專利名稱：調(diào)節(jié)補體系統(tǒng)的激活以用于治療出血相關(guān)炎癥的制作方法
調(diào)節(jié)補體系統(tǒng)的激活以用于治療出血相關(guān)炎癥 與相關(guān)專利申請的參考本專利申請要求分別于2007年3月6日和2007年3月7日提交的美國 臨時專利申請?zhí)?0/905， 178和60/905， 356的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，所述專利文 獻(xiàn)整體通過提及而合并入本文。發(fā)明背景血友病A的發(fā)生比率據(jù)估計為在IO， OOO個男性中出現(xiàn)1個，而血友 病B的發(fā)生比率為在25， OOO個男性出現(xiàn)l個。血友病的主要并發(fā)癥是在 關(guān)節(jié)中的關(guān)節(jié)內(nèi)出血。超過90。/。的具有嚴(yán)重血友病的患者將會具有關(guān)節(jié) 出血，除非在年輕時提供凝血因子替代作為預(yù)防。平均來說，嚴(yán)重血 友病患者每年將會經(jīng)歷17次關(guān)節(jié)出血。反復(fù)的關(guān)節(jié)出血導(dǎo)致血友病性 滑膜炎。目前的療法包括用凝血因子vni進(jìn)行預(yù)防，然而，替代療法必須 在年輕時開始，以便阻止滑膜炎的發(fā)展。當(dāng)替代失敗，或者受試者變得對此類替代具有抵性時，采用按需療法(on-demand therapies)。 此類療法包括施用鎮(zhèn)痛藥例如C0X-2抑制劑和水袋，隨后為滑膜切除術(shù) 和最終為全關(guān)節(jié)置換術(shù)。上述療法中沒有一種減輕與出血相關(guān)的炎癥 性損害，并且此外，關(guān)于由C0X-2抑制劑介導(dǎo)的心血管風(fēng)險的關(guān)注導(dǎo)致 C0X-2抑制劑撤出了市場。用于治療與出血相關(guān)的關(guān)節(jié)炎癥的備選和/ 或改良的治療方法可能對于這些和其他患者將會具有顯著的益處。發(fā)明概述本文所描述的發(fā)明提供了幾種用于治療出血相關(guān)炎癥例如滑膜炎 的新方法，在此類治療中有用的組合物，以及相關(guān)的方法和組合物。 在第一個示例性的方面，本發(fā)明提供了用于在有此需要的哺乳動物受 試者中治療滑膜炎、減少滑膜炎的發(fā)生率、減少滑膜炎的嚴(yán)重度、或 者延遲滑膜炎的發(fā)作的方法，所述方法包括給受試者施用有效量的取 消或減少所述受試者中補體途徑的激活的試劑(即，"補體途徑激活調(diào)節(jié)劑(complement pathway activation modulating agent)"， 其也可以稱為"CPAMA"或CPAM試劑；如果在本文中使用術(shù)語"試劑"， 那么它一般指的是CPAMA，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛 盾)。在相關(guān)意義中，本發(fā)明提供了此類試劑在治療滑膜炎或其他出 血相關(guān)炎癥中的用途，并且還提供了此類試劑在制備用于治療此類病 狀的藥物中的用途。在另一個意義中，本發(fā)明提供了包含CPAMA的產(chǎn)品 (例如藥學(xué)上可接受的組合物)，所述產(chǎn)品用于治療滑膜炎(例如血 友病性滑膜炎)或其他出血相關(guān)炎癥(其可以包括或不包括滑膜炎)。 在一個實施方案中，待通過上述用途/方法進(jìn)行治療的受試者患有 血友病(其可以是血友病A或血友病B或兩者)。在另一個方面，受試 者還或者備選地患有另一種出血病癥。在另一個方面，患者可以患有 出血相關(guān)炎癥，其可以包括或不包括血友病性滑膜炎或滑膜炎(一般 地)。在一個具體的實施方案中，所述CPAM試劑是生物學(xué)試劑(或生物 分子一 —例如蛋白質(zhì)、糖蛋白、聚糖、核酸、脂質(zhì)等，其在生物體中 天然產(chǎn)生，或者是此類分子的變體或衍生物)，該試劑在一個實施方 案中是抗體。在一個更具體的實施方案中，所述CPAM試劑是特異性地 與C5a受體(C5aR)的胞外環(huán)相互作用的抗體。在一個實施方案中，所 述CPAM抗體還或者備選地特異性地抑制或取消C5a與其關(guān)聯(lián)(cognate ) 受體的結(jié)合。在一個具體的示例性實施方案中，所述CPAM抗體由具有 ECACC登錄號00110609、 02090226或02090227,或ATCC登錄號HB 11382、 HB 11384或HB-11625的雜交瘤產(chǎn)生。因此，本發(fā)明還提供了此類試劑 在治療此類病狀中和在制備用于治療此類病狀的藥物中的用途。本發(fā)4明還提供了包含任何這些試劑的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品用于治療滑膜炎或出 血相關(guān)炎癥(其可以包括或不包括滑膜炎)。在另一個實施方案中，所述試劑是寡肽，其一般限于非抗體肽、 多肽或蛋白質(zhì)(或其衍生物)。在一個實施方案中，所迷試劑是小分子化合物。通常，在本發(fā)明 的情況下的小分子化合物(或在用于鑒定在實踐本文所描述的本發(fā)明方法中有用的化合物的方法情況下的候選試劑)是具有大于約100道爾 頓且小于約2， 500道爾頓的分子量的非肽小有機(jī)化合物。此類小分子化 合物/小分子候選試劑通常包含關(guān)于與蛋白質(zhì)(例如C5a和/或C5aR )的 結(jié)構(gòu)相互作用(例如通過氫鍵鍵合)而言所需的官能團(tuán)，并且通常至 少包括胺基團(tuán)、羰基、羥基和/或羧基，和一般包括這些官能團(tuán)中的至 少兩種。此類小分子化合物通常還包含環(huán)狀碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳香族 或多芳香族結(jié)構(gòu)，其常常被一個或多個上述官能團(tuán)取代。小分子還或 備選地可以特別選自糖、脂肪酸、類固醇、嘌呤、嘧啶以及任何前述 物質(zhì)的衍生物、結(jié)構(gòu)類似物或組合。合適的小分子化合物通常是有機(jī) 分子，優(yōu)選具有大于100道爾頓且小于約2， 500道爾頓的分子量的小有 機(jī)化合物，其包含至少一個胺基團(tuán)、羰基、羥基和/或羧基，并且包含 環(huán)狀碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)。在一個具體的示例性實施方案中，所述CPAM小分 子試劑選自N- ((4-二甲基氨基苯基)甲基)-N- (4-異丙基苯基)-7-甲氧 基-1， 2, 3， 4-四氫萘-1-曱酰胺鹽酸化物、R (-) -2- [4'-異丁基苯基)-丙?；被鵠-l，l-二甲基哌啶錯碘化物、([R]-2-(4-異丁基-苯 基)-N-(3-哌咬-l-基-丙基)-丙酰胺和3-芳基-5， 6-二取代的噠溱，或 者任何前述物質(zhì)的組合(這個短語自始至終也應(yīng)當(dāng)理解為包括所有前 迷物質(zhì)的組合)。在另一個方面，所述CPAM小分子化合物是在例如WO 2006128670中所描述的C5aR的苯基氨基化合物拮抗劑。在一個實施方案中，所述方法進(jìn)一步包括給受試者施用止血劑，例如凝血因子，其在某些實施方案中是凝血因子xin、凝血因子IX、 凝血因子vn、凝血因子vni、纖維蛋白原，或者任何前述物質(zhì)的生物 學(xué)活性片段、任何前述物質(zhì)的功能性變體或任何前述物質(zhì)的衍生物，5或者任何前述物質(zhì)的組合。在一個示例性實施方案中，所述方法進(jìn)一試劑，所述試劑在一個實施方案中是編碼所述凝血因子的核酸，所述試劑在另一個實施方案中編碼凝血因子XIII、凝血因子IX、凝血因子vn、凝血因子vin、纖維蛋白原、凝血酶或蛋白質(zhì)抗纖維蛋白溶解劑 (例如抑酶肽)，或者前述物質(zhì)的衍生物或變體、或任何前述物質(zhì)的 的組合。CPAM試劑可以以任何合適的方式取消或減少任何合適的補體途徑 的激活。在一個實施方案中，所述CPAM試劑取消或減少C5a表達(dá)、C5a 與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或任何前述內(nèi)容的組合。在一個實施方案中，所述CPAM試劑作為藥物組合物的一部分進(jìn)行 施用，所述藥物組合物在一個實施方案中被配制成用于口服、關(guān)節(jié)中 (局域性的)、靜脈內(nèi)、皮下或局部施用。因此，在一個示例性實施 方案中，本發(fā)明提供了此類藥物組合物，其中所述組合物被配制為可 注射制劑。本發(fā)明的方法一般可以用于治療任何類型的滑膜炎。在一個實施 方案中，滑膜炎是急性的，或者在另一個實施方案中，滑膜炎是慢性 的。在另外一個實施方案中，滑膜炎是急性前期的(pre-acute)。包 含此類試劑的組合物可以被指明在這些適應(yīng)癥中的一種或多種之中使 用，并且所述方法通過在使用此類組合物用于此類目的方面對患者、 保健提供者等進(jìn)行教導(dǎo)而促進(jìn)包含此類試劑的組合物的銷售和使用。在另一個方面，本發(fā)明提供了用于在有此需要的受試者中治療出 血相關(guān)炎癥(其可以包括或不包括滑膜炎，并且更特別地可以排除普 遍地與血友病或者與一種類型的血友病(例如血友病A)相關(guān)的滑膜 炎)、減少出血相關(guān)炎癥的發(fā)生率、減少出血相關(guān)炎癥的嚴(yán)重度、或 延遲出血相關(guān)炎癥的發(fā)作(或進(jìn)展)的方法，所述方法包括給受試者施用有效量的取消或減少所述受試者中補體途徑的激活的試劑(即 CPAMA)。在另一個方面，本發(fā)明提供了新的藥物組合物，其可以例如用于6治療任何上述病癥/病狀。在一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了藥 物組合物，其包含有效量的取消或減少補體途徑的激活的試劑，例如
上述抗體之一 (例如本文其他地方所描述的抗C5a抗體之一)，以及凝 血因子或其他止血劑(例如，去氨加壓素(DDAVP)或抗纖維蛋白溶解 劑例如氨甲環(huán)酸和氨基己酸)。
在另一個方面，本發(fā)明提供了抑制或減少C5a受體(C5aR)的激活 的試劑用于治療滑膜炎的用途?；ぱ卓梢允羌毙缘摹?隄性的或亞急 性的(并且可以與一種或多種類型的血友病相關(guān))。在一個不同的方 面，本發(fā)明提供了此類試劑在制備用于治療滑膜炎的藥物中的用途。 在另一個具體的方面，所述試劑是對于C5aR特異的抗體。在另一個方 面，所述試劑還或者備選地用作用于在具有血友病的患者中治療滑膜 炎的藥物。在一個具體方面，所述試劑是抗體，所述抗體由下述雜交 瘤表達(dá)，或者包含由下述雜交瘤表達(dá)的抗體的功能性部分具有ECACC 登錄號00110609、 02090226或02090227,或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384或HB-11625的雜交瘤。本發(fā)明還提供了包含此類試劑的產(chǎn)品(例 如，藥學(xué)上可接受的組合物)，所述產(chǎn)品用于治療此類病狀(在具有 此類病狀或處于形成此類病狀的危險中的患者之中)。
在另一個方面，本發(fā)明提供了 (a)取消或減少C5aR的激活的試劑 和(b)凝血因子或止血因子的組合用于治療滑膜炎的用途。本發(fā)明還 提供了包含此類要素組合的組合物。在一個具體方面，所述凝血因子 或止血因子選自凝血因子XIII、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、 凝血因子VII、凝血因子VIII、纖維蛋白原、凝血酶、任何前述物質(zhì)的 變體、任何前述物質(zhì)的衍生物、以及任何前述物質(zhì)的組合。
本發(fā)明還提供了抑制或減少C5aR的激活的試劑用于治療滑膜炎， 用于治療出血相關(guān)炎癥的用途。在一個方面，所述試劑是對于C5aR特 異的抗體。在另一個方面，所述試劑還或者備選地特異性地結(jié)合C5aR 的胞外環(huán)。在一個示例性方面，所述試劑是抗體，所述抗體由下述雜 交瘤表達(dá)(或等價于由下述雜交瘤表達(dá)的抗體)，或者包含由下述雜 交瘤表達(dá)的抗體的功能性部分(例如CDRs)，或者基本上由下述雜交瘤表達(dá)的抗體組成具有ECACC登錄號00110609 、 02090226或 02090227，或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384或HB-11625的雜交瘤。 本發(fā)明還提供了此類抗體在治療出血相關(guān)炎癥和更特別地(或備選地) 滑膜炎例如血友病性滑膜炎中的用途(以及此類試劑在制備用于此類 病狀的藥物中的用途)。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含有效量的 取消或減少補體途徑的激活的CPAM試劑，和編碼凝血因子或其他止血 劑的核酸。
在一個實施方案中，在所述藥物組合物中的CPAM試劑是生物學(xué)試 劑(或"生物分子")，其在一個實施方案中是抗體，或在另一個實 施方案中是寡肽。在另一個實施方案中，所述凝血因子是凝血因子 VIII、凝血因子IX、凝血因子VII、凝血因子X、凝血因子XI、任何前 述物質(zhì)的活性片段、任何前述物質(zhì)的變體、或任何前述物質(zhì)的衍生物。
在另一個實施方案中，在所述藥物組合物中的CPAM試劑取消或減 少C5a表達(dá)、C5a與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或者任何或所 有前述內(nèi)容的組合。
在另外一個實施方案中，所述藥物組合物被配制成用于口服、靜 脈內(nèi)、皮下或局部施用，或者在另一個實施方案中，所述藥物組合物
:陂配制為可注射制劑。
這些方面和實施方案在該文件中所提供的本發(fā)明描述之中進(jìn)一步 進(jìn)行描述，并且本發(fā)明的另外方面、實施方案、特征和優(yōu)點(例如， 通過使用具有本文所描述的試劑的特征的測試候選物，來鑒定在上述 治療方案中有用的試劑或試劑組合的方法)將會由于在該文件中所提 供的本發(fā)明描述而顯而易見。
本發(fā)明的示例性方面和特征
為了更好地舉例說明本文所描述的發(fā)明，此處提供了本發(fā)明的示
例性方面和特征的非限制性列表
1.在有此需要的受試者中治療滑膜炎、減少滑膜炎的發(fā)生率、減
8少滑膜炎的嚴(yán)重度、或者延遲滑膜炎的發(fā)作或延遲滑膜炎的進(jìn)展的方 法，所述方法包括給受試者施用有效量的取消或減少所述受試者中補 體途徑的激活的試劑。
2. 根據(jù)方面l的方法，其中所述受試者患有血友病。
3. 根據(jù)方面1或方面2的方法，其中所述試劑是抗體。
4. 根據(jù)方面3的方法，其中所述抗體特異性地與C5a受體(C5aR) 的胞外環(huán)相互作用。
5. 根據(jù)方面3或方面4的方法，其中所述抗體特異性地抑制或取消 C5a與其關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合。
6. 根據(jù)方面4的方法，其中所述抗體由具有ECACC登錄號 00110609、 02090226或02090227，或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384 或HB-11625的雜交瘤產(chǎn)生。
7. 根據(jù)方面l-6中任一項的方法，其進(jìn)一步包括給所述受試者施 用有效量的凝血因子或其他止血因子。
8. 根據(jù)方面7的方法，其中所述因子是凝血因子XIII、凝血因子 IX、凝血因子X、凝血因子XI、凝血因子VII、凝血因子vin、纖維蛋 白原、凝血酶、任何前述物質(zhì)的變體、或任何前述物質(zhì)的衍生物、或 任何前述物質(zhì)的組合。
9. 根據(jù)方面l-8中任一項的方法，其中所述試劑取消或減少C5a 表達(dá)、C5a與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。
10. 根據(jù)方面l-9中任一項的方法，其中所述試劑作為藥物組合物 的一部分進(jìn)行施用。
11. 根據(jù)方面10的方法，其中所述藥物組合物被配制成用于靜脈 內(nèi)、皮下或關(guān)節(jié)中(局域性的)施用。
12. 根據(jù)方面10的方法，其中所述藥物組合物被配制為可注射制劑。
13. 根據(jù)方面1-12中任一項的方法，其中所述滑膜炎是急性的或 亞急性的。
14. 在有此需要的受試者中治療出血相關(guān)炎癥、減少出血相關(guān)炎
9癥的發(fā)生率、減少出血相關(guān)炎癥的嚴(yán)重度、或者延遲出血相關(guān)炎癥的 發(fā)作或進(jìn)展的方法，所述方法包括給受試者施用有效量的取消或減少 所述受試者中補體途徑的激活的試劑。
15. 根據(jù)方面14的方法，其中所述試劑是抗體。
16. 根據(jù)方面15的方法，其中所述抗體特異性地與C5a受體(C5aR) 的胞外環(huán)相互作用。
17. 根據(jù)方面15或方面16的方法，其中所述抗體特異性地抑制或 取消C5a與其關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合。
18. 根據(jù)方面16的方法，其中所述抗體由具有ECACC登錄號 00110609、 02090226或02090227，或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384 或HB-11625的雜交瘤產(chǎn)生。
19. 根據(jù)方面14-18中任一項的方法，其進(jìn)一步包括給所述受試者
施用有效量的凝血因子或其他止血因子。
20. 根據(jù)方面19的方法，其中所述凝血因子是凝血因子XIII、凝 血因子IX、凝血因子VII、凝血因子X、凝血因子XI、凝血因子VIII、 纖維蛋白原、凝血酶、或任何前述物質(zhì)的變體、或任何前述物質(zhì)的衍 生物、或4壬4可前述物質(zhì)的組合。
21. 根據(jù)方面14-19中任一項的方法，其中所述試劑取消或減少 C5a表達(dá)、C5a與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。
22. 根據(jù)方面14-21中任一項的方法，其中所述試劑作為藥物組合 物的一部分進(jìn)行施用。
23. 用于治療出血相關(guān)炎癥的藥物組合物，其包含有效量的(a)
組合:、''''，'、' -,、
24. 根據(jù)方面23的藥物組合物，其中所述試劑是單克隆抗體或活 性抗體片段。
25. 根據(jù)方面24的藥物組合物，其中所述抗體特異性地與C5a受體 (C5aR)的胞外環(huán)相互作用。
26. 根據(jù)方面24或方面25的藥物組合物，其中所述抗體特異性地
10抑制或取消C5a與其關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合。
27. 根據(jù)方面25的藥物組合物，其中所述抗體由具有ECACC登錄號 00110609、 02090226或02090227'或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384 或HB-11625的雜交瘤產(chǎn)生。
28. 根據(jù)方面23-27中任一項的藥物組合物，其中所述凝血因子是
凝血因子xni、凝血因子ix、凝血因子vn、凝血因子vni、纖維蛋白 原、或任何前述物質(zhì)的變體、或任何前述物質(zhì)的衍生物、或4壬何前述 物質(zhì)的組合。
29. ;f艮據(jù)方面23-28中任一項的藥物組合物，其中所述試劑取消或 減少C5a表達(dá)、C5a與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。
30. 根據(jù)方面23-29中任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物 被配制成用于皮下、靜脈內(nèi)或關(guān)節(jié)中(局域性的)施用。
31. 根據(jù)方面23-30中任一項的藥物組合物，其中所述藥物組合物 被配制為可注射制劑。
這些方面在本文所提供的本發(fā)明描述中更充分地進(jìn)行描述，并且 本發(fā)明的另外方面、特征和優(yōu)點將會由于本文所提供的本發(fā)明描述而 顯而易見。
附圖簡述
在說明書的結(jié)論部分中特別指出被視為本發(fā)明的主題，并且在那 里明確要求進(jìn)行保護(hù)。然而，當(dāng)與附圖一起閱讀時，通過參考下面的 詳細(xì)描述可以最好地理解本發(fā)明，其中涉及組織構(gòu)成和操作方法以及 其目標(biāo)、特征和優(yōu)點，在所述附圖中
圖l呈現(xiàn)了人正?；そM織中C5aR表達(dá)的顯微照片。顯示了用 W17/1 (B)以及用IgG對照(A)探測的人滑膜的免疫組織化學(xué)。
圖2呈現(xiàn)了顯微照片，其顯示了在免疫測定法中通過抗人C5aRl抗 體對人骨關(guān)節(jié)炎滑膜進(jìn)行染色。
圖3呈現(xiàn)了顯微照片，其顯示了在免疫測定法中通過抗人C5aRl抗體對人血友病性滑膜炎組織進(jìn)行染色。
發(fā)明詳述
在下面的詳細(xì)描述中，闡述了眾多具體細(xì)節(jié)，以便提供對于本發(fā) 明的徹底理解。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，本發(fā)明可以無需這 些具體細(xì)節(jié)而進(jìn)行實踐。在其他情況下，未詳細(xì)描述眾所周知的方法、 操作程序和組分，以便不使本發(fā)明含糊不清。
在某些實施方案中，本發(fā)明旨在用于在有此需要的受試者中治療 和/或預(yù)防對于動關(guān)節(jié)(滑膜關(guān)節(jié))的損害，或出血相關(guān)炎癥，或兩者 的組合物和/或方法(以及還有此類組合物在治療此類病狀或者在制備 用于治療此類病狀的藥物中的用途)。
在某些實施方案中，滑膜炎應(yīng)當(dāng)理解為包括任何病因?qū)W的關(guān)節(jié)的 滑膜或關(guān)節(jié)軟骨的任何炎癥。在某些實施方案中，滑膜炎或關(guān)節(jié)病可 以具有自身免疫病因?qū)W、炎癥、創(chuàng)傷或其他，它們中的任何都代表了 本發(fā)明的實施方案。在某些實施方案中，滑膜炎是外傷性滑膜炎、滑 膜的炎癥、或?qū)τ陉P(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)軟骨的損害。在某些實施方案中，滑膜 炎是血友病性滑膜炎。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療的組合物，其可以包 括被特別配制用于關(guān)節(jié)內(nèi)和/或腸胃外使用，用于在例如治療和/或預(yù) 防滑膜炎和/或?qū)τ陉P(guān)節(jié)軟骨的損害中使用，例如用于手術(shù)后關(guān)節(jié)灌洗
