專利名稱：治療增殖性疾病或炎癥的3,11b-順式-二氫丁苯那嗪的制作方法
專利說明治療增殖性疾病或炎癥的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪 本發(fā)明涉及二氫丁苯那嗪在預(yù)防或治療炎性疾病和癌癥的藥物中的用途。

背景技術(shù)：
癌癥是對(duì)異常和不受控制的細(xì)胞生長為特征的一類疾病所給出的集合術(shù)語。正常地，只有當(dāng)身體需要時(shí)，細(xì)胞才生長并分裂，形成新的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞老化而死亡時(shí)，新細(xì)胞就會(huì)取代它們的位置。細(xì)胞內(nèi)的基因突變有時(shí)可破壞這種過程，這樣在身體并不需要的時(shí)候，新細(xì)胞形成，而應(yīng)死亡的舊細(xì)胞卻沒有死亡。這多余的細(xì)胞形成一團(tuán)組織，稱為生長、贅生物或腫瘤。腫瘤可以是或者良性(非癌性)的，或者惡性(癌性)的。良性腫瘤并不擴(kuò)散到身體的其它部分，因而它們極少危及生命，而惡性腫瘤可以擴(kuò)散(轉(zhuǎn)移)，因而可以是威脅生命的。癌癥起源于單個(gè)細(xì)胞內(nèi)，因而可以根據(jù)它們最初發(fā)生所在的細(xì)胞類型和根據(jù)細(xì)胞的部位進(jìn)行分類。因此，腺瘤起源于腺組織，癌癥起源于上皮細(xì)胞，白血病開始于骨髓干細(xì)胞，淋巴瘤起源于淋巴組織，黑素瘤發(fā)生于黑素細(xì)胞，肉瘤開始于骨或肌肉的結(jié)締組織，而畸胎瘤開始于胚細(xì)胞。
已有各種方法用于治療癌癥，最常見的方法為手術(shù)、化療或放療。一般來說，療法的選擇將取決于腫瘤的部位和分期以及疾病的階段。如果腫瘤是局限性的，手術(shù)往往是優(yōu)選的療法。常見外科手術(shù)的例子包括對(duì)前列腺癌的前列腺切除術(shù)和對(duì)乳腺癌的乳房切除術(shù)。手術(shù)的目的可以是或者僅切除腫瘤或者切除整個(gè)器官。由于單個(gè)癌細(xì)胞可生長成相當(dāng)大的腫瘤，僅切除腫瘤會(huì)導(dǎo)致更大機(jī)會(huì)的復(fù)發(fā)。化療包括用可破壞或預(yù)防癌細(xì)胞生長的藥物治療癌癥。癌癥化療采用的另一個(gè)機(jī)制包括抗-血管生成藥物(其起著破壞供應(yīng)腫瘤的血管的作用)和免疫治療劑(其起著增強(qiáng)宿主抑制腫瘤組織的免疫應(yīng)答的作用)。正常細(xì)胞以控制的方式生長和死亡。當(dāng)癌癥發(fā)生時(shí)，體內(nèi)的細(xì)胞不能正常地保持分裂而不受控制地形成更多的細(xì)胞。有一類抗癌藥物通過殺死分裂細(xì)胞或通過停止它們的生長或增值發(fā)揮作用。健康的細(xì)胞也將受到損害，尤其是那些快速分裂的細(xì)胞，這樣可導(dǎo)致副作用。放療包括使用電離輻射以殺死癌細(xì)胞和縮小腫瘤。放療通過破壞它們的遺傳物質(zhì)，使這些細(xì)胞不能繼續(xù)生長和分裂，損害或破壞待治療區(qū)域(“靶組織”)的細(xì)胞。雖然放射損害癌細(xì)胞和正常細(xì)胞，但大多數(shù)正常細(xì)胞可從放射的作用中恢復(fù)并發(fā)揮正常功能。放療的目的是盡可能破壞更多的癌細(xì)胞，同時(shí)限制對(duì)附近健康組織的損害。放療可用于治療幾乎每一種類型的實(shí)體瘤，包括腦、乳腺、子宮頸、喉、肺、胰、前列腺、皮膚、脊骨、胃、子宮的癌癥，或軟組織肉瘤。放射也可用于治療白血病和淋巴瘤(分別為血-形成細(xì)胞和淋巴系統(tǒng)的癌癥)。
已報(bào)道sigma(σ)受體的配體具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的能力(Berthois等，British Journal of Cancer(英國癌癥雜志)，(2003)，88，438-446)。Bourrie等(Current Opinion in Investigational Drugs，(2004)5(11)1158-63)也已報(bào)道兩個(gè)σ受體亞型及其兩個(gè)相關(guān)的蛋白也在腫瘤細(xì)胞上表達(dá)。
σ受體為細(xì)胞表面受體，其一度被認(rèn)為是阿片受體的亞型，但在對(duì)該受體進(jìn)行鑒定并發(fā)現(xiàn)對(duì)該受體的特異性配體后，目前已經(jīng)證實(shí)它們不同于阿片受體(見Bourrie等(2004))。
σ受體可以被分類為sigma-1(σ-1)和sigma-2(σ-2)亞型。σ-1受體被認(rèn)為含有223個(gè)氨基酸，目前已被克隆出來(Hanner等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(1996)938072-8077)，并且已發(fā)現(xiàn)它對(duì)任何其它受體類不表現(xiàn)出初級(jí)序列同源性。然而，它與真菌固醇C8-C7異構(gòu)酶的序列具有30.3％的同一性，并且發(fā)現(xiàn)與另一種未知的功能蛋白，SRBP2(SR-31747結(jié)合-蛋白2)相關(guān)，其與這種酶共享高度的同源性。σ-2受體尚未被克隆。
Wang等，Breast Cancer Research & Treatment(乳腺癌的研究和治療)，(2004)，87(3)205-14，檢查了σ-1受體在人乳腺癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與正常組織相比，σ-1受體mRNA在64％的乳腺癌中過度表達(dá)，由此他們得出結(jié)論，即一些正常的和大多數(shù)腫瘤的乳腺上皮細(xì)胞和細(xì)胞系通常表達(dá)σ-1受體。他們也發(fā)現(xiàn)高濃度的氟哌啶醇(一種非特異性σ-1配體)抑制這些細(xì)胞的生長并在體外增強(qiáng)化療的效果。
Berthois等，(2003)描述了其中測(cè)定σ受體配體SR31747A對(duì)人上皮乳腺和前列腺癌細(xì)胞系增值的作用的研究。他們報(bào)告納摩爾濃度的SR31747A在體外極大地抑制激素-響應(yīng)和激素-未響應(yīng)癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖。他們還發(fā)現(xiàn)在用SR31747A治療的小鼠中明顯降低腫瘤的發(fā)生。
Spruce等，Cancer Research(癌癥研究)，(2004)4875-4886，報(bào)告小分子σ-1受體拮抗劑在沒有副作用的情況下，抑制免疫受損小鼠中進(jìn)化的和確立的激素-敏感性和激素-非敏感性哺乳動(dòng)物癌異體移植物(xenographs)、常位前列腺腫瘤和p53-無(null)肺癌異體移植物的生長。他們發(fā)現(xiàn)σ-1拮抗劑在腫瘤細(xì)胞(但不在大多數(shù)正常細(xì)胞類型)中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡)。Spruce等得出結(jié)論，使用σ-1拮抗劑可令人信服地提供既殺死腫瘤而又盡量不傷害正常組織的方法。
使用σ-1受體配體抑制癌細(xì)胞的增值的其它報(bào)道可在Spruce等(2004)引用的參考文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)，例如見Brent等，Eur.J. Pharmacol.，(1995)，278151-60和Crawford等，Cancer Research(癌癥研究)，(2002)，62313-22。
因此，已充分證實(shí)σ受體配體可抑制癌細(xì)胞系的增值并可誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡，因而在這一證據(jù)的基礎(chǔ)上，構(gòu)思了σ受體配體如σ-1拮抗劑，其將證明可用于治療癌癥。
也報(bào)道σ受體配體具有抗炎活性。例如，Bourrie等，Eur.J.Pharmacol.，(2002)，456(1-3)123-31報(bào)告Sanofi-Synthelabo Recherche化合物SSR125329A(化學(xué)名[(Z)-3-(4-金剛烷-2-基-3，5-二氯-苯基)-烯丙基]-環(huán)己基-乙胺)為具有有效抗炎特性的高親和力σ受體配體。Bourrie等得出結(jié)論為他們的研究結(jié)果提供重要的證據(jù)，即σ受體配體可代表治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的新的有效途徑。
另一種Sanofiσ受體拮抗劑(SR31747)目前已處于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床試驗(yàn)中。
丁苯那嗪(化學(xué)名1，3，4，6，7，11b-六氫-9，10-二甲氧基-3-(2-甲丙基)-2H-苯并(a)喹嗪-2-酮)自二十世紀(jì)五十年代后期已作為藥物使用。丁苯那嗪最初作為抗精神病藥來開發(fā)，現(xiàn)在用于運(yùn)動(dòng)過度的運(yùn)動(dòng)失調(diào)例如亨廷頓氏病、偏側(cè)顫搐(hemiballismus)、老年性舞蹈病、抽搐、遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙和圖雷特氏綜合征的癥狀治療，參見例如Jankovic等，Am.J.Psychiatry.(1999)Aug；156(8)1279-81和Jankovic等，Neurology(1997)Feb；48(2)358-62。
丁苯那嗪的化學(xué)結(jié)構(gòu)在下

圖1中顯示。

圖1-丁苯那嗪的結(jié)構(gòu) 化合物在3和11b碳原子上具有手性中心，因此理論上可存在合計(jì)4種異構(gòu)形式，如圖2顯示。

圖2-可能的丁苯那嗪異構(gòu)體 在圖2中，用Cahn，Ingold和Prelog建立的“R和S”命名法定義每種異構(gòu)體的立體化學(xué)，該命名法參見Jerry March的Advanced OrganicChemistry(高級(jí)有機(jī)化學(xué))，第4版，John Wiley & Sons，New York，1992，109-114頁。在圖2和本專利申請(qǐng)的其它各處中，按照碳原子位置編號(hào)的順序給出“R”或“S”的指示。因此，例如，RS是3R，11bS的速記符號(hào)。類似地，當(dāng)出現(xiàn)3個(gè)手性中心時(shí)，如在下文描述的二氫丁苯那嗪中，按照碳原子2，3和11b的順序列出“R”或“S”的指示。因此2S，3R，11bR異構(gòu)體用速記形式表示為SRR等。
市場上可購買的丁苯那嗪是RR和SS異構(gòu)體的外消旋混合物，將顯示RR和SS異構(gòu)體(下文個(gè)別或全稱為反式丁苯那嗪，因?yàn)?和11b位氫原子具有反式的相對(duì)取向)是熱力學(xué)最穩(wěn)定的異構(gòu)體。
丁苯那嗪的生物利用度多少有些低并且多變。丁苯那嗪被首過代謝廣泛地代謝，通常在尿中很少或檢測(cè)不到無變化的丁苯那嗪。主要代謝產(chǎn)物是二氫丁苯那嗪(化學(xué)名2-羥基-3-(2-甲丙基)-1，3，4，6，7，11b-六氫-9，10-二甲氧基-苯并(a)喹嗪)，其通過還原丁苯那嗪中的2-酮基形成，相信主要負(fù)責(zé)藥物的活性(參見Mehvar等，Drug Metab.Disp，15，250-255(1987)和J.Pharm.Sci.，76，No.6，461-465(1987))。
目前已鑒定4種二氫丁苯那嗪異構(gòu)體并對(duì)其特征進(jìn)行了表征，它們?nèi)垦苌愿€(wěn)定的母體丁苯那嗪的RR和SS異構(gòu)體，在3和11b位氫原子之間具有反式相對(duì)取向)(參見Kilbourn等，Chirality，959-62(1997)和Brossi等，Helv.Chim.Acta.，vol.XLI，No.193，pp 1793-1806(1958)。4種異構(gòu)體是(+)-α-二氫丁苯那嗪、(-)-α-二氫丁苯那嗪、(+)-β-二氫丁苯那嗪和(-)-β-二氫丁苯那嗪。考慮4種已知的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)如圖3顯示。

