專利名稱：：一種小檗堿加成物、含有該加成物的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種極大地提高了小檗堿的口服生物利用度的前體藥物，具體涉及一種小檗堿的加成物及含有該化合物的藥物，及其制備方法。技術(shù)背景小檗堿(Berberine),又稱黃連素，是從黃連等植物中提取的一種傳統(tǒng)的天然抗菌活性物質(zhì)，臨床上主要用于腸道細(xì)菌性感染的治療用藥。近年來的藥理研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿鹽酸鹽除用于抗菌和消炎外，還具有改善心血管疾病和降血糖、降血脂等多種藥理活性。但由于小檗堿結(jié)構(gòu)上為強(qiáng)極性季銨堿，難以穿透腸道的親酯脂性的屏障，加上其鹽酸鹽的水溶性很小，導(dǎo)致口服后在人體內(nèi)吸收很差[余琛、張慧、潘俊芳等，健康志愿者口服鹽酸小檗堿后尿液中代謝產(chǎn)物的檢測和初步研究，中國臨床藥理學(xué)雜志，2000:(16)36-39。]，生物利用度不高，通常只用來作腸道抗菌治療。有試驗顯示需要口服高達(dá)每人每天lg(—天2次，每次0.5g)的劑量才能獲得降低血脂的作用[WeijiaKong，JingWei，Parve.enAbidi.Berberineisanovelcholesterol-loweringdrugworkingthroughauniquemechanismdistinctfromstatins.Publishedonline7November2004;doi:lO.1038/nmll35]。高劑量的小檗堿對腸道的正常菌群的殺菌作3用必將嚴(yán)重影響腸道菌群的平衡，也就極大限制了小檗堿用于治療全身性疾病治療的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能大大提高小檗堿血藥濃度，從而提高小檗堿生物利用度的小檗堿的加成物，作為前體藥物發(fā)揮出小檗堿治療全身性疾病的作用。還包括這種小檗堿的加成物的制備方法，為達(dá)到上述目的，采用的技術(shù)方案是小檗堿的加成物具有通式(I)結(jié)構(gòu)H3CO,H3CO-(I)通式(I)中，R是含P-羰基的C3-Cs的烷基，是由具有a-活潑氫原子的羰基化合物與小檗堿進(jìn)行加成反應(yīng)，羰基a位的碳原子與小檗堿8位碳原子共價連接形成。本發(fā)明的制備方法是將小檗堿鹽酸鹽制成水溶液，在強(qiáng)堿性條件下與具有a位活潑氫原子的羰基化合物反應(yīng)，過濾，洗滌，干燥即得。所述具有a-活潑氫原子的羰基化合物是丙酮、甲乙酮、或甲丙酮。所述強(qiáng)堿性條件是指pH為1112。所述化合物可以用丙酮重結(jié)晶，化合物純度達(dá)98%以上。含有所述小檗堿的加成物，或該加成物與藥學(xué)上可用的輔料用于制備口服生物利用度較小檗堿原形藥物高的藥物，尤其是用于制備抗心律失常、抗心力衰竭、降血脂或治療糖尿病等發(fā)揮小檗堿治療動物和人的全身性疾病的治療藥物。本發(fā)明的積極效果是合成方法簡單，小檗堿的加成物作為前體藥物提高了小檗堿藥物在體內(nèi)的血藥濃度，從而提高小檗堿生物利用度，使該活性成分能用于制備具有降低病理性高血糖、抗心律失常、抗心力衰竭、降血脂等作用的藥物。圖l、圖2為液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜圖；圖3為丙酮小檗堿的液相色譜圖；，圖4是丙酮小檗堿加入鹽酸小檗堿后的液相色譜圖；圖5為用液相色譜測定丙酮小檗堿純度圖；圖6為血藥濃度-時間曲線圖；圖7為小檗堿的加成物結(jié)構(gòu)通式。圖中，1一鹽酸小檗堿曲線；2—丙酮小檗堿曲線。