或者治療和/或預(yù)防炎性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎(OA)和/或退行性關(guān)節(jié)病 (DJD)的組合物。使用此類組合物的此類具體方法是本發(fā)明的另外方 面。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于在有此需要的受試者中治 療滑膜炎、減少滑膜炎的發(fā)生率、減少滑膜炎的嚴(yán)重度、或者延遲滑 膜炎的發(fā)作或進(jìn)展的方法，所述方法包括給受試者施用有效量的取消 或減少所述受試者中補體途徑的激活的試劑。
在一個方面，本發(fā)明涉及治療一種或多種與出血相關(guān)炎癥有關(guān)的
12疾病、病癥或病狀的方法。在一個實施方案中，術(shù)語"治療"包括預(yù) 防性的以及病癥緩解性的治療。在某些實施方案中，術(shù)語"治療"包 括"減少"、"阻抑，，和"抑制"疾病、病癥和/或病狀，或與之相關(guān) 的癥狀。在某些實施方案中，術(shù)語"減少"、"阻抑，，和"抑制"具 有其通常理解的含義，即在另一個實施方案中變少或降低疾病、病癥 或病狀的發(fā)生率、嚴(yán)重度或發(fā)病機(jī)制，或者在另一個實施方案中延遲 疾病、病癥或病狀的發(fā)生率、嚴(yán)重度或發(fā)病機(jī)制，或者在另一個實施 方案中減少疾病、病癥或病狀的發(fā)生率、嚴(yán)重度或發(fā)病機(jī)制。在實施 方案中，術(shù)語治療是指延遲的與疾病、病癥或病狀相關(guān)的癥狀的進(jìn)展， 延長的與疾病、病癥或病狀相關(guān)的癥狀的緩解，減少的與疾病、病癥 或病狀相關(guān)的癥狀的發(fā)生率，和/或與疾病、病癥或病狀相關(guān)的癥狀的 改善。在一個實施方案中，術(shù)語"治療"、"減少"、"阻抑"或"抑 制"是指與所示疾病、病癥或病狀相關(guān)的發(fā)病率、死亡率或其組合的 減少。關(guān)于本發(fā)明的治療方法的這些術(shù)語和類似概念可以從個體方面 進(jìn)行評估，或者更通常地就具有相關(guān)病狀的個體群體，例如具有通過 臨床試驗所確定的病狀的大多數(shù)患者來說進(jìn)行評估。在一個實施方案 中，關(guān)于疾病或病狀而言，術(shù)語"進(jìn)展"是指范圍或嚴(yán)重度的增加、 前進(jìn)、增長或變得更糟。在一個方面，本發(fā)明的方法提供了用于減少 或終止病狀的進(jìn)展(或降低病狀進(jìn)展的可能性)的手段，所述病狀例 如為滑膜炎(例如血友病患者中的滑膜炎)。在另一個實施方案中， 術(shù)語"復(fù)發(fā)"意指在緩解或潛伏狀態(tài)后疾病的回復(fù)。在一個方面，根
滑膜炎的復(fù)發(fā)可能性。在一個實施方案中，本發(fā)明的治療方法減少疾 病的嚴(yán)重度。在另一個實施方案中，應(yīng)用本文所描述的本發(fā)明方法還 或者備選地可以減少與疾病相關(guān)的癥狀。在另外一個實施方案中，根 據(jù)本發(fā)明的治療方法還或者備選地可以在個體中減少在疾病過程中正 常表達(dá)的生物標(biāo)志物的數(shù)目。
一般地，本發(fā)明的任何方法可以任選地
包括下述步驟通過本領(lǐng)域已知用于評估此類內(nèi)容(例如病狀嚴(yán)重度、 生活質(zhì)量等)的相關(guān)測試來檢測患者或其他受試者的狀態(tài)(例如健康)
13是否已被改變(通常為改善)。
在一個實施方案中，術(shù)語"治療，，及其所包括的方面是指施用給具有所示疾病、病癥或病狀的受試者，或者在某些實施方案中，施用給易患所示疾病、病癥或病狀的受試者(或已被鑒定為處于形成所述疾病、病癥或病狀的危險(通常為緊急危險)中的受試者)。術(shù)語"易患"被認(rèn)為尤其是指與在所示疾病的發(fā)生率、嚴(yán)重度等方面的傾向或統(tǒng)計學(xué)增加相關(guān)的遺傳特性鐠或家族關(guān)系。在某些實施方案中，術(shù)語
"易患"被認(rèn)為尤其是指與所示疾病的增加的危險相關(guān)的生活方式。在某些實施方案中，術(shù)語"易患"被認(rèn)為尤其是指與所示疾病相關(guān)的
生物標(biāo)志物的存在。還可能由于與素質(zhì)(predisposition )不相關(guān)(或已知相關(guān))的病狀，例如與損傷相關(guān)的出血病狀，或者與或可能與炎癥相關(guān)的病狀而存在危險。
在另一個實施方案中，本發(fā)明方法的實踐可以減少靶疾病、病狀或病癥的發(fā)病機(jī)制。在某些實施方案中，術(shù)語"減少發(fā)病機(jī)制"應(yīng)當(dāng)理解為包括減少與特定疾病、病癥或病狀相關(guān)的組織損害或器官損害。在另一個實施方案中，術(shù)語"減少發(fā)病機(jī)制"應(yīng)當(dāng)理解為包括減少所考慮的那種相關(guān)疾病、病癥或病狀的發(fā)生率或嚴(yán)重度。在另一個實施方案中，術(shù)語"減少發(fā)病機(jī)制"應(yīng)當(dāng)理解為包括減少所示的相關(guān)疾病、病癥或病狀或者與之相關(guān)的癥狀的數(shù)目。
術(shù)語"施用"或其語法形式是指使受試者與本發(fā)明的化合物接觸。施用可以在體外即在試管中完成，或者在體內(nèi)即在活的生物體例如人的細(xì)胞或組織中完成(或者離體)。在一個實施方案中，本發(fā)明包括給哺乳動物受試者例如人患者施用本發(fā)明的化合物。
在某些實施方案中，術(shù)語"試劑的有效量"是指這樣的量，其可檢測地取消或減少受試者例如人患者中補體途徑的激活(此類量通?？梢苑Q為"生理學(xué)有效量")。在一個方面，本發(fā)明涉及這樣的方法，即給受試者施用生理學(xué)有效量的CPAM試劑，以便誘導(dǎo)、促進(jìn)和/或增強(qiáng)其中的生理學(xué)效應(yīng)，例如出血相關(guān)炎癥的減少、 一種或多種補體途徑的抑制(例如，C5a/C5aR相互作用的抑制)等等。在某些實施方案中，術(shù)語"有效量"是這樣的量，其導(dǎo)致所示疾病、病癥或病狀的治療，包括如本文所述的"治療"的任何實施方案。在某些實施方案中，術(shù)語"試劑的有效量"是指這樣的量，其還或者備選地導(dǎo)致該化合物的治療效果或治標(biāo)效果的量。試劑的此類量(在任一或兩種情況下)可以稱為"治療有效量"。對于預(yù)防或減少發(fā)作、減少發(fā)作可能性等而言有效的試劑的量可以稱為"預(yù)防有效量，，。在
一個實施方案中，給受試者提供治療有效量的CPAM試劑，以便促進(jìn)、誘導(dǎo)或增強(qiáng)治療效果(例如，血友病性滑膜炎的治療)。在另一個實施方案中，給受試者提供預(yù)防有效量的CPAM試劑，以在受試者中減少形成病狀的危險、延長達(dá)到病狀發(fā)作時的時間、減少緊急病狀的可能嚴(yán)重度，等等。
術(shù)語"試劑，，和"化合物，，是同義的，并且在本文中可互換使用，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛盾。
術(shù)語"化合物"是指CPAM試劑，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛盾。
在某些實施方案中，術(shù)語"試劑"表示化學(xué)化合物，化學(xué)化合物的混合物，生物大分子(例如核酸、抗體、蛋白質(zhì)或其部分例如肽)，或由生物材料例如細(xì)菌、植物、真菌或動物(特別是哺乳動物)細(xì)胞或組織制得的提取物。此類試劑的活性可以使得它適合于作為"治療劑"，所述治療劑是生物學(xué)、生理學(xué)或藥理學(xué)活性物質(zhì)，所述物質(zhì)在受試者中局域性地或全身性地發(fā)揮作用，從而產(chǎn)生治療上有益的生理學(xué)效應(yīng)。
本發(fā)明的方法可以應(yīng)用于任何合適的哺乳動物。在某些實施方案中，"受試者"或"宿主"是指人或非人哺乳動物。在一個實施方案中，所述哺乳動物是靈長類動物。在一個實施方案中，所述哺乳動物是嚙齒類動物。在一個實施方案中，所述哺乳動物是農(nóng)場動物和/或家庭寵物。在一個實施方案中，所述哺乳動物是人患者。
在一個方面，如本文所描述的，本發(fā)明提供了用于在有此需要的受試者例如被診斷為具有此類病狀的人患者中治療滑膜炎、關(guān)節(jié)病和/
15或出血相關(guān)炎癥的方法和/或組合物。
在一個實施方案中，受試者患有血友病。在一個實施方案中，受
試者患有血友病A。在另一個實施方案中，受試者患有血友病B。在另一個方面，受試者患有非血友病性滑膜炎(其可以例如與職業(yè)或運動損傷相關(guān))。
在一個實施方案中，所述CPAM試劑取消或減少補體途徑的激活，所述補體途徑在一個實施方案中是經(jīng)典途徑，或在另一個實施方案中是旁路途徑，或者在另一個實施方案中，所述試劑取消或減少這兩種途徑的激活。
在一個實施方案中，所述試劑取消或減少(a) Cl激活；(b)組分C4和C2這兩者的部分的切割；(c)激活的復(fù)合物C4b2a的形成；(d)C3的切割；(e)C3b的產(chǎn)生；(f) C4b2a3b的形成；(g)C5的切割；(h)膜攻擊單元的形成；或(i)任何前述內(nèi)容的組合。
在一個實施方案中，所述試劑取消或減少C3b產(chǎn)生，例如通過取消或減少(a ) C3被切割成C3a和C3b; ( b ) C3bBb的形成，C5被切割成C5a和C5b和/或膜攻擊單元的起始；(c) C5b與C6和C7相組合而形成C5bC6C7; (d) C5bC6C7與C8相組合；(e)多個C9相組合而形成進(jìn)一步的末端膜攻擊復(fù)合物，其在細(xì)胞表面上引起細(xì)胞溶解；或(f)任何前述內(nèi)容的組合。在一個方面，所述試劑取消或減少C3 (通過調(diào)節(jié)C3和/或C3受體的功能)、C1和/或C5。
CPAM試劑一般地可以是任何合適的試劑，所述試劑以減少出血相關(guān)炎癥的方式減少補體激活。適合性可以由普通技術(shù)人員/從業(yè)者就毒性、在促進(jìn)所需生理學(xué)或治療效果方面的有效性等來進(jìn)行測定。此類試劑可以包括本領(lǐng)域已知的抗體，肽，抑制劑，拮抗劑，或其他，例如描述于Makrides， S. C. Pharmacological Reviews 50: 59-78(1998);美國專利號5，135，916; 3， 3'-亞脲基雙[6-(2-氨基-8-羥基-6-硫-l-萘基偶氮)苯磺酸，四鈉鹽，舒拉明鈉，氨曱環(huán)酸，肝素，氧肟酸衍生物(例如，水楊基氧將酸(SHA)或乙酰氧肟酸(AHA));經(jīng)取代的酰胺；經(jīng)取代的羥胺；醛將(例如水楊基醛將)；羥苯基化
16合物(例如兒茶素或氫化咖啡酸)；薛；齊墩果酸；和麻黃。目前可從例如Parke-Davis， Arm Arbor, Mich. ， USA和Behringer AG,Morburg， Germany商購獲得補體抑制劑；美國專利申請公開號20060105980中所描述的適體(aptamer)，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知
的其他。
在另一個實施方案中，所述CPAM試劑是生物學(xué)試劑，其在一個實施方案中是這樣的試劑，所述試劑特異性地取消或減少C5a表達(dá)、C5a與關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。在某些實施方案中，此類試劑是抗體，所述抗體在某些實施方案中，特異性地與C5a受體(C5aR)的胞外環(huán)相互作用，或在某些實施方案中，特異性地抑制或取消C5a與其關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合。在一個具體實施方案中，所述CPAM試劑是特異性地與不位于C5aR的N-末端處或附近的C5aR的胞外環(huán)結(jié)合的抗體(其可以是抗體片段、抗體衍生物等)或其他分子(例如抗體模擬物)。在一個更加具體的實施方案中，所述CPAM試劑是與C5aR的第二個環(huán)結(jié)合的抗體或其他分子。此類抗體的實例描述于例如WO03/062278和US 200524406中?？梢詾橛杏玫腃PAM試劑的其他分子以及相關(guān)或者有關(guān)的原理、方法等例如描述于下列文獻(xiàn)中Valentino等人，下文,Lee等人，下文，Schnathaum等人，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters 16 (2006) 5088-5092, Scola等人，JBC Papersin Press (手稿M609178200 ，其于2006年12月11日在線開于http: 〃麗.jbc. org/cgi/doi/10. 1074/jbc. M609178200);和Rinder等人，Ann. Thorac. Surg. 2007; 83:146-52。關(guān)于實踐本發(fā)明方法的相關(guān)原理也例如描述于下列文獻(xiàn)中Dunn等人，Curr. Opin.Hematol. 12:390-394 (2005); Roosendaal等人，Seminars inThrombosis and Hemostasis, 29 (1): 37-42; Arumugam等人，ClinicaChmimica Acta 374 (2006) 33-45 ; 和Tsoukas等人，Blood,107 (5): 1786-1790 (2006)。
在一個具體的示例性實施方案中，所述抗體由具有ECACC登錄號00110609、 02090226或02090227，或ATCC登錄號HB 11382或HB 11384或HB-11625的雜交瘤產(chǎn)生。
在某些實施方案中，所述抗體如美國專利申請公開號20030175267
中所述，或者在另一個實施方案中，所述抗體如美國專利申請公開號20050244406中所述，或者在另一個實施方案中，所述抗體如美國專利號5，480， 974中所述，或者在另一個實施方案中，所述抗體如美國專利號5， 177， 190中所述，或如日本專利號JP 08109200 A中所述，或如世界知識產(chǎn)權(quán)組織z^開號WO 9516033中所述，或如Thomas， TC等人，MolImmunol 1996; 33: 1389-1401中所述。在某些實施方案中，本發(fā)明的方法/組合物利用此類抗體的組合，或者此類抗體和本文所述的其他試劑的組合，被視為本發(fā)明的一部分的任何組合。
因此，使用本領(lǐng)域眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)方法可以產(chǎn)生并鑒定出針對補體受體或配體的抗體，所述方法中僅一些在本文中例示。在某些實施方案中，抗體可以通過本領(lǐng)域已知的用于制備和表征抗體的常規(guī)手段
來制備(參見例如，Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory, 1988)。
在某些實施方案中，用于產(chǎn)生單克隆抗體(MAbs)的方法通過下列方式而開始依照本發(fā)明用免疫原性組合物對動物進(jìn)行免疫接種，其中取決于所采用的抗原組成和方案，有或沒有先前的免疫耐受(例如對于正常細(xì)胞群體耐受，然后用肺瘤細(xì)胞群體進(jìn)行免疫接種)；并且從那個經(jīng)免疫接種的動物中收集抗血清。在某些實施方案中，所述抗體是多克隆抗體。
廣泛范圍的動物物種可以用于產(chǎn)生抗血清。通常，用于產(chǎn)生抗血清的動物是兔、小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠或山羊。因為兔具有相對較大的血量，所以常常使用兔(盡管不是唯一地使用)來產(chǎn)生多克隆抗體。
如本領(lǐng)域眾所周知的，給定的組合物可以在其免疫原性方面不同。因此，常常必需加強(qiáng)宿主免疫系統(tǒng)，如可以通過將肽或多肽免疫原與載體相偶聯(lián)而達(dá)到的。示例性的且優(yōu)選的栽體是匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)。其他白蛋白例如卵白蛋白、小鼠血清白蛋白
18或兔血清白蛋白也可以用作載體。用于將多肽與載體蛋白質(zhì)相綴合的 手段是本領(lǐng)域眾所周知的，并且包括戊二醛、間-馬來酰亞氨基苯曱酰
基-N-羥基琥珀酰亞胺酯、碳二亞胺和雙重氮化聯(lián)苯胺。
還如本領(lǐng)域眾所周知的，特定免疫原組合物的免疫原性可以通過 使用免疫應(yīng)答的非特異性刺激劑(稱為佐劑)而得到增強(qiáng)。示例性的 且優(yōu)選的佐劑包括完全弗氏佐劑(包含殺死的結(jié)核分枝桿菌 (#7co6ac^e77i//B f"6ercw/o57s)的免疫應(yīng)答的非特異性刺激劑)、 不完全弗氏佐劑、和氫氧化鋁佐劑。
在多克隆抗體的產(chǎn)生中所使用的免疫原組合物的量依免疫原的性 質(zhì)以及用于免疫接種的動物而變。各種途徑可以用于施用免疫原(皮 下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)和腹膜內(nèi))?？梢酝ㄟ^在免疫接種后的各個 點時取經(jīng)免疫接種的動物的血樣來監(jiān)控多克隆抗體的產(chǎn)生。還可以給 予第二次加強(qiáng)注射。重復(fù)加強(qiáng)和滴定的過程，直至達(dá)到合適的滴度。 當(dāng)獲得所需的滴度水平時，可以對經(jīng)免疫接種的動物進(jìn)行采血，并且 分離和貯存血清，和/或所述動物可以用于產(chǎn)生MAbs。
MAbs可以容易地通過使用眾所周知的技術(shù)來制備，例如在美國專 利號4，196， 265 (其通過提及而合并入本文)中所例示的那些。通常，
所述免疫原組合物例如為純化或部分純化的腫瘤細(xì)胞或血管內(nèi)皮細(xì)胞 蛋白質(zhì)、多肽、肽或完整細(xì)胞組合物。以對于刺激抗體生成細(xì)胞而言 有效的方式施用免疫接種組合物。嚙齒類動物例如小鼠和大鼠是優(yōu)選 的動物，然而，使用兔、綿羊、蛙細(xì)胞也是可以的。使用大鼠可以提 供某些優(yōu)點，但小鼠是優(yōu)選的，其中BALB/c小鼠是最優(yōu)選的，因為這 是最常規(guī)使用的并且一般產(chǎn)生更高百分比的穩(wěn)定融合。
在免疫接種后，選擇具有用于產(chǎn)生抗體的潛力的體細(xì)胞，特別是B 淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)，以用于在產(chǎn)生MAb的方案中使用。這些細(xì)胞可以 獲自活組織檢查的脾、扁桃體或淋巴結(jié)，或者獲自外周血樣品。脾細(xì) 胞和外周血細(xì)胞是優(yōu)選的，前者是因為它們是處于分裂性成漿細(xì)胞階 段中的抗體生成細(xì)胞的豐富來源，和后者是因為外周血可容易獲得。通常，對動物實驗對象組進(jìn)行免疫接種，并且取出具有最高抗體滴度 的動物的脾，并通過用注射器對脾進(jìn)行勻漿而獲得脾淋巴細(xì)胞。通常，
來自經(jīng)免疫接種的小鼠的脾包含約5 x 107 - 2 x 1 08個淋巴細(xì)胞。
然后，將來自經(jīng)免疫接種的動物的抗體生成B淋巴細(xì)胞與永生的骨 髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞相融合，所述骨髓瘤細(xì)胞一般是與進(jìn)行免疫接種的動 物相同的物種的細(xì)胞。適合于在產(chǎn)生雜交瘤的融合操作程序中使用的 骨髓瘤細(xì)胞系優(yōu)選地是非抗體生成性的，具有高的融合效率以及酶缺 陷，所述酶缺陷使得它們不能在僅支持所需的融合細(xì)胞(雜交瘤)生 長的某些選擇培養(yǎng)基中生長。
可以使用許多骨髓瘤細(xì)胞中的任何一種，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知 的。例如，當(dāng)經(jīng)免疫接種的動物是小鼠時，可以使用P3-X63/Ag8、 X63-Ag8.653、 NSl/l.Ag 4 1、 Sp210-Ag14、 F0、 NS0/U、 MPC-ll、 MPC11-X45-GTG 1. 7和S194/5XX0 Bul;對于大鼠，可以使用R210. RCY3、 Y3-Ag 1.2.3、 IR983F、 4B210或上文列出的小鼠細(xì)胞系之一; 以及U-266 、 GM1500-GRG2、 LICR-L0N-HMy2和UC729-6在人細(xì)胞融合 方面都是有用的。
用于產(chǎn)生抗體生成性脾或淋巴結(jié)細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的雜種的方法 通常包括在促進(jìn)細(xì)胞膜融合的試劑(化學(xué)的或電的)存在下，將體細(xì) 胞與骨髓瘤細(xì)胞以4: l的比例相混合，盡管比例可以分別從約20: l至約 1:1變4匕。4吏用4山臺病毒的融合方法已由Kohler和Milstein (Nature, 256: 495-497， 1975; Eur. J. Immunol., 6:511-519， 1976 )進(jìn)行了 描述，以及使用聚乙二醇(PEG)例如37% (v/v) PEG的融合方法已由 Gefter等人(Somatic Cell Genet. ， 3: 231-236， 1977 )進(jìn)行了描述。 使用電誘導(dǎo)的融合方法也是合適的(Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 第2版，Academic Press, Orlando, Fla., 第71-74頁,1986 )。
融合操作程序可以以低頻率(約l x l(T6 - 1 x 10_8)產(chǎn)生活的雜種。
但是，可以通過在選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)來將活的融合雜種與親本的、 未融合的細(xì)胞區(qū)分開。選擇培養(yǎng)基可以包含在組織培養(yǎng)基中阻斷核苷
20酸的從頭合成的試劑。在某些實施方案中，此類試劑包括氨基蝶呤、 氨甲蝶呤、重氮絲氨酸或其他。
在某些實施方案中，選擇培養(yǎng)基是HAT。
在某些實施方案中，所述培養(yǎng)提供了從中選擇出特定雜交瘤的雜 交瘤群體。在某些實施方案中，通過下列方式來進(jìn)行雜交瘤的選擇 在孩吏量滴定板中通過單克隆稀釋(single-clone dilution)來培養(yǎng)細(xì) 胞，隨后就所需的反應(yīng)性來測試各個克隆上清液(在約2-3周后)。 在某些實施方案中，測定法可以包括放射免疫測定法、酶免疫測定法、 細(xì)胞毒性測定法、噬斑測定法、斑點免疫結(jié)合測定法等。
