(s，6H). HPLC(方法1)Rt＝3.59min MS(ESIpos)m/z＝289(M+H)+ 可選擇的合成 伴隨冰-冷卻，向70.7g(262mmol)來(lái)自實(shí)施例60A的化合物(可選擇的合成)中加入1.15l(575mmol)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷在四氫呋喃中的0.5摩爾濃度溶液，使得內(nèi)部溫度為10-15℃?；旌衔锶缓笈絉T并且在室溫下攪拌1.5h?；旌衔锶缓罄鋮s并且，在0℃-5℃下，添加653ml(1.31mol)氫氧化鈉的2-摩爾濃度水溶液。混合物再短暫攪拌，并且然后添加296g(2.51mol)30％濃度過(guò)氧化氫溶液，使得溫度不超過(guò)30℃并且不降到25℃之下。添加結(jié)束后，混合物再攪拌30min。向反應(yīng)混合物中加入水和乙酸乙酯。相分離后，含水相再次用乙酸乙酯提取。合并的有機(jī)相用亞硫酸氫鈉水溶液洗滌。分離有機(jī)相并且在減壓下蒸干。殘余物溶于二氯甲烷并且通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶2，然后乙酸乙酯)。這產(chǎn)生66.5g(理論的88％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3，δ/ppm)δ＝8.07(s，2H)，7.43(dd，1H)，6.98(ddd，1H)，6.38(dd，1H)，3.88(ddd，2H)，3.55(dd，1H)，2.89(dd，2H)，2.19(s，6H). HPLC(方法14)Rt＝0.83min MS(ESIpos)m/z＝289(M+H)+ 實(shí)施例62A 3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(1H)-酮
760mg(2.64mmol)來(lái)自實(shí)施例61A的化合物和0.55ml(3.9mmol)三乙胺溶于7ml無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺。添加16mg(0.13mmol)4-二甲基氨基吡啶和1.09g(3.95mmol)叔-丁基(氯)二苯基硅烷，并且混合物在RT下攪拌2h。然后向水中加入混合物，且相分離后，用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌兩次，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，并在減壓下蒸發(fā)。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯5∶1)。這產(chǎn)生971mg(理論的58％)期望產(chǎn)物。
HPLC(方法2)Rt＝5.97min MS(ESIpos)m/z＝527(M+H)+ 可選擇的合成 100g(346mmol)來(lái)自實(shí)施例61A的化合物(可選擇的合成)和30.7g(450mmol)咪唑溶于1l無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺。滴加117g(416mmol)叔-丁基(氯)二苯基硅烷在150ml N，N-二甲基甲酰胺中的溶液，并且混合物在RT下攪拌3h。然后添加水和乙酸乙酯，相分離并且有機(jī)相用水洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾和在減壓下蒸發(fā)。殘余物與石油醚/乙醚(10∶1)一起研磨。過(guò)濾后，殘余物用石油醚洗滌和然后空氣干燥。這產(chǎn)生150g(理論的82％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3，δ/ppm)δ＝8.04(s，2H)，7.68-7.62(m，4H)，7.46-7.33(m，7H)，6.92(dd，1H)，6.30(dd，1H)，3.95(dd，2H)，2.86(dd，2H)，2.16(s，6H)，1.02(s，9H). HPLC(方法13)Rt＝2.98min MS(ESIpos)m/z＝527(M+H)+ 實(shí)施例63A 1-(4-氨基-2，6-二甲基苯基)-3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(1H)-酮
970mg(1.84mmol)來(lái)自實(shí)施例62A的化合物溶于20ml THF。然后添加200mg在炭上的鈀，并且在RT下在氫氛中在大氣壓下氫化混合物。然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾混合物，濾餅用THF洗滌三次并且濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物(1.00g)沒(méi)有進(jìn)一步提純地進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法2)Rt＝4.99min MS(ESIpos)m/z＝497(M+H)+ 可選擇的合成 143g(271mmol)來(lái)自實(shí)施例62A的化合物(可選擇的合成)溶于1.43l四氫呋喃并用氬沖洗。添加17g在炭上的鈀(50％，用水潤(rùn)濕)，并且然后在RT下在氫氛中在大氣壓下氫化混合物。然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾混合物，濾餅用四氫呋喃洗滌并且濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物(134g)沒(méi)有進(jìn)一步提純地進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝3.11min MS(ESIpos)m/z＝497(M+H)+ 實(shí)施例64A N-[((5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]-5-氯噻吩-2-甲酰胺
800mg(1.61mmol)來(lái)自實(shí)施例63A的化合物溶于15ml無(wú)水乙睛，并且添加385g(1.77mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物和539mg(2.41mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5h。然后添加652mg(4.03mmol)1，1-羰二咪唑和19mg(0.16mmol)N，N-二甲基氨基吡啶，并且混合物在回流下加熱18h。使混合物冷卻并添加到100ml水和100ml乙酸乙酯中。相分離后，含水相用乙酸乙酯提取兩次并且合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，混合物在減壓下蒸干。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶2)。這產(chǎn)生664mg(理論的55％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，7.70(d，1H)，7.63-7.45(m，4H)，7.48-7.31(m，9H)，7.28(dd，1H)，7.20(d，1H)，6.32(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.22(dd，1H)，3.89-3.82(m，3H)，3.62(t，2H)，2.76(dd，2H)，1.94(s，6H)，0.95(s，9H). HPLC(方法2)Rt＝5.92min MS(ESIpos)m/z＝740(M+H)+ 可選擇的合成 102g(171mmol)來(lái)自實(shí)施例68A的化合物溶于1.45l二氯甲烷，并添加44.7ml(257mmol)N，N-二異丙基乙胺。緩慢地滴加37.1g(205mmol)5-氯噻吩-2-羰基氯在少量二氯甲烷中的溶液，并且混合物在室溫下攪拌一小時(shí)。然后添加水，相分離并且有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，濾液在減壓下蒸干。殘余物沒(méi)有進(jìn)一步提純地再反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝3.33min MS(ESIpos)m/z＝740(M+H)+ 實(shí)施例65A 5-氯-N-[((5S)-3-{4-[3-(2-羥基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
660mg(0.891mmol)來(lái)自實(shí)施例64A的化合物溶于20ml THF，并添加512mg(1.96mmol)氟化四丁銨。1h后，混合物在減壓下濃縮至干。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/甲醇10∶1；1％三乙胺)。這產(chǎn)生396mg(理論的85％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.69(d，1H)，7.42(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.25(dd，1H)，7.19(d，1H)，6.29(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.60(t，1H)，4.20(t，1H)，3.86(dd，1H)，3.64-3.52(m，4H)，2.62(t，2H)，1.95(s，6H). HPLC(method 1)Rt＝3.92min MS(ESIpos)m/z＝502(M+H)+ 可選擇的合成 157g(174mmol)來(lái)自實(shí)施例64A的化合物(可選擇的合成)溶于1.44l二氯甲烷。在15-20℃下，滴加453ml(5.32mol)濃鹽酸，并且混合物在室溫下攪拌1h。相分離，丟棄有機(jī)相。含水相用二氯甲烷洗滌兩次。然后向含水相中加入二氯甲烷，并且混合物伴隨冷卻使用1∶1稀氫氧化鈉水溶液調(diào)整到pH＝10。相分離，并且有機(jī)相用水洗滌兩次和然后通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，濾液在減壓下濃縮至干。殘余物與丙酮一起研磨，冷卻到10℃，在該溫度下濾掉并且用冷的丙酮洗滌。干燥后，產(chǎn)生75g(理論的85％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.69(d，1H)，7.42(dd，1H)，7.42-7.38(m，2H)，7.25(dd，1H)，7.19(d，1H)，6.29(t，1H)，4.90-4.81(m，1H)，4.60(t，1H)，4.20(t，1H)，3.86(dd，1H)，3.64-3.52(m，4H)，2.62(t，2H)，1.95(s，6H). HPLC(方法6)Rt＝1.93min MS(ESIpos)m/z＝502(M+H)+ 實(shí)施例66A 2-[(2R)-3-({4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基-苯基}氨基)-2-羥基丙基]-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮
65g(131mmol)來(lái)自實(shí)施例63A的化合物(可選擇的合成)溶于1.3l乙腈，并添加27.9g(137mmol)(S)-環(huán)氧鄰苯二甲酰亞胺和43.8g(196mmol)高氯酸鎂?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?5h。然后添加水和二氯甲烷，相分離并且有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，濾液在減壓下蒸干。殘余物沒(méi)有進(jìn)一步提純地再反應(yīng)。
