專利名稱：一種具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健品領(lǐng)域。具體涉及一種具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品及制備方法。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)的發(fā)展，人們的工作壓力日益加重，所以人們一直期待著能在日常生活的不經(jīng)意之中，同時(shí)能獲得既緩解體力疲勞又抵抗自身氧化的具有雙重保健作用的保健品，以提高身體素質(zhì)，改善生活質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于在傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的經(jīng)典理論指導(dǎo)下，運(yùn)用現(xiàn)代中藥學(xué)制劑工藝，提供一種能同時(shí)解除疲勞和抗氧化的保健品。
本發(fā)明公開(kāi)的具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品由主要含銀杏葉、肉蓯蓉、山藥、人參活性成分以及其他輔料制成的口服制劑。
本發(fā)明各活性成分占總活性成分重量百分比含量為銀杏葉16-32％、肉蓯蓉32-56％、山藥16-32％、人參2-5％。
本發(fā)明所述其他輔料包括各種營(yíng)養(yǎng)成分，食品添加劑和藥用輔料等，如維生素E及紫蘇油等。
本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于公開(kāi)上述具有抗疲勞和抗氧化功能保健品的制備方法。
本發(fā)明上述保健品的制備包括下列步驟
1.銀杏葉和山藥、肉蓯蓉和人參分成二組，分別洗凈，切成片或絲，用水和/或乙醇浸泡，回流提?。?.將上述二組提取液合并離心分離，上清液濃縮，噴霧干燥，即得混合粉；3.將上述混合粉按常規(guī)方法制成各種口服制劑；4.用分光光度計(jì)檢測(cè)制劑中總黃酮含量以蘆丁計(jì)不小于2021mg/100g，粗多糖以葡萄糖計(jì)不小于404.2mg/100g，總皂甙以人參皂甙苷Re計(jì)不小于853.5mg/100g。
在本發(fā)明保健品配方中銀杏葉是主要原料之一，有實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道以適量游泳和疲勞游泳的小鼠通過(guò)灌服銀杏葉提取物建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察其心肌線粒體的抗氧化酶的活力和脂質(zhì)過(guò)氧化水平。灌服銀杏葉提取物的小鼠通過(guò)適量游泳和疲勞游泳后，抗氧化酶(SOD)的活力均顯著高于各自的對(duì)照組，丙二醛(MDA)的含量均顯著低于各自的對(duì)照組。結(jié)果提示，通過(guò)服用銀杏葉提取物可減輕由運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的內(nèi)源性自由基對(duì)小鼠的傷害，銀杏葉提取物具有較強(qiáng)的抗自由基損傷和抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的作用，是天然的自由基清除劑。
許多研究已表明，機(jī)體內(nèi)活性氧、自由基過(guò)量會(huì)引起脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)變性、酶失活、多糖降解、DNA鏈斷裂、生物結(jié)構(gòu)受損、細(xì)胞解體乃至機(jī)體病變和死亡。因此，清除過(guò)量活性氧、自由基，其生理意義重大。銀杏葉黃酮W和H都具有較強(qiáng)的清除活性氧和自由基的作用，是一種功能較多的抗氧化劑。
肉蓯蓉為多年生寄生草本植物，味甘酸、性溫，具有補(bǔ)腎益精，潤(rùn)燥滑腸等功能。藥理實(shí)驗(yàn)表明，小鼠游泳實(shí)驗(yàn)是一種負(fù)荷性強(qiáng)體力活動(dòng)，直到動(dòng)物體力消耗殆盡而下沉。實(shí)驗(yàn)組給小鼠口飼肉蓯蓉煎液，能延長(zhǎng)缺氧小鼠的存活時(shí)間，因而肉蓯蓉對(duì)心臟和腦組織缺氧有明顯的保護(hù)作用。說(shuō)明肉蓯蓉煎劑可能有增強(qiáng)體質(zhì)，對(duì)抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用，而使小鼠游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)。在肉蓯蓉的抗氧化作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，采用鄰苯三酚自氧化、硫代巴比妥酸(TBA)和熒光法，分別測(cè)定小鼠心、肝、腦、腎組織中SOD活性、MDA及脂褐質(zhì)含量。結(jié)果肉蓯蓉總甙GCS(125mg/kg，250mg/kg)組能顯著提高腦、腎組織中SOD活性，250mg/kg組提高心、肝組織中SOD活性，并顯著降低各組織MDA及脂褐質(zhì)含量。結(jié)果提示GCS能有效地提高機(jī)體組織抗氧化能力，防止組織脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。
