專利名稱：一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)是涉及一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法。
背景技術(shù)：
分清五淋丸是木通、車(chē)前子、黃芩、茯苓、豬苓、黃柏、大黃、篇蓄、瞿麥、知母、澤
瀉、梔子、甘草、滑石14味藥組成的復(fù)方，收載于中國(guó)藥典2005年版一部。原標(biāo)準(zhǔn)只收載 有顯微鑒別和檢査項(xiàng)，按照藥品注冊(cè)管理辦法中有關(guān)仿制產(chǎn)品提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，參照中 國(guó)藥典2005年版一部相關(guān)品種項(xiàng)下和有關(guān)文獻(xiàn)資料，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)摸索后，增加了大黃、 梔子、黃柏、黃芩的薄層鑒別；并對(duì)該制劑進(jìn)行了重金屬及砷鹽的考察，其測(cè)定結(jié)果低于常 規(guī)限度，同時(shí)對(duì)處方中木通所含齊墩果酸和常春藤皂苷元進(jìn)行了含量測(cè)定的試驗(yàn)摸索，結(jié)果 滿意，大大的提高了原標(biāo)準(zhǔn)，使得產(chǎn)品質(zhì)量更加可控，同時(shí)更利于產(chǎn)品工業(yè)化生產(chǎn)要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開(kāi)一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法，對(duì)處方中木通所含齊墩 果酸和常春藤皂苷元建立了高效液相含量測(cè)定方法，同時(shí)增加了處方中大黃、梔子、黃柏、 黃芩的薄層鑒別，提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)了該藥的質(zhì)量可控性，保證了患者服用的有效性， 通過(guò)本發(fā)明增加的質(zhì)量控制，有利于本產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)的監(jiān)控。
本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的-
一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法，其特點(diǎn)在于該方法中的鑒別方法是以下的 一種或幾種
a、鑒別
顯微鑒別包括下列步驟取分清五淋丸，置顯微鏡下觀察可見(jiàn)車(chē)前子、黃芩、茯苓、 豬苓、黃柏、大黃、萵蓄、瞿麥、知母、澤瀉、梔子、甘草的顯微特征，
大黃的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸O. 5 lg，研細(xì)，加甲醇20 40ml，浸泡1 2 小吋，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 20ml使溶解，再加鹽酸l 2ml，加熱回流30 40分 鐘，立即冷卻，用乙醚分2 4次振搖提取，每次20 30ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤?氯甲烷1 2ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0. 1 0.2g，同法制成對(duì)照藥 材溶液。再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含1 1.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照 薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 10y 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑 的硅膠H薄層板上，以石油醚30 6(TC-甲酸乙酉旨-甲酸(15 20 : 5 7 : 1 1.4)的上層溶液 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，陰件對(duì)照無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，
梔子的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸5 10g，研細(xì)，加40 70%甲醇50 100ml， 超聲處理40 60分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取梔子對(duì)照藥材l 1.5g,同法制成 對(duì)照藥材溶液。再取梔子苷對(duì)照品，加乙醇制成每lml含4 6mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2 5til，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合
劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5 io : 5 io : 1 2 : 1 2)為展開(kāi)劑，
展開(kāi)，取出，晾干，噴以5 10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色 譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，
黃柏的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸2 5g，研細(xì)，加甲醇25 50ml，加熱回流30 40分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材10 20rag，加甲醇l 2ml，制成 對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每lral含0.5 lmg的溶液，作為對(duì)照 品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1 2y 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素
鈉為黏合劑的硅膠r'薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 15 : 6 15 : 1 2 : 1 2)
為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供 試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，
黃芩的鑒別包括下列歩驟取分清五淋丸5 10g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇(3 6: l 2)的混合溶液50 100ml，加熱回流30 40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? 10ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材1 1.5g，同法制成對(duì)照藥材溶 液。再取黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品，加甲醇制成每lml各含0.5 lmg的對(duì)照品溶液。照薄 層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各2 4ul及上述兩種對(duì)照品溶液各1 2
p i，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸ao 15 : 3 4.5: i i. 5:
2 7.5)為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30 40分鐘，展丌，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視， 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的暗色斑點(diǎn)， b含量測(cè)定
齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定方法包括下列步驟
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三 乙胺80 95 : 20 5 : 0. 02 0. 5 : 0. 01 0. 05為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，理論板數(shù)按齊 墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;
對(duì)照品溶液的制備；精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每 lml各含0. 4 0. 7mg的混合溶液，即得；
供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10 15g，精密稱定，加甲醇50 80ml， 超聲處理功率250W，頻率50kHz30 40分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈欤喜V液與洗液，回 收溶劑至干，殘?jiān)铀?0 15 ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3 5次，每次20 30ml，合 并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0 30 ml、鹽酸2 4ml，加熱水解4 6小時(shí)，水解物加水 10 15ml，用三氯甲烷振搖提取2 4次，每次20 30ml，合并提取液，冋收溶劑至干，殘 渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 20^1 ，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；
分清五淋丸每lg含木通以齊墩果酸(C3。H4803)和常春藤皂苷元(C3。H4804)的總量計(jì)，不 得少于0. 20mg;
該方法中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別a及含量測(cè)定b方法是以下方法的一種或幾種 a鑒別
顯微鑒別取分清五淋丸，置顯微鏡下觀察不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無(wú)色，遇水合氯醛試液
溶化；菌絲無(wú)色或淡棕色，直徑4 6um;菌絲黏結(jié)成團(tuán)，大多無(wú)色；草酸鈣方晶正八面體 形，直徑32 60um;種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類(lèi)長(zhǎng)方形，壁微波狀，以數(shù)個(gè)細(xì)胞為一組，略 作鑲嵌狀排列；韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)；纖維束鮮黃色，周?chē)?xì)胞含草酸鈣 方品，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚；纖維束周?chē)”诩?xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖 維；草酸鈣簇晶大，直徑60 140wm;草酸鈣針晶成束或散在，長(zhǎng)26 110ym;纖維束周 圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣簇晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞縱向成行；葉表皮細(xì)胞平周壁有角質(zhì)線紋， 氣孔不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3個(gè)；上下表皮均可見(jiàn)柵欄組織；薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形，有橢園形紋孔， 集成紋孔群；內(nèi)皮層細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，較厚，木化，有稀疏細(xì)孔溝；種皮石細(xì)胞黃色或 淡棕色，多破碎，完整著長(zhǎng)多角形、長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，壁厚，有大的圓形紋孔，胞腔棕紅色；
大黃的鑒別取分清五淋丸0.5g，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提 取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃综鵯ml使溶解，作為供試品溶液；另取 大黃對(duì)照藥材O. lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg 的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5iU,分別點(diǎn)于同一以 羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚30 60°C-甲酸乙酉g-甲酸15 : 5 : 1 的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365rm下檢視；供試品色譜中，在與 對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；
梔子的鑒別取分清五淋丸5g，研細(xì)，加5(m甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾 液作為供試品溶液；另取梔子對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取梔子苷對(duì)照品，加 乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各 2Pl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸
-水5 : 5 : l : i為展丌劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在iio"c加熱至斑
點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點(diǎn)；
黃柏的鑒別取分清五淋丸2g，研細(xì)，加甲醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，濾液作 為供試品溶液；另取黃柏對(duì)照藥材50mg，加甲醇5ral，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取鹽酸小 檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸 取h述三種溶液各1 u 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙
酸乙酯-丁酮-甲酸-水io : 6 : i : i為展升劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，
晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
黃芩的鑒別取分清五淋丸5g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇3 : 1的混合溶液50ml，加熱 回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，取上清液作為供試品溶液； 另取黃芩對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品，加甲醇制成 每lml各含0. 5mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各2 yl及上述兩種對(duì)照品溶液各分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-
