專利名稱：人參皂苷Re的抗休克作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及人參皂苷Re的抗休克作用。

背景技術(shù)：
人參為珍貴藥材之一?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》就明確記載“人參主補五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目開心益智，久服輕身延年”。《本草匯言》人參補氣生血，助精養(yǎng)神之藥也。故真氣衰弱，短促氣虛，以此補之，如榮衛(wèi)空虛，用之可治也。精神錯亂，魂魄飛揚，以此斂之，如陽亡陰脫，用之可回也。驚悸怔忡，健忘恍惚，以此寧心，如心志懶怯，用之可壯也。目前從人參中提取出的成分有皂苷、多糖類、蛋白質(zhì)等。人參皂苷(ginsenoside)為人參的主要有效成分之一，人參皂苷中人參三型皂苷Re(ginsenoside-Re)含量占總皂苷的23％，為無色針狀結(jié)晶，mp 201～203℃，分子量947.12。因此人參皂苷Re，有可能是人參功能的代表。

國內(nèi)外文獻報道人參皂苷Re具有許多藥理活性1.保護心臟功能人參皂苷Re能增加NO的生成量，激活cGMP依賴蛋白激酶，使肌凝蛋白輕鏈去磷酸化而產(chǎn)生平滑肌松弛作用，擴張血管改善心肌供血(Ethnopharmacol 2001；76(1)109-13；Pharmacol.2001，134(6)1159-65.)。人參皂苷Re還可以擴張冠脈，使心輸出量增加。(沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，1995，12(2)130.)人參皂苷Re對內(nèi)源性和外源性氧化劑所誘導(dǎo)的心肌細胞的氧化損傷具有保護作用(Pharmacol 2006，532(3)201-7.)，能顯著抑制心肌缺血再灌注環(huán)境下中性粒細胞PMNs浸潤和過氧化物酶MPO活性(臨床心血管病雜志，2004，20(12)736-8.)。人參皂苷Re兼有鈣通道阻滯作用和抗自由基作用，可使心室肌細胞呈現(xiàn)自發(fā)性博動的群落性和心臟肌細胞動作電位各參數(shù)減少(長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1997，13(2)52-3.)。人參皂苷Re在體外對豚鼠心室肌細胞有一定的縮短其動作電位時程作用，但縮短的幅度很小，同時可抑制L型Ca2+通道并激活K+離子通道(European Journal of pharmacology，476(2003)35-44.)。人參皂苷Re能改善新生大鼠由乙醇所致的腦損傷，具有較強的恢復(fù)小腦生長的作用(Biol.Pharm.Bull，1994，17(2)270)。不同濃度的人參皂苷Re能夠顯著保護缺氧、缺糖、自由基、谷氨酸、H2O2等多種因素導(dǎo)致體外培養(yǎng)的PC12細胞損傷或死亡，對神經(jīng)具有保護作用(Ethnopharmacol.2006，107(1)48-52.)。人參皂苷Re連續(xù)灌胃給藥7天能顯著延長結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)小鼠存活時間，顯著降低小鼠腦指數(shù)和腦含水量，降低腦組織MDA含量，提高腦內(nèi)SOD水平；顯著延長斷頭小鼠全腦缺血后喘息時間。人參皂苷Re可延長給藥小鼠常壓耐缺氧的存活時間，減少耗氧量，提高小鼠耐缺氧能力。人參皂苷Re能夠通過提高大鼠腦缺血再灌注后腦組織神經(jīng)元線粒體膜流動性、抗自由基損傷、抗氧化從而發(fā)揮對缺血神經(jīng)元的保護作用。人參皂苷Re對MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神經(jīng)元具有保護作用(沈陽藥科大學(xué)學(xué)報.2005，22(1)36-44.)。人參皂苷Re能使黑質(zhì)致密部(SNc)的TH陽性神經(jīng)元和黑質(zhì)網(wǎng)狀部(SNr)的GABA陽性神經(jīng)元數(shù)目顯著增多；增加PPD擴增產(chǎn)物，人參皂苷Re對MPTP誘致帕金森病小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元具有明顯的保護作用，其作用可能與改變GABA能神經(jīng)元以及PFDmRNA表達水平，從而調(diào)節(jié)PD中直接回路和間接回路的興奮-抑制平衡有關(guān)。實驗證明，用人參皂苷Re預(yù)處理的小鼠，然后用順鉑處理30分鐘，每24小時測定食物的攝入量和體重，共5天，發(fā)現(xiàn)kaolin攝入量減少。人參皂苷Re具有減弱順鉑誘導(dǎo)的異食癖作用。在對人參皂苷Re預(yù)處理72小時的乳腺癌MCF-7細胞用體外細胞增殖測定進行細胞計數(shù)時發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Re并沒有減弱順鉑的抑癌效應(yīng)。(Cancer Chemotherapy AndPharmacology Cancer Chemother Pharmacol.2007，59(3)369-74)。