山藥是常用的中藥，具有補(bǔ)肺養(yǎng)胃、生津益肺、補(bǔ)腎澀精之功。實(shí)驗(yàn)證明中醫(yī)藥在清除體內(nèi)自由基、提高機(jī)體抗氧化能力方面具有較大優(yōu)勢(shì)，已有不少發(fā)現(xiàn)，山藥就具有較好的抗氧化作用，山藥多糖能明顯提高衰老模型小鼠血紅細(xì)胞中SOD活力及血CAT活力，提高機(jī)體抗氧化活性，抑制脂褐質(zhì)等的形成，使衰老模型小鼠血、腦勻漿和肝勻漿中LPO水平明顯降低。這和中醫(yī)臨床認(rèn)為的山藥具有補(bǔ)中益氣及古代文獻(xiàn)記載的輕身延年等作用相一致。從而提示山藥多糖的抗氧化作用可能是山藥補(bǔ)益抗衰的部分機(jī)理。
人參皂甙是中藥人參的重要化學(xué)成分，其水解產(chǎn)物包括人參二醇、人參三醇、齊墩果酸等多種皂甙元。強(qiáng)制運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)機(jī)體的對(duì)抗是疲勞抑制的生理機(jī)制起作用，負(fù)荷終止后是疲勞恢復(fù)的生理機(jī)制作用的原理，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明人參及其配伍具有明顯的抗疲勞作用。有實(shí)驗(yàn)表明人參Rb組皂苷50mg/Kg、100mg/Kg、200mg/Kg劑量組對(duì)急性心肌梗死24h大鼠均可明顯縮小其心肌梗死面積，降低血清CK、LDH活性，并明顯降低血清LPO含量，提高SOD、CAT及GSH-Px活性，可以得出結(jié)論人參Rb組皂苷對(duì)大鼠急性心肌梗死具有明顯保護(hù)作用，可能與其對(duì)抗氧自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化酶活性，減少自由基對(duì)心肌的氧化損傷有關(guān)。另實(shí)驗(yàn)證明，人參可使血漿和組織中的MDA降低，紅細(xì)胞的SOD活性增強(qiáng)，說(shuō)明人參具有抗氧化作用。
抗氧化劑通過(guò)控制自由基來(lái)促進(jìn)人體免疫系統(tǒng)。自由基是氧的一些不穩(wěn)定形式，會(huì)損害人體的一些重要脂肪，從而損傷人體細(xì)胞。維生素E、C和A等抗氧化性物質(zhì)可以控制這些自由基，保護(hù)人體免疫系統(tǒng)，從而可以緩解人們心理和生理上的壓力。維生素E通過(guò)減少疲勞性游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)小白鼠的MDA生成和提高SOD活性，對(duì)機(jī)體起到一定保護(hù)作用。另外，維生素E的抗氧化功能表現(xiàn)在維生素E能通過(guò)自身被氧化成生育醌，從而將ROO-轉(zhuǎn)變成化學(xué)性質(zhì)不活潑的ROOH，中斷脂類過(guò)氧化的連鎖反應(yīng)，有效抑制脂類的過(guò)氧化作用，保護(hù)細(xì)胞免受不飽和脂肪酸氧化產(chǎn)生的毒性物質(zhì)的傷害，在防止衰老、腫瘤等方面起著重要作用，若在本發(fā)明保健品中添加維生素E，則可進(jìn)一步增強(qiáng)抗疲勞和抗氧化作用。
綜上所述，以上配方，每味都有現(xiàn)代藥理基礎(chǔ)及臨床研究依據(jù)，以銀杏葉為君藥，以肉蓯蓉、山藥為臣輔之，佐以人參，組方符合中醫(yī)藥理論，其制劑可達(dá)到緩解體力疲勞和抗氧化的保健功能。
對(duì)本發(fā)明保健品杏靈牌力能保軟膠囊進(jìn)行食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，證明安全無(wú)毒1.急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)SD大鼠和昆明種小鼠的急性經(jīng)口LD50均大于15g/kg.bw，判屬無(wú)毒類。
2.遺傳毒性試驗(yàn)Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，表明本檢品無(wú)致突變作用。
3.大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)中(最高劑量為人體推薦攝入量的100倍)，受試物未引起大鼠整體健康狀況、生理生化功能和器官組織形態(tài)學(xué)等各項(xiàng)重要指標(biāo)的異常變化，初步估計(jì)最大無(wú)作用劑量大于3.3g/kg.bw(人體推薦攝入量的100倍)。
對(duì)本發(fā)明保健品杏靈牌力能保軟膠囊進(jìn)行抗疲勞抗氧化功效試驗(yàn)1.緩解體力疲勞功能動(dòng)物試驗(yàn)杏靈牌力能保軟膠囊按人體推薦劑量的10、20、30倍經(jīng)口灌胃給予受試動(dòng)物30天。結(jié)果顯示杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重?zé)o不良影響0.66g/kg.bw劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P＜0.05)；1.00g/kg.bw劑量組小鼠肝糖原含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)、尿素氮含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。三個(gè)劑量組小鼠游泳后20min的血乳酸含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊具有緩解體力疲勞的作用。