HPLC(方法14)Rt＝1.73min MS(ESIpos)m/z＝701(M+H)+ 實(shí)施例67A 2-{[(5S)-3-{4-[3-(2-{[叔-丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮
190g(204mmol)來(lái)自實(shí)施例66A的化合物溶于1.01l甲苯。然后添加66.0g(407mmol)1，1′-羰二咪唑，并且混合物在回流下加熱一小時(shí)?；旌衔锶缓罄鋮s到室溫，并添加水和二氯甲烷。相分離并且有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，混合物在減壓下蒸干。殘余物與甲醇一起研磨，濾掉剩余固體并用甲醇洗滌。這產(chǎn)生130g(理論的87％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝7.99-7.82(m，4H)，7.65-7.56(m，4H)，7.48-7.28(m，10H)，6.32(t，1H)，5.03-4.93(m，1H)，4.24(dd，1H)，4.00(dd，1H)，3.97-3.88(m，2H)，3.85(t，2H)，2.76(t，2H)，1.94(s，6H)，0.95(s，9H). HPLC(方法14)Rt＝1.74min MS(ESIpos)m/z＝726(M+H)+ 實(shí)施例68A 1-{4-[(5S)-5-(氨甲基)-2-氧代-1，3-噁唑烷-3-基]-2，6-二甲基苯基}-3-(2-{[叔-丁基-(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(1H)-酮
130g(179mmol)來(lái)自實(shí)施例67A的化合物溶于650乙醇，并添加193ml(2.68mol)40％濃度六亞甲基四胺水溶液并且混合物在50-55℃下加熱一小時(shí)。冷卻到室溫后，添加水和二氯甲烷，相分離并且有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，濾液在減壓下蒸干。殘余物(117g，理論的89％)沒(méi)有進(jìn)一步提純地再反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝2.05min MS(ESIpos)m/z＝597(M+H)+ 實(shí)施例69A 1-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)-3-甲氧基吡啶-2(1H)-酮
在0℃下，向在10ml DMF中的336mg(2.69mmol)3-甲氧基吡啶酮(pyridinon)中加入452mg(4.03mmol)叔-丁醇鉀，并且混合物在室溫下攪拌30min。添加500mg(2.96mmol)1-氟-2，5-二甲基-4-硝基苯，并且混合物在80℃下攪拌。22h后，混合物在120℃下加熱并再攪拌20h?；旌衔锶缓罄鋮s和添加到100ml水和15ml飽和氯化鈉水溶液中?；旌衔镌诿恳环N情況下用300ml乙酸乙酯提取三次，并且合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，在減壓下除去溶劑并且殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶1)。這產(chǎn)生383mg(理論的52％)期望化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.16(s，2H)，7.04(dd，1H)，6.97(dd，1H)，6.38(dd，1H)，3.77(s，3H)，2.08(s，6H). HPLC(方法1)Rt＝2.84min. MS(DCI，m/z)275(M+H)+. 實(shí)施例70A 1-(4-氨基-2，6-二甲基苯基)-3-甲氧基吡啶-2(1H)-酮
2.05g(7.47mmol)來(lái)自實(shí)施例69A的化合物溶于70ml乙酸乙酯和70ml乙醇，添加2.35g(37.4mmol)甲酸銨和0.39g(0.37mmol)鈀/炭(10％)并且混合物在80℃下攪拌2h。為了后處理，使反應(yīng)溶液達(dá)到室溫并且通過(guò)硅膠玻璃料。濾餅用乙醇洗滌并且濾液在減壓下濃縮。反應(yīng)產(chǎn)物(1.65g)沒(méi)有進(jìn)一步提純地反應(yīng)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝6.93-6.83(m，2H)，6.33(s，2H)，6.19(dd，1H)，5.12(br.s，2H)，3.72(s，3H)，1.78(s，6H). LC-MS(方法1)Rt＝2.90min. MS(DCI，m/z)245(M+H)+. 實(shí)施例71A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-甲氧基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3，5-二甲基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
向555mg(2.27mmol)來(lái)自實(shí)施例70A的化合物在28ml乙腈中的溶液中加入544mg(2.50mmol)來(lái)自實(shí)施例1A的化合物。添加761mg(3.41mmol)高氯酸鎂，并且懸浮液然后在RT下攪拌5.5h。然后添加736mg(4.54mmol)1，1′-羰二咪唑和28mg(0.23mmol)DMAP，并且混合物在60℃下加熱。18h后，再添加28mg(0.23mmol)DMAP。在70℃下2h后，混合物冷卻并且用100ml水稀釋。含水相在每一種情況下用100ml乙酸乙酯提取三次，并且合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。過(guò)濾后，濾液除去溶劑并且殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/乙醇20∶1)。除去溶劑產(chǎn)生840mg(理論的69％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR 300MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.69(d，1H)，7.42-7.32(m，2H)，7.20(dd，1H)，7.00-6.88(m，2H)，6.28(dd，1H)，4.91-4.80(m，1H)，4.20(dd，1H)，3.90-3.82(m，1H)，3.75(s，3H)，3.60(dd，2H)，1.95(s，6H). HPLC(方法14)Rt＝1.02min. MS(ESIpos，m/z)488(M+H)+. 實(shí)施例72A 5-氯-N-({(5S)-3-[4-(3-羥基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-3，5-二甲基苯基]-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺
830mg(1.70mmol)來(lái)自實(shí)施例71A的化合物溶于50ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃。在該溫度下，滴加3.40ml(3.40mmol)在二氯甲烷中的1當(dāng)量(normalen)三溴化硼溶液，使得溫度不超過(guò)-65℃?；旌衔镌?78℃下攪拌2h和然后在RT下攪拌2.5h并且在-20℃下保持15h。在室溫下，溶液小心地添加到飽和碳酸氫鈉水溶液中。相分離后，含水相用二氯甲烷提取三次，并且合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并且在減壓下蒸干。這產(chǎn)生907mg(理論的69％，根據(jù)LC-MS純度61％)期望化合物。
LC-MS(方法6)Rt＝2.09min. MS(ESIpos，m/z)＝474(M+H)+ 實(shí)施例73A 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-(2-氯乙氧基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
900mg(1.89mmol)來(lái)自實(shí)施例72A的化合物和1.36g(9.49mmol)1-溴-2-氯乙烷溶于30ml 1-甲基-2-吡咯烷酮。向溶液中加入1.55g(4.75mmol)碳酸銫，并且混合物在60℃下攪拌15小時(shí)。然后添加水，并且，相分離后，含水相用叔-丁基甲醚和三次用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相先后用1N氫氧化鈉水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌和然后通過(guò)硫酸鈉干燥。濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶5)。這產(chǎn)生464mg(理論的45％，根據(jù)LC-MS純度74％)期望產(chǎn)物。
HPLC(方法6)Rt＝2.26min MS(ESIpos)m/z＝536(M+H)+ 操作實(shí)施例 實(shí)施例1 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{[(2-羥乙基)氨基]甲基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
在-10℃下，向56mg(0.11mmol)來(lái)自實(shí)施例11A的化合物在1mlDMF中的溶液中添加38mg(0.63mmol)氨基乙醇。在-10℃下30min后，向水中添加混合物和之后用乙酸乙酯提取三次。合并有機(jī)相和然后在減壓下除去溶劑。產(chǎn)物使用乙腈/水混合物用制備HPLC提純。這產(chǎn)生14.5mg(理論的26％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)9.00(t，1H)，8.28-8.15(m，2H)，7.70(d，1H)，7.60-7.48(m，3H)，7.45(d，1H)，7.23(d，1H)，7.20(d，1H)，6.35(dd，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.22(dd，1H)，3.88(dd，1H)，3.71-3.45(m，6H)，2.68(dd，2H)，2.02(s，3H). HPLC(方法2)Rt＝3.71min. MS(ESIpos，m/z)517/519(35Cl/37Cl)(M+H)+. 實(shí)施例2 5-氯-N-{[(5S)-3-{3-甲基-4-[3-(2-嗎啉-4-基乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基]苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
100mg(0.21mmol)實(shí)施例18A溶于5ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃。在該溫度下，添加66mg(0.62mmol)2，6-二甲基吡啶和69mg(0.25mmol)三氟甲烷磺酸酸酐，并且混合物再攪拌10min。之后添加179mg(2.05mmol)嗎啉，5min后，除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌16h。在減壓下除去溶劑，并且殘余物溶于少許甲醇和使用乙腈和水梯度通過(guò)制備HPLC提純。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并且在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生104mg(理論的91％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.0(t，1H)，7.7(d，1H)，7.5(m，2H)，7.45(dd，1H)，7.35(dd，1H)，7.2(m，2H)，6.25(t，1H)，4.85(m，1H)，4.2(t，1H)，3.9(m，1H)，3.65(t，2H)，3.55(m，4H)，2.3-2.7(m，8H)，2.0(s，3H). LC-MS(方法3)Rt＝1.30min MS(ESIpos)m/z＝556(M+H+)+ 使用合適的胺，類似于實(shí)施例2制備下表的實(shí)施例。

