專利名稱：一種遠(yuǎn)志的有效部位及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的有效部位及其用途，具體地說是涉及遠(yuǎn)志的有效部位及其在制備預(yù)防和治療老年性癡呆藥物中的用途。
背景技術(shù)：
遠(yuǎn)志為常見中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，被視為養(yǎng)命之要藥，具有安神益智、祛痰、消腫等功效(國家藥典委員會編，中華人民共和國藥典一部，2000123)。據(jù)對《本經(jīng)》、《本草綱目》和《中醫(yī)藥大辭典》等醫(yī)書中益智藥物的統(tǒng)計表明，遠(yuǎn)志是出現(xiàn)幾率最高的中藥之一，并且其益智作用比較全面。但是目前遠(yuǎn)志的應(yīng)用還主要停留在祛痰、鎮(zhèn)咳方面，如中國藥典收載的遠(yuǎn)志的流浸膏和酊劑就是用于祛痰、鎮(zhèn)咳的。
近年來隨著老年性癡呆病的加重，人們積極地尋找能夠有效預(yù)防和治療該疾病的藥物。已有研究表明，使用80％乙醇對遠(yuǎn)志根的提取物BT-11以10mg/kg腹腔注射給藥時，能夠明顯逆轉(zhuǎn)東莨菪堿導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能障礙；預(yù)防性地給予這種遠(yuǎn)志提取物(0.5，3和5μg/ml)能夠劑量依賴性地降低由谷氨酸(1mM)、Aβ(10μM)及由淀粉樣前體蛋白(APP)的C-末端碎片(CT105)(10μM)所誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(ParkCH，et al.Journal ofNeuroscience Research，2002，70484-492)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種遠(yuǎn)志的有效部位。
本發(fā)明的再一目的在于提供所述遠(yuǎn)志的有效部位的用途。
本發(fā)明的目的是通過如下的技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明提供的遠(yuǎn)志的有效部位，其為由如下的方法得到1)提取將遠(yuǎn)志的根或根皮粉碎至10～20目，使用水或/和醇作為提取溶劑進(jìn)行提??；2)樹脂吸附將步驟1)得到的提取液濃縮，上大孔樹脂柱，先用3～4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位；所述的洗脫溶劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、或50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液。
所述步驟1)的遠(yuǎn)志包括遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd.和卵葉遠(yuǎn)志Polygala sibiricaL.。
所述步驟1)的提取溶劑中水和醇的混合物是50～95v％的乙醇水溶液。
所述步驟1)的提取為加入6～8倍量的提取溶劑提取2～3次，可以是在室溫下浸漬提取24～48h/次；或為用20～70kHz的超聲波提取15～30min/次；或在60～80℃加熱提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
所述步驟2)所采用的樹脂包括D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列和AB-8大孔吸附樹脂。
所述D系列的大孔吸附樹脂優(yōu)選D-101型；HPD系列的大孔吸附樹脂優(yōu)選HPD-500型；HP系列大孔吸附樹脂優(yōu)選HP-20、XAD系列大孔吸附樹脂優(yōu)選XAD-4。
洗脫溶劑優(yōu)選為60～70％的乙醇或甲醇的水溶液。
本發(fā)明提供的遠(yuǎn)志有效部位，其制備方法還包括在步驟1)中或之后進(jìn)行脫脂，具體步驟如下在步驟1)中，將遠(yuǎn)志的根或根皮粉碎至10～20目之后，先用6～8倍量的極性較小的有機溶劑對遠(yuǎn)志或卵葉遠(yuǎn)志的根或根皮進(jìn)行提取2～3次，殘渣再用水或/和醇作為提取溶劑提??；或是在步驟1)的提取之后，將提取液濃縮至不含有機溶劑，加入水，制成密度為1.1～1.2g/ml的懸浮液，再用極性較小的有機溶劑進(jìn)行萃取3～4次，分出水相。
所述極性較小的有機溶劑包括石油醚、汽油、環(huán)己烷、正己烷、乙醚等。
脫脂過程以2～4次為最佳。
本發(fā)明提供的遠(yuǎn)志的有效部位，是來源于遠(yuǎn)志的活性成分--遠(yuǎn)志總苷，其主要包括酮苷、糖酯和皂苷類化合物(如圖1所示)，以3，6’-二芥子?；崽酋閷φ掌罚捎米贤夥止夤舛确ㄔ?30nm波長處測定吸收度，該遠(yuǎn)志有效部位中遠(yuǎn)志總苷的含量達(dá)50％以上。
