專利名稱：：3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物及其制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬有機化合物制備，主要涉及3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物及制備方法和在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：Combretastatins是由南非植物Cow&e似wca#ram的根皮或莖中提取分離的具抗腫瘤活性的二苯乙烯類化合物。自1982年始相關(guān)的化合物相繼被發(fā)現(xiàn)，CombretastatinA-4(CA-4)是其中最有效的抗腫瘤成分之一。機制研究表明，其具有良好的抑制微管蛋白聚集和選擇性抑制腫瘤血管增生的活性，因此引起了人們的極大關(guān)注。但該化合物由于水溶性差的原因，體內(nèi)抗腫瘤活性較弱，故將CA-4B環(huán)的3-位羥基進行磷酸化后制得其水溶性前藥CA-4磷酸二鈉鹽(CA-4P)，其體內(nèi)抗腫瘤活性大大提高，2006年被FDA批準(zhǔn)為罕見病的治療藥物，用于治療卵巢癌。目前，CA-4P作為腫瘤血管生成抑制劑正在美國等國家進行II期臨床試驗。在以CA-4為先導(dǎo)物進行結(jié)構(gòu)修飾的過程中，發(fā)現(xiàn)用構(gòu)象限制的五元環(huán)(咪唑啉-2-酮)替代原結(jié)構(gòu)中的乙烯連接鏈，所得到的叢芳基-3-芳基-4-芳基-咪唑-2-酮-1-甲酰胺類化合物(見中國專利ZL200410052976.X中公開的內(nèi)容)顯示了較強的抑制腫瘤細胞增殖的活性，這為我們后續(xù)的研究提供了新的方向。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎的未見文獻報道的含有3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物，本發(fā)明是將5-胺基異噁唑環(huán)替代CA-4結(jié)構(gòu)中乙烯連接鏈，作為構(gòu)像限制性基團，合成了一系列的3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物，本發(fā)明提供的3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物結(jié)構(gòu)通式為其中(1)Ar!為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán):單取代苯環(huán)上的取代基為氟、氯、溴、硝基、含1至3個碳原子的直鏈或支鏈的垸氧基中的一種，二取代苯環(huán)上的取代基為3-羥基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羥基、3，4-二甲氧基、3-芐基-4-甲氧基、3-硝基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一種，三取代苯環(huán)上的取代基為4-羥基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一種；(2)Ar2為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)或芳雜環(huán)單取代苯環(huán)上的取代基為氟、氯、溴、含1至3個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基中的一種，二取代苯環(huán)上的取代基為3-羥基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羥基、3，4-二甲氧基、3-節(jié)基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一種，三取代苯環(huán)上的取代基為4-羥基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一種，芳雜環(huán)為噻吩、吡啶、呋喃或吡咯中的一種；(3)&和112相同或不同，選用氫、甲基、乙基或含l-4個碳原子的酰基。本發(fā)明的另一個目的是提供3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)本發(fā)明的合成路線根據(jù)上述反應(yīng)式可制得目標(biāo)產(chǎn)物V和VI?；衔颕(取代的芳香乙腈)可按文獻方法(Zhong，R.Q.etal，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志2005，36，328;Sundaresan，A.K.etal，OrganicLetters,2007，9，3575)制得，化合物II(取代的芳香羧酸酯衍生物)可按文獻方法(Elsinghorst，P.W.etal，JMed.Chem.2006，49，7540)制得。具體制備步驟為(1)在極性溶劑中，堿性條件下，化合物i和化合物n反應(yīng)生成化合物ni，反應(yīng)溫度為20—9(TC，所得產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶可得純品。