專利名稱：治療和預(yù)防炎癥性疾病的誘餌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組合物及其應(yīng)用，所述組合物包含與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子結(jié)合的位點(diǎn)特異性結(jié)合的一種化合物(如核酸及其類似物)。更特異地，本發(fā)明涉及包含一種誘餌化合物(decoy compound)(如核因子κB(NF-κB)誘餌)的治療炎癥性疾病(disease)或障礙(disorder)的一種組合物。
背景技術(shù)：
許多疾病，包括氣喘、癌癥、心臟病、動(dòng)脈瘤、自身免疫疾病及病毒感染出現(xiàn)可變癥狀和跡象，已經(jīng)提示一或幾種蛋白質(zhì)的異常表達(dá)(過(guò)表達(dá)或低表達(dá))在許多情況中是主要的病因。通常，那些蛋白質(zhì)的表達(dá)是由許多轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，如轉(zhuǎn)錄激活因子和轉(zhuǎn)錄抑制基因控制的。
NF-κB是這種編碼對(duì)炎癥和免疫應(yīng)答而言重要的基因產(chǎn)物的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子之一(Baeuerle PA.et al.，Annu Rev Immunol.1994；12141-79)。NF-κB應(yīng)答多種胞外信號(hào)并從胞質(zhì)遷移至細(xì)胞核，在一些細(xì)胞因子和粘著分子基因的協(xié)同反式激活中起關(guān)鍵作用。Cooper等論證了NF-κB的DNA結(jié)合活性的時(shí)間依賴性提高，其在異源心臟移植動(dòng)物模型中在排斥之前3天出現(xiàn)峰值(Cooper M.等，Transplantation，1998 Oct.15；66(7)838-44)。然而，給予PDTC顯著延長(zhǎng)受體動(dòng)物的存活時(shí)間，PDTC是NF-κB的一種強(qiáng)力抑制劑，降低所述模型中NF-κB活性峰值。
人NF-κB的正?；钚孕问绞莾蓚€(gè)DNA結(jié)合亞單位的異源二聚體，所述亞單位是50kDa亞單位(p50)和65kDa亞單位(relA或p65)(Lenardo，Cell.1989 Jul 28，58(2)227-9；Libermann，Mol Cell Biol.1990 May；10(5)2327-34；Satriano J，J Clin Invest.1994 Oct；94(4)1629-36；Neish AS et al.，J Exp Med.1992 Dec 1，176(6)1583-93)。在未被刺激的細(xì)胞中，NF-κB結(jié)合稱作IκB的一種抑制分子并在胞質(zhì)內(nèi)隱藏。在細(xì)胞被刺激后，IκB被磷酸化，然后迅速降解。之后，NF-κB從IκB中釋放，從而使得轉(zhuǎn)錄因子易位至細(xì)胞核，在此所述轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合多個(gè)DNA識(shí)別位點(diǎn)以調(diào)節(jié)基因表達(dá)(Baeurerle，1994，如前述)。已經(jīng)提示轉(zhuǎn)錄因子NF-κB從所述復(fù)合物中的解離誘導(dǎo)基因，包括白細(xì)胞介素(IL)-1、-6和-8、胞內(nèi)粘著分子、血管細(xì)胞粘著分子和內(nèi)皮細(xì)胞粘著分子的經(jīng)調(diào)節(jié)的反式激活，并在炎癥改變的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用(Lenardo，1989如前述；Libermann，1990如前述；Satriano J，1994如前述；Neish，1992如前述)。因此，NF-κB的阻斷可以減弱基因介導(dǎo)的心肌缺血再灌注。
NF-κB可參與惡性腫瘤的發(fā)生進(jìn)展(Rayet B et al.，Oncogene1999 Nov 22，18(49)6938-47)；NF-κB參與對(duì)缺氧應(yīng)激的腫瘤細(xì)胞應(yīng)答(Royds JA et al.，Mol Pathol 1998 Apr.，51(2)55-61)；NF-κB抑制細(xì)胞因子和粘著分子在衍生自慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜細(xì)胞中的表達(dá)(Tomita T et al.，Rheumatology(Oxford)2000 Jul，39(7)749-57)；眾多轉(zhuǎn)錄因子，包括NF-κB之間的協(xié)同抑制改變了多種腫瘤的惡性表型(Denhardt DT，Crit Rev Oncog 1996，7(3-4)261-91)；由于綠茶多酚所致的NF-κB激活的下調(diào)阻斷了一氧化氮合酶的誘導(dǎo)，并抑制A431人表皮樣癌細(xì)胞(Lin JK et al.，Biochem Pharmacol 1999Sep 15，58(6)911-5)；在阿爾茨海默病患者腦中觀測(cè)到的β淀粉樣肽結(jié)合成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞中的75kD神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)受體(p75NTR)，以時(shí)間依賴性方式和劑量依賴性方式激活NF-κB(Kuper P et al.，JNeurosci Res 1998 Dec 15，54(6)798-804)；TNF-α在腎小球性腎炎的發(fā)生中起重要作用(Ardaillou et al.，Bull Acad Natl Med 1995 Jan，179(1)103-15)。