在某些實施方案中，對所選擇的雜交瘤進(jìn)行系列稀釋，并且克隆 到各抗體生成細(xì)胞系中，所述克隆隨后可以無限地繁殖以提供MAbs。 在某些實施方案中，可以如下將細(xì)胞系用于MAb產(chǎn)生可以將雜交瘤的 樣品注射入(常常注射入腹膜腔中)組織相容性動物類型中，所述動 物用于提供體細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞以用于最初融合。經(jīng)注射的動物形成 腫瘤，所述腫瘤分泌由融合的細(xì)胞雜種產(chǎn)生的特異性單克隆抗體。然 后，可以抽取動物的體液例如血清或腹水，以提供高濃度的MAbs。在 某些實施方案中，各細(xì)胞系在體外進(jìn)行培養(yǎng)，其中MAbs天然地被分泌 到培養(yǎng)基中，從所述培養(yǎng)基中可以容易地以高濃度獲得它們。在某些 實施方案中，如果需要，使用過濾、離心和各種色鐠方法例如HPLC或 親和層析，進(jìn)一步純化通過任一方式產(chǎn)生的MAbs。
在某些實施方案中，可以使用分子克隆方法來產(chǎn)生單克隆抗體。 為此，由從經(jīng)免疫接種的動物的脾中分離的RM制備組合免疫球蛋白噬 菌粒文庫，并且通過使用表達(dá)抗原的細(xì)胞和對照細(xì)胞(例如正常對腫 瘤細(xì)胞)進(jìn)行淘選來選擇表達(dá)合適抗體的噬菌粒。
在某些實施方案中，在本發(fā)明中所采用的MAbs具有人、鼠類、猴、 大鼠、倉鼠、雞或者兔起源。本發(fā)明考慮了使用人抗體，具有人恒定 區(qū)和/或可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的來自小鼠、大鼠或其他物種的"人源化"或嵌 合抗體，以及其他重組抗體及其片段。
在某些實施方案中，用于在本發(fā)明的組合物和/或方法中使用的MAbs涉及單克隆抗體的功能性片段的使用。 一般而言，可以在實踐本 文所描述的本發(fā)明方法之中使用任何合適類型的抗體片段。在某些實 施方案中，使用Fab片段。在某些實施方案中，通過用非特異性巰基蛋 白酶(木瓜蛋白酶)使完整的免疫球蛋白進(jìn)行蛋白水解來獲得Fab片段。 在某些實施方案中，通過用半胱氨酸、2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇使活 性位點中的硫氬基還原來激活木瓜蛋白酶?？梢酝ㄟ^用EDTA(2 mM) 進(jìn)行螯合來去除儲備酶(stock enzyme)中的重金屬，以確保最大的 酶活性?？梢砸詌: IOO的重量比將酶和底物混合在一起。在溫育后，通 過用碘乙酰胺使疏醇基發(fā)生不可逆的烷基化或者簡單地通過透析來終 止反應(yīng)?？梢酝ㄟ^SDS-PAGE來監(jiān)控消化的完全性，并且通過A蛋白 -Sepharose或離子交換層析來分開各個級分。
在某些實施方案中，功能性片段是F(ab')2片段。在某些實施方案 中，經(jīng)由用胃蛋白酶進(jìn)行有限的蛋白水解，而從兔和人起源的IgG制備 F(ab')2片段。條件可以根據(jù)免疫球蛋白亞類而變化。
在某些實施方案中，功能性片段是Fc片段，或單鏈Fv片段，其的 制備是本領(lǐng)域眾所周知的。
在一個實施方案中，所述抑制補體途徑的試劑是任何長度的肽、 或蛋白質(zhì)。肽或多肽通常是指基于單條氨基酸聚合物鏈的化合物，而 蛋白質(zhì)可以包含多條相聯(lián)合的多肽鏈和/或多個蛋白質(zhì)單元(例如，蛋 白質(zhì)可以是二聚體或更高級別的多聚體)。在某些實施方案中，所述 試劑是寡肽。在某些實施方案中，術(shù)語"寡肽"是指任何長度的肽， 其包含功能材料，例如蛋白質(zhì)，或其功能性片段。
在另一個實施方案中，肽可以包含來自任何動物物種(包括人) 的天然多肽的片段，天然(人和非人)多肽及其片段的衍生物，和天 然多肽的變體。在一個實施方案中，"片段"包含有在成熟天然多肽 的序列內(nèi)的區(qū)域，并且在另一個實施方案中，"衍生物"包含天然多 肽的氨基酸序列和糖基化變體以及共價修飾物。在另一個實施方案中， "變體"是指天然多肽的氨基酸序列和糖基化變體。
在某些實施方案中，所述CPAM試劑是環(huán)肽C5aR拮抗劑，例如
22AcF-
、 H67KDMQLGR74 、 YSFKPMPLaR 、 NMeFKP 、 NMePHe-Lys-Pro-D-Cha-X-D-Arg、 NMe-FKP、 NMeFKPdChaWr 、氫化肉 桂酸鹽-[OP(D-Cha)WR]、 (F-
) 、 CHIPS肽或其類似物、 jim〃os-A8 (jun〃os-C5a-(l-68)-Arg69Ser70Leu71Leu72Arg73 、 A8Delta71-73 (C5a-(1-68)-Arg69Ser70)、或任何前述物質(zhì)的組合。 在某些實施方案中，所述試劑是corpstatin或其他C3抑制劑。這些試 劑是本領(lǐng)域已知的，并且具體描述于例如WO 03033528A1 、 US 20060160726A1、 US 20060217530A1和WO 04040000中。
在某些實施方案中，所述CPAM試劑是N-((4-二甲基氨基苯基)甲 基)-N- (4-異丙基苯基)-7-曱氧基-1， 2， 3， 4-四氫萘-l-曱酰胺鹽酸化 物、R (-) -2- [4'-異丁基苯基)-丙酰基氨基]-1， 1-二甲基哌啶鎮(zhèn)碘化 物、([R]-2-(4-異丁基-苯基)-N-(3-哌啶-l-基-丙基)-丙酰胺、3-芳 基-5，6-二取代的噠溱、6-脒基-2-萘基-4-胍基苯甲酸鹽、或其任何組 合，或者在某些實施方案中，此類試劑與本文描述的任何其他試劑的 組合。
在某些實施方案中，所述CPAM試劑如美國專利號6355245中所述， 或者在另一個實施方案中，所述試劑如美國專利號5853722中所述，或 者在另一個實施方案中，所述試劑如美國專利號6074642中所述，或者 在另一個實施方案中，所述試劑如美國專利號6723743中所述，或者在 另一個實施方案中，所述試劑如美國專利申請公開號2005/0004031中 所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如美國專利申請公開號 2003/0175267中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如美國專 利申請公開號2005/0226870中所述，或者在另一個實施方案中，所述 試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2005/092366中所述，或者在另一 個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2006/004589 中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公 開號WO 2003/082826中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如 世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2004/043925中所述，或者在另一個實施 方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2003/061765中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號wo
2003/009803中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識 產(chǎn)權(quán)組織公開號2005/074607中所述，或者在另一個實施方案中，所述 試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2004/022096中所述，或者在另一 個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號冊2003/084524 中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織z厶 開號WO 2003/082829中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如 世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2003/082828中所述，或者在另一個實施 方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2002/49993中所述， 或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識產(chǎn)權(quán)組織公開號WO 2004/018460中所述，或者在另一個實施方案中，所述試劑如世界知識 產(chǎn)權(quán)組織^^開號WO 2005/007087中所述，或如Makrides SC， Pharmacol Rev 1998; 50:59-87中所述，或如Morikis， D.等人，Protein Sci 1998; 7: 619-627中所述；或如Pellas TC等人，J. Immunol 1998; 160: 5616-5621中所述；或如Riley RD等人，J Thorac Cardiopvasc Surg 2000; 120: 350-358中所述，所述參考文獻(xiàn)中的每一篇通過提及 而全部合并入本文。在另一個實施方案中，所述試劑是其組合，或者 這些與本文描述的任何其他試劑的組合。
在某些實施方案中，所述CPAM試劑抑制與補體途徑相關(guān)的基因的 表達(dá)。在某些實施方案中，所述試劑是核酸。
在一個實施方案中，術(shù)語"核酸，，分子是指DNA或RNA，其可以為 單鏈或雙鏈。核酸可以包括在本質(zhì)上為原核或真核mRNA的序列。DNA 可以包括來自真核或原核mRNA的cDNA，來自真核或原核DNA的基因組 DNA序列，或者在另一個實施方案中，合成的DM序列。該術(shù)語還指包 含DNA和RNA的任何已知堿基類似物的序列。在本發(fā)明的組合物中的核 酸序列可以是棵核酸，或者在另一個實施方案中，可以被包含在載體 內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的這個方面，并且在一個實施方案中，可以將編碼目 的序列的多核苷酸區(qū)段連接到商購可得的表達(dá)載體系統(tǒng)中，所述表達(dá)
24載體系統(tǒng)適合于轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)化哺乳動物細(xì)胞，和適合于指導(dǎo)重組產(chǎn)物在經(jīng) 轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。應(yīng)當(dāng)意識到，此類商購可得的載體系統(tǒng)可以容 易地經(jīng)由常用的重組技術(shù)進(jìn)行修飾，以便替換、加倍或突變現(xiàn)有的啟 動子或增強(qiáng)子序列和/或引入任何另外的多核苷酸序列，例如編碼另外 的選擇標(biāo)記的序列或編碼報道多核苷酸的序列(關(guān)于進(jìn)一步的細(xì)節(jié)，
參見例如，"Methods in Enzymology"第1-317巻，Academic Press, Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel F.M.等人(編 輯)Greene Publishing Associates, (1989),和Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版，Sambrook等人，Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1989)，或其他標(biāo)準(zhǔn)實驗室手冊)。
在一個實施方案中，本發(fā)明的核酸和/或載體尤其包括核酶、反義 寡核苷酸或?qū)τ诰幋a序列特異的miRNA試劑。
在一個實施方案中，術(shù)語"miRNA試劑"是指通過RNA干擾機(jī)制來
調(diào)節(jié)耙基因表達(dá)的試劑。
在本發(fā)明的方法中所使用的miRNA試劑一般可以具有任何合適的 結(jié)構(gòu)。在一個實施方案中，miRNA試劑包括可以形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的雙鏈 RNA。在另一個實施方案中，所采用的miRNA試劑是小核糖核酸分子， 或寡核糖核苷酸，其以雙鏈體結(jié)構(gòu)存在，例如在一個實施方案中，彼 此雜交的兩個不同的寡核糖核苷酸，或在另一個實施方案中，采取發(fā) 夾結(jié)構(gòu)從而產(chǎn)生雙鏈體結(jié)構(gòu)的單個核糖寡核苷酸。
在一個實施方案中，可以根據(jù)由制造商提供的說明書，在Applied Bio Systems寡核苷酸合成儀上合成核酸和/或寡核苷酸。在另一個實 施方案中，可以通過本領(lǐng)域普遍已知的許多方法來合成核酸/寡核苷酸 或經(jīng)修飾的寡核苷酸。
在一個實施方案中，術(shù)語"編碼序列"是指"編碼"特定多肽或 肽的核酸序列。在一個實施方案中，編碼序列是當(dāng)置于合適的調(diào)節(jié)序 列的控制之下時，在體外或在體內(nèi)被轉(zhuǎn)錄(在DNA的情況下)和被翻譯 (在mMA的情況下)成多肽的核酸序列。編碼序列的邊界由在5'(氨 基)末端處的起始密碼子和在3'(羧基)末端處的翻譯終止密碼子來
25確定。編碼序列可以包括但不限于，來自原核或真核mRNA的cDNA、來 自原核或真核DNA的基因組DNA序列和甚至合成的DM序列。轉(zhuǎn)錄終止序 列常常位于編碼序列的3'。
在一個實施方案中，術(shù)語"編碼序列"包括編碼多肽的DNA序列， 以及轉(zhuǎn)錄成抑制性反義分子的DNA序列。
在一個實施方案中，當(dāng)它涉及載體、核酸及它們在根據(jù)本發(fā)明的 組合物和/或方法中的用途時，術(shù)語"減少表達(dá)"是指當(dāng)與在所述試劑 不存在的情況下的水平相比較時，基因表達(dá)水平的降低。
在一個實施方案中，減少的表達(dá)可以在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平或其組合 上受到影響。
根據(jù)本發(fā)明的這個方面，通過使用根據(jù)本發(fā)明的組合物和/或方法 而減少的表達(dá)是特異的。在一個實施方案中，表達(dá)的減少經(jīng)由抑制靼 基因的能力，而不顯示對于細(xì)胞的其他基因的作用。在其他實施方案 中，可以通過檢查細(xì)胞或生物體的外在性質(zhì)或通過生物化學(xué)技術(shù)來證 實抑制的后果，所述生物化學(xué)技術(shù)例如為RNA溶液雜交、核酸酶保護(hù)、 Northern雜交、用微陣列進(jìn)行基因表達(dá)監(jiān)控、抗體結(jié)合、酶聯(lián)免疫吸 附測定法(ELISA) 、 Western印跡法、放射免疫測定法(RIA)、其他 免疫測定法、和熒光激活細(xì)胞分析(FACS)。
可以通過本領(lǐng)域常規(guī)使用的標(biāo)準(zhǔn)方法來評估在細(xì)胞內(nèi)核酸的攝 取。例如，可以對于與本發(fā)明的組合物接觸的細(xì)胞或組織，或由從施 用了本發(fā)明的組合物的個體中分離的樣品執(zhí)行濾膜雜交技術(shù)(例如， Northern或Southern印跡法)，或者在另一個實施方案中，可以執(zhí)行 RM酶保護(hù)或逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)，以檢測質(zhì)粒或DNA 的攝取，和測量其表達(dá)?？梢酝ㄟ^合適的測定法來檢測基因產(chǎn)物，例 如通過所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的免疫學(xué)檢測，例如用特異性抗體，或者通過 功能測定法以檢測基因產(chǎn)物的功能活性，例如酶促測定法。如果待由 細(xì)胞表達(dá)的目的基因產(chǎn)物無法容易地檢驗，那么首先可以通過使用與 待使用的調(diào)節(jié)元件和載體相連接的報道基因來優(yōu)化表達(dá)系統(tǒng)。報道基 因編碼這樣的基因產(chǎn)物，所述基因產(chǎn)物可容易地檢測，并因此可以用于評估該系統(tǒng)的功效。本領(lǐng)域中所使用的標(biāo)準(zhǔn)報道基因包括編碼P-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶、螢光素酶和人生長激素，或者本文 列出的任何標(biāo)記物蛋白質(zhì)的基因。
在某些實施方案中，其表達(dá)被減少或取消的基因包含編碼補體組
分的序列，例如在NCBI's GenBank數(shù)據(jù)庫中列出的那些，登錄號AAA72968 、AAH22312 、NP-001726 、CAH70782 、NP一000195 、
NP一001728、AAH43484、1006226A 、CAA60121 、AAH63851 、
BAD02321、AAA85332、 AAB59537、 。07021、 CAI17449、CAM24859、
CAI41720 、CAM25395 、CAA69849 、AAA59651 、CAA50994 、
AAA51925 、AAA51856 、AAA51855 、AAH63289 、CAI41856 、
AAM10002 、AAD15289 、AAA99717 、AAA51889 、CAB66087 、
ABD48959 、AAR89906 、AAA51890 、AAA35617 、CAA72407 、
AAA35722 、BAB63292 、P01024 、 P0C0L4 、 P0C0L5、P01031 、
P00736、 P00751、 P06681、 P09871、 P02748、 P07358、 P07357，或者 包含DQ895516 、 DQ894720 、 DQ894514 、 DQ894443 、 DQ894054 、 DQ891410、 DQ891257、 NM-000064中所示的序列，或編石馬卓卜體受體的序 列，例如在NCBI's GenBank數(shù)據(jù)庫中列出的那些，登錄號DQ894940、 DQ895197 、 CAI16725 、CAI16724 、CAI16723 、CAI16044 、 CAI16043、 CAI16042、 AAB60694、 A34924、 CAA48779、 AAA99005、 AAA99004 、 AAA37478 、AAA37477 、 AAA37447 、AAD15289 、 AAB60695、 AAB60694 、 NP一004045 、 NP-004045 、 NP-001002029 、 NP_001727、 AAD14919、 CAA40530、 CAA68674,或本領(lǐng)域已知的那些， 或與其同源的序列，或其組合的抑制或取消。
在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物/方法進(jìn)一步包含/利用凝血 因子或者減少出血和/或促進(jìn)止血的其他試劑/因子("止血因子"或 "止血劑")，它們被施用給有此需要的受試者。在某些實施方案中， 所述凝血或止血因子是凝血因子XIII、凝血因子IX、凝血因子VII、凝 血因子Vin、凝血因子X、纖維蛋白原、凝血酶、抗纖溶酶(ct2-抗纖 溶酶，TAFI)或抗纖維蛋白溶解劑(例如抑酶肽)，或者其衍生物或
27變體，或者其組合。在某些實施方案中，此類因子可以包括天然存在 的或重組的形式，或者其衍生物或變體。
在某些實施方案中，除了CPAM試劑外，本發(fā)明的組合物或方法還
包括凝血因子vni蛋白質(zhì)或多肽。凝血因子vni蛋白質(zhì)(或"凝血因 子vin"或"Fviir )可以包括天然存在或重組的形式的凝血因子vin，
例如在美國專利號5， 563， 045 ，美國專利號5， 451, 521 ,美國專利號 5, 422, 260,美國專利號5， 004, 803，美國專利號4， 757， 006，美國專 利號5，661， 008，美國專利號5， 789， 203，美國專利號5， 681， 746，美 國專利號5， 595， 886，美國專利號5， 045， 455，美國專利號5， 668， 108， 美國專利號5， 633，150，美國專利號5, 693, 499 ，美國專利號 5, 587, 310，美國專利號5,171， 844，美國專利號5， 149， 637，美國專 利號5，112， 950，美國專利號4， 886， 876, WO 94/11503， WO 87/07144， WO 92/16557， WO 91/09122, WO 97/03195， WO 96/21035， WO 91/07490， EP 0 672 138， EP 0 270 618， EP 0 182 448， EP 0 162 067， EP 0 786 474, EP 0 533 862, EP 0 506 757， EP 0 874 057， EP 0 795 021， EP 0 670 332, EP 0 500 734, EP 0 232 112， EP 0 160 457， Sanberg 等人，XXth Int. Congress of the World Fed. Of Hemophilia (1992)， 和Lind等人，Eur. J. Biochem. ， 232: 19 (1995)中公開的那種，所 述這些文獻(xiàn)通過提及而以其整體合并入本文。在一個方面，在本發(fā)明 的方法或組合物中與CPAM試劑相組合的凝血因子是"凝血因子VIII多 肽，，。術(shù)語"凝血因子VIII多肽"包括但不限于，凝血因子VII,以及
凝血因子vni相關(guān)多肽。術(shù)語"凝血因子vnr， 一般意欲包括但不限
于，具有Toole等人，Nature 1984; 312: 342-347中所描述的氨基酸 序列(野生型人凝血因子VIII)的多肽及其等位基因變體。"凝血因
子vin相關(guān)多肽，，(其可以用作Fvni的替代物)可以包括但不限于這 樣的凝血因子vni多肽，其相對于人凝血因子vni而言已進(jìn)行了化學(xué) l奮飾和/或包含一個或多個相對于人凝血因子vin而言的氨基酸序列 改變(即凝血因子vin變體)，和/或包含相對于人凝血因子vni而言 截短的氨基酸序列(即凝血因子viii片段)。通常，待在本文描述的
28方法/組合物中使用的凝血因子vni的變體，如同其他凝血因子的變體 一樣，將會在氨基酸序列組成方面與相關(guān)/相應(yīng)的人蛋白質(zhì)具有高水平 的同一性(例如，與其，在該情況下與人凝血因子vin，具有至少約