實(shí)施例6 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲氧基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
19g(38mmol)實(shí)施例25A溶于1000ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃。在該溫度下，添加12.3g(115mmol)2，6-二甲基吡啶和16g(57mmol)三氟甲烷磺酸酸酐?；旌衔镌?78℃下攪拌1.5h，并且然后添加44g(383mmol)溶于250ml二氯甲烷和50ml N，N-二甲基甲酰胺的反式-4-氨基環(huán)己醇。除去冷卻，混合物在室溫下攪拌16h和然后在減壓下除去溶劑。殘余物溶于少量甲醇并使用乙腈和水梯度通過(guò)制備HPLC提純。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并且在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生15.2g(理論的73％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3，δ/ppm)δ＝7.72-7.52(m，1H)，7.50-7.37(m，2H)，7.32(dd，1H)，7.21(d，1H)，7.10(dd，1H)，6.92-6.84(m，2H)，6.20(t，1H)，4.81-4.66(m，1H)，4.10-3.95(m，1H)，3.87-3.66(m，6H)，3.64-3.50(m，2H)，2.95-2.84(m，2H)，2.78-2.68(m，2H)，2.52-2.41(m，1H)，1.98-1.78(m，5H)，1.33-1.05(m，4H). LC-MS(方法6)Rt＝1.40min MS(ESIpos)m/z＝602(M+H+)+ 使用適當(dāng)?shù)陌?，類似于?shí)施例6制備下表的實(shí)施例。

實(shí)施例9 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥基乙基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基-甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
14g(27mmol)實(shí)施例34A溶于660ml無(wú)水二氯甲烷并且冷卻到-78℃。在該溫度下，添加8.7g(81mmol)2，6-二甲基吡啶和13g(46mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下10min后，添加8.2g(135mmol)2-氨基乙醇，再過(guò)5min后除去冷卻，并且混合物然后在室溫下攪拌16h。在減壓下除去溶劑，并且殘余物溶于少量甲醇和使用乙腈和水梯度通過(guò)制備HPLC提純。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并且在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生11.1g(理論的73％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.71-7.65(m，2H)，7.62-7.55(m，1H)，7.40(dd，1H)，7.35(dd，1H)，7.28(d，1H)，7.20(d，1H)，6.25(t，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.42(t，1H)，4.27-4.08(m，3H)，3.94-3.88(m，1H)，3.63(t，2H)，3.45(dt，2H)，3.18(s，3H)，2.75-2.68(m，2H)，2.61-2.43(m，4H). LC-MS(方法6)Rt＝1.34min MS(ESIpos)m/z＝561(M+H+)+ 實(shí)施例10 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-(甲氧基甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
900mg(1.7mmol)實(shí)施例34A溶于42ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃。添加560mg(5.2mmol)2，6-二甲基吡啶和833mg(2.9mmol)三氟甲烷磺酸酸酐，并且混合物在-78℃下攪拌1.5h。添加1g(8.7mmol)反式-4-氨基環(huán)己醇，5min后除去冷卻并且混合物然后在室溫下攪拌18h?；旌衔镉盟投燃淄橄♂?，并分離掉有機(jī)相，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾和在減壓下蒸發(fā)。殘余物在少量甲醇中吸收并使用乙腈和水梯度通過(guò)制備HPLC提純。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生655mg(理論的61％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.71-7.65(m，2H)，7.62-7.55(m，1H)，7.40(dd，1H)，7.35(dd，1H)，7.27(d，1H)，7.20(d，1H)，6.25(t，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.44(d，1H)，4.27-4.07(m，3H)，3.93-3.83(m，1H)，3.62(t，2H)，3.18(s，3H)，2.76-2.65(m，2H)，2.57-2.48(m，2H)，2.36-2.27(m，2H)，1.84-1.72(m，4H)，1.19-1.06(m，2H)，1.03-0.91(m，2H). LC-MS(方法6)Rt＝1.68min MS(ESIpos)m/z＝615(M+H+)+ 使用適當(dāng)?shù)陌罚愃朴趯?shí)施例10制備下表的實(shí)施例。



實(shí)施例18 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{3-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]丙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
92.4mg(0.18mmol)實(shí)施例38A溶于4.5ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃，并添加67mg(0.55mmol)2，6-二甲基吡啶和78mg(0.28mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下1h后，添加106mg(0.920mmol)反式-4-氨基環(huán)己醇，除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌72h。添加2.5ml甲醇后，混合物攪拌5min和然后在減壓下除去溶劑。殘余物使用乙腈和0.2％濃度在水中的三氟甲烷磺酸梯度通過(guò)制備HPLC提純。這產(chǎn)生7.5mg(理論的7％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，8.37-8.21(m，2H)，7.70(d，1H)，7.58-7.47(m，2H)，7.45-7.36(m，2H)，7.22(d，1H)，7.20(d，1H)，6.32(dd，1H)，4.92-4.78(m，1H)，4.21(dd，1H)，4.00-3.48(m，4H)，3.41-3.30(m，1H)，2.98-2.85(m，2H)，2.02(s，3H)，2.00-1.91(m，2H)，1.88-1.80(m，4H)，1.37-1.15(m，6H). LC-MS(方法6)Rt＝1.45min MS(ESIpos)m/z＝601(M+H)+ 實(shí)施例19 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{3-[(2-羥基乙基)氨基]丙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
92.4mg(0.18mmol)實(shí)施例38A溶于4.5ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃，并添加67mg(0.55mmol)2，6-二甲基吡啶和78mg(0.28mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下1h后，添加112mg(1.84mmol)氨基乙醇，除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌72h。添加2.5ml甲醇后，混合物攪拌5min和然后在減壓下除去溶劑。殘余物使用乙腈和0.2％濃度在水中的三氟甲烷磺酸梯度通過(guò)制備HPLC提純。這產(chǎn)生14mg(理論的14％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，8.51-8.37(m，2H)，7.70(d，1H)，7.58-7.47(m，2H)，7.45-7.38(m，2H)，7.22(d，1H)，7.20(d，1H)，6.32(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.22(dd，1H)，3.95-3.50(m，7H)，3.05-2.89(m，4H)，2.02(s，3H)，1.93-1.82(m，2H). LC-MS(方法6)Rt＝1.45min MS(ESIpos)m/z＝546(M+H)+ 實(shí)施例20 5-氯-N-{[(5S)-3-{3-甲基-4-[2-氧代-3-{2-[(四氫呋喃-2-基甲基)氨基]乙氧基}吡啶-1(2H)-基]苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
在2ml無(wú)水1，2-二甲氧基乙烷中的80.0mg(153μmol)實(shí)施例46A，23mg(153μmol)碘化鈉和105μl(77.4mg，766μmol)1-(四氫呋喃-2-基)六亞甲基四胺在90℃下攪拌8小時(shí)。為了后處理，濃反應(yīng)溶液使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC精制。這產(chǎn)生60mg(理論的67％)產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.97(t，1H)，7.69(d，1H)，7.55-7.46(m，2H)，7.25-7.18(m，2H)，7.04(d，1H)，6.93(d，1H)，6.21(t，1H)，4.87(m，1H)，4.22(dd，1H)，3.97(m，2H)，3.90-3.81(m，2H)，3.72(m，2H)，3.66-3.55(m，3H)，2.90(m，2H)，2.62(d，2H)，2.01(s，3H)，1.95-1.80(m，3H)，1.57-1.96(m，1H). LC-MS(方法3)Rt＝1.45min MS(ESIpos)m/z＝587(M+H)+ 實(shí)施例21 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