一種NF-κB轉(zhuǎn)錄因子誘餌抑制細(xì)胞因子和粘著分子在體內(nèi)在TNF-α誘導(dǎo)的小鼠腎炎中的表達(dá)(Tomita N et al.，Gene Ther 2000Aug，7(15)1326-32)等等。
這提示NF-κB在轉(zhuǎn)錄水平抑制MMP1和MMP9，所述MMP1和MMP9是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的成員(Eberhardt W，HuwilerA，Beck KF，Walpen S，Pfeilschifter J.J Immunol 2000 Nov 15，165(10)，5788-97；M，Baker AH，Newby AC.Biochem Biophys ResCommun.Bond 1999 Oct 22，264(2)，561-7；Bond M，F(xiàn)abunmi RP，Baker AH，Newby AC.FEBS Lett 1998 Sep.11，435(1)，29-34；及Kim H，Koh G.Biochem Biophys Res Commun.2000 Mar 16，269(2)，401-5)。MMP是參與胞外基質(zhì)成分降解的鋅依賴性酶的多基因家族。
MMP通過(guò)介導(dǎo)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)的降解而在癌細(xì)胞的侵潤(rùn)中起重要作用。許多研究提示MMP和MMP抑制劑(TIMP)參與癌癥的進(jìn)展血清中TIMP1水平可用作結(jié)腸和直腸癌的預(yù)后和診斷的標(biāo)記，及用作轉(zhuǎn)移癌的一個(gè)選擇性標(biāo)記(Pellegrinl P et al.，Cancer ImmunolImmunother 2000 Sep，49(7)388-94)；MMP2和MMP9在人膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)和活性受到腫瘤壞死因子α和γ干擾素的影響(ShinKY et al.，Cancer Lett 2000 Oct 31，159(2)127-134)；MMP2、MMP9和MT1-MMP及其抑制劑TIMP1和TIMP2在卵巢上皮腫瘤中表達(dá)(Sakata K et al.，Int J Oncol 2000 Oct，17(4)673-681)；MMP1、MMP2、MMP3和MMP9的每一個(gè)的水平及MMP的整體活性在結(jié)腸和直腸腫瘤中是上調(diào)的，MMP1在結(jié)腸和直腸癌的進(jìn)展中最重要(Baker EA et al.，Br J Surg 2000 Sep，87(9)1215-1221)；激活的MMP2尿道上皮癌的侵潤(rùn)中起重要作用，而且激活的MMP2的表達(dá)水平可用作一種有效的預(yù)后指數(shù)(Kaneda K et al.，BJU Int 2000 Sep，86(4)553-557)；一種前列腺素合成抑制劑抑制人前列腺腫瘤細(xì)胞的侵潤(rùn)，并降低MMP的釋放(Attiga FA et al，Cancer Res 2000 Aug 15，60(16)4629-37)；在乳腺癌和肺癌患者中血清優(yōu)球蛋白部分的MMP活性提高，可用作這些癌癥的腫瘤標(biāo)記(Farias E et al.，Int J Cancer2000 Jul 20，89(4)389-94)；MMP抑制劑抑制腫瘤細(xì)胞中明膠降解活性(Ikeda M et al.，Clin Cancer Res 2000 Aug，6(8)3290-6)；由于膜蛋白LMP1所致的MMP9的誘導(dǎo)促進(jìn)鼻咽癌(NPC)的轉(zhuǎn)移(Horikawa T et al.，Cancer 2000 Aug 15，89(4)715-23)；MMP在血管成形術(shù)的早期階段起重要作用，MMP抑制劑抑制人微血管內(nèi)皮細(xì)胞的侵潤(rùn)和形態(tài)發(fā)生(Jia MC et al.，Adv Exp Med Biol 2000，476181-94)；MMP9在侵潤(rùn)性和復(fù)發(fā)的垂體腺瘤和垂體癌中表達(dá)(TurnerHE et al.，J Clin Endocrinol Metab 2000 Aug，85(8)2931-5)等等。
還已知MMP參與主動(dòng)脈瘤的發(fā)生MMP參與腦動(dòng)脈瘤的形成和破裂(Gaetani P et al.，Neurol Res 1999 Jun，21(4)385-90)；MMP-9啟動(dòng)子是腦動(dòng)脈瘤的一個(gè)危險(xiǎn)因素(Peters DG et al.，Stroke 1999 Dec，30(12)2612-6)；MMP的抑制在動(dòng)脈瘤模型中抑制了微動(dòng)脈瘤的生長(zhǎng)(Treharne GD et al.，Br J Surg 1999Aug，86(8)1053-8)等等。MMP從遷移的血管平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等中分泌，并破壞血管壁中存在的膠原、彈性蛋白等，從而血管的緊張性喪失而且血管不再抵抗血壓及其直徑擴(kuò)展。事實(shí)上，在動(dòng)脈瘤的血管中觀測(cè)到彈性蛋白的明顯破壞。