通過建立NGF引導(dǎo)下鼠胚脊神經(jīng)節(jié)體外培養(yǎng)模型的研究發(fā)現(xiàn)人參皂甙Re具有保護脊髓神經(jīng)元和促進周圍神經(jīng)軸突生長作用(中國神經(jīng)科學(xué)雜志，2000，16(4)345-8)濃度60μmol/L人參皂苷Re對小鼠皮層神經(jīng)元缺氧損傷具有保護作用，且能減輕細胞損傷的形態(tài)學(xué)改變(南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報.2002，22(2)134-5)。采用Morris水迷宮法觀察人參皂苷Re對大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響并采用電生理學(xué)方法觀察人參皂苷Re對大鼠突觸長時程強化(LTP)作用的結(jié)果顯示人參皂苷Re能顯著對抗自然衰老引起的記憶獲得障礙，對麻醉大鼠海馬齒狀回基礎(chǔ)突觸傳遞有增強作用，且能形成突觸長時程增強形象，而該作用可能與其增強基礎(chǔ)突觸傳遞、促進LTP形成有關(guān)(中藥新藥與臨床藥理.2007，18(1)20-2)。
人參皂苷Re在條件培養(yǎng)液中，促進小鼠骨髓細胞集落形成和3H-TdR攝入作用，顯示其外源性促進小鼠骨髓細胞增殖活性(白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1997，23(2)141)。人參皂苷Re能夠顯著增強在卵清蛋白(OVA)免疫的鼠中Con A，LPS和卵清蛋白所誘導(dǎo)的脾細胞的增殖，與OVA對照組相比，人參皂苷Re能夠明顯增強血清中OVA特異的IgG，IgG1和IgG2b的抗體滴度。實驗結(jié)果顯示，在抗OVA的鼠中，對特異性抗體和細胞內(nèi)的免疫應(yīng)答有明顯的輔助效應(yīng)(Chemistry & Biodiversity[ChemBiodivers]2006，3(7)718-26)。人參皂苷Re對體外培養(yǎng)的人胚肺形成纖維細胞，具有可促進衰老細胞的增殖的作用(天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1996，8(4)3)。人參皂苷Re可增加高齡人胚肺成纖維細胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PDH)和丙酮酸脫氫酶(PVO)的活性。并降低HeLa細胞內(nèi)幾種酶的活性(中藥藥理與臨床，1997，13(6)18.；天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1996，8(4)3)。人參皂苷Re能夠增加培養(yǎng)基中分泌型脂酶活性(Biol.Pharm.Bull，1996，60(12)1962-65)。人參皂苷Re有益于精子的獲能和頂體反應(yīng)，這一作用是通過NO/cGMP/PKG途徑完成的(Molecular Reproduction AndDevelopment.2007，74(4)497-501)。人參皂苷Re對醋酸潑尼松造成的血清總膽固醇和甘油三酯的升高均有一定抑制作用，能夠減輕PA的副作用引起的血脂升高(中國中藥雜志.1997，22(3)174-6)。日本專利93p-2401公開人參皂苷Re能顯著對抗CHCl3、CaCl2-Ach、哇巴因、腦垂體后葉制劑及結(jié)扎左冠狀動脈前降支誘發(fā)的心律失常，提高兔左心室致顫閾；本研究小組申請的中國專利(專利號200410021113.6)公開人參皂苷Re對1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶致帕金森病小鼠具有保護多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)與功能，抑制黑質(zhì)星形膠質(zhì)細胞增生，調(diào)節(jié)腦內(nèi)阿片肽，抗黑質(zhì)神經(jīng)元凋亡等作用。本研究小組申請的另一項中國專利(專利號200810010677)公開人參皂苷Re對神經(jīng)細胞的保護作用。
綜上所述，人參皂苷Re具有抗心肌氧化，保護心功能，抑制黑質(zhì)星形膠質(zhì)細胞增生、調(diào)節(jié)腦內(nèi)阿片肽和抗黑質(zhì)神經(jīng)元凋亡等方面作用，對腦缺血再灌注所造成損傷具有保護作用，能夠改善微循環(huán)，提高機體免疫功能等。這些文獻資料暗示人參皂苷Re具有抗休克效果。
休克(shock)是涉及臨床各科常見的危重病癥，它是微循環(huán)功能障礙為主要特征，并導(dǎo)致多器官功能衰竭的綜合癥，很多疾病到垂危時均可產(chǎn)生休克。休克時發(fā)生兩個關(guān)鍵問題，一方面微循環(huán)灌流障礙，另一方面細胞對缺血缺氧的耐受性低，導(dǎo)致休克搶救的成功率低，抗休克治療始終是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的重大課題。70年代曾經(jīng)用升壓的辦法搶救休克，但效果不佳，80年代以后，又改用解痙的辦法，使休克搶救的成功率有所提高，但還是有一多半休克患者死亡。每年因休克搶救無效死亡的病例有4000萬人以上。因此，休克的治療到目前還沒有解決。
能不能在改善微循環(huán)灌流的同時增加細胞對缺血缺氧的耐受性？尋找古今中外的治療藥物，發(fā)現(xiàn)人參自古就用來回陽救逆，治療休克，現(xiàn)代研究證明人參皂苷Re具有較強的抗氧化活性，可增加細胞對對缺血缺氧的耐受性。因此，將人參作為抗休克輔助藥，將有助于休克的搶救。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種人參皂苷Re的醫(yī)藥新用途，即人參皂苷Re在輔助抗休克提高休克搶救的成功率中的應(yīng)用。