2.抗氧化功能動(dòng)物試驗(yàn)采用老齡鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，設(shè)0.17g/kg.bw、0.34g/kg.bw和0.68g/kg三個(gè)劑量組(分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的5、10和20倍)，同時(shí)設(shè)一個(gè)老齡對(duì)照和年輕對(duì)照組。結(jié)果表明受試物高劑量組的紅細(xì)胞MDA含量顯著低于對(duì)照組，全血中GSH-Px的活力顯著高于對(duì)照組(P＞0.05)。按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊抗氧化功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。
3.抗氧化功能人體試食試驗(yàn)杏靈牌力能保軟膠囊抗氧化作用人體試食試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)期間受試者的精神、飲食、睡眠、大小便等未見(jiàn)異常，表明本檢品對(duì)人體無(wú)不良影響。試驗(yàn)組受試者在試驗(yàn)后的SOD活性顯著高于試驗(yàn)前(P＜0.05)亦顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。試食組試驗(yàn)后MDA含量和GSH-Px活性與試驗(yàn)前比較無(wú)顯著變化，與對(duì)照組比較亦無(wú)顯著差異。按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊有抗氧化功能。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1緩解體力疲勞功能動(dòng)物試驗(yàn)1.材料與方法1.1.樣品1.1.杏靈牌力能保軟膠囊，褐色油膏狀，由上海杏靈科技藥業(yè)股份有限公司提供，人體推薦劑量為2.0g/人/日。
1.2.試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)ICR雄性小白鼠，體重為18g-22g。
1.3.實(shí)驗(yàn)方法將體重為18g-22g的ICR雄性小白鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、三個(gè)杏靈牌力能保軟膠囊試驗(yàn)組，試驗(yàn)組動(dòng)物分別按人體推薦劑量2.0g/日(0.033g/kg.bw)的10倍、20倍、30倍(0.33g/kg.bw、0.66g/kg.bw、1.0g/kg.bw)連續(xù)灌胃給予受試物，每天一次，共30天?？瞻讓?duì)照組動(dòng)物每天用蒸餾水灌胃，各組動(dòng)物灌胃30天后分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。
1.3.1.負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o予受試樣品30min后，將尾根部負(fù)荷5％體重鉛皮的小鼠置于游泳箱中游泳。箱中水深不少于30cm，水溫25℃±1℃，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間。
1.3.2.血乳酸測(cè)定末次給樣30min后，將動(dòng)物置溫度為30℃的水中不負(fù)重游泳10min，并于游泳前、游泳后立即休息20min后各采眼球血20μL測(cè)定乳酸含量。并按以下公式計(jì)算血乳酸曲線下面積，以判斷運(yùn)動(dòng)后血乳酸變化情況。
血乳酸曲線下面積＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min血乳酸值+2×游泳后休息20min血乳酸值)1.3.3.血清尿素氮測(cè)定末次給受試樣品30min后，將小鼠置溫度為30℃的水中不負(fù)重游泳90min，休息60min后采眼球血0.5mL，血凝固后取血清用二乙酰-肟法測(cè)定血清尿素氮含量。
1.3.4.肝糖原測(cè)定于末次給樣后30min處死動(dòng)物，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干后置于冰面上的平皿內(nèi)，迅速稱取肝臟100mg，測(cè)定肝糖原含量(蒽酮法)。
1.4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件3.0版對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，方差不齊者使用秩和檢驗(yàn)。
2.結(jié)果2.1.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響見(jiàn)表1-4。
表1-4顯示，杏靈牌力能保軟膠囊三個(gè)劑量組小鼠初始體重、中期體重及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重與對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)。
表1 杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響(負(fù)重游泳試驗(yàn)組)