極性溶劑選用N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、四氫呋喃或二氯甲垸中的一種，堿性物質(zhì)選用碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲醇鈉、叔丁醇鈉、氫化鈉、三乙胺或吡啶中的一種；(2)化合物ni在極性溶劑中與鹽酸羥胺縮合得到化合物iv，反應(yīng)溫度為20—12(TC，所得產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶可得純品。極性溶劑選用N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇或異丙醇中的一種；(3)化合物IV與冰醋酸反應(yīng)10—24小時，經(jīng)柱層析分離可得到化合物V和化合物VI的純品。本發(fā)明的又一個目的是提供3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。初步的藥理實驗發(fā)現(xiàn)它們對多種腫瘤細胞株，包括K562，ECA-109，A549，SMMC-7721，PC-3等均有較好的體外抑制增殖作用，其中IVa、IVi和VIa作用尤為突出，IVa對上述細胞的IC5o值在0.02-4.28嗎/ml之間，IVi對上述細胞的IC5。值在0.14-9.39pg/ml之間，VIa對上述細胞的ICs。值在0.03-0.60[xg/ml之間。流式結(jié)果顯示IVa可使SMMC-7721細胞終止在G2/M期，且阻滯活性較高；VIa可使SMMC-7721細胞終止在G2/M期，且阻滯活性比CA-4更高，并具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。本發(fā)明的特點是以天然產(chǎn)物CA-4為先導(dǎo)化合物，將5-胺基異噁唑環(huán)替代CA-4結(jié)構(gòu)中乙烯連接鏈得到的3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物。這是一類結(jié)構(gòu)全新的化合物，初步的藥理活性篩選試驗表明這些化合物均具有較好的抗腫瘤活性，有些化合物具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。本發(fā)明設(shè)計合理，制備簡單，適于實用。具體實施例方式本發(fā)明結(jié)合實施例作進一步的說明。以下的實施例是說明本發(fā)明的，而不是以任何方式限制本發(fā)明。實施例l、2-(4-甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(IIIa)將0.15g(1mmol)4-甲氧基苯乙腈和10mL無水四氫呋喃投入二頸瓶中，攪拌溶解，加入0.058g(2.4mmo1)氫化鈉，滴加0.27g(1.2mmol)3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯和20mL無水四氫呋喃混合液，滴畢，加熱回流反應(yīng)5小時(TLC監(jiān)測)。加水停止反應(yīng)，用二氯甲烷提取，棄去有機層。水層加3M鹽酸酸化至沉淀不再產(chǎn)生，抽濾，濾餅用水洗滌，干燥。粗品用乙醇重結(jié)晶，得到類白色固體0.27g，收率78%;熔點90-92°C。JHNMR(400MHz，CDC13)S3.78(s,3H，OCH3)，3.85(s，6H，OCH3x2),3.90(s，3H，OCH3),5.56(s,1H,//C-CN),6.91(d,2H,/=8.8Hz,Ar-H),7.18(s，2H,Ar鄰，7.35(d,2H,/=8.8Hz，Ar-H)。實施例2、2-(3，4-二甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(mb)操作過程與實施例l相同，只是用3，4-二甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率71%;熔點159-160°C。!HNMR(400MHz,CDC13)53.88(s,6H,OCH3x2)，3.89(s,6H，OCH3x2)，3.92(s，3H,OCH3),5.48(s，1H,//C-CN),6.88(d，1H,/=8,4Hz，Ar畫H)，6.92(s,1H,Ar誦H)，6.99(d，1H，《/=8.4Hz,Ar-H),7.21(s,2H，Ar-H)。實施例3、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4,5-三甲氧基苯基)-丙腈(1仏)操作過程與實施例l相同，只是用3，4，5-二甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率68%;熔點174-176。C。'HNMR(400MHz,CDC13)53.82(s，6H,OCH3x2),3.83(s,6H，OCH3x2),3.90(s,3H，OCH3)，5.44(s，1H，T/C畫CN)，6.62(s,2H,Ar-H),7.19(s,2H,Ar隱H)。實施例4、2-(4畫氯苯基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(IIId)操作過程與實施例l相同，只是用4-氯苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率80%;熔點148-150°C。