本發(fā)明的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的 1.人參皂苷Re提取方法 A.人參原料浸泡及煎煮 (A)按人參原料與自來水的重量份數(shù)比為1∶8，1∶16向人參原料中加水，常溫浸泡5小時，然后，將兩者的混合物加熱至100℃，保溫4小時，之后，濾渣取液 (B)按人參原料與水的重量份數(shù)1∶10向(A)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至100℃，保溫2.5小時，之后，濾渣取液。
(C)按人參原料與水的重量份數(shù)1∶8向(B)濾出的渣中加入自來水，并將兩者混合物加熱至100℃，保溫1.5小時，之后，濾渣取液。
B液體濃縮 將制取的提取液體混合一起后減壓濃縮，直至其濃縮至約3升為止。
C吸附、洗脫 使?jié)饪s后的液體通過經(jīng)活化處理后的HPD-100大孔樹脂柱，使液體中的人參皂苷Re被樹脂柱吸附，并棄去流出液，再用3升蒸餾水沖洗樹脂柱，棄去流出液，繼用濃度為35％的乙醇清洗樹脂柱，使吸附于其上的人參皂苷-Re被完全洗脫為止，并收集洗脫液，減壓回收乙醇至干，得人參皂苷-Re粗結(jié)晶。
D重結(jié)晶 將獲得的人參皂苷-Re粗結(jié)晶用其重量100倍的乙醇-水重結(jié)晶即得人參皂苷-Re成品。
2人參皂苷Re抗休克作用的藥理學(xué)研究 2.1實驗動物與分組 Wistar大鼠體重220-260克雌雄各半，沈陽藥科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(2003)0008號，動物隨機分成6組，每組12只，分別為假手術(shù)對照組、模型組、654-2組、人參皂苷Re注射液低劑量組、人參皂苷Re注射液中劑量組、人參皂苷Re注射液高劑量組。
2.2實驗方法 2.2.1腸系膜上動脈夾閉性休克(SMAO)模型的建立 大鼠隨機分成6組，每組12只，分別為假手術(shù)對照組、模型組、654-2組、人參皂苷Re低劑量組、中劑量組和高劑量組。大鼠實驗前禁食12h，自由飲水，用25％烏拉坦0.1g/100g腹腔注射麻醉，固定后行頸總動脈插管，通過血壓換能器連接Pc-LAB系統(tǒng)，記錄血壓和心率。于上腹部正中切口，長約2cm，用無菌棉簽將內(nèi)臟輕輕推向左下腹，暴露出脊柱腹膜后組織以及腸系膜上動脈，分離該血管周圍組織，在腸系膜上動脈根部用一個套硅膠管小動脈夾鉗夾，觀察2min待確定腸系膜上動脈血流被阻斷，腸壁蒼白，血管無搏動，夾閉傷口120min后開腹，打開動脈夾，恢復(fù)腸系膜上動脈血流供應(yīng)，腸壁變紅，血管恢復(fù)搏動，再關(guān)腹觀察，整個手術(shù)過程中，保持室溫20-25℃，維持動物肛溫在37℃左右，假手術(shù)對照組同樣開腹，不鉗夾血管，僅輕擾腹腔后關(guān)腹。
給藥方法人參皂苷Re組分別按40、80、160mg/kg，劑量用藥，模型組給予等量生理鹽水，陽性藥組給予654-2注射液20mg/Kg，溶于等量生理鹽水，分別于夾閉同時腹腔注射。
2.2.2失血性休克模型的建立 將貓隨機分成6組，每組8只，分別為假手術(shù)對照組、模型組、多巴胺組、人參皂苷Re低劑量組、中劑量組和高劑量組。實驗前動物禁食過夜，自由飲水。用25％烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定后，分離右側(cè)頸動脈、股動脈、股靜脈，股靜脈插管以給藥，全身肝素化(肝素生理鹽水500U/kg)，股動脈插管后經(jīng)三通管一端連接于儲血瓶供放血用，頸動脈連接于PC-Lab生理記錄儀監(jiān)測收縮壓、舒張壓、平均動脈壓，動物放血(約10min)使平均動脈壓降至5.3kPa(40mmHg)，記為休克后0min，并維持該血壓90min，在休克后0分鐘各組分別給予相應(yīng)的藥物治療(股靜脈滴入)。隨后將動物自身血液回輸。觀察動物狀態(tài)和考察指標至液體回輸后2小時。假手術(shù)對照組手術(shù)如前，但不放血。
2.2.3燙傷性休克模型 將大鼠隨機分成6組，假手術(shù)對照組，模型組、人參皂苷Re低劑量組、中劑量組和高劑量組及多巴胺組。動物禁食不禁水15小時，用25％烏拉坦0.1g/100g腹腔注射麻醉，剪去背部從自肩至髖30％體表面積的毛發(fā)，用固定器固定，置98℃沸水18s造成III度燙傷，保持脫毛區(qū)以外的部位不與水相接觸，觀察并記錄動物的狀態(tài)。
給藥方法人參皂苷Re組分別以50、100、200mg/kg劑量給藥，模型組給予等量生理鹽水，陽性藥組給予地塞米松注射液20mg/kg，于燙傷后10分鐘給予腹腔注射。假手術(shù)對照組同樣麻醉并剪去背部自肩至髖30％體表面積毛發(fā)，但不進行燙傷。
2.24.4胰島素性休克模型 將小鼠隨機分成4組，分別是對照組、人參皂苷Re低劑量組、中劑量組和高劑量組。
動物禁食不禁水20小時，保持室溫20-25℃，用微量進樣器(100微升)抽取胰島素原液按0.1U/g，給小鼠皮下注射，20分鐘后腹腔注射給藥，對照組給予生理鹽水0.1ml/10g，給藥組分別給予人參皂苷Re 50，100，200mg/kg，觀察給藥后240分鐘內(nèi)動物首次發(fā)生驚厥和死亡的時間。
2.3標本采集與處理 2.3.1腸系膜上動脈夾閉性休克(SMAO)的標本采集與處理 2.3.1.1觀察休克2小時動物死亡率 觀察動物休克后的一般情況，記錄2小時各組動物的死亡數(shù)，計算死亡率。