甲酸io : 3 : i : 2為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365腦下檢
視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的暗色斑點(diǎn)； b含量測(cè)定齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定
照高效液相色譜法中國(guó)藥典2005年版一部附錄Vi D測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
以卜八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺87 : 13 : o. 04 : o. 02為流動(dòng)
相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每lml 各含0. 5mg的混合溶液，即得；
供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10g，精密稱定，加甲醇50ml，超盧處 理功率250W，頻率50kHz30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收溶劑至干， 殘?jiān)铀甀O ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?甲醇20 ml、鹽酸2 ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振搖提取2次， 每次20ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至 刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 pl ，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
分清五淋丸每lg含木通以齊墩果酸(C3。H4803)和常春藤皂苷元(C:,。H4804)的總量計(jì)，不 得少于0. 20mg。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過(guò)顯微鑒別車(chē)前子、黃芩、茯苳、豬苓、黃柏、大黃、萵 蓄、瞿麥、知母、澤瀉、梔子、甘草，采用薄層色譜法鑒別大黃、梔子、黃柏、黃芩，含量 測(cè)定采用高效液相色譜法測(cè)定木通中齊墩果酸對(duì)照品和常春藤皂苷元，是提供分清五淋丸質(zhì) 量檢驗(yàn)方法及標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)建立明確專屬性強(qiáng)的鑒別及重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及精密度良好的含量測(cè) 定方法，能夠有效控制分清五淋丸的質(zhì)量，使分清五淋丸質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、可控、高效及安全， 是對(duì)產(chǎn)品的投料要求及質(zhì)量控制嚴(yán)格，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高產(chǎn)品的質(zhì)量、療效、生物 利用度，產(chǎn)品質(zhì)量高，能保證產(chǎn)品療效，更好地滿足醫(yī)療的需要。


圖1是本發(fā)明的分清五淋丸中大黃紫外燈下鑒別圖； 圖2是本發(fā)明的分清五淋丸中大黃氨蒸氣熏后鑒別圖； 圖3是本發(fā)明的分清五淋丸中梔子鑒別圖； 圖4是本發(fā)明的分清五淋丸中黃柏鑒別圖； 圖5是本發(fā)明的分清五淋丸中黃吝鑒別圖6是本發(fā)明的齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品的高效液相色譜圖7是本發(fā)明的分清五淋丸中樣品的高效液相色譜圖8是本發(fā)明的分清五淋丸陰性對(duì)照溶液高效液相色譜具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
1、 在分清五淋丸的定性鑒別的研究中，首先按中國(guó)藥典2005版一部分清五淋丸標(biāo)準(zhǔn)， 保留了顯微鑒別項(xiàng)，同時(shí)設(shè)計(jì)對(duì)處方中木通、黃苓、茯苓、黃柏、大黃、知母、梔子、甘草 進(jìn)行定性鑒別，參考藥典方法及文獻(xiàn)報(bào)道方法，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)摸索，結(jié)果木通、茯苳、知母、 甘草分離效果依舊很差，有的甚至無(wú)法分離，陰性樣品有干擾，大黃、梔子、黃柏、黃芩分 離效果很好，陰性樣品無(wú)干擾。
2、 分清五淋丸在定量分析的設(shè)計(jì)中，因原標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有含量測(cè)定項(xiàng)，對(duì)木通進(jìn)行了成分
分析的實(shí)驗(yàn)。采用的高效液相色譜法對(duì)其中所含齊墩果酸對(duì)照品和常春藤皂苷元進(jìn)行含量測(cè) 定，經(jīng)過(guò)對(duì)系統(tǒng)適用性、線性回歸、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、回收率等試驗(yàn)考察，證明本 檢驗(yàn)方法，重現(xiàn)性好，能快速準(zhǔn)確的檢驗(yàn)藥品質(zhì)量。鑒別
1、分清五淋丸的顯微鑒別
取分清五淋丸研細(xì)，置顯微鏡下觀察不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無(wú)色，遇水合氯醛試液溶化； 菌絲無(wú)色或淡棕色，直徑4 6ixm。菌絲黏結(jié)成團(tuán)，大多無(wú)色；草酸鈣方晶正八面體形，直
徑32 60nm。種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類(lèi)長(zhǎng)方形，壁微波狀，以數(shù)個(gè)細(xì)胞為一組，略作鑲嵌 狀排列。韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)。纖維束鮮黃色，周?chē)?xì)胞含草酸鈣方晶， 形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚。纖維束周?chē)”诩?xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。草 酸鈣簇晶大，直徑60 140ym。草酸鈣針晶成束或散在，長(zhǎng)26 110nrn。纖維束周?chē)”?細(xì)胞含草酸鈣簇晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞縱向成行。葉表皮細(xì)胞平周壁有角質(zhì)線紋，氣孔 不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3個(gè)；上下表皮均可見(jiàn)柵欄組織。薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形，有橢園形紋孔，集成 紋孔群；內(nèi)皮層細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，較厚，木化，有稀疏細(xì)孔溝。種皮石細(xì)胞黃色或淡棕色，多破碎，完整著長(zhǎng)多角形、長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，壁厚，有大的圓形紋孔，胞腔棕紅色。 2、大黃的薄層鑒別
供試品溶液的制備取分清五淋丸0.5g，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2 次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄閘ml使溶解，即得。
