專利名稱：中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方活性組分的制備工藝，更具體的說，本發(fā)明涉及的是中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分制備方法。
背景技術(shù)：
癌癥是嚴(yán)重危害人民生命健康的重大疾病，世界上每年有600多萬(wàn)人死于惡性腫瘤。目前臨床上使用的治療藥物主要是傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類化學(xué)合成抗腫瘤藥物，雖然部分藥物抗腫瘤作用明顯，但毒副作用大，選擇性較差，容易產(chǎn)生耐藥性。中醫(yī)藥學(xué)是一門積淀中華民族幾千年來防病治病的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)結(jié)晶，具有鮮明的理論體系，又能體現(xiàn)辨證論治和個(gè)體化治療時(shí)代特征的生命科學(xué)。中醫(yī)能辨西醫(yī)不明之癥，中藥能治西藥難治、不治之癥。因此抗腫瘤中藥的研究越來越收到國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界的重視和青睞。
薏苡附子敗醬散是一個(gè)經(jīng)典的抗腫瘤中藥復(fù)方，出自《金匱要略》，方中薏苡仁為君、敗醬草為臣、附子為佐。中醫(yī)藥理論認(rèn)為，方中重用薏苡仁、敗醬草，苦寒淡滲以清熱利濕，活血化瘀，佐以微量附子，大辛大熱，走而不守，通行經(jīng)絡(luò)隱曲之處，假其辛熱以行郁滯之氣?，F(xiàn)代研究表明，薏苡仁油具有明顯的抗腫瘤效果，敗醬草具有免疫活性調(diào)節(jié)功能，附子中也具有一些調(diào)節(jié)人體免疫功能的生物堿類化合物。在臨床或民間，薏苡附子敗醬散是用水煎煮后直接服用，雖然有一定的效果，但有效成分的提取率不高，藥材浪費(fèi)嚴(yán)重，所得提取物大、黑、粗，質(zhì)量難以控制，也難以適應(yīng)國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)要求。因此如何有效、簡(jiǎn)便、大量的制備薏苡附子敗醬散的抗腫瘤活性組分，對(duì)該方的二次開發(fā)、充分利用我國(guó)的藥材資源和適應(yīng)中藥現(xiàn)代化要求等具有重大意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝以克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的有效成分的提取率不高，藥材浪費(fèi)嚴(yán)重，所得提取物大、黑、粗，質(zhì)量難以控制等難題以適應(yīng)中藥現(xiàn)代化的問題。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是按中藥復(fù)方各藥材的配方量將薏苡附子敗醬散中的薏苡仁先單獨(dú)用包括丙酮、石油醚、乙酸乙酯在內(nèi)的有機(jī)溶劑提取薏苡仁油，藥渣再與附子、敗醬草合并用水煮沸提取，提取液過大孔吸附樹脂，用水充分洗滌后再用一定濃度乙醇洗脫，乙醇洗脫液濃縮干燥后與薏苡仁油合并即得薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分，該組分中薏苡仁油含量高于30％，總黃酮含量高于20％。
下面對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明。
1、藥材粉碎將薏苡仁、附子和敗醬草均磨成粗粉。
2、薏苡仁油的提取將薏苡仁粗粉放入到提取器中，加入一種包括丙酮、石油醚、乙酸乙酯在內(nèi)的有機(jī)溶劑，水浴加熱回流提取3次。過濾合并濾液，濾液靜止過夜后取上清液減壓濃縮至無丙酮味，再用無水硫酸鈉干燥即得薏苡仁油。
3、全方提取上述提取后的薏苡仁藥渣與附子、敗醬草粗粉合并放入提取器中，加入水煮沸提取2次，過濾合并濾液，濾液靜止過夜后取上清物減壓濃縮至浸膏狀。
4、大孔樹脂分離純化取一定量預(yù)處理好的包括1300、D101或AB-8在內(nèi)的弱極性大孔吸附樹脂裝到層析柱中，用水反復(fù)沖洗后將全方提取物浸膏(樹脂和藥材用量比為1∶1)，吸附完全后，用大量水充分洗去糖分和無機(jī)鹽等雜質(zhì)，再用一定濃度乙醇溶液洗脫目標(biāo)成分。
5、濃縮干燥大孔樹脂乙醇洗脫物減壓濃縮干燥，濃縮溫度為60℃，濃縮物經(jīng)噴霧干燥后得到薏苡附子敗醬散純化物。
6、薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的得到將薏苡仁油和全方純化物混合，攪拌均勻即得，該有效組分為淺黃色粘稠狀物。
