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一種從百合中提取的天然抗菌組合物及其提取方法

文檔序號:1174127閱讀:438來源:國知局
專利名稱:一種從百合中提取的天然抗菌組合物及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及抗菌組合物,具體來說涉及一種從百合中提取的天然抗菌組合物,同時還涉及其提取方法。
背景技術(shù)
抗菌藥物是臨床應用最廣的一類藥物,但是目前這類藥物的應用存在著許多問題,如耐藥性、毒副反應、抗菌藥物造成的菌群失調(diào)、二重感染和院內(nèi)感染以及變態(tài)反應等,尤其是細菌耐藥性的迅速上升。使得對這類菌所致的嚴重感染沒有有效的藥物可供選用,對人類健康造成極大威脅。因此,目前人們從天然資源中發(fā)展新的抗菌藥物作為抗菌藥物研究的一個重點。
百合為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb、百合lilium brownii F.EBrown var.viriulum Baker或細葉百合Lilium pumilulm DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉。秋季采挖,洗凈,剝?nèi)△[葉,置沸水中略燙,干燥。百合具有止咳,祛痰,平喘,鎮(zhèn)靜等藥理作用,在臨床上被用來治療燥咳,精神分裂癥,肺結(jié)核和更年期綜合癥等疾病,具有較顯著的療效。含有各種微量元素,皂苷,磷脂,多糖和生物堿類化學成分。但未見關(guān)于百合的體外抑菌活性方面的報道,發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的克服上述缺點而提供的一種對金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、糞鏈球菌(Staphylococcus faecalis)、黃曲霉(Aspergillus flavus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aemginosa)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)有抑制作用的從百合中提取的天然抗菌組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法。
本發(fā)明的從百合中提取的天然抗菌組合物,其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩,按1-5g/10ml的比例加入溶劑,浸泡1-5次后,每次12-24h,置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h,抽濾得到提取液;回收溶劑后干燥,即得。
其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩,按1-5g/10ml的比例加入溶劑,浸泡1-5次后,每次12-24h,置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h,抽濾得到提取液;回收溶劑后干燥,即得。
上述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其中回收溶劑后干燥的方法為溶劑為水時,-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥;溶劑為酒精時,酒精提取液40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精,-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥;溶劑為乙酸乙酯時,乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比,經(jīng)過實驗證明,水溶劑浸提物對綠膿桿菌有較好的效果,最低抑菌濃度均為12.5mg/ml;對大腸桿菌,藤黃微球菌,黃曲霉的最低抑菌濃度均為25mg/ml;對金黃色葡萄球菌,糞腸球菌的最低抑菌濃度為50mg/ml。酒精溶劑浸提物對藤黃微球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用較好,最低抑菌濃度均為6.25mg/ml;對大腸桿菌和黃曲霉的最低抑菌濃度為12.5mg/ml;對綠膿桿菌和糞腸球菌的最低抑菌濃度均為25mg/ml;乙酸乙酯溶劑對金黃色葡萄球菌有較好的效果,最低抑菌濃度均為3.13mg/ml;對其它的供試菌的抑制效果稍弱,對綠膿桿菌的最低抑菌濃度為6.25mg/ml;對黃曲霉的最低抑菌濃度均為12.5mg/ml,對大腸桿菌,藤黃微球菌,糞腸球菌的最低抑菌濃度為50mg/ml。說明百合的不同溶劑提取物都具有抑制細菌生長的活性。為百合的進一步開發(fā)利用和尋找新的天然抗菌藥物提供了基礎。
具體實施例方式
以下通過抑菌活性實驗來進一步證明本發(fā)明的有益效果實施例1將干燥的百合粉碎過40目篩,稱取150g,加入1000ml的水,浸泡2次后,每次12h,置于溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min的恒溫搖床上震蕩12h,抽濾得到提取液,-80℃冷凍12h后用真空冷凍干燥機干燥24h,得到干燥品。
取百合水提取物的干燥品0.3g,分別溶于3mL DMF中作為原液,過細菌過濾器,分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128,1∶256各8個濃度,即含原液濃度分別為50,25,12.5,6.25,3.1,1.5,0.75,0.375mg/mL,每管300ul。每個濃度設三個平行管,并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL,混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板,每梯度涂有三個平板,整個過程重復兩次,24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下


實施例2將干燥的百合粉碎過120目篩,稱取150g,加入1000ml、95%的酒精,浸泡3次后,每次18h,置于溫度為30℃、轉(zhuǎn)速為250r/min的恒溫搖床上震蕩18h,抽濾得到提取液,40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精,-80℃冷凍12h用真空冷凍干燥機干燥24h,得到干燥品。
取百合95%酒精的提取物干燥品0.3g,分別溶于3mL DMF中作為原液,過細菌過濾器,分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128,1∶256各8個濃度,即含原液濃度分別為50,25,12.5,6.25,3.1,1.5,0.75,0.375mg/mL,每管300ul。每個濃度設三個平行管,并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL,混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板,每梯度涂布三個平板,整個過程重復兩次,24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下

實施例3將干燥的百合粉碎過200目篩,稱取150g,加入1000ml的乙酸乙脂,浸泡5次后,每次24h,置于溫度為40℃、轉(zhuǎn)速為180r/min的恒溫搖床上震蕩24h,抽濾得到提取液,45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯,得到干燥品。
取百合乙酸乙酯提取物的干燥品0.3g,分別溶于3mL DMF中作為原液,過細菌過濾器,分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128,1∶256各8個濃度,即含原液濃度分別為50,25,12.5,6.25,3.1,1.5,0.75,0.375mg/mL,每管300ul。每個濃度設三個平行管,并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL,混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板,每梯度涂布三個平板,整個過程重復兩次,24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下

權(quán)利要求
1.一種從百合中提取的天然抗菌組合物,其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩,按1-5g/10ml的比例加入溶劑,浸泡1-5次后,每次12-24h,置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h,抽濾得到提取液;回收溶劑后干燥,即得。
2.如權(quán)利要求1所述的從百合中提取的天然抗菌組合物,其特征在于溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
3.一種從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩,按1-5g/10ml的比例加入溶劑,浸泡1-5次后,每次12-24h,置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h,抽濾得到提取液;回收溶劑后干燥,即得。
4.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其特征在于溶劑為水時,回收溶劑后干燥的方法為-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
5.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其特征在于溶劑為酒精時,回收溶劑后干燥的方法為酒精提取液40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精,-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
6.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法,其特征在于溶劑為乙酸乙酯時,回收溶劑后干燥的方法為乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從百合中提取的天然抗菌組合物及其提取方法,將干燥的百合粉碎過40-200目篩,按1-5g/10ml的比例加入溶劑,浸泡1-5次后,每次12-24h,置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h,抽濾得到提取液;回收溶劑后干燥,即得。其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。本發(fā)明制得的產(chǎn)品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、糞鏈球菌、黃曲霉、綠膿桿菌、藤黃微球菌均有抑制作用。
文檔編號A61K127/00GK101019993SQ20071007767
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月8日
發(fā)明者周英, 段震 申請人:貴州大學
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