陰性對(duì)照溶液制備取缺大黃的陰性樣品0.5g，加甲醇20ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2 次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃综鵯ml使溶解，即得。
對(duì)照藥材溶液的制備取大黃對(duì)照藥材O. lg，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)， 濾液蒸干，殘?jiān)铀甶Oml使溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分 2次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄閘ml使溶解，即得。
對(duì)照品溶液的制備取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，即得。
試驗(yàn)方法照薄層色譜法試驗(yàn)(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)，吸取上述四種溶 液各5nl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚(30 6(TC)-甲酸乙酉旨-甲酸(15 : 5 : 1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色 熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后， 斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；而陰性對(duì)照溶液無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，結(jié)果不干擾黃芪的鑒別，見(jiàn)圖l。
3、 梔子的鑒別
供試品溶液的制備取分清五淋丸5g，研細(xì)，加5Cm甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾 過(guò)，即得。
陰性對(duì)照溶液制備取缺梔子的陰性樣品5g，研細(xì)，加50y。甲醇50ml，超聲處理40分 鐘，濾過(guò)，即得。
對(duì)照藥材溶液的制備取梔子對(duì)照藥材lg，加5(F。甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)， 即得。
對(duì)照品溶液的制備取梔子苷對(duì)照品，加乙醇制成每lml含4mg的溶液，即得。 試驗(yàn)方法照薄層色譜法試驗(yàn)(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)，吸取上述四種溶 液各2ii1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-
甲酸-水(5:5:i:i)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在iio°c
加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，結(jié)果不T擾梔了的鑒別，見(jiàn)圖2。
4、 黃柏的鑒別
供試品溶液的制備取分清五淋丸2g，研細(xì)，加甲醇25ml，加熱冋流30分鐘，濾過(guò)， 即得。
陰性對(duì)照溶液的制備取缺黃柏的陰性樣品2g，研細(xì)，加甲醇25ml，加熱回流30分鐘， 濾過(guò)，即得。
對(duì)照藥材溶液的制備取黃柏對(duì)照藥材50mg，加甲醇5ml，加熱回流30分鐘，濾過(guò)， 即得。
對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。 試驗(yàn)方法照薄層色譜法試驗(yàn)(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)，吸取上述四種溶 液各1 u 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io : 6 : i : i)為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展丌缸內(nèi)，展丌，取出，晾干，置紫
外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜屮，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，結(jié)果不干擾黃柏的鑒別，見(jiàn)圖3。 5、黃芩的鑒別-
供試品溶液的制備取分清五淋丸5g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇3 : 1的混合溶液50ml， 加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
陰性對(duì)照溶液的制備取缺黃芩的陰性樣品5g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇3 : 1的混合溶 液50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
對(duì)照藥材溶液的制備取黃芩對(duì)照藥材lg，加乙酸乙酯-甲醇3 : 1的混合溶液50ml， 加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。
對(duì)照品溶液的制備取黃芩素、漢黃苳素對(duì)照品，加甲醇制成每lml各含0. 5mg的對(duì)照 品溶液，即得。
試驗(yàn)方法照薄層色譜法試驗(yàn)(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)，吸取供試品溶液、 對(duì)照藥材溶液各1及上述四種對(duì)照品溶液各1 y 1，分別點(diǎn)于問(wèn)一聚酰胺薄膜上，以甲苯-
乙酸乙酯-甲醇-甲酸io : 3 : l : 2為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外
光燈365皿下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相同的位置卜.，顯相 同顏色的暗色斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，結(jié)果不干擾黃芩的鑒別，見(jiàn)圖4。含量測(cè)定齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定
照高效液相色譜法中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺87 : 13 : 0. 04 : 0. 02為流動(dòng) 相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每lml 各含0. 5mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10g，精密稱定，加甲醇50ml，超聲處 理功率250W，頻率50kHz30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收溶劑至干， 殘?jiān)铀甀O ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?甲醇20 ml、鹽酸2ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10 ml，用三氯甲垸振搖提取2次， 每次20ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至 刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 |_J ，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
分清五淋丸每lg含木通以齊墩果酸(C3 Hw03)和常春藤皂苷元(C3。H4S04)的總量計(jì)，不 得少于0. 20mg。 含量測(cè)定
木通收載于《中國(guó)藥典》2005年版一部，為木通科植物木通^ire&'a (Thunb.)