在1.75ml無(wú)水1，2-二甲氧基乙烷中的70.0mg(134μmol)實(shí)施例46A，20.0mg(134μmol)碘化鈉和77.2mg(670μmol)反式-4-氨基環(huán)己醇在90℃下攪拌8小時(shí)。為了后處理，濃反應(yīng)溶液使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC精制。這產(chǎn)生57mg(理論的69％)產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.97(t，1H)，7.69(d，1H)，7.53-7.50(m，2H)，7.23-7.18(m，2H)，7.04(d，1H)，6.92(d，1H)，6.22(t，1H)，4.89-4.81(m，1H)，4.44(d，1H)，4.22(t，1H)，3.99-3.82(m，3H)，3.62(t，3H)，2.87(t，2H)，2.41-2.31(m，1H)，2.01(s，3H)，1.80(t，4H)，1.53(bs，1H)，1.19-0.93(m，4H). LC-MS(方法3)Rt＝1.41min MS(ESIpos)m/z＝601(M+H)+. 使用適當(dāng)?shù)陌罚愃朴趯?shí)施例21制備下表的實(shí)施例。




實(shí)施例34 5-氯-N-{[(5S)-3-(4-{3-[2-(4-羥基哌啶-1-基)乙氧基]-2-氧代吡啶-1(2H)-基}-3-甲基苯基)-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
88.0mg(175μmol)實(shí)施例45A溶于5ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃，并添加42μl(69.7mg，244μmol)三氟甲烷磺酸酸酐和56mg(524μmol)2，6-二甲基吡啶。在-78℃下攪拌一小時(shí)后，再滴加15μl(24.7mg，88μmol)三氟甲烷磺酸酸酐，并且混合物在該溫度下再攪拌半小時(shí)。在-78℃下，然后向反應(yīng)中加入180mg(1.74mmol)4-羥基哌啶，并且混合物再攪拌5分鐘，暖到室溫并在該溫度下攪拌過(guò)夜。為了后處理，反應(yīng)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮并且殘余物使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC提純兩次。這產(chǎn)生30.0mg(理論的29％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)8.96(t，1H)，8.15(s，1H)，7.69(d，1H)，7.55-7.46(m，2H)，7.25-7.15(m，2H)，7.04(d，1H)，6.93(d，1H)，6.21(t，1H)，4.86(m，1H)，4.22(dd，1H)，4.01(m，2H)，3.92-3.84(m，1H)，3.62(t，2H)，3.45(m，1H)，2.80(m，2H)，2.70(t，2H)，2.17(m，2H)，2.01(s，3H)，1.75-1.64(m，2H)，1.45-1.32(m，2H). LC-MS(方法3)Rt＝1.38min MS(ESIpos)m/z＝587(M+H)+ 實(shí)施例35 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-丙基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
開始向750μl 1，2-二甲氧基乙烷中加入30mg(54μmol)實(shí)施例58A，8.2mg(54μmol)碘化鈉和31.4mg(272μmol)反式-4-氨基己醇。反應(yīng)在90℃下攪拌8小時(shí)。為了后處理，反應(yīng)溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底濃縮并使用乙腈/水混合物通過(guò)制備RP-HPLC精制。這產(chǎn)生15.0mg(理論的41％)產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，methanol-d4，δ/ppm)7.61(dd，1H)，7.52(m，2H)，7.20(d，1H)，7.07(d，2H)，7.01(d，1H)，6.92(t，1H)，6.42(t，1H)，4.27(t，1H)，4.08(m，2H)，3.98(m，1H)，3.73(m，2H)，3.58-3.45(m，1H)，3.02(m，2H)，2.50(m，1H)，2.35(m，2H)，1.97(m，4H)，1.50(m，2H)，1.38-1.11(m，5H)，0.83(t，3H). LC-MS(方法8)Rt＝2.06min MS(ESIpos)m/z＝629(M+H)+ 實(shí)施例36 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥基乙基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3-丙基-苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
500mg(0.908mmol)實(shí)施例58A，142mg(0.954mmol)碘化鈉和277mg(4.54mmol)2-氨基乙醇溶于8ml 1，2-二甲氧基乙烷并在90℃下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)溶液濃縮和然后在100ml二氯甲烷和水中吸收并在RT下攪拌1h。相分離，并且含水相用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌和然后通過(guò)硫酸鈉干燥。濾掉干燥劑，并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/乙醇5∶1；添加0.1體積％乙基二甲基胺)。這產(chǎn)生241mg(理論的46％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.01(t，1H)，7.70(d，1H)，7.58-7.45(m，2H)，7.23-7.17(m，2H)，7.06(dd，1H)，6.95(dd，1H)，6.22(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.65-4.55(m，1H)，4.24(dd，1H)，4.10-3.85(m，3H)，3.62(dd，2H)，3.52-3.43(m，2H)，2.93(t，2H)，2.68(t，2H)，2.35-2.20(m，2H)，1.50-1.35(m，2H)，0.78(t，3H). HPLC(方法2)Rt＝4.00min MS(ESIpos)m/z＝575(M+H)+ 實(shí)施例37 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥基乙基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
100mg(0.20mmol)實(shí)施例65A溶于3ml無(wú)水二氯甲烷并且冷卻到-78℃，并添加64mg(0.59mmol)2，6-二甲基吡啶和84mg(0.29mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下1h后，添加121mg(1.99mmol)2-氨基乙醇，5min后除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌18h。然后在減壓下除去溶劑并且殘余物使用乙腈和0.3％濃度在水中的甲酸梯度通過(guò)制備HPLC提純兩次。這產(chǎn)生27mg(理論的25％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.01(t，1H)，8.30(s，1H)，7.70(d，1H)，7.46(d，1H)，7.41-7.34(m，2H)，7.31(d，1H)，7.19(d，1H)，6.33(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.20(dd，1H)，3.86(dd，1H)，3.61(t，2H)，3.54(t，2H)，2.94(t，2H)，2.81(t，2H)，2.72(t，2H)，1.96(s，6H). LC-MS(方法12)Rt＝1.22min MS(ESIpos)m/z＝545(M+H)+ 實(shí)施例38 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
100mg(0.20mmol)實(shí)施例65A溶于3ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃，并添加64mg(0.59mmol)2，6-二甲基吡啶和84mg(0.29mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下1h后，添加114mg(0.97mmol)反式-4-氨基己醇，5min后除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌18h。然后在減壓下除去溶劑并且殘余物使用乙腈和0.3％濃度在水中的甲酸梯度通過(guò)制備HPLC提純兩次。這產(chǎn)生15mg(理論的13％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.00(t，1H)，8.28(s，1H)，7.70(d，1H)，7.51-7.42(m，1H)，7.41-7.34(m，2H)，7.31(d，1H)，7.19(d，1H)，6.33(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.20(t，1H)，3.86(dd，1H)，3.64-3.55(m，2H)，3.52(dd，1H)，3.38-3.29(m，2H)，2.95-2.86(m，2H)，2.78(dd，1H)，2.74-2.60(m，3H)，1.96(s，6H)，1.94-1.75(m，2H)，1.20-1.10(m，3H)。該譜包含甲酸和/或標(biāo)題化合物的甲酸鹽的信號(hào)。