2.3.1.2血液動力學(xué)變化 2.3.1.2.1記錄SMAO大鼠的平均動脈壓(MAP) 按照設(shè)定時間點，各組動物于夾閉前，再灌注后0，5，10，15，20，30，45，60，90，120MI N記錄動物的平均動脈壓，把動物最初的MAP作為100％，以后每個時間點的MAP與之相除得到百分數(shù)，對百分數(shù)進行統(tǒng)計。開夾后，動物的血壓都有所下降，下降的幅度一般為最初血壓的60％左右，本試驗規(guī)定，血壓下降至原血壓的2/3以下的動物為造模成功，否則被視為無效模型，棄去。
2.3.1.2.2記錄SMAO大鼠的心率 記錄每個時間點的心率數(shù)進行統(tǒng)計。在一定范圍內(nèi)，如果每次心搏出量不變，心率增快，則心排出量增加，但如果心率過大，舒張期過短，心室充盈時間過短，充盈不足，每次心搏出量也隨之減少，導(dǎo)致心排出量降低。
2.3.1.3SMAO大鼠血清生化指標的測定 于夾閉前、再灌注后120MI N抽取動脈血約0.5ml，2500rpm×5min離心，取上清，進7170型自動生化分析儀測定BUN、Cr、GPT、GOT、LDH、CK和GLU。
2.3.1.4休克2小時血清一氧化氮(nitric oxide，NO)的測定于再灌注后120min抽取動脈血離心，按一氧化氮試劑盒步驟操作。具體操作 混勻，37℃準確水浴60分鐘 充分斡旋混勻30秒，室溫靜置10分鐘，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清顯色。
混勻，室溫靜置10分鐘，蒸餾水調(diào)零，550nm，0.5cm光徑，測各管吸光度值 計算公式
2.3.1.5SMAO大鼠組織抗氧化指標的測定 2.3.1.5.1大鼠小腸組織丙二醛(MDA)的測定 休克2小時后處死動物(或動物死亡后)，迅速解剖，選取回盲瓣上端6厘米處的小腸作為取材，用銳利刀片割取小腸組織約0.5g。稱重，用生理鹽水制成10％的組織勻漿，取0.1ml上述組織勻漿，依次加入8.1％十二烷基硫酸鈉(SDS)0.2ml，pH 3.5的醋酸緩沖液1.5ml，1％硫代巴比妥酸(TBA)1.5ml，蒸餾水1.0ml，沸水浴40分鐘，冷卻后3000rpm離心15分鐘，取上清液，721分光光度計于532nm波長處測定A值。按下式計算每克組織MDA的生成量 C＝A×D/ε(μmol/g) 其中A為吸光度，ε為消光系數(shù)(156000L/mol/cm)，D為稀釋倍數(shù)。
2.3.1.5.2大鼠肝、腎組織谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的測定 采集動物休克2小時血樣，將動物處死，取肝臟和腎臟各約0.5g。按谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒操作。
取組織用冰冷的生理鹽水漂洗，拭干，稱重，制成10％組織勻漿， (1)酶促反應(yīng) 37℃水浴預(yù)溫5分鐘 37℃水浴準確反應(yīng)5分鐘 混勻，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清顯色。
(2)顯色反應(yīng) 混勻，室溫靜置15分鐘，蒸餾水調(diào)零，412nm，1cm光徑，測各管吸光度值
2.3.1.6SMAO大鼠肺組織含水率及支氣管肺泡灌洗液(BALF)蛋白的測定 腸缺血再灌注導(dǎo)致的多種臟器功能障礙中以呼吸衰竭最為常見，取右肺肺組織，吸干后稱濕重，60℃烤箱烘烤48h，再稱干重。含水率＝(濕重-干重)/濕重×100％；收集全部支氣管肺泡灌洗液(bronchiaalveolus lung fluid，BALF)離心，1000rpm，10min，取上清用考馬斯亮蘭法蛋白定量(g/L)。
支氣管肺泡灌洗液收集方法從氣管插入輸液用塑料細管至左主支氣管，經(jīng)左主支氣管行左肺支氣管肺泡灌洗。用生理鹽水5ml分3次灌洗，回收率80％-90％，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)。
2.3.2失血性休克貓的標本采集與處理 2.3.2.1失血性休克貓血壓的測定 觀察動物放血、回輸液體的一般情況，記錄各組動物在休克前、休克后0分鐘及復(fù)蘇后30、60、120分鐘的收縮壓、舒張壓、平均動脈壓。
2.3.2.2失血性休克貓血氣分析的測定 各組動物均于放血前、休克0分鐘和復(fù)蘇120分鐘抽取動脈血標本約1ml進血氣分析儀測定血氣(血氣標本6小時內(nèi)測定)，標本隔絕空氣。記錄pH、BE、HCO3-act、PCO2、PO2等指標。
2.3.2.3失血性休克貓復(fù)蘇后血常規(guī)的測定 各組動物均于復(fù)蘇120分鐘抽取動脈血標本約1ml，肝素抗凝后進自動分析儀測定血常規(guī)。記錄血紅蛋白、白細胞計數(shù)。
2.3.2.4失血性休克貓血清丙二醛(MDA)的測定 各組動物均于復(fù)蘇120分鐘抽取動脈血3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清待測MDA。
2.3.2.5失血性休克貓血清乳酸(LD)的測定 各組動物均于復(fù)蘇120分鐘抽取動脈血，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清待測乳酸。
混勻，37℃水浴準確反應(yīng)10分鐘 混勻，530nm，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測各管吸光度值
