專利名稱：包括烷基醚衍生物或其鹽的神經形成誘導劑或神經病變治療劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及包括烷基醚衍生物或其鹽的極佳的神經形成誘導劑 或精神障礙治療劑。
背景技術：
作為精神障礙，精神分裂癥、雙相性情感障礙(bipolar emotional disorder)、復發(fā)性抑郁障礙、恐怖性焦慮障礙等是已知的(非專利 文獻1)。目前，臨床上已經使用抗精神病藥、抗抑郁藥、抗焦慮藥 等治療這些精神障礙。然而，需要具有增強的有效性和更少藥物不良 反應的藥物。
例如，許多的抗精神病藥物是多巴胺受體阻滯劑，并可誘導錐體 束外癥狀。此外，這些藥物對改善消極癥狀的作用不充分。已知抗抑 郁藥需要約數周顯示它們的治療作用，部分患者抵抗他們的治療，并 且他們治療后的緩解率為50%或更低。許多抗抑郁藥已知是上癥的， 并且具有不良反應如困倦。
另一方面，在各種病理情況，例如抑郁、精神分裂癥和情感障礙 中，已經報道局部的腦體積減少。在精神障礙中觀察到的腦神經元數 目減少被認為與這些疾病的這些病理情況緊密相關(非專利文獻 2-5)。
近來，已經揭示神經元通過存在于成人腦中的神經干細胞和神經 祖細胞的增殖和分化產生(非專利文獻6)，并指出這種可能，即內 源性神經千細胞和/或神經祖細胞的活化和分化將重建在各種疾病中 減少的神經組織和功能。
而且，基于抗抑郁藥、抗精神病藥等實際上顯示了神經發(fā)生誘導 作用的事實，其表明集中于神經發(fā)生誘導作用將導致更有效的精神障
5礙治療劑的發(fā)展(非專利文獻7和8)。
誘導神經干細胞和/或神經祖細胞增殖和分化的化合物被認為可 用作精神障礙治療劑，因為它們在各種疾病中減少的神經組織和降低 的功能的重建作用(專利文獻2)。
迄今為止，已經報道烷基醚衍生物具有神經保護、神經再生、和 軸突向外生長促進的作用(專利文獻1)。然而，它們的神經發(fā)生誘 導作用尚不清楚。
專利文獻l: W0 03/035647 小冊子
專利文獻2: US 6, 294, 346 說明書
非專利文獻 1: Michio Tohru， Yoshibumi Nakane， Minoru Komiyama， Yuuji 0kazaki， Yoshirou 0hkubo， "ICD-IO Seishin oyobi koudou no syougai-Rinshou kijutu to sindan gaidorain-Shinteiban (ICD-IO mental and behavioral disorder-clinical description and diagnosis guide 1 ines-a newly revised edition)，，， Igaku-Shoin， Nov., 2005，p. 23-49
非專利文獻2: Br. J. Psychiatry., 1988， 172: p. 527-532 非專利文獻3: Biol. Psychiatry., 1993， 33 (4): p. 236-246 非專利文獻4: Biol. Psychiatry., 1996， 40 (11): p. 1091- 1099 非專利文獻5: Brain， 2002， 125: p. 1428-1449 非專利文獻6: Nat. Med. ， 1998， 11: p. 1313-1317 非專利文獻7: Science, 2003， 301: p. 805-809 非專利文獻8: J. Neurosci. Res. ， 2002， 69 (1): p. 72-79
本發(fā)明的公開
需要顯示神經發(fā)生誘導作用并可用作神經發(fā)生誘導劑和精神障礙 治療劑的化合物。