LC-MS(方法12)Rt＝1.24min MS(ESIpos)m/z＝599(M+H)+ 可選擇的合成1 600mg(1.19mmol)實(shí)施例65A溶于18ml無(wú)水二氯甲烷并冷卻到-78℃，并添加384mg(3.58mmol)2，6-二甲基吡啶和573mg(2.03mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-78℃下1h后，添加688mg(5.97mmol)反式-4-氨基己醇，5min后除去冷卻并且混合物在室溫下攪拌18h。然后在減壓下除去溶劑并且殘余物使用乙腈/0.1％濃度在水中的二異丙基乙胺1∶1混合物通過(guò)制備HPLC提純。這產(chǎn)生263mg(理論的36％)期望化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.70(d，1H)，7.48-7.33(m，3H)，7.25(d，1H)，7.19(d，1H)，6.28(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.44(d，1H)，4.20(t，1H)，3.86(dd，1H)，3.64-3.55(m，2H)，2.72(dd，2H)，2.64-2.50(m，3H)，2.35-2.23(m，1H)，1.96(s，6H)，1.82-1.71(m，4H)，1.20-0.89(m，4H). LC-MS(方法14)Rt＝0.83min MS(ESIpos)m/z＝599(M+H)+ 可選擇的合成2 39g(77mmol)實(shí)施例65A(可選擇的合成)溶于1.17l無(wú)水二氯甲烷并冷卻到60℃以下。首先，添加24.9g(233mmol)2，6-二甲基吡啶，然后滴加22.3ml(132mmol)三氟甲烷磺酸酸酐。在-70℃下15min后，然后在-50℃以下迅速地添加46.1g(388mmol)反式-4-氨基己醇在360ml二氯甲烷和360ml異丙醇中的溶液。混合物在干冰浴中攪拌15min，然后除去冷卻浴。3h后，在減壓下除去溶劑并且殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/甲醇/25％濃度氨溶液9∶1∶0.2)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分，除去溶劑并且通過(guò)在硅膠上層析再提純(二氯甲烷/甲醇/25％濃度氨溶液9∶1∶0.2)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并且在減壓下除去溶劑。為了除去仍然存在的任何甲醇，各添加130ml水兩次，然后在減壓下在50℃下除去溶劑，并且產(chǎn)物在高度真空下干燥。這產(chǎn)生34.1g(理論的73％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.98(t，1H)，7.70(d，1H)，7.48-7.33(m，3H)，7.25(d，1H)，7.19(d，1H)，6.28(dd，1H)，4.91-4.82(m，1H)，4.44(d，1H)，4.20(t，1H)，3.86(dd，1H)，3.64-3.55(m，2H)，2.72(dd，2H)，2.64-2.50(m，3H)，2.35-2.23(m，1H)，1.96(s，6H)，1.82-1.71(m，4H)，1.20-0.89(m，4H). 實(shí)施例39 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(反式-4-羥基環(huán)己基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
開始向3.5ml 1，2-二甲氧基乙烷中加入211mg(0.393mmol)實(shí)施例73A，62mg(0.41mmol)碘化鈉和226mg(1.97mmol)反式-4-氨基己醇。反應(yīng)在90℃下攪拌15小時(shí)。為了后處理，反應(yīng)溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中徹底濃縮和然后在二氯甲烷/水混合物中吸收并且在RT下攪拌10min。相分離后，含水相用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌。通過(guò)硫酸鈉干燥后，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析預(yù)提純(二氯甲烷/乙醇10∶1，添加1％乙基二甲基胺)。隨后使用乙腈/水混合物通過(guò)制備HPLC提純產(chǎn)生104mg(理論的43％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝8.99(t，1H)，7.61(dd，1H)，7.43-7.36(m，2H)，7.20(d，1H)，7.15-7.07(m，2H)，6.34(t，1H)，4.88-4.80(m，1H)，4.23-4.15(m，3H)，3.92-3.65(m，1H)，3.61(dd，4H)，3.40-3.31(m，3H)，3.13-3.03(m，1H)，2.07-1.95(m，2H)，1.96(s，6H)，1.88-1.80(m，2H)，1.41-130(m，2H)，1.23-1.12(m，2H). HPLC(方法2)Rt＝3.84min MS(ESIpos)m/z＝615(M+H)+ 實(shí)施例40 5-氯-N-{[(5S)-3-{4-[3-{2-[(2-羥基乙基)氨基]乙氧基}-2-氧代吡啶-1(2H)-基]-3，5-二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺
255mg(0.475mmol)實(shí)施例73A，74mg(0.50mmol)碘化鈉和145mg(2.38mmol)2-氨基乙醇溶于4.2ml 1，2-二甲氧基乙烷并在90℃下攪拌15小時(shí)。為了后處理，反應(yīng)溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底濃縮并且殘余物在100ml二氯甲烷/水混合物中吸收和在RT下攪拌10min。相分離后，含水相用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌。通過(guò)硫酸鈉干燥后，濾掉干燥劑并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上徹底除去溶劑。殘余物通過(guò)在硅膠上層析提純(二氯甲烷/乙醇10∶1-＞5∶1，添加1％乙基二甲基胺)。這產(chǎn)生168mg(理論的58％)期望產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ/ppm)δ＝9.07(t，1H)，7.78-7.72(m，1H)，7.41-7.35(m，2H)，7.20(d，1H)，7.08-7.02(m，2H)，6.31(dd，1H)，4.92-4.81(m，1H)，4.22-4.12(m，2H)，3.92-3.86(dd，1H)，3.63-3.56(m，4H)，3.40-3.27(m，3H)，3.23-3.17(m，2H)，2.97-2.92(m，2H)，1.96(s，6H). HPLC(方法2)Rt＝3.80min MS(ESIpos)m/z＝561(M+H)+ B.藥理學(xué)活性的評(píng)價(jià) 根據(jù)本發(fā)明的化合物對(duì)于治療血栓栓塞病的適合性可以利用以下試驗(yàn)體系證明 a)試驗(yàn)描述(體外) a.1)在緩沖液中因子Xa抑制的測(cè)定 為了測(cè)定因子Xa對(duì)于以上列出的物質(zhì)的抑制，構(gòu)建生物試驗(yàn)體系，其中因子Xa底物的轉(zhuǎn)化用于測(cè)定人因子Xa的酶活性。這里，因子Xa分解來(lái)自肽底物的氨基甲基香豆素，其通過(guò)熒光測(cè)定。測(cè)定在微量滴定板中進(jìn)行。
要試驗(yàn)的物質(zhì)以各種濃度溶于二甲基亞砜并在22℃下用人因子Xa(1.3nmol/l，溶于50mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩沖液(Tris-Puffer)[C，C，C-三(羥基甲基)氨基甲烷]，100mmol/l氯化鈉，5mmol/l氯化鈣，0.1％BSA[牛血清清蛋白]，pH 7.4)培養(yǎng)30min。然后添加底物(5μmol/l來(lái)自Bachem的Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC)。培養(yǎng)30min后，樣品在360nm波長(zhǎng)激發(fā)并且在460nm測(cè)定發(fā)射。具有試驗(yàn)物質(zhì)的試驗(yàn)批次的測(cè)定的發(fā)射與沒(méi)有試驗(yàn)物質(zhì)(在二甲基亞砜中僅僅二甲基亞砜，而無(wú)試驗(yàn)物質(zhì))的對(duì)照批次對(duì)比，并且由濃度/活性關(guān)系計(jì)算IC50值。
a.2)在緩沖液中凝血酶的測(cè)定 為了測(cè)定凝血酶對(duì)于以上列出的物質(zhì)的抑制，構(gòu)建生物試驗(yàn)體系，其中凝血酶底物的轉(zhuǎn)化用于測(cè)定人凝血酶的酶活性。這里，凝血酶分解來(lái)自肽底物的氨基甲基香豆素，其通過(guò)熒光測(cè)定。測(cè)定在微量滴定板中進(jìn)行。
要試驗(yàn)的物質(zhì)以各種濃度溶于二甲基亞砜并且在22℃下用人凝血酶(0.06nmol/l，溶于50mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩沖液[C，C，C-三(羥基甲基)氨基甲烷]，100mmol/l氯化鈉，0.1％BSA[牛血清清蛋白]，pH7.4)培養(yǎng)15min。然后添加底物(5μmol/l來(lái)自Bachem的Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC)。培養(yǎng)30min后，樣品在360nm波長(zhǎng)激發(fā)并且在460nm測(cè)量發(fā)射。具有試驗(yàn)物質(zhì)的試驗(yàn)批次的測(cè)定的發(fā)射與沒(méi)有試驗(yàn)物質(zhì)(在二甲基亞砜中僅僅二甲基亞砜，而無(wú)試驗(yàn)物質(zhì))的對(duì)照批次對(duì)比，并且由濃度/活性關(guān)系計(jì)算IC50值。
a.3)選擇性的測(cè)定 為了顯示該物質(zhì)相對(duì)于凝血酶和因子Xa抑制的選擇性，檢驗(yàn)試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)其它的人絲氨酸蛋白酶，例如因子XIIa，因子XIa，胰蛋白酶和胞漿素的抑制。為了測(cè)定因子XIIa(10nmol/l，來(lái)自Kordia)，因子XIa(0.4nmol/l，來(lái)自Kordia)，胰蛋白酶(83mU/ml，來(lái)自Sigma)和胞漿素(0.1μg/ml，來(lái)自kordia)的酶活性，溶解這些酶(50mmol/l三羥甲基氨基甲烷緩沖液[C，C，C-三(羥基甲基)氨基甲烷]，100mmol/l氯化鈉，0.1％BSA[牛血清清蛋白]，5mmol/l氯化鈣，pH 7.4)并在二甲基亞砜中用各種濃度的試驗(yàn)物質(zhì)和用沒(méi)有試驗(yàn)物質(zhì)的二甲基亞砜培養(yǎng)15min。然后通過(guò)添加適當(dāng)?shù)牡孜?對(duì)于因子XIIa 5μmol來(lái)自Bachem的H-Pro-Phe-Arg-AMC，對(duì)于胰蛋白酶5μmol/l來(lái)自Bachem的Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC，對(duì)于因子XIa 5μmol/l來(lái)自Bachem的Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC，對(duì)于胞漿素50μmol/l來(lái)自Bachem的MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC)開始酶促反應(yīng)。在22℃下30min培養(yǎng)時(shí)間后，測(cè)定熒光(激發(fā)360nm，發(fā)射460nm)。具有試驗(yàn)物質(zhì)的試驗(yàn)批次的測(cè)定的發(fā)射與沒(méi)有試驗(yàn)物質(zhì)(在二甲基亞砜中僅僅二甲基亞砜，而無(wú)試驗(yàn)物質(zhì))的對(duì)照批次對(duì)比，并由濃度/活性關(guān)系計(jì)算IC50值 a.4)在血漿樣品中潛在抑制劑的因子Xa-抑制活性的測(cè)定 為了測(cè)定在血漿樣品中因子Xa的抑制，在血漿中存在的因子X通過(guò)來(lái)自響尾蛇毒素的蛋白酶活化。然后通過(guò)添加顯色底物測(cè)定因子Xa活性或者它的通過(guò)潛在抑制劑的抑制。
各種濃度的要試驗(yàn)的物質(zhì)溶于二甲基亞砜并與refludan水溶液(10μg/ml)混合。在具有平底的透明96-孔板中，30μl檸檬酸鹽血漿(Octapharma)與10μl物質(zhì)稀釋液混合。然后，添加20μl響尾蛇毒素(Russel viper venom(RVV)；RVV試劑Pentapharm 121-06，最后濃度0.6mU)在氯化鈣水溶液緩沖液(氯化鈣的最后濃度0.05M)中的溶液或者20μl沒(méi)有RVV試劑的氯化鈣水溶液(氯化鈣的最后濃度0.05M)(作為對(duì)于未刺激的樣品的參考)。添加20μl ChromozymX底物(最后濃度1.6mmol/l，Bachem L-1565，在水中稀釋)后，樣品在20分鐘期間內(nèi)在使用具有405nm的檢測(cè)過(guò)濾器的SpectraFluor Reader中每分鐘測(cè)定。當(dāng)達(dá)到最大信號(hào)的大約70％時(shí)(大約12min)，測(cè)定IC50值。