80%、 85°/。、 90%、 92%、 93%、 95%、 97%或99%的同一性)，并且保留與 人蛋白質(zhì)至少基本上類似的活性(例如，在調(diào)節(jié)出血方面，或者如在 相關(guān)測定法(例如在US 20030199444中所描述的凝血因子VIII活性測 定法)中所測試的)。術(shù)語"凝血因子VIII相關(guān)多肽，，意欲包括以其 未切割(酶原)形式存在的此類多肽，以及已經(jīng)歷了蛋白水解加工從 而產(chǎn)生其相應(yīng)的生物活性形式(其可以稱為"凝血因子VIIIa相關(guān)多肽" 或"與激活的凝血因子VIII相關(guān)的多肽")的那些。短語"凝血因子 VIII相關(guān)多肽"包括但不限于，展示出至少顯著比例的相對于野生型 人凝血因子VIII而言基本上相同或改善的生物活性的多肽。凝血因子 Vin多肽的非限制性例子包括，例如在Fulcher等人，Proc. Acad. Nat. Sci. USA 1982; 79: 1648-1652和Rotblat等人，Biochemistry 1985; 24: 4294-4300中所描述的血漿衍生的人凝血因子Vin，以及例如在 Fass等人，Blood 1982; 59: 594-600和Knutson等人，Blood 1982; 59: 615-624中所描述的血漿矛汙生的豬FVni。凝血因子VII序列變體的 非限制性例子描述于例如Lollar等人，Blood 2000; 95 (2): 564-568 (雜合的豬/人FVIII多肽)和Lollar等人，Blood 2001; 97(1): 169-174中。商購可得的FVIII產(chǎn)品(所謂的替代產(chǎn)品)通常源自正常 的匯集的血漿或經(jīng)基因改造的哺乳動物細(xì)胞系。常常根據(jù)最終純度來 對替代產(chǎn)品進(jìn)行分類，所述最終純度被定義為比活性(凝血因子活性 的國際單位/mg蛋白質(zhì)，IU/mg)。中間產(chǎn)品具有相對較低的比活性(<50 IU/mg)，因為它們還包含無關(guān)的血漿蛋白質(zhì)，例如纖維蛋白原、纖連 蛋白和其他非凝血蛋白質(zhì)。高純度(>50 IU/mg)和超高純度(>3000 IU/mg)包含很少的其他血漿蛋白質(zhì)或?qū)嵸|(zhì)上無其他血漿蛋白質(zhì)，除了 作為穩(wěn)定劑而添加的白蛋白外。可以根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行使用的商購可得 的凝血因子VIII產(chǎn)品(濃縮物和制劑)的非限制性例子為例如但不限 于，來自AHP/Genetics Institute的ReFacto (缺失了 B-結(jié)構(gòu)域的
29rFVIII )、來自Alpha的Alphanate ( FVIII)、來自Aventis的Bioclate
(rFVIII)、來自Aventis的Monoclate-P (凝血因子Vni:C)、來自 Aventis的Helixate( rFVIII )、來自Baxter的Recombinate( rFVIII )、 來自Baxter的He邁ofil M( FVIII)、來自Bayer的Kogenate ( rFVIII )、 來自HemaSure的Nordiate (FVIII)、來自Laboratoire Francais du Fractionnement et des Biotechnologies (LFB)的FACTEUR VIII-LFB
(基于人血漿的FVIII)、來自Speywood的Hyate:C(豬FVIII)和來自 Bayer的Kogenate SF (用蔗糖配制的rFVIII)。高和超高活性產(chǎn)品的 非限制性例子為AlphanateTM( Alpha)(低)；ReFacto ( AHP/Genet ics Institute ) ， Kogenate SF( Bayer ), Kogenate ( Bayer ) ， Helixate
(Aventis) ， Recombinate ( Baxter ) ， Monoclate-P ( Aventis )， Hemofi 1 M ( Baxter )(全部超高)。
如上所述，在另一個實施方案中，本發(fā)明的組合物或方法可以包 括凝血因子IX多肽和CPAM試劑的組合。凝血因子IX蛋白質(zhì)可以是人重 組凝血因子IX (rhFIX)。凝血因子IX蛋白質(zhì)可以更特別地選自 BeneFix ( AHP/Genet ics Institute )、Mononine ( Avent i s)、 Proplex
(Baxter) 、 BebulinVH (Baxter) 、 FACTEUR IX-LFB (Uboratoire Francais du Fractionnement et des Biotechnologies (LFB))、 Immunine ( Baxter/I咖uno ) 、 0ctanyne (Octapharma) 、 OctanineF
(Octapharma) 、 Mono FIX-VF ( CSL )或Novact M (Kaketsuken)。 一般而言，短語"凝血因子IX多肽"包括但不限于，凝血因子IX，以 及凝血因子I X相關(guān)多肽(其中任何一種 一般可以用于/摻入本發(fā)明的方 法或組合物中)。術(shù)語"凝血因子IX，，意欲包括但不限于，具有Jaye 等人，Nucleic Acids Res. 1983中所描述的氨基酸序列(野生型人凝 血因子IX)的多肽，和可以從一個個體到另一個個體中存在和出現(xiàn)的 人凝血因子IX的天然等位基因變化形式。此外，糖基化或其他翻譯后 修飾的程度和位置可以依所選擇的宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境的性質(zhì)而 變。術(shù)語"凝血因子IX"還意欲包括以其未切割(酶原)形式存在的 凝血因子IX多肽，以及已經(jīng)歷了蛋白水解加工從而產(chǎn)生其相應(yīng)的生物活性形式(其可以稱為凝血因子IXa)的那些(如與本文描述的其他凝 血因子的情況一樣)?？梢該饺氡景l(fā)明的方法和組合物中的"凝血因 子IX相關(guān)多肽"包括但不限于這樣的凝血因子IX多肽，其相對于人凝 血因子IX而言已進(jìn)行了化學(xué)修飾和/或包含一個或多個相對于人凝血 因子IX而言的氨基酸序列改變(即凝血因子IX變體)，和/或包含相對 于人凝血因子IX而言截短的氨基酸序列(即凝血因子IX片段)。通常， 待在本文描述的方法/組合物中使用的凝血因子IX的變體，如同其他凝 血因子的變體一樣，將會與相關(guān)的人蛋白質(zhì)具有高水平的同一性(例 如，與其具有至少約80°/ 、 85°/。、 90%、 92%、 93°/。、 95%、 97°/?；?9°/。的同 一性)，并且保留與人蛋白質(zhì)至少基本上類似的活性(例如，在調(diào)節(jié) 出血方面，或者如在相關(guān)測定法(例如在US 20030203845中所描述的 凝血因子IX測定法)中所測試的)。凝血因子IX多肽的非限制性例子 包括，例如在Chandra等人，Biochem. Biophys. Acta 1973， 328:456; Andersson等人，Thromb. Res. 1975， 7:451; S躍ela等人，Eur. J. Biochem. 1976， 71:145中所描述的血漿衍生的人凝血因子IX。在某些 實施方案中，所述凝血因子IX是凝血因子IX相關(guān)多肽，其中當(dāng)在"生 色測定法，，(參見US 20030203845 )中進(jìn)行測試時，所述凝血因子IX 多肽的活性和天然人凝血因子IX (野生型凝血因子IX)的活性之間的 比率為至少約1.25;在其他實施方案中，該比率為至少約2. 0;在進(jìn)一 步的實施方案中，該比率為至少約4.0。商購可得的FIX產(chǎn)品(所謂的 替代產(chǎn)品)源自正常的匯集的血漿或經(jīng)基因改造的哺乳動物細(xì)胞系。 常常根據(jù)最終純度來對替代產(chǎn)品進(jìn)行分類，所述最終純度被定義為比 活性(凝血因子活性的國際單位/mg蛋白質(zhì)，IU/mg)。中間產(chǎn)品具有 相對較低的比活性(〈50 IU/mg)，因為它們還包含無關(guān)的血漿蛋白質(zhì)， 例如纖維蛋白原、纖連蛋白和其他非凝血蛋白質(zhì)。高純度(>50 IU/mg) 和超高純度(>160 IU/mg)包含很少的其他血漿蛋白質(zhì)或?qū)嵸|(zhì)上無其 他血漿蛋白質(zhì)，除了作為穩(wěn)定劑而添加的白蛋白外?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明 進(jìn)行使用的商購可得的凝血因子IX產(chǎn)品(濃縮物和制劑)的非限制性 例子為例如但不限于，來自AHP/Genetics Inst i tute的BeneFix(rFIX)、來自Aventis的Mononine (FIX)、來自Baxter的Proplex (FIX復(fù)合物)、來自Baxter的Bebul in VH ( FIX復(fù)合物)、來自
Laboratoire Francais du Fractionnement et des Biotechnologies (LFB )的FACTEUR IX-LFB (基于人血漿的FIX ) 、 Immunine (Baxter/Immuno ) 、 Octanyne ( Octapharma ) 、 Octanine F (Octapharma) 、 Mono FIX-VF ( CSL) 、 Novact M (Kaketsuken)。
凝血因子IX和凝血因子X蛋白質(zhì)(包括凝血因子IX和凝血因子X變體，
及其衍生物)也是本領(lǐng)域已知的.(參見例如，WO2006127896 ;
EP1728798-A1;和Schuettrumpf等人，Blood， 105 (6): 2316-2323 (2005))。
在一個實施方案中，凝血因子或止血因子和CPAM試劑的組合是所 述組合物或方法中的唯一活性試劑(或者CPAM試劑和凝血因子/止血因 子和/或第二抗炎劑的組合是所述組合物/方法中的唯一活性試劑)。
一般而言，在本文描述的方法或組合物中所牽涉的任何這些試劑的特 征可以為至少基本上分離的或純化的。
在某些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含具有編碼凝血因子的 序列的核酸，和/或所述方法利用具有編碼凝血因子的序列的核酸，例 如NCBI's GenBank的那些，登錄號CAH72549、 AAA88042、 AAT85802、 P08709、 P00740、 P12259 、 P00748、 P03951 、 KFHU5 、 P00488、
AAB31518、AAB31517 、AAB31516 、NP-000121、NP一000124、
P00742 、NP一000123 、NP-000495 、NP—001984、1205236A、
AAB59401、NP—036283 、CAI43241 、AAH98389、AAH22513、
AAB28588、AAI22864 、AAI19015 、AAH64380、AAI11970、
AAI11968、AAC50211、 AAA52420、 AAB5949、 AAA70225、AAA58466、AAV85964、AAB59490 、AAA52421 、AAA51986、CAI95417、
CAI95416、CAI42103 、CAI41386 、CAI41385、CAI41382、
CAI41381、AAI30469 、AAH27963 、EAX09185、EAX09184、
EAX09183、EAX09182 、EAX04621 、EAX04620、ABJ51930、
ABJ51929、ABJ51928 、ABJ51927 、ABJ51926、ABJ51925、
32ABJ51924 、ABJ51923 、ABJ51922 、ABJ51921 、ABJ51931、
ABI26644 、BAA20295 、ABF69029 、ABF69028 、ABF69027、
ABF69026 、ABF69025 、ABF69024 、ABF69023 、ABF69022、
ABF69021 、ABF69020 、ABF69019 、ABF69018 、ABF69017、
ABF69016 、ABF69015 、ABF69013 、ABF69012 、ABF69011、
ABF69010 、ABF69009 、ABF69007 、ABF69006 、ABF69005、
CAA48315 、CAA48314 、ABK19831 、ABK19830 、ABK19829、
ABK19827、 ABJ55913、 ABJ55912、 ABJ55910、 ABJ55909，或本領(lǐng)域技 術(shù)人員已知的其他那些，或其同系物或變體，或其組合。
在一個實施方案中，所述方法進(jìn)一步包括給所述受試者施用促進(jìn) 或增強(qiáng)凝血因子或其他止血劑的產(chǎn)生的試劑，其在一個實施方案中， 是編碼所述凝血因子的核酸，其在另一個實施方案中，編碼凝血因子 VIII。
在某些實施方案中，編碼凝血因子VIII的核酸是載體，其包含凝 血因子VIII重鏈的前57個堿基對，例如如在美國專利申請^^開號 20050276787中所描述的。在某些實施方案中，所述載體將包含全長人 凝血因子VIII,例如如在美國專利號4， 757, 006中，或者在Toole等人， Nature 312:312-317， 1984; Wood等人，Nature 312:330-337， 1984; Vehar等人，Nature 312:337-342， 1984, WO 87/04187， WO 88/08035 和WO 88/03558，美國專利號4， 868， 112; EP 0 786 474; WO 86/06101; WO 87/07144中所描述的，以及本領(lǐng)域已知的其他那些。
在某些實施方案中，可以通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方 法(例如轉(zhuǎn)染)來將載體和構(gòu)建體引入細(xì)胞中。許多轉(zhuǎn)染技術(shù)是本領(lǐng) 域普遍已知的(參見例如，Graham等人，Virol., 52:456 [1973]; Sambrook等人，同上；Davis等人，同上；和Chu等人，Gene 13:197 [1981])。特別合適的轉(zhuǎn)染方法包括磷酸鈣共沉淀法(Graham等人， Virol. ， 52: 456-467 [1973])、直接顯微注射到培養(yǎng)的細(xì)胞中 (Capecchi， Cell 22: 479-488 [1980〗)、電穿孔(Shigekawa等人， BioTechn.， 6: 742-751 [1988])、脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移(Mannino
33等人，BioTechn., 6: 682-690 [1988〗、脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)(Feigner等 人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7413-7417 [1987])和l吏用高 速微粒發(fā)射技術(shù)的核酸遞送(Klein等人，Nature 327: 70-73 [1987〗)。
在某些實施方案中，可以通過任何方法來檢驗?zāi)蜃覸III的表 達(dá)和活性，例如Western印跡分析、Northern印跡分析、Southern印跡 分析、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(例如SDS-PAGE)、逆轉(zhuǎn)錄酶-偶聯(lián)的 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、酶聯(lián)免疫吸附測定法ULISA)、放射免 疫測定法(RIA)和熒光免疫測定法UFA)。
在另一個方面，所述凝血因子是凝血因子VII或其變體或衍生物。 在某些實施方案中，所述凝血因子VIIa(術(shù)語凝血因子VII和凝血因子 VIIa在本文中在一定程度上可互換使用，應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，在本發(fā)明的方 法/組合物中可以使用/摻入任何合適形式的凝血因子，通常使用/摻入 活性形式)是人凝血因子VIIa，如例如在美國專利號4， 784， 950中以該 文獻(xiàn)的SEQIDNO: 1而/>開的(野生型凝血因子VII)。如已經(jīng)記述的， 術(shù)語"凝血因子vn，，意欲包括以其未切割(酶原)形式存在的凝血因 子VII多肽，以及已經(jīng)歷了蛋白水解加工從而產(chǎn)生其相應(yīng)的生物活性形 式(其可以稱為凝血因子VIIa)的那些。通常，人凝血因子VII在殘基 152和153之間進(jìn)行切割，從而產(chǎn)生凝血因子VIIa。
在另一個實施方案中，將CPAM試劑與凝血因子VII類似物或變體 (術(shù)語相似物、類似物和變體在本文中可互換使用)相組合。FVII變 體可以是與野生型FVII相差一個或多個插入、缺失、添加等的任何變 體(通常，變體將與野生型人FVII氨基酸序列具有至少約85。/。、至少約 90%、至少約95%、至少約97%或更高的同一性，并且至少基本上保留與 人FVII類似的一些酶促活性)。凝血因子VII/凝血因子VIIa (FVIIa) 變體的非限制性例子包括S52A; S60A;在美國專利號5， 580， 560中/>開 的展示出增加的蛋白水解穩(wěn)定性的FVIIa變體；在PCT/DK02/00189中公 開的凝血因子VII變體；在WO 02/38162中公開的展示出增加的蛋白水 解穩(wěn)定性的凝血因子VII變體；在WO 99/20767中公開的具有經(jīng)修飾的 Gla-結(jié)構(gòu)域且展示出增強(qiáng)的膜結(jié)合的凝血因子VII變體；和在WO01/58935; WO 01/83725; WO 02/22776; WO 02/077218; PCT/DK02/00635; 丹麥專利申請PA 2002 01423;丹麥專利申請PA 2001 01627; WO 0V3816Z中公開的凝血因子VII變體；在JP 2001061479中公開的具有 增強(qiáng)的活性的FVIIa變體；和缺乏Gla結(jié)構(gòu)域的凝血因子VIIa (Nicolaisen等人，F(xiàn)EBS Letts. 317: 245-249， 1993 )。另外的修^ 飾的進(jìn)一步非限制性例子包括R152E; S344A; L305V; L305V/M306D/D309S; L305I, L305T， F374P， V158T/M298Q， V158D/E296V/M298Q, K337A, M298Q, V158D/M298Q， L305V/K337A， V158D/E296V/M298Q/L305V, V158D/E296V/M298Q/K337A， V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A， K157A， E296V， E296V/M298Q， V158D/E296V, V158D/M298K，和S336G， L305V/K337A, L305V/V158D， L305V/E296V， L305V/M298Q, L305V/V158T， L305V/K337A/V158T， L305V/K337A節(jié)8Q， L305V/K337A/E296V， L305V/K337A/V158D， L305V/V158D/M298Q， L305V/V158D/E296V， L305V/V158T/M298Q， L305V/V158T/E296V， L305V/E296V/M298Q， L305V/V158D/E296V/M298Q， L305V/V158T/E296V/M298Q, L305V/V158T/K337A/M298Q， L305V/V158T/E296V/K337A， L305V/V158D/K337A/M298Q， L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，
L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A，
L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A， S314E/K316H， S314E/K316Q， S314E/L305V, S314E/K337A， S314E/V158D, S314E/E296V， S314E/M298Q, S314E/V158T， K316H/L305V， K316H/K337A， K316H/V158D， K316H/E296V， K316H/M298Q， K316H/V158T， K316Q/L305V， K316Q/K337A， K316Q/V158D， K316Q/E296V, K316Q/M298Q， K316Q/V158T, S314E/L305V/K337A， S314E/L305V/V158D， S314E/L305V/E296V， S314E/L305V/M298Q， S314E/L305V/V158T， S314E/L305V/K337A/V158T， S314E/L305V/K337A/M298Q， S314E/L305V/K337A/E296V， S314E/L305V/K337A/V158D， S314E/L305V/V158D/M298Q,S314E/L305V/V158D/E296V， S314E/L305V/V158T/M298Q，
S314E/L305V/V158T/E296V， S314E/L305V/E296V/M298Q，
S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q，
S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q，
S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q，
S314E/L305V/V158T/E296V/K337A，
S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q，
S314E/L305V/V158D/E296V/K337A，
S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A，