在此情況下，本發(fā)明人已經發(fā)現下面通式[l]代表的苯并噻吩烷基 醚衍生物或其鹽具有神經發(fā)生誘導作用，并因此可用作神經發(fā)生誘導 劑和精神障礙治療劑，且已經完成本發(fā)明，<formula>formula see original document page 7</formula> [1]。
由通式[l]代表的本發(fā)明烷基醚衍生物或其鹽顯示神經發(fā)生誘導 作用并可用作神經發(fā)生誘導劑和精神障礙治療劑。
實施本發(fā)明的最佳方式
下面將對本發(fā)明詳細舉例說明。
除非另外說明，此說明書中的每個術語具有下迷含義。 卣原子意指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子；烷基意指直鏈或 支鏈d—12烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁 基、戊基、己基、庚基和辛基；低級烷基意指直鏈或支鏈Cw烷基， 如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基和己基； 鏈烯基意指C2—12鏈烯基，如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯 基、庚烯基和辛烯基；低級鏈烯基意指Cw鏈烯基，如乙烯基、丙烯 基、丁烯基、戊烯基和己烯基；?；榛庵?，例如，如乙?；谆?、 苯甲酰基甲基、對-硝基苯甲酰基甲基、對-溴代苯甲酰基曱基、對-甲氧基苯曱?；鶗趸蚻-苯甲?；一幕鶊F；酰氧基烷基意指，例 如，如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基的基團；芳基 疏基烷基意指，例如，苯基次磺酰基(sulfenyl)甲基和2-(對-硝 基苯基次磺?；?乙基的基團；芳基磺?；榛庵福?，如對-甲苯磺?；一幕鶊F；含氮雜環(huán)烷基意指，例如，如鄰苯二甲酰亞胺基甲基(phthalimidomethyl)和琥珀酰亞胺基甲基的基團；環(huán)烷基 意指，例如，CH環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基的基團； 烷基硫基烷基意指，例如，Cw烷基硫基-d-6烷基，如甲基硫基甲基、 乙基硫基甲基和丙基硫基甲基的基團；烷氧基烷基意指，例如，Ch 烷氧基-Cw烷基，如甲氧基甲基和l-乙氧基乙基的基團；芳烷氧基烷
基意指，例如，芳-C!-6烷氧基-d—6烷基，如千氧基甲基和苯乙基氧基
曱基的基團。
烷氧基意指直鏈或支鏈C卜12烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、 異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基 和辛氧基；低級烷氧基意指直鏈或支鏈Ch6烷氧基，如甲氧基、乙氧 基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己 氧基；鏈烯氧基意指Cw2鏈烯氧基，如乙烯氧基、丙烯氧基、丁烯氧 基、戊烯氧基、己烯氧基、庚烯氧基和辛烯氧基。
烷基硫基意指Cw2烷基硫基，如甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、 異丙基硫基、丁基硫基、異丁基硫基、叔丁基硫基、戊基硫基、己基 硫基、庚基硫基和辛基硫基；低級烷基硫基意指Cw烷基硫基，如甲 基硫基、乙基硫基、丙基硫基、異丙基硫基、丁基硫基、異丁基硫基、 叔丁基硫基、戊基硫基和己基硫基。
