專利名稱：甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體是一種甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法。
背景技術(shù)：
1997年人重組甲狀旁腺激素(1～84氨基酸)已在進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)，Lilly的甲狀旁腺激素(1～34)產(chǎn)品特立帕肽(Teriparatide Forteo)2002年6月經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用于治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥和原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。由于甲狀旁腺激素的血漿半衰期很短(20-30min)，不被直接吸收、治療周期長，目前甲狀旁腺激素治療采用每周3～5次皮下注射40～100微克，長時間治療病人難以耐受，上述原因給甲狀旁腺激素用藥治療帶來很大困難，因此需要研究甲狀旁腺激素緩釋劑型。目前有關(guān)甲狀旁腺激素緩釋微球，制備方法尚停留于傳統(tǒng)復(fù)乳法簡單修改，Christopher Breuer等制備的甲狀旁腺激素緩釋聚乳酸羥基乙酸共聚物微球體外釋放曲線存在嚴(yán)重的突釋現(xiàn)象，第一天釋放69％。Peter X.Ma等制備了甲狀旁腺激素聚乳酸羥基乙酸共聚物微球，體外生物活性測試結(jié)果顯示24小時的生物學(xué)活性下降至6小時的40％。
目前有關(guān)PTH緩釋微球的研究尚停留于傳統(tǒng)復(fù)乳法簡單修改。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Christopher Breuer等在Journal of Pediatric Surgery(兒童外科雜志)2005年第40期第81-85頁，文章題名“Development of a parathyroidhormone-controlled release system as a potential surgical treatment forhypoparathyroidism”(甲狀旁腺激素緩釋系統(tǒng)用于治療甲狀旁腺激素功能減退的研究進(jìn)展)，提出采用甲狀旁腺激素(4.76％，w/w)和聚乳酸羥基乙酸共聚物(95.24％，w/w)制備緩釋微球。將PTH磷酸鹽-生理鹽水溶液逐滴滴加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷中，經(jīng)渦旋、冰浴超聲形成初乳液，初乳再加至濃度1％PVA溶液中超聲形成復(fù)乳，繼續(xù)將復(fù)乳轉(zhuǎn)移至3％PVA溶液中，，室溫下攪拌3小時除去二氯甲烷，離心搜集微球，冷凍干燥得到微球。但是所得到的微球體外釋放曲線存在嚴(yán)重的突釋現(xiàn)象，第一天釋放出69％，沒有達(dá)到理想的緩釋效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，使其可以改善微球的釋放曲線，提高載藥量，并在制劑、貯存、釋放過程中穩(wěn)定甲狀旁腺激素。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明所述的甲狀旁腺激素緩釋微球組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％、小分子糖0-10％、緩釋高分子75-95％，其制備方法包括以下步驟a)將甲狀旁腺激素先溶于高分子多糖水溶液中作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，采用磁力攪拌或者勻漿的方式，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿或者磁力攪拌將初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
所述的高分子多糖為葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質(zhì)酸、海藻酸鹽中的一種或者任意混合；可以在高分子多糖中添加小分子糖，提高干燥過程中多肽的穩(wěn)定性。
所述的緩釋高分子選用聚乳酸或乳酸和羥基乙酸的共聚物。
所述的甲狀旁腺激素是由84個氨基酸殘基組成的一條直鏈多肽分子，分子質(zhì)量9000，氨基端是活性端，與靶組織受體結(jié)合后引起生物效應(yīng)，羧基端不具有生物活性，生物活性部分主要在氨基端1～34；甲狀旁腺激素也可以是由1-34位氨基酸組成的多肽分子。
所述的甲狀旁腺激素與高分子多糖的重量百分比從10/1至1/10。
其內(nèi)水相與聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相重量百分比從1/2至1/50，優(yōu)選為1/5至1/10。
步驟b)，將內(nèi)水相分散于聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相形成初乳時磁力攪拌或者勻漿的速率為2500-10000rpm、時間為2-5分鐘。
步驟c)制備“W/O/W”復(fù)乳的外水相溶液的組成重量百分比為聚乙烯醇0.1-5％，氯化鈉0.5-20％，外水相需用二氯甲烷進(jìn)行飽和吸收。
步驟c)，制備W/O/W復(fù)乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為1500-3500rpm、時間為30-50秒。
步驟d)，所用的氯化鈉溶液的濃度為0.5-25％，進(jìn)一步為5-10％，攪拌時間3-4小時。
本發(fā)明以可降解高分子材料聚乳酸-羥基乙酸共聚物為基質(zhì)，高分子多糖顆粒作為“內(nèi)親水相”，在內(nèi)水相中加入高分子多糖可以和緩釋高分子共同調(diào)節(jié)甲狀旁腺激素的釋放速率，根據(jù)治療需要控制釋放速率；在內(nèi)水相中加入高分子多糖可以阻滯甲狀旁腺激素向外水相泄漏，從而提高微球載藥量；在內(nèi)水相中加入高分子多糖通過增大粘度降低甲狀旁腺激素分子的可動性，減少聚集現(xiàn)象的發(fā)生；高分子多糖與甲狀旁腺激素有很好的生物相容性，可以減少高由于甲狀旁腺激素與高分子的直接接觸而引起的吸附，可以提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過程中的穩(wěn)定性。本發(fā)明制得的微球可以改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過程中的穩(wěn)定性、增加微球的載藥量，可持續(xù)釋放半個月至三個月且第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1甲狀旁腺激素微球制備及體外釋放實(shí)驗(yàn)a)將甲狀旁腺激素(2％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(1％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(95％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，采用磁力攪拌10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；
c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