表2杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響(血乳酸含量測(cè)定組)

表3杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響(肝糖原含量測(cè)定組)

表4杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重的影響(尿素氮含量測(cè)定組)

2.2.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響


*與照組比較，P＜0.05表5中顯示，該檢品各劑量組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間均長(zhǎng)于對(duì)照組，中劑量組與對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)，即杏靈牌力能保軟膠囊可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。
2.3.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠血乳酸含量的影響，見(jiàn)表6。
表6杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠血乳酸含量的影響

*與照組比較，P＜0.05杏靈牌力能保軟膠囊三個(gè)劑量組小鼠游泳前、游泳后0min血乳酸含量及三個(gè)時(shí)點(diǎn)血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，三個(gè)劑量組小鼠游泳后20min血乳酸含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)，即杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠游泳后20min血乳酸含量有降低作用，但對(duì)血乳酸曲線下面積無(wú)明顯作用。
2.4.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠肝糖原含量的影響，見(jiàn)表7。
表7杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠肝糖原含量的影響

**與對(duì)照組比較，P＜0.05表7顯示，杏靈牌力能保軟膠囊1.00g/kg.bw劑量組小鼠肝糖原含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。即杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠肝糖原含量有升高作用。
2.5.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠血清尿素氮含量的影響，見(jiàn)表8。
表8杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠血清尿素氮含量的影響

*與對(duì)照組比較，P＜0.05表8顯示，杏靈牌力能保軟膠囊1.00g/kg.bw劑量組小鼠血清尿素氮含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，即本品(杏靈牌力能保軟膠囊)對(duì)小鼠血清尿素氮含量有降低作用。
3.小結(jié)杏靈牌力能保軟膠囊按人體推薦劑量的10、20、30倍經(jīng)口灌胃給予受試動(dòng)物30天。結(jié)果顯示杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠體重?zé)o不良影響；0.66g/kg.bw劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P＜0.05)；1.00g/kg.bw劑量組小鼠肝糖原含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)、尿素氮含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。三個(gè)劑量組小鼠游泳前、游泳后0min血乳酸含量及三個(gè)時(shí)點(diǎn)血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，三個(gè)劑量組小鼠游泳后20min血乳酸含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊具有緩解體力疲勞的作用。
實(shí)施例2抗氧化功能動(dòng)物試驗(yàn)1.材料和方法1.1.樣品杏靈牌力能保軟膠囊，批號(hào)20030505，送檢品為褐色油膏狀，由上海杏靈科技藥業(yè)股份有限公司提供。送檢方推薦成人服用劑量為0.5g×4/日/人。試驗(yàn)時(shí)樣品用食用植物油配制和稀釋后給小鼠灌胃。
1.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種雌性小鼠共50只，其中12月齡以上小鼠40只，體重范圍44-55克，8周少齡小鼠10只，平均體重19.2±1.0克。
1.3.劑量分組以杏靈牌力能保軟膠囊人體推薦量的5倍、10倍和20倍設(shè)三個(gè)劑量組，即0.17g/kg.bw、0.34g/kg.bw和0.68 g/kg.bw，另設(shè)老齡鼠對(duì)照組和少齡鼠對(duì)照組。杏靈牌力能保軟膠囊用植物油配制，按0.5％給動(dòng)物灌胃。
1.4.實(shí)驗(yàn)方法對(duì)各劑量組小鼠，每日按0.5ml/100g.bw(即100克體重灌0.5ml)體積給動(dòng)物灌胃給予受試物，老齡對(duì)照和年輕組對(duì)照組動(dòng)物均按0.5ml/100g.bw給予食用植物油，連續(xù)40天，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)按南京建成生物工程研究所購(gòu)買的MDA、SOD和GSH-Px試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定動(dòng)物紅細(xì)胞中的MDA含量、SOD活力以及全血中的GSH-Px活力。
1.5.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均數(shù)比較的方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。所用軟件為PEMS3.0《中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書(shū)·醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》統(tǒng)計(jì)軟件包(第三版)。
2.結(jié)果2.1.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠體重的影響由表9可見(jiàn)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，老齡鼠各組體重均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
表9杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠各實(shí)驗(yàn)階段體重的影響

