專利名稱：一種超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物載體的制備方法，具體涉及一種具有超聲控制所含藥物釋放速度的藥物載體-超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法。
背景技術(shù)：
微/納米藥物載體系統(tǒng)是具有微米及納米尺寸的藥物載體系統(tǒng)，包括微球、微凝膠、微乳劑、納米微粒、納米乳劑及納米凝膠等。與傳統(tǒng)藥物劑型相比，它們的特點是具有體內(nèi)藥物緩釋性和一定的組織靶向性，由于它們和細胞的融合及內(nèi)吞作用，改變了給藥途徑，不僅使藥物在體內(nèi)的滯留時間延長，而且改變了藥物在體內(nèi)各器官的分布，從而降低了藥物的毒副作用，提高了治療效果。通常，微/納米藥物載體系統(tǒng)適用于各種給藥方式，如動脈注射、靜脈注射、肌肉注射、口服、粘膜給藥和關(guān)節(jié)內(nèi)給藥等。因此該類藥物載體系統(tǒng)在抗腫瘤、抗病毒、心血管疾病、DNA靶向等方面有巨大的應(yīng)用前景。但是微/納米載體一旦進入體內(nèi)，人們便不能控制其靶向性和釋藥方式，載體在體內(nèi)只有被動地隨血液全身循環(huán)，被動地釋放藥物。這對一些重大疾病的治療往往難以奏效，以惡性腫瘤為例，化療藥物由于毒副作用大、細胞耐藥等原因使其應(yīng)用受到限制，只能采用間隙給藥的方法，腫瘤細胞不能一次被殺滅。由于腫瘤細胞的增殖速度快于正常細胞，用藥結(jié)果是藥物對正常細胞的殺滅甚于腫瘤細胞，形成惡性循環(huán)。此外，由于腫瘤種類不同，其增殖方式、增殖速度等各不相同，甚至不同個體之間都有很大差異。臨床化療方案僅有給藥劑量和間隙時間，對不同生長期的腫瘤細胞采用同樣的給藥劑量和間隙時間，常常達不到預(yù)期療效。因此，理想的載藥體系應(yīng)該具有藥物定位、定時、定量釋放的性質(zhì)才能達到罪佳治療。藥物定位可由靶向制劑來解決，而定時、定量給藥則需要通過控釋制劑來實現(xiàn)。控釋方式主要包括物理信號如溫度、電場、磁場、超聲波等和化學(xué)信號如pH值、離子強度和化學(xué)物質(zhì)等。其中，超聲觸發(fā)釋藥體系具有方法簡便、定位準(zhǔn)確、對人體損傷小、可以深入到身體內(nèi)部、作用距離長等特點受到廣泛關(guān)注。目前，在我國尚無超聲觸發(fā)釋藥體系方面的發(fā)明專利。國際專利申請WO2004082607-A2“A METHODOF PREPARING GAS-FILLED POLYMER MATRIX MICROPARTICLESUSEFUL FOR DELIVERING DRUG”(一種用于有效遞送藥物的充氣聚合物基質(zhì)微球制備方法)公開了一種用于超聲介導(dǎo)藥物靶向遞送微粒的制備方法，這種多聚物微粒可用于超聲介導(dǎo)的藥物靶向遞送首先把微球送達特定的組織或器官；然后在該組織或器官施加超聲，該超聲的能量密度可引起微球破裂；保持該超聲能量密度直到大多數(shù)的微球破裂即可將藥物介導(dǎo)到靶部位。該制備方法的特點在于提高了制備過程中乳狀液的穩(wěn)定性。國際專利申請WO2003015831-A“GAS MICROSPHERE LIPOSOME COMPOSITES”(充氣微球脂質(zhì)體復(fù)合物)公開了一種用于診斷超聲成像和藥物靶向遞送的微泡-脂質(zhì)體復(fù)合物的制備方法。該方法的新穎性在于當(dāng)其懸浮于介質(zhì)中時，微泡-脂質(zhì)體復(fù)合物由一個含氣的微球(MS)和充滿液體的脂質(zhì)體(LP)組成，該微球表面至少吸附了一個酯類分子(Ia)或表面活性劑分子(Ib)，而充滿液體的脂質(zhì)體則通過Ia或Ib與含氣微球相連。該方案主要用于診斷成像，特別是超聲診斷成像，如對受體、或RNA酶的成像；或者在包含藥物的情況下，用于心臟病、炎癥、傳染病、癌癥和血管栓塞的治療。該方案的特點在于可以選擇性地靶向遞送診斷或治療試劑，并通過施加超聲加速局部藥物釋放。國際專利申請WO9851284-A“NOVEL ACOUSTICALLY ACTIVE DRUGDELIVERY SYSTEMS”(新型聲學(xué)活性藥物遞送系統(tǒng))公開了一種可用于藥物定位釋放的聲學(xué)靶向藥物遞送系統(tǒng)，使用含有油和表面活性劑的填氣顆粒，通過加熱或診斷超聲實現(xiàn)眼、前列腺、肺和癌癥的局部治療。由于微粒含有可檢測的組分如氟碳化合物，因此藥物的遞送過程可以被有效的監(jiān)測，當(dāng)藥物到達特定位點可通過在特定位點施加超聲能量給氣體，破壞脂質(zhì)體微粒從而釋放診斷或治療藥物。上述所公開的超聲控制釋藥體系均是兼有載藥功能的超聲造影劑，其所存在的缺點是穩(wěn)定性較差、載藥效率不高，并非專門的超聲釋藥體系，它們的超聲觸發(fā)釋藥量較低。且均為不可逆地藥物釋放，載體破壞后不能恢復(fù)。因此，開發(fā)性能穩(wěn)定的新型可逆超聲觸發(fā)體系具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是旨在提供一種新的超聲波觸發(fā)釋藥體系-離子化修飾明膠微凝膠制備工藝，所述離子化修飾明膠微凝膠體系是以明膠為載體材料、將藥物成份包裹成微/納米級凝膠顆粒，減小藥物與正常細胞的接觸，降低藥物毒性，到達局部后在病灶部位施加超聲波，使藥物從該載藥系統(tǒng)中定時、定量釋放，達到增加藥物的局部濃度、減小整體藥物濃度和提高藥物的治療效果。