芳基意指苯基、萘基、茚滿基和茚基；芳氧基意指苯氧基、萘氧 基、茚滿氧基和茚基氧基；芳烷基意指芳-CH垸基，如芐基、二苯基 曱基、三苯甲基和苯乙基；芳基硫基意指苯基硫基、萘基硫基、茚滿 基硫基和茚基硫基。
?；庵讣柞；?，C2—12烷?；缫阴；?、異戊酰、丙?；托挛?酰，芳烷基羰基如節(jié)基羰基，和芳?；绫郊柞；洼良柞；?；烷氧 基羰基意指，例如，直鏈或支鏈Cw2烷氧基羰基，如甲氧基羰基、乙 氧基羰基、l，l 二甲基丙氧基羰基、異丙氧基羰基、2-乙基己氧基羰 基、叔丁氧基羰基和叔戊氧基羰基；芳烷氧基羰基意指，例如，芳-Ch6 烷氧基羰基，如芐氧基羰基和苯乙基氧基羰基；芳氧基羰基意指，例 如，如苯氧基羰基的基團；雜環(huán)氧基羰基意指，例如，如2-糠基氧基羰基和8-喹啉基氧基羰基的基團。
烷基磺酰基意指Cw2烷基磺?；缂谆酋；?、乙基磺酰基、
丙基磺?；惐酋；?、丁基磺酰基、異丁基磺?；?、仲丁基磺 ?；⑹宥』酋；⑽旎酋；⒓夯酋；?、庚基磺?；托粱?br> 磺?；坏图壨榛酋；庵?，例如，d-6烷基磺?；?，如甲基磺?；?乙基磺?；捅酋；环蓟酋；庵溉绫交酋；?甲苯基 磺?；洼粱酋；幕鶊F。
烷基氨基意指單-或二-Cw烷基氨基，如甲基氨基、乙基氨基、丙 基氨基、異丙基氨基、丁基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二異丙 基氨基和二丁基氨基。
雜環(huán)基意指5-或6-元稠和或交聯(lián)雜環(huán)基，其包含至少一個選自 氮、氧或硫原子的雜原子，如吡咯烷基、哌啶基、哌喚基、高哌溱基、 高哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、奎寧 環(huán)基、咪唑啉基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡咬基、嘧咬基、奮啉 基、喹嗪基、噻唑基、四唑基、噻二唑基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡 唑烷基、嘌呤基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、吡喃基、異苯并呋 喃基、噁唑基、異噁唑基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并 噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、喹喔啉基(quinoxalyl) 、 二 氫喹喔啉基、2， 3-二氫苯并噻吩基、2， 3-二氫苯并吡咯基、2， 3-4H-1-硫雜萘基(thianaphthyl) 、 2， 3-二氫苯并呋喃基、苯并[b] 二噁烷基、 咪唑并[2，3-a]吡啶基、苯并[b]哌溱基、色烯基、異瘞唑基、異噁唑 基、噁二唑基、噠嗪基、異吲哚基、異喹啉基、1， 3-benzodioxonyl 和1，4-苯并二噁烷基。
含氧雜環(huán)基意指，例如，如2-四氫吡喃基和2-四氫呋喃基的基團； 含硫雜環(huán)基意指，例如，如四氫硫代吡喃基的基團；被取代的甲硅烷 基意指，例如，如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基和三丁基甲硅烷 基的基團；烷基甲硅烷基烷基意指，例如，如2-(三甲基甲硅烷基) 乙基的基團。
氨基保護基團包括可用作氨基的常用保護基的所有基團，例如，如在 W. Greene, et. al. ， "Protective Groups in Organic Synthesis" ， 3rd edition, p. 494-615,1999， John Wiley & Sons, INC中所描述的那些。特別地，例如，包括?；?、烷氧基羰基、芳烷 氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷基、烷氧基烷基、芳烷氧基烷基、芳疏 基、烷基磺?；?、芳基磺?；捅蝗〈募坠柰榛?。