S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, K316H/L305V/K337A， K316H/L305V/V158D, K316H/L305V/E296V, K316H/L305V/M298Q, K316H/L305V/V158T， K316H/L305V/K337A/V158T, K316H/L305V/K337A/M298Q， K316H/L305V/K337A/E296V， K316H/L305V/K337A/V158D， K316H/L305V/V158D/M298Q， K316H/L305V/V158D/E296V, K316H/L305V/V158T/M298Q， K316H/L305V/V158T/E296V， K316H/L305V/E296V/M298Q， K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q， K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q， K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q， K316H/L305V/V158T/E296V/K337A， K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q， K316H/L305V/V158D/E296V/K337A， K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A，
K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, K316Q/L305V/K337A， K316Q/L305V/V158D， K316Q/L305V/E296V, K316Q/L305V節(jié)8Q， K316Q/L305V/V158T， K316Q/L305V/K337A/V158T, K316Q/L305V/K337A/M298Q， K316Q/L305V/K337A/E296V， K316Q/L305V/K337A/V158D， K316Q/L305V/V158D/M298Q， K316Q/L305V/V158D/E296V, K316Q/L305V/V158T/M298Q，
36K316Q/L305V/V158T/E296V， K316Q/L305V/E296V/M298Q， K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q， K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q， K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q， K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A, K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q, K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A， K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A， K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A, F374Y/K337A， F374Y/V158D, F374Y/E296V， F374Y/M298Q， F374Y/V158T， F374Y/S314E, F374Y/L305V, F374Y/L305V/K337A, F374Y/L305V/V158D， F374Y/L305V/E296V， F374Y/L305V/M298Q， F374Y/L305V/V158T， F374Y/L305V/S314E， F374Y/K337A/S314E， F374Y/K337A/V158T, F374Y/K337A/M298Q， F374Y/K337A/E296V, F374Y/K337A/V158D， F374Y/V158D/S314E， F374Y/V158D/M298Q， F374Y/V158D/E296V， F374Y/V158T/S314E， F374Y/V158T/M298Q, F374Y/V158T/E296V， F374Y/E296V/S314E， F374Y/S314E/M298Q, F374Y/E296V/M298Q, F374Y/L305V/K337A/V158D, F374Y/L305V/K337A/E296V， F374Y/L305V/K337A/M298Q, F374Y/L305V/K337A/V158T， F374Y/L305V/K337A/S314E， F374Y/L305V/V158D/E296V， F374Y/L305V/V158D/M298Q， F374Y/L305V/V158D/S314E， F374Y/L305V/E296V/M298Q， F374Y/L305V/E296V/V158T, F374Y/L305V/E296V/S314E， F374Y/L305V/M298Q/V158T， F374Y/L305V/M298Q/S314E， F374Y/L305V/V158T/S314E， F374Y/K337A/S314E/V158T， F374Y/K337A/S314E/M298Q， F374Y/K337A/S314E/E296V, F374Y/K337A/S314E/V158D， F374Y/K337A/V158T/M298Q, F374Y/K337A/V158T/E296V, F374Y/K337A/M298Q/E296V， F374Y/K337A/M298Q/V158D， F374Y/K337A/E296V/V158D，
37F374Y/V158D/S314E/M298Q， F374Y/V158D/S314E/E296V，
F374Y/V158D/M298Q/E296V， F374Y/V158T/S314E/E296V，
F374Y/V158T/S314E/M298Q， F374Y/V158T/M298Q/E296V，
F374Y/E296V/S314E/M298Q， F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E，
F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E,
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F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E，
F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E，
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F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T，
F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E，
F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E,
F374Y/L305V/V158D/E296V節(jié)8Q/K337A，
F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E，
F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E，
F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E，
F374Y/L305V/V158D/E296V節(jié)8Q/K337A/S314E; R152E， S3楊；
P11Q/K33E， T106N, V253N, R290N/A292T， G291N, R315N/V317T,
K143N/R315N/V317T;在從T233到N240的氨基酸序列中具有置換、添加
或缺失的FVII;和在從R304到C329的氨基酸序列中具有置換、添加或
缺失的FVII。
凝血因子VIIa衍生物的非限制性例子包括其上附著有聚乙二醇 (PEG)聚合物、?；?、磷酸酯或硫酸酯基團(tuán)等的野生型和類似物凝血 因子VIIa多肽。凝血因子VIIa衍生物還可以包括包含已進(jìn)行了化學(xué)或 酶促修飾的N-聯(lián)或O-聯(lián)寡糖的凝血因子VI I多肽，或已經(jīng)歷了蛋白水解 切割的凝血因子VIIa (野生型或類似物)多肽。凝血因子VII衍生物的 非限制性例子包括在WO 03/31464以及美國專利申請US 20040043446、 US 20040063911、 US 20040142856、 US 20040137557和US 20040132640 (Neose Technologies, Inc.)中公開的糖PEG化的FVII衍生物；在 WO 02/077218、 US 20030044908 ( Novo Nordisk A/S ) ; WO 01/04287、 美國專利申請20030165996、WO 01/58935、 WO 03/93465( Maxygen ApS ); 和WO 02/02764 、 美國專利申請20030211094 (University of Minnesota)中公開的FVII綴合物。
在一個實施方案中，所述CPAM試劑取消或減少C5a表達(dá)、C5a與關(guān) 聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含取消或減 少補體途徑的激活的試劑以及凝血因子或其他止血劑。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含取消或減
在一個實施方案中，所述CPAM試劑是生物學(xué)試劑，其在一個實施 方案中是抗體，或者在另一個實施方案中是寡肽。在另一個實施方案
中，所述凝血因子是凝血因子vni。
在另一個實施方案中，所述CPAM試劑取消或減少C5a表達(dá)、C5a與 關(guān)聯(lián)受體的結(jié)合、C5a受體信號傳導(dǎo)、或其組合。
在另一個實施方案中，所述藥物組合物被配制成用于口服、靜脈 內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)中(局域性的)或局部施用，或者在另一個實施方案 中，所述藥物組合物凈皮配制為可注射制劑。
在某些實施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步提供了本發(fā)明的組合物及其使 用方法，其中所述組合物或方法進(jìn)一步包括一種或多種第二抗炎治療 劑或操作程序，例子包括但不限于合成和非合成的皮質(zhì)類固醇試劑、 非類固醇抗炎藥、抗風(fēng)濕藥、免疫調(diào)節(jié)劑、免疫抑制劑、關(guān)節(jié)功能增 強(qiáng)劑、白介素產(chǎn)生抑制劑、或其組合。皮質(zhì)類固醇試劑的具體例子包 括但不限于，地塞米松、氫化可的松、曲安西龍、倍他米松、潑尼松 龍、曱潑尼龍、囟潑尼松、倍氯米松等。此類試劑的另外例子描述于 例如Romas等人，Rheum Di s CI in North Am. 2006 Nov; 32 (4): 759-73; Zhonghua等人，2006 Nov 21; 86 (43): 3055-8;和Katz等人，Curr Opin Rheumatol. 2007 Mar; 19 (2): 106-110中。
非類固醇抗炎劑的進(jìn)一步具體例子包括但不限于，雙氯芬酸、吲 哚美辛、布洛芬、酮洛芬、阿司匹林、二氯尼柳、氟芬那酸、夫洛非 寧、托芬那酸、舒林酸、芬布芬、水楊酸、阿西美辛、丙谷美辛、萘 丁美酮、丙替溱酸、噻洛芬(thiaprofen)、奧沙普秦、洛索洛芬、 阿明洛芬、扎托洛芬、氟比洛芬、氟比洛芬等。具有技能的從業(yè)人員 將會考慮患者的健康、年齡等，當(dāng)考慮CPAM試劑與抗炎藥的任何組合 時，特別是給定的與這些化合物相關(guān)的已知健康風(fēng)險。
40在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含至少一種吡
唑基苯磺酰胺化合物，例如在美國專利號5， 756， 529和美國專利號 5， 466， 823中所述的那些。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物可以進(jìn) 一步包含可用于治療炎癥和/或疼痛的二芳基取代的吡唑。在某些實施 方案中，本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含治療量的任何類別的二芳基 取代的吡唑類，其同分異構(gòu)體、類似物和/或代謝物。在某些實施方案 中，這些化合物主要經(jīng)由抑制環(huán)加氧酶-2 (C0X-2)來減少炎癥和/或 疼痛。
在某些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含減少炎癥和/或疼痛的 非類固醇試劑，例如塞來考昔、羅非考昔等。
在某些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含醋氧乙、吡羅昔康、 替諾昔康、安吡昔康、美洛昔康、D-青霉胺、布西拉明、金硫丁二鈉、 金諾芬、氯苯扎利、柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、 咪唑立賓、環(huán)孢素等。
在某些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含阿片樣物質(zhì)和其他鎮(zhèn) 痛藥，尤其包括麻醉性鎮(zhèn)痛藥、m受體拮抗劑、K受體拮抗劑、非麻 醉性(即非致癮性)鎮(zhèn)痛藥、單胺攝取抑制劑、腺苷調(diào)節(jié)試劑、大麻 素衍生物、P物質(zhì)拮抗劑、神經(jīng)激肽-l受體拮抗劑和鈉通道阻斷劑。在 某些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含醋氯芬酸、阿西美辛、e-乙 酰氨基己酸、對乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰苯胺、乙酰水楊酸(阿 司匹林)、S-腺苷甲硫氨酸、阿氯芬酸、阿芬太尼、烯丙羅定、阿明 洛芬、阿洛普令、阿法羅定、二(乙酰水楊酸)鋁、氨芬酸、氨氯苯喁 嗪、3-氨基-4-羥基丁酸、2-氨基-4-曱基吡啶、氨丙吡酮、氨基比林、 阿米西群、水楊酸銨、安吡昔康、呱氨托美丁、阿尼利定、安替比林、 水楊酸安替比林、安曲非寧、阿扎丙宗、芐達(dá)酸、貝諾酯、苯喁洛芬、 芐哌立隆、芐達(dá)明、芐嗎啡、柏莫洛芬、貝齊米特、oc-紅沒藥醇、溴 芬酸、p-溴乙酰苯胺、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊醇、布西丁、布氯 酸、布可隆、丁苯羥酸、布馬地宗、丁丙諾菲、布他西丁、布替布芬、 布托啡諾、乙酰水楊酸鈣、卡馬西平、卡比芬、卡洛芬、卡沙蘭、三
41氯叔丁醇、氯西諾溱、水楊酸膽堿、辛可芬、桂美辛、西拉馬朵、環(huán) 氯茚酸、氯美辛、氯尼他秦、氯尼辛、氯吡酸、丁香、可待因、溴曱 可待因、磷酸可待因、硫酸可待因、克羅丙胺、克羅乙胺、地索嗎啡、 右奧沙屈、右嗎拉胺、地佐辛、地恩丙胺、雙氯芬酸鈉、二苯米唑、 聯(lián)苯吡胺、二氟尼柳、雙氫可待因、乙酰二氫可待因酮、雙氫嗎啡、 乙酰水楊酸二羥鋁、地美沙朵、地美庚醇、二甲噻丁、嗎苯丁酯、地 匹哌酮、地匹乙酯、安乃近、地他唑、屈-惡昔康、依莫法宗、苯乙氨 茴酸、依匹唑、依他佐辛、依特柳酯、乙水楊胺、依索庚嗪、依托沙 秦、乙甲噻丁、乙基嗎啡、依托度酸、依托芬那酯、依托尼秦、丁香 酚、聯(lián)苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬太尼、芬 替酸、非普地醇、非普拉宗、夫洛非寧、氟芬那酸、氟諾洛芬、氟苯 乙砜、氟吡汀、氟丙喹宗、氟比洛芬、磷柳酸、龍膽酸、格拉非寧、 葡美辛、乙二醇水楊酸酯、愈創(chuàng)藍(lán)油烴、氫可酮、氫嗎啡酮、羥哌替 啶、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、水楊酸咪唑、吲哚美辛、吲哚洛 芬、三苯唑酸、依索拉醇、異美沙酮、異尼辛、伊索克酸、伊索昔康、 凱托米酮、酮洛芬、酮咯酸、對-乳酰乙氧苯胺、利非他明、左啡諾、 洛芬太尼、氯那唑酸、氯諾昔康、洛索洛芬、賴氨酸乙酰水楊酸、乙 酰水楊酸鎂、甲氯芬那酸、曱芬那酸、麥啶、美普他酚、美沙拉秦、 美他佐辛、鹽酸美沙酮、左美丙嗪、甲嗪酸、甲氧夫啉、美托酮、莫 非布宗、莫苯唑酸、嗎拉宗、嗎啡、鹽酸嗎啡、硫酸嗎啡、水楊嗎啉、 麥羅啡、萘丁美酮、納布啡、水楊酸l-萘酯、萘普生、那碎因、奈福
泮、尼可嗎啡、尼芬那宗、尼氟酸、尼美舒利、5'-硝基-r-丙氧基乙 酰苯胺、去甲左啡諾、去曱美沙酮、去甲嗎啡、諾匹哌酮、奧沙拉秦、 阿片、奧沙西羅、奧沙美辛、奧沙普秦、羥考酮、羥嗎啡酮、羥布宗、 阿片全堿、瑞尼托林、帕沙米特、噴他佐辛、哌立索唑、非那西丁、 苯嗎庚酮、非那佐辛、鹽酸非那吡啶、非諾可、苯哌利定、非諾吡酮、 乙酰水楊酸苯酯、保泰松、水楊酸苯酯、非尼拉朵、吡酮洛芬、匹米 諾定、哌布宗、哌立酮、吡洛芬、吡拉唑酸、哌腈咪特、吡羅昔康、 普拉洛芬、丙谷美辛、普羅庚嗪、Y-二甲哌替啶、丙帕他莫、丙吡蘭、
42右丙氧芬、異丙安替比林、普羅喹宗、丙替嗪酸、雷米那酮、瑞芬太 尼、甲硫利馬唑、醋水楊胺、水楊苷、水楊酰胺、水楊酰胺鄰-乙酸、 水楊基硫酸、雙水楊酯、沙維林、西美曲特、水楊酸鈉、舒芬太尼、 柳氮磺吡啶、舒林酸、超氧化物歧化酶、舒洛芬、琥布宗、他尼氟酯、 替尼達(dá)普、替諾昔康、特羅芬那酯、粉防己堿、噻唑丁炎酮
(thiazolinobutazone)、塞洛芬酸、漆拉米特、替利定、替諾立定、 托芬那酸、托美丁、曲馬多、托匹星、維米醇、聯(lián)苯丁酸、希莫洛芬、 扎托洛芬和佐美酸(參見The Merck Index,第12版，Therapeutic Category and Biological Activity Index, 編輯S. Budavari (1996) pp. Ther-2至Ther-3和Ther-12 (Analgesic (Dental), Analgesic (Narcotic), Analgesic (Non-narcotic)， Anti-inflammatory (Nonsteroidal))。
根據(jù)本發(fā)明的化合物和藥物制劑可以與 一種或多種其他治療劑組 合使用，或者包括一種或多種其他治療劑，所述其他治療劑例如選自 本文所描述的抗炎劑、抗膽堿能劑(特別是M1、 M2、 M1/M2或M3受體拮 抗劑)、P2-腎上腺素受體激動劑、抗感染劑(例如抗生素、抗病毒 劑)、抗組胺劑、或其任何組合。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了 抑制或干擾補體途徑的試劑連同一種或多種其他治療活性試劑一起的 組合，所述其他治療活性試劑例如為凝血因子，和/或任選地抗炎劑(例 如皮質(zhì)類固醇或NSAID),抗膽堿能劑，P 2-腎上腺素受體激動劑，抗 感染劑(例如抗生素或抗病毒劑)，或抗組胺劑，或皮質(zhì)類固醇，或 抗膽堿能藥，或PDE-4抑制劑，或其任何組合。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，適當(dāng)時，所述治療成分可以 以鹽的形式(例如，堿金屬或胺鹽，或作為酸加成鹽)、或以前體藥 物的形式、或作為酯(例如，低級烷基酯)、或作為溶劑化物(例如， 水合物)進(jìn)行使用，以優(yōu)化治療成分的活性和/或穩(wěn)定性和/或物理特 征(例如溶解性)。還顯而易見的是，適當(dāng)時，所述治療成分可以以 光學(xué)上純的形式進(jìn)行使用。
P 2-腎上腺素受體激動劑的例子包括沙美特羅(其可以是外消旋
43物或單種對映體，例如R-對映體)、沙丁胺醇、福莫特羅、沙甲胺醇、非諾特羅或特布他林及其鹽，例如沙美特羅的昔萘酸鹽、沙丁胺醇的硫酸鹽或游離堿、或者福莫特羅的富馬酸鹽。長效P2-腎上腺素受體激動劑是優(yōu)選的，尤其是具有超過24小時時間段的療效的那些，例如
沙美特羅或福莫特羅。
在某些實施方案中，P2-腎上腺素受體激動劑包括在W002/66422A 、 WO02/270490 、 WO02/076933 、 W003/024439 、WO03/072539 、 WO03/091204 、 WO04/016578 、 W004/022547 、WO04/037807 、 WO04/037773 、 WO04/037768 、 WO04/039762 、WO04/039766、 WO01/42193和WO03/042160中描述的那些，這些專利的7>開內(nèi)容通過提及而合并入本文。
在某些實施方案中，P2-腎上腺素受體激動劑是
3- (4- {[6- ( {(2R) -2-羥基-2- [4-羥基-3- (羥甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧基} 丁基)苯磺酰胺；3- (3- {[7- ({(2R) -2-羥基-2- [4-羥基-3-
羥曱基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧基}丙基)苯磺酰胺；
4- {(1R) -2- [ (6- {2- [ (2， 6-二氯爺基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-l-羥乙基} -2 (羥曱基)苯酚；4- {(1R) -2- [ (6- {4- [3-(環(huán)戊基磺?；?苯基]丁氧基}己基)氨基]-1-羥乙基}-2-(羥甲基)苯酚；N-[2-羥基-5- [ (1R) -1-羥基-2- [ [2-4- [ [ (2R) -2-羥基-2-苯乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]曱酰胺,N-2-U-[4-(3-苯基-4-曱氧基苯基)氨基苯基]乙基}_2-羥基-2-(8-羥基-2(lH)-喹啉酮-5-基)乙胺，或其組合。
在某些實施方案中，皮質(zhì)類固醇可以包括甲潑尼龍、潑尼松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6ot，9oc-二氟-17a-[(2-呋喃基羰基)氧基]-ll P -羥基-16 a-甲基-3-氧代-雄烷-1， 4-二烯-17 P -硫代羧酸S-氟甲基酯、6 a ， 9 a -二氟-11 P -羥基-l 6 a -甲基-3-氧代-l 7 a -丙酰氧基-雄烷-1, 4-二烯-17 P -硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、6a ， 9 a -二氟-ll P -羥基-16 oc -甲基-17 a - (l-甲基環(huán)丙基羰基)氧基-3-氧代-雄烷-l， 4-二烯-17 P -硫代羧酸S-氟曱基酯、6 a ， 9 a-二氟-11 P-羥基-16a-曱基-3-氧代-17a-(2，2, 3， 3-四甲基環(huán)丙基羰基)