2.3.2.6組織病理標本的制備 各組動物復(fù)蘇2h被處死后迅速開胸，取肺臟、肝臟各約1.0克，存于福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色觀察。
2.3.3燙傷性休克大鼠標本的采集 2.3.3.1燙傷后3小時大鼠紅細胞壓積(Hct)的測定 觀察并記錄動物的狀態(tài)。分別于燙傷后3小時收集大鼠靜脈血約0.5ml，抗凝后檢測Hct。
2.3.3.2燙傷后3小時大鼠心肌酶的測定 于燙傷后3小時收集大鼠靜脈血約0.5ml，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，分離血漿后進全自動生化分析儀測定血漿CK-MB、LDH、α-HBD等的變化。
2.3.4胰島素性休克的記錄 觀察給藥后240分鐘內(nèi)動物的一般情況，記錄小鼠首次發(fā)生驚厥和死亡的時間。
3統(tǒng)計學(xué)處理 本實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(mean±s)表示。采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包處理，多組間比較用方差分析，兩兩比較采用配對t檢驗。
4結(jié)果 4.1人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克的影響 4.1.1人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠死亡率的影響夾閉腸系膜上動脈后，腸組織循環(huán)障礙，血液淤積，因腸組織長時間的缺血缺氧，引起腸壁細胞壞死和通透性增加，大量體液從腸腔丟失，腸道內(nèi)的細菌代謝產(chǎn)物和毒素進入血液，加上腸缺血再灌注生成大量自由基，啟動脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致毒血癥，使動物死亡。結(jié)果從

圖1可以看出，休克后2小時內(nèi)，除假手術(shù)對照組外各組均出現(xiàn)動物死亡，但模型組動物死亡過半，人參皂苷Re不同劑量組及654-2組動物死亡率明顯低于模型組，在10％-20％左右，顯示人參皂苷Re能明顯降低SMAO大鼠的死亡率(表4)。
表4.人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠死亡率的影響

與模型組比**p＜0.01，與假處理組比#p＜0.01 表5.人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠平均動脈壓％的影響
表內(nèi)數(shù)據(jù)為平均動脈壓(mmHg)，與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比#p＜0.05，##p＜0.01 4.1.2人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血液動力學(xué)的影響 4.1.2.1人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠平均動脈壓的影響 腸系膜上動脈夾閉120分鐘后，假手術(shù)對照組血壓略有降低，降至原平均動脈壓的80％左右，模型組平均動脈壓降至原平均動脈壓的2/3以下，顯著低于假手術(shù)對照組，進入休克狀態(tài)，雖然在10分鐘后血壓代償性回升，但從休克第20min起，模型組平均動脈壓開始進行性下降，而人參皂苷Re不同劑量組與654-2組從休克后第30min至120min各時間點的平均動脈壓均顯著高于模型組(表5)，表現(xiàn)為穩(wěn)定而持久的代償性變化。
4.1.2.2人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠心率的影響 休克后各組動物的心率隨時間逐漸下降，但各組之間相比均無顯著性差異。心率下降的原因主要考慮為麻醉的影響、心肌受損以及電解質(zhì)紊亂，如高血鉀、低血鈣等。
4.1.3人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清生化指標的影響 4.1.3.1人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清尿素氮和肌酐的影響 表6人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清尿素氮和肌酐的影響
與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表6可見，休克前各組動物尿素氮和肌酐無顯著性差異，休克2小時模型組動物尿素氮和肌酐顯著高于假手術(shù)對照組，顯示休克后腎功能受損，血中尿素氮和肌酐含量升高。與模型組相比，人參皂苷Re中、高劑量能明顯降低血清尿素氮的含量，人參皂苷Re中劑量能明顯降低血清肌酐的含量。但各給藥組并不能使尿素氮和肌酐降至正常水平。
4.1.3.2人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響 表7人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響