來(lái)自該試驗(yàn)的代表性的活性數(shù)據(jù)在以下表1中列出 表1 a.5)在血漿樣品中潛在抑制劑的凝血酶-抑制活性的測(cè)定 各種濃度的要試驗(yàn)的物質(zhì)溶于二甲基亞砜并用水稀釋。在具有平底的白色96-孔板中，20μl物質(zhì)稀釋液與20μl ecarin溶液(ecarin試劑，來(lái)自Sigma E-0504，每批最后濃度20mU)在Ca緩沖液(200mMHepes+560mM氯化鈉+10mM氯化鈣+0.4％PEG)中或者與20μl Ca緩沖液(作為未刺激的對(duì)照)混合。此外，添加20μl熒光凝血酶底物(來(lái)自Bachem I-1120，最后濃度50μmol/l)和20μl檸檬酸鹽血漿(來(lái)自O(shè)ctapharma)并徹底均化。板在使用360nm的激發(fā)過(guò)濾器和465nm的發(fā)射過(guò)濾器的SpectraFluorplus Reader中在20分鐘期間內(nèi)每分鐘測(cè)定。當(dāng)達(dá)到最大信號(hào)的大約70％時(shí)(大約12min)，測(cè)定IC50值。
來(lái)自該試驗(yàn)的代表性的活性數(shù)據(jù)在以下表2中列出 表2 a.6)凝血酶生成試驗(yàn)(凝血酶生成圖) 在人血漿(

來(lái)自O(shè)ctapharma)中，在凝血酶生成圖(Thrombogramm)(根據(jù)Hemker的凝血酶生成試驗(yàn))上的試驗(yàn)物質(zhì)的作用體外測(cè)定。在根據(jù)Hemker的凝血酶生成試驗(yàn)中，在凝固血漿中的凝血酶的活性通過(guò)測(cè)定底物I-1140(Z-Gly-Gly-Arg-AMC，Bachem)的熒光分裂產(chǎn)物測(cè)定。來(lái)自Thrombinoscope的試劑(PPP試劑在HEPES中30pM重組組織因子，24μM磷脂)用于開始凝固反應(yīng)。反應(yīng)在變化濃度的試驗(yàn)物質(zhì)或者相應(yīng)溶劑存在的情況下進(jìn)行。此外，使用來(lái)自Thrombinoscope的凝血酶校準(zhǔn)器，需要其酰胺分解活性用于計(jì)算血漿樣品中的凝血酶活性。
試驗(yàn)根據(jù)制造商(Thrombinoscope BV)的技術(shù)要求(Herstellerangaben)進(jìn)行4μl試驗(yàn)物質(zhì)或者溶劑，76μl血漿和20μl PPP試劑或者凝血酶校準(zhǔn)器在37℃下培養(yǎng)5min。在20mM Hepes，60mg/ml BSA，102mM氯化鈣中添加20μl 2.5mM凝血酶底物后，在120min期間內(nèi)每20s測(cè)定凝血酶生成。測(cè)定使用來(lái)自Thermo Electron的裝有390/460nm成對(duì)過(guò)濾器和分配器的熒光計(jì)(Fluoroskan Ascent)進(jìn)行。使用Thrombinoscope軟件，計(jì)算凝血酶生成圖并圖解呈現(xiàn)。計(jì)算的是以下參數(shù)滯后時(shí)間，達(dá)峰時(shí)間，峰，ETP(內(nèi)生凝血酶潛力)和開端末端。
a.7)抗凝活性的測(cè)定 試驗(yàn)物質(zhì)的抗凝活性在人血漿，兔子血漿和大鼠血漿中體外測(cè)定。為此目的，使用作為接收劑的0.11摩爾濃度的檸檬酸鈉溶液以檸檬酸鈉/血1/9的混合比抽血。抽血后緊接著，徹底混合并在大約4000g離心15分鐘。移液管吸掉上清液。
在變化濃度的試驗(yàn)物質(zhì)或者相應(yīng)溶劑存在的情況下，使用商用試驗(yàn)盒(

來(lái)自Boehringer Mannheim或者

RecombiPlastin，來(lái)自Instrumentation Laboratory)測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT，同義詞凝血激酶時(shí)間，快速檢驗(yàn))。試驗(yàn)化合物用血漿在37℃下培養(yǎng)3分鐘。然后通過(guò)添加凝血激酶開始凝固，并測(cè)定當(dāng)凝固發(fā)生時(shí)的時(shí)間。測(cè)定影響凝血酶原時(shí)間加倍的試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。
在變化濃度的試驗(yàn)物質(zhì)或者相應(yīng)溶劑存在的情況下，使用商用試驗(yàn)盒(來(lái)自Roche的凝血酶試劑)測(cè)定凝血酶時(shí)間(TT)。試驗(yàn)化合物用血漿在37℃下培養(yǎng)3分鐘。然后通過(guò)添加凝血酶試劑開始凝固，并測(cè)定當(dāng)凝固發(fā)生時(shí)的時(shí)間。測(cè)定影響凝血酶時(shí)間加倍的試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。
在變化濃度的試驗(yàn)物質(zhì)或者相應(yīng)溶劑存在的情況下，使用商用試驗(yàn)盒(來(lái)自Roche的PTT試劑)測(cè)定活化的部分凝血激酶時(shí)間(APTT)。試驗(yàn)化合物用血漿和PTT試劑(腦磷脂，高嶺土)在37℃下培養(yǎng)3分鐘。然后通過(guò)添加25mM氯化鈣開始凝固，并測(cè)定當(dāng)凝固發(fā)生時(shí)的時(shí)間。測(cè)定影響APTT加倍的試驗(yàn)物質(zhì)的濃度。
a.8)血栓彈性描記法(凝血彈性圖) 血栓彈性描記法借助于來(lái)自Pentapharm的血栓彈性描記器ROTEM和它的附件，杯子和針進(jìn)行。測(cè)定在預(yù)先抽出到來(lái)自Sarstedt的檸檬酸鈉monovettes中的全血中進(jìn)行。在monovettes中的血使用振蕩器保持運(yùn)轉(zhuǎn)并且在37℃下預(yù)培養(yǎng)30min。制備氯化鈣在水中的2摩爾濃度儲(chǔ)備溶液。這用0.9％濃度的氯化鈉水溶液1∶10稀釋。為了測(cè)定，開始向杯子中加入20μl該200mM氯化鈣溶液(氯化鈣的最后濃度12.5mM)。添加3.2μl物質(zhì)或者溶劑。通過(guò)添加300μl全血開始測(cè)定。添加后，使用吸管的末端，混合物快速吸入吸管并且沒(méi)有生成氣泡地再次釋放。測(cè)定在2.5小時(shí)期間內(nèi)進(jìn)行或者當(dāng)纖維蛋白溶解開始時(shí)停止。為了評(píng)價(jià)，測(cè)定以下參數(shù)CT(凝固時(shí)間/[秒])，CFT(凝固形成時(shí)間/[秒])，MCF(最大凝固堅(jiān)固度(maximum clot firmness)/[mm])和α角[°]。每3秒鐘測(cè)定測(cè)量點(diǎn)并且圖解表示，y軸為MCF[mm]和x軸為時(shí)間[秒]。
a.9)血栓結(jié)合的凝血因子凝血酶和因子Xa的抑制 在用抗凝血?jiǎng)┑闹委熼_始前，在治療中斷期間或者不管治療，形成的血塊包含大量可幫助促進(jìn)血栓形成的凝血因子。這些凝血因子緊緊地與血栓結(jié)合并且不能被洗出。在某些臨床情況中，這可能導(dǎo)致患者的危險(xiǎn)。在以下進(jìn)行的試驗(yàn)中，在人血栓中可以顯示具有生物學(xué)(促凝血的)活性的凝血酶和因子Xa。
體外形成的血栓 由人血漿體外形成血栓并且檢查結(jié)合的凝血因子的凝血酶和因子Xa的活性。為此目的，300μl血漿與30μl脂小泡和30μl氯化鈣水溶液在48-孔MTP板中混合并培養(yǎng)30min。本步驟和以下步驟在37℃下進(jìn)行并且伴隨恒定攪拌(300rpm)。形成的血栓轉(zhuǎn)入新的48孔MTP板并在10min期間內(nèi)用0.9％濃度氯化鈉溶液洗滌兩次，血栓在洗滌步驟期間輕輕地抹在濾紙上。血栓轉(zhuǎn)入緩沖液B(Owens Veronal Buffer，1％BSA)并且培養(yǎng)15min，輕輕地抹在濾紙上并且在緩沖液B中在具有不同濃度的試驗(yàn)物質(zhì)中培養(yǎng)30min。然后凝塊按以上描述洗滌兩次。輕觸血栓并且轉(zhuǎn)入緩沖液D(240μl Owren’s Veronal Buffer，1％BSA和15.6mM氯化鈣)并且有或者沒(méi)有0.6μM凝血酶原地培養(yǎng)45min。反應(yīng)通過(guò)添加75μl 1％EDTA溶液停止。凝血酶活性分別在血栓中在緩沖液A(7.5mM Na2EDTAx2H2O，175mM氯化鈉，1％BSA，pH 8.4)中或者在來(lái)自上一步驟的上清液中測(cè)定。為此目的，底物I-1120以50μM的最后濃度使用，并且產(chǎn)生的熒光在熒光板閱讀器中測(cè)定(360/465nm)。
該結(jié)合血栓的凝血酶的活性不能通過(guò)選擇性因子Xa抑制劑以治療相關(guān)的濃度抑制。相反，它可以用雙重因子IIa/因子Xa抑制劑或者因子IIa參考抑制劑抑制。
添加凝血酶原后，如果存在結(jié)合血栓的因子Xa(凝血酶原酶配合物)，形成新的凝血酶，其通過(guò)熒光底物檢測(cè)。凝血酶的重新形成不能通過(guò)純凝血酶抑制因子預(yù)防；然而，它可以通過(guò)雙重因子IIa/因子Xa抑制劑或者通過(guò)選擇性因子Xa參考抑制劑抑制。
結(jié)合血栓的凝血酶活性的生物活性通過(guò)添加熒光標(biāo)記的纖維蛋白原檢驗(yàn)，該纖維蛋白原通過(guò)活性凝血酶轉(zhuǎn)變?yōu)檠w維蛋白并且與血栓結(jié)合。為此目的，按以上描述形成血栓并且在250μl用Alexa488標(biāo)記的纖維蛋白原溶液(100μg/ml)和30μl 100mM氯化鈣水溶液(有或者沒(méi)有各種濃度的試驗(yàn)物質(zhì))中培養(yǎng)。上清液的熒光在熒光板閱讀器中在合適的波長(zhǎng)下測(cè)定。此外，血栓在每一種情況下用15min洗滌四次并通過(guò)熒光顯微法評(píng)價(jià)。來(lái)自上清液的熒光的減少和血栓的熒光的增加可以通過(guò)雙重因子IIa/因子Xa抑制劑，而非通過(guò)因子Xa參考抑制劑抑制。
體內(nèi)形成的心內(nèi)血栓(患者材料) 用在心手術(shù)期間由病人左心室采集的血栓重復(fù)實(shí)驗(yàn)。為此目的，融化血栓并且分成片(濕重10-100mg)。取決于規(guī)程，重復(fù)洗滌后或者沒(méi)有洗滌地使用血栓，并類似于以上描述的方法使用底物I-1120(最后濃度100μM)測(cè)定凝血酶活性。
a.10)在內(nèi)毒素血癥(endotoxaemic)小鼠和大鼠中損害的凝固和器官功能的專門診斷 凝血酶/抗凝血酶配合物 凝血酶/抗凝血酶配合物(在下文稱為“TAT”)是對(duì)通過(guò)凝固激活內(nèi)源形成的凝血酶的測(cè)定。使用ELISA試驗(yàn)Enzygnost TAT micro，Dade-Behring)測(cè)定TAT。血漿由檸檬酸鹽血通過(guò)離心獲得。向50μ血漿中加入50μl TAT樣品緩沖液，并且樣品短暫振蕩和在室溫下培養(yǎng)15min。樣品伴隨抽吸濾掉，并且孔用洗滌緩沖液(300μl/孔)洗滌3次。在洗滌期間，液體通過(guò)輕敲板除去。添加共軛溶液(100μl)，并且板在室溫下培養(yǎng)15min。吸取樣品，并且孔用洗滌緩沖液(300μl/孔)洗滌3次。然后添加顯色底物(100μl/孔)，板在黑暗中在室溫下培養(yǎng)30min，添加停止溶液(100μl/孔)并且在492nm測(cè)定(Saphire板閱讀器)顏色進(jìn)展。
用于器官功能的參數(shù) 測(cè)定各種參數(shù)，其相對(duì)于不同內(nèi)臟的功能的限制通過(guò)服用LPS使得能夠得出結(jié)論并且其使得能夠估計(jì)試驗(yàn)物質(zhì)的治療效果。離心檸檬酸鹽血或者，如合適，鋰/肝素血，并且由血漿測(cè)定參數(shù)。一般地，測(cè)定以下參數(shù)肌酸酐，脲，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，總膽紅素，乳酸脫氫酶(LDH)，總蛋白，總清蛋白和纖維蛋白原。該值給出有關(guān)腎，肝，心血管系統(tǒng)和血管的功能的指征。