圖3-已知的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的結(jié)構(gòu) Kilbourn等(參見Eur.J.Pharmacol.，278249-252(1995)和Med.Chem.Res.，5113-126(1994))研究了清醒大鼠腦內(nèi)個(gè)體放射性標(biāo)記的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的特異性結(jié)合。他們發(fā)現(xiàn)(+)-α-[11C]二氫丁苯那嗪(2R，3R，11bR)異構(gòu)體蓄積在與高濃度神經(jīng)元膜多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)和液泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VMAT2)有關(guān)的腦區(qū)。然而，基本上無活性的(-)-α-[11C]二氫丁苯那嗪異構(gòu)體幾乎均勻分布在腦內(nèi)，提示不存在對(duì)DAT和VMAT2的特異性結(jié)合。該體內(nèi)研究與證明(+)-α-[11C]二氫丁苯那嗪異構(gòu)體對(duì)[3H]甲氧基丁苯那嗪的Ki比對(duì)(-)-α-[11C]二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的Ki高＞2000倍的體外研究相關(guān)。
我們?cè)缦鹊膰H專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/GB2005/00464公開了衍生自不穩(wěn)定的丁苯那嗪RS和SR異構(gòu)體(下文個(gè)別或全稱為順式丁苯那嗪，因?yàn)?和11b位氫原子具有順式相對(duì)取向)的藥用二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的制備和用途。PCT/GB2005/00464包含顯示順式二氫丁苯那嗪異構(gòu)體結(jié)合于σ-1和σ-2受體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，但未公開使用σ受體結(jié)合活性的任何治療用途。
發(fā)明概述 本發(fā)明涉及我們?cè)缦鹊膰H專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/GB2005/000464中描述的順式二氫丁苯那嗪在治療炎性疾病和癌癥中的用途。
因此，第一方面，本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療增殖性疾病或炎性疾病的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述增殖性疾病為癌癥。
因此，本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療增殖性疾病如癌癥的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
本發(fā)明還提供 ·3，11b-順式-二氫丁苯那嗪在制備用于治療增殖性疾病如癌癥的藥物中的用途。
·順式-二氫丁苯那嗪在制備用于預(yù)防或治療因細(xì)胞異常生長引起的疾病或病癥(如癌癥)的藥物中的用途。
·治療哺乳動(dòng)物中包含細(xì)胞異常生長或由細(xì)胞異常生長引起的疾病或病癥(如癌癥)的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物有效治療量的順式-二氫丁苯那嗪。
·治療哺乳動(dòng)物中包含細(xì)胞異常生長或由細(xì)胞異常生長引起的疾病或病癥(如癌癥)的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物有效抑制細(xì)胞異常生長的量的順式-二氫丁苯那嗪。
·降低或減少哺乳動(dòng)物中包含細(xì)胞異常生長或由細(xì)胞異常生長引起的疾病或病癥(如癌癥)的發(fā)病率的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物有效抑制細(xì)胞異常生長的量的順式-二氫丁苯那嗪。
本發(fā)明化合物還被設(shè)計(jì)用于治療或預(yù)防選自以下的任何一種或多種癌癥 腺瘤； 癌瘤； 白血??； 淋巴瘤； 黑素瘤； 肉瘤；和 畸胎瘤。
可被抑制或治療的癌癥的具體實(shí)例包括，但不限于癌瘤例如膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌(如結(jié)腸直腸癌如結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)、腎癌、上皮癌、肝癌、肺癌如肺腺癌、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌如外分泌胰腺癌、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌或皮膚癌例如鱗狀細(xì)胞癌；淋巴系的造血性腫瘤，例如白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、T-細(xì)胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、毛細(xì)胞性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤；淋巴系的造血性腫瘤，例如急性和慢性骨髓性白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征或前髓細(xì)胞白血??；甲狀腺濾泡癌；間葉細(xì)胞源性瘤，例如纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤(habdomyosarcoma)；中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，例如星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或神經(jīng)鞘瘤；黑素瘤；精原細(xì)胞瘤；畸胎癌、骨肉瘤；著色性干皮病；角化棘皮瘤；甲狀腺濾泡癌；或卡波濟(jì)氏肉瘤。
更特別的是，可用順式-二氫丁苯那嗪治療或抑制的癌癥為對(duì)σ受體配體，例如σ-1拮抗劑敏感的那些癌癥。
可用順式-二氫丁苯那嗪治療或抑制的癌癥的其它實(shí)例為其中σ受體過度表達(dá)的那些癌癥。
在一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，所述癌癥是乳腺癌。
在另一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，所述癌癥是前列腺癌，例如同位性前列腺癌。
在還一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，所述癌癥是肺癌。
在另一個(gè)總的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療炎性疾病的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
本發(fā)明還提供 ·3，11b-順式-二氫丁苯那嗪在制備用于預(yù)防或治療炎性疾病的藥物中的用途。
·預(yù)防或治療患者(例如哺乳動(dòng)物如人)的炎性疾病或病癥的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物有效治療量的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
炎性疾病和病癥的實(shí)例包括，但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)疹性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎疾?。患毙曰蚵匝仔约膊顟B(tài)如由內(nèi)毒素或炎性腸道疾病誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)；Reiter’s綜合征、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性脊椎炎、慢性肺炎性疾病，克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。
特別的炎性疾病和病癥為對(duì)σ受體配體，例如σ受體拮抗劑敏感的那些疾病。
一種特別的炎性疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
用于本發(fā)明的順式-二氫丁苯那嗪是3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
用于本發(fā)明的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪可以是基本上純形式的，例如異構(gòu)純度大于90％，通常大于95％，且更優(yōu)選大于98％。
術(shù)語“異構(gòu)純度”在本文是指3，11b-順式-二氫丁苯那嗪相對(duì)于所有異構(gòu)形式的二氫丁苯那嗪的總量或濃度所占的量。例如，如果組合物中90％的總的二氫丁苯那嗪是3，11b-順式-二氫丁苯那嗪，那么異構(gòu)純度是90％。
用于本發(fā)明的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪可以是基本上不含3，11b-反式-二氫丁苯那嗪的組合物顯示，優(yōu)選其含少于5％的3，11b-反式-二氫丁苯那嗪，更優(yōu)選少于3％的3，11b-反式-二氫丁苯那嗪，且最優(yōu)選少于1％的3，11b-反式-二氫丁苯那嗪。
在此所用的術(shù)語“3，11b-順式-”是指二氫丁苯那嗪結(jié)構(gòu)中3-和11b-位氫原子處于順式相對(duì)取向。因此本發(fā)明的異構(gòu)體是式(I)化合物及其對(duì)映體(鏡像)。