與模型組比**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表7可見休克前各組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶無顯著性差異，休克2小時模型組二者含量顯著高于假手術(shù)對照組，顯示休克后肝細胞受損，細胞膜破裂，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶釋放入血。與模型組相比，人參皂苷Re中劑量組能明顯降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。但各給藥組并不能使谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶恢復(fù)至正常水平。
4.1.3.3人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清乳酸脫氫酶和肌酸激酶的影響 由表8可見，休克前各組動物血清乳酸脫氫酶和肌酸激酶無顯著性差異，休克2小時模型組二者含量顯著高于假手術(shù)對照組，顯示休克后細胞受損，細胞膜破裂，乳酸脫氫酶和肌酸激酶大量釋放入血。與模型組相比，人參皂苷Re低、中劑量組能明顯降低血清乳酸脫氫酶的含量。顯示人參皂苷Re具有穩(wěn)定細胞膜、保護受損細胞的作用。但人參皂苷Re各給藥組并不能降低血中肌酸激酶的含量。
表8人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清乳酸脫氫酶和肌酸激酶的影響 與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 4.1.3.4人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血糖的影響 表.9人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血糖的影響

與模型組比，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表9可見，休克前各組動物血糖無明顯差異，均在4mmol/l左右，休克2小時后模型組血糖升高，顯著高于假手術(shù)對照組，說明休克后由于缺血缺氧，有氧代謝障礙，熱量產(chǎn)生不足，機體為滿足熱量的需要就大大加強無氧代謝，必然要消耗更多的葡萄糖，同時，休克也是一種應(yīng)激，血糖隨之升高。但人參皂苷Re給藥組及654-2組的血糖與模型組無顯著性差異。
4.1.3.5人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清一氧化氮的影響 表10顯示休克2小時，模型組血清一氧化氮的水平明顯高于假手術(shù)對照組，說明休克后由于毒素、細胞因子及炎癥介質(zhì)等的誘導(dǎo)，一氧化氮大量生成，與模型組相比，人參皂苷Re能明顯降低血清的一氧化氮值，但Re高劑量組無此作用。
表.10人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠血清NO的影響
與模型組比*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 4.1.4人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠抗氧化作用的影響 4.1.4.1人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠小腸組織丙二醛的影響 表.11人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠小腸丙二醛的影響
與模型組比*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 表11可見，腸缺血再灌注損傷2小時后，由于脂質(zhì)過氧化損傷，模型組小腸組織丙二醛顯著高于假手術(shù)對照組。與模型組相比，人參皂苷Re中劑量組小腸組織丙二醛顯著降低，但仍然顯著高于假手術(shù)對照組。
4.1.4.2人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠肝臟及腎臟組織谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的影響 表12人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠肝臟及腎臟組織谷胱甘肽過氧化物酶的影響
與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 由表12可見，休克2小時，模型組肝、腎組織的GSH-PX顯著低于假手術(shù)對照組，顯示了腸缺血再灌注損傷2小時后，組織的GSH-PX含量明顯下降。人參皂苷Re中、低劑量組與654-2組的肝組織GSH-PX明顯高于模型組，其有增加缺血再灌注后肝組織內(nèi)GSH-PX水平的作用，但腎臟組織的GSH-PX各給藥組與模型組相比無顯著性差異。
4.1.5人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠肺組織含水率及支氣管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量的影響 表.13人參皂苷Re對腸系膜上動脈夾閉性休克大鼠肺組織含水率及支氣管肺