用于炎癥的參數(shù) 通過(guò)內(nèi)毒素引起的炎癥反應(yīng)的程度可以通過(guò)血漿中炎癥介質(zhì)，例如白細(xì)胞間介素(1，6，8和10)，腫瘤壞死因子α或者單核細(xì)胞趨化蛋白-1的增加檢測(cè)。為此目的，可以使用ELISAs或者luminex系統(tǒng)。
b)抗血栓活性的測(cè)定(體內(nèi)) b.1)動(dòng)靜脈分流和出血模型(混合模型大鼠(combi-model rat)) 使用Inactin(150-180mg/kg)麻醉具有300-350g重量的空腹雄大鼠(種HSD CPBWU)。在動(dòng)靜脈分流中根據(jù)Christopher N.Berry等，Br.J.Pharmacol.(1994)，113，1209-1214描述的方法開始形成血栓。為此目的，暴露左頸靜脈和右頸動(dòng)脈。通過(guò)體外的旁路，使用具有10cm長(zhǎng)度的聚乙烯管(PE 60)連接兩根血管。在中間，聚乙烯管再連接具有3cm長(zhǎng)度的包含排列形成環(huán)的粗糙尼龍線的聚乙烯管(PE 160)，以形成形成血栓的表面。體外循環(huán)維持15分鐘。然后除去旁路并且尼龍線同血栓一起立刻稱重。實(shí)驗(yàn)開始以前測(cè)定尼龍線自身的重量。
為測(cè)定出血時(shí)間，短路循環(huán)打開后，立刻通過(guò)使用刀片截短大鼠的尾巴的末端3mm。尾巴然后放入保持在37℃溫度的生理鹽水中并且在15min期間內(nèi)觀察來(lái)自切口的出血。測(cè)定的是直到出血停止至少30秒的時(shí)間(開始出血時(shí)間)，在15分鐘期間內(nèi)總出血時(shí)間(累計(jì)出血時(shí)間)和通過(guò)收集的血紅蛋白的光度測(cè)定的失血量。
體外循環(huán)建立和截短尾巴末端以前，當(dāng)醒覺時(shí)作為單一丸劑或者作為同隨后的連續(xù)的浸劑一起的丸劑，通過(guò)對(duì)側(cè)頸靜給動(dòng)物脈靜脈內(nèi)地服用或者使用咽管給動(dòng)物口服試驗(yàn)物質(zhì)。
c)溶解度試驗(yàn) 需要的試劑 ·PBS緩沖液pH 7.490.00g NaCl p.a.(例如Merck Art.No.1.06404.1000)，13.61g KH2PO4p.a.(例如Merck Art.No.1.04873.1000)和83.35g 1N NaOH(例如Bernd Kraft GmbH Art.No.01030.4000)稱重入1l量瓶，量瓶填充水并且混合物攪拌大約1小時(shí)。
·醋酸鹽緩沖液pH 4.65.4g乙酸鈉x 3H2O p.a.(例如Merck Art.No.1.06267.0500)稱重入100ml量瓶并溶于50ml水，添加2.4g冰醋酸，混合物用水補(bǔ)足到100ml，校驗(yàn)pH并且，如果需要，調(diào)整到pH 4.6。
·二甲基亞砜(例如Baker Art.No.7157.2500) ·蒸餾水 校準(zhǔn)溶液的制備 為校準(zhǔn)溶液的儲(chǔ)備溶液的制備大約0.5mg活性化合物精確稱重入2ml Eppendorf Safe-Lock管(Eppendorf Art.No.0030120.094)，DMSO添加到600μg/ml濃度(例如0.5mg活性化合物+833μl DMSO)并且渦旋混合物直到一切已經(jīng)溶解。
校準(zhǔn)溶液1(20μg/ml)向34.4μl儲(chǔ)備溶液中加入1000μl DMSO，并且均化混合物。
校準(zhǔn)溶液2(2.5μg/ml)向100μl校準(zhǔn)溶液1中加入700μl DMSO，并且均化混合物。
樣品溶液的制備 在PBS緩沖液pH 7.4中溶解度最高達(dá)10g/l的樣品溶液大約5mg活性化合物精確稱重入2ml Eppendorf Safe-Lock管(Eppendorf Art.No.0030120.094)，并且PBS緩沖液pH 7.4添加到5g/l濃度(例如5mg活性化合物+500μl PBS緩沖液pH 7.4)。
在醋酸鹽緩沖液pH 4.6中溶解度最高達(dá)10g/l的樣品溶液大約5mg活性化合物精確稱重入2ml Eppendorf Safe-Lock管(Eppendorf Art.No.0030120.094)，并且醋酸鹽緩沖液pH 4.6添加到5g/l濃度(例如5mg活性化合物+500μl醋酸鹽緩沖液pH 4.6)。
在水中溶解度最高達(dá)10g/l的樣品溶液大約5mg活性化合物精確稱重入2ml Eppendorf Safe-Lock管(Eppendorf Art.No.0030120.094)，并且添加水到5g/l濃度(例如5mg活性化合物+500μl水)。
實(shí)施 用這樣的方式制備的樣品溶液在20℃下在溫度可調(diào)振動(dòng)器(例如具有可拆卸部件Art.No.5362.000.019的Eppendorf Thermomixer comfortArt.No.5355000.011)中在1400rpm下振蕩24小時(shí)。在每一種情況下，由這些溶液取180μl并且轉(zhuǎn)入Beckman Polyallomer離心管(Art.No.343621)。這些溶液以大約223000*g離心1小時(shí)(例如具有類型42.2Ti轉(zhuǎn)子Beckman Optima L-90K超離心機(jī)，以42000rpm)。由每一樣品溶液，除去100μl上清液并且用各自使用的溶劑1∶5，1∶100和1∶1000稀釋(水，PBS緩沖液7.4或者醋酸鹽緩沖液pH 4.6)。由每一稀釋液，樣品轉(zhuǎn)入適合于HPLC分析的容器。
分析 樣品通過(guò)RP-HPLC分析。使用在DMSO中的試驗(yàn)化合物的兩點(diǎn)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行量化。溶解度用mg/l表示。
分析順序 1.校準(zhǔn)溶液2.5mg/ml 2.校準(zhǔn)溶液20μg/ml 3.樣品溶液1∶5 4.樣品溶液1∶100 5.樣品溶液1∶1000 用于酸的HPLC方法 具有DAD(G1315A)的Agilent 1100，計(jì)量泵(G1311A)，自動(dòng)取樣器CTC HTS PAL，脫氣裝置(G1322A)和柱恒溫箱(G1316A)；柱Phenomenex Gemini C18，50×2mm，5μ；溫度40℃；流動(dòng)相A水/磷酸pH 2；流動(dòng)相B乙腈；流速0.7ml/min；梯度0-0.5min85％A，15％B；坡度0.5-3min 10％A，90％B；3-3.5min 10％A，90％B；坡度3.5-4min 85％A，15％B；4-5min 85％A，15％B。
用于堿的HPLC方法 具有DAD(G1315A)的Agilent 1100，計(jì)量泵(G1311A)，自動(dòng)取樣器CTC HTS PAL，脫氣裝置(G1322A)和柱恒溫箱(G1316A)；柱VDSoptilab Kromasil 100C18，60×2.1mm，3.5μ；溫度30℃；流動(dòng)相A水+5ml高氯酸/l；流動(dòng)相B乙腈；流速0.75ml/min；梯度0-0.5min 98％A，2％B；坡度0.5-4.5min 10％A，90％B；4.5-6min10％A，90％B；坡度6.5-6.7min 98％A，2％B；6.7-7.5min 98％A，2％B。
d)藥效動(dòng)力學(xué)的測(cè)定(體內(nèi)) 為了測(cè)定體內(nèi)藥效動(dòng)力學(xué)，試驗(yàn)物質(zhì)溶于多種配制的組合物(例如血漿，乙醇，DMSO，PEG400，等)或者這些增溶劑的混合物并且給小鼠，大鼠，狗或者猴子靜脈內(nèi)或者經(jīng)口服用。靜脈內(nèi)服用或者作為快速濃注或者作為浸劑進(jìn)行。服用劑量是在0.1-5mg/Kg范圍。血樣通過(guò)導(dǎo)管或者作為犧牲血漿在最高達(dá)26h期間內(nèi)在不同的時(shí)間采集。此外，在一些情況下，也采集器官，組織和尿樣。在試驗(yàn)樣品中物質(zhì)的定量測(cè)定使用在所討論的基質(zhì)中調(diào)整的校準(zhǔn)樣品進(jìn)行。通過(guò)用乙腈或者甲醇沉淀除去在樣品中存在的蛋白質(zhì)。樣品然后使用在2300HTLC體系(CohesiveTechnologies，F(xiàn)ranklin，MA，美國(guó))中的反相柱通過(guò)HPLC分離。HPLC體系通過(guò)增壓渦輪離子噴射界面偶聯(lián)到API 3000 Triple Quadropole質(zhì)譜儀(Applied Biosystems，Darmstadt，德國(guó))。使用有效的動(dòng)力學(xué)分析程序分析血漿濃度時(shí)間過(guò)程。
物質(zhì)對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的親合力通過(guò)在溢流試驗(yàn)(flux assay)中的體外試驗(yàn)使用Caco-2細(xì)胞或者在專門的運(yùn)載體中過(guò)量表達(dá)的細(xì)胞檢驗(yàn)(Troutman MD，Thakker DR，Pharm.Res.20(8)1210-1224(2003)；Schwab D，F(xiàn)ischer H，Tabatabaei A，Poli S，Huwyler J，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)；Merino G，Jonker JW，Wagenaar E，Pulido MM，Molina AJ，Alvarez AI，Schinkel AH，Drug Metab.Dispos.33(5)614-618(2005))。為此目的，細(xì)胞在24-或者96-孔濾板上培養(yǎng)4-15天。為了測(cè)定滲透作用，頂端(A)或者基部(B)添加在HEPES緩沖液中的該物質(zhì)到細(xì)胞中，并且混合物培養(yǎng)2h。0h和2h后，樣品由順-和反-室(cis-and trans-compartment)采集并且通過(guò)LC-MS/MS分析。Papp值使用Schwab等公開的公式計(jì)算。當(dāng)Papp(B-A)/Papp(A-B)的比值是＞2或者＜0.5時(shí)物質(zhì)分為活性轉(zhuǎn)運(yùn)類。
e)內(nèi)毒素血癥(endotoxinaemia)活性的測(cè)定(體內(nèi)) 使用大鼠或者小鼠進(jìn)行檢驗(yàn)。在小鼠模型(NMRI，雄)中，LPS(大腸桿菌血清型055:B5，Sigma-Aldrich)腹內(nèi)注入50mg/kg。LPS注射前通過(guò)尾靜脈而靜脈內(nèi)地，皮下，腹內(nèi)服用或者使用胃管口服試驗(yàn)物質(zhì)最高達(dá)一小時(shí)。LPS服用后四小時(shí)，使動(dòng)物麻醉(Ketavet/Rompun)并且通過(guò)手術(shù)打開腹部。檸檬酸鈉溶液(3.2％w/v)(配方體重g/13次100μl)注射到下腔靜脈，并且30秒后采集血樣(大約1ml)。由血測(cè)定各種參數(shù)，例如細(xì)胞血成分(特別是紅血球，白血球和血小板)，乳酸鹽濃度，凝血激活(TAT)或者器官功能障礙或者器官衰竭的參數(shù)和死亡率。
f)用于大鼠身上DIC試驗(yàn)的方法的描述 雄威斯塔大鼠以250μg/kg劑量靜脈內(nèi)服用LPS(大腸桿菌O55B5，Sigma生產(chǎn)，溶于PBS)到尾靜脈(服用體積2ml/kg)。試驗(yàn)物質(zhì)溶于PEG 400/H2O 60％/40％并且LPS注射前30分鐘口服(服用體積5ml/kg)。LPS注射后1，5或者4小時(shí)，動(dòng)物通過(guò)刺穿以末端麻醉(terminalanaesthesia)的心抽血(Trapanal@100mg/kg i.p.)，并且獲得檸檬酸鹽血漿用于測(cè)定纖維蛋白原，PT，TAT和血小板數(shù)量。任選地，獲得血清用于測(cè)定肝酶，腎功能參數(shù)和細(xì)胞活素。使用可商購(gòu)的ELISAs(R&DSystems)測(cè)定TNFα和IL-6。