具有3，11b-順式構(gòu)型的二氫丁苯那嗪有4種可能的異構(gòu)體，它們是2S，3S，11bR異構(gòu)體、2R，3R，11bS異構(gòu)體、2R，3S，11bR異構(gòu)體和2S，3R，11bS異構(gòu)體。本發(fā)明已分離和鑒定4種異構(gòu)體，且另一方面提供3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的個(gè)體異構(gòu)體。特別是，本發(fā)明提供 (a)具有式(Ia)的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的2S，3S，11bR異構(gòu)體
(b)具有式(Ib)的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的2R，3R，11bS異構(gòu)體
(c)具有式(Ic)的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的2R，3S，11bR異構(gòu)體
和 (d)具有式(Id)的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的2S，3R，11bS異構(gòu)體
本發(fā)明的各異構(gòu)體的特征在于它們的光譜、光學(xué)和色譜性能，也在于它們的經(jīng)X-射線結(jié)晶學(xué)測(cè)定的絕對(duì)立體化學(xué)構(gòu)型。
不意味著任何具體的絕對(duì)構(gòu)型或立體化學(xué)，4種新異構(gòu)體的特征可以如下 異構(gòu)體A ORD(甲醇，21℃)測(cè)量的旋光性；左旋(-)IR光譜(KBr固體)，1H-NMR光譜(CDCl3)和13C-NMR光譜(CDCl3)基本上如表1中描述。
異構(gòu)體B ORD(甲醇，21℃)測(cè)量的旋光性；右旋(+)IR光譜(KBr固體)，1H-NMR光譜(CDCl3)和13C-NMR光譜(CDCl3)基本上如表1中描述，X-射線結(jié)晶學(xué)特征如實(shí)施例4中所述。
異構(gòu)體C ORD(甲醇，21℃)測(cè)量的旋光性；右旋(+)IR光譜(KBr固體)，1H-NMR光譜(CDCl3)和13C-NMR光譜(CDCl3)基本上如表2中描述。
異構(gòu)體D ORD(甲醇，21℃)測(cè)量的旋光性；左旋(-)IR光譜(KBr固體)，1H-NMR光譜(CDCl3)和13C-NMR光譜(CDCl3)基本上如表2描述。
每種異構(gòu)體的ORD值在以下實(shí)施例中給出，但注意這樣的值是通過實(shí)施例給出，并可根據(jù)異構(gòu)體的純度及受其它變量例如溫度波動(dòng)和殘留溶劑分子作用的影響而改變。
對(duì)映體A、B、C和D可各自以基本上對(duì)映體的純的形式或作為本發(fā)明其它對(duì)映體的混合物存在。
術(shù)語“對(duì)映體純度”和“對(duì)映體純”在本文是指給定的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪對(duì)映體相對(duì)于全部對(duì)映體和異構(gòu)體形式的二氫丁苯那嗪總量或濃度占的量。例如，如果組合物中90％的總二氫丁苯那嗪以單一對(duì)映體形式存在，那么對(duì)映體純度是90％。
通過實(shí)施例，在本發(fā)明各方面和每個(gè)實(shí)施方案中，每種選自異構(gòu)體A、B、C和D的單一對(duì)映體可以以至少55％(例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、99.5％或100％)的對(duì)映體純度存在。
本發(fā)明的異構(gòu)體也可以以一種或多種異構(gòu)體A、B、C和D的混合物形式存在。這樣的混合物可以是外消旋混合物或非外消旋混合物。外消旋混合物的實(shí)例包括異構(gòu)體A和異構(gòu)體B的外消旋混合物以及異構(gòu)體C和異構(gòu)體D的外消旋混合物。
藥學(xué)上可接受的鹽 除非上下文需要，否則在本申請(qǐng)中涉及二氫丁苯那嗪及其異構(gòu)體時(shí)，包括在其范圍內(nèi)的不僅包括二氫丁苯那嗪的游離堿，還包括其鹽，特別是酸加成鹽。
形成酸加成鹽的具體酸包括pKa值小于3.5且更通常小于3的酸。例如，可由pKa范圍從+3.5至-3.5的酸形成酸加成鹽。
優(yōu)選的酸加成鹽包括那些用磺酸例如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和萘磺酸形成的那些酸加成鹽。
可形成酸加成鹽的一種特殊酸是甲磺酸。
可通過本文描述的方法或常規(guī)化學(xué)方法(例如描述于Pharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use(藥用鹽特性、選擇和用途)，P.Heinrich Stahl(編輯)，Camille G.Wermuth(編輯)，ISBN3-90639-026-8，Hardcover，388頁，2002年8月中的方法)制備酸加成鹽。通常，可通過使化合物的游離堿形式與適當(dāng)?shù)膲A或酸在水或有機(jī)溶劑或兩者的混合物中反應(yīng)制備這樣的鹽；通常，用非水介質(zhì)例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。
鹽通常是藥學(xué)上可接受的鹽。然而，藥學(xué)上不可接受的鹽也可制備成中間體形式，其可隨后轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽。這樣的非藥學(xué)上可接受的鹽形式也形成本發(fā)明的一部分。
制備二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的方法 本發(fā)明的二氫丁苯那嗪可通過以下方法制備，該方法包括使式(II)化合物
與一種或多種適合使式(II)化合物中2，3-雙鍵水合的試劑反應(yīng)，隨后在需要時(shí)分離和分離需要的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體形式。
可用硼烷試劑例如二硼烷或硼烷-醚(例如硼烷-四氫呋喃(THF))，通過硼氫化作用使2，3-雙鍵水合，得到中間體烷基硼烷加合物，接著使烷基硼烷加合物氧化并在堿存在下水解。硼氫化作用通常在干燥極性非質(zhì)子溶劑例如醚(例如THF)中、通常在不提高的溫度例如室溫下進(jìn)行。通常用氧化劑例如過氧化氫在堿存在下，使硼烷-烯烴加合物氧化，提供氫氧化物離子例如氫氧化銨或堿金屬氫氧化物例如氫氧化鉀或氫氧化鈉。通常方法A的硼氫化-氧化-水解反應(yīng)順序提供二氫丁苯那嗪異構(gòu)體，其中2-和3-位氫原子具有反式相對(duì)取向。
可通過還原丁苯那嗪得到二氫丁苯那嗪，然后使二氫丁苯那嗪脫水制備式(II)化合物?？捎脷浠X試劑例如氫化鋁鋰，或氫硼化物試劑例如氫硼化鈉、氫硼化鉀，或氫硼化物衍生物例如烷基氫硼化物(例如三-仲-丁基氫硼化鋰)還原丁苯那嗪?；蛘?，可采用催化氫化作用例如經(jīng)過蘭氏鎳或氧化鉑催化劑進(jìn)行還原步驟。進(jìn)行還原步驟的合適條件在下文有更詳細(xì)的描述，或可在美國2,843,591(Hoffmann-La Roche)和Brossi等，Helv.Chim.Acta.，XLI卷，193期，ppl 793-1806(1958)中發(fā)現(xiàn)。
因?yàn)橛米鬟€原反應(yīng)的起始材料的丁苯那嗪通常是RR和SS異構(gòu)體(即反式-丁苯那嗪)的混合物，所以由還原步驟形成的二氫丁苯那嗪將在3-和11b位具有相同反式構(gòu)型，并將采取一種或多種已知的在上文圖3中所示的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體形式。因此方法A可包括采用已知的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體、使它們脫水形成烯烴(II)，然后用產(chǎn)生需要的本發(fā)明新的順式二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的條件使烯烴(II)“再脫水”。
可用將醇脫水形成烯烴的多種標(biāo)準(zhǔn)條件將二氫丁苯那嗪脫水為烯烴(II)，參見例如J.March(同前)389-390頁及其中的參考文獻(xiàn)。這樣的條件的實(shí)例包括用以磷為基礎(chǔ)的脫水劑例如鹵化磷或鹵氧化磷(phosphorus oxyhalides)，例如POCl3和PCl5。作為直接脫水的替代，可將二氫丁苯那嗪的羥基轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)L例如鹵素(例如氯或溴)，然后經(jīng)歷除去H-L的條件(例如在堿存在下)?？捎没瘜W(xué)技術(shù)人員熟知的方法將羥基轉(zhuǎn)化為鹵化物，例如通過與四氯化碳或四溴化碳在三烷基或三芳基膦例如三苯基膦或三丁基膦存在下反應(yīng)。
用作還原反應(yīng)的起始材料得到二氫丁苯那嗪的丁苯那嗪可從市場上購買或通過描述于美國2,830,993(Hoffmann-La Roche)的方法合成。
用于制備本發(fā)明的二氫丁苯那嗪的另一種方法(方法B)包括使式(III)化合物
經(jīng)歷將式(III)化合物中的2，3-環(huán)氧化物基團(tuán)的環(huán)打開的條件，隨后在需要時(shí)分離和分離需要的二氫丁苯那嗪異構(gòu)體形式。
可根據(jù)用于打開過氧化物環(huán)的已知方法完成開環(huán)。然而，目前打開過氧化物環(huán)的優(yōu)選方法是還原性開環(huán)，其可用還原劑例如硼烷-THF完成。通常在環(huán)境溫度下，在極性非質(zhì)子溶劑例如乙醚(例如四氫呋喃)中進(jìn)行與硼烷-THF的反應(yīng)，接著將由此形成的硼烷復(fù)合物在水和堿存在下，在溶劑的回流溫度中加熱水解。通常方法B產(chǎn)生二氫丁苯那嗪異構(gòu)體，其中在2-和3-位的氫原子具有順式相對(duì)取向。
可通過上文式(II)烯烴的環(huán)氧化作用制備式(III)的環(huán)氧化物化合物?？捎没瘜W(xué)技術(shù)人員熟知的條件和試劑進(jìn)行環(huán)氧化反應(yīng)，參見例如J.March(同前)，826-829頁及其中的參考文獻(xiàn)。通常，可用過酸例如間氯過苯甲酸(MCPBA)或過酸與其它氧化劑例如過氯酸的混合物產(chǎn)生環(huán)氧化作用。
當(dāng)上文方法A和B的起始材料是對(duì)映體混合物時(shí)，該方法的產(chǎn)物將通常是成對(duì)對(duì)映體，例如外消旋混合物，可能夾雜非對(duì)映異構(gòu)體雜質(zhì)?？赏ㄟ^技術(shù)例如層析(例如HPLC)除去不需要的非對(duì)映異構(gòu)體并且可通過化學(xué)技術(shù)人員已知的多種方法分離各對(duì)映體。例如，它們可通過以下途徑分離 (i)手性層析(在手性載體上的層析)；或 (ii)與光學(xué)純的手性酸形成鹽，通過分級(jí)結(jié)晶分離兩種非對(duì)映異構(gòu)體的鹽，然后從鹽中釋放二氫丁苯那嗪；或 (iii)與光學(xué)純的手性衍化劑(derivatising)(例如酯化劑)形成衍生物(例如酯)，分離生成的差向異構(gòu)體(例如通過層析)，然后將衍生物轉(zhuǎn)化為二氫丁苯那嗪。
一種分離從方法A和B各自獲得的成對(duì)對(duì)映體的方法(已發(fā)現(xiàn)其特別有效)是用旋光活性形式的Mosher’s酸(例如以下顯示的R(+)異構(gòu)體)或其活性形式使二氫丁苯那嗪的羥基酯化
然后可通過層析(例如HPLC)分離生成的二氫丁苯那嗪的兩種對(duì)映體的酯，然后在極性溶劑例如甲醇中用堿例如堿金屬氫氧化物(例如NaOH)水解分離的酯，得到各二氫丁苯那嗪(dihydrobenazine)異構(gòu)體。
作為將對(duì)映體混合物用作方法A和B中的起始材料，然后分離對(duì)映體的替代方法，可用單一對(duì)映體起始材料分別進(jìn)行方法A和B，得到其中以單一對(duì)映體為主的產(chǎn)物?？扇缦轮苽湎N(II)的單一對(duì)映體用三-仲-丁基氫硼化鋰使RR/SS丁苯那嗪經(jīng)歷立體選擇還原反應(yīng)，得到二氫丁苯那嗪的SRR和RSS對(duì)映體混合物，分離對(duì)映體(例如通過分級(jí)結(jié)晶)，然后使分離的二氫丁苯那嗪的單一對(duì)映體脫水，得到絕大部分的或唯一的式(II)化合物的單一對(duì)映體。
方法A和B在方案1和2中各自有更詳細(xì)的說明。
方案1
方案1說明具有2S，3S，11bR和2R，3R，11bS構(gòu)型的各二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的制備，其中連接2-和3-位的氫原子以反式相對(duì)取向排列。該反應(yīng)方案包括上文定義的方法A。
方案1中反應(yīng)順序的起點(diǎn)是購自市場的丁苯那嗪(IV)，其是丁苯那嗪的RR和SS旋光異構(gòu)體的外消旋混合物。在每種RR和SS異構(gòu)體中，3-和11b-位的氫原子都是以反式相對(duì)取向排列。作為使用可市售獲得的化合物的代替，可根據(jù)描述于美國專利號(hào)2,830,993(具體參見實(shí)施例11)的步驟合成丁苯那嗪。
用氫硼化物還原劑三-仲-丁基氫硼化鋰(“L-Selectride”)還原RR和SS丁苯那嗪的外消旋混合物得到已知的二氫丁苯那嗪2S，3R，11bR和2R，3S，11bS異構(gòu)體(V)，其中為簡化只顯示了2S，3R，11bR異構(gòu)體。通過用更多立體要求的L-Selectride作為氫硼化物還原劑代替氫硼化鈉，使二氫丁苯那嗪的RRR和SSS異構(gòu)體的形成降至最低或受抑制。
使二氫丁苯那嗪異構(gòu)體(V)與脫水劑例如五氯化磷在非質(zhì)子溶劑例如氯化烴(例如氯仿或二氯甲烷，優(yōu)選二氯甲烷)中反應(yīng)，形成不飽和化合物(II)，為成對(duì)對(duì)映體，在方案中只顯示R-對(duì)映體。脫水反應(yīng)通常在低于室溫的溫度例如在約0-5℃進(jìn)行。
然后將不飽和化合物(II)經(jīng)歷立體選擇性再水合，得到二氫丁苯那嗪(VI)及其鏡像或?qū)τ丑w(未顯示)，其中3-和11b-位氫原子以順式相對(duì)取向排列，且2-和3-位氫原子以反式相對(duì)取向排列。立體選擇性再水合作用通過用硼烷-THF在四氫呋喃(THF)中的氫硼化步驟完成，形成中間體硼烷復(fù)合物(未顯示)，然后在堿例如氫氧化鈉存在下用過氧化氫氧化。
然后可進(jìn)行最初的純化步驟(例如通過HPLC)，得到再水合反應(yīng)順序的產(chǎn)物(V)，為2S，3S，11bR和2R，3R，11bS異構(gòu)體混合物，其中方案只顯示2S，3S，11bR異構(gòu)體。為分離異構(gòu)體，在二氯甲烷中，在草酰氯和二甲氨基吡啶(DMAP)存在下用R(+)Mosher’s酸處理混合物，得到一對(duì)非對(duì)映異構(gòu)酯(VII)(其中只顯示一種非對(duì)映異構(gòu)體)，其接著可用HPLC分離。然后用堿金屬氫氧化物例如氫氧化鈉水解各種酯，得到單一異構(gòu)體(VI)。
在方案1顯示的步驟順序的變化中，RR/SS丁苯那嗪還原后，可分離生成的二氫丁苯那嗪的對(duì)映體混合物(V)，得到各對(duì)映體。可通過用手性酸例如(+)或(-)樟腦磺酸形成鹽進(jìn)行分離，通過分級(jí)結(jié)晶分離生成的非對(duì)映體，得到單一對(duì)映體的鹽，然后從鹽中釋放游離堿。
可將分離的二氫丁苯那嗪對(duì)映體脫水得到烯烴(II)的單一對(duì)映體。然后將烯烴(II)再水合得到絕大部分的或唯一的順式-二氫丁苯那嗪(VI)的單一對(duì)映體。這種變化的優(yōu)點(diǎn)是不涉及Mosher’s酸酯的形成，從而避免通常用于分離Mosher’s酸酯的層析分離。
方案2說明具有2R，3S，11bR和2S，3R，11bS構(gòu)型的各個(gè)二氫丁苯那嗪異構(gòu)體的制備，其中連接于2-和3-位的氫原子以順式相對(duì)取向排列。該反應(yīng)方案包括上文定義的方法B。
方案2
在方案2中，通過還原丁苯那嗪得到二氫丁苯那嗪的2S，3R，11bR和2R，3S，11bS異構(gòu)體(V)并按上文方案1描述的方法用PCl5脫水產(chǎn)生不飽和化合物(II)。然而，代替化合物(II)經(jīng)歷氫硼化作用的是，通過與間氯過苯甲酸(MCPBA)和過氯酸反應(yīng)將2，3-雙鍵轉(zhuǎn)化為環(huán)氧化物。通常在約室溫下，在醇溶劑例如甲醇中很方便進(jìn)行環(huán)氧化反應(yīng)。
然后用硼烷-THF作為親電子還原劑使環(huán)氧化物(VII)經(jīng)歷還原性開環(huán)，得到中間體硼烷復(fù)合物(未顯示)，然后在堿例如氫氧化鈉存在下將其用過氧化氫氧化和裂解，得到二氫丁苯那嗪(VIII)的2R，3S，11bR和2S，3R，11bS異構(gòu)體混合物，為簡化其中只顯示2R，3S，11bR。在二氯甲烷中，在草酰氯和二甲氨基吡啶(DMAP)存在下，用R(+)Mosher’s酸處理異構(gòu)體(VIII)混合物，得到一對(duì)差向異構(gòu)體酯(IX)(其中只顯示一種差向異構(gòu)體)，然后可通過層析分離并按上文描述與方案1有關(guān)的方法將其在甲醇中用氫氧化鈉水解。
生物學(xué)特性 本發(fā)明的順式二氫丁苯那嗪化合物結(jié)合于σ-1和σ-2受體，如在以下實(shí)施例中所述。順式二氫丁苯那嗪的四種異構(gòu)體作為對(duì)σ-2受體的配體是大致等效的，但異構(gòu)體B和D比異構(gòu)體A和C更強(qiáng)烈地結(jié)合于σ-1受體。
基于它們的σ受體結(jié)合活性，本發(fā)明的順式二氫丁苯那嗪化合物被設(shè)計(jì)用于抑制或預(yù)防腫瘤細(xì)胞的增值。
本發(fā)明化合物抑制或預(yù)防腫瘤細(xì)胞的增值的能力可通過例如在以下實(shí)施例6中所述方法或采用Spruce等，Cancer Research(癌癥研究)，(2004)，644875-4886中所述方法測(cè)試所述化合物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞系的抑制來測(cè)定。
除了對(duì)細(xì)胞系的體外研究，本發(fā)明化合物也可例如如在Spruce等，(2004)，487頁中所述，在免疫-受損小鼠中的人腫瘤異體移植(xenographs)體內(nèi)測(cè)試。
還設(shè)計(jì)了作為活性抗炎藥的本發(fā)明化合物。所述化合物的抗炎活性可用技術(shù)人員熟知的各種方法測(cè)定。
本發(fā)明化合物治療關(guān)節(jié)炎的能力可通過以下試驗(yàn)測(cè)定和模型的任何一種或多種證實(shí) (i)如Kakimoto等.，Cell Immunol.142326-327，1992描述的小鼠膠原質(zhì)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
(ii)如Knoerzer等.，Toxicol Pathol.2513-19，1997描述的大鼠膠原質(zhì)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
(iii)如Halloran等.，Arthritis Rheum.39810-819，1996描述的佐劑大鼠關(guān)節(jié)炎模型。
(iv)如Schimmer等.，J.Immunol.1601466-1477，1998描述的大鼠鏈球菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
(v)如Oppenheimer Marks等.，J.Clin.Invest.1011261-1272，1998描述的SCID-小鼠人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型。
本發(fā)明化合物治療炎性肺損傷的能力可通過以下測(cè)定和試驗(yàn)?zāi)Ｐ妥C實(shí) (vi)如Wegner等.，Lung 170267-279，1992描述的氧誘導(dǎo)的小鼠肺損傷模型。
(vii)如Mulligan等.，J.Immunol.1541350-1363，1995描述的小鼠免疫復(fù)合物誘導(dǎo)的肺損傷模型。
(viii)如Nagase等.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.154504-510，1996描述的酸誘導(dǎo)的小鼠肺損傷模型。
本發(fā)明化合物治療炎性腸道疾病的能力可在Bennet等.，J.Pharmacol.Exp.280988-1000，1997描述的化學(xué)誘導(dǎo)的兔結(jié)腸炎模型中證實(shí)。
本發(fā)明化合物治療炎性肝損傷的能力可在Tanaka等.，J.Immunol.1515088-5095，1993描述的小鼠肝損傷模型證實(shí)。
本發(fā)明化合物治療炎性腎小球損傷的能力可在Kawasaki等.，J.Immunol.1501074-1083，1993描述的大鼠腎毒性血清腎炎模型中證實(shí)。
本發(fā)明化合物的抗炎活性也為其減少前炎性細(xì)胞因子的生成和抑制T-細(xì)胞增值的能力證實(shí)，如在以下實(shí)施例中所述。
藥用制劑 二氫丁苯那嗪化合物通常以藥用組合物的形式提供。
藥用組合物可采用任何適合口服、胃腸外、局部、鼻內(nèi)、支氣管內(nèi)、眼、耳、直腸、陰道內(nèi)或經(jīng)皮給藥的形式。當(dāng)預(yù)期將組合物胃腸外給藥時(shí)，可將它們配制用于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下給藥或通過注射、灌注或其它釋放途徑直接釋放至靶器官或組織。
適合口服給藥的藥用劑型包括片劑、膠囊、扁囊、丸劑、錠劑、糖漿劑、溶液、噴霧劑、粉劑、粒劑、酏劑和混懸劑、舌下含片、噴霧劑、糯米紙囊劑或貼劑和口腔貼劑。
可根據(jù)已知的技術(shù)配制含本發(fā)明的二氫丁苯那嗪化合物的藥用組合物，參見例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Company，Easton，PA，USA。
因此，片劑組合物可包含單位劑量的活性化合物以及惰性稀釋劑或載體，例如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇；和/或非糖衍生的稀釋劑例如碳酸鈉、磷酸鈣、滑石、碳酸鈣，或纖維素或其衍生物例如甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素，和淀粉例如玉米淀粉。片劑也可包含這樣的標(biāo)準(zhǔn)成分作為粘合和制粒劑例如聚乙烯吡咯烷酮、崩解劑(例如可膨脹的交聯(lián)聚合物例如交聯(lián)羧甲基纖維素)、潤滑劑(例如硬脂酸酯)、防腐劑(例如對(duì)羥苯甲酸酯)、抗氧化劑(例如BHT)、緩沖劑(例如磷酸鹽或枸櫞酸鹽緩沖液)和發(fā)泡劑例如枸櫞酸鹽/碳酸氫鹽混合物。這樣的賦形劑已眾所周知，在此不需要詳細(xì)討論。
膠囊制劑可以是硬膠囊或軟膠囊種類，并可包含固體、半固體或液體形式的活性成分。明膠膠囊可用動(dòng)物明膠或其合成的或植物衍生的同等物形成。
雖然固體劑型(例如片劑、膠囊等)可被包衣或不包衣，但通常具有包衣，例如保護(hù)性薄膜包衣(例如蠟或清漆)或釋放控制包衣?？蓪?例如EudragitTM型聚合物)設(shè)計(jì)在胃腸道內(nèi)需要的位置釋放活性成分。因此，可選擇包衣以便在胃腸道內(nèi)某個(gè)pH條件下降解，從而在胃或回腸或十二指腸內(nèi)選擇性釋放化合物。
代替包衣或除包衣之外，可使藥物存在于固體基質(zhì)中，該基質(zhì)含釋放控制劑，例如可適合在胃腸道內(nèi)變化的酸堿度條件下選擇性釋放化合物的釋放延緩劑?；蛘?，基質(zhì)材料或釋放延緩包衣可采用易蝕聚合物(例如馬來酸酐聚合物)的形式，該形式在劑型通過胃腸道時(shí)基本上是被連續(xù)腐蝕的。
局部使用的組合物包括軟膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、貼劑、凝膠劑、液體滴劑和插入物(例如眼內(nèi)插入物)?？筛鶕?jù)已知的方法配制這樣的組合物。
胃腸外給藥的組合物通常是無菌水或油溶液或精制的懸浮液，或可提供為精細(xì)分散的無菌粉末形式，與無菌水臨時(shí)配制用于注射。
直腸或陰道內(nèi)給藥制劑的實(shí)例包括陰道栓劑或栓劑，其可用例如含活性化合物的外觀可塑的或蠟質(zhì)材料形成。
吸入給藥的組合物可采用可吸入粉末組合物或液體或粉末噴霧劑的形式，并可用粉末吸入裝置或氣溶膠分散裝置以標(biāo)準(zhǔn)形式給藥。這樣的裝置時(shí)眾所周知的。對(duì)于吸入給藥，粉末狀制劑通常包含活性化合物和惰性固體粉末狀稀釋劑例如乳糖。
通常本發(fā)明化合物將以單位劑型存在，這樣將通常包含足夠的化合物以提供需要水平的生物活性。例如，預(yù)期口服給藥的制劑可包含從2毫克至200毫克活性成分，更通常從10毫克至100毫克，例如12.5毫克、25毫克和50毫克。
活性化合物將以足夠獲得需要的治療效應(yīng)的量被給藥于有需要的患者(例如人或動(dòng)物患者)。
需要這樣的給藥的患者通常為患有如上定義的增殖性疾病如癌癥或炎性疾病或有患所述疾病風(fēng)險(xiǎn)的患者。
本發(fā)明化合物通常以治療或預(yù)防有效的且一般無毒的量給予。然而，在某些情況下，特別是在癌癥治療的情況下，給予本發(fā)明的二氫丁苯那嗪化合物的益處可超過任何毒性作用或副作用的不利之處，在這種情況下，可能需要考慮給予與毒性程度有關(guān)的量的化合物。
所述化合物的典型日劑量可高達(dá)每日1000mg，例如在每千克體重0.01mg至10mg的范圍內(nèi)，更通常在每千克體重0.025mg至5mg的范圍內(nèi)，例如高達(dá)每千克體重3mg，且更通常為在每千克體重0.15mg至5mg，雖然在需要時(shí)可給予更高或更低的劑量。
為治療癌癥，式(I)化合物可作為單獨(dú)的治療劑給予或可在聯(lián)合療法中與一種或多種用于治療特定疾病狀態(tài)(例如如上定義的癌癥)的其它化合物一起給予。可與式(I)化合物一起(無論是同時(shí)或在不同的時(shí)間間隔)使用或給予的其它治療劑和方法的實(shí)例包括，但不限于 ·拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(例如喜樹堿化合物如托泊替堪(Hycamtin)、依立替康和CPT 11(Camptosar))， ·抗代謝藥(例如抗腫瘤核苷類如5-氟尿嘧啶、吉西他濱(Gemzar)、雷替曲塞(Tomudex)、卡培他濱(Xeloda)、培美曲塞(Alimta)、阿糖胞苷或胞嘧啶阿拉伯糖苷或阿拉伯糖苷胞嘧啶[AraC](Cytosar

