專利名稱：一種從百合中提取的天然抗菌組合物及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗菌組合物，具體來說涉及一種從百合中提取的天然抗菌組合物，同時還涉及其提取方法。
背景技術(shù)：
抗菌藥物是臨床應用最廣的一類藥物，但是目前這類藥物的應用存在著許多問題，如耐藥性、毒副反應、抗菌藥物造成的菌群失調(diào)、二重感染和院內(nèi)感染以及變態(tài)反應等，尤其是細菌耐藥性的迅速上升。使得對這類菌所致的嚴重感染沒有有效的藥物可供選用，對人類健康造成極大威脅。因此，目前人們從天然資源中發(fā)展新的抗菌藥物作為抗菌藥物研究的一個重點。
百合為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb、百合lilium brownii F.EBrown var.viriulum Baker或細葉百合Lilium pumilulm DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉。秋季采挖，洗凈，剝?nèi)△[葉，置沸水中略燙，干燥。百合具有止咳，祛痰，平喘，鎮(zhèn)靜等藥理作用，在臨床上被用來治療燥咳，精神分裂癥，肺結(jié)核和更年期綜合癥等疾病，具有較顯著的療效。含有各種微量元素，皂苷，磷脂，多糖和生物堿類化學成分。但未見關(guān)于百合的體外抑菌活性方面的報道，發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的克服上述缺點而提供的一種對金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、糞鏈球菌(Staphylococcus faecalis)、黃曲霉(Aspergillus flavus)、綠膿桿菌(Pseudomonas aemginosa)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)有抑制作用的從百合中提取的天然抗菌組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法。
本發(fā)明的從百合中提取的天然抗菌組合物，其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
上述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其中回收溶劑后干燥的方法為溶劑為水時，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥；溶劑為酒精時，酒精提取液40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥；溶劑為乙酸乙酯時，乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，經(jīng)過實驗證明，水溶劑浸提物對綠膿桿菌有較好的效果，最低抑菌濃度均為12.5mg/ml；對大腸桿菌，藤黃微球菌，黃曲霉的最低抑菌濃度均為25mg/ml；對金黃色葡萄球菌，糞腸球菌的最低抑菌濃度為50mg/ml。酒精溶劑浸提物對藤黃微球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用較好，最低抑菌濃度均為6.25mg/ml；對大腸桿菌和黃曲霉的最低抑菌濃度為12.5mg/ml；對綠膿桿菌和糞腸球菌的最低抑菌濃度均為25mg/ml；乙酸乙酯溶劑對金黃色葡萄球菌有較好的效果，最低抑菌濃度均為3.13mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍弱，對綠膿桿菌的最低抑菌濃度為6.25mg/ml；對黃曲霉的最低抑菌濃度均為12.5mg/ml，對大腸桿菌，藤黃微球菌，糞腸球菌的最低抑菌濃度為50mg/ml。說明百合的不同溶劑提取物都具有抑制細菌生長的活性。為百合的進一步開發(fā)利用和尋找新的天然抗菌藥物提供了基礎。
具體實施例方式
以下通過抑菌活性實驗來進一步證明本發(fā)明的有益效果實施例1將干燥的百合粉碎過40目篩，稱取150g，加入1000ml的水，浸泡2次后，每次12h，置于溫度為37℃、轉(zhuǎn)速為200r/min的恒溫搖床上震蕩12h，抽濾得到提取液，-80℃冷凍12h后用真空冷凍干燥機干燥24h，得到干燥品。
取百合水提取物的干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板，每梯度涂有三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下


實施例2將干燥的百合粉碎過120目篩，稱取150g，加入1000ml、95％的酒精，浸泡3次后，每次18h，置于溫度為30℃、轉(zhuǎn)速為250r/min的恒溫搖床上震蕩18h，抽濾得到提取液，40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精，-80℃冷凍12h用真空冷凍干燥機干燥24h，得到干燥品。
取百合95％酒精的提取物干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板，每梯度涂布三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下

實施例3將干燥的百合粉碎過200目篩，稱取150g，加入1000ml的乙酸乙脂，浸泡5次后，每次24h，置于溫度為40℃、轉(zhuǎn)速為180r/min的恒溫搖床上震蕩24h，抽濾得到提取液，45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯，得到干燥品。
取百合乙酸乙酯提取物的干燥品0.3g，分別溶于3mL DMF中作為原液，過細菌過濾器，分別以LB液體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256各8個濃度，即含原液濃度分別為50，25，12.5，6.25，3.1，1.5，0.75，0.375mg/mL，每管300ul。每個濃度設三個平行管，并分別設不含萃取液的LB液體培養(yǎng)基為對照管。然后在各管中加入事先制備好的菌懸液(600nm處OD值約為1.0)30uL，混勻后放于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。分別從每一試管取0.1ml液體涂布營養(yǎng)瓊脂平板，每梯度涂布三個平板，整個過程重復兩次，24h后確定是否有細菌生長。以藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。實驗結(jié)果如下

權(quán)利要求
1.一種從百合中提取的天然抗菌組合物，其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的從百合中提取的天然抗菌組合物，其特征在于溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。
3.一種從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于將干燥的百合粉碎過40-200目篩，按1-5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1-5次后，每次12-24h，置于溫度為30-40℃、轉(zhuǎn)速為180-250r/min的恒溫搖床上震蕩12-24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。
4.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為水時，回收溶劑后干燥的方法為-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
5.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為酒精時，回收溶劑后干燥的方法為酒精提取液40℃減壓旋轉(zhuǎn)濃縮除去酒精，-80℃冷凍12-24h用真空冷凍干燥機干燥。
6.如權(quán)利要求3所述的從百合中提取的天然抗菌組合物的提取方法，其特征在于溶劑為乙酸乙酯時，回收溶劑后干燥的方法為乙酸乙酯提取液45℃減壓濃縮除去乙酸乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從百合中提取的天然抗菌組合物及其提取方法，將干燥的百合粉碎過40－200目篩，按1－5g/10ml的比例加入溶劑，浸泡1－5次后，每次12－24h，置于溫度為30－40℃、轉(zhuǎn)速為180－250r/min的恒溫搖床上震蕩12－24h，抽濾得到提取液；回收溶劑后干燥，即得。其中溶劑為水、酒精或乙酸乙酯。本發(fā)明制得的產(chǎn)品對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、糞鏈球菌、黃曲霉、綠膿桿菌、藤黃微球菌均有抑制作用。
文檔編號A61K127/00GK101019993SQ20071007767
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月8日
發(fā)明者周英, 段震 申請人:貴州大學