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.65(s,6H，OCH3x2),3.83(s，3H,OCH3),5.29(s，1H,i/C-CN)，6.52(s，2H，Ar畫H),7.23(d,2H，《/=8.4Hz,Ar-H),7.33(d，2H，《/=8.4Hz,Ar-H)。實施例5、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIe)操作過程與實施例l相同，只是用3-芐氧基-4-甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率54%;熔點135-136°C。&NMR(400MHz,CDC13)S3.83(s，9H，OCH3x3)，3.93(s，3H,OCH3)，5.15(s,2H，CH2)，5.48(s，1H，T/C-CN)，6.60(s,2H,Ar-H),6.89(d，1H,/=8.4Hz，Ar誦H),7.32-7.45(m,5H，Ar陽H)，7.56-7.61(m,2H，Ar-H)。實施例6、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIf)將化合物IIIe0.45g(lmmol)，10e/。鈀碳0.1g以及25mL四氫呋喃依次投入到反應(yīng)瓶中，氫氣飽和，室溫反應(yīng)12小時(TLC監(jiān)測)。抽濾，濾液減壓濃縮，殘余物以硅膠柱層析純化，以石油醚乙酸乙酯(h2)為洗脫劑，得到灰白色固體0.18g，收率47%;熔點53-55°C。^NMR(400MHz，CDC13)53.82(s，3H，OCH3)，3.84(s，6H,OCH3x2)，3.94(s，3H，OCH3),5.49(s,1H,//C-CN),6.55(s,2H,Ar-H),6.88(d,1H,J=8.8Hz,Ar-H)，7.52(s,1H,Ar-H),7.56(d,1H，/=8.8Hz,Ar鄰。實施例7、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(3，4-二甲氧基苯基)-丙腈(IIIg)操作過程與實施例l相同，只是用3，4-二甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率72%;熔點123-124。C。JHNMR(400MHz,CDC13)53.78(s，3H，OCH3),3.80(s,6H,OCH3x2),3.86(s,3H,OCH3),3.90(s，3H,OCH3),5.53(s,1H，//C-CN),6.60(s,2H,Ar國H),6.84(d，1H,/=8.8Hz，Ar-H),7.47(s,1H,Ar-H),7.56(d,1H,J=8,8Hz,Ar-H)。實施例8、2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-酮-3-(4-甲氧基苯基)-丙腈(IIIh)操作過程與實施例l相同，只是用4-甲氧基苯甲酸甲酯替代3，4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯，3，4，5-三甲氧基苯乙腈替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率72%;熔點94-96°C。JHNMR(400MHz,CDC13)S3.83(s，3H,OCH3),3.85(s,6H，OCH3x2),3.87(s,3H，OCH3),5.48(s，1H，7/C-CN),6,62(s，2H,Ar-H),6,94(d，2H，/=8.8Hz,Ar-H),7.95(d，2H，《/=8.8Hz,Ar誦H)。實施例9、2-(3-噻吩基)-3-酮-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-丙腈(111》操作過程與實施例l相同，只是用3-乙腈噻吩替代4-甲氧基苯乙腈，得到白色固體，收率75%;熔點128誦130。C。JHNMR(400MHz,CDC13)S3.87(s，6H,OCH3x2)，3.93(s,3H,OCH3),5.59(s,1H，TfC-CN)，7.11(dd，1H,/=1.2，4.8Hz，ThiopheneH)，6.58(s,2H，Ar-H),7.20-7.22(m，2H,ThiopheneH)。實施例IO、4-(4-甲氧基苯基)-3-(3,4，5-三甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVa)將0.34g(1mmol)化合物IIIa和0.07g(1mmol)鹽酸羥胺依次投入到反應(yīng)瓶中，加入5mL乙醇，加熱反應(yīng)2小時(TLC監(jiān)測)。反應(yīng)完畢，減壓濃縮，得黃色固體殘留物，殘留物用水/乙醇(60%)重結(jié)晶，得到白色固體0.23g，收率:65%;熔點:157-159。C。'HNMR(400MHz，CDC13)S3.68(s,6H,OCH3x2),3.83(s,3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3),4,51(brs，2H，NH2)，6.72(s,2H，Ar誦H),6.94(d，2H,8.8Hz，Ar-H)，7.19(d，2H，《/=8.8Hz,Ar陽H)。