)、甲氨蝶呤(Matrex)、氟達(dá)拉濱(Fludara)和替加氟。
·微管蛋白靶向劑(例如，長春花生物堿、長春堿和紫杉烷化合物如長春新堿(Oncovin)、長春瑞濱(Navelbine)、長春堿(Velbe)、紫杉醇(Taxol)和多西他賽(Taxotere))。
·DNA結(jié)合劑和拓?fù)洚悩?gòu)酶(topo)II抑制劑(例如鬼臼毒素衍生物和蒽環(huán)霉素衍生物如依托泊苷(Eposin，Etophos，Vepesid，VP-16)、替尼泊苷(Vumon)、柔紅霉素(Cerubidine，DaunoXome)、表柔比星(Pharmorubicin)、多柔比星(Adriamycin；Doxil；Rubex)、伊達(dá)比星(Zavedos)、聚乙二醇化脂質(zhì)體多柔比星鹽酸鹽(Caeylx)、脂質(zhì)體包囊的多柔比星檸檬酸鹽(Myocet)、米托蒽醌(Novatrone，Onkotrone))。
·烷化劑((例如氮芥或亞硝基脲烷化劑和吖丙啶如環(huán)磷酰胺(Endoxana)、美法侖(Alkeran)、苯丁酸氮芥(Leukeran)、白消安(Myleran)、亞硝脲氮芥(BiCNU)、洛莫司汀(CCNU)、異環(huán)磷酰胺(Mitoxana)、絲裂霉素(Mitomycin C Kyoma))。
·烷化劑(例如鉑化合物如順鉑、卡鉑(順二氨環(huán)丁烷鉑)和奧沙利鉑(Eloxatin))。
·單克隆抗體(例如EGF家族及其受體和VEGF家族及其受體，更特別是曲妥單抗(Herceptin)、西妥昔單抗(Erbitux)、利妥昔單抗(Mabthera)、托西莫單抗(Bexxar)、吉姆單抗、奧佐米星(Mylotarg)和貝伐單抗(Avastin))。
·抗激素藥(例如抗雄激素劑包括抗雌激素劑(如芳香酶抑制劑)如他莫昔芬(Nolvadex D，Soltamox，Tamofen)、氟維司群(Faslodex)、雷洛昔芬(Evista)、托瑞米芬(Fareston)、屈洛昔芬、來曲唑(Femara)、阿那曲唑(Arimidex)、依西美坦(Aromasin)、伏氯唑(Rivizor)、比卡魯胺(Casodex，Cosudex)、luprolide(Zoladex)、乙酸美格列奈(Megace)、氨魯米特(Cytadren)和貝沙羅汀(Targretin))。
·信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑(例如吉非替尼(Iressa)、伊馬替尼(Gleevec)、埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva)和塞來考昔(Celebrex))。
·蛋白酶體抑制劑如bortezimib(Velcade)。
·DNA甲基轉(zhuǎn)移酶如替莫唑胺(Temodar)。
·細(xì)胞因子和視黃醛衍生物如干擾素α(IntronA，Roferon-A)、白介素2(Aldesleukin，Proleukin)和全反式-視黃酸[ATRA]或維A酸(Vesanoid) ·放療。
當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療劑或治療方法一起用于聯(lián)合療法中時(shí)，兩種或更多種治療劑可以以不同的劑量方案和通過不同的途徑分別給予。
當(dāng)本發(fā)明化合物與一種或多種其它治療劑聯(lián)合給予時(shí)，所述化合物可以同時(shí)或順序給予。當(dāng)順序給予時(shí)，它們可以在密切的空間間隔(例如5-10分鐘的時(shí)間段)或經(jīng)歷較長的間隔(例如1、2、3、4或更多個(gè)小時(shí)的間隔，甚或在需要時(shí)更長的間隔時(shí)段)后給予，精確的劑量方案是與治療劑的特性相稱的。
本發(fā)明化合物也可以與非化學(xué)治療劑如放療、光力學(xué)療法、基因療法、手術(shù)和控制飲食聯(lián)合給予。
為了與另一種化學(xué)治療劑一起用于聯(lián)合療法，本發(fā)明化合物和一、二、三、四或更多種其它治療劑可以例如配制在一起，成為包含二、三、四或更多種治療劑的劑型?；蛘撸髦委焺┛梢苑謩e配制并以藥劑盒的形式(任選包括其使用說明)存在在一起。
附圖簡述 圖1說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)單核細(xì)胞產(chǎn)生TNFα的影響。
圖2說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-4的影響。
圖3說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)人單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的影響。
圖4說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)人單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-5的影響。
圖5說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)人單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-10的影響。
圖6說明本發(fā)明化合物，異構(gòu)體B(RU350)和異構(gòu)體D(RU346)對(duì)人單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-12的影響。
實(shí)施例 以下非限制性實(shí)施例說明本發(fā)明的二氫丁苯那嗪化合物的合成和特性。
實(shí)施例1 制備二氫丁苯那嗪的2S，3S，11bR和2R，3R，11bS異構(gòu)體1A.還原RR/SS丁苯那嗪
在0℃用超過30分鐘將四氫呋喃(135ml，135mmol，2.87當(dāng)量)中的1M L-Selectride

