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紫鉚素及其衍生物在制備色素代謝疾病藥物的用途的制作方法

文檔序號(hào):1082583閱讀:326來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:紫鉚素及其衍生物在制備色素代謝疾病藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種化合物及其衍生物的新用途,具體來(lái)說(shuō),是紫鉚素(Butin)及其衍生物在制備治療色素代謝疾病如白癜風(fēng)和白發(fā)的藥物的用途。
背景技術(shù)
白癜風(fēng)是常見(jiàn)的一種局限性色素減退性皮膚病,發(fā)病率為0.5-2.0%,由于致病原因和發(fā)病機(jī)理目前尚未明確,國(guó)際上至今仍處于易診難治的狀況。該病被世界醫(yī)學(xué)界列為疑難病癥之一。目前白癜風(fēng)的藥物治療方法有補(bǔ)骨脂素聯(lián)合UVA治療、皮質(zhì)激素療法、凱林聯(lián)合UVA療法、金屬元素配合PUVA療法、苯丙氨酸配合UVA療法以及中藥療法。
驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊為菊科植物驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊Vernonia anthelmintica Willd的瘦果。于夏秋果實(shí)成熟時(shí)割??;或分別割取成熟果枝,打下果實(shí),存于陰涼干燥處。原產(chǎn)于印度、巴基斯坦,中國(guó)新疆已有長(zhǎng)約四百年的栽培歷史。主要分布于新疆阿克蘇地區(qū)。是新疆維吾爾民間治療白癜風(fēng)的藥物,在70年代新疆藥學(xué)研究人員將其制成醫(yī)院制劑,應(yīng)用于臨床治療白癜風(fēng),治愈率為7-20%,有效率大于90%,并且未見(jiàn)毒副作用。但是至今對(duì)驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊中的有效成分尚不清楚。為此,本發(fā)明人進(jìn)行了進(jìn)一步的篩選分離工作,發(fā)現(xiàn)了驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊治療白癜風(fēng)和白發(fā)等其他色素代謝疾病的化合物為紫鉚素(Butin),從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供紫鉚素(Butin)及其衍生物在制備治療色素疾病如白癜風(fēng)和白發(fā)的藥物的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的紫鉚素為3’-4’-7-三羥基二氫黃酮,結(jié)構(gòu)式為 紫鉚素衍生物包括在5,6,7,8,3’,4’,5’,6’被-OH,-OR或-R取代的一組化合物及生成的糖苷類化合物,其中R為C1-C8的烴基。
它可以從植物驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊種子或其他植物如菊科秋英屬植物(Cosmos sulphureus)黃秋英,金雞菊屬(Coreopsis tinctoria)金雞菊等植物中提取獲得,也可以通過(guò)化學(xué)合成獲得,如芳香族的醛類于2,4-二羥基苯乙酮縮合。如果從驅(qū)蟲(chóng)斑鳩菊種子中提取獲得,提取方法之一為用甲醇加熱回流,得到甲醇提取液,減壓回收,濃縮,得到濃縮液,用乙酸乙酯和水分配,取乙酸乙酯層,將上清液通過(guò)硅膠柱層析,用氯仿-甲醇梯度洗脫,得到洗脫液,再在硅膠柱層析用石油醚-丙酮(4∶1-1∶1)洗脫,將洗脫液,再用葡聚糖凝膠LH-20用50-80%甲醇洗脫,得到洗脫液,再用十八烷基鍵合硅膠層析,用50-100%甲醇洗脫,得到洗脫液,再用硅膠柱層析用氯仿-甲醇(10-25∶1)洗脫,得到。經(jīng)過(guò)譜學(xué)鑒定證實(shí)為紫鉚素。
我們進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí),紫鉚素可使黑色素細(xì)胞增殖,酪氨酸酶的活性提高,黑色素含量增高,可提高黑色素合成基因(酪氨酸酶基因.酪氨酸酶相關(guān)基因-1、酪氨酸酶相關(guān)基因-2)的表達(dá),使黑色素小體類型發(fā)生明顯變化,更趨向于色素顆粒的產(chǎn)生。紫鉚素對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫具有抑制作用。通過(guò)對(duì)脾細(xì)胞增殖及分泌IL-2活性分析,進(jìn)一步在分子水平顯示紫鉚素對(duì)免疫系統(tǒng)具有抑制作用。紫鉚素對(duì)黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19,SKMel-23,Mel-2A,MeWo,Bro.表現(xiàn)出了抑制作用。
附圖簡(jiǎn)介

圖1-----紫鉚素及其衍生物在體外對(duì)黑色素含量的影響。
圖2-----紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性的影響。