44氧基-雄烷-1， 4-二烯-17 P -羧酸氰甲酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17,21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如糠酸酯)、曲安奈德、羅氟奈德、環(huán)索奈德、(16 ot ， 17- [ [ (R) -環(huán)己基亞甲基]二 (氧基)]-ll P ， 21-二羥基-孕烷-1， 4-二烯-3， 20-二酮)、丙酸布替可特、RPR-106541和ST-126。優(yōu)選的皮質(zhì)類固醇包括丙酸氟替卡松、6 ot ， 9a -二氟-11 p -羥基-l 6 a -甲基-17 ot - [ (4-甲基-1 ， 3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄烷-1， 4-二烯-17 P -硫代羧酸S-氟曱基酯和6 oc ， 9 ot -二氟-l 7 a - [ (2-呋喃基羰基)氧基]-11 P -羥基-l 6 ot -曱基-3-氧代-雄烷-1，4-二烯-17 P-硫代羧酸S-氟甲基酯，更優(yōu)選6oc，9ct-二氟-17a-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11 P -羥基-16 oc -曱基-3-氧代-雄烷-l， 4-二烯-17 p -硫代羧酸S-氟甲基酯。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用具有糖皮質(zhì)激素激動作用的非類固醇化合物，其可以具有相對于反式激活而言對于反式阻抑的選擇性，例如在W003/082827 、 W001/10143 、WO98/54159、WO04/005229、WO04/009016、W004/009017、 W004/018429、WO03/104195 、 WO03/082787 、 WO03/082280 、 WO03/059899 、WO03/101932、 W002/02565、 WO01/16128、 WO00/66590、 WO03/086294、W004/026248、 W003/061651、 WO03/08277中^^開的化合物，這些專利通過提及而全部合并入本文。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用非類固醇抗炎藥(NSAID's)，例如色甘酸鈉、奈多羅米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如，茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑、白三烯合成的抑制劑(例如，孟魯司特)、iNOS抑制劑、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、P-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動劑或拮抗劑(例如，腺苷2a激動劑)、細(xì)胞因子拮抗劑(例如，趨化因子拮抗劑，例如CCR3拮抗劑)或細(xì)胞因子合成的抑制劑、或5-脂加氧酶抑制劑。合適的其他P 2-腎上腺素受體激動劑包括沙美特羅(例如，作為昔萘酸鹽)、沙丁胺醇(例如，作為硫酸鹽或游離堿)、福莫特羅(例如，作為富馬酸鹽)、非諾特羅或特布他林及其鹽。iNOS
45(誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑)優(yōu)選用于口服施用。合適的iNOS抑制劑包括在W093/13055 、 WO98/30537 、 WO02/50021 、 W095/34534和W099/62875中公開的那些。合適的CCR3抑制劑包括在W002/26722中公開的那些。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用磷酸二酯酶4 ( PDE4 )抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑，例如順-4-氰基-4-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-l-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-環(huán) 丙基 甲 氧基-4-二氟曱氧基苯基)環(huán)己烷-l-酮和順-[4-氰基-4- (3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟曱氧基苯基)環(huán)己烷-l-醇]。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用美國專利號5， 552， 438中所述的化合物；Hofgen， N.等人，15thEFMCInt. S卿.Med. Chem. (September 6-10, Edinburgh) 1998， Abst. P. 98; CAS參考號247584020-9 )的那種；命名為NCS-613的9-節(jié)基腺噤呤衍生物(INSERM);來自Chiroscience and Schering-Plough的D-4418;鑒定為C1-1018 (PD-168787 )并且歸屬于Pfizer的苯并二氮雜萆PDE4抑制劑；由Kyowa Hakko在W099/16766中公開的苯并間二氧雜環(huán)戊烯衍生物；來自Kyowa Hakko的K-34;來自Napp的V-11294A ( LandelIs, L. J.等人，Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc (September 19-23，Geneva) 1998] 1998， 12 (Suppl. 28): AbstP2393 );來自Byk-Gulden的羅氟司特(CAS參考號162401-32-3 )， 二氮雜萘酮聯(lián)苯(W099/47505，其公開內(nèi)容通過提及而合并入本文)；作為混合的PDE3/PDE4抑制劑的普馬芬群，(-)-p- [ (4aR*， 1 ObS*) -9-乙氧基-1， 2， 3， 4， 4a， 1 Ob-六氫-8-曱氧基-2-曱基苯并[(;][1，6]萘啶-6-基]-N,N-二異丙基苯曱酰胺，其已由Byk-Gulden (現(xiàn)在的Altana )制備并公開；處于Almirall-Prodesfarma的開發(fā)下的阿羅茶堿；來自Vernalis的VM554/而65;或T-440 ( Tanabe Seiyaku; Fuji, K.等人，J PharmacolExp Ther， 1998， 284 (1): 162 )，和T2585。其他可能的PDE-4和混合的PDE3/PDE4抑制劑包括在WO01/13953中列出的那些，所述專利的公開內(nèi)容通過提及而合并入本文。在某些實施方案中，所迷組合物包含或者所述方法利用本文所描述的試劑的任何組合。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用抗膽堿能劑，例如顛茄植物的生物堿，如由諸如阿托品、東菜菪堿、后馬托品、
茛菪堿所舉例說明的；這些化合物通常作為鹽(為叔胺)進(jìn)行施用。這些藥物，特別是鹽形式，可容易地從許多商業(yè)來源獲得或者可以根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行制造或制備，例如阿托品一CAS-51-55-8或CAS-51-48-1
(無水形式)、疏酸阿托品一CAS-5908-99-6 ; 氧阿托品一CAS-4438-22-6 ，或其鹽酸鹽一 CAS-4574-60-l ，和曱硝阿托品一CAS-52-88-0;后馬托品一CAS-87-00-3，氫溴酸鹽一CAS-51-56-9，溴甲烷鹽一CAS-80-49-9;策菪堿(d， 1) 一CAS-101-31-5，氫溴酸鹽—CAS-306-03-6和硫酸鹽一CAS-6835-16-l ; 和東茛菪堿一CAS-51-34-3，氫溴酸鹽一CAS-6533-68-2，溴甲烷鹽一CAS-155-41-9。在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用抗膽堿能藥，例如但不限于以名稱Atrovent進(jìn)行銷售的異丙阿托品(例如，作為溴化物)、氧托品(例如，作為溴化物)和噻托品(例如，作為溴化物)(CAS-139404-48-1 )。還令人感興趣的是曱胺太林
(CAS-5 3-46-3 )、溴丙胺太林(CAS-50-34-9 )、甲溴辛托品或Valpin50( CAS-80-50-2 )、克利溴銨(Quarzan， CAS-3485-62-9 )、 copyrrolate
(Robinul)、異丙碘銨(CAS-H-81-8 )、溴美噴酯(美國專利號2, 918, 408 )、曲地氯銨(Pathilone， CAS-4310-35-4 )和甲硫己環(huán)銨(Tral， CAS-115-63-9)。還可參見鹽酸環(huán)噴托酯(CAS-5870-29-l)、托吡卡胺(CAS-1508-75-4 )、鹽酸苯海索(CAS-144-11-6 )、哌侖西平(CAS-29868-97-1 )、替侖西平(CAS-80880-90-9 ) 、 AF-DX 116、或美索托明，以及在WO 01/04118中公開的化合物，所述專利的公開內(nèi)容通過提及而合并入本文。
在某些實施方案中，所述組合物包含或者所述方法利用抗組胺劑
(也稱為Hl-受體拮抗劑)，其可以包括抑制Hl-受體的已知的眾多拮抗劑中的任何一種或多種，并且對于人使用是安全的。在某些實施方案中，此類化合物包括乙醇胺類、乙二胺類和烷基胺類，例如但不限
47于馬來酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸二苯基羥基胺、和茶苯海明、馬來酸美吡拉敏、鹽酸曲吡那敏、和檸檬酸曲吡那敏、氯非尼拉敏及其鹽例如馬來酸鹽、和阿伐斯汀、鹽酸羥溱、雙羥萘酸羥溱、鹽酸賽克力嗪、乳酸賽克力溱、鹽酸美克洛溱、和鹽酸西替利溱、阿司
咪唑、鹽酸左卡巴斯汀、氯雷他定或其脫羧乙氧基Uescarboethoxy)類似物、和特非那定和鹽酸非索非那定或另一種藥學(xué)上可接受的鹽、鹽酸氮萆斯汀，或者本文所述的試劑的任何組合。
上文提及的組合可以方便地被提供用于以藥物制劑的形式進(jìn)行使用，并因此包含如上定義的組合以及生理學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的藥物制劑代表了本發(fā)明的進(jìn)一步方面。
本發(fā)明的化合物和/或任何次級試劑(例如，止血劑和/或凝血因子)可以用適合于所示施用途徑(和所打算的貯存等)的許多合適的載體、稀釋劑、賦形劑等(參見例如，Powell等人，"Compendium ofexcipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol.52:238-311 (1998)——術(shù)語"媒介物"和"載體"在本發(fā)明的描述的自始至終可以用于所有全體地以及通過提及而獨立地指每種此類類型的試劑)和/或功能增強(qiáng)劑(例如穩(wěn)定劑、表面活性劑、濕潤劑、乳化劑、防腐劑、填充劑、鹽、增溶劑、去污劑、抗聚集劑(例如抗聚集氨基酸制劑)、分散介質(zhì)、等滲劑、組織固定劑(tissue fixatives)、螯合劑、緩沖劑、抗菌劑、抗氧化劑、著色劑、調(diào)味劑、吸收延遲劑、控釋試劑等)進(jìn)行配制。此類另外的成分一般這樣進(jìn)行選擇，以便不會不利地影響根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑的總體穩(wěn)定性。合適的載體、稀釋劑、佐劑以及功能增強(qiáng)劑，和此類組合物的施用/配制方式是制藥學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的。參見例如,Remington: The Science and Practiceof Pharmacy,第19版，1995。還參見例如，Berge等人，J. Pharm.ScL， 6661 ). 1-19 (1977); Wang和Hanson, J. Parenteral. Sci.Tech: 42， S4-S6 1988)，美國專利6， 165， 779和6， 225， 289。另外的相關(guān)原理、方法和試劑例如描述于下列參考文獻(xiàn)中Urquhart等人，Lancet, 16, 367 (1980)， Lieberman等人，PHARMACEUTICAL DOSAGE
48FORMS-DISPERSE SYSTEMS (第2版，第3巻，1998); Ansel等人， PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS & DRUG DELIVERY SYSTEMS (第7版， 2000); Martindale， THE EXTRA PHARMACOPEIA (第31版)，Remington's PHARMACEUTICAL SCIENCES (第16-20版);The Pharmacological Basis Of Therapeutics, Goodman和Gilman,編輯(第9版- 1996); Wilson and Gisvoids' TEXTBOOK OF ORGANIC MEDICINAL AND PHARMACEUTICAL CHEMISTRY, Delgado和Remers，編輯(第IO版-1998),以及美國專 利5， 708， 025和5， 994， 106。配制藥學(xué)上可接受的組合物的原理也描述 于例如Platt， Clin. Lab Med. ， 7:289-99 (1987)， Aulton， PHARMACEUTICS: THE SCIENCE OF DOSAGE FORM DESIGN, Churchill Livingstone (New York) (1988) ， EXTEMPORANEOUS ORAL LIQUID DOSAGE PREPARATIONS, CSHP (1998)，和"Drug Dosage, " J. Kans. Med. Soc.， 70(1)， 30-32 (1969)中。
本發(fā)明的組合物可以以任何合適的形式進(jìn)行配制，例如液體、半 固體和固體劑型，例如液體溶液(例如，可注射和可輸注的溶液)、 分散體或懸浮液等。關(guān)于任何組合物而言的最佳形式依賴于所期望的 施用方式、所述組合物或組合的性質(zhì)、和治療應(yīng)用或其他預(yù)期用途。 用于遞送本發(fā)明的組合物的通常方式是通過腸胃外施用(例如靜脈內(nèi) 施用)。在一個方面，本發(fā)明的組合物通過靜脈內(nèi)輸注或注射而施用 給人患者。注射可以4吏用例如雙桶注射器(dual barrel syringe)或 其他合適的裝置來完成?？赡芎线m的遞送裝置的例子描述于例如美國 專利號5， 104， 375、 4， 359， 049、 4， 631， 055和4， 874， 368中。其他合適 的遞送裝置包括移液管。
藥學(xué)上可接受的組合物通常是無菌的，溶解了足夠量的本發(fā)明的 化合物(和任何存在的次級試劑)，在用于制造和貯存的條件下是穩(wěn) 定的，并且對于用于所提議的應(yīng)用的受試者是無害的(或者至少對于 許多，常常是基本上大多數(shù)(至少約70y。、 80°/。、 85%、 90°/。、 95%、 97%、 98%、 99%等)的類似受試者是無害的，如可以通過例如臨床試驗所測 定的)?？梢詫τ杀景l(fā)明所提供的(和/或在本文其他地方所描述的各
49種方法中所使用的)組合物實施常規(guī)的制藥學(xué)操作，例如滅菌、純化 等(從而使得其活性成分可以^皮視為至少基本上分離的或分離的)。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所述藥物制劑是水性制劑，即包含 水的制劑。此類制劑通常是溶液或懸浮液。在本發(fā)明的一個進(jìn)一步的 實施方案中，所述藥物制劑是水溶液。術(shù)語"水性制劑"被定義為包
含至少5(^w/w的水的制劑。同樣地，術(shù)語"水溶液"被定義為包含至 少50。/。w/w的水的溶液，并且術(shù)語"水懸浮液"被定義為包含至少50。/。w/w 的水的懸浮液。
在另一個實施方案中，所述藥物制劑是經(jīng)冷凍干燥的制劑，在使 用前醫(yī)生或患者向其添加溶劑和/或稀釋劑。
可注射藥學(xué)產(chǎn)品通常被視為是"對于治療應(yīng)用而言可接受的"， 如果它是無菌、基本上無熱原的，并且不具有醫(yī)學(xué)上不可接受的效應(yīng)。 例如，當(dāng)注射到人受試者中時，該產(chǎn)品不應(yīng)產(chǎn)生醫(yī)學(xué)上不可接受的免 疫反應(yīng)。醫(yī)學(xué)上不可接受的效應(yīng)可以由醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的技術(shù)人員來確定。 通過純化所述組合物的組分，根據(jù)本文描述和本領(lǐng)域已知的原理配制 此類組分，并且使用標(biāo)準(zhǔn)測試操作程序，無需過度實驗或努力即可獲 得符合本文描述的這些和/或其他特征的組合物。
由本發(fā)明所提供的聯(lián)合療法的各化合物可以在分開或組合的藥物 制劑中順次或同時施用。已知的治療劑的合適劑量將會被容易地意識 到或者可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用常規(guī)實驗來測定。
在一個實施方案中，所述試劑作為藥物組合物的一部分進(jìn)行施用， 所述藥物組合物在一個實施方案中被配制成用于口服、靜脈內(nèi)或局部 施用，或者在另一個實施方案中被配制為可注射制劑。應(yīng)當(dāng)理解，本 發(fā)明考慮并且包括任何施用途徑，以及用于組合物的特定施用途徑以 及關(guān)于本發(fā)明方法的任何制劑。
在某些實施方案中，所述組合物及其在本發(fā)明中的使用允許摻入 賦形劑，在某些實施方案中，所述賦形劑是固體或液體或兩者。包含 賦形劑的本發(fā)明的組合物可以通過任何藥劑學(xué)技術(shù)來制備，所述藥劑 學(xué)技術(shù)包括將賦形劑與所需的試劑相混合。適合于頰或舌下施用的組合物包括例如，在調(diào)味基質(zhì)(例如蔗糖
和阿拉伯膠或黃蓍膠)中包含選擇的所述試劑的糖錠劑(lozenge), 以及在惰性基質(zhì)(例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠)中包含所述試 劑的軟錠劑(pastille)。
用于口服施用的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的懸浮液、糖漿劑和 酏劑，其包含本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑例如水。此類組合物還可 以包含例如濕潤劑、乳化劑和懸浮劑，以及甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑。
用于口服施用的固體單位劑型包含所需的試劑(包括以納米顆粒 形式)以及賦形劑，并且最方便地被配制為片劑或膠囊。下面為可以 用于制備本發(fā)明的藥物組合物的賦形劑的非限制性例子。
本發(fā)明的組合物任選地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑作 為賦形劑。舉例來說，合適的稀釋劑單獨或組合地包括乳糖，包括 無水乳糖和乳糖一水合物；淀粉，包括可直接壓縮的淀粉和水解淀粉 (例如CelutabTM和EmdexTM);甘露醇；山梨糖醇；木糖醇；右旋糖(例 如CereloseTM 2000 )和右旋糖一水合物；二堿價磷酸鈣二水合物；基 于蔗糖的稀釋劑；糖果劑的糖(confectioner's sugar); —堿價石危 酸釣一水合物；硫酸鈣二水合物；顆粒狀乳酸鈣三水合物；葡萄糖結(jié) 合劑；肌醇；水解的谷類固體；直鏈淀粉；纖維素，包括微晶纖維素、 ot和無定形纖維素(例如，Rexcel )的食品級來源以及粉狀纖維素； 碳酸鈣；甘氨酸；膨潤土；聚乙烯吡咯烷酮等。此類稀釋劑，如果存 在，總共構(gòu)成約5%-約99%，優(yōu)選地約10°/ -約85%，和更優(yōu)選地約20%-約80%的所述組合物的總重量。所選擇的稀釋劑優(yōu)選地展示出合適的流 動性質(zhì)，并且當(dāng)需要片劑時具有可壓縮性。
單獨或組合地，乳糖和微晶纖維素是優(yōu)選的稀釋劑。這兩種稀釋 劑與塞來考昔在化學(xué)上是相容的。顆粒外的(extragranular)微晶纖 維素(即，在干燥步驟后添加到經(jīng)濕法?；慕M合物中的微晶纖維素) 可以用于改善硬度(對于片劑)和/或崩解時間。乳糖，尤其是乳糖一 水合物，是特別優(yōu)選的。乳糖通常以相對較低的稀釋成本提供具有合 適的塞來考昔釋放速率、穩(wěn)定性、預(yù)壓縮流動性和/或干燥性質(zhì)的組合物。它提供了高密度基材，這在?；^程中(當(dāng)采用濕法制粒時)幫 助稠化，并因此改善了混合流動性質(zhì)。
本發(fā)明的組合物任選地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的崩解劑作 為賦形劑，特別是對于片劑制劑。合適的崩解劑，單獨或組合地，包
括淀粉，包括羥乙酸淀粉鈉(例如PenWest的ExplotabTM)和預(yù)膠化 玉米淀粉(例如NationalTM 1551、National 1550,和Colocorn"1 1500 ), 粘土 (例如VeegumTM HV),纖維素例如純化的纖維素、微晶纖維素、 甲基纖維素、羧甲基纖維素和羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 (例如FMC的Ac-Di-SolTM)，藻酸鹽，交聚維酮，和樹膠例如瓊脂、瓜 耳膠、槐豆膠、卡拉雅膠、果膠和黃蓍膠。
可以在制備組合物的過程中，特別是在?；盎蛘咴趬嚎s前的 潤滑步驟過程中，在任何合適的步驟處添加崩解劑。此類崩解劑，如 果存在，總共構(gòu)成約O. 2%-約30%，優(yōu)選地約O. 2%-約10%，和更優(yōu)選地 約O. 2%-約5%的所述組合物的總重量。
交聯(lián)羧甲基纖維素鈉對于片劑或膠嚢崩解而言是優(yōu)選的崩解劑， 并且如果存在，優(yōu)選地構(gòu)成約O. 2%-約10%，更優(yōu)選地約O. 2%-約7%，和 更加優(yōu)選地約O. 2%-約5%的所述組合物的總重量。交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 賦予本發(fā)明的經(jīng)?；慕M合物以優(yōu)異的顆粒內(nèi)崩解能力。