本發(fā)明堤供一種所述遠(yuǎn)志的有效部位在制備預(yù)防和治療老年性癡呆藥物中的用途。將遠(yuǎn)志有效部位，即遠(yuǎn)志總苷作為抗老年癡呆癥的有效成分，使之與藥學(xué)上可接受的載體或其他適宜賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成經(jīng)口服給藥的內(nèi)用劑型和非口服給藥的注射劑或其它劑型，可以臨床用于預(yù)防和治療老年癡呆癥。
本發(fā)明首次分離出了遠(yuǎn)志的有效部位總苷，并利用脫脂、溶劑提取和大孔吸附樹脂法，得到了純度較高的遠(yuǎn)志總苷。本發(fā)明提供的遠(yuǎn)志的有效部位的制備方法工藝操作簡便，生產(chǎn)成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。而且，通過水迷宮試驗證明遠(yuǎn)志總苷在50mg/kg時，能夠拮抗東莨菪堿導(dǎo)致的記憶障礙，提示了該遠(yuǎn)志總苷可作為活性成分在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。


圖1為本發(fā)明實施例1～3分離制備出的遠(yuǎn)志總苷與各標(biāo)準(zhǔn)品對照的TLC圖譜；薄層板為硅膠GF254高效薄層預(yù)制板(Merck公司)，展開劑為CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層，顯色為①10％硫酸乙醇噴灑 105℃烘烤3～5分鐘，②紫外燈下(365nm)觀察熒光，③紫外燈下(254nm)觀察熒光；其中1為3，6’-二芥子?；崽酋?，2為實施例1的總苷，3為polygalaxanthone III，4為實施例2的總苷，5為tenuifoliose Q，6為實施例3的總苷，7為onjisaponin J。
具體實施例方式
實施例1、取遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd)藥材的根100g粉碎至20目，先用600mL石油醚回流提取0.5h，共提取3次。然后濾出遠(yuǎn)志的殘渣，用600mL70v％乙醇進(jìn)行回流提取，每次lh，共3次。合并提取液，減壓濃縮至近干，得稠浸膏34.99g，溶于少量水中，上HPD-500型大孔樹脂，先用3個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用65v％乙醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位——遠(yuǎn)志總苷11.10g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?0.52％。
實施例2、取卵葉遠(yuǎn)志(Polygala sibirica L.)藥材的根皮100g粉碎至10目，先用700mL正己烷回流提取0.5h，共提取2次。然后濾出遠(yuǎn)志的殘渣，用700mL50v％乙醇在70kHz的超聲波中提取2次，每次15min。合并提取液，濃縮提取液，上HP-20型大孔樹脂，先用4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用60％甲醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位——遠(yuǎn)志總苷10.76g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?4.32％。
實施例3、取卵葉遠(yuǎn)志(Polygala sibirica L.)藥材的根皮100g粉碎至20目，用800mL50％乙醇回流提取3次，每次2h。合并提取液，減壓濃縮至近干，得稠浸膏36.94g，懸浮于少量的水中，用石油醚進(jìn)行萃取脫脂，共四次。所余水層濃縮至少量，上AB-8型大孔吸附樹脂，先用4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，再用60v％乙醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位——遠(yuǎn)志總苷10.93g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?0.45％。
實施例4、取遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd)藥材的根70g粉碎至20目，用500mL 95％乙醇回流提取3次，每次3h。合并提取液，減壓回收溶劑近干，得稠浸膏29.54g。將其懸浮于水中，先用環(huán)己烷進(jìn)行萃取脫脂，共3次。然后分出水層，濃縮至少量，上D-101型大孔樹脂，先用3個柱體積的水洗去雜質(zhì)，再用70v％乙醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位——遠(yuǎn)志總苷4.32g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?2.93％。