實施例ll、4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVb)操作過程與實施例10相同，只是用化合物nib替代nia，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率59%;熔點:159-160。C。^NMR(400MHz,CDC13)S3.68(s，6H,OCH3x2),3.76(s，3H，OCH3)，3.85(s，3H,OCH3)，3.90(s，3H，OCH3),4.57(brs,2H,NH2),6.73(d,1H,/=2.0Hz，Ar-H)，6.75(s，2H，Ar-H),6.84(dd，1H,/=2.0,8.0Hz,Ar-H)，6.91(d,1H，《/=8.0Hz賃Ar陽H)o實施例12、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVc)操作過程與實施例10相同，只是用化合物nie替代IIIa，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率47%;熔點:160-162。C。NMR(400MHz,CDC13)S3.70(s，6H，OCH3x2),3.78(s,6H，OCH3x2)，3.86(s,6H,OCH3x2)，4.60(brs,2H,NH2),6.47(s,2H，Ar國H),6.76(s,2H,Ar鄰。實施例13、4-(4-氯苯基)-3畫(3，4，5-三甲氧基苯基)-異噁唑-5誦胺(Wd)操作過程與實施例10相同，只是用化合物IIId替代IIIa，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率70%;熔點:170-172。C。&NMR(400MHz，CDC13)S2.84(brs，2H，NH2),3.68(s,6H,OCH3x2),3.84(s,3H,OCH3),6.64(s，2H，Ar-H),7.18(d，2H,J=8.8Hz，Ar-H)，7.34(d，2H,/=8.8Hz,Ar-H)。實施例14、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVe)操作過程與實施例10相同，只是用化合物nie替代IIIa，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率48%;熔點:156-168T。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.74(s,6H，OCH3x2),3.87(s,3H,OCH3),3.88(s,3H,OCH3),4.57(brs,2H，NH2)，4.98(s,2H，CH2),6.47(s，2H，Ar-H)，6.83(d，1H，J=8.4Hz，Ar-H),7.07(d，1H，《/=8.4Hz，Ar鄰，7.11(s，1H，Ar-H),7.28-7.33(m,5H,Ar畫H)。實施例15、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVf)操作過程與實施例10相同，只是用化合物ni潛代nia，殘余物以硅膠柱層析純化得灰白色固體，收率36%;熔點:131-133。C。!HNMR(400MHz,CDC13)S3.86(s，6H,OCH3x2),3.92(s,6H，OCH3x2),6.49(s,2H,Ar-H)，6.76-6.77(m，2H,Ar-H),7.39-7.40(m,1H,Ar誦H)。實施例16、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVg)操作過程與實施例io相同，只是用化合物iiig替代nia，殘余物以硅膠柱層析純化得亮黃色固體，收率58%;熔點:132-134。C。'HNMR(400MHz，CDC13)53.75(s，9H，OCH3x3),3.86(s，3H,OCH3)，3.88(s,3H,OCH3)，4.61(brs，2H，NH2),6.46(s,2H，Ar-H),6.80(d，1H，/=8.0Hz,Ar-H)，7.04(dd，1H，J=1.6,8.0Hz,Ar國H)，7.10(d，1H,/=1.6Hz,Ar-H)。實施例17、4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IVh)操作過程與實施例io相同，只是用化合物nih替代nia，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率63%;熔點:146-148。C。!HNMR(400MHz，CDC13)S3.72(s,6H，OCH3x2)，3.82(s，3H,OCH3),3.88(s，3H，OCH3)，4.60(brs，2H，NH2)，6.41(s，2H,Ar-H)，6.87(d，2H，/=8.8Hz,Ar-H),7.44(d，2H，/=8.8Hz,Ar鄰。實施例18、4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)-異噁唑-5-胺(IYj)操作過程與實施例io相同，只是用化合物nii替代ma，殘余物以硅膠柱層析純化得白色固體，收率68%;熔點:146-147。C。'