緩慢加入丁苯那嗪RR/SS外消旋化合物(15g，47mmol)在乙醇(75ml)和四氫呋喃(75ml)中的攪拌溶液內(nèi)。完成添加后在0℃將混合物攪拌30分鐘，然后任其升溫至室溫。
將混合物傾至碎冰(300g)上并加入水(100ml)。用乙醚(2×200ml)提取溶液并用水(100ml)沖洗合并的含醚提取液，用無水碳酸鉀部分干燥。用無水硫酸鎂完成干燥，過濾后，減壓除去溶劑(避光，浴溫＜20℃)得到淡黃色固體。
用石油醚(30-40℃)使固體淤漿化并過濾得到白色粉狀固體(12g，80％)。
1B.將還原的丁苯那嗪脫水
在0℃用超過30分鐘將五氯化磷(32.8g，157.5mmol，2.5當(dāng)量)分批加入來自實(shí)施例1A的還原的丁苯那嗪產(chǎn)物(20g，62.7mmol)在二氯甲烷(200ml)中的攪拌溶液內(nèi)。完成添加后，在0℃將反應(yīng)混合物再攪拌30分鐘，將溶液緩慢傾至含碎冰(0℃)的2M碳酸鈉水溶液中。
一旦起初的酸性氣體放出停止即用固體碳酸鈉堿化(約pH 12)混合物。
用乙酸乙酯(800ml)提取堿性溶液并用無水硫酸鎂干燥合并的有機(jī)提取液。過濾后減壓除去溶劑得到褐色油，將其通過柱層析(二氧化硅，乙酸乙酯)純化得到半純化的烯烴(10.87g，58％)，為黃色固體。
1C.將實(shí)施例1B的粗品烯烴水合
在室溫下，通過將1M硼烷-THF(155.6ml，155.6mmol，4.30當(dāng)量)滴加入來自實(shí)施例1B的粗品烯烴(10.87g，36.11mmol)在干燥THF(52ml)中的溶液內(nèi)來進(jìn)行處理。攪拌反應(yīng)物2小時(shí)，加入水(20ml)并用30％氫氧化鈉水溶液將溶液堿化至pH 12。
將30％過氧化氫水溶液(30ml)加入攪拌的堿性反應(yīng)混合物中，將溶液加熱至回流1小時(shí)，然后任其冷卻。加入水(100ml)并用乙酸乙酯(3×250ml)提取混合物。將有機(jī)提取液合并，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑得到黃色油狀物(9g)。
以350mg每注射液用制備型HPLC(柱Lichrospher Si60，5μm，250×21.20mm，流動(dòng)相己烷∶乙醇∶二氯甲烷(85∶15∶5)；UV 254nm，流量10ml min-1)純化該油狀物，接著真空濃縮需要的流分。然后使產(chǎn)物油溶于乙醚中并再次真空濃縮，得到上文顯示的二氫丁苯那嗪外消旋物(5.76g，50％)，為黃色泡沫。
1D.制備Mosher’s酯衍生物
將R-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲苯基乙酸(5g，21.35mmol)、草酰氯(2.02ml)和DMF(0.16ml)加入無水二氯甲烷(50ml)并在室溫將溶液攪拌45分鐘。減壓濃縮溶液并用無水二氯甲烷(50ml)再吸收殘留物1次。用冰水浴冷卻生成的溶液，加入二甲氨基吡啶(3.83g，31.34mmol)，接著是實(shí)施例1C固體產(chǎn)物(5g，15.6mmol)在無水二氯甲烷中的預(yù)干燥溶液(過4

篩網(wǎng))。在室溫?cái)嚢?5分鐘后，加入水(234ml)并用乙醚(2×200ml)提取混合物。將乙醚提取液用無水硫酸鎂干燥，通過二氧化硅墊，用乙醚洗脫產(chǎn)物。
減壓濃縮收集的乙醚洗脫液得到油狀物，用柱層析(二氧化硅，己烷∶乙醚(10∶1))將其純化。蒸發(fā)需要收集的柱流分并減壓除去溶劑得到固體，用柱層析(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯(1∶1))將其進(jìn)一步純化得到3種主要成分，其部分溶于Mosher’s酯峰1和2。
以300mg裝填3種成分的制備型HPLC(柱2×Lichrospher Si60，5μm，250×21.20mm，流動(dòng)相己烷∶異丙醇(97∶3)，UV 254nm；流量10ml min-1)，然后真空濃縮需要的流分，得到純化的Mosher’s酯衍生物峰1(3.89g，46.5％)峰2(2.78g，33％) 將對(duì)應(yīng)于兩個(gè)峰的流分水解以釋放經(jīng)鑒定且具有異構(gòu)體A和B特征的各二氫丁苯那嗪異構(gòu)體。相信異構(gòu)體A和B各自具有一種以下結(jié)構(gòu)
更特別地，根據(jù)下面實(shí)施例4中描述的X-線結(jié)晶學(xué)實(shí)驗(yàn)，相信異構(gòu)體B具有2S、3S、11bR絕對(duì)構(gòu)型。
1E.水解峰1得到異構(gòu)體A 將20％氫氧化鈉水溶液(87.5ml)加入Mosher’s酯峰1(3.89g，7.27mmol)的甲醇(260ml)溶液中并將混合物攪拌和加熱至回流150分鐘。冷卻至室溫后加入水(200ml)并用乙醚(600ml)提取溶液，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮。
將殘留物用乙酸乙酯(200ml)溶解，用水(2×50ml)沖洗溶液，將有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮得到黃色泡沫。用柱層析(二氧化硅，梯度洗脫為乙酸乙酯∶己烷(1∶1)至乙酸乙酯)純化該物質(zhì)。合并需要的流分并減壓除去溶劑。在乙醚中吸收殘留物并再次減壓除去溶劑得到異構(gòu)體A(1.1g，47％)，為灰白色泡沫。
用1H-NMR、13C-NMR、IR、質(zhì)譜法、手性HPLC和ORD鑒定異構(gòu)體A的特征，相信其或者具有2R，3R，11bS構(gòu)型(未確定絕對(duì)立體化學(xué))。異構(gòu)體A的IR、NMR和MS數(shù)據(jù)在表1中顯示，而手性HPLC和ORD數(shù)據(jù)在表3中顯示。
1F.水解峰2得到異構(gòu)體B 將20％氫氧化鈉水溶液(62.5ml)加入Mosher’s酯峰2(2.78g，5.19mmol)的甲醇(185ml)溶液中并將混合物攪拌和加熱至回流150分鐘。冷卻至室溫后加入水(142ml)并用乙醚(440ml)提取溶液，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮。
將殘留物用乙酸乙酯(200ml)溶解，用水(2×50ml)沖洗溶液，將有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮。將石油醚(30-40℃)加入殘留物中，將溶液再次真空濃縮得到異構(gòu)體B(1.34g，81％)，為白色泡沫。
用1H-NMR、13C-NMR、IR、質(zhì)譜法、手性HPLC、ORD和X-線結(jié)晶學(xué)鑒定異構(gòu)體B的特征，相信其或者具有2S，3S，11bR構(gòu)型。異構(gòu)體B的IR、NMR和MS數(shù)據(jù)在表1中顯示而手性HPLC和ORD數(shù)據(jù)在表3中顯示。X-線結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)在實(shí)施例4中顯示。
實(shí)施例2 制備二氫丁苯那嗪的2R，3S，11bR和2S，3R，11bS異構(gòu)體 2A.制備2，3-二氫丁苯那嗪 按實(shí)施例1A的方法，用L-Selectride

使含RR和SS丁苯那嗪對(duì)映體外消旋混合物(15g，47mmol)的四氫呋喃溶液還原，得到二氫丁苯那嗪的2S，3R，11bR和2R，3S，11bS對(duì)映體混合物(12g，80％)，為白色粉狀固體。然后按實(shí)施例1B的方法，用PCl5使部分純化的二氫丁苯那嗪脫水，得到2，3-二氫丁苯那嗪的11bR和11bS異構(gòu)體(下文未顯示其11bR對(duì)映體)的半純化混合物(12.92g，68％)，為黃色固體。