具體實施方式實施例1小檗堿鹽酸鹽40g，加水500ml，6(TC水浴攪拌使成混懸液，取出，放冷至40。C左右，滴加20%(g/ml)氫氧化鈉約60ml至pH為1112，放冰浴中冷卻至室溫，在不斷攪拌下滴加丙酮40ml，得黃色沉淀，抽濾至干，用水5000ml洗滌至pH67，6CTC烘干。用丙酮重結(jié)晶，所得產(chǎn)物用于溶解性測定、結(jié)構(gòu)分析與純度測定。l.溶解性該化合物為黃色或黃棕色粉末，在水中幾乎不溶，在乙醇中微溶，在乙腈和丙酮中略溶。2.結(jié)構(gòu)分析2.1核磁共振氫譜如下(溶劑是氘代二甲亞砜)-'H麗R，S7.250(1H，s，H—1)，6.850(1H，d，J=8.1Hz，H-ll)，6.755(1H,s，H-4)，6.715(1H，d，J二8.5Hz,H-12)，5.993(2H,s，0-CH廠0)，5.207(1H，m，H-13)，3.762(6H，s.-0CH3)，3.250(1H,m，H-8)，2.955(1H，d，J=6.4Hz，H-6)，2.906(1H，d，J=6.4Hz:H-6)，2.750(2H,m，H—14a，b)，2.322(1H,d,J=4.6Hz,H—5)，2.273(1H，d，J二6.4Hz，H-5)，2.000(3H，s,16_CH3)。解析丙酮小檗堿'H-腿R譜共振峰歸屬。根據(jù)小檗堿與丙酮的反應(yīng)推斷其結(jié)構(gòu)式如式(II)所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>2.2.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法質(zhì)量測定由圖1為液相串聯(lián)質(zhì)譜圖，由圖顯示丙酮小檗堿的質(zhì)量數(shù)為394.6-1=393.6;小檗堿的質(zhì)量數(shù)為336.1-1=335.1。均與理論計算值(丙酮小檗堿的質(zhì)量數(shù)393.43，小檗堿的質(zhì)量數(shù)335，36)近似，誤差在允許范圍內(nèi)。為便于比較，在試樣丙酮小檗堿中加入少量鹽酸小檗堿，比較丙酮小檗堿與小檗堿的出峰時間，由圖2液相串聯(lián)質(zhì)譜圖可見，丙酮小檗堿與小檗堿的出峰時間不同，表示丙酮小檗堿與鹽酸小檗堿是兩個不同的化合物。圖中的峰面積是它們的響應(yīng)值。圖中，因鹽酸小檗堿中的鹽酸鹽和小檗堿不是以化學(xué)鍵結(jié)合，故在質(zhì)譜中只能顯示小檗堿。圖3是丙酮小檗堿的液相色譜圖，圖4是丙酮小檗堿加入鹽酸小檗堿后的液相色譜圖。兩圖顯示在一定的條件下丙酮小檗堿在液相色譜中有一特定的峰，與鹽酸小檗堿有很好的分離度。進(jìn)一步證實在本工藝條件下鹽酸小檗堿已反應(yīng)生成丙酮小檗堿，丙酮小檗堿是不同于鹽酸小檗堿的一個化合物。2.3.紫外光譜分析以乙腈為溶劑，作了不同濃度的丙酮小檗堿紫外光譜分析，紫外光譜圖可見，丙酮小檗堿濃度17ug/ml特征峰入max為378.Onm，峰高0.756;285.4nm，峰高0.626。丙酮小檗堿濃度34yg/ml特征峰Araax為377.2nm，峰高1.494;285.2nm,峰高1.239。顯示(1)不同濃度丙酮小檗堿的紫外光譜特征峰是一致的；(2)峰高與濃度成正比例。由以上系列實驗可以得出結(jié)論再次確證加成物分子式C23H23N05分子量393.43(與質(zhì)譜圖顯示的質(zhì)量數(shù)393.6誤差為0.043%)，結(jié)構(gòu)式如式(II)所示。3.