根據(jù)通過(guò)測(cè)定35-80歲成年男性的主動(dòng)脈直徑獲得的數(shù)據(jù)，平均值為1.5-2.0cm。通常，直徑超過(guò)平均值1.5倍的主動(dòng)脈被判斷為主動(dòng)脈瘤。然而，根據(jù)上述數(shù)據(jù)，在每400人中就有一個(gè)人具有直徑為3cm或更大的動(dòng)脈瘤，這被判斷為主動(dòng)脈瘤。因此，盡管在此不考慮主動(dòng)脈破裂的危險(xiǎn)程度，但主動(dòng)脈瘤的流行在35-80歲的成年男性中相對(duì)較高。在65或更高年齡的男性中認(rèn)為該流行更顯著。
已經(jīng)有報(bào)道MMP抑制劑在大鼠腹部中的主動(dòng)脈瘤模型中抑制血管直徑的擴(kuò)展。MMP抑制劑可用于治療腎小球性腎炎(Marti HP，Schweiz Med Wochenschr 2000 May 27，130(21)，784-8)。然而，系統(tǒng)性給予MMP抑制劑產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，并難以臨床應(yīng)用處理(治療和預(yù)防)多種疾病。
合成的ODN作為一種“誘餌化合物”順式元件阻斷核因子結(jié)合其指定基因的啟動(dòng)子區(qū)域，從而抑制體外和體內(nèi)分析系統(tǒng)的基因反式激活(Sullenger，J Virol 1991 Dec，65(12)6811-6；Morishita R.etal.，Contrib Nephrol.1996，118254-64)。這種誘餌策略已經(jīng)用于治療某些人體疾病。本發(fā)明人先前報(bào)道了E2F誘餌ODN的轉(zhuǎn)染作為在氣囊損傷后再狹窄的基因治療模型以抑制新生內(nèi)膜(neointimal)增殖(Morishita，Proc Natl Acad Sci USA，1995 Jun 20，92(13)5855-9)。最近，本發(fā)明人在大鼠中使用NF-κB誘餌成功地在體內(nèi)保護(hù)心肌免于缺血損傷。
(本發(fā)明要解決的問(wèn)題)因此，這提示NF-κB通過(guò)在其轉(zhuǎn)錄控制下許多基因的表達(dá)而參與多種疾病。然而，目前還沒(méi)有有效治療與炎癥性疾病相關(guān)的障礙或疾病的方法，尤其是非侵入性治療方法。特別是如上所述，炎癥性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎等不是很罕見的疾病。隨著社會(huì)的老齡化，動(dòng)脈硬化疾病的增多不可避免地導(dǎo)致主動(dòng)脈瘤疾病的增多。考慮到患者年齡的增加，理想的是使用藥物直接抑制炎癥性疾病的生長(zhǎng)，然而，迄今為止還未獲得這種手段。因此非常需要揭示炎癥性疾病的一種低侵入性的治療和預(yù)防方法。
炎癥性疾病是指與炎癥相關(guān)的任何疾病或障礙。特別地，需要可以有效治療關(guān)節(jié)部位的炎癥性疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎等)，而又無(wú)副作用或顯著降低副作用的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療或預(yù)防炎癥性疾病或障礙以及由所述疾病或障礙所致的障礙的一種組合物，該組合物包含至少一種NF-κB誘餌或者相似的轉(zhuǎn)錄因子的誘餌，及一種藥物可接受的載體。本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防炎癥性疾病或障礙以及由所述疾病或障礙所致的障礙的方法，所述方法包括為治療對(duì)象給予一種組合物，所述組合物包含至少一種NF-κB誘餌或者相似的轉(zhuǎn)錄因子的誘餌，及一種藥物可接受的載體。
在一個(gè)實(shí)施方案中，炎癥性疾病包括許多炎癥，如腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等)、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎、睪丸炎等。所述障礙是與上述炎癥性疾病相關(guān)的那些障礙。所述藥物可接受的載體可以是脂質(zhì)體。所述NF-κB誘餌可包含一個(gè)序列GGATTTCCC。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述誘餌或組合物可以直接施用于關(guān)節(jié)處。
因此，本發(fā)明提供如下內(nèi)容1.一種治療和預(yù)防炎癥性疾病或障礙的藥物組合物，其包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
2.根據(jù)第1項(xiàng)的組合物，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎、睪丸炎。
3.根據(jù)第1項(xiàng)的組合物，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
4.根據(jù)第1項(xiàng)的組合物，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
5.根據(jù)第1項(xiàng)的組合物，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
6.根據(jù)第1項(xiàng)的組合物，其適于膝關(guān)節(jié)給藥。
7.根據(jù)第6項(xiàng)的組合物，其包含至少10mg所述NF-κB誘餌。
8.根據(jù)第6項(xiàng)的組合物，其包含至少30mg所述NF-κB誘餌。
9.一種治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的藥物組合物，其包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
10.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎。