HNMR(400MHz，CDC13)33.70(s，6H,OCH3x2),3.85(s,3H，OCH3)，4.60(brs,2H,NH2),6.73(s,2H，Ar-H)，6.95(dd,1H,/=1.2,4.8Hz,ThiopheneH)，7.18-7.19(m，1H,ThiopheneH),7.37-7.39(m,1H，ThiopheneH)。實施例19、N-(4-(4-甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Va)N-乙?；?N-(4-(4-甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Via)將0.71g(2mmol)化合物IVa和3.3mL(30mmol)冰醋酸投入反應(yīng)瓶中，攪拌溶解，然后加入0.03mL吡啶，室溫反應(yīng)24小時(TLC監(jiān)測)。停止反應(yīng)，用乙酸乙酯和水進行萃取，合并有機層，有機層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓回收溶劑后，得到黃褐色固體殘留物，殘余物以硅膠柱層析純化，以石油醚乙酸乙酯(2:l)為洗脫劑，分別得淡黃色固體Va0.49g，收率62%，熔點129-131°C;淡黃色固體VIa0.23g，收率27%，熔點119-121°C。Va:'HNMR(400MHz,CDC13)52.19(s，3H,OC國CT^),3.64(s，6H,OCH3x2)，3.80(s，3H，OCH3)，3.84(s，3H，OCH3)，6.68(s，2H，Ar鄰，6.92(d,2H，/=8.4Hz,Ar畫H),7.16(d，2H,/=8.4Hz,Ar-H)，7.49(brs，1H,OC-M/);VIa:&NMR(400MHz，CDC13)52.34(s,6H,0=C-CH3x2),3.68(s,6H，OCH3x2)，3.85(s,3H,OCH3),3.88(s,3H,OCH3),6.75(s,2H，Ar畫H)，6.94(d，2H,/=8.8Hz,Ar-H)，7.12(d，2H，/=8.8Hz,Ar畫H)。實施例20、N-(4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vb)N-乙?；?N-(4-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(VIb)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVb替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化分別得白色固體Vb，收率63%，熔點137-139°C;白色固體VIb，收率25%，熔點139-140°C。Vb:!HNMR(400MHz，CDC13)S2.20(s，3H，0=C-0/3),3.66(s，6H,OCH3x2),3.75(s，3H,OCH3),3.84(s,3H,OCH3),3.89(s,3H，OCH3),6.72(s,2H,Ar-H)，6.76(d，1H,/=2.0Hz，Ar-H),6.82(dd，1H，2.0，8.4Hz,Ar-H)，6.89(d,1H,/=8.4Hz,Ar-H),7.69(brs,1H,OC-MZ)。VIb:NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s，6H,OC-CH3x2),3.67(s，6H，OCH3x2)，3.76(s,3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3)，3.90(s，3H,OCH3)，6.74(s，2H，Ar-H),6.78(d，1H，■/=2.0Hz，Ar-H),6.85(dd,1H，2.0，8.4Hz，Ar-H)，6.91(d，1H，/:8.4Hz，Ar-H)。實施例21、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vc)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVe替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率55%;熔點160-162。C。，HNMR(400MHz，CDC13)52.24(s,3H，OC國Ci^),3.67(s，6H，OCH3x2)，3.75(s,6H,OCH3x2)，3.85(s,6H,OCH3x2),6,48(s,2H，Ar-H),6.73(s,2H,Ar-H):7.81(brs,1H，OC-,。實施例22、N-(4-(4-氯苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vd)N-乙酰基-N-(4-(4-氯苯基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(VIC)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVd替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化分別得白色固體Vd，收率57%，熔點162-164°C;白色固體VIc，收率21%，熔點165-166°C。Vd:NMR(400MHz,CDC13)52.18(s,3H,0=C-OT3)，3.66(s,6H,OCH3x2),3.86(s,3H，OCH3)，6.63(s,2H，Ar畫H)，7.20(d,2H，/=8.8Hz，Ar-H)，7.37(d，2H，/=8.8Hz，Ar鄰，7.90(s,1H，0=C-,。