還可以測(cè)定器官功能的直接參數(shù)，例如左-和右-心室壓，動(dòng)脈壓，排尿，腎灌注液(kidney perfusion)和血?dú)夂退?堿狀況。
C.藥物組合物的實(shí)施例的實(shí)施方案 根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以以下方法轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬镏苿? 片劑 組合物 100mg根據(jù)本發(fā)明化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(國(guó)產(chǎn))，10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(來(lái)自BASF，Ludwigshafen，德國(guó))和2mg硬脂酸鎂。
片劑重量212mg。直徑8mm，曲率半徑12mm。
制備 本發(fā)明的化合物，乳糖和淀粉的混合物用在水中5％濃度的PVP溶液(m/m)造粒。干燥顆粒并且然后與硬脂酸鎂混合5分鐘。該混合物使用常規(guī)壓片機(jī)壓縮(對(duì)于片劑的形式參見上面)。作為指導(dǎo)，15kN的壓力用于壓縮。。
口服懸浮液 組合物 1000mg根據(jù)本發(fā)明化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg

(來(lái)自FMC的黃原膠，賓夕法尼亞，美國(guó))和99g水。
10ml口服懸浮液相當(dāng)于具有100mg根據(jù)本發(fā)明的化合物的單劑量。
制備 Rhodigel懸浮在乙醇中，并且向懸浮液中加入根據(jù)本發(fā)明的化合物。添加水，同時(shí)攪拌?；旌衔飻嚢璐蠹s6h直到Rhodigel的膨脹結(jié)束。
口服溶液 組合物 500mg根據(jù)本發(fā)明化合物，2.5g聚山梨酸酯和97g聚乙二醇400。20g口服溶液相當(dāng)于具有100mg根據(jù)本發(fā)明化合物的單劑量。
生產(chǎn) 根據(jù)本發(fā)明的化合物懸浮在聚乙二醇和聚山梨酸酯的混合物中，同時(shí)攪拌。繼續(xù)攪拌直到根據(jù)本發(fā)明的化合物完全溶解。
體內(nèi)溶液 根據(jù)本發(fā)明的化合物在生理可接受的的溶劑(例如等滲氯化鈉溶液，5％葡萄糖溶液和/或30％PEG 400溶液)中以低于飽和溶解度的濃度溶解。溶液通過(guò)過(guò)濾殺菌并且灌裝入無(wú)菌的和無(wú)熱原的注射容器。
權(quán)利要求
1.具有下式的化合物
其中
R1代表氯，三氟甲氧基，甲基，乙基，正-丙基，甲氧基，甲氧基甲基或者乙氧基甲基，
R2代表氫或者甲基，
和
R3代表具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
n代表數(shù)字1，2，3或者4，
m代表數(shù)字1或者2，
R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R5代表氫，甲基或者乙基，
或者
R4和R5連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)，
R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R7代表氫，甲基或者乙基，
R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，特征在于
R1代表氯，三氟甲氧基，甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基，
R2代表氫或者甲基，
和
R3代表具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
n是數(shù)字1，2或者3，
m代表數(shù)字1或者2，
R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R5代表氫，甲基或者乙基，
或者
R4和R5連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)，
R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R7代表氫，甲基或者乙基，
R6和R7連同它們連接的氮原子形成吡咯烷-1-基環(huán)，2-甲氧基甲基吡咯烷-1-基環(huán)，嗎啉-4-基環(huán)，1，1-二氧代硫代嗎啉-4-基環(huán)，1，4-氧代氮雜烷-4-基環(huán)，4-甲基哌嗪-1-基或者4-羥基哌啶-1-基環(huán)，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2的化合物，特征在于
R1代表甲基，乙基，正-丙基，甲氧基或者甲氧基甲基，
R2代表氫或者甲基，
和
R3代表具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
n是數(shù)字1，2或者3，
m代表數(shù)字1或者2，
R4代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R5代表氫，甲基或者乙基，
R6代表氫，甲基，乙基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，2-羥基乙-1-基，3-羥基丙-1-基，2-甲氧基乙-1-基，3-甲氧基丙-1-基，4-羥基環(huán)己-1-基，四氫呋喃-2-基甲基或者1，4-二噁烷-2-基甲基，
R7代表氫，甲基或者乙基，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)的化合物，特征在于
R1代表甲基或者甲氧基，
R2代表氫，
或者
R1代表甲基，
R2代表甲基，
和
R3代表具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
n代表數(shù)字2，
m代表數(shù)字1，
R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基，
R5代表氫，
R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基，
R7代表氫，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)的化合物，特征在于
R1代表甲氧基甲基，
R2代表氫，
或者
R1代表甲基，
R2代表甲基，
和
R3代表具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
n代表數(shù)字2，
R4代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基，
R5代表氫，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)的化合物，特征在于
R1代表甲基，
R2代表氫，
或者
R1代表甲基，
R2代表甲基，
和
R3表示具有下式的基團(tuán)
其中
*是與氧代吡啶環(huán)的連結(jié)點(diǎn)，
m代表數(shù)字1，
R6代表2-羥基乙-1-基或者4-羥基環(huán)己-1-基，
R7代表氫，
或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物。
7.制備根據(jù)權(quán)利要求1的具有式(I)的化合物或者一種它的鹽，它的溶劑化物或者它的鹽的溶劑化物的方法，特征在于
[A]具有下式的化合物
其中n，R1和R2具有在權(quán)利要求1中給出的意思，和
X代表羥基或者溴，
與具有下式的化合物反應(yīng)
其中R4和R5具有在權(quán)利要求1中給出的意思，
以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中n，R1，R2，R4和R5具有在權(quán)利要求1中給出的意思，
或者
[B]具有下式的化合物
其中m，R1和R2具有在權(quán)利要求1中給出的意思，和
Y代表羥基或者氯，
與具有下式的化合物反應(yīng)
其中R6和R7具有在權(quán)利要求1中給出的意思，
以產(chǎn)生具有下式的化合物
其中m，R1，R2，R6和R7具有在權(quán)利要求1中給出的意思。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物，用于治療和/或預(yù)防疾病。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防疾病的藥物的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防血栓栓塞病的藥物的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物用于預(yù)防體外血液凝固的應(yīng)用。
12.藥物，包含與惰性的、無(wú)毒的、藥學(xué)可接受的助劑結(jié)合的根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物。
13.包含與進(jìn)一步的活性化合物結(jié)合的根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物的藥物。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或者13的藥物，用于治療和/或預(yù)防血栓栓塞病。
15.使用抗凝有效量的至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物，權(quán)利要求12或者13的藥物或者根據(jù)權(quán)利要求9或者10獲得的的藥物治療和/或預(yù)防在人和動(dòng)物中的血栓栓塞病的方法。
16.預(yù)防體外血液凝固的方法，特征在于加入抗凝有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防肺高壓的藥物的應(yīng)用。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防膿毒癥，全身炎癥綜合征(SIRS)，膿毒性臟器功能障礙，膿毒性臟器衰竭和多臟器衰竭，急性呼吸困難綜合征(ARDS)，急性肺損傷(ALI)，膿毒性休克和/或DIC(彌漫性血管內(nèi)凝血)的藥物的應(yīng)用。
19.在權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)中定義的化合物，用于用來(lái)治療和/或預(yù)防血栓栓塞病的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的噁唑二酮，它們的制備方法，它們對(duì)于治療和/或預(yù)防疾病的應(yīng)用和它們對(duì)于制備用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是血栓栓塞病的藥物的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P7/00GK101821259SQ200880103129
公開日2010年9月1日 申請(qǐng)日期2008年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者S·阿勒海利根, M·鮑瑟, D·海姆巴赫, S·海特邁耶, M·J·格諾思, C·格德斯, G·馮德根費(fèi)爾德, S·羅里格, U·雷斯特, E·迪特里克-溫根羅思, U·薩特曼, A·特斯蒂根 申請(qǐng)人:拜耳先靈制藥股份公司