羥基保護基團包括可用作羥基的常用保護基的所有基團，例如， 如在 W. Greene, et. al.， "Protective Groups in Organic Synthesis" ， 3rd edition, p. 17-245,1999， John Wiley & Sons, INC中所描述的那些。特別地，例如，包括酰基、烷氧基羰基、芳烷 氧基羰基、雜環(huán)氧基羰基、烷基、鏈烯基、芳烷基、含氧雜環(huán)基、含 硫雜環(huán)基、烷氧基烷基、芳烷氧基烷基、烷基磺酰基、芳基磺?；?被取代的甲硅烷基。
羧基保護基團包括可用作羧基的常用保護基的所有基團，例如， 如在 W. Greene, et. al. ， "Protective Groups in Organic Synthesis" ， 3rd edition, p. 369-453,1999， John Wiley & Sons, INC中所描述的那些。特別地，例如，包括烷基、鏈烯基、芳基、芳 烷基、酰基烷基、芳基硫基烷基、芳基磺?；榛?、含氧雜環(huán)基、烷 基甲硅烷基烷基、酰氧基烷基、含氣雜環(huán)烷基、環(huán)烷基、烷氧基烷基、 芳烷氧基烷基、烷基疏基烷基和被取代的甲硅烷基。
在Ri和R2中烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、烷基硫基、 芳基硫基、鏈烯基、鏈烯基氧基、氨基、烷基磺?；⒎蓟酋；?、 氨基甲?；碗s環(huán)基的取代基和在R3中烷基氨基的取代基，包括選自 鹵原子、低級烷基、環(huán)烷基、芳基、低級烷氧基、芳氧基、低級烷基 硫基、芳基硫基、低級鏈烯基、低級烷基磺酰基、芳基磺?；⑼榛?氨基、任選被保護的氨基、任選被保護羥基、任選被保護的羧基、酰 基和雜環(huán)基的基團。
通式[1 ]化合物的鹽包括在堿性基團如氨基，或在酸性基團如羥基 或羧基形成的通常已知的鹽。
在堿性基團形成的鹽包括，例如，與無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硝酸和硫酸的鹽；與有機羧酸諸如甲酸、乙酸、檸檬酸、草酸、富馬 酸、馬來酸、琥珀酸、蘋果酸、酒石酸、天冬氨酸、三氯乙酸和三氟 乙酸的鹽；和與磺酸諸如甲磺酸、苯磺酸、對-甲苯磺酸、1，3，5-三甲 苯基磺酸和萘磺酸的鹽。
在酸性基團形成的鹽包括，例如，與堿金屬諸如鈉和鉀的鹽；與 堿土金屬諸如鉀和鎂的鹽；銨鹽；和與含氮有機堿諸如三甲胺、三乙 胺、三丁胺、吡咬、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二 乙胺、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二節(jié)基胺、N-千基-p-苯乙基胺、l-二苯羥曱胺和N，N， -二爺基乙二胺的鹽。
在上述鹽中，優(yōu)選的鹽包括藥理學可接受的鹽。
當異構體，例如光學異構體、幾何異構體和互變異構體存在于通 式[1]的炕基醚衍生物或其鹽中時，本發(fā)明包括所有那些異構體并包括 水合物、溶劑合物和所有晶體形式。
優(yōu)選地，通式[l]的本發(fā)明烷基醚衍生物或其鹽包括下列化合物
優(yōu)選其中W是氫原子的化合物；
優(yōu)選其中R2是氫原子、面原子和烷氧基的化合物，且更優(yōu)選其中 R2是氫原子的化合物；
優(yōu)選其中W是羥基的化合物； 優(yōu)選其中m是2的化合物；