11.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
12.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
13.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
14.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中所述疾病或障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，其包含至少治療有效量的所述誘餌。
15.根據(jù)第14項(xiàng)的組合物，其中所述治療有效量是至少0.01mg/kg體重。
16.根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其適于膝關(guān)節(jié)給藥。
17.根據(jù)第16項(xiàng)的組合物，其中所述NF-κB包含至少10mg。
18.根據(jù)第16項(xiàng)的組合物，其中所述NF-κB誘餌包含至少30mg。
19.一種治療或預(yù)防炎癥性疾病或障礙的方法，包括給予患者一種組合物，所述組合物包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
20.根據(jù)第19項(xiàng)的方法，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎和睪丸炎。
21.根據(jù)第19項(xiàng)的方法，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
22.根據(jù)第19項(xiàng)的方法，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
23.根據(jù)第19項(xiàng)的方法，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
24.根據(jù)第19項(xiàng)的方法，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
25.根據(jù)第24項(xiàng)的方法，其中所述組合物包含至少10mg的NF-κB誘餌。
26.根據(jù)第24項(xiàng)的方法，其中所述組合物包含至少30mg的NF-κB誘餌。
27.一種治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的方法，包括給予患者一種組合物，所述組合物包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
28.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎。
29.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
30.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
31.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
32.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述疾病或障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述誘餌包含至少治療有效量。
33.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述治療有效量是至少0.01mg/kg體重。
34.根據(jù)第27項(xiàng)的方法，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
35.根據(jù)第34項(xiàng)的方法，其中所述組合物包含至少10mg的所述NF-κB誘餌。
36.根據(jù)第34項(xiàng)的方法，其中所述組合物包含至少30mg的所述NF-κB誘餌。
37.至少一種NF-κB誘餌在生產(chǎn)治療和預(yù)防炎癥性疾病或障礙的藥物中的應(yīng)用。
38.根據(jù)第37項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎和睪丸炎。
39.根據(jù)第37項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
40.根據(jù)第37項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
41.根據(jù)第37項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
42.根據(jù)第37項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
43.根據(jù)第42項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述組合物包含至少10mg的NF-κB誘餌。
44.根據(jù)第42項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述組合物包含至少30mg的NF-κB誘餌。
45.至少一種NF-κB誘餌在生產(chǎn)治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的藥物中的應(yīng)用。
46.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述疾病或障礙是選自如下一組中的至少一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎。