Decne.、三口十木通」Vire/^'a tr_i/bJists (Thunb.) Koidz.或白木通/4AeZ^'s tn'/bJists (Thunb.) Koidz.var. aystrah's(Diels.) Rehd.的干燥藤莖。具有清心火，利小便，通經(jīng)下乳之功效。 用于治療胸中煩熱，喉痹咽痛，尿赤，五淋，水腫，周身攣痛，經(jīng)閉乳少等癥，為方中主藥。 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，木通主要含有三萜皂苷類(lèi)化學(xué)成分[4]。，其皂苷元齊墩果酸、常春藤皂苷元是 中.要活性成分，閑此，我們參照《中國(guó)藥典》2005年版一部等文獻(xiàn)資料，對(duì)處方中木通所含 齊墩果酸和常春藤皂苷元進(jìn)行了高效液相色譜法含量測(cè)定的試驗(yàn)摸索，結(jié)果滿意，可作為該 藥內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)。
1. 樣品來(lái)源由內(nèi)蒙古包頭中藥有限責(zé)任公司提供(批號(hào)20050408、 20050410、 20050412、 20050503、 20050510、 20050516、 20050528、 20050601、 20050602、 20050603)。
2. 儀器與試藥美國(guó)Alltech高效液相色譜儀，M626輸液泵，UVIS-201型檢測(cè)器；齊墩果酸和常春藤皂苷元對(duì)照品由中國(guó)藥品牛物制品檢定所提供；甲醇為色譜純?cè)噭?；冰醋酸?三乙胺均為分析純?cè)噭?；水為超純水?br> 3. 色譜條件Alltech RP-C,8色譜柱(5 ,， 4. 6 mmX250 mm);流動(dòng)相甲醇_水-冰醋 酸-三乙胺(87 : 13 : 0. 04 : 0.02);檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm ;流速l.Oml/min;柱溫室溫。 4.試驗(yàn)條件的選擇
丄1高效液相色譜條件的選擇
4. 1. 1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取對(duì)照品溶液，在400^190nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果 齊墩果酸、常春藤皂苷元在205nm波長(zhǎng)處都有最大吸收，但由于205 nm處溶劑峰十?dāng)_較大， 經(jīng)試驗(yàn)選用210 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，以減少溶劑對(duì)皂苷元測(cè)定的干擾。
4.1.2流動(dòng)相的選擇參考《中國(guó)藥典》2005年版一部木通項(xiàng)下以甲醇-水-冰醋酸-
三乙胺(87 : 13 : 0.04 : 0.02)為流動(dòng)相，其中冰醋酸可產(chǎn)生弱酸性環(huán)境，有利于樣品中酸
性物質(zhì)的分離，既可使齊墩果酸與常春藤皂苷元得到良好的分離，又能與其他成分達(dá)到基線 分離；三乙胺可良好地改善峰形，故選擇該流動(dòng)相。 4. 2樣品提取條件的選擇
分別考察了索氏提取、加熱回流提取、超聲提取等三種方法對(duì)含量的影響，結(jié)果見(jiàn)表l。
表l不同提取條件的測(cè)定結(jié)果
提取條件取樣量(g)含量(mg/g)
超聲提取30分鐘10. 00350. 432
加熱回流1小時(shí)10. 27630. 418
索氏提取4小時(shí)10.25680. 419
索氏提取4小時(shí)，超聲提取0. 5小時(shí)，回流提取1小時(shí)的結(jié)果基本一致，而超聲提取方法 簡(jiǎn)單易行，且提取副產(chǎn)物少，所以選用超聲提取法。
5. 陰性對(duì)照試驗(yàn)
取按處方量比例以相同工藝制備的陰性對(duì)照溶液(缺木通)，同法測(cè)定。測(cè)得結(jié)果為陰
性對(duì)照溶液的HPLC色譜中在與齊墩果酸和常春藤皂苷元對(duì)照品色譜中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú) 色譜峰出現(xiàn)。表明處方中其他組分對(duì)齊墩果酸和常春藤皂苷元的測(cè)定無(wú)T擾。對(duì)照品溶液、樣
品溶液、陰性對(duì)照溶液HPLC圖譜見(jiàn)圖5-圖7。
6. 含量測(cè)定
6. l對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每 lml各含0. 5mg的混合溶液，即得。
6.2供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10g，精密稱定，加甲醇50ml，超聲 處理(功率250W，頻率50kHz) 30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收溶 劑至干，殘?jiān)铀甀O ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并提取液，蒸干， 殘?jiān)蛹状?0 ml，鹽酸2ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振搖提取2 次，每次20 ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍哭D(zhuǎn)移至5 ml量瓶中， 加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
6.3測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 pi ，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
7. 方法學(xué)考察
7. l線性關(guān)系考察分別精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶液。精密吸取該溶液0. 5、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 ml，置5ml量瓶 中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10yl分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積值。結(jié)果對(duì) 照品峰面積Y與其進(jìn)樣量X (iig)之間早.良好的線性關(guān)系，線性范圍及回歸方稃見(jiàn)表2，回歸 曲線見(jiàn)圖8。
表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果
成分 線性方程 線性范圍(ug)相關(guān)系數(shù)(r)
齊墩果酸 Y=06X + 3E-92304 1. 02廣10. 21 常春藤皂苷元 Y二06X+3E-90987 0.996 9.960.9992 0.9992
7.2精密度試驗(yàn)精密吸取供試品(批號(hào)20050601)溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄齊墩果 酸、常春藤皂苷元峰面積積分值。結(jié)果見(jiàn)表3。 表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)12 3 45 RSD
齊墩果酸 899247894498 899302 890900897679 0.40%
常春藤皂苷元 1314273 1311855 1325533 13262471315477 0.51%