2.2.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)紅細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響表10杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠紅細(xì)胞MDA含量的影響

*與少齡鼠對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)。#表示與老齡鼠對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)。
表10顯示，老齡鼠對(duì)照組紅細(xì)胞MDA含量顯著高于少齡鼠對(duì)照組(P＜0.05)，受試物高劑量組(0.68g/kg.bw)與老齡鼠對(duì)照組相比，MDA含量顯著降低(P＜0.05)。
2.3.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠紅細(xì)胞超氧化物歧化酶的影響表11杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠紅細(xì)胞SOD的影響

*與少齡鼠對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)。
由表11可見(jiàn)，老齡鼠對(duì)照組紅細(xì)胞SOD活力顯著低于少齡鼠對(duì)照組(P＜0.05)，而受試物各劑量組與老齡鼠對(duì)照組相比，SOD活力無(wú)顯著增高(P＞0.05)。
2.4.杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠全血谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的影響表12杏靈牌力能保軟膠囊對(duì)小鼠全血GSH-Px的影響

*與少齡鼠對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)。#與老齡鼠對(duì)照組比較，(P＜0.05＝。
#酶活力單位定義規(guī)定1ml全血每分鐘扣除非酶反應(yīng)1g(GSH)的作用降低后，使1g(GSH)的降低值為一個(gè)酶活力單位。
表12顯示，老齡鼠對(duì)照組紅細(xì)胞GSH-Px活力顯著高于少齡鼠對(duì)照組(P＜0.05)，受試物高劑量組(0.68g/kg.bw)與老齡鼠對(duì)照組相比，GSH-Px活力顯著增加(P＜0.05)。
3.結(jié)論杏靈牌力能保軟膠囊抗氧化功能動(dòng)物試驗(yàn)紅細(xì)胞中MDA含量和全血中的GSH-Px活力為陽(yáng)性結(jié)果，按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊的抗氧化功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。
實(shí)施例3抗氧化功能人體試食試驗(yàn)1.材料與方法1.1.樣品杏靈牌力能保軟膠囊由上海杏靈科技藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)20030505。包裝規(guī)格為0.5g×100粒/瓶，人體推薦攝入量為2g/人/日。
1.2.受試人群按自愿原則選擇符合下述標(biāo)準(zhǔn)者。
1.2.1.受試者的選擇標(biāo)準(zhǔn)選齡在45-65歲，身體健康狀況良好，無(wú)明顯腦、心、肝、肺、腎、血液疾患，無(wú)長(zhǎng)期服藥史，志愿受試并保證配合的中老年人。
1.2.2.受試者排除標(biāo)準(zhǔn)孕期或哺乳期婦女；合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病患者；30天服用過(guò)與受試功能有關(guān)的物品者；未按規(guī)定服用受試樣品者；資料不全無(wú)法判定功效或安全性者。
1.3.試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組受試者隨機(jī)分為試食組(50人)和對(duì)照組(52人)，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、生活飲食習(xí)慣等，以保證組間的可比性。采用自身前后對(duì)照和組間對(duì)照兩種研究方法。
1.4.服用劑量及時(shí)間試食組每人每日口服2次，每次2粒，連續(xù)服用3個(gè)月。對(duì)照組不作任何處理。試驗(yàn)期間受試者不改變?cè)瓉?lái)的生活和飲食習(xí)慣，正常飲食。
1.5.觀察指標(biāo)1.5.1.一般狀況包括受試者的精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等。
1.5.2.安全性指標(biāo)血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)、X線胸部透視、腹部B超、心電圖、肝功能、腎功能等。
1.5.3.功效性指標(biāo)1.5.3.1.過(guò)氧化脂質(zhì)含量觀察試驗(yàn)前后MDA的變化情況。使用南京建成生物工程研究所試劑盒及推薦方法進(jìn)行測(cè)定。
1.5.3.2.超氧化物歧化酶觀察試驗(yàn)前后SOD的變化情況。使用南京建成生物工程研究所試劑盒及推薦方法進(jìn)行測(cè)定。
1.5.3.3.谷胱甘肽過(guò)氧化物酶觀察試驗(yàn)前后GSH-PX的變化情況。使用南京建成生物工程研究所試劑盒及推薦方法進(jìn)行測(cè)定。
1.6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用醫(yī)學(xué)百科全書(shū)統(tǒng)計(jì)軟件包(PEMS3.0)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。各指標(biāo)試驗(yàn)前后差異的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。試驗(yàn)前、后試食組和對(duì)照組組間差異的比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用t’檢驗(yàn)。
2.結(jié)果2.1.一般狀況試驗(yàn)期間受試者的精神、飲食、睡眠、大小便等均未見(jiàn)異常。
2.2.安全性指標(biāo)觀察結(jié)果試驗(yàn)前受試者心率、血壓、心電圖，X線胸部透視、腹部B超、血常規(guī)、血生化指標(biāo)等均在正常范圍。試驗(yàn)后血常規(guī)及血生化指標(biāo)與實(shí)驗(yàn)前比較均未見(jiàn)異常。
2.3.功效性指標(biāo)觀察結(jié)果2.3.1.試驗(yàn)前后過(guò)氧化脂質(zhì)(MDA)含量變化情況，見(jiàn)表13。試驗(yàn)前試食組與對(duì)照組比較MDA含量無(wú)顯著差異；試食組試驗(yàn)后與試驗(yàn)前比較MDA含量無(wú)顯著變化，與對(duì)照組比較亦無(wú)顯著差異。
表13試驗(yàn)前后MDA含量變化情況(X±SD)