本發(fā)明的組合物任選地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的粘合劑或 粘著劑作為賦形劑，特別是對于片劑制劑。此類粘合劑和粘著劑優(yōu)選 地賦予待壓片的粉末以足夠的粘結(jié)力，以允許進(jìn)行正常的加工操作， 例如過篩(sizing)、潤滑、壓縮和包裝，但仍允許在攝入后片劑進(jìn) 行崩解以及組合物被吸收。合適的粘合劑和粘著劑單獨或組合地包括 阿拉伯膠；黃蓍膠；蔗糖；明膠；葡萄糖；淀粉，例如但不限于，預(yù) 膠化淀粉(例如Nationar 1511和National 1500 );纖維素，例如 但不限于，曱基纖維素和羧甲纖維素鈉(例如TyloseTM);藻酸和藻酸 的鹽；硅酸鎂鋁；PEG;瓜耳膠；多糖酸；膨潤土；聚維酮，例如聚維 酮K-15、 K-30和K-29/32;聚甲基丙烯酸酯；HPMC;羥丙基纖維素(例 如Klucel.);和乙基纖維素(例如EthocerM)。此類粘合劑和/或粘
52著劑，如果存在，總共構(gòu)成約O. 5%-約25°/。，優(yōu)選地約O. 75°/。-約15%,和 更優(yōu)選地約1%-約10%的所述組合物的總重量。
本發(fā)明的組合物任選地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的濕潤劑作 為賦形劑。此類濕潤劑優(yōu)選地被選擇用于維持所述試劑與水緊密結(jié)合， 這是被認(rèn)為改善組合物的生物利用度的條件。
子包括季銨化合物，例如苯扎氯銨、節(jié)索氯銨和西吡氯銨，琥珀酸 二辛酯磺酸鈉，聚氧乙烯烷基苯基醚，例如壬苯醇醚9、壬苯醇醚IO 和辛苯昔醇9，泊洛沙姆(聚氧乙烯和聚氧丙烯嵌段共聚物)，聚氧乙 烯脂肪酸甘油酯和油，例如聚氧乙烯(8)辛酸/癸酸甘油單和二酯(例 如Gattefosse的Labrasor"、聚氧乙烯(35)蓖麻油和聚氧乙烯(40) 氫化蓖麻油；聚氧乙烯烷基醚，例如聚氧乙烯(20)鯨蠟硬脂基醚，聚 氧乙烯脂肪酸酯，例如聚氧乙烯(40)硬脂酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖 醇酯，例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80 (例如ICI的TweenTM 80), 丙二醇脂肪酸酯，例如丙二醇月桂酸酯(例如Gattefosse的 Lauroglycol )、月桂基硫酸鈉，脂肪酸及其鹽，例如油酸、油酸鈉 和油酸三乙醇胺，甘油脂肪酸酯，例如單硬脂酸甘油酯，脫水山梨糖 醇酯，例如脫水山梨糖醇單月桂酸酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水 山梨糖醇單棕櫚酸酯和脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，泰洛沙泊，及其混 合物。此類濕潤劑，如果存在，總共構(gòu)成約0. 25°/。-約15°/。，優(yōu)選地約0. 4%-約10%，和更優(yōu)選地約O. 5%-約5°/。的所述組合物的總重量。
在某些實施方案中，采用作為陰離子表面活性劑的濕潤劑。月桂 基硫酸鈉是濕潤劑的一個實施方案。月桂基硫酸鈉，如果存在，構(gòu)成 約O. 25%-約7%,或者在某些實施方案中，約O. 4%-約4%，或者在某些實 施方案中，約O. 5%-約2°/。的所述組合物的總重量。
本發(fā)明的組合物任選地包含一種或多種藥學(xué)上可接受的潤滑劑 (包括防粘劑和/或助流劑)作為賦形劑。合適的潤滑劑單獨或組合地 包括山崳酸甘油酯(例如CompritorM 888 );硬脂酸及其鹽，包括 硬脂酸鎂、鈣和鈉；氫化植物油(例如SterotexTM);膠態(tài)硅石；滑石；
53蠟；硼酸；苯曱酸鈉；乙酸鈉；富馬酸鈉；氯化鈉；DL-亮氨酸；PEG (例如CarbowaxTM 4000和CarbowaxTM 6000 );油酸鈉；月桂基石克酸鈉； 和月桂基硫酸鎂。在某些實施方案中，此類潤滑劑，如果存在，總共 構(gòu)成約O. 1%-約10%，或者在某些實施方案中，0. 2%-約8%，或者在某些 實施方案中，0.25%-約5%的所述組合物的總重量。
硬脂酸鎂是用于例如在片劑制劑的壓縮過程中減少設(shè)備和?；?混合物之間的摩擦的優(yōu)選潤滑劑。
合適的防粘劑包括滑石、玉米淀粉、DL-亮氨酸、月桂基硫酸鈉和 硬脂酸金屬鹽。滑石是用于例如減少制劑與設(shè)備表面粘附以及還減少 混合物中的靜電的優(yōu)選防粘劑或助流劑?；?，如果存在，在某些實 施方案中構(gòu)成約O. 1%-約10%，或者在某些實施方案中構(gòu)成0. 25%-約5%, 或者在某些實施方案中構(gòu)成約O. 5%-約2%的所述組合物的總重量。
其他賦形劑例如著色劑、調(diào)味劑和甜味劑是制藥學(xué)領(lǐng)域中已知的， 并且可以在本發(fā)明的組合物中使用。片劑可以例如用腸溶包衣進(jìn)行包 被或者不包被。本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含例如緩沖試劑。
任選地， 一種或多種泡騰試劑可以用作崩解劑和/或用于增強(qiáng)本發(fā) 明的組合物的器官感覺性質(zhì)。當(dāng)存在于本發(fā)明的組合物中以促進(jìn)劑型 崩解時， 一種或多種泡騰試劑所存在的總量為，在某些實施方案中， 所述組合物的約30重量％-約75重量％,或者在某些實施方案中，45重量 %-約70重量°/。，例如約60重量％。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所迷組合物以單位劑量膠嚢或片劑 的形式存在，并且以所需量包含部分或全部地納米顆粒的本文所描述 的試劑，以及一種或多種賦形劑，例如藥學(xué)上可接受的稀釋劑、崩解 劑、粘合劑、濕潤劑和潤滑劑。在某些實施方案中，所述組合物包含 一種或多種所選擇的賦形劑，例如乳糖(最優(yōu)選地，乳糖一水合物)、 月桂基硫酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和 微晶纖維素。在某些實施方案中，所述組合物包含乳糖一水合物和交 聯(lián)羧甲基纖維素鈉。在某些實施方案中，此類組合物進(jìn)一步包含一種 或多種載體材料，月桂基硫酸鈉、硬脂酸鎂和微晶纖維素。在某些實施方案中，如此選擇用于本發(fā)明的膠嚢和片劑組合物的賦形劑，以便在標(biāo)準(zhǔn)崩解測定法中提供小于約30分鐘的崩解時間，或 者在某些實施方案中，約25分鐘或更少，或者在某些實施方案中，約 20分鐘或更少，或者在某些實施方案中，約15分鐘或更少。舉例來說，對于片劑制劑，在常規(guī)生產(chǎn)規(guī)模的壓片機(jī)器中以正常 壓縮壓力(例如在典型的壓片模具中施加約l kN-約50 kN的力)，對 量足以制備均 一批次的片劑的成分的完全混合物實施壓片?？梢垣@得 在操作、制造、貯存和攝取方面方便的任何片劑硬度。對于IOO mg片 劑，在某些實施方案中，硬度為至少4 kP，或者在某些實施方案中， 約5 kP,或者在某些實施方案中，至少約6 kP。對于200 mg片劑，在 某些實施方案中，硬度為至少7kP,或者在某些實施方案中，至少約9 kP，或者在某些實施方案中，約llkP。然而，不將混合物壓縮至這樣 的程度，即后來當(dāng)暴露于胃液時，在達(dá)到水合方面存在困難。在標(biāo)準(zhǔn)測試中，在某些實施方案中，片劑脆碎度小于約l， 0%，或 者在某些實施方案中，小于O. 8%，或者在某些實施方案中，小于約O. 5%。可以采用濕法制粒、干法制?；蛘咧苯訅浩虬鼑胺椒?，以制備 本發(fā)明的片劑或膠嚢組合物。在某些實施方案中，所述組合物包含經(jīng)研磨或微粉化的試劑。在 某些實施方案中，在試劑的沖擊研磨例如針式研磨中所使用的常規(guī)研 磨機(jī)或碾磨機(jī)，給最終組合物提供了相對于其他類型的研磨而言改善 的混合均勻度。例如使用液氮來冷卻待研磨的材料可以在研磨過程中 完成，以避免將試劑加熱至不希望的溫度。在某些實施方案中，經(jīng)研磨或微粉化的試劑，如果有的話，可以 與所需量的所述組合物的其他組分相混合。在某些實施方案中，在這 個步驟中，所述試劑與一種或多種稀釋劑、崩解劑和/或粘合劑，和任 選地一種或多種濕潤劑相混合。在某些實施方案中，對于片劑制劑， 可能希望在干燥后添加微晶纖維素，以改善顆粒的可壓縮性和從所述 顆粒制備的片劑的硬度。在某些實施方案中，將水例如凈化水加入到干粉末混合物中，并55且將該混合物混合另外的時間段，以形成經(jīng)濕法?；幕旌衔铩Ｔ谀?些實施方案中，使用濕潤劑，所述濕潤劑在某些實施方案中，首先加入到水中，并且在將水加入到干粉末混合物中之前，混合至少15分鐘， 或者在某些實施方案中，至少20分鐘。在某些實施方案中，立刻、經(jīng) 過一段時間逐步地、或經(jīng)過一段時間以幾部分向混合物中添加水。在 某些實施方案中，經(jīng)過一段時間逐步地添加水。在某些實施方案中， 將濕潤劑加入到干粉末混合物中，并且可以向所得到的混合物中添加 水。在某些實施方案中，在水添加完成后實施另外的混合時間段，以 確保水在混合物中的均勻分布。在某些實施方案中，經(jīng)濕法?；幕旌衔镫S后例如用篩磨機(jī)進(jìn)行 濕法研磨，以去除作為濕法制粒操作的副產(chǎn)物而形成的大的材料聚集 體。在某些實施方案中，經(jīng)濕法?；驖穹ㄑ心サ幕旌衔镫S后例如在 烘箱或流化床干燥器(例如流化床干燥器)中進(jìn)行干燥，以形成干燥 的顆粒。在某些實施方案中，在干燥前使經(jīng)濕法?；幕旌衔飻D出或 球化(spheronize )。在某些實施方案中，隨后減少干燥的顆粒在制劑中的大小，以用 于壓縮或包嚢?？梢允褂贸Ｒ?guī)的顆粒大小減少設(shè)備，例如振蕩器或沖 擊研磨機(jī)(例如Fitz研磨機(jī))。對于包含較少水量的混合物，隨著混合時間增加，觀察到顆粒大 小略微減少。假設(shè)當(dāng)水濃度太低而無法充分活化所采用的粘合劑時， 顆粒內(nèi)的初級粒子之間的粘結(jié)力不足以經(jīng)受得住由混合葉片所產(chǎn)生的 剪切力，并且發(fā)生顆粒大小耗損而不是增長。相反地，增加水量以充 分活化粘合劑，允許初級粒子之間的粘結(jié)力經(jīng)受得住由混合葉片所產(chǎn) 生的剪切力，并且隨著混合時間和/或水添加率增加，出現(xiàn)顆粒增長而 不是耗損。與給料速率和/或研磨機(jī)速度的變化相比較，濕法研磨機(jī)的 篩號的變化趨向于具有更大的對于顆粒大小的影響。在某些實施方案中，干燥的顆粒隨后被置于合適的摻合機(jī)例如雙 殼摻合機(jī)(twin-shell blender)中，并且任選地添加潤滑劑(例如56硬脂酸鎂)和任何另外的栽體材料(例如在某些片劑制劑中的顆粒外 的微晶纖維素和/或顆粒外的交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)，以形成最終的摻 合混合物。在某些實施方案中，當(dāng)稀釋劑包括微晶纖維素時，已發(fā)現(xiàn)， 在這個步驟過程中添加一部分的微晶纖維素大大增加了顆?？蓧嚎s性 和片劑硬度。在某些實施方案中，對最終的摻合混合物進(jìn)行包嚢(或者，如果 待制備片劑，那么通過使用適當(dāng)大小的工具加工而壓縮成具有所需重 量和硬度的片劑)?？梢圆捎帽绢I(lǐng)域已知的常規(guī)壓縮和包嚢技術(shù)。通過采用在某些實施方案中約20 nim-約60 mm的床高，約0-約5 mm的壓實 設(shè)定，和約60， 000粒膠嚢/小時-約130， 000粒膠嚢/小時的速度，對于 膠嚢獲得合適的結(jié)果。當(dāng)需要包衣片劑時，可以采用本領(lǐng)域已知的常 規(guī)包衣技術(shù)。在某些實施方案中，該操作組合產(chǎn)生這樣的顆粒，其在單位劑量 水平上在藥物含量方面均一，其容易地崩解，其足夠容易地流動，從 而使得在膠嚢填充或壓片過程中可以可靠地控制重量變化，并且其在 堆積方面足夠密實，從而可以在所選擇的設(shè)備中加工每批批料，并且 各劑量適合于指定的膠嚢或片劑模具。在某些實施方案中，本發(fā)明的任何組合物將包含以本文所述的任 何形式或?qū)嵤┓桨傅乃枋龅脑噭?。在某些實施方案中，本發(fā)明的任 何組合物將由以本文所述的任何形式或?qū)嵤┓桨傅乃枋龅脑噭┙M 成。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物將基本上由以本文所述的任 何形式或?qū)嵤┓桨傅乃枋龅脑噭┙M成。在某些實施方案中，術(shù)語"包 括，，是指包括所示的活性試劑，以及包括其他活性試劑，和藥學(xué)上可 接受的載體、賦形劑、潤滑藥、穩(wěn)定劑等，如制藥工業(yè)中已知的。在 某些實施方案中，術(shù)語"基本上由……組成，，指這樣的組合物，其中 僅活性成分為所示的活性成分，然而，還可以包括這樣的其他化合物， 其用于使所述制劑穩(wěn)定、保存等，但不直接牽涉所示活性成分的治療 效果。在某些實施方案中，術(shù)語"基本上由……組成"可以指促進(jìn)活 性成分的釋放的組分。在某些實施方案中，術(shù)語"由……組成"指包57含活性成分和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了聯(lián)合制劑。在一個實施方案中，術(shù)語"聯(lián)合制劑"尤其定義了 "部件套盒(kit of parts)"，其含 義是如上定義的聯(lián)合伙伴可以獨立地或者通過采用具有顯著量的聯(lián)合 伙伴的不同固定組合，即同時地、并發(fā)地、分開地或順次地，進(jìn)行給 藥。在某些實施方案中，部件套盒的部分隨后可以例如同時地或按時 間順序錯開地施用，即對于部件套盒的任何部分來說在不同的時間點 處并且以相同或不同的時間間隔。在某些實施方案中，可以在聯(lián)合制 劑中施用聯(lián)合伙伴的總量的該比例。在一個實施方案中，可以改變聯(lián) 合制劑，例如以便應(yīng)付待治療的患者亞群的需求或單個患者的需求， 所述不同的需求可以是由于特定的疾病、疾病嚴(yán)重度、年齡、性別或 體重，如可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地來進(jìn)行的。部件套盒可以包含 有用于形成CPAM試劑和凝血因子/止血因子和/或第二抗炎劑的聯(lián)合組 合物的材料，或者可以包含有在分開的單位劑量容器中的此類試劑的 組合(或用于制備其分開的單位劑量的工具-例如通過重懸浮或配 制藥物形式如凍干形式)以用于分開施用。本文描述的試劑(例如CPAM試劑)通常將會被理解為在對于相當(dāng) 的藥學(xué)試劑而言一般可接受的純度水平內(nèi)至少基本上分離和/或純化 的(通過任何合適的方便手段)或者分離的。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明一般地涉及本文所描述的組合物和聯(lián)合療法， 以用于任何疾病、病癥或病狀(在合適時)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 意識到的。此類組合物和聯(lián)合療法的某些應(yīng)用已在上文中進(jìn)行了描述， 用于特定的疾病、病癥和病狀，其代表了本發(fā)明的實施方案，并且通 過單獨地或作為聯(lián)合療法的一部分施用本文所描述的取消或減少補體 途徑的激活的試劑或者通過使用本發(fā)明的組合物來治療受試者中的此 類疾病、病癥和病狀的方法，代表了本發(fā)明的另外實施方案。如其他地方所指出的，在一個方面，本發(fā)明涉及用于治療滑膜炎 的方法，例如在出血病狀的情況下和/或在患有出血病癥例如血友病的 患者中治療滑膜炎。在一個實施方案中，滑膜炎是急性的和/或急性前58期的，或者在另一個實施方案中，滑膜炎是慢性的。在某些實施方案中，可以通過本領(lǐng)域已知的任何手段來監(jiān)測滑膜 炎和/或治療效果，包括但不限于患病關(guān)節(jié)的超聲檢查和/或磁共振成像，以及Ritchie指數(shù)的評估，胂脹關(guān)節(jié)計數(shù)和得分，手和腕的腫脹關(guān) 節(jié)計數(shù)，晨僵的評價，疼痛強(qiáng)度，疾病活性得分(Disease Activity Score, DAS)，紅細(xì)胞沉降速率，和C-反應(yīng)蛋白。在某些實施方案中， 治療方案可以根據(jù)對臨床干預(yù)的應(yīng)答性進(jìn)行調(diào)整，例如可以改變劑量、 施用途徑和/或時機(jī)，以及改變或調(diào)整聯(lián)合療法以優(yōu)化受試者中的療 法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于在受試者中治療出血相關(guān) 炎癥、減少出血相關(guān)炎癥的發(fā)生率、減少出血相關(guān)炎癥的嚴(yán)重度、或 者延遲出血相關(guān)炎癥的發(fā)作(和/或延遲出血相關(guān)炎癥的進(jìn)展)的方法， 所述方法包括給受試者施用取消或減少所述受試者中補體途徑的激活 的試劑。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療各種病狀的組合物以 及用于治療各種病狀的方法，所述各種病狀(在受試者中直接或間接) 與出血(或其顯著和/或緊急的危險)或血液和炎癥相關(guān)，包括系統(tǒng)性 紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、肌炎、神經(jīng)痛、滑膜炎、 痛風(fēng)、強(qiáng)直性脊推炎、粘液嚢炎或其他，如將由本領(lǐng)域技術(shù)人員所意 識的。在一個實施方案中，在除了炎性病癥外還患有特定的出血病狀 (例如，來自外創(chuàng)、外科手術(shù)、創(chuàng)傷等)和/或出血相關(guān)疾病、病癥或 病狀例如血友病的患者中治療此類病癥。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療炎癥相關(guān)病癥的組合 物以及用于治療炎癥相關(guān)病癥的方法，所述炎癥相關(guān)病癥與血液、出 血或其危險相關(guān)，例如異常的傷口愈合、對于眼組織的急性損傷、血 管發(fā)生相關(guān)病癥、血管成形術(shù)炎癥、強(qiáng)直性脊推炎、細(xì)菌引起的炎癥、 腦缺血、衣原體引起的炎癥、凝血、冠狀動脈旁路手術(shù)炎癥、冠狀動 脈疾病、冠狀動脈斑塊炎癥、克羅恩病、動脈內(nèi)膜切除術(shù)炎癥、胃腸 出血、齦炎、痛風(fēng)、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、頭部創(chuàng)傷、血友病、遺傳性血管性水腫、低凝血酶原血癥、IBD相關(guān)關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性多肌炎、炎癥相關(guān) 心血管病癥、炎性腸病、腸易激惹綜合征、人工關(guān)節(jié)植入物的松開、 心肌缺血、肌炎、腎炎、骨關(guān)節(jié)炎、復(fù)發(fā)性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周圍炎、 消化性潰瘍、手術(shù)后炎癥、肺部炎癥、復(fù)發(fā)性胃腸損傷、局限性回腸 炎、視網(wǎng)膜炎、視網(wǎng)膜病變、再血管化操作程序炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、結(jié)節(jié)病、鞏膜炎、硬皮病、支架放置炎癥、中風(fēng)局部缺血、在損 傷后發(fā)生的腫脹、滑膜炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性類風(fēng)濕性脈管炎、 系統(tǒng)性硬化癥、肌腱炎、甲狀腺炎、組織潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、脈管 炎或其他。本發(fā)明還提供了用于促進(jìn)CPAM試劑(單獨地或與止血因子/ 凝血因子和/或第二抗炎劑相組合)的銷售的方法，以用于治療此類疾 病(例如通過直接對于消費者做廣告，經(jīng)由科學(xué)聯(lián)絡(luò)人進(jìn)行促銷，對 于關(guān)鍵意見引導(dǎo)者定向做廣告等)。
本發(fā)明的組合物包含和/或本發(fā)明的方法利用本文所描述的試劑， 以阻抑、抑制、治療等出血相關(guān)炎癥，其是許多疾病(包括上文列表) 的特征性癥狀和/或病因?qū)W。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物包含 和/或本發(fā)明的方法利用試劑以阻抑血管發(fā)生，而所述血管發(fā)生可以構(gòu) 成、加重或參與疾病嚴(yán)重度。在某些實施方案中，此類試劑可以包括 抗侵襲因子、視黃酸及其衍生物、紫杉醇、蘇拉明、組織金屬蛋白酶 抑制劑-1、組織金屬蛋白酶抑制劑-2、纖溶酶原激活物抑制劑-1、纖 溶酶原激活物抑制劑-2、和各種形式的較輕的"d族"過渡金屬。這些 和其他抗血管發(fā)生因子將在下文中更詳細(xì)地討論。
從軟骨提取物中制備的抗侵襲因子或"AIF"包含負(fù)責(zé)抑制新血管 生長的組成成分。這些組成成分包括具有7種低分子量蛋白質(zhì)(<50， 000 道爾頓)的家族 (Kuettner和Pauli, "Inhibition of neovascularization by a cartilage f"tor" in Development of the Vascular System, Pitman Books ( CIBA Foundation Symposium 100 ), 第163-173頁，1983 )，包括具有針對各種蛋白酶的抑制效應(yīng)的多種蛋 白質(zhì)(Eisentein等人，Am. J. Pathol. 81:337-346， 1975; Langer 等人，Science 193: 70—72， 1976 ; 和Horton等人，Science
60199:1342-1345, 1978 )。通過利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以容易地制備 適合于在本發(fā)明內(nèi)使用的AIF (例如Eisentein等人，同上；Kuettner 和Pauli，同上；和Langer等人，同上)。AIF的經(jīng)純化的組成成分例 如軟骨衍生抑制劑("CDI")(參見，Moses等人，Science 248:1408-1410， 1990 )也可以容易地制備，并且在本發(fā)明的情況下使 用。