實施例5、取卵葉遠(yuǎn)志(Polygala sibirica L.)藥材的根80g粉碎至10目，用480ml水回流提取3次，每次2h.。合并提取液，減壓濃縮至少量，上D-101型大孔樹脂，先用3個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用60v％乙醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位7.56g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯計為50.63％。
實施例6、取遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd)藥材的根皮100g粉碎至10目，用800ml95v％的乙醇水溶液在室溫下浸漬提取2次，每次48h。合并提取液，減壓濃縮至近干，得稠浸膏34.15g，懸浮于少量的水中，用石油醚進(jìn)行萃取脫脂，共四次。然后分出水層，濃縮至少量，上HPD-500型大孔樹脂，先用4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用60v％的丙酮水溶液進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位11.45g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?5.43％。
實施例7、取遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd)藥材的根100g粉碎至15目，用700ml50v％的乙醇水溶液在60C加熱提取2次，每次1.5h。合并提取液，減壓濃縮至近干，得稠浸膏36.15g，懸浮于少量的水中，用石油醚進(jìn)行萃取脫脂，共三次。然后分出水層，濃縮至少量，上AB-8型大孔樹脂，先用4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用60％乙醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位9.44g，含量以3，6’-二芥子?；崽酋ビ嫗?0.43％。
實施例8、取卵葉遠(yuǎn)志(Polygala sibirica L.)藥材的根皮100g粉碎至20目，用650ml 70v％的乙醇水溶液用50kHz的超聲波提取3次，每次20min。合并提取液，減壓濃縮至近干，得稠浸膏36.38g，懸浮于少量的水中，用石油醚進(jìn)行萃取脫脂，共三次。然后分出水層，濃縮至少量，上XAD-4型大孔樹脂，先用3個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用65％甲醇進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點(展開劑CHCl3∶MeOH∶H2O/65∶35∶10下層)為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位9.14g，含量以3，6’-二芥子酰基蔗糖酯計為57.43％。
實施例9、遠(yuǎn)志總苷對東莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙的影響選取ICR系小鼠100只，次日進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，每天每只動物重復(fù)訓(xùn)練4次。以跑表測定反應(yīng)時間(小鼠自起點至終點所需時間)，同時記錄小鼠每次游入盲端的錯誤次數(shù)。經(jīng)4天訓(xùn)練后，篩選反應(yīng)時間相近的64只小鼠作為入選實驗動物。按反應(yīng)時間差異分別將雌雄小鼠隨機分為四組蒸餾水對照組、腦復(fù)康陽性對照藥組、實施例4制得的遠(yuǎn)志總苷50mg/kg和250mg/kg給藥組，每組雌雄小鼠各8只。每天上午進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，每只小鼠重復(fù)測定3次，記錄每組小鼠每次游入盲端的錯誤次數(shù)和出現(xiàn)錯誤的動物的只數(shù)。下午給藥或蒸餾水，連續(xù)訓(xùn)練和給藥8天(給藥及蒸餾水體積為0.2ml/10g BW)。各組小鼠反應(yīng)時間及錯誤次數(shù)相近后，經(jīng)禁食不禁水過夜，各組分別于給藥或蒸餾水30分鐘后腹腔注射東莨菪堿1mg/kg，給東莨菪堿后30分鐘，測定各組小鼠反應(yīng)時間及錯誤次數(shù)和只數(shù)。每只小鼠重復(fù)測定3次，計算其平均值及平均出現(xiàn)障礙的次數(shù)，結(jié)果見表1。
表1 遠(yuǎn)志總苷對ICR系小鼠東莨菪堿誘導(dǎo)記憶缺失作用的拮抗組別 劑量 動物數(shù)給藥前給藥后mg/kg 反應(yīng)時間 錯誤次數(shù)反應(yīng)時間 錯誤次數(shù)(秒) (次)(秒) (次)遠(yuǎn)志總苷 50 16 14.41±7.88 27 15.20±4.46**34△△腦復(fù)康組 500 15 15.98±11.62 42 14.15±5.41**37△△對照組 15 18.82±10.81 32 26.44±11.26# 92◆◆t檢驗給藥前后比較 #p＜0.05與對照組比較**p＜0.01普哇松分布檢驗給藥前后比較 ◆◆p＜0.01與對照組比較 △△p＜0.01；從表1的結(jié)果可以看出遠(yuǎn)志總苷(50mg/kg)組和腦復(fù)康組對于給予東莨菪堿30分鐘后的小鼠的反應(yīng)時間和錯誤次數(shù)均明顯小于對照組(p＜0.01)，由此說明，遠(yuǎn)志總苷對于東莨菪堿導(dǎo)致的小鼠記憶缺失作用具有明顯的拮抗作用。