VIC:&NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s,6H,OC-C7/3x2),3.67(s,6H,OCH3x2)，3.86(s,3H,OCH3)，6.63(s，2H，Ar-H),7.20(d,2H,J=8.8Hz，Ar-H),7.39(d，2H，《/=8.8Hz，Ar-H)。實施例23、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Ve)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVe替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化得白色固體，收率50%，熔點178-180°C。*HNMR(400顧z，CDC13)S2.21(s，3H，OCH3)，3.72(s,6H,OCH3x2),3.87(s,6H，OCH3x2)，4.96(s，2H，CH2),6.41(s，2H,Ar畫H),6.82(d，1H,/=8.4Hz,Ar-H)，7.04(d，1H,/=8.4Hz,Ar畫H)，7.08(s,1H，Ar隱H),7.26-7.32(m,5H,Ar-H),7.83(s,1H，0=C-M/)。實施例24、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3-羥基-4-甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vf)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IV潛代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化得亮黃色固體，收率46%,熔點238-240°C。NMR(400顧z，CDC13)S2.45(s,3H，OC-C7/3)，3.62(s，6H,OCH3x2)，3.77(s,6H,OCH3x2),6.20(s，2H,Ar-H)，6.51-6.53(m，2H,Ar-H)，6.69(s，1H,Ar-H),7.86(s,1H,OC-夠。實施例25、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vg)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVg替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化得白色固體，收率49%，熔點168-170°C。^NMR(400MHz,CDC13)S2.25(s,3H,0=C-C7/3),3.73(s,9H,OCH3x3),3.86(s,3H，OCH3)，3.87(s,3H,OCH3)，6.44(s,2H,Ar畫H)，6.79(d,1H，《/=8.0Hz，Ar-H),7.01(dd，1H,/=1.6,8.0Hz,Ar-H),7.07(d，1H,/=1.6Hz，Ar-H)，7.45(brs,lH,0=C-M/)。實施例26、N-(4-(3，4，5-三甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vh)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVh替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化得黃色固體，收率65%;熔點175-177°C。&NMR(400MHz,CDC13)S2.21(s，3H，0=C-0/3),3.70(s,6H,OCH3x2)，3.80(s，3H,OCH3),3.86(s,3H,OCH3),6.41(s，2H，Ar-H)，6.85(d,2H，《/=8.4Hz,Ar-H)，7.39(d,2H，《/=8.4Hz，Ar-H)，7.88(brs,1H,OC-MZ)。實施例27、(N-(4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(Vi)N-乙酰基-N-(4-(3-噻吩基)-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)異噁唑-5-基)乙酰胺(VId)操作過程與實施例19相同，只是用化合物IVi替代IVa，殘余物以硅膠柱層析純化分別得黃色固體Vi，收率55%，熔點132-134°C;白色固體VId，收率36%，熔點193-195°C。Vi:NMR(400MHz,CDC13)S2.24(s，3H，0=C-C//3)，3.70(s，6H，OCH3x2)，3.83(s，3H,OCH3)，6.72(s，2H,Ar-H)，6.98(dd，1H，/=1.2,4.8Hz，ThiopheneH),7.29-7.30(m,1H，ThiopheneH)，7.39-7.41(m，1H,ThiopheneH),7.51(s,1H,0=C-M/)。VId:&麗R(400MHz,CDC13)S2.26(s,6H，0=C-C//3x2),3.71(s,6H,OCH3x2)，3.88(s，3H，OCH3)，6.74(s,2H，Ar-H),6.99(dd，1H,/=1.2,4.8Hz,ThiopheneH)，7.30-7.31(m，1H，ThiopheneH),7.42-7.46(m，1H,ThiopheneH)。