2B.將得自實(shí)施例2A的粗品烯烴環(huán)氧化
將70％過氯酸(3.70ml，43mmol)的甲醇(215ml)溶液加入來自實(shí)施例2A的粗品烯烴(12.92g，42.9mmol)在甲醇(215ml)中的攪拌溶液內(nèi)。將77％3-氯過氧苯甲酸(15.50g，65mmol)加入反應(yīng)物中，在室溫將生成的混合物避光攪拌18小時(shí)。
將反應(yīng)混合物傾入飽和亞硫酸鈉水溶液(200ml)中并加入水(200ml)。將氯仿(300ml)加入生成的乳液中并用飽和碳酸氫鈉水溶液(400ml)堿化混合物。
收集有機(jī)層并用另外的氯仿(2×150ml)沖洗水層。將合并的氯仿層用無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑，得到褐色油狀物(14.35g，產(chǎn)率＞100％-產(chǎn)物中可能殘余溶劑)。該物質(zhì)無需進(jìn)一步純化即可使用。
2C.將2B的環(huán)氧化物還原性開環(huán)
用15分鐘用1M硼烷/THF(184.6ml，184.6mmol)緩慢處理來自實(shí)施例2B的粗品環(huán)氧化物(14.35g，42.9mmol，假定100％產(chǎn)率)在干燥THF(80ml)中的攪拌溶液。將反應(yīng)物攪拌2小時(shí)，加入水(65ml)并攪拌，使溶液加熱至回流30分鐘。
冷卻后，將30％氫氧化鈉溶液(97ml)加入反應(yīng)混合物，然后加入30％過氧化氫溶液(48.6ml)，將反應(yīng)物攪拌并再加熱至回流1小時(shí)。
用乙酸乙酯(500ml)提取冷卻的反應(yīng)混合物，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑得到油狀物。將己烷(230ml)加入油狀物中并再減壓濃縮溶液。
用柱層析(二氧化硅，乙酸乙酯)純化油狀殘留物。將需要的流分合并并減壓除去溶劑。用柱層析(二氧化硅，梯度，己烷至乙醚)再次純化殘留物。將需要的流分合并并減壓蒸發(fā)溶劑，得到淡黃色固體(5.18g，38％)。
2D.制備二氫丁苯那嗪的2R，3S，11bR和2S，3R，11bS異構(gòu)體的Mosher’s酯衍生物
將R-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲苯基乙酸(4.68g，19.98mmol)、草酰氯(1.90ml)和DMF(0.13ml)加入無水二氯甲烷(46ml)中并在室溫將溶液攪拌45分鐘。減壓濃縮溶液并在無水二氯甲烷(40ml)中再次吸收殘留物。用冰水浴冷卻生成的溶液，加入二甲氨基吡啶(3.65g，29.87mmol)，然后加入實(shí)施例2C的固體產(chǎn)物(4.68g，14.6mmol)在無水二氯甲烷(20ml)中的預(yù)干燥溶液(過4

篩網(wǎng))。在室溫?cái)嚢?5分鐘后，加入水(234ml)并用乙醚(2×200ml)提取混合物。將乙醚提取液經(jīng)無水硫酸鎂干燥，通過二氧化硅墊并用乙醚洗脫產(chǎn)物。
減壓濃縮收集的乙醚洗脫液得到油狀物，用柱層析(二氧化硅，己烷∶乙醚(1∶1))將其純化。將需要收集的柱流分蒸發(fā)并減壓除去溶劑得到粉紅色固體(6.53g)。
以100mg裝填固體的制備型HPLC(柱2×Lichrospher Si60，5μm，250×21.20mm；流動(dòng)相己烷∶異丙醇(97∶3)；UV 254nm；流量10mlmin-1)，然后真空濃縮需要的流分得到固體，用石油醚(30-40℃)使其淤漿化并過濾收集得到純化的Mosher’s酯衍生物峰1(2.37g，30％)峰2(2.42g，30％) 將對(duì)應(yīng)于兩個(gè)峰的流分水解以釋放經(jīng)鑒定且具有異構(gòu)體C和D特征的各二氫丁苯那嗪異構(gòu)體。相信異構(gòu)體C和D各自具有一種以下結(jié)構(gòu)
2F.水解峰1得到異構(gòu)體C 將20％氫氧化鈉水溶液(53ml)加入Mosher’s酯峰1(2.37g，4.43mmol)在甲醇(158ml)中的攪拌溶液內(nèi)并將混合物攪拌回流150分鐘。冷卻后將水(88ml)加入反應(yīng)混合物并用乙醚(576ml)提取生成的溶液。將有機(jī)提取液經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑。將乙酸乙酯(200ml)加入殘留物，并用水(2×50ml)沖洗溶液。將有機(jī)溶液經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑。
用石油醚(30-40℃)處理殘留物并過濾收集生成的懸浮固體。減壓濃縮濾液并過濾收集第二批懸浮的固體。將兩次收集的固體合并，減壓干燥得到異構(gòu)體C(1.0g，70％)。
用1H-NMR、13C-NMR、IR、質(zhì)譜法、手性HPLC和ORD鑒定異構(gòu)體C的特征，相信其或者具有2R，3S，11bR，或者具有2S，3R，11bS構(gòu)型(未確定絕對(duì)立體化學(xué))。異構(gòu)體C的IR、NMR和MS數(shù)據(jù)在表2中顯示，而手性HPLC和ORD數(shù)據(jù)在表4中顯示。
2G.水解峰2得到異構(gòu)體D 將20％氫氧化鈉水溶液(53ml)加入Mosher’s酯峰2(2.42g，4.52mmol)在甲醇(158ml)中的攪拌溶液內(nèi)并將混合物攪拌回流150分鐘。冷卻后將水(88ml)加入反應(yīng)混合物并用乙醚(576ml)提取生成的溶液。將有機(jī)提取液經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑。將乙酸乙酯(200ml)加入殘留物中，并用水(2×50ml)沖洗溶液。將有機(jī)溶液經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓除去溶劑。
用石油醚(30-40℃)處理殘留物并過濾收集生成的懸浮橙色固體。使該固體溶于乙酸乙酯∶己烷(15∶85)并用柱層析(二氧化硅，梯度乙酸乙酯∶己烷(15∶85)至乙酸乙酯)純化。合并需要的流分并減壓除去溶劑。用石油醚(30-40℃)使殘留物淤漿化并過濾收集生成的懸浮液。減壓干燥收集的固體得到異構(gòu)體D(0.93g，64％)，為白色固體。
用1H-NMR、13C-NMR、IR、質(zhì)譜法、手性HPLC和ORD鑒定異構(gòu)體D的特征，相信其或者具有2R，3S，11bR，或者具有2S，3R，11bS構(gòu)型(未確定絕對(duì)立體化學(xué))。異構(gòu)體D的IR、NMR和MS數(shù)據(jù)在表2中顯示，而手性HPLC和ORD數(shù)據(jù)在表4中顯示。
在表1和2中，用KBr壓片(disc)確定紅外光譜。用Varian GeminiNMR波譜儀(200MHz.)在氘化氯仿溶液中進(jìn)行1H NMR光譜。用Varian Gemini NMR波譜儀(50MHz)在氘化氯仿溶液中進(jìn)行13C NMR光譜。用Micromass Platform II(ES+條件)波譜儀獲得質(zhì)譜。在表3和4中，在24℃下，在甲醇溶液中用Optical Activity PolAAr 2001儀器獲得旋光色散數(shù)據(jù)。用帶UV檢測(cè)器的HP1050 HPLC層析儀測(cè)量HPLC保留時(shí)間。
表1和2-光譜數(shù)據(jù)

表3和4-層析和ORD數(shù)據(jù)

實(shí)施例3 制備異構(gòu)體B和制備甲磺酸鹽的替代方法 3A.還原RR/SS丁苯那嗪
用30分鐘將四氫呋喃(52ml，52mmol，1.1當(dāng)量)中的1MSelectride

緩慢加入丁苯那嗪外消旋物(15g，47mmol)在四氫呋喃(56ml)中的冷卻(冰浴)、攪拌的溶液內(nèi)。完成添加后，任由混合物升溫至室溫并再攪拌6小時(shí)。TLC分析(二氧化硅，乙酸乙酯)顯示只殘留極少量起始材料。
將混合物傾至碎冰(112g)、水(56ml)和冰醋酸(12.2g)的攪拌的混合物中。用乙醚(2×50ml)沖洗生成的黃色溶液并緩慢加入固體碳酸鈉(約13g)使其堿化。邊攪拌邊將Pet-醚(30-40℃)(56ml)加入混合物中，過濾收集粗產(chǎn)物β-DHTBZ，為白色固體。
使粗制固體溶于二氯甲烷(約150ml)并用水(40ml)沖洗生成的溶液，用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮至約40ml。形成白色固體的稠密懸浮液。加入Pet-醚(30-40℃)(56ml)并在實(shí)驗(yàn)室溫度將懸浮液攪拌15分鐘。過濾收集產(chǎn)物并用pet-醚(30-40℃)(40至60ml)在濾器上沖洗直至雪白，在室溫風(fēng)干后得到β-DHTBZ(10.1g，67％)，為白色固體。TLC分析(二氧化硅，乙酸乙酯)顯示只有一種成分。
3B.制備和分級(jí)結(jié)晶外消旋β-DHTBZ的樟腦磺酸鹽 加熱使實(shí)施例3A的產(chǎn)物和1當(dāng)量(S)-(+)-樟腦-10-磺酸溶于最小量甲醇。任由生成的溶液冷卻，然后用乙醚緩慢稀釋直至生成的固體沉淀物的形成結(jié)束。過濾收集生成的白色結(jié)晶固體并用乙醚沖洗，然后干燥。
使樟腦磺酸鹽(10g)溶于熱的無水乙醇(170ml)和甲醇(30ml)的混合物中。攪拌生成的溶液并任其冷卻。2小時(shí)后過濾收集形成的沉淀物(2.9g)，為白色結(jié)晶固體。使結(jié)晶材料樣品與過量飽和的碳酸鈉水溶液和二氯甲烷在分液漏斗中振蕩。將有機(jī)相分離，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。用pet-醚(30-40℃)研磨殘留物并再次濃縮有機(jī)溶液。用Chirex(S)-VAL和(R)-NEA 250×4.6mm柱對(duì)該鹽進(jìn)行手性HPLC分析，用己烷∶乙醇(98∶2)洗脫液以1ml/分鐘的流速洗脫，顯示分離的β-DHTBZ濃縮在一種對(duì)映體中(對(duì)映體過量約80％)。
使?jié)饪s的樟腦磺酸鹽(14g)溶于熱的無水乙醇(140ml)并加入丙-2-醇(420ml)。攪拌生成的溶液，在1分鐘內(nèi)開始形成沉淀物。任由混合物冷卻至室溫并攪拌1小時(shí)。將形成的沉淀物過濾收集，用乙醚沖洗并干燥得到白色結(jié)晶固體(12g)。
使結(jié)晶物質(zhì)與過量的飽和碳酸鈉水溶液和二氯甲烷在分液漏斗中振蕩。將有機(jī)相分離，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。用pet-醚(30-40℃)研磨殘留物并再次濃縮有機(jī)溶液，得到(真空干燥后)(+)-β-DHTBZ(6.6g，ORD+107.8)。分離的對(duì)映體的對(duì)映體過量＞97％。
3C.制備異構(gòu)體B 用超過10分鐘將五氯化磷(4.5g，21.6mmol，1.05當(dāng)量)的二氯甲烷(55ml)溶液穩(wěn)定地加入實(shí)施例3B的產(chǎn)物(6.6g，20.6mmol)在二氯甲烷(90ml)中的攪拌、冷卻(冰水浴)溶液內(nèi)。完成添加后，將生成的黃色溶液再攪拌10分鐘，然后傾至碳酸鈉(15g)在水(90ml)和碎冰(90g)中的快速攪拌的混合物內(nèi)。將混合物再攪拌10分鐘并移至分液漏斗中。
一旦分離出各相，即將褐色二氯甲烷層除去，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到粗品烯烴(約6.7g)中間體，為褐色油狀物。TLC分析(二氧化硅，乙酸乙酯)顯示粗產(chǎn)物內(nèi)無(+)-β-DHTBZ殘留。
在無水四氫呋喃(40ml)中吸收粗品烯烴(干燥的氮?dú)鈿夥?并用超過15分鐘邊攪拌邊加入硼烷的THF(1M溶液，2.5當(dāng)量，52ml)溶液。然后在室溫將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。TLC分析(二氧化硅，乙酸乙酯)顯示反應(yīng)混合物中無烯烴中間體殘留。
將氫氧化鈉(3.7g)的水(10ml)溶液、過氧化氫水溶液(50％，約7ml)先后加入正在攪拌的反應(yīng)混合物中，將形成的兩相混合物攪拌回流1小時(shí)。此時(shí)有機(jī)相的TLC分析(二氧化硅，乙酸乙酯)顯示出現(xiàn)如異構(gòu)體B預(yù)期的Rf的產(chǎn)物。還顯示特征性非極性成分。
任由反應(yīng)混合物冷卻至室溫并將其傾入分液漏斗。將上面的有機(jī)層除去并減壓濃縮以除去大部分THF。使殘留物在乙醚(穩(wěn)定的(BHT)，75ml)中吸收，用水(40ml)沖洗，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮得到淡黃色油狀物(8.1g)。
用柱層析(二氧化硅，乙酸乙酯∶己烷(80∶20)，增加至100％乙酸乙酯)純化黃色油狀物，收集需要的柱流分、合并并減壓濃縮得到蒼白色油，將其用乙醚(穩(wěn)定的，18ml)處理并減壓濃縮得到異構(gòu)體B(2.2g)，為淡黃色固體泡沫。
用實(shí)施例3B列出的條件進(jìn)行的手性HPLC證實(shí)已經(jīng)產(chǎn)生的異構(gòu)體B的對(duì)映體過量(e.e)大于97％。
用Bellingham Stanley ADP220旋光計(jì)測(cè)量旋光度得到[αD]為+123.5°。
3D.制備異構(gòu)體B的甲磺酸鹽 通過使1當(dāng)量來自實(shí)施例3C的異構(gòu)體B與1當(dāng)量甲磺酸的混合物溶于最小量乙醇、然后加入乙醚制備異構(gòu)體B的甲磺酸鹽。過濾收集形成的生成白色沉淀物并真空干燥得到甲磺酸鹽，產(chǎn)率約為85％而純度(通過HPLC)約為96％。
實(shí)施例4 異構(gòu)體B的X-線結(jié)晶學(xué)研究 制備異構(gòu)體B的(S)-(+)-樟腦-10-磺酸鹽，按照以下條件使單一結(jié)晶經(jīng)歷X-線結(jié)晶學(xué)研究 衍射計(jì)NoniusKappaCCD區(qū)域檢測(cè)儀(t/i掃描和OJ掃描以完成不對(duì)稱單位)。
細(xì)胞測(cè)定DirAx(Duisenberg，A.J.M.(1992)，J.Appl.Cryst.25，92-96)。
數(shù)據(jù)收集Collect(收集數(shù)據(jù)收集軟件，R.Hooft，Nonius B.V，1998)。
數(shù)據(jù)約簡(reduction)和晶胞精制(refinement)Demo(Z.Otwinowski & W.Minor，酶學(xué)方法(Methods in Enzymology)(1997)Vol.276大分子晶體學(xué)(Macromolecular Crystallography)，部分A，307-326頁；C.W.Carter，Jr & R.M.Sweet，Eds.，Academic Press)。
吸收校正Sheldrick，G.M.SADABS-Bruker Nonius區(qū)域檢測(cè)儀掃描和吸收校正-V2.\0。
結(jié)構(gòu)拆分(Structure solution)SHELXS97(G.M.Sheldrick，ActaCryst.(1990)A46467-473)。結(jié)構(gòu)精制SHELXL97(G.M.Sheldrick(1997)，University of