7、樹脂的處理及再生大孔吸附樹脂在裝柱前，需要用95％乙醇浸泡過夜并充分?jǐn)嚢?，去掉乙醇后用水浸泡，以此去掉樹脂中的殘留物。樹脂裝柱后需要用大量水沖洗至無乙醇味。洗脫完成后，用95％乙醇將樹脂上吸附的弱極性成分解析下來，用水沖洗至無醇味后即可進(jìn)行第二次吸附。樹脂反復(fù)吸附數(shù)次后，需要用0.1～0.5mol/ml的NaOH浸泡，去掉NaOH后用95％乙醇和水浸泡處理，沖洗至無乙醇味后可繼續(xù)上樣。


圖1為本發(fā)明中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明實(shí)施例1中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備將薏苡仁、附子和敗醬草均磨成粗粉，如圖1所示
1、稱取薏苡仁藥材粗粉3.0kg，用8倍量丙酮水浴回流提取三次，提取溫度為50℃，每次提取1.5h，過濾合并濾液并靜止過夜，取上清液減壓回收至無丙酮味。再用無水硫酸鈉干燥即得135g淺黃色油狀物，即為薏苡仁油，得率為4.5％。
2、上述提取后的薏苡仁藥渣與600g附子粗粉、1500g敗醬草粗粉合并后用10倍量水煮沸提取2.0小時(shí)，過濾后再用8倍量水煮沸提取1.5小時(shí)，過濾后合并濾液。
3、全方提取液靜止過夜后，取上清物減壓回收，回收溫度為60℃，濃縮得1700ml浸膏，每毫升浸膏含原藥材3.0g。
4、稱取5000g D101大孔吸附樹脂，用95％乙醇浸泡過夜后，再用水浸泡過夜后加到層析柱上(10.0×120cm)，用大量水反復(fù)沖洗。將全方提取物加到樹脂上端，打開活塞，流速為30ml/min，上樣完成后，關(guān)閉活塞，靜止吸附約1小時(shí)，接著用6倍樹脂床體積的水(60L)沖洗樹脂至洗脫液幾乎無色為止，再用5倍樹脂床體積的60％乙醇(50L)洗脫，接收60％乙醇洗脫物，洗脫流速為50ml/min。
5、60％乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮溫度為60℃，濃縮至原液體積的十分之一時(shí)(約為5000ml)進(jìn)行噴霧干燥，得干粉248g，提取率為4.86％。
6、將薏苡仁油和60％乙醇洗脫干燥物混合，攪拌均勻后所得產(chǎn)品即為本發(fā)明中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分，該組分為淺黃色粘稠狀物，薏苡仁油含量為35.2％，總黃酮含量為20.7％。
實(shí)施例2薏苡附子敗醬散活性組分的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)取本室自己傳代呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的S180小鼠腹水，用生理鹽水稀釋成2×107/ml，取0.2ml接種于小鼠右腋皮下。小鼠接種后第二天灌胃給藥，空白組給予生理鹽水0.2ml，陽(yáng)性對(duì)照組給腹腔注射CTX 0.2ml(20mg/kg)，各治療組分別給予薏苡附子敗醬散活性組分0.5g/kg，1.0g/kg，2.0g/kg，連續(xù)10天，于次日處死。小鼠處死前眼眶取血，并作白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)，之后行脫臼處死小鼠。剝?nèi)∪饬鼋M織同時(shí)取小鼠脾臟和胸腺，稱重后按照下式計(jì)算抑瘤率，并計(jì)算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，所得結(jié)果表明本工藝制備得到的組分具有很強(qiáng)的抑制小鼠體內(nèi)S180肉瘤生長(zhǎng)的作用，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.01)，同時(shí)該組分能明顯見降低小鼠的脾指數(shù)和升高小鼠的胸腺指數(shù)，高劑量時(shí)作用尤為顯著(P＜0.01)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)表明該制備物能明顯升高由CTX所造成的小鼠白細(xì)胞降低(P＜0.01)。見表1、2和3。
抑瘤率＝(對(duì)照組肉瘤重-實(shí)驗(yàn)組肉瘤重)/對(duì)照組肉瘤重表1 薏苡附子敗醬散活性組分對(duì)S180移植肉瘤的抑制作用(X±S)

注與對(duì)照組相比△P＜0.05；與對(duì)照組相比△△P＜0.01；與CTX組相比#P＜0.05。