實施例28、抗腫瘤生物活性測試方法腫瘤細胞離體培養(yǎng)選取腫瘤細胞K562，ECA-109,A549,SMMC-7721,PC-3于37。C、5%C02細胞培養(yǎng)箱中孵育，待細胞密度長到70-90%時傳代(貼壁細胞用Puck'sEDTA消化后傳代)，用于以后實驗所需。MTT法測定3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物對不同瘤株的體外抑制作用將化合物用DMSO溶解，稀釋;將處于對數(shù)生長期的上述腫瘤細胞，以2xl04個/mL接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入化合物2pl，終濃度為12.0pM，6.0pM，3.0jiM，1.5pM，共同于37°(:、5%(:02細胞培養(yǎng)箱中孵育48小時，以DMSO(P/。)為空白對照。每孔加入濃度為2.5mg/mL的MTT溶液20^iL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸去上清液，每孔加入100^iL的DMSO，搖勻，用酶標(biāo)儀于570nM波長下測定各孔的吸光度(OD值)，所得數(shù)據(jù)用于計算IQ。。所得結(jié)果見表l。從表l可以看出，(1)所有的22個二芳基異噁唑類化合物對所測試的腫瘤細胞株均顯示了較強的抑制活性。同樣，該類化合物對白血病細胞株K562具有更強的選擇抑制作用(IC5Q最小值為0.01pg/mL);(2)其中化合物IVa、IVi和VIa的體外抗腫瘤作用尤為突出，IVa對上述細胞的IC5o值在0.02-4.28jig/ml之間，IVi對上述細胞的ICso值在0.14-9.39pg/ml之間，VIa對上述細胞的IC5o值在0.03-0.60嗎/ml之間；(3)流式結(jié)果顯示IVa可使SMMC-7721細胞終止在G2/M期，且阻滯活性較高；VIa可使SMMC-7721細胞終止在G2/M期，且阻滯活性比CA-4更高，并具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用?？傊?，該類化合物有較好的抗腫瘤應(yīng)用前景，因而具進一步的開發(fā)價值。表1合成的22個化合物對不同腫瘤細胞株的IC5Q(ng/ml)值<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>"nd"表示未測定IC5o值。權(quán)利要求1.一種3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物，其特征是具有以下結(jié)構(gòu)通式其中(1)Ar1為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)單取代苯環(huán)上的取代基為氫原子、氟、氯、溴、硝基、含1至3個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基中的一種，二取代苯環(huán)上的取代基為3-羥基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羥基、3，4-二甲氧基、3-芐基-4-甲氧基、3-硝基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一種，三取代苯環(huán)上的取代基為4-羥基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一種，(2)Ar2為無取代、單取代、二取代或三取代的苯環(huán)或芳雜環(huán)單取代苯環(huán)上的取代基為氟、氯、溴、含1至3個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基中的一種，二取代苯環(huán)上的取代基為3-羥基-4-甲氧基、3-甲氧基-4-羥基、3，4-二甲氧基、3-芐基-4-甲氧基或3-氨基-4-甲氧基中的一種，三取代苯環(huán)上的取代基為4-羥基-3，5-二甲氧基或3，4，5-三甲氧基中的一種，芳雜環(huán)為噻吩、吡啶、呋喃或吡咯中的一種；(3)R1和R2相同或不同，選用氫、甲基、乙基或含1-4個碳原子的?；?。全文摘要本發(fā)明提供一種3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物，是以天然產(chǎn)物CA-4為先導(dǎo)化合物，將5-胺基異噁唑環(huán)替代CA-4結(jié)構(gòu)中乙烯連接鏈，作為構(gòu)像限制性基團，合成了一系列的3，4-二芳基異噁唑-5-胺基衍生物。藥理實驗證實對多種腫瘤細胞株均有較好的體外抑制增殖作用，有些化合物具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用，可在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計合理，制備簡單，適于實用。本發(fā)明的結(jié)構(gòu)通式為右式。文檔編號A61P35/00GK101407500SQ20081016206公開日2009年4月15日申請日期2008年11月7日優(yōu)先權(quán)日2008年11月7日發(fā)明者何俏軍,滔劉,虹朱,波楊,胡永洲,娜薛申請人:浙江大學(xué)