德國)。
制圖Cameron-分子制圖軟件包(A Molecular Graphics Package)(D.M.Watkin，L.Pearce和C.K.Prout，牛津大學(xué)化學(xué)結(jié)晶學(xué)實(shí)驗(yàn)室，1993)。
詳細(xì)說明所有的氫原子均處于理想位置并采用riding模型精制，除了位于不同圖譜的NH和OH并用抑制結(jié)晶精制外。手性NI＝R，CI2＝S，CI3＝S，CI5＝S，C21＝S，C24＝R 下表A、B、C、D和E顯示研究的結(jié)果。
在表中，標(biāo)號(hào)RUS0350指異構(gòu)體B。

表B.原子坐標(biāo)[x104]，等價(jià)物等方性的置換參數(shù)[A2x103]和位點(diǎn)占據(jù)因子。Ueq被定義為痕量正交化Uij張量的三分之一。


表C.鍵長[A]和角度[°]。


表D.各向異性的置換參數(shù)[A2x103]。各向異性的置換因子指數(shù)采取形式-2π2[h2a*2U11+...+2hka*b*U12]。

表E.氫坐標(biāo)[x104]和等方性的置換參數(shù)[A2x103]。

表6.氫鍵[

和°]

30％概率水平時(shí)的熱橢圓體圖 根據(jù)上文列出的數(shù)據(jù)，相信異構(gòu)體B具有2S、3S、11bR構(gòu)型，其對(duì)應(yīng)于式(Ia)
實(shí)施例5 σ受體結(jié)合研究 對(duì)4種二氫丁苯那嗪異構(gòu)體A、B、C和D進(jìn)行特異性結(jié)合試驗(yàn)以測(cè)定它們結(jié)合至σ-1和σ-2受體的能力。結(jié)果在表5列出。
(a)Sigmaσ1受體 參考文獻(xiàn)Ganapathy等，Pharmacol.Exp.Ther.，289251-260，(1999) 來源人jurkat細(xì)胞 配體8nM[3H]氟哌啶醇 載體1％DMSO 培養(yǎng)時(shí)間/溫度4小時(shí)@25℃ 培養(yǎng)緩沖液5mM K2HPO4/KH2PO4緩沖液，pH 7.5 非特異性配體10μM氟哌啶醇 Kd5.8nM Bmax0.71pmole/mg蛋白 特異性結(jié)合80％ 定量方法放射性配體結(jié)合 顯著性標(biāo)準(zhǔn)≥50％最大刺激或抑制 (b)Sigmaσ2受體 參考文獻(xiàn)Hashimoto等，Eur.J.Pharmacol.，236159-163，(1993)來源Wistar大鼠腦 配體3nM[3H]艾芬地爾 載體1％DMSO 培養(yǎng)時(shí)間/溫度60分鐘@37℃ 培養(yǎng)緩沖液50mM Tris-HCl，pH 7.4 非特異性配體10μM艾芬地爾 Kd4.8nM Bmax1.3pmole/mg蛋白 特異性結(jié)合85％ 定量方法放射性配體結(jié)合 顯著性標(biāo)準(zhǔn)≥50％最大刺激或抑制 表5
數(shù)據(jù)顯示結(jié)合于σ-1和σ-2受體的所有四種異構(gòu)體。這四種異構(gòu)體在σ-2受體結(jié)合研究中大致相等，但異構(gòu)體B和D更強(qiáng)烈地結(jié)合于σ-1受體。
實(shí)施例6 抗增值活性 本發(fā)明化合物的抗增值活性可通過測(cè)定所述化合物抑制一些細(xì)胞系的細(xì)胞生長的能力來確定。細(xì)胞生長的抑制用Alamar藍(lán)(AlamarBlue)測(cè)定法測(cè)定(Nociari，M.M，Shalev，A.，Benias，P.，Russo，C.Journal of Immunological Methods 1998，213，157-167)。該方法基于活細(xì)胞將刃天青還原為其熒光產(chǎn)物試鹵靈的能力。對(duì)于每種增值測(cè)定，將細(xì)胞置于96孔板中，并在再經(jīng)72小時(shí)加入抑制劑化合物之前恢復(fù)16小時(shí)。在培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，加入10％(v/v)Alamar藍(lán)，在于535nM ex/590nM em測(cè)定熒光產(chǎn)物之前再培養(yǎng)6小時(shí)。在非增值細(xì)胞測(cè)定的情況下，在經(jīng)另外72小時(shí)加入抑制劑化合物之前，維持細(xì)胞匯合96小時(shí)。如前通過Alamar藍(lán)測(cè)定法測(cè)定存活細(xì)胞的數(shù)量。全部細(xì)胞系得自ECACC(歐洲細(xì)胞培養(yǎng)中心(European Collection of cell Cultures)。這樣的細(xì)胞系的實(shí)例為人SK-N-SH成神經(jīng)細(xì)胞瘤和大鼠C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。
實(shí)施例7 本發(fā)明化合物對(duì)LPS/IFN刺激的人單核細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響的測(cè)試 測(cè)試本發(fā)明化合物以確定它們能調(diào)節(jié)人單核細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的程度。單核細(xì)胞是巨噬細(xì)胞的前體，為在廣泛范圍內(nèi)的疾病狀態(tài)中炎性細(xì)胞因子的重要來源。因而，本發(fā)明化合物抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生的活性提供具有抗炎活性的化合物的可能性的良好指標(biāo)。
建立以下處理組 程序 人單核細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的調(diào)節(jié) 材料 MACS緩沖液1×PBS pH 7.2，2mM EDTA(Sigma)，5％人AB血清培養(yǎng)基500ml RPMI 1640(Invitrogen)，5ml Penstrep(Sigma)，5ml L-谷氨酸鹽(Invitrogen)，10ml HEPES(Sigma)，5％自體同源血漿。
化合物在無水乙醇中的10mM儲(chǔ)備液、 LPS1mg/ml的流產(chǎn)沙門氏菌(Sigma，Cat#L1887)。
IFNγ10μg/ml的人重組體(BD Pharmacia，Cat#554617)。
MACS CD14陽性選擇珠和LS柱(Miltenyi Biotech)。
CD14FITC抗體(Miltenyi Biotech) 得自Bristol國家血液服務(wù)機(jī)構(gòu)(Bristol National Blood Services)暗黃覆蓋層。
1ml血應(yīng)給予7×106個(gè)總細(xì)胞。
自體同源血漿的制備 以3500rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘。
除去上血漿層并于56℃熱滅活30分鐘。
以3500rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘以除去熱滅活的補(bǔ)體蛋白等。
外周血單核細(xì)胞(PBMC)分離 1.重新懸浮于等體積RPMI 1640培養(yǎng)基中維持暗黃覆蓋層并倒置混合。
2.將histopaque(Sigma)預(yù)溫?zé)嶂潦覝?RT)并將10ml加入到通用試劑(universal)中。
3.用15ml血/培養(yǎng)基混合物溫和地覆蓋。
4.于室溫下以1600rpm旋轉(zhuǎn)25分鐘(中途不要停止)。
5.將PBMC分離到培養(yǎng)基和histopaque之間的表面層，在50mlFalcon中除去細(xì)胞，加入10ml培養(yǎng)基。
6.于室溫下以1800rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘。
7.用40ml RPMI培養(yǎng)基洗滌3次并懸浮于培養(yǎng)基中。
通過用CD14+MicroBeads陽性選擇分離CD14+細(xì)胞 在冰上操作，用預(yù)先冷卻的溶液。
1.測(cè)定細(xì)胞數(shù)(313×10×5×104＝1.565×108總細(xì)胞)。
2.移出100μl細(xì)胞樣品用于熒光-激活的細(xì)胞-分選(Fluorescence-Activated Cell-Sorting，F(xiàn)ACS)分析(預(yù)選擇樣品)。
3.于4℃以1800rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘。除去上清液。
4.將沉淀物再次懸浮于每1×107總細(xì)胞80μl緩沖液(2400μl/總細(xì)胞)。
5.加入20μl CD14 MicroBeads/1×107總細(xì)胞(400μl/總細(xì)胞)。
6.混合各孔并于4-8℃培養(yǎng)15分鐘。
7.用1-2ml緩沖液洗滌細(xì)胞，于4℃以300×g旋轉(zhuǎn)10分鐘。除去上清液。
8.將至多1×108個(gè)細(xì)胞再次懸浮于500μl緩沖液(1ml/總細(xì)胞)。
用LS柱進(jìn)行磁分離 1.將柱置于MACS

