專利名稱：冷凍式巴氏涂片檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種冷凍式巴氏涂片檢測方法。
背景技術(shù)：
目前，傳統(tǒng)巴氏涂片技術(shù)的應用已有近50年，為世界范圍內(nèi)宮頸癌的防治作出了極其重要的貢獻。它采用的方法是應用棉簽及刮板等采樣器在宮頸處采集細胞樣本，直接涂沫于玻片上并及時固定后直接進行染色。雖然其簡便快捷，成本低廉。但該其仍存在以下缺點1)、細胞收集不全面，涂片細胞重疊，應用高濃度乙醇或乙醇乙醚混合固定液固定后細胞收縮明顯，粘液變性固化，染色過程中染色劑不易穿透粘液變性膜，致使粘液包裹的細胞著色不良，核漿染色欠佳，尤其是涂片較厚，細胞重疊顯著的區(qū)域細胞分辨很差，嚴重影響觀察，易造成漏診誤診；2)、當固定的細胞未能及時染色處理則細胞容易變形，后續(xù)染色效果將受到嚴重影響。為此，雖然醫(yī)學專家相繼發(fā)明了多種細胞學改良技術(shù)，對于解決傳統(tǒng)巴氏涂片部分缺陷具有一定作用，如TCT、LCT、LPT等技術(shù)，但這些技術(shù)操作復雜，需要具備特殊設(shè)備及專用耗材，成本高昂，難于普遍推廣，實際應用中具有很大的局限，特別是在進行大批量細胞涂片時，上述技術(shù)缺陷表現(xiàn)得更為突出。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低廉，細胞著色良好，操作簡單，實用性強的冷凍式巴氏涂片檢測方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是冷凍式巴氏涂片檢測方法，包括以下步驟
a)、先用細胞專用的采樣器在宮頸處采集細胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細胞樣本沉浸于細胞變性恢復液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
所述醋酸乙醇混合固定液為含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
所述玻片放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。
所述冷凍器是電冰箱。
所述變性恢復液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的冷凍式巴氏涂片檢測方法，1)、由于經(jīng)固定的帶細胞的玻片經(jīng)變性恢復液處理，并在低溫下(零度以下)冰箱內(nèi)速凍，細胞各成分滲透性明顯增強，因而經(jīng)過上述處理后，附有細胞的玻片直接進入染色劑內(nèi)染色，細胞著色顯著改善，核漿及細胞各成分清晰，細胞與細胞之間境界清楚，分辨較佳，核漿著色分明，顯著地改善了傳統(tǒng)巴氏涂片細胞染色不佳的狀態(tài)，即使涂片具有一定的重疊，細胞的輪角仍然清晰可辨，特別適用于大批量婦檢時由于細胞玻片未能及時處理而長時間干燥留置后玻片細胞的修復處理，對恢復變性細胞形態(tài)及保持良好的染色效果起到重要作用；2)、而使用該技術(shù)無需特殊設(shè)備及耗材，其成本低廉，操作簡單，實用性強，利于全面推廣，具有很強的應用價值。
具體實施例方式
冷凍式巴氏涂片檢測方法，包括以下步驟a)、先用細胞專用的采樣器在宮頸處采集細胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細胞樣本沉浸于細胞變性恢復液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
而醋酸乙醇混合固定液是采用含0.1％-5％以上的醋酸乙醇混合液。玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
而經(jīng)細胞變性恢復液沉浸玻片再放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。所述冷凍器是電冰箱。所述變性恢復液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液，該液體較易穿透變性的粘液及細胞膜及細胞核內(nèi)，達到進一步固定，增強粘液及細胞的滲透性，起到冰凍膨脹性裁體的作用而恢復細胞的形態(tài)和促進細胞染色，有利于對細胞形態(tài)的觀察。
技術(shù)的原理經(jīng)過醋酸乙醇混合固定液固定后的粘液及細胞，在這些固定液的作用下起到保持細胞活時的良好形態(tài)，其粘液內(nèi)的蛋白分子發(fā)生構(gòu)變，形成一層較為致密的膜狀物粘附并包裹于細胞的周圍，細胞固定后細胞內(nèi)的各種成分亦發(fā)生形態(tài)同步性濃縮構(gòu)變，盡管起到相對保持細胞形態(tài)的作用，但細胞及細胞內(nèi)成分收縮明顯，變形的粘液分子發(fā)生絞連，致密地封閉在細胞的周圍，經(jīng)醋酸乙醇混合液固定的細胞玻片或干燥變性的細胞玻片經(jīng)變性恢復液進一步處理后，由于變性恢復液本身具有較強的滲透作用而迅速進入粘液及細胞內(nèi)，在低溫下(零度以下)冰箱內(nèi)速凍，應用水性液體在冰體狀態(tài)下體積機械性膨脹擴張的原理，滲透入粘液及細胞內(nèi)的液體在冷凍狀態(tài)下形成冰晶，在細胞內(nèi)膨脹直至細胞膜達到張力自限時恢復細胞生活時的形態(tài)及體積，粘液內(nèi)浸入變性恢復液后在冷凍狀態(tài)下冰晶膨脹于具有一定程度變性絞連的糖蛋白粘液分子之間，致使絞連分子解開絞合，各種細胞及細胞成分以及粘液分子布散于恢復液形成的冰晶之間，形態(tài)上粘液變得松散稀薄，粘液分子與細胞之間黏附松解，細胞各成分滲透性明顯增強。經(jīng)過上述處理后，附有細胞的玻片直接進入染色劑內(nèi)染色，細胞著色顯著改善，核漿及細胞各成分清晰，細胞與細胞之間境界清楚，分辨較佳，核漿著色分明，顯著地改善了傳統(tǒng)巴氏涂片細胞染色不佳的狀態(tài)，即使涂片具有一定的重疊，但細胞的輪角仍然清晰可辨，特別適用于大批量婦檢時由于細胞玻片未能及時處理而長時間干燥留置后玻片細胞的修復處理，對恢復變性細胞形態(tài)及保持良好的染色效果起到重要作用。
權(quán)利要求
1.冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，包括以下步驟a)、先用細胞專用的采樣器在宮頸處采集細胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細胞樣本沉浸于細胞變性恢復液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，所述醋酸乙醇混合固定液的濃度為含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，所述玻片放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，所述冷凍器是電冰箱。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述冷凍式巴氏涂片檢測方法，其特征是，所述變性恢復液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種冷凍式巴氏涂片檢測方法，其包括以下步驟a)先用細胞專用的采樣器在宮頸處采集細胞樣本；b)然后將采樣器采集的細胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)再把上述涂沫有細胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細胞樣本被固定后，取出；d)將上述取出的玻片上的細胞樣本沉浸于細胞變性恢復液中1－5分鐘，取出；e)再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細胞樣本內(nèi)滲入的水分形成冰晶；f)最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷，因而具有成本低廉，細胞著色良好，操作簡單，實用性強的優(yōu)點。
文檔編號A61B10/00GK1854709SQ20051003432
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月29日
發(fā)明者毛榮軍 申請人:佛山市順德區(qū)桂洲醫(yī)院