結(jié)果表明本法精密度良好。
7.3穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品(批號(hào)20050601)溶液，分別于0、 4、 8、 12小時(shí)進(jìn) 樣，記錄齊墩果酸、常春藤皂苷元峰面積積分值。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
時(shí)間(小時(shí))04812RSD
齊墩果酸9196689274529299849255860. 47%
常春藤皂苷元i3205381339618134278213385050. 75%
結(jié)果表明，本法在12小時(shí)內(nèi)測(cè)定方法穩(wěn)定。
7. 4重復(fù)性試驗(yàn):取供試品(批號(hào):20050601) 5份，分別按[含jl測(cè)定]項(xiàng)下方法操作并測(cè)定含量，齊墩果酸和常春藤皂苷元總含量的平均值為0. 432mg/g， RSD為1. 20%。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=5)
編號(hào)雙《 (g)齊墩果酸(mg/g)常春藤皂苷元 (mg/g)總含量 (mg/g)平均植 (mg/g)RSD (%)
1 10.00350. 1800. 2530. 433
2 10.00020. 1780. 2470. 425
3 10.00580. 1780.2530.4310. 4321.20
4 10.36000. 1850. 2530. 438
5 10.45320. 1850. 2520. 437
結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
7.5回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知齊墩果酸和常春藤皂苷?？偤康墓┰?br> 品(批號(hào)20050601) 5份，分別精密加入齊墩果酸和常春藤皂苷元對(duì)照品，按[含量測(cè)定]方 法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)
取樣量 (g)
成分
供試品含j (mg)
加入 (mg)
(mg)
回收率
平均 回收率(％)
RSD(%)
5.2583 齊墩果酸
0. 961
1. 811
97. 92
98. 17
0. 515. 2035 5. 2203 5. 2197 5.2884 5.2583 5,2035 5.2203 5.2197 5. 2884
常春藤皂 苷元0.9511.80197. 920.9540. 8681.80497. 920.9541.80598. 040.9661.82699. 071.3292.46698. 691.3152.742100. 431.3191. 1522.45898.871.3192.43096. 441.3362.47498. 78
98.64
1. 44
結(jié)果表明回收率均在95%~105%以內(nèi)，符合方法學(xué)考察要求
7. 6樣品含量測(cè)定按上述[含量測(cè)定]項(xiàng)下方法操作，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品 溶液各IO pi ，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)表7。
表7 含量測(cè)定結(jié)果(n=2)
批號(hào)
取樣量(g)
含量(mg/g)
平均含量(mg/g)
10.25690.447
200506010.436
10.00280.426
2005060210.00120.425
0.436
10.30160.4472005060310.33180.446
0.437
10.00560.4282005040810.00230.436
0.434
10.11360.4332005041010.05690.454
0.441
10.13880.4292005041210.45880.464
0.445
10.00230.4272005050310.38980.414
0.413
9.92350.4122005051010.42330.453
0.453
10.35680.4542005051610.48330.447
0.438
10.00210.430
10.00050.420
200505280.421
10.00560.422
8.木通藥材中齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定取藥材粉末(過(guò)四號(hào)篩)2g，精密 稱定，加甲醇50 ml，超聲處理(功率250W，頻率50kHz) 30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈欤?合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)铀?0 ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20 ml， 合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml、鹽酸2ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10 ml，用 三氯甲烷振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍哭D(zhuǎn) 移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果見(jiàn)表8。
表8 木通藥材含量測(cè)定結(jié)果取樣量 (g)齊墩果酸(％)常春藤皂苷元(％)水份 (%)總含量(％)
0.32650. 240. 167.80. 40
藥材木通中齊墩果酸和常春藤皂苷元總含量為0.40%，十批樣品中齊墩果酸和常春藤皂苷元總 含量均高于0. 2mg/g ，轉(zhuǎn)移率約為98.77%。參照《中國(guó)藥典》2005年版一部"木通"項(xiàng)下 齊墩果酸和常春藤皂苷元的總含量限度及市售木通藥材所含齊墩果酸和常春藤皂苷元的總含 量的不同，分清五淋丸含木通以齊墩果酸(C3 H18Q,)和常春藤皂苷元(C3晶A)的總量計(jì)，暫 定為每lg不得少于O. 2mg。
權(quán)利要求
1、一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法，其特征在于該方法中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)a鑒別及b含量測(cè)定方法是以下方法的一種或幾種a鑒別顯微鑒別取分清五淋丸，置顯微鏡下觀察可見(jiàn)車(chē)前子、黃芩、茯苓、豬苓、黃柏、大黃、萹蓄、瞿麥、知母、澤瀉、梔子、甘草的顯微特征；大黃的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸0.5～1g，研細(xì)，加甲醇20～40ml，浸泡1～2小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0～20ml使溶解，再加鹽酸1～2ml，加熱回流30～40分鐘，立即冷卻，用乙醚分2～4次振搖提取，每次20～30ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?～2ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材0.1～0.2g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1～1.