優(yōu)選其中n是2或3的化合物，且更優(yōu)選其中n是3的化合物；
和
進一步最優(yōu)選其中W和R2是氫原子，W是羥基，m是2和n是3 的化合物。
優(yōu)選地，通式[1]的烷基醚衍生物是1- ( 3- ( 2- (l-苯并逸吩-5-基)乙氧基)丙基)氮雜環(huán)丁烷-3-醇。
通式[1]的本發(fā)明烷基醚衍生物或其鹽具有神經發(fā)生誘導作用，且 特征在于其含有通式[1]的烷基醚衍生物或其鹽的藥劑可用于治療和
預防疾病，其中神經發(fā)生在所迷疾病中是有效的。
已知發(fā)現精神障礙治療劑在培養(yǎng)的神經干細胞中的神經誘導作用(專利文獻2)。例如，已知用作雙相性障礙治療劑的丙戊酸顯示了 在培養(yǎng)的神經千細胞中的神經發(fā)生誘導作用(Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. ， 2004， 101 (47), pp. 16659-64 )。
神經發(fā)生有效治療或預防的疾病包括，例如，精神障礙和脊髓損 傷。優(yōu)選的疾病包括精神障礙。
本發(fā)明的精神障礙包括，例如，精神分裂癥和其相關疾病，諸如 精神分裂癥、分裂型障礙、情感分裂性精神障礙和其他非器質性精神 障礙；情感障礙諸如躁狂性發(fā)作、雙相性情感障礙(躁狂-抑郁性精神 病)、抑郁發(fā)作、復發(fā)性抑郁障礙和持久性情感障礙；和神經癥性障 礙諸如恐怖性焦慮障礙、強制性障礙和適應性障礙，且優(yōu)選精神分裂 癥、雙相性情感障礙(躁狂-抑郁性精神病)、抑郁發(fā)作和復發(fā)性抑郁 障礙。
用于本發(fā)明的通式[1]的烷基醚衍生物或其鹽可通過已知方法或 它們的適當組合，或通過專利文獻l中描述的方法生產。
通過加入不同的藥物添加劑諸如賦形劑、粘合劑、崩解劑、崩解 抑制劑、抗結塊/抗黏附劑、潤滑劑、吸收/吸附載體、溶劑、膨脹劑、 等滲劑、增溶劑、乳化劑、助懸劑、增稠劑、包衣劑、吸收促進劑、 膠凝/凝集促進劑、光穩(wěn)定劑、防腐劑、抗?jié)駝⑷橐?混懸液/分散體 穩(wěn)定劑、著色防護劑、脫氧劑/抗氧化劑、矯味藥、著色劑、發(fā)泡劑、
消泡劑、安撫劑、抗靜電劑，或緩沖劑/pH調節(jié)劑，本發(fā)明的化合物 可配制為藥物制劑，諸如口服藥(片劑、膠囊、散劑、顆粒、細粉、 丸劑、混懸液、乳劑、溶液、糖漿等)，或注射劑。 上述藥劑被配制以常規(guī)的方式配制。
口服固體制劑如片劑、散劑、或顆粒可根據普通方法制備，使用 下列此類固體制劑的藥物添加劑，例如賦形劑如乳糖、蔗糖、氯化 鈉、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結晶纖維素、無水磷酸氫鉀、 部分預膠凝的淀粉、玉米淀粉、或藻酸；粘合劑如單糖漿、葡萄糖溶 液、淀粉溶液、明膠溶液、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、 羧甲基纖維素、蟲膠、曱基纖維素、乙基纖維素、藻酸鈉、阿拉伯膠、
12羥丙甲基纖維素、羥丙基纖維素、水、或乙醇；崩解劑如無水淀粉、 藻酸、瓊脂粉、淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、 羧曱基纖維素鈣、或淀粉羥乙酸鈉；崩解抑制劑如硬脂醇、硬脂酸、 可可脂、或氫化油；抗結塊/抗黏附劑如硅酸鋁、磷酸氫鈣、氧化鎂、 滑石粉、硅酸酐；潤滑劑如巴西棕櫚臘、輕無水硅酸、硅酸鋁、硅酸 鎂、硬化油、硬化植物油衍生物、芝麻油、白蜂蠟、氧化鈦、無水氫 氧化鋁凝膠、硬脂酸、硬脂酸鉤、硬脂酸鎂、滑石粉、磷酸氫鈣、月 桂基硫酸鈉、或聚乙二醇；吸收促進劑如季銨鹽、月桂基硫酸鈉、脲、 或酶；和吸收/吸附載體如淀粉、乳糖、高嶺土、膨潤土、硅酸酐、含 水二氧化硅、偏硅酸鋁鎂，或膠體硅酸。