與模型組比*p＜0.05，，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 表13顯示休克2小時后，模型組肺組織含水率及肺泡灌洗液的蛋白含量明顯高于假手術(shù)對照組，表明休克后動物肺組織水腫和炎性滲出，二者明顯升高，人參皂苷Re各劑量組肺組織含水率均明顯低于模型組，人參皂苷Re中、高劑量組支氣管肺泡灌洗液的蛋白含量明顯低于模型組，表明了人參皂苷Re具有減輕肺水腫和炎性滲出的作用。
4.2人參皂苷Re對貓失血性休克的影響 4.2.1失血性休克貓的一般狀況 表.14失血性休克貓的一般狀況的影響(mean±s，n＝8)


與模型組比p＞0.05，與假處理組比p＞0.05 由表14可見，幾組動物的體重、放血總量、放血時間等比較P＞0.05，沒有顯著性差異，說明兩組動物在性別、體重、放血總量、放血時間上具有可比性。
4.2.2人參皂苷Re對失血性休克貓血液動力學(xué)的影響 4.2.2.1人參皂苷Re對失血性休克貓收縮壓(mmHg)的影響 表.15人參皂苷Re對失血性休克貓收縮壓(mmHg)的影響(mean±s，n＝8)
與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表15可見，放血前各組動物收縮壓無顯著性差異，放血后，除假手術(shù)對照組外各組收縮壓均降至68mmHg左右，假手術(shù)對照組的收縮壓隨時間改變略有下降，液體回輸后，收縮壓逐漸回升，但模型組各時間點的收縮壓均明顯低于假手術(shù)對照組，人參皂苷Re低、中、高劑量組及多巴胺組收縮壓回升較快，至再灌注60分鐘，上述三組收縮壓顯著高于模型組。再灌注120分鐘時，各組收縮壓有所下降，人參皂苷Re中劑量及多巴胺組收縮壓仍顯著高于模型組。表明人參皂苷Re具有升高失血性休克動物的收縮壓的作用。
4.2.2.2人參皂苷Re對失血性休克貓舒張壓(mmHg)的影響 表.16人參皂苷Re對失血性休克貓舒張壓(mmHg)的影響(mean±s，n＝8)

與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 表16可見，放血前各組動物舒張壓無顯著性差異，放血后，除假手術(shù)組外各組舒張壓均降至28mmHg左右，假手術(shù)對照組的舒張壓隨時間改變略有下降，隨著液體的回輸，舒張壓逐漸回升，但休克后模型組各時間點的舒張壓均明顯低于假手術(shù)對照組，至再灌注120分鐘時，模型組舒張壓逐漸下降，而人參皂苷Re中、高劑量組持續(xù)增高，顯著高于模型組。表明人參皂苷Re具有升高失血性休克后動物的舒張壓的作用。
4.2.2.3人參皂苷Re對失血性休克貓平均動脈壓(mmHg)的影響 平均動脈壓是指一個心動周期中每一瞬間動脈血壓的平均值，等于舒張壓+(收縮壓-舒張壓)/3。
表.17人參皂苷Re對失血性休克貓平均動脈壓的影響(mmHg，χ±s，n＝8)
與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表17可見，放血前各組動物平均動脈壓無顯著性差異，放血后，除假手術(shù)組外各組收縮壓均降至40mmHg左右，隨著液體的回輸，平均動脈壓逐漸回升，但各組均無顯著差異。至再灌注60分鐘，人參皂苷Re中、高劑量及多巴胺組平均動脈壓回升較快，顯著高于對照組。再灌注120分鐘時，各組平均動脈壓均有所下降，人參皂苷Re中、高劑量及多巴胺組平均動脈壓仍顯著高于對照組。
4.2.3人參皂苷Re對失血性休克貓血氣及血常規(guī)的影響 4.2.3.1人參皂苷Re對失血性休克貓pH值的影響 表18人參皂苷Re對失血性休克貓pH值的影響(χ±s，)

n＝8與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 由表18可見，兩組動物在休克期與休克恢復(fù)期pH值均呈下降趨勢，所有動物均出現(xiàn)明顯的代謝性酸中毒；人參皂苷Re中、高劑量組及多巴胺組能改善機體代謝性酸中毒的狀態(tài)，pH值明顯高于對照組。
4.2.3.2人參皂苷Re對失血性休克貓血氣分析其他指標的影響 表19人參皂苷Re對失血性休克貓血氣分析其他指標的影響(χ±s，n＝8)復(fù)蘇120min
與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 由表19可見，實驗結(jié)果顯示，休克復(fù)蘇2小時末，模型表現(xiàn)為代謝性酸中毒伴呼吸性堿中毒，其中人參皂苷Re中、高劑量組及多巴胺組的BE負值小于模型組，HCO3-顯著高于模型組，表明人參皂苷Re可以改善機體代謝性酸中毒的狀態(tài)。各組的PCO2值及氧分壓比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
4.2.3.3人參皂苷Re失血性休克貓血常規(guī)的影響 表20人參皂苷Re失血性休克貓血常規(guī)的影響(χ±s，n＝8)
與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 由表20可見，休克復(fù)蘇2小時各組Hct無明顯差異。人參皂苷Re中劑量組血紅蛋白顯著高于對照組，表明人參皂苷Re中劑量可以提高休克復(fù)蘇后血紅蛋白的含量，改善了器官組織的供氧障礙。人參皂苷Re各劑量組白細胞數(shù)均顯著低于對照組，表明人參皂苷Re具有抗炎作用，減輕了血管內(nèi)皮的損傷，改善了休克所致的微循環(huán)障礙。
4.2.4人參皂苷Re失血性休克貓血清乳酸及MDA的變化 4.2.4.1人參皂苷Re失血性休克貓血清MDA的影響 表21人參皂苷Re失血性休克貓血清MDA的影響(χ±s，n＝8)