47.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
48.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
49.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
50.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述疾病或障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述誘餌包含至少治療有效量。
51.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述治療有效量是至少0.01mg/kg體重。
52.根據(jù)第45項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
53.根據(jù)第52項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述組合物包含至少10mg的所述NF-κB誘餌。
54.根據(jù)第52項(xiàng)的方法，其中所述組合物包含至少30mg的所述NF-κB誘餌。
本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)閱讀及理解如下詳細(xì)描述，及如果需要?jiǎng)t參考附圖，對(duì)本發(fā)明的這些及其它優(yōu)點(diǎn)將更清楚。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是示出在猿膠原蛋白關(guān)節(jié)炎模型的關(guān)節(jié)中出現(xiàn)由本發(fā)明的誘餌所致的改變的X光照片。不加處理和接受混雜的誘餌的模型無(wú)作用，而接受本發(fā)明誘餌處理的模型示出許多顯著的改善，如滑膜炎癥的改變、關(guān)節(jié)腫脹的抑制及關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)中破骨的抑制等。
圖2示出關(guān)節(jié)切面的照片，示出NF-κB對(duì)骨關(guān)節(jié)炎大鼠模型的作用。該圖示出一個(gè)正常的供體，一個(gè)膠原蛋白產(chǎn)生的關(guān)節(jié)炎模型，及NF-κB誘餌(給予10mg和30mg)對(duì)這個(gè)模型的作用和類固醇對(duì)這個(gè)模型的作用。給予10mg的誘餌已經(jīng)獲得顯著作用，給予30mg誘餌則消滅關(guān)節(jié)炎。這些作用超過(guò)類固醇所獲得的那些作用。另外，與類固醇處理相反，這種處理無(wú)副作用。
圖3示出本發(fā)明的治療膠原蛋白產(chǎn)生的關(guān)節(jié)炎的方案。
圖4示出本發(fā)明的治療骨關(guān)節(jié)炎的方案。
最佳實(shí)施方式下文將對(duì)本發(fā)明加以描述。應(yīng)理解在本說(shuō)明書中單數(shù)形式(例如“一個(gè)、一種”等)除了特別說(shuō)明之外均包括其復(fù)數(shù)的概念。還應(yīng)理解本文所用術(shù)語(yǔ)除了特別說(shuō)明之外均具有本領(lǐng)域典型使用的含義。因此，除了特別說(shuō)明之外，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所一般了解的相同含義。如果有任何不一致之處，本說(shuō)明書提前加以說(shuō)明。
本文所用術(shù)語(yǔ)“誘餌”或“誘餌化合物”是指一種化合物，其模擬轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB所結(jié)合的一個(gè)染色體位點(diǎn)，或者其模擬轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子結(jié)合的由轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB等控制的一個(gè)基因的染色體位點(diǎn)(后文稱作“靶結(jié)合位點(diǎn)”)，從而與結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的染色體結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)。典型地，所述誘餌或誘餌化合物包括一種核酸及其類似物。
當(dāng)一種誘餌存在于細(xì)胞核中時(shí)，所述誘餌與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合該轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的靶結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果，由轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子與靶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合而產(chǎn)生的生物學(xué)功能被抑制。所述誘餌含有能結(jié)合靶結(jié)合序列的至少一個(gè)核酸序列。本發(fā)明的誘餌可用于制備一種藥物組合物，只要該誘餌具有與靶結(jié)合序列結(jié)合的活性。
所述誘餌的實(shí)例包括含有關(guān)于NF-κB的GGGATTTC的寡核苷酸。優(yōu)選的誘