而且如需要，片劑可加工成用普通包衣劑包衣的片劑，如糖包衣 片劑、明膠包衣片劑、胃溶衣片劑、腸溶衣片劑、和水溶膜包衣片劑。
通過將本發(fā)明化合物與前述各種類型藥物混合并填充所得混合物 到硬明膠膠嚢或軟膠嚢中制備膠囊。
此外，通過普通方法，使用上述液體制劑的各種類型的添加劑， 如溶劑、膨脹劑、等滲劑、增溶劑、乳化劑、懸浮劑或增稠劑，本發(fā) 明的化合物還可配制成水或油型混懸液、溶液、糖漿、和酏劑。
通過普通方法，使用液體制劑的藥物添加劑包括稀釋劑如水、 乙醇、聚乙二醇、丙二醇、檸檬酸、乙酸、躊酸、乳酸、乳酸鈉、硫 酸、氫氧化鈉；pH調節(jié)劑和緩沖劑，如檸檬酸鈉、乙酸鈉、和磷酸鈉； 穩(wěn)定劑如焦亞硫酸鈉、乙二胺四乙酸、巰基乙酸、或硫代乙酸；等滲 劑如氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、或甘油；增溶劑如羧甲基纖維素鈉、 丙二醇、苯甲酸鈉、苯曱酸節(jié)基酯、氛基甲酸乙酯、乙醇胺、或甘油； 安撫劑如葡萄糖酸鉀、氯丁醇、葡萄糖、或節(jié)醇；和局部麻醉劑可制 備注射劑。
可根據普通方法通過將本發(fā)明化合物與防腐劑如氯丁醇、曱醋吡 喃酮鈉、苯扎氯銨、氯化十六烷基吡啶鎗、苯乙基醇、對羥苯甲酸曱 酯、或芐索氯銨；緩沖劑如硼砂、硼酸、或磷酸二氫鉀；增稠劑如甲 基纖維素、羥乙基纖維素、羧曱基纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、或硫酸軟骨素；增溶劑如聚山梨醇酯80或聚氧 乙烯硬化荒麻油60;穩(wěn)定劑如依地酸鈉或亞硫酸氫鈉；或等滲劑如氯 化鈉、氯化鉀或甘油適當混合制備滴眼液。
給予上述制劑的方法無特殊限制。其根據制劑的形式、患者年齡、 其性別、和患者癥狀的程度，及其他條件適當確定。
本發(fā)明制劑的活性成分的劑量根據用法、患者的年齡、其性別、 疾病的形式、和其他條件適當選擇?？傊?，本制劑可以以1-1500mg/ 成人/天的劑量給藥， 一次或分成多次給予，優(yōu)選以40-500mg/成人/ 天的劑量給藥， 一次或分成多次給予。
實施例
現在，本發(fā)明將以試驗實施例和配制實施例來說明，其絕非限制
本發(fā)明。
為顯示其可用作精神障礙治療劑，本發(fā)明化合物的神經發(fā)生作用 在培養(yǎng)的神經干細胞中證明。
使用1- (3- (2- (1-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮雜環(huán)丁 烷-3-醇(下文稱作T-817)馬來酸鹽(下文稱作T-817MA)作為試驗物質。
試驗實施例對培養(yǎng)的神經干細胞分化的作用
培養(yǎng)的神經千細胞根據Hirabayashi的部分改良方法制備
(Development, 2004， 131 (12) ， p. 2791-2801 )。從ICR小鼠胚胎移 除大腦(14天胚胎)，在含0. 0625 %胰蛋白酶和0. lmg/mL Dnase I 的人工腦脊液(124mM NaCl， 5mM KC1， 1. 3mM MgCl2， 2mM CaCl2， 26mM NaHC03， 10mM D-Glucose，pH 7.4)中于37*€培養(yǎng)5分鐘。然后加入 胰蛋白酶抑制劑(終濃度0. 35mg/mL)，該混合物于800rpm離心5 分鐘。通過移液在神經干細胞培養(yǎng)基(含20 ng/mL基本的成纖維細胞 生長因子、20 ng/mL表皮生長因子和補充B27的DMEM/F-12培養(yǎng)基