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于硅膠薄層板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸15～20∶5～7∶1～1.4的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，陰性對(duì)照無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)；梔子的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸5～10g，研細(xì)，加40～70％甲醇50～100ml，超聲處理40～60分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取梔子對(duì)照藥材1～1.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取梔子苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含4～6mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5～10∶5～10∶1～2∶1～2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5～10％硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；黃柏的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸2～5g，研細(xì)，加甲醇25～50ml，加熱回流30～40分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取黃柏對(duì)照藥材10～20mg，加甲醇1～2ml，制成對(duì)照藥材溶液；再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5～1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水10～15∶6～15∶1～2∶1～2為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；黃芩的鑒別包括下列步驟取分清五淋丸5～10g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇3～6∶1～2的混合溶液50～100ml，加熱回流30～40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?～10ml使溶解，取上清液作為供試品溶液；另取黃芩對(duì)照藥材1～1.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.5～1mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各2～4μl及上述兩種對(duì)照品溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸10～15∶3～4.51～1.5∶2～7.5為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30～40分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的暗色斑點(diǎn)；b含量測(cè)定齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定方法包括下列步驟色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺80～95∶20～5∶0.02～0.5∶0.01～0.05為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.4～0.7mg的混合溶液，即得；供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10～15g，精密稱定，加甲醇50～80ml，超聲處理功率250W，頻率50kHz30～40分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈欤喜V液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)铀?0～15ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3～5次，每次20～30ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0～30ml、鹽酸2～4ml，加熱水解4～6小時(shí)，水解物加水10～15ml，用三氯甲烷振搖提取2～4次，每次20～30ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5～10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10～20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；分清五淋丸每1g含木通以齊墩果酸(C30H48O3)和常春藤皂苷元(C30H48O4)的總量計(jì)，不得少于0.20mg。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述一種分清五淋丸的質(zhì)量檢驗(yàn)方法，其特征在于該方法中的 a鑒別方法和b含量測(cè)定是以下方法的一種或幾種a鑒別顯微鑒別取分清五淋丸，置顯微鏡下觀察不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無(wú)色，遇水合氯醛試液溶化；菌絲無(wú)色或淡棕色，直徑4 6ym;菌絲黏結(jié)成團(tuán)，大多無(wú)色；草酸鈣方晶正八 面體形，直徑32 60ym;種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類(lèi)長(zhǎng)方形，壁微波狀，以數(shù)個(gè)細(xì)胞為一組，略作鑲嵌狀排列；韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)；纖維束鮮黃色，周?chē)?xì)胞 含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚；纖維束周?chē)”诩?xì)胞含草酸鈣方晶， 形成晶纖維；草酸鈣簇晶大，直徑60 140um;草酸鈣針晶成束或散在，長(zhǎng)26 110ym; 纖維束周?chē)”诩?xì)胞含草酸鈣簇晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞縱向成行；葉表皮細(xì)胞平周壁 有角質(zhì)線紋，氣孔不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3個(gè)；上下表皮均可見(jiàn)柵欄組織；薄壁細(xì)胞類(lèi)圓形， 有橢園形紋孔，集成紋孔群；內(nèi)皮層細(xì)胞垂周壁波狀彎曲，較厚，木化，有稀疏細(xì)孔溝； 種皮石細(xì)胞黃色或淡棕色，多破碎，完整著長(zhǎng)多角形、長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，壁厚，有大的 圓形紋孔，胞腔棕紅色；大黃的鑒別取分清五淋丸O. 