視黃酸改變細(xì)胞外基質(zhì)組分的代謝，從而導(dǎo)致血管發(fā)生的抑制。 可以利用脯氨酸類似物、血管生長抑制性類固醇(angiostatic steroid )或肝素的添加，以l更協(xié)同地增加反式視黃酸的抗血管發(fā)生效 應(yīng)?？梢栽诒景l(fā)明的情況下使用的視黃酸及其衍生物可以從商業(yè)來源 容易地獲得，包括例如Sigma Chemical Co. (# R2625 )。
紫杉醇是高度衍生化的二萜類化合物(Wani等人，J. Am. Chem. Soc. 93: 2325， 1971)，其已從收獲并干燥的短葉紅豆杉(rajf"s 6reW尸o7/a)(太平洋紫杉)樹皮以及安德紫杉霉(Taxomyces Andreanae)(太平洋紫杉的一種植物內(nèi)生真菌)中獲得(Stierle等 人，Science 60:214-216， 1993 )。 一般地，紫杉醇通過結(jié)合微管蛋 白來發(fā)揮作用以穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu)，從而形成異常的有絲分裂紡錘體。"紫 杉醇，，(其在本文中應(yīng)當(dāng)理解為包括類似物和衍生物，例如，TAX0L 、 TAX0TERE 、紫杉醇的10-脫乙?；愃莆锖妥仙即嫉?' N-脫苯甲?；?-3'N-叔丁氧基羰基類似物)可以通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù) 容易地制備(還可參見W0 94/07882， W0 94/07881， W0 94/07880， WO 94/07876， WO 93/23555， WO 93/10076，美國專利號5， 294， 637， 5， 283， 253， 5， 279， 949， 5， 274，137， 5， 202, 448， 5， 200， 534， 5， 229， 529 和EP 590267 ),或者從各種商業(yè)來源獲得，包括例如Sigma Chemical Co., St. Louis， Mo. (T7402—來自短葉紅豆杉)。
蘇拉明是通常用作殺錐蟲劑的多磺化的萘脲化合物。簡而言之， 蘇拉明阻斷多種生長因子的特異性細(xì)胞表面結(jié)合，所述生長因子例如 為血小板衍生生長因子("PDGF")、表皮生長因子("EGF")、轉(zhuǎn) 化生長因子("TGF-P")、胰島素樣生長因子("IGF-1")和成纖
61維細(xì)胞生長因子("PFGF")。蘇拉明可以依照已知技術(shù)進(jìn)行制備， 或從各種商業(yè)來源容易地獲得，包括例如Mobay Chemical Co. ， New York (參見Gagliardi等人,Cancer Res. 52:5073-5075， 1992;和 Coffey, Jr.等人，J. of Cell. Phys. 132:143-148， 1987 )。
組織金屬蛋白酶抑制劑-1 ( "TIMP")由內(nèi)皮細(xì)胞分泌，所述內(nèi) 皮細(xì)胞還分泌MTP酶。TIMP是糖基化的并且具有28.5 kDa的分子量。 TIMP-1通過與激活的金屬蛋白酶結(jié)合來調(diào)節(jié)血管發(fā)生，從而阻抑血管 侵入細(xì)胞外基質(zhì)中。組織金屬蛋白酶抑制劑-2 ( "TIMP-2")也可以 用于抑制血管發(fā)生。簡而言之，TIMP-2是21 kDa的非糖基化的蛋白質(zhì)， 其與以活性形式和潛伏的酶原形式的金屬蛋白酶結(jié)合。TIMP-1和 TIMP-2都可以從商業(yè)來源獲得，例如Synergen， Boulder, Colo。
纖溶酶原激活物抑制劑-1 (PA)是50 kDa的糖蛋白，其存在于血 小板中，并且還可以由內(nèi)皮細(xì)胞和肌細(xì)胞合成。PAI-l抑制在內(nèi)皮的基 底外側(cè)位點處的t-PA和尿激酶纖溶酶原激活物，并且另外還調(diào)節(jié)纖維 蛋白溶解過程。纖溶酶原激活物抑制劑-2 (PAI-2) —般僅在某些情況 下，例如在妊娠中和在腫瘤存在的情況下，在血液中被發(fā)現(xiàn)。簡而言 之，PAI-2是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌的56 kDa的蛋白質(zhì)。它被認(rèn)為 調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解活性，并且特別地抑制尿激酶纖溶酶原激活物和組 織纖溶酶原激活物，從而阻止纖維蛋白溶解。
他抗血管發(fā)生因子。代表性的例子包括血小板因子4 (Sigma Chemical Co., #F1385 );疏酸魚精蛋白(緋精蛋白)(Sigma Chemical Co., #P4505 );硫酸化殼多糖衍生物(從雪花蟹的殼中制備的)，(Sigma Chemical Co.，并C3641; Murata等人，Cancer Res. 51:22-26， 1991); 硫酸多糖肽聚糖復(fù)合物(SP-PG)(這種化合物的功能可以通過類固醇 例如雌激素和檸檬酸他莫昔芬的存在而得到增強(qiáng))；星形孢菌素(Sigma Chemical Co., #S4400 );基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)劑，包括例如脯氨酸類似 物U(L-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸(LACA)( Sigma Chemical Co. , #A0760 )), 順羥脯氨酸，d，L-3,4-脫氫脯氨酸(Sigma Chemical Co. , #D0265 ),噢脯氨酸(Thiaproline) (Sigma Chemical Co. ， #T063. 1 ) ]， oc， ct-聯(lián)吡啶(Sigma Chemical Co., #D7505 ) ， 氨基丙腈富馬酸鹽
(Sigma Chemical Co., #A3134) ]}; MDL 27032 ( 4-丙基-5-(4-p比 咬基)-2 (3H)-嚙峻酮；Merion Merrel Dow Research Institute); 甲氨蝶呤(Sigma Chemical Co. ， #A6770; Hirata等人，Arthritis and Rheumatism 32: 1065-1073， 1989);米托蒽S^ ( Polyer ini和Novak， Biochera. Biophys. Res. Comm. 140:901-907 ) ，肝素(Folkman， Bio. Phar. 34: 905-909， 1985; Sigma Chemical Co. ， #P8754 );干擾素
(例如Sigma Chemical Co. ， #13265 ) ; 2巨球蛋白-血清(Sigma Chemical Co., #M7151 ) ; ChIMP-3 ( Pavloff等人，J. Bio. Chem. 267: 17321-17326, 1992 );胰凝乳蛋白酶抑制劑(Sigma Chemical Co,, #C7268; Tomkinson等人，Biochem J. 286:475-480， 1992 ); P-環(huán) 糊精十四硫酸酉旨(Sigma Chemical Co., #C4767 ) ; Epo翻ycin;喜 樹堿；夫馬潔林(Sigma Chemical Co. ， #F6771 ;加拿大專利號 2, 024, 306; Ingber等人，Nature 348: 555-557， 1990 );金石危丁二 鈉("GST" ; Sigma: G4022; Matsubara和Ziff， J. Clin. Invest. 79: 1440-1446， 1987 ); D-青霉胺("CDPT" ; Sigma Chemical Co.， 并P4875和P5000 (HC1) ); P-l-抗膠原酶-血清；oc 2-抗纖溶酶(Sigma Chem. Co.: A0914; Holmes等人，J. Biol. Chem. 262 (4): 1659-1664, 1987 );比生群(National Cancer Institute);氣笨4L利二4內(nèi)(N—(2) — 羧基苯基-4-鄰氨基苯甲酸二鈉或"CCA" ; Takeuchi等人，Agents Actions 36:312-316， 1992 );沙利度胺；血管生長抑制性類固醇； AGM-1470; carboxy謹(jǐn)inolmidazole;金屬蛋白酶抑制劑例如BB94和 肽CDPGYIGSR-NH2( SEQUENCE ID NO. 1 )( Iwaki Glass, Tokyo, Japan )。
實施例
給出下述實施例以便更充分地舉例說明本發(fā)明的某些實施方案。 然而，它們決不應(yīng)當(dāng)被解l^為限制了本發(fā)明的花圍。
63實施例l
患病關(guān)節(jié)中的C5aR表達(dá) 將進(jìn)行處于正常和患病狀態(tài)中的C5aR的人關(guān)節(jié)表達(dá)的分析。從經(jīng) 歷了滑膜切除術(shù)或全關(guān)節(jié)置換的成人中收集關(guān)節(jié)組織，其中在滑膜炎 的不同階段(包括急性、亞急性和慢性滑膜炎)收集組織。從受試者 獲得書面知情同意書。
^，摔品w^e桌
從經(jīng)歷外科手術(shù)的每個膝獲得滑膜組織(直徑1~2 cm,幾個樣 品)。在4%磷酸鹽緩沖的福爾馬林中固定組織切片，以用于免疫組織 化學(xué)研究。在固定后，對組織進(jìn)行加工，包埋在石蠟中，切片，并放 置到栽玻片上。切片也在液氮中速凍并貯存，以用于免疫組織化學(xué)分 析。進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的組織學(xué)加工和染色，包括H & E染色。
尤瘦逸織必夢為V('
對載玻片進(jìn)行脫石蠟，再水化，并且通過標(biāo)準(zhǔn)方案來猝滅內(nèi)源性 過氧化物酶。將山羊血清用作封閉劑，并且用針對人C5aR而產(chǎn)生的小 鼠單克隆抗體(W17/1)來對載玻片進(jìn)行探測。將鼠類IgGl用作對照抗 體。生物素化的大鼠抗小鼠免疫球蛋白為所使用的二抗，并且使載玻 片在濕潤的室中進(jìn)行溫育。因為是AEC底物，所以添加辣根過氧化物酶 (HRP)，并且通過添加水來終止反應(yīng)。
載玻片用Mayer's蘇木精進(jìn)行復(fù)染，觀察，并記錄。購買正常關(guān)節(jié) 組織，并且類似地進(jìn)行加工和探測。正常組織染色的例子顯示在圖l 中(其在實施例4中進(jìn)一步討論)。
及賜、浙.'
將冷凍的組織樣品在Trizol Reagent中進(jìn)行均漿，隨后為氯仿 /Trizol提取。對水相實施l: 2異丙醇/Trizol提取，以用于RM沉淀。 用乙醇/Trizol混合物洗滌RNA粒狀沉淀，風(fēng)干，并重新溶解在DEPC水中。
也可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法從經(jīng)福爾馬林固定的組織中提取出RNA。
64因此，將通過RT-PCR而在患病組織以及健康組織中定量地進(jìn)行測定C5aR表達(dá)。
預(yù)期將會在滑膜組織中檢測出C5aR表達(dá)，并且C5aR表達(dá)在從滑膜炎患者獲取的滑膜組織中相比于正常對照而言上調(diào)，這表明所述受體在疾病發(fā)病機(jī)制中^皮調(diào)節(jié)。
實施例2C5aR的消除和滑膜炎的發(fā)展將在遺傳上破壞了C5aR表達(dá)的C5ar廣^小鼠與在遺傳上破壞了
凝血因子vin表達(dá)的F8t""az小鼠進(jìn)行雜交，從而產(chǎn)生在任一蛋白質(zhì)的
表達(dá)方面具有缺陷的小鼠。經(jīng)由Southern印跡法或RT-PCR來完成基因型的確認(rèn)。如Hakobyan N.等人，Haemophilia. 2005 May; 11(3):227-32和/或Valentino LA等人，Haemophilia. 2004 May;10 (3): 280-7中所描述的，在這些小鼠中進(jìn)行血友病性滑膜炎的誘導(dǎo)。評估C5aR的不存在對于滑膜炎發(fā)展的影響，并且評估與凝血因子VIII敲除小鼠相比較，雙敲除小鼠是否對于關(guān)節(jié)出血誘導(dǎo)更易感。預(yù)期由于不存在C5a/C5aR相互作用，雙敲除小鼠將會對于關(guān)節(jié)出血更不易感。
實施例3阻抑C5aR的試劑的開發(fā)
通過標(biāo)準(zhǔn)方法來開發(fā)特異性地結(jié)合并阻斷C5aR的單克隆抗體。在某些情況下，C57BL/6小鼠每14天進(jìn)行腹膜內(nèi)(IP)免疫接種，共6次，隨后為在最后一次IP注射后4-5天的單次靜脈內(nèi)(IV)注射，其中使用Ll. 2/人C5aR表達(dá)性細(xì)胞，所述Ll. 2/人C5aR表達(dá)性細(xì)胞用丁酸激活24小時并且用絲裂霉素C處理。然后，處死小鼠，并且使其脾細(xì)胞與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞相融合，其中所得到的雜交瘤通過FACS來進(jìn)行篩選，并且鑒定并分離產(chǎn)生針對C5aR的單克隆抗體的雜交瘤。
在其他實施方案中，可以根據(jù)Lee H.等人，2006 NatureBiotechnology 24: 1279-1284中所概括的方法來產(chǎn)生特異性地與人
65C5aR相互作用的單克隆抗體，或者可以利用其中所產(chǎn)生的抗體。
一旦產(chǎn)生了候選單克隆抗體，就評估它們阻斷配體結(jié)合和/或嗜中
性粒細(xì)胞趨化性的能力。在滑膜炎的小鼠模型中鑒定和測試先導(dǎo)抗體，
例如如實施例2中所描述的。
也可以在具有血友病性滑膜炎的成人受試者中進(jìn)行人臨床試驗。
可以給受試者施用抑制由C5aR介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的單克隆抗體，包括所
謂的"人源化"形式的本文所描述的抗體。證明了抗體的治療效果。
預(yù)期此類試劑將會提供有用的生理學(xué)、預(yù)防性和/或治療性效果，如本
文所描述的。
實施例4
使用滑膜組織和抗C5aR抗體的免疫組織學(xué)染色正?；べ徸訟sterand plc( Detroit, MI, USA; Royston， Herts,UK)。它切除自82歲的患病男性高加索人。該滑膜組織由Asterand加工成經(jīng)福爾馬林固定的、用石蠟包埋的切片(厚5-IO微米)。
對于染色，以10iig/ml的濃度將小鼠抗人C5aRl W17/l單克隆抗體(Abeam - Cambridge, MA， USA)用作一抗。生物素化的大鼠抗小鼠IgGl (BD Pharmingen)用作二抗。綴合有鏈霉抗生物素蛋白的HRP(BDPharmingen)和AEC底物(BD Pharmingen)用于顯色。用Mayer，s蘇木精(Sigma)對栽玻片進(jìn)行復(fù)染，并且安放好以進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示在

圖1中。如圖l中所顯示的，正?；そM織看起來表達(dá)最低水平的C5aR。
從在切除時具有右膝的進(jìn)行中的骨關(guān)節(jié)炎的65歲患病女性中獲取的另外的滑膜組織購自Asterand, Inc. (Detroit, MI, USA)。在與上文關(guān)于圖l而描述的相同條件下，使用相同的抗體(W17/1)來對組織進(jìn)行染色。結(jié)果顯示在圖2中(因為圖2是原始彩色顯微照片的黑白復(fù)制品，所以難以看出鑒別染色的區(qū)域)；給該圖添加了指示線以指出其中檢測出C5aR的區(qū)域)。這個實驗的結(jié)果反映了，與正?；は啾容^，人骨關(guān)節(jié)炎滑膜表達(dá)中等水平的C5aR。如下進(jìn)行進(jìn)一步的研究。患者關(guān)節(jié)樣品獲自Rush University(Chicago, IL， USA)。該樣品被描述為來自經(jīng)歷了滑膜切除術(shù)的血友病性滑膜炎患者的關(guān)節(jié)樣品。在用石蠟包埋的人滑膜組織上執(zhí)行免疫組織化學(xué)。將系列5-jim切片放置在載玻片上。通過放置在56-60'C烘箱中l(wèi)小時，然后轉(zhuǎn)移至二甲苯浴來使載玻片脫蠟。然后，使載玻片再水化，隨后進(jìn)行熱誘導(dǎo)的表位修復(fù)(heat-induced epitoperetrieval, HIER)。栽玻片用PBS進(jìn)行漂洗，隨后用3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。將載玻片與一抗一起在4'C下溫育過夜，用PBS/0. ly。Tween洗滌3次，然后與抗小鼠-HRP聚合物(DAKO,未稀釋的)在室溫下溫育30分鐘。在PBS中洗滌后，在去離子水中漂洗載玻片，并根據(jù)制造商的指導(dǎo)用持久的AEC色素原(BioCare Medical )進(jìn)行顯現(xiàn)。載玻片用Mayer，s蘇木精(Sigma)進(jìn)行復(fù)染，通過酒精進(jìn)行脫水，在二曱苯中清洗，并且用Permount (Fisher)蓋上蓋玻片。所測試的一抗是稀釋了l: 100的小鼠抗人C5aR, W17/1 (Abcam, 0.1 mg/mL)。未稀釋的小鼠IgG用作陰性對照(Dako， 6.1 mg/mL)。這個工作的結(jié)果呈現(xiàn)在圖3中。如可在圖3中看見的，在患病組織中顯示出清楚的用抗C5aR的染色。
本文所引用的所有參考文獻(xiàn)，包括出版物、專利申請和專利，均通過提及而以其整體合并入本文，就如同每篇參考文獻(xiàn)被單獨地和具體地指明通過引用而合并入本文并且以其整體列出在本文中一樣(至由法律所允許的最大程度)，而不管在本文其他地方所作的任何分開提供的關(guān)于具體文件的合并。
在描述本發(fā)明的情況下使用術(shù)語"a"和"an"和"the"以及類似的指示物應(yīng)當(dāng)被解釋為涵蓋了單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛盾。
除非另外說明，本文提供的所有精確值是相應(yīng)的近似值的代表(例如，適當(dāng)時，關(guān)于特定因子或測量而提供的所有精確的示例性值可以被視為還提供了由"約"進(jìn)行修飾的相應(yīng)的近似測量值)。
67在本文中關(guān)于要素使用術(shù)語例如"包含"、"具有"、"包括"或"含有"來描述本發(fā)明的任何方面或?qū)嵤┓桨?，旨在提供關(guān)于"由所述特定要素組成"、"基本上由所述特定要素組成"或"實質(zhì)上包含所述特定要素"的本發(fā)明的類似方面或?qū)嵤┓桨傅闹С?，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛盾(例如，在本文中被描述為包含特定要素的組合物應(yīng)當(dāng)理解為還描述了由那種要素組成的組合物，除非另外說明或者通過上下文而明顯相矛盾)。
本文所提供的任何和所有實例或示例性語言(例如，"例如")的使用僅旨在更好地闡明本發(fā)明，并不對本發(fā)明的范圍施加限制，除非另外要求。在說明書中沒有語言應(yīng)當(dāng)解釋為指明了任何未要求的要素是實踐本發(fā)明所必需的。
本文中專利文件的引用和合并僅僅是為了方4更起見而進(jìn)行的，并不反映關(guān)于此類專利文件的有效性、專利性和/或可行使性的任何觀點。
曰A兩.汰ff i吝開i沄砵;vr方面之中所闡述的主題的所有修飾和等價物，
68
權(quán)利要求
1.抑制或減少C5a受體(C5aR)的激活的試劑用于治療滑膜炎的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述試劑是對于C5aR特異的抗體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的用途，其中所迷試劑用作用于在具有血友病的患者中治療滑膜炎的藥物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l-3中任一項的用途，其中所述試劑特異性地結(jié)合C5aR的胞外環(huán)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2-4中任一項的用途，其中所述抗體由下述雜交瘤表達(dá)，或者包含由下述雜交瘤表達(dá)的抗體的功能性部分具有ECACC登錄號00110609、 02090226或02090227，或ATCC登錄號HB 11 382、 HB 11384或HB-11625的雜交瘤。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的用途，其中所述滑膜炎是急性或亞急性的，或者慢性的。
7. (a)取消或減少C5aR的激活的試劑和(b)凝血因子或止血因子的組合用于治療滑膜炎的用途。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中所述凝血因子或止血因子選自凝血因子XIII、凝血因子IX、凝血因子X、凝血因子XI、凝血因子VII、凝血因子VIII、纖維蛋白原、凝血酶、任何前述物質(zhì)的變體、任何前述物質(zhì)的衍生物、以及任何前述物質(zhì)的組合。
9. 抑制或減少C5aR的激活的試劑用于治療出血相關(guān)炎癥的用途。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述試劑是對于C5aR特異的抗體。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的用途，其中所述試劑特異性地結(jié)合C5aR的胞外環(huán)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9-ll中任一項的用途，其中所迷抗體由下列雜交瘤表達(dá)，或者包含由下列雜交瘤表達(dá)的抗體的功能性部分具有ECACC登錄號00110609、 02090226或02090227'或ATCC登錄號HB 11382、 HB11384或HB-11625的雜交瘤。
全文摘要
本發(fā)明尤其提供了用于在有此需要的受試者中治療滑膜炎和/或出血相關(guān)炎癥，減少滑膜炎和/或出血相關(guān)炎癥的發(fā)生率，減少滑膜炎和/或出血相關(guān)炎癥的嚴(yán)重度，或者延遲滑膜炎和/或出血相關(guān)炎癥的發(fā)作或進(jìn)展的方法和組合物。所述組合物包含有效量的取消或減少所述受試者中C5aR補體途徑的激活的試劑和任選地其他治療劑，并且所述方法利用有效量的取消或減少所述受試者中C5aR補體途徑的激活的試劑和任選地其他治療劑，所述其他治療劑包括凝血因子、其他止血因子和/或第二抗炎劑。
文檔編號A61K39/395GK101668541SQ200880013874
公開日2010年3月10日 申請日期2008年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月6日
發(fā)明者Y·曹 申請人:諾和諾德公司