(Invitrogen))中將所得片狀沉淀分散得到單細胞懸液。所得細胞
14懸液在10mL神經干細胞培養(yǎng)基中稀釋至1 x 1()5個細胞/ml,并培養(yǎng)7 天(使用10-cm皿)。在培養(yǎng)第7天，所形成的神經干細胞球用胰蛋 白酶消化，并通過如上述的移液分散以得到單細胞懸液。所得到的分 離細胞在神經干細胞培養(yǎng)基中另培養(yǎng)7天。
培養(yǎng)7天后，所形成的神經干細胞球用胰蛋白酶消化，并通過如 上述的移液分散以得到單細胞懸液。該細胞懸液在培養(yǎng)基(補充了 B27 的DMEM/F-12培養(yǎng)基)中稀釋至2xl()S個細胞/ml，然后其以100pL/ 孔被等分到T-817MA治療組和對照組的每個孔。100nL的T-817MA溶 液已經被加入T-817MA治療組的孔(T-817MA溶解于補充了 B27的 DMEM/F-12培養(yǎng)基至10 n M的終濃度)。100 p L補充了 B27的DMEM/F-12 培養(yǎng)基已經被加入對照組的孔。關于培養(yǎng)板，使用0. 5%聚乙烯亞胺-包被的48孔板。
T-817MA治療組和對照組均培養(yǎng)3天。
培養(yǎng)3天后，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌細胞，用4%多聚甲 醛/磷酸鹽緩沖液固定，用0. 3%TritonX-100/PBS溶液在室溫處理5 分鐘，用PBS洗滌，并用0. 5%脫脂乳于室溫孵育1小時。加入用0. 5 %脫脂乳500倍稀釋的小鼠Tujl抗體(COVANCE)，該混合物置于4 'C過夜，然后用PBS洗滌。進一步，向細胞加入用PBS稀釋1000倍的 Alexa Fluor 546-標記的抗小鼠IgG (Molecular Probes)，將該混 合物置于室溫1小時。用PBS洗滌細胞并在熒光顯微鏡下觀察，計數 發(fā)射紅色熒光的Tujl陽性細胞數目，計算其與總細胞數目的比率作為 分化成神經元的比率，代表神經發(fā)生誘導作用。結果顯示于表l。
— 對照組 T-817MA治療組—
"^"化成神經元的比率(％ ) ^"o (Tujl陽性細胞的比率) '
與僅在補充了 B27的DMEM/F-12培養(yǎng)基中培養(yǎng)的神經干細胞(對 照組)相比，在含T-817MA (10pM)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞顯示了更高的分化比率，即，T-817MA的神經發(fā)生誘導作用。 配制實施例1
50mg的T-817MA、20mg的乳糖、25mg的玉米淀粉和40mg的Avicel PH101(Asahi Kasei Corporation)的混合物與5°/。聚乙烯吡咯烷酮K30 水溶液捏合，60'C干燥，與lOing的Kollidon CL (BASF) 、 10mg的 Avicel PH302 (Asahi Kasei Corporat ion) 、 18mg的輕度無水硅酸和 2nig的硬脂酸鎂的混合物混合，壓制得到7mm直徑和75mg重量的圓形 片，含50mg的T-817MA。
配制實施例2
50mg的T-817MA、 20mg的乳糖和53mg的玉米淀粉的混合物與5 0/。聚乙烯吡咯烷酮K30水溶液捏合，60TC干燥，與7mg的KollidonCL (BASF) 、 18mg的Avicel PH302(Asahi Kasei Corporation)和2mg 的硬脂酸鎂的混合物混合，然后每膠嚢150 mg混合物填充入4號明膠 膠嚢中裝配膠嚢。
工業(yè)適用性
本發(fā)明烷基醚衍生物或其鹽顯示神經發(fā)生誘導作用，并可用作神 經發(fā)生誘導劑和精神障礙治療劑。