表2 薏苡附子敗醬散活性組分對(duì)荷瘤小鼠免疫器官的影響(X±S)

注與對(duì)照組相比△P＜0.05；與CTX組相比#P＜0.05；與CTX組相比##P＜0.01
表3 薏苡附子敗醬散活性組分對(duì)荷瘤小鼠WBC數(shù)的影響(X±S)

注與對(duì)照組相比△△P＜0.01；與CTX組相比##P＜0.01本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、薏苡仁油用丙酮水浴回流提取簡(jiǎn)便易行、提取率高、丙酮可以反復(fù)使用。
2、全方用水煮沸提取，簡(jiǎn)便易行、不需要有機(jī)溶劑、提取成本低。
3、用大孔樹脂分離純化，簡(jiǎn)便易行，只需要用水和低濃度乙醇即可，乙醇可以回收利用，成本較低。所選大孔樹脂(如D101)具有吸附容量大，再生容易，可以反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)。
4、本發(fā)明步驟少，方便應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)。
總之，按照本發(fā)明的方法制備薏苡附子敗醬散的抗腫瘤有效組分，有效成分的提取率高，所得產(chǎn)物的抗腫瘤活性強(qiáng)，藥材的利用率高，簡(jiǎn)便易行，成本低，可大規(guī)模生產(chǎn)。
權(quán)利要求
1.一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是將按中藥復(fù)方各藥材的配方量薏苡仁先用有機(jī)溶劑提取，得薏苡仁油；薏苡仁提取后的藥渣再與附子、敗醬草合并用水煮沸提取后，再用過大孔吸附樹脂純化得到全方純化物，兩提取物合并即得薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是提取薏苡仁油所用有機(jī)溶劑為丙酮，藥材用8倍量丙酮水浴回流提取三次，每次1.5小時(shí)，提取溫度為50℃，薏苡仁丙酮提取物靜止過夜后，取上清液減壓回收至無丙酮味，再用無水硫酸鈉脫水即得薏苡仁油提取物，回收溫度為40℃。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是薏苡仁提取后的藥渣與附子、敗醬草分別用10倍量和8倍量水煮沸提取兩次，每次2.0小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，再用過大孔吸附樹脂純化得到全方純化物。
4.按照權(quán)利要求1或3所述的一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是純化全方水提取物所用大孔吸附樹脂為包括1300、D101或AB-8在內(nèi)的弱極性大孔吸附樹脂，全方提取濃縮后的浸膏加到已經(jīng)處理好的大孔吸附樹脂上，樹脂和藥材用量比為1∶1，上樣完成后，先用6倍樹脂床體積的水洗脫，再用濃度為60％乙醇洗脫，洗脫體積為5倍樹脂床體積，接收60％乙醇洗脫物，減壓回收乙醇后噴霧干燥即得全方純化物，回收溫度為60℃。
5.按照權(quán)利要求1或2或4所述的一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是將薏苡仁提取物和全方純化物合并攪拌均勻即得薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分，組分中薏苡仁油含量高于30％，總黃酮含量高于20％。
全文摘要
本發(fā)明提供一種中藥復(fù)方薏苡附子敗醬散抗腫瘤活性組分的制備工藝，其特征是將方中薏苡仁用適當(dāng)有機(jī)溶劑水浴回流提取，提取物減壓回收溶劑后干燥劑干燥得薏苡仁油；藥渣與方中附子、敗醬草合并用水煮沸提取，提取液過大孔吸附樹脂，用水充分洗滌后，再用一定濃度乙醇解析，接收乙醇洗脫物減壓回收后干燥得全方過柱純化物；合并薏苡仁提取物和全方過柱純化物即得薏苡附子敗醬散的抗腫瘤活性組分，該組分中薏苡仁油含量高于30％，總黃酮含量高于20％。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單、快速、成本低、藥材利用率高等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1840114SQ20061002337
公開日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月17日
發(fā)明者范國(guó)榮, 彭金詠, 柴逸峰, 吳玉田, 吳會(huì)靈 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)