圖3-----紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞增殖的影響圖4-----紫鉚素在體外對(duì)黑色素合成基因表達(dá)影響圖5-----紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞中黑色素小體的影響圖6-----紫鉚素在對(duì)棕色豚鼠皮膚黑色素細(xì)胞的影響圖7-----紫鉚素在體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。
圖8-----紫鉚素在體外對(duì)小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2活性的影響。
具體的實(shí)施方案實(shí)驗(yàn)例1紫鉚素的體外藥效學(xué)研究因白癜風(fēng)患者皮損區(qū)的色素細(xì)胞及其功能受損,我們研究了紫鉚素對(duì)體外培養(yǎng)的人體黑色素細(xì)胞的影響。
1.1.實(shí)驗(yàn)方案1.1.1篩選模型正常人黑色素細(xì)胞;1.1.2.來(lái)源兒童包皮環(huán)切手術(shù)的多余包皮,無(wú)感染。
1.1.3.培養(yǎng)條件取正常兒童包皮胰酶消化后獲得黑色素細(xì)胞,在DMEM培養(yǎng)基中添加bFGF,CT,TPA,F(xiàn)CS,雙抗等各種因子,5%CO2,37℃條件下培養(yǎng)7天后進(jìn)行傳代,傳代細(xì)胞在上述條件下培養(yǎng)48小時(shí)后加入不同濃度的藥物和對(duì)照,測(cè)定相關(guān)分析指標(biāo)。
1.1.4.測(cè)定方法細(xì)胞增值用MTT法;酪氨酸酶活性測(cè)定用多巴染色法;黑色素含量用堿消化法;黑色素合成基因(酪氨酸酶基因.酪氨酸酶相關(guān)基因-1、酪氨酸酶相關(guān)基因-2)的表達(dá)用Northern Blotting;電鏡分析用掃描電鏡。
1.2.結(jié)果1.2.1.紫鉚素及其衍生物在體外對(duì)黑色素細(xì)胞中黑色素的影響紫鉚素及其衍生物在體外對(duì)黑色素細(xì)胞中合成黑色素的含量有提高作用,見(jiàn)圖1。其中化合物為紫鉚素(Butin) 分子式C15H12O5分子量272kD
紫鉚素衍生物I紫鉚查爾酮(Butein) 分子式C15H12O5分子量272kD紫鉚素衍生物II5,6,7,4′-四羥基黃酮 分子式C15H10O6分子量286kD1.2.2.紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞中酪氨酸酶活性的影響紫鉚素在體外可提高黑色素細(xì)胞中酪氨酸酶的活性,見(jiàn)圖2。
1.2.3.紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞增值的影響紫鉚素可促進(jìn)黑色素細(xì)胞增殖,見(jiàn)圖3。
1.2.4.紫鉚素在體外對(duì)黑色素合成基因表達(dá)的影響對(duì)其機(jī)理探討得出紫鉚素可提高黑色素合成基因(酪氨酸酶基因.酪氨酸酶相關(guān)基因-1、酪氨酸酶相關(guān)基因-2)的表達(dá),見(jiàn)圖4。
1.2.5.紫鉚素在體外對(duì)黑色素細(xì)胞中黑色素小體的影響從電鏡分析可看到黑色素小體類型發(fā)生明顯變化,更趨向于色素顆粒的產(chǎn)生。見(jiàn)圖5。
實(shí)驗(yàn)例2.紫鉚素的體內(nèi)藥效學(xué)研究通過(guò)灌胃給藥觀察紫鉚素對(duì)棕色豚鼠體內(nèi)黑色素細(xì)胞在基底層所含比例的影響。
2.1.實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)動(dòng)物英國(guó)短毛棕色豚鼠,新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。受試藥物設(shè)置紫鉚素高濃度組8.74mg/kg(按最大耐受量的1/25計(jì)算)中濃度組4.37mg/kg(按最大耐受量的1/50計(jì)算)低濃度組2.19mg/kg(按最大耐受量的1/100計(jì)算)陽(yáng)性對(duì)照組8-MOP(8甲氧基補(bǔ)骨脂素,中國(guó)藥品生物制品鑒定所)陰性對(duì)照組2.5%氫醌空白對(duì)照組;生理鹽水2.2.動(dòng)物模型的建立先外用氫醌和補(bǔ)骨脂(8-MOP),觀察氫醌、8-MOP對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響外用氫醌后,可使有色豚鼠皮膚基底層增厚,使黑色素生成減少這一結(jié)果與有關(guān)文獻(xiàn)相符;使用8-MOP后,可使有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞增加。確定模型成立。
2.3.結(jié)果紫鉚素可提高有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的比例。高、中、低劑量的紫鉚素可以使用藥前后有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞有顯著性變化(P<0.05);高、中、低劑量的紫鉚素組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05),但在數(shù)值上有變化。其中中劑量組對(duì)有色豚鼠皮膚基底層黑色素細(xì)胞的影響較大。見(jiàn)圖6。