2.3.2.試驗(yàn)前后超氧化物歧化酶(SOD)活性變化情況，見(jiàn)表14。試驗(yàn)前試食組與對(duì)照組比較SOD活性無(wú)顯著性差異；試食組試驗(yàn)后SOD活性與試驗(yàn)前比較顯著增高(P＜0.05)，與對(duì)照組比較亦有顯著差異(P＜0.05)。
表14試驗(yàn)前后SOD活性變化情況(X±SD)

注自身前后比較#P＜0.01；組間比較*P＜0.012.3.2.試驗(yàn)前后谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性變化情況，見(jiàn)表15。試驗(yàn)前試食組與對(duì)照組比較GSH-Px活性無(wú)顯著差異；試食組試驗(yàn)后與試驗(yàn)前比較GSH-Px活性無(wú)顯著變化，與對(duì)照組比較亦無(wú)顯著差異。
表15試驗(yàn)前后GSH-Px活性變化情況(X±SD)

3.小結(jié)杏靈牌力能保軟膠囊抗氧化作用人體試食試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)期間受試者的精神、飲食、睡眠、大小便等未見(jiàn)異常，體檢亦未見(jiàn)異常，表明本發(fā)明制劑對(duì)人體無(wú)不良影響；試驗(yàn)組受試者在試驗(yàn)后的SOD活性顯著高于試驗(yàn)前(P＜0.05)，亦顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)；試食組試驗(yàn)后MDA含量和GSH-Px活性與試驗(yàn)前比較無(wú)顯著變化，與對(duì)照組比較亦無(wú)顯著差異。按評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，杏靈牌力能保軟膠囊有抗氧化功能。
實(shí)施例4銀杏葉555g肉蓯蓉1110g山藥 800g人參 64g維生素E 16g紫蘇油540g蜂蠟 30g大豆磷脂 30g1.中藥提取銀杏葉和山藥、肉蓯蓉和人參分二組，經(jīng)過(guò)鑒定檢驗(yàn)(按中國(guó)藥典一部的規(guī)定)、分別經(jīng)過(guò)洗凈、切成片或絲，稱重，投入多功能提取罐中，加入12倍量的70％的乙醇，浸泡2小時(shí)后，加熱回流1小時(shí)，殘?jiān)?0倍量水再同法提取1小時(shí)，合并兩次提取液；2.管式高速離心機(jī)用于高速離心(8000轉(zhuǎn)/分)；上清液減壓濃縮至比重為1.15(60℃)；3.噴霧干燥藥液進(jìn)行噴霧干燥，其參數(shù)為轉(zhuǎn)速18000轉(zhuǎn)/分鐘、進(jìn)風(fēng)溫度185℃、出風(fēng)溫度85℃、出粉的水分≤3.5％；4.混合將上述噴霧干燥粉過(guò)篩(200目)后混合均勻，得混合粉280g；5.混勻與軟膠囊的基質(zhì)及原料中脂溶性成分(維生素E、紫蘇油、蜂蠟、大豆磷脂)混合并且強(qiáng)力攪拌，得混懸物(即內(nèi)容物)1000g；6.滅菌處理上述混懸物進(jìn)行微波滅菌處理，微波頻率2450MHz，滅菌時(shí)間5min；7.壓制滅菌好的混懸粉進(jìn)行功效成分含量、理化、微生物的測(cè)定，測(cè)得總黃酮2046mg/100g，總皂甙869.7mg/100g，粗多糖415.7mg/100g，將上述的內(nèi)容物制成軟膠囊；8.干燥將成形的軟膠囊進(jìn)行干燥(≤60℃)，得成品，每粒0.5g。
實(shí)施例5制劑中總黃酮測(cè)定1.蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液精密稱取在105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，配成150μg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，相當(dāng)于蘆丁0、75、150、300、450、600μg移入10mL刻度比色管中，各加30％乙醇至5ml，各加5％NaNO2溶液0.3ml，搖勻放置5min，各加10％Al(NO3)3溶液0.3ml，搖勻，再放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液2ml，用30％乙醇定容至刻度，搖勻放置10-20min，在510nm波長(zhǎng)處，以零管溶液作空白分別測(cè)定吸光度，以吸光度對(duì)濃度進(jìn)行回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.供試品溶液的制備稱取1.0g樣品，(實(shí)施例4方法制得內(nèi)容物)用濾紙包緊，置于平底燒瓶中，加入50-100mL70％乙醇，浸潤(rùn)后，在80℃水浴下回流2h，至黃酮類化合物基本提取完全。粗提液冷卻后，減壓抽濾，并用少量25％乙醇溶液洗滌濾渣，合并濾液。在50℃下減壓蒸餾，除去其中的乙醇，直至燒瓶?jī)?nèi)溶液呈無(wú)醇味。倒出燒瓶?jī)?nèi)溶液，并用30mL熱水分3次洗滌燒瓶，抽濾后，將濾液倒入分液漏斗中，以75mL氯仿分3次萃取脫脂，待完全分層后，收集各次下層水溶液并定容至50mL。