丙酮小檗堿加成物純度測定HS色譜數(shù)據(jù)工作站分析報告進(jìn)樣時間2008.04.03半峰寬5斜率IOO分析方法面積歸一法檢測器JASCOUV-975<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>用歸一法計算丙酮小檗堿的含量為98.6%，幾批測定，丙酮小檗堿的含量均在98.0%以上。丙酮小檗堿液相色譜法測定純度圖示于圖5。實施例2取小檗堿鹽酸鹽30g，于三口燒瓶中，中間口裝攪拌器，一邊口裝回流裝置，在另一邊加料口加入200ml水后，開動攪拌，緩緩加入丙酮30ml，水浴加熱至60°C，使回流。配制20%(g/ml)氫氧化鈉液36ml，緩慢滴加，不斷攪拌，滴加完后，攪拌2小時，反應(yīng)結(jié)束，放入冷水中使冷卻，用布氏漏斗濾取結(jié)晶。用4000ml水洗滌，60°C烘干，即得丙酮小檗堿加成物。實施例3取小檗堿鹽酸鹽30g，于三口燒瓶中，中間口裝攪拌器，一邊口裝回流裝置，在另一邊加料口加入200ml水后，開動攪拌，緩緩加入甲乙酮38ml，水浴加熱至80°C，使回流。配制20%(g/ml)氫氧化鈉液36ml，緩慢滴加，不斷攪拌，滴加完后，攪拌2小時，反應(yīng)結(jié)束，放入冷水中使冷卻，用布氏漏斗濾取結(jié)晶。用4000ml水洗漆，60'C烘干，即得甲乙酮小檗堿加成物。實施例4取小檗堿鹽酸鹽30g，于三口燒瓶中，中間口裝攪拌器，一邊口裝回流裝置，在另一邊加料口加入200ml水后，開動攪拌，緩緩加入甲丙酮45ml，水浴加熱至80°C，使回流。配制20%(g/ml)氫氧化鈉液36ml，緩慢滴加，不斷攪拌，滴加完后，攪拌2小時，反應(yīng)結(jié)束，放入冷水中使冷卻，用布氏漏斗濾取結(jié)晶。用4000ml水洗滌，6(TC烘干，即得甲丙酮小檗堿加成物。實施例5含丙酮小檗堿加成物與藥學(xué)上可用的輔料制備藥物。稱取丙酮小檗堿5g，乳糖2g，微晶纖維素2g，研磨，過80目篩，備用。稱取聚乙二醇(6000)5g，放入燒杯中，7(TC水浴加熱，至融溶，加入丙酮小檗堿，攪拌，使均勻，取出，立即放入一20'C冰箱中，冷卻使成硬塊，取出，刮下，用研缽研成細(xì)粉，過80目篩，加入乳糖和微晶纖維素，反復(fù)過篩(3次以上)，使均勻，再加入硬脂酸鎂，過篩，混勻，壓片，即得。實施例6動物試驗與血藥濃度測定。一.喂鼠藥物的配制1.取羧甲基纖維素鈉0.25g，加生理鹽水適量，自然溶脹成粘稠液，備用；2.取1.785g小檗堿鹽酸鹽加步驟1所述溶液25ml，攪拌成混懸3.取1.723g丙酮小檗堿加步驟1所述溶液25ml，攪拌成混懸液備用o二20只SD大鼠，隨機(jī)分成甲乙2組，每組10只。第一天甲組喂食小檗堿鹽酸鹽lml，乙組喂食丙酮小檗堿lml，按喂食前及喂食后0.5、1.2、3、4、6、8、12、24、48小時抽血。在48小時之后，再喂養(yǎng)7天(為清洗期)，然后二組交叉給藥，仍按上述時間取血。三.用LC-MS/MS測定血藥濃度1.色譜條件色譜柱十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑。'流動相0.02%甲酸的乙腈溶液-0.02%甲酸的水溶液(30:70)，流速0.30ml/min。柱溫25°C。'進(jìn)樣量5yL。2.質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描；MRM掃描分析，Ql/Q3離子通道分別選擇為m/z:336—320amu(小檗堿)禾n325—109amu(內(nèi)標(biāo))。離子源參數(shù)包括霧化氣流速0.47MPa90，輔助氣0.39MPa,氣簾氣流速0.24MPa，碰撞氣流速Medium;離子源電壓3500V，離子源溫度550°C。3.樣本測定取處理好的對照品、質(zhì)控品和測定樣品溶液各5ul注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄色譜圖。