為達到以上目的，本發(fā)明是采取如下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的，一種超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法，包括以下步驟a.將含重量濃度為5～20％的明膠溶液加熱至35～60℃，加入1％～10％重量的藥物攪拌均勻，再逐漸加入摩爾濃度為0.5～1.5mol·L-1鹵素鈉鹽溶液，至鹵素陰離子終重量濃度為1～5％，用雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠溶液的重量濃度為0.5％～5％，再加入0.5～2％重量的表面活性劑；b.在35～60℃熱水浴中進行磁力攪拌，并逐滴加入重量濃度為20％的蛋白沉淀劑，至觀察到溶液混濁，再逐滴加入溶劑化劑至觀察到溶液恢復(fù)澄清；c.在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理1-4分鐘，使之成為均勻的半透明的溶液。
d.在步驟b同樣的磁力攪拌條件下，加入0.1％～3％重量的交聯(lián)劑，進行交聯(lián)反應(yīng)；e.交聯(lián)反應(yīng)25分鐘～2小時后，加入0.1～1.0％重量的焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1～2小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。
所述步驟a的藥物可以是抗生素類、抗菌素類、抗腫瘤類、抗病毒類、抗凝血劑、提高免疫力類、蛋白類、核酸類、激素類和基因類藥物中的一種，其在水溶液中為親脂性或親水性的；所述表面活性劑可以是吐溫-20(Tween-20)、吐溫-40(Tween-40)、吐溫-60(Tween-60)、吐溫-65(Tween-65)、吐溫-80(Tween-80)、吐溫-85(Tween-85)和司盤-20(Span-20)、司盤-40(Span-40)、司盤-60(Span-60)、司盤-80(Span-80)中的一種，或者是其中兩種以上的混合物。
所述步驟b中的蛋白沉淀劑，可以是硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉中的一種，或者是其中兩種以上的混合物。
所述步驟c中的溶劑化劑可以是乙醇、異丙醇中的一種或這兩種混合物所述步驟d中的交聯(lián)劑可以是甲醛、戊二醛、甘油醛、環(huán)氧化物、氧化葡聚糖、異氰酸酯、?；B氮化合物和水溶性碳化二亞胺中的一種或者兩種以上混合物。
上述方案中，步驟b中所述的磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200～500轉(zhuǎn)/分；步驟c中所述的超聲波處理，超聲頻率為20KHz，功率為75w。
本發(fā)明基于鹵素離子共沉淀法制備的含藥明膠微凝膠具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有大量的水，本發(fā)明利用鹵素離子(如F-離子)共沉淀一方面可以制備含藥明膠微凝膠，另一方面微凝膠含有大量的鹵素離子，由于鹵素離子如F-離子具有較大的電負性，使得明膠凝膠表面帶有微小的孔隙，超聲波可以透過而不破壞微凝膠，當(dāng)超聲波在適當(dāng)?shù)臈l件下達到某個特定值時，三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的水產(chǎn)生大量氣泡，使微凝膠的體積急劇增大，氣泡再在超聲波的作用下運動并最終逸出凝膠，從而帶走了溶解其中的藥物，藥物釋放增加。而超聲波停止后，大量氣泡破裂，微凝膠的體積降低，加上體系要維持穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，所以幾分鐘后體系可以恢復(fù)原狀，而未含有鹵素離子的明膠微凝膠其表面沒有孔隙，超聲波難以透過或者透過會破壞微凝膠，因此不會產(chǎn)生超聲觸發(fā)釋藥效應(yīng)。所以在交聯(lián)反應(yīng)時必須嚴(yán)格控制條件，一旦形成微凝膠則馬上終止交聯(lián)反應(yīng)，反應(yīng)過長則微凝膠其表面沒有孔隙，反應(yīng)過短無法形成一定形狀的微凝膠。本發(fā)明方法制備的新型超聲觸發(fā)釋藥體系對未來的研究和應(yīng)用都有很好的促進作用。另外，明膠作為載體材質(zhì)，與合成高分子材料相比，具有良好的生物相容性和生物可降解性。本發(fā)明的藥物載體在藥物新劑型方面有重要的應(yīng)用價值。


圖1是本發(fā)明離子化修飾明膠微凝膠的制備方法工藝流程框圖；圖2是本發(fā)明實例1離子化修飾明膠微凝膠的粒徑分布圖。
圖3是本發(fā)明實例2的透射電鏡圖(×30000)。
圖4是本發(fā)明實例2在超聲作用下平均粒徑的變化圖。
圖5是本發(fā)明實例2在超聲作用下藥物釋放變化圖。
具體實施例方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細描述。