稱取1-2g經(jīng)預(yù)處理的聚酰胺樹(shù)脂粉末，濕法裝柱，用水飽和。吸取上述脫脂后的水溶液1-2mL，沿層析柱慢慢滴入柱內(nèi)，放置一定時(shí)間，待測(cè)液被充分吸附后，用70％乙醇或甲醇洗脫，流速為1.0mL/min，至流出液基本無(wú)色，一般收集10mL即可。上述洗出液用洗脫劑定容后即可用于測(cè)定。
4.樣品測(cè)定精密吸取樣品提取液1.00ml于10ml比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備操作步驟于510nm處進(jìn)行吸光度的測(cè)定。
5.計(jì)算X=m1×V2m×V2×106×100=2046mg/100g]]>式中X樣品中總黃酮的含量(以蘆丁計(jì))，mg/100g；m1依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)液中黃酮含量，μg；m試樣的質(zhì)量，g；V1待測(cè)液分取的體積，mL；V2待測(cè)液的總體積，mL。
實(shí)施例6制劑中粗多糖測(cè)定1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確稱取1.0000g經(jīng)過(guò)98-100℃干燥至恒重的葡萄糖(AR)，加水溶解后以水稀釋至1000ml，此溶液1ml含1mg葡萄糖，用前稀釋10倍(0.1mg/ml)，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2.標(biāo)準(zhǔn)曲線精密移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60mL，分置于具塞試管中。加蒸餾水補(bǔ)充至體積2.00mL，再加苯酚溶液1.00mL，搖勻，依次加入濃硫酸5.00mL，搖勻，置沸水浴2min，取出置室溫，于波長(zhǎng)485nm處測(cè)定吸收度。以含糖量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.供試品溶液的制備樣品提取稱取樣品2.0g，(實(shí)施例4方法制得內(nèi)容物)置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加熱2h，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后，過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。
準(zhǔn)確吸取以上終濾液5.00mL，置于50mL離心管中，加入無(wú)水乙醇20 mL，混勻5min后，以3000r/min離心5min，棄去上清液。殘?jiān)?0％(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3-4次。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?.0mL，混勻后，供沉淀葡聚糖。
準(zhǔn)確吸取以上終溶液2.00mL，置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL、銅試液溶液2.0mL，沸水浴中煮沸加熱2min，冷卻，以3000r/min離心5min，棄去上清液。殘?jiān)孟礈煲簲?shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3次，殘?jiān)?0％(體積分?jǐn)?shù))硫酸溶液2.0mL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。
4.樣品測(cè)定吸取供試品溶液1.00ml，加水補(bǔ)充至2.00ml，再加苯酚溶液1.00ml，搖勻，依次加入濃硫酸5.00ml，搖勻，置沸水浴2min，取出置室溫，于波長(zhǎng)485nm處測(cè)定吸收度。
5.計(jì)算粗多糖(以葡萄糖計(jì))mg/100ml=m×5010.00×1.0×1000×100=415.7mg/100g]]>式中m為測(cè)定溶液相當(dāng)葡萄糖的量，μg。
實(shí)施例7制劑中總皂苷的測(cè)定1.人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每1mL含人參皂苷Re2.0mg。
2.樣品處理稱取樣品2.0g，(實(shí)施例4方法制得內(nèi)容物)置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加熱2h，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后，以PT-大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行層析分離，將樣品溶液上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，再用20mL85％乙醇洗脫總皂甙，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干。