5g，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸 干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸lml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次 振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃综鵯ml使溶解，作為供試品溶 液；另取大黃對(duì)照藥材0. lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成 每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5ul， 分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚30 6(TC-甲酸乙 酯-甲酸15 : 5 : 1的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視； 供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與 對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；梔子的鑒別取分清五淋丸5g，研細(xì)，加5(m甲醇50ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)， 濾液作為供試品溶液；另取梔子對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取梔子苷對(duì)照 品，加乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三 種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5:5:i:i為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在11(TC加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；黃柏的鑒別取分清五淋丸2g，研細(xì)，加甲醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，濾液 作為供試品溶液；另取黃柏對(duì)照藥材50mg，加甲醇5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取鹽 酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試 驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1 U 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水io : 6 : l : l為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì) 照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；黃芩的鑒別取分清五淋丸5g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲醇3 : 1的混合溶液50ml，加 熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，取上清液作為供試品 溶液；另取黃芩對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品， 加甲醇制成每lml各含0.5mg的對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照 藥材溶液各2nl及上述兩種對(duì)照品溶液各lul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸io : 3 : i : 2為展開(kāi)劑，預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相同的位置上，顯 相同顏色的暗色斑點(diǎn)；b含量測(cè)定齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量測(cè)定照高效液相色譜法中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺87 : 13 : 0. 04 : 0. 02為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;理論板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成 每lml各含0.5mg的混合溶液，即得；供試品溶液的制備取分清五淋丸，研細(xì)，取約10g，精密稱定，加甲醇50ml，超 聲處理功率250W，頻率50kHz30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收 溶劑至干，殘?jiān)铀甀O ml溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20 ml，合并提取液， 蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml、鹽酸2ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10 ml，用三氯甲烷 振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10pl ，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；分清五淋丸每lg含木通以齊墩果酸(C3。H4803)和常春藤皂苷元(C3。H4804)的總量計(jì)， 不得少于0. 20mg。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法，原分清五淋丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有顯微鑒別和檢查項(xiàng)，本發(fā)明進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)摸索后，增加了大黃、梔子、黃柏、黃芩的薄層鑒別，并對(duì)該制劑進(jìn)行了重金屬及砷鹽的考察，其測(cè)定結(jié)果低于常規(guī)限度，同時(shí)對(duì)處方中木通所含齊墩果酸和常春藤皂苷元進(jìn)行了含量測(cè)定的試驗(yàn)摸索，對(duì)處方中木通所含齊墩果酸和常春藤皂苷元建立了高效液相含量測(cè)定方法，提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)了該藥的質(zhì)量可控性，保證了患者服用的有效性，通過(guò)本發(fā)明增加的質(zhì)量控制，結(jié)果滿意，提高了原標(biāo)準(zhǔn)，使得產(chǎn)品質(zhì)量更加可控，同時(shí)更利于產(chǎn)品工業(yè)化生產(chǎn)要求，有利于本產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)的監(jiān)控。
文檔編號(hào)A61K36/8964GK101444589SQ20081013772
公開(kāi)日2009年6月3日 申請(qǐng)日期2008年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月11日
發(fā)明者于得才, 朱賀年, 麗 楊, 賈金良 申請(qǐng)人:包頭中藥有限責(zé)任公司