精密稱量10mg微球，加入1mlPBS溶液，于37℃、60rpm氣浴搖床培養(yǎng)，定時取出上清夜并補(bǔ)加緩沖介質(zhì)，采用microbca的方法測試上清夜中甲狀旁腺激素含量，扣除空白微球讀數(shù)，計算微球釋放度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲狀旁腺激素微球組合物平穩(wěn)緩釋，第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例2a)將甲狀旁腺激素(20％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(3％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，采用磁力攪拌2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本發(fā)明實(shí)施例的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例3a)將甲狀旁腺激素(11％，w/w)先溶于高分子多糖(2％，w/w)、小分子糖(2％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(85％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，采用磁力攪拌6250rpm，3.5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。甲狀旁腺激素微球組合物平穩(wěn)緩釋，第一天突釋不大于藥物載量的15％，總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例4a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶于高分子多糖(20％，w/w)、小分子糖(0％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液400mg中，勻漿10000rpm，2分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(0.1％，w/w)和氯化鈉(20％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，1500rpm，50秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃0.5％氯化鈉溶液中，攪拌3小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本發(fā)明實(shí)施例制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例5a)將甲狀旁腺激素(5％，w/w)先溶于高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(10％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液4.2g中，勻漿2500rpm，5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(5％，w/w)和氯化鈉(0.5％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，3500rpm，30秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃25％氯化鈉溶液中，攪拌4小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本實(shí)施例制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
實(shí)施例6a)將甲狀旁腺激素(10％，w/w)先溶于高分子多糖(10％，w/w)、小分子糖(5％，w/w)水溶液200mg作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物(75％，w/w)的二氯甲烷溶液10g中，勻漿6250rpm，3.5分鐘，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇(2.55％，w/w)和氯化鈉(10.25％，w/w)水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿方式，2500rpm，40秒，初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃12.75％氯化鈉溶液中，攪拌3.5小時，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。本實(shí)施例制得的微球總釋放量接近或不低于藥物載量的85％，無突釋及不完全釋放現(xiàn)象。
權(quán)利要求
1.一種甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征在于，所述的甲狀旁腺激素緩釋微球組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2-20％、高分子多糖2-20％、小分子糖0-10％、緩釋高分子75-95％，其制備包括以下步驟a)將甲狀旁腺激素先溶于高分子多糖水溶液中作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，采用磁力攪拌或者勻漿的方式，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，采用勻漿或者磁力攪拌將初乳進(jìn)一步乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將上述W/O/W復(fù)乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥10小時，得到甲狀旁腺激素緩釋微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，所述的高分子多糖為葡聚糖、可溶性纖維素衍生物、透明質(zhì)酸、海藻酸鹽中的一種或者任意混合；或者在高分子多糖中添加小分子糖，提高干燥過程中多肽的穩(wěn)定性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，所述的緩釋高分子選用聚乳酸或乳酸和羥基乙酸的共聚物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，所述的甲狀旁腺激素是由84個氨基酸殘基組成的一條直鏈多肽分子，分子質(zhì)量9000；或者是包括生物活性部分的氨基端1～34，即34個氨基酸組成的多肽分子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或者4所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，所述的甲狀旁腺激素與高分子多糖的重量百分比從10/1至1/10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，其內(nèi)水相與聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相重量百分比從1/2至1/50。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，步驟b)，將內(nèi)水相分散于聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液相形成初乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為2500-10000rpm、時間為2-5分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，步驟c)，制備“W/O/W”復(fù)乳的外水相溶液的組成重量百分比為聚乙烯醇0.1-5％，氯化鈉0.5-20％，外水相需用二氯甲烷進(jìn)行飽和吸收。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或者8所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，步驟c)，制備W/O/W復(fù)乳時，磁力攪拌或者勻漿的速率為1500-3500rpm、時間為30-50秒。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，其特征是，步驟d)，所用的氯化鈉溶液的濃度為0.5-25％，攪拌時間3-4小時固化，使微球。
全文摘要
一種藥物技術(shù)領(lǐng)域的甲狀旁腺激素緩釋微球的制備方法，所述的緩釋微球各組分及重量百分比為甲狀旁腺激素2－20％、高分子多糖2－20％，小分子糖0－10％、緩釋高分子75－95％，制備步驟a)將甲狀旁腺激素先溶于高分子多糖水溶液中作為內(nèi)水相；b)內(nèi)水相加至聚乳酸羥基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中，形成W/O初乳；c)4℃聚乙烯醇和氯化鈉的水溶液作為外水相，先用二氯甲烷飽和外水相，初乳加至其中，將初乳乳化形成W/O/W復(fù)乳；d)將W/O/W復(fù)乳加入4℃氯化鈉溶液中，攪拌，使微球固化；e)將固化的微球用水洗去聚乙烯醇和氯化鈉后冷凍干燥。本發(fā)明可改善甲狀旁腺激素微球的釋放曲線，提高甲狀旁腺激素在制劑、貯存、釋放過程中的穩(wěn)定性、增加微球的載藥量。
文檔編號A61K9/16GK1739795SQ20051002927
公開日2006年3月1日 申請日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月31日
發(fā)明者金拓, 吳飛 申請人:上海交通大學(xué)