分離器(Separator)的磁場中。用3ml MACS緩沖液洗柱。
2.將細(xì)胞懸浮液施加于柱上。
3.收集通過的未標(biāo)記的細(xì)胞。用3×3ml緩沖液洗柱，在每次洗滌之間使該柱的貯庫放空。收集總的流出物(未標(biāo)記的細(xì)胞部分)。
4.出分離器中移出柱并置于收集管中。
5.將5ml緩沖液施加于柱上，通過浸泡柱立即洗脫含磁標(biāo)記的細(xì)胞的部分。
6.在MACS緩沖液中旋轉(zhuǎn)并使細(xì)胞沉淀物再懸浮于培養(yǎng)基中。
7.在陽性選擇的細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
71×20×5×104＝7.1×107個(gè)細(xì)胞/ml。具有1.75ml∴1.24×108個(gè)總細(xì)胞。
8.取出樣品，通過FACS檢查純度-加10μl CD14-FITC抗體并于4-8℃培養(yǎng)5分鐘。
化合物制備 制備在在無水乙醇中的10mM化合物。在培養(yǎng)基中培養(yǎng)之前先稀釋至所需濃度。
細(xì)胞培養(yǎng) 將分離的CD14+單核細(xì)胞在24孔板中以1×106個(gè)細(xì)胞/ml/孔的濃度培養(yǎng)。單核細(xì)胞在如下表中所示的各種稀釋度的試驗(yàn)化合物和對(duì)照品的存在下培養(yǎng)。培養(yǎng)過夜后，加入LPS(10μg/ml)和IFNγ(100ng/ml)以刺激單核細(xì)胞的活化并提高CB2的表達(dá)。48小時(shí)后，移出上清液以用于CBA細(xì)胞因子分析。
CBA細(xì)胞因子分析(BenderMedSystems人Th1/Th2Kit[Cat#BMS716FF]) 使所有緩沖液升溫至室溫并在使用前渦流 1.通過加入到450ml蒸餾水并溫和地混合，制備測(cè)試緩沖液。于4℃貯存。
2.通過將600μl的各種生物素-綴合物加入到通用試劑中制備生物素-綴合物混合物。
3.通過加入300μl各種珠試劑盒制備珠混合物。
4.如在小瓶標(biāo)簽上所推薦的，每種標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水重構(gòu)成。將100μl測(cè)試緩沖液加入到標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)品1的試管中。加入10μl各種重構(gòu)成的標(biāo)準(zhǔn)品并混合。系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)品混合物(加入100μl測(cè)試緩沖液至試管2-7，加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品1至試管2中，混合并將50μl移至試管3等)。
5.標(biāo)記FACS試管并將25μl標(biāo)準(zhǔn)品1-7加入到指定試管中。將25μl測(cè)試緩沖液加入到空白管中。
6.將25μl樣品加入到指定樣品試管中。
7.將25μl珠混合物加入到所有試管中。
8.將50μl生物素-綴合物加入到所有試管中。
9.通過渦流混合，任何用鋁箔覆蓋，于室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。
10.通過將176μl混合于5324μl測(cè)試緩沖液中制備鏈霉抗生物素-PE溶液。將1ml測(cè)試緩沖液加入到所有試管中，于200×g旋轉(zhuǎn)5分鐘。倒掉上清液。重復(fù)洗滌步驟并倒掉上清液。
11.將50μl鏈霉抗生物素-PE加入到所有試管中。通過渦流混合，然后用鋁箔覆蓋，于室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。
12.重復(fù)洗滌步驟2次。
13.將500μl測(cè)試緩沖液加入到所有試管中。
流式細(xì)胞儀設(shè)定 將陽性和陰性珠(用試劑盒供應(yīng))定于最適設(shè)置并測(cè)定補(bǔ)償(compensation)等。在抽樣前建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，在門控群體(gatedpopulation)上計(jì)數(shù)3000個(gè)事件(300事件/被分析物)。
結(jié)果 結(jié)果示于圖1-6。在所述圖中，標(biāo)記RU348指定為異構(gòu)體D。
如在圖1-6中所可顯示的，兩個(gè)順式-二氫丁苯那嗪異構(gòu)體B和D兩者均減少被LPS/IFN刺激的單核細(xì)胞中不同范圍細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
因此，異構(gòu)體B在所有測(cè)試濃度下均減少細(xì)胞因子IL-2和IL-12的產(chǎn)生并在大多數(shù)測(cè)試濃度下均減少細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-10的產(chǎn)生。
異構(gòu)體D在所有測(cè)試濃度下均減少細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5和IL-12的產(chǎn)生并在大多數(shù)測(cè)試濃度下均減少細(xì)胞因子TNFa、IL-4、IL-5和IL-10的產(chǎn)生。
實(shí)施例8 本發(fā)明化合物對(duì)T細(xì)胞增值的作用的測(cè)定 測(cè)試本發(fā)明化合物以確定它們能抑制T細(xì)胞增值的程度。T細(xì)胞對(duì)共同調(diào)配(co-ordinating)適應(yīng)的免疫反應(yīng)有響應(yīng)并引起廣泛范圍的疾病狀態(tài)的炎癥。
因此，本發(fā)明化合物抑制T細(xì)胞增值的活性提供具有抗炎活性的化合物的可能性的良好指標(biāo)。
材料 HBSS+2％HEPES緩沖液(500ml+10ml)，αMEM(500ml)+2％HEPES(10ml)+1％Pen/strep(5ml)+2％L-谷氨酸鹽(10ml)+50μM2-ME(500μl)和正常小鼠血清(NMS)。
方法 1.用在PBS中的1μg/ml 100μl抗-小鼠CD3涂布3×96孔板，每板有1-8列和A-H行，共192孔，因此通過加入1.44mg/ml的17μl儲(chǔ)備液組成24mls的PBS溶液。于37℃培養(yǎng)2小時(shí)。
2.心臟穿刺后匯集2balb/c小鼠血，用于制備NMS，將脾取出置于HBSS+Hepes中。
3.將血液于37℃放置30分鐘以凝固，在chilspin中以3000rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘、除去血清，過濾滅菌，于冰箱中保持待用。
4.將脾移至含10ml HBSS的陪替氏培養(yǎng)皿中，用干凈的無菌絲網(wǎng)置于脾上，用玻璃棒釋放細(xì)胞。用巴斯德吸液管洗出絲網(wǎng)上的細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至15ml管中。于室溫下(RT)以1000rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘. 5.再懸浮細(xì)胞，將0.5ml滅菌DW加入到細(xì)胞溶解RBC中，混合并立即在HBSS中稀釋，通過細(xì)胞濾網(wǎng)轉(zhuǎn)移至50ml管中(70μM)。以除去碎片，如上所述旋轉(zhuǎn)，在HBSS中洗滌細(xì)胞1次以上，最后懸浮于含補(bǔ)充物(如上所述)的2mlsαMEM中。
6.細(xì)胞計(jì)數(shù)-252個(gè)細(xì)胞×2×5×104＝2.52×107細(xì)胞/ml，總共4mls＝108個(gè)細(xì)胞。將2mls稀釋至25mls，得到細(xì)胞濃度2×106個(gè)細(xì)胞/ml。
7.將250μl NMS加入細(xì)胞中，得到1％的濃度。
8.用PBS洗滌抗-CD3包被的板3次(3×PBS)。
9.將100μl的細(xì)胞等分試樣轉(zhuǎn)移至包被的3×96孔板的各孔(A-H排，1-8列)中。如下所述加入在96孔板中稀釋的等體積的化合物。
化合物 將10mM的3.5μl化合物轉(zhuǎn)移至346.5μl培養(yǎng)基(1/100)中，將35μl的1/100稀釋液轉(zhuǎn)移至315μl培養(yǎng)基(1/10)中，如此稀釋板，得到化合物的系列1/10稀釋液。將100μl不同化合物的等分試樣稀釋液轉(zhuǎn)移至含T細(xì)胞的一式三份的孔中。
*Nan＝大麻隆 培養(yǎng)48小時(shí)，然后加入1滴(16μl)3H-胸苷至各孔中，于37℃、5％CO2中培養(yǎng)過夜。收獲。測(cè)定3H-胸苷的結(jié)合。
結(jié)果 如3H-胸苷結(jié)合的水平所證實(shí)的，T細(xì)胞增值的程度由下表所示數(shù)據(jù)證實(shí)。
經(jīng)數(shù)據(jù)證實(shí)的結(jié)合示于下表中。
T細(xì)胞增值 板1 NabRU346 RU350培養(yǎng)基 A 42 1 37.3 28 36361.9 B 40910.794808.174.7 42663.8 C 52155.555277.346179.1 48044.3 D 41607.852138 54194.4 53253.6 E 36442 49102.453277.2 46372.2 F 37988.751285 58924.4 62391.8 G 37202.753139.146056.3 52016.7 H 38818.150602.852646.7 64420.5 板2 Nab RU346 RU350 培養(yǎng)基 A 18.714 42 68823.2 B 72188.2 1 108341.6 36745.151978.8 C 48534.9 66042.862557.558244.3 D 65222 49013.163867.262197.1 E 44970.2 55537.966290 42555.2 F 36994.3 59320.949054.358165.6 G 44920.7 47373.760937.440598.4 H 34530 52070.641897.142487 板3 Nab RU346 RU350 培養(yǎng)基 A 46.718.7 51.4 63111.1 B 78370.5 84079.6110594.7 51408.2 C 44235.7 123241.3 58812.641777.6 D 55348.5 61529 67792.879248.8 E 46765.1 57697.570736.756283.9 F 35152.2 72051.974224 68615.4 G 36359.1 74186.659965.862897.8 H 39295.7 72606.457220.442878.1 在表中，“Nab”指大麻隆，“RU346”指異構(gòu)體D和“RU350”指異構(gòu)體B。
結(jié)果證實(shí)各化合物在高濃度下測(cè)試時(shí)抑制T細(xì)胞增值。
實(shí)施例9 藥用組合物 (i)片劑制劑-I 通過將50mg二氫丁苯那嗪與作為稀釋劑的197mg乳糖(BP)以及作為潤滑劑的3mg硬脂酸鎂混合，并用已知的方法壓緊形成片劑制備含本發(fā)明的二氫丁苯那嗪的片劑組合物。
(ii)片劑制劑-II 通過將化合物(25mg)與氧化鐵、乳糖、硬脂酸鎂、白色玉米淀粉和滑石混合，并用已知的方法壓緊成片劑制備含本發(fā)明的二氫丁苯那嗪的片劑組合物。
(iii)膠囊制劑 通過將100mg本發(fā)明的二氫丁苯那嗪與100mg乳糖混合并將生成的混合物填充入標(biāo)準(zhǔn)不透光的硬明膠膠囊內(nèi)制備膠囊制劑。
等價(jià)物 很容易明白在不脫離本發(fā)明的原理下即可對(duì)上文描述的本發(fā)明的具體實(shí)施方案進(jìn)行許多修飾和改變。所有這樣的修飾和改變都打算包括在本申請(qǐng)書內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種化合物在制備用于預(yù)防或治療增殖性疾病或炎性疾病的藥物中的用途，所述化合物為3，11b-順式-二氫丁苯那嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物用于預(yù)防或治療炎性疾病。
3.權(quán)利要求2的用途，其中所述炎性疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)疹性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎疾??；急性或慢性炎性疾病狀態(tài)如由內(nèi)毒素或炎性腸道疾病引起的炎性反應(yīng)；Reiter’s綜合征、痛風(fēng)、類風(fēng)濕性脊椎炎、慢性肺炎性疾病、克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述炎性疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
5.一種用于預(yù)防或治療炎性疾病，例如權(quán)利要求3或權(quán)利要求4定義的炎性疾病的化合物，其中所述化合物為3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
6.一種用于在患者例如哺乳動(dòng)物如人類中預(yù)防或治療炎性疾病或病癥例如權(quán)利要求3或權(quán)利要求4定義的炎性疾病的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物治療有效量的3，11b-順式-二氫丁苯那嗪。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)定義的用途、化合物或方法，其中3，11b-順式-二氫丁苯那嗪為如在本文定義的異構(gòu)體B或異構(gòu)體D。
8.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)定義的用途、化合物或方法，其中3，11b-順式-二氫丁苯那嗪具有式(Ia)
9.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)定義的化合物、用途或方法，其中3，11b-順式-二氫丁苯那嗪為酸加成鹽形式。
10.權(quán)利要求9中定義的用途、化合物或方法，其中所述鹽是甲磺酸鹽。
11.如本文中基本參照實(shí)施例所述的用途、化合物或方法。
全文摘要
本發(fā)明提供為3，11b-順式-二氫丁苯那嗪的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防或治療增殖性疾病或炎性疾病的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/473GK101321528SQ200680036600
公開日2008年12月10日 申請(qǐng)日期2006年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月5日
發(fā)明者A·J·杜菲爾德 申請(qǐng)人:劍橋?qū)嶒?yàn)室(愛爾蘭)有限公司