顯色
在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘雜溶解，再加0.8mL高氯酸，混勻后移入10mL比色管中，塞緊蓋子于60℃以下的水浴上加溫15min取出，冷卻后準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后以1.0cm比色皿于560nm處與人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)管同時(shí)比色。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.0mg/mL)0、20、40、60、80、100μL(相當(dāng)于人參皂苷Re0、40、80、120、160、200μg)，于10mL比色管中，用氮?dú)獯蹈桑珹1.3.2顯色步驟測(cè)定吸光度。并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.結(jié)果計(jì)算X=m×V1×100V2×1000=869.7mg/100g]]>式中X樣品中總皂苷(以人參皂苷Re計(jì))，mg/100ml；V1樣品提取液總體積，ml；V2樣品提取液測(cè)定用用體積，ml；M從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測(cè)液中人參皂苷Re量，μg。
實(shí)施例8片劑制備將干燥銀杏葉200g，山藥250g為一組，肉蓯蓉360g，人參40g為一組，采用同實(shí)施例4的制備方法提取，獲得噴霧干燥粉。取噴霧干燥粉100g，加淀粉100g低取代羥丙基纖維素40g，分別過(guò)80目篩，混合均勻，以稀乙醇為潤(rùn)濕劑制粒，干燥整粒，外加潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂少量，壓片，每片0.3g。
實(shí)施例9口服液制備取按實(shí)施例4方法制得的噴霧干燥粉100g加羧甲基纖維素10g，糖精2g，苯甲酸鈉2g，溶于8L蒸餾水中，加香精適量，攪拌、溶解、過(guò)濾分裝，消毒滅菌，包裝即得。
權(quán)利要求
1.一種具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品，其特征在于所述的保健品是由主要含銀杏葉、肉蓯蓉、山藥、人參活性成分以及其他輔料制成的口服制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品，其特征在于其中各活性成分占總活性成分重量百分比含量為銀杏葉16-32％、肉蓯蓉32-56％、山藥16-32％、人參2-5％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品，其特征在于其中所述的其他輔料包括各種營(yíng)養(yǎng)成分，食品添加劑和藥用輔料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品的制備方法，其特征在于該保健品的制備包括下列步驟1)銀杏葉和山藥、肉蓯蓉和人參分成二組，分別洗凈，切成片或絲，用水和/或乙醇浸泡，回流提??；2)將上述二組提取液合并離心分離，上清液濃縮，噴霧干燥，即得混合粉；3)將上述混合粉按常規(guī)方法制成各種口服制劑；4)用分光光度計(jì)檢測(cè)制劑中總黃酮含量以蘆丁計(jì)不小于2021mg/100g，粗多糖以葡萄糖計(jì)不小于404.2mg/100g，總皂甙以人參皂甙苷Re計(jì)不小于853.5mg/100g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗疲勞和抗氧化功能的保健品及制備方法。該保健品是由主要含銀杏葉、肉蓯蓉、山藥、人參活性成分以及其他輔料制成的口服制劑。本發(fā)明在傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的經(jīng)典理論指導(dǎo)下，運(yùn)用了現(xiàn)代中藥學(xué)制劑工藝，提供了同時(shí)解除疲勞和抗氧化，效果顯著的保健品。
文檔編號(hào)A61K36/258GK1723800SQ20041005300
公開(kāi)日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2004年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月20日
發(fā)明者謝德隆, 高崎, 王軍, 張國(guó)安 申請(qǐng)人:上海杏靈科技藥業(yè)股份有限公司