與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 由表21可見，人參皂苷Re各給藥組及多巴胺組血清MDA均顯著低于對照組。表明人參皂苷Re有抗氧化、抗自由基、抑制脂質(zhì)過氧化物生成、穩(wěn)定生物膜的作用，減輕了細胞結(jié)構(gòu)在休克過程中的損害，保護細胞功能，從而避免或減輕重要臟器的損傷，有利于臟器功能的恢復(fù)，使休克得以糾正。
4.2.4.2人參皂苷Re對失血性休克貓血清乳酸(LD)的影響 休克復(fù)蘇2小時模型組血清LD顯著高于假手術(shù)對照組，表明了休克后組織由于缺血缺氧，加劇無氧代謝，導(dǎo)致酸性產(chǎn)物堆積，人參皂苷Re中、高劑量組與654-2組的血清LD明顯低于模型組，提示人參皂苷Re可以改善機體的缺氧狀態(tài)。
4.3人參皂苷Re對燙傷性休克大鼠的影響 4.3.1人參皂苷Re對燙傷性休克大鼠Hct的影響 嚴重的燙傷、劇烈的疼痛等超強刺激傳入中樞，引起交感神經(jīng)強烈興奮，燙傷后毛細血管的通透性增加，血漿成分大量喪失，有效循環(huán)血量減少，紅細胞壓積增加。表22顯示休克3小時，模型組Hc t顯著高于假手術(shù)對照組，表明燙傷后毛細血管的通透性增加，血漿成分大量喪失，有效循環(huán)血量減少，Hc t增加，人參皂苷Re中、高劑量組及多巴胺組HCT顯著低于模型組，表明人參皂苷Re中劑量、高劑量組可以提高休克后的有效循環(huán)血量，改善了器官組織的供氧障礙。
表.22人參皂苷Re對燙傷性休克大鼠Hct的影響(mean±s，n＝8)
與模型組比，*p＜0.05，與假處理組比##p＜0.01 4.3.2人參皂苷Re對燙傷性休克大鼠心肌酶的影響 表23人參皂苷Re對燙傷性休克大鼠血清乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK-MB)、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBD )的影響(mean±s，n＝8)
與模型組比，**p＜0.01，與假處理組比##p＜0.01 結(jié)果顯示休克3小時，模型組大鼠血清LDH、CK-MB、α-HBD較假手術(shù)對照組明顯升高，顯示了休克后動物的心肌受到損害，心肌細胞破裂，LDH、CK-MB、α-HBD等大量釋出，從表.20我們看出人參皂苷Re中、高劑量組LDH、CK-MB、α-HBD顯著低于模型組，顯示了人參皂苷Re具有穩(wěn)定心肌細胞膜的作用(表23)。
4.4人參皂苷Re對胰島素性休克小鼠的影響 4.4.1人參皂苷Re對胰島素性休克小鼠驚厥時間和死亡時間的影響 結(jié)果顯示人參皂苷Re中劑量組可以明顯延長小鼠死亡時間，但各給藥組對首次驚厥時間無影響(表24)。
表24.人參皂苷Re對胰島素性休克小鼠驚厥時間和死亡時間的影響(mean±s)

與模型組比，*p＜0.05 以上結(jié)果提示，人參皂苷Re可改善休克動物的狀態(tài)，降低休克動物的死亡率，對失血性休克、感染性休克等模型都展示出良好的治療效果。
試驗結(jié)果表明，人參皂苷Re的最小有效量為40mg/kg，LD50為400mg/kg。
人參皂苷Re可以和藥學(xué)上可接受的載體混合制備臨床上可以接受的各種劑型，如片劑、膠囊、注射劑、顆粒劑等。
人參皂苷Re可改善休克動物的狀態(tài)，降低休克動物的死亡率，在臨床上可用于休克患者，產(chǎn)生輔助抗休克作用，以提高休克搶救的成功率。

具體實施例方式 下述實施例是為了更好的闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。
實施例1人參皂苷Re注射液 處方(按1000支計算) 人參皂甙Re20g 丙二醇300g 聚乙二醇400 150g NaCl 9g 加注射用水至 2000ml 制法 稱取處方量的藥物、丙二醇/聚乙二醇和1000ml注射用水，混合溶解后，加入0.1％活性炭，攪拌10分鐘，過濾。濾液中加注射用水至2000ml，攪拌均勻，過濾。分裝，滅菌。得成品。
實施例2人參皂苷Re片 人參皂苷Re60g 羧甲基淀粉鈉 18g 微晶纖維素72g 乳糖 150g 制成 1000片 制法將上述原、輔料過80目篩混合均勻，再以5％聚維酮K30水溶液為粘合劑過18目篩制粒，在40℃的條件下干燥，然后用16目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂混勻，壓片，即得。
權(quán)利要求
1.人參皂苷Re在感染性休克、失血性休克、燙傷性休克、低血糖休克藥物中的應(yīng)用。
2.人參皂苷Re可與藥學(xué)上可接受的載體混合制備臨床接受的片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了人參皂苷Re的抗休克作用。人參皂苷Re對失血性休克、感染性休克、燙傷性休克、低血糖休克均有良好的治療效果。試驗結(jié)果表明，人參皂苷Re的最小有效量為40mg/kg，LD50為400mg/kg。人參皂苷Re可以和藥學(xué)上可接受的載體混合制備臨床上可以接受的各種劑型，如片劑、膠囊、注射劑、顆粒劑等以改善休克狀態(tài)，降低休克動物的死亡率。在臨床上可用于休克搶救，產(chǎn)生輔助抗休克作用，提高休克搶救的成功率。
文檔編號A61P43/00GK101721420SQ20081022818
公開日2010年6月9日 申請日期2008年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月21日
發(fā)明者徐峰, 路金才, 鄧意輝, 呂爽, 馬文慧, 徐靜華, 王敏 申請人:沈陽藥科大學(xué)