按峰面積計算血樣中含小檗堿鹽酸鹽和丙酮小檗堿量。4.結(jié)果血藥濃度測定值如下表和圖6血藥濃度-時間曲線所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>AUC?！猼0t時間藥物濃度一時間曲線下面積;AUC?！?w時間藥物濃度一時間曲線下面積t1/2半衰期；AUMC?！猺at0t一階矩一時間曲線下面積；AUMC。一0w—階矩一時間曲線下面積；MRT—個分子在體內(nèi)的平均駐留時間；CL1/F用統(tǒng)計矩計算的藥物總清除率；Vd/F用統(tǒng)計矩計算的藥物表觀分布容積。四.用LC-MS/MS測定大鼠組織中藥物濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從以上實驗看，丙酮小檗堿在心肝腎胰組織中的濃度均高于鹽酸小檗堿，尤其在肝組織中。5.結(jié)論鹽酸小檗堿水溶性很小，脂溶性更差，吸收不良，導(dǎo)致其口服生物利用度低。符合圖7小檗堿加成物結(jié)構(gòu)通式的丙酮小檗堿的AUC。-t為小檗堿鹽酸鹽的7.67倍，即丙酮小檗堿的生物利用度為小檗堿鹽酸鹽的7.67倍。權(quán)利要求1.一種小檗堿的加成物，其特征在于具有通式(I)結(jié)構(gòu)通式(I)中，R是含β-羰基的C3～C5烷基化合物。2.制備權(quán)利要求1所述小檗堿加成物的方法，其特征在于將小檗堿鹽酸鹽制成水溶液，在強(qiáng)堿性條件下與具有a-位活潑氫原子的羰基化合物反應(yīng)、過濾，洗滌，干燥即得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述小檗堿加成物的制備方法，其特征在于具有a-位活潑氫原子的羰基化合物是丙酮、或甲乙酮、或甲丙酮。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述小檗堿加成物的制備方法，其特征在于所述強(qiáng)堿性條件是指pH為1112。5.含有權(quán)利要求1所述小檗堿加成物，或該加成物與藥學(xué)上可用的輔料用于制備血藥濃度較小檗堿高的藥物。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述小檗堿加成物，或該加成物與藥學(xué)上可用的輔料，其特征在于用于制備抗心律失常、抗心力衰竭、降血脂或治療糖尿病的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及一種小檗堿的加成物，具有通式(I)結(jié)構(gòu)通式(I)中，R是含β-羰基的C₃-C₅的烷基。制備方法是將小檗堿鹽酸鹽制成水溶液，在pH為11～12條件下與具有α位活潑氫原子的羰基化合物如丙酮、或甲乙酮、或甲丙酮反應(yīng)，再過濾，洗滌，干燥即得。含有所述小檗堿的加成物，或該加成物與藥學(xué)上可用的輔料用于制備口服生物利用度較小檗堿原形藥物高的藥物，尤其是用于制備抗心律失常、抗心力衰竭、降血脂或治療糖尿病等發(fā)揮小檗堿治療動物和人的全身性疾病的治療藥物。本發(fā)明的積極效果是合成方法簡單，小檗堿的加成物作為前體藥物提高了小檗堿藥物在體內(nèi)的血藥濃度，從而提高小檗堿生物利用度。文檔編號A61P9/04GK101323613SQ200810038998公開日2008年12月17日申請日期2008年6月16日優(yōu)先權(quán)日2008年6月16日發(fā)明者琛余,昀劉,劉罡一,劉艷梅,紅周,周菊珍,張之川,張夢琪,李水軍,潘俊芳,偉王,王逸平,賈晶瑩,川陸申請人:上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院