1權利要求
1. 一種神經發(fā)生誘導劑，其特征在于其含有下列通式代表的苯并噻吩烷基醚衍生物或其鹽，[其中，R1和R2，相同或不同，代表一種或多種選自氫原子、鹵原子、任選被取代的烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、烷基硫基、芳基硫基、鏈烯基、鏈烯基氧基、氨基、烷基磺?；?、芳基磺酰基、氨基甲?；螂s環(huán)基、任選被保護的氨基、羥基或羧基、硝基和氧代基的基團；R3代表任選被取代的烷基氨基或任選被保護的氨基或羥基；和m和n，相同或不同，代表1-6的整數]。
2. 根據權利要求1的神經發(fā)生誘導劑，其特征在于其含有苯并噢 吩烷基醚衍生物或其鹽，其中Ri是氫原子和R2是氫原子、卣原子或烷 氧基。
3. 根據權利要求1或2的神經發(fā)生誘導劑，其特征在于其含有苯 并噻吩烷基醚衍生物或其鹽，其中m是2和n是2或3。
4. 根據權利要求l-3中任一項的神經發(fā)生誘導劑，其特征在于其 含有苯并噻吩烷基醚衍生物或其鹽，其中R2是氫原子，W是羥基和n 是3。
5. 根據權利要求1的神經發(fā)生誘導劑，其特征在于所述苯并塞吩 烷基醚衍生物是1- (3- (2- (1-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮 雜環(huán)丁烷-3-醇。
6. —種精神障礙治療劑，其特征在于其含有下列通式代表的苯并 瘞吩烷基醚衍生物或其鹽，,[其中，W和R2,相同或不同，代表一種或多種選自氫原子、囟原 子、任選被取代的烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、坑基硫基、 芳基硫基、鏈烯基、鏈烯基氧基、氨基、烷基磺?；⒎蓟酋；?、 氨基甲酰或雜環(huán)基、任選被保護的氨基、鞋基或羧基、硝基和氧代基的基團；R3代表任選被取代的坑基氨基或任選被保護的氨基或羥基；和m和n，相同或不同，代表1-6的整數]。
7. 根據權利要求6的精神障礙治療劑，其特征在于其含有苯并噻 吩烷基醚衍生物或其鹽，其中r是氫原子和R2是氫原子、卣原子或烷 氧基。
8. 根據權利要求6或7的精神障礙治療劑，其特征在于其含有苯 并漆吩烷基醚衍生物或其鹽，其中m是2和n是2或3。
9. 根據權利要求6-8中任一項的精神障礙治療劑，其特征在于其 含有苯并噻吩烷基醚衍生物或其鹽，其中R2是氫原子，W是羥基和n 是3。
10. 根據權利要求6的精神障礙治療劑，其特征在于所述苯并噻吩 烷基醚衍生物是1- (3- (2- (l-苯并噻吩-5-基)乙氧基)丙基)氮 雜環(huán)丁烷-3-醇。
11.根據權利要求6-10中任一項的治療劑，其中所述精神障礙是 精神分裂癥及其相關疾病、情感障礙、和神經癥性障礙。
全文摘要
公開了含下列通式代表的苯并噻吩烷基醚衍生物或其鹽的藥劑。其中，R¹和R²獨立代表至少一種選自氫原子、鹵原子、烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、烷基硫基、芳基硫基、鏈烯基、鏈烯基氧基、氨基、烷基磺?；?、芳基磺酰基、氨基甲?；?、雜環(huán)基、氨基、羥基、羧基、硝基、氧代基等的基團；R³代表可被取代的烷基氨基或可被保護的氨基或羥基；和m和n獨立代表1-6的整數。該藥劑可用作神經發(fā)生誘導劑或神經病的治療劑。
文檔編號A61P43/00GK101432280SQ20078001476
公開日2009年5月13日 申請日期2007年4月24日 優(yōu)先權日2006年4月26日
發(fā)明者丸淵茂樹, 奧田智博, 巖上登 申請人:富山化學工業(yè)株式會社