實(shí)驗(yàn)例3.紫鉚素對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響3.1.實(shí)驗(yàn)方案3.1.1.實(shí)驗(yàn)?zāi)P团囵B(yǎng)昆明系新生小鼠脾細(xì)胞。
3.1.2.動(dòng)物來(lái)源新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
3.1.3.培養(yǎng)條件取昆明系新生小鼠脾臟胰酶消化后獲得脾細(xì)胞,在RPMI1640培養(yǎng)基中添加FCS,雙抗等各種因子,5%CO2,37℃條件下培養(yǎng)下培養(yǎng)48小時(shí)后加入不同濃度的藥物和對(duì)照,測(cè)定相關(guān)分析指標(biāo)。
3.2.結(jié)果由于目前病因研究多支持白癜風(fēng)的發(fā)病與免疫系統(tǒng)有關(guān),發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者體內(nèi)有特異性抗體存在。進(jìn)行紫鉚素對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)影響的研究結(jié)果顯示紫鉚素對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫具有抑制作用。通過(guò)對(duì)脾細(xì)胞及脾細(xì)胞分泌IL-2活性分析,進(jìn)一步在分子水平顯示紫鉚素對(duì)免疫系統(tǒng)具有抑制作用,見(jiàn)圖7,8。
實(shí)驗(yàn)例4.紫鉚素在體外對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的影響由于紫鉚素可使黑色素細(xì)胞增殖,我們考察了其在體外對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的影響。
4.1.篩選模型黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19,SKMel-23,Mel-2A,MeWo,Bro;4.2.來(lái)源德國(guó)柏林自由大學(xué)本杰明·富蘭克林醫(yī)學(xué)研究中心。
4.3.培養(yǎng)條件在DMEM培養(yǎng)基中添加FCS,雙抗等各種因子,5%CO2,37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)后加入不同濃度的藥物和對(duì)照,測(cè)定相關(guān)分析指標(biāo)。
4.4.測(cè)定方法細(xì)胞增值用MTT法4.5.結(jié)果紫鉚素可對(duì)黑色素瘤細(xì)胞系SKMel-19,SKMel-23,Mel-2A,MeWo,Bro表現(xiàn)出了不同程度的抑制作用。
權(quán)利要求
1.紫鉚素(Butin)及其衍生物在制備增殖黑色素細(xì)胞、提高酪氨酸酶的活性和增高黑色素含量藥物的用途,其中所述的紫鉚素及其衍生物的結(jié)構(gòu)式為 在5,6,7,8,3’,4’,5’,6’可以被-OH,-OR,或-R取代的一組化合物及生成的糖苷類化合物,其中R為C1-C8的烴基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途,其中所述的藥物為治療色素代謝疾病的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途,其中所述的藥物為治療白癜風(fēng)的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途,其中所述的藥物為治療白發(fā)的藥物。
5.權(quán)利要求1所述的紫鉚素及其衍生物在制備抑制免疫系統(tǒng)作用藥物的用途。
6.權(quán)利要求1所述的紫鉚素及其衍生物在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了紫鉚素(Butin)及其衍生物在制備增殖黑色素細(xì)胞、提高酪氨酸酶的活性和增高黑色素含量藥物的用途,尤其是制備治療色素代謝疾病如白癜風(fēng)和白發(fā)的藥物。紫鉚素及其衍生物在制備抑制免疫系統(tǒng)作用藥物的用途。紫鉚素及其衍生物在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。紫鉚素化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)上圖。
文檔編號(hào)A61P37/06GK1778294SQ20041009132
公開(kāi)日2006年5月31日 申請(qǐng)日期2004年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月23日
發(fā)明者尚靖, 徐建國(guó), 于魯海, 孫力, 李紅健 申請(qǐng)人:尚靖
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