實施例1將含重量濃度10％的明膠溶液加熱至40℃，加入2％重量的抗生素類藥物林可霉素攪拌均勻，再逐漸加入1.50mol·L-1的NaCl溶液至Cl-終濃度為2％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠重量濃度為0.6％，加入0.8％重量的Tween-40，在35℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸銨至溶液渾濁，再逐滴加入乙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理2min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在35℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分下加入0.2％重量的交聯(lián)劑甲醛，交聯(lián)反應(yīng)45分鐘后，加入0.2％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1.5小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到林可霉素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末制得的產(chǎn)品靜置后分層，上層澄清透明下層為白色顆粒狀沉淀，振蕩可分散。取2ml左右液體置于5ml小燒杯中，室溫下用探頭式超聲細胞破碎儀作用，超聲頻率為20kHz。超聲作用約前80秒，液體略顯混濁，濁度低。作用約80秒左右時，液體由半透明溶液變?yōu)槿榘咨珣覞嵋骸Ｊ覝叵蚂o置100秒左右，溶液恢復(fù)原狀，無大塊絮狀物生成。
經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為3.5709±1.45518μm，D10為1.76423μm，D90為5.29389μm。附圖2為該空白離子化修飾明膠微凝膠的粒徑分布圖。所用儀器為Multisizer 3型顆粒粒度分布及顆粒計數(shù)儀，美國貝克曼-庫爾特公司公司生產(chǎn)。測定條件為20℃。
實施例2將含重量濃度5％的明膠溶液加熱至35℃，加入1％重量的抗腫瘤藥物鹽酸阿霉素攪拌均勻，再逐漸加入1.0mol·L-1的NaF溶液至F-終濃度為1％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為0.5％，加入0.5％重量的Tween-20，在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入異丙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理1min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下加入0.1％重量的交聯(lián)劑戊二醛，交聯(lián)反應(yīng)25分鐘后，加入0.1％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠的過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到阿霉素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。
阿霉素離子化修飾明膠納米凝膠粉末加入雙蒸水分散為為乳白色的膠體混懸液，在透射電子顯微鏡下觀察離子化修飾明膠納米凝膠呈球形且大小較均勻，如附圖3所示。將采集的圖象經(jīng)計算機圖象分析，求得離子化修飾明膠納米凝膠的平均粒徑為(46±12)nm。所用儀器為JEM-2000EX型透射電鏡，日本日立公司生產(chǎn)。經(jīng)高效液相質(zhì)譜測定和計算，載藥率及包裹率分別為0.091g/L和87.2％。該體系于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
未施加超聲波時，離子化修飾明膠納米凝膠的粒徑為40nm。而施加了超聲波后，約7-8min后，粒徑即增加到最大值(1100nm)左右。停止超聲3min左右，離子化修飾明膠納米凝膠的粒徑又基本恢復(fù)至40nm。說明該現(xiàn)象是可逆且可以連續(xù)進行的。圖4是實例2在超聲作用下平均粒徑的變化圖。測試條件超聲頻率為20kHz，能量密度為0.4w/Gm2。圖5是超聲前后離子化修飾明膠納米凝膠的釋藥特性，該體系在超聲施加后7-8min可以達到條件體積相變值最大。此時，藥物釋放量也最大，而停止超聲波3min后體系恢復(fù)原狀。所用儀器為Shimadzu LC-6A高效液相色譜儀，日本島津公司公司生產(chǎn)。色譜條件流動相為甲醇∶0.01mol·L-1磷酸二氫銨∶冰乙醇(7∶30∶0.5)，流速1.0ml·min-1，激發(fā)波長450nm，發(fā)射波長530nm，20℃。
實施例3將含重量濃度12％的明膠溶液加熱至50℃，加入2％重量的抗真菌類藥物兩性霉素攪拌均勻，再逐漸加入1.2mol·L-1的NaBr溶液至Br-終濃度為3％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為1％，加入1.0％重量的Tween-60，在在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為400轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的氯化鈉至溶液渾濁，再逐滴加入重量比1∶1的乙醇與異丙醇混合物至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理3min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為400轉(zhuǎn)/分下加入0.8％重量的交聯(lián)劑甘油醛，交聯(lián)反應(yīng)1小時后，加入0.4％重量交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌2小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到兩性霉素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。