該實驗結(jié)果提示了本發(fā)明提供的遠(yuǎn)志有效部位可作為活性成分在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種遠(yuǎn)志的有效部位，其為由如下的方法得到1)提取將遠(yuǎn)志的根或根皮粉碎至10～20目，使用水或/和醇作為提取溶劑進(jìn)行提?。?)樹脂吸附將步驟1)得到的提取液濃縮，上大孔樹脂柱，先用3～4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，直至薄層色譜檢識無明顯斑點為止；收集洗脫液，干燥，即得遠(yuǎn)志有效部位；所述的洗脫溶劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述步驟1)的遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd.或卵葉遠(yuǎn)志Polygala sibirica L.。
3.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述步驟1)的提取溶劑中水和醇的混合物是50～95v％的乙醇水溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述步驟1)的提取為加入6～8倍量的提取溶劑提取2～3次，然后在室溫下浸漬提取24～48h/次；或為用20～70kHz的超聲波提取15～30min/次；或在60～80℃加熱提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
5.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述步驟2)所采用的樹脂柱中填充的樹脂為D系列、HPD系列、HP系列、XAD系列或AB-8大孔吸附樹脂。
6.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述D系列的大孔吸附樹脂為D-101型；HPD系列的大孔吸附樹脂為HPD-500型；HP系列大孔吸附樹脂為HP-20、XAD系列大孔吸附樹脂為XAD-4。
7.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述步驟2)的洗脫溶劑為60～70％的乙醇或甲醇的水溶液。
8.如權(quán)利要求1所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其制備方法還包括在步驟1)中或之后進(jìn)行脫脂，具體步驟如下在步驟1)中，將遠(yuǎn)志的根或根皮粉碎至10～20目之后，先用6～8倍量的極性較小的有機溶劑對遠(yuǎn)志或卵葉遠(yuǎn)志的根或根皮進(jìn)行提取2～3次，殘渣再用水或/和醇作為提取溶劑提??；或是在步驟1)的提取之后，將提取液濃縮至不含有機溶劑，加入水，制成密度為1.1～1.2g/ml的懸浮液，再用極性較小的有機溶劑進(jìn)行萃取3～4次，分出水相。
9.如權(quán)利要求8所述的遠(yuǎn)志的有效部位，其特征在于，所述極性較小的有機溶劑為石油醚、汽油、環(huán)己烷、正己烷或乙醚。
10.一種遠(yuǎn)志的有效部位在制備預(yù)防和治療老年性癡呆藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種遠(yuǎn)志的有效部位，是來源于遠(yuǎn)志的活性成分——遠(yuǎn)志總苷，其主要包括酮苷、糖酯和皂苷類化合物。其為將遠(yuǎn)志的根或根皮粉碎后，先使用水或/和醇作進(jìn)行提??；然后上大孔樹脂柱，使用水、甲醇、乙醇、丙酮、或50～95v％的乙醇或丙酮的水溶液進(jìn)行洗脫；收集洗脫液，干燥，即得含量達(dá)50％以上的遠(yuǎn)志有效部位；其制備方法還包括脫脂過程，即先使用極性較小的有機溶劑對遠(yuǎn)志進(jìn)行提取，或是使用極性較小的有機溶劑對提取液進(jìn)行萃取。該遠(yuǎn)志的有效部位與藥學(xué)上可接受的載體或其他適宜賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成經(jīng)口服給藥的內(nèi)用劑型和非口服給藥的注射劑或其它劑型，可用于制備預(yù)防和治療老年性癡呆的藥物。
文檔編號A61P25/00GK1640425SQ20041000039
公開日2005年7月20日 申請日期2004年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月13日
發(fā)明者姜勇, 李軍, 屠鵬飛 申請人:北京華醫(yī)神農(nóng)醫(yī)藥科技有限公司