經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為1.57±1.45μm，D10為1.06μm，D90為3.29389μm。載藥率及包裹率分別為0.082g/L和80.2％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例4將含重量濃度15％的明膠溶液加熱至55℃，加入4％重量的提高免疫力藥物α-干擾素攪拌均勻，再逐漸加入1.4mol·L-1的NaI溶液至I-終濃度為4％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為4％，加入1.2％重量的Tween-65，在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入異丙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理4min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為500轉(zhuǎn)/分下加入1.0％重量的交聯(lián)劑甘油醛，交聯(lián)反應(yīng)1小時20分鐘后，加入1％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到α-干擾素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為5.21±1.05μm，D10為2.06μm，D90為7.46μm。載藥率及包裹率分別為0.086g/L和82.4％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例5將含重量濃度20％的明膠溶液加熱至60℃，加入6％重量的抗凝血劑雙香豆素攪拌均勻，再逐漸加入1.0mol·L-1的NaI溶液至I-終濃度為5％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為5％，加入1.4％重量的Tween-80，在30℃磁力攪拌下，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％重量比1∶1的硫酸鈉和硫酸銨混合物至溶液渾濁，再逐滴加入異丙醇至溶液渾濁后再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理3min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下加入1.5％重量的交聯(lián)劑環(huán)氧乙烷，交聯(lián)反應(yīng)1小時40分鐘后，加入1.0％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到雙香豆素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為0.47±0.25μm，D10為0.16μm，D90為1.09μm。載藥率及包裹率分別為0.062g/L和75.4％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例6將含重量濃度15％的明膠溶液加熱至40℃，加入8％重量的抗病毒藥物金剛烷胺攪拌均勻，再逐漸加入1.5mol·L-1的NaBr溶液至Br-終濃度為3％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為2％，加入1.6％重量的Tween-85，在30℃水浴中磁力攪拌下，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的氯化鈉至溶液渾濁，再逐滴加入重量比1∶1的乙醇與異丙醇混合物至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理3min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下加入1.8％重量的交聯(lián)劑氧化葡聚糖，交聯(lián)反應(yīng)2小時后，加入0.4％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌2小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到金剛烷胺明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為0.26±0.07μm，D10為0.16μm，D90為0.59μm。載藥率及包裹率分別為0.068g/L和77.4％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例7將含重量濃度20％的明膠溶液加熱至35℃，加入10％重量的激素類藥物地塞米松攪拌均勻，再逐漸加入1.0mol·L-1的NaCl溶液至Cl-終濃度為2％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為2.5％，加入1.8％重量的Span-20，在35℃水浴中磁力攪拌，轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入乙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理2min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在35℃水浴中磁力攪拌，轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分下加入2％重量的交聯(lián)劑異氰酸酯，交聯(lián)反應(yīng)45分鐘后，加入0.2％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到地塞米松明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為2.42±0.34μm，D10為1.12μm，D90為6.09μm。載藥率及包裹率分別為0.092g/L和88.4％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例8將含重量濃度20％的明膠溶液加熱至55℃，加入10％重量的抗腫瘤藥物絲裂霉素攪拌均勻，再逐漸加入1.50mol·L-1的NaF溶液至F-終濃度為3％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為3.5％，加入0.8％重量的Span-40，，在30℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入乙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理2min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在35℃水浴中磁力攪拌，轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分下加入2.2％重量的交聯(lián)劑?；B氮化合物，交聯(lián)反應(yīng)1小時后，加入0.4％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到絲裂霉素明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為0.87±0.35μm，D10為0.36μm，D90為3.09μm。載藥率及包裹率分別為0.088g/L和79.1％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例9將含重量濃度12％的明膠溶液加熱至45℃，加入5％重量的基因治療藥物重組人P53腺病毒注射液攪拌均勻，再逐漸加入1.50mol·L-1的NaF溶液至F-終濃度為1.5％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為8％，加入2％重量的Span-60，在在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入乙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理2min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分下加入2.5％重量的交聯(lián)劑?；B氮化合物，交聯(lián)反應(yīng)1小時后，加入0.6％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到重組人P53腺病毒明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為0.13±0.03μm，D10為0.06μm，D90為0.39μm。載藥率及包裹率分別為0.042g/L和62.4％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例10將含重量濃度10％的明膠溶液加熱至55℃，加入4％重量的蛋白類藥物重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白攪拌均勻，再逐漸加入1.5mol·L-1的NaI溶液至I-終濃度為4％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為4.5％，加入1.2％重量的Span-80，在35℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為400轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸鈉至溶液渾濁，再逐滴加入異丙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理4min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在35℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為400轉(zhuǎn)/分下加入3％重量的交聯(lián)劑水溶性碳化二亞胺，交聯(lián)反應(yīng)1小時20分鐘后，加入0.8％重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為5.27±0.45μm，D10為2.16μm，D90為9.19μm。載藥率及包裹率分別為0.092g/L和78.6％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
實施例11將含重量濃度8％的明膠溶液加熱至45℃，加入4％重量的核酸藥物三鏈形成寡核甘酸攪拌均勻，再逐漸加入0.50mol·L-1的NaI溶液至I-終濃度為3％，加入雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠濃度為3％，加入1.2％重量的1∶1的Tween-80和Span-80的混合物，在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為500轉(zhuǎn)/分下逐滴加入重量濃度20％的硫酸銨至溶液渾濁，再逐滴加入異丙醇至溶液再變清。在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理2min(功率為75w，頻率20KHz)后，使之成為均勻的半透明的溶液。在40℃水浴中磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為500轉(zhuǎn)/分下加入1％重量的重量比為1∶1的水溶性碳化二亞胺和氧化葡聚糖的混合物，交聯(lián)反應(yīng)1小時后，加入1.0％的重量的交聯(lián)反應(yīng)終止劑焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠。將得到的離子化修飾的明膠微凝膠過Sephadax G-75柱，再冷凍干燥后輕輕粉碎得到三鏈形成寡核甘酸明膠氟離子化修飾微凝膠粉末。經(jīng)粒度分析儀測定，體系平均粒徑為0.87±0.21μm，D10為0.46μm，D90為3.11μm。載藥率及包裹率分別為0.070g/L和70.2％。該體系具有明顯的超聲控釋藥物的性質(zhì)，于4℃放置6個月后，外觀依然為均質(zhì)膠體混懸液，無分層和沉淀現(xiàn)象。電鏡觀察顆粒大小無變化，載藥率及包裹率也沒有明顯的變化。
本發(fā)明以上實施例并非構(gòu)成對本發(fā)明要求保護的技術(shù)方案的限制，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員按照其對本發(fā)明的理解所進行的發(fā)明要素的組合或者等同替換，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法，其特征是，包括下述步驟a.將含重量濃度5～20％的明膠溶液加熱至35～60℃，加入1％～10％重量的藥物攪拌均勻，再逐漸加入濃度為0.5～1.5mol·L-1鹵素鈉鹽溶液，至鹵素陰離子終重量濃度為1～5％，用雙蒸水調(diào)節(jié)溶液的體積使明膠溶液的重量濃度為0.5％～5％，再加入0.5～2％重量的表面活性劑；b.在35～60℃熱水浴中進行磁力攪拌，并逐滴加入重量濃度為20％的蛋白沉淀劑，至觀察到溶液混濁，再逐滴加入溶劑化劑至觀察到溶液恢復(fù)澄清；c.在0-5℃水溫條件下，用超聲波處理溶液1-4分鐘，使之成為均勻的半透明的溶液；d.在步驟b同樣的磁力攪拌條件下，加入0.1％～3％重量的交聯(lián)劑，進行交聯(lián)反應(yīng)；e.交聯(lián)反應(yīng)25分鐘～2小時后，加入0.1～1.0％重量的焦亞硫酸鈉，終止交聯(lián)反應(yīng)，繼續(xù)攪拌1～2小時，放入4℃的冰箱中靜置過夜，即得到載藥的離子化修飾明膠微凝膠；所述步驟a中的藥物包括抗生素類、抗菌素類、抗腫瘤類、抗病毒類、抗凝血劑、提高免疫力類、蛋白類、核酸類、激素類和基因類中的一種，其在水溶液中為親脂性或親水性的；所述表面活性劑包括吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-65、吐溫-80、吐溫-85、司盤-20、司盤-40、司盤-60和司盤-80中的一種或兩種以上的混合物所述步驟b中的蛋白沉淀劑為硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉中的一種，或者是其中兩種以上的混合物；所述步驟c中的溶劑化劑為乙醇、異丙醇中的一種或這兩種混合物；所述步驟d中的交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、甘油醛、環(huán)氧化物、氧化葡聚糖、異氰酸酯、?；B氮化合物和水溶性碳化二亞胺中的一種或者兩種以上混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法，其特征是，步驟b中所述的磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200～500轉(zhuǎn)/分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲控釋含藥明膠微凝膠的制備方法，其特征是，步驟c中所述的超聲波處理，超聲頻率為20KHz，功率為75w。
全文摘要
本發(fā)明針對現(xiàn)有非專門的超聲控釋載藥體系穩(wěn)定性差、載藥效率不高，超聲觸發(fā)釋藥量較低。且載體藥物釋放的不可逆性，公開了一種新的超聲波觸發(fā)釋藥體系—離子化修飾明膠微凝膠的制備工藝，包括下述工序?qū)⒁欢舛鹊拿髂z溶液加熱后載藥，加入鹵素鈉鹽溶液及表面活性劑對載藥明膠體系進行離子化修飾，然后進行磁力攪拌及超聲波處理、再加入交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應(yīng)，終止反應(yīng)后放入冰箱中靜置過夜，最后得到具有優(yōu)良超聲控釋性能的載藥明膠微凝膠制品。本發(fā)明方法制備的明膠微凝膠載藥體系在藥物新劑型方面有重要的應(yīng)用價值，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
文檔編號A61K9/00GK101020061SQ20071001746
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月6日
發(fā)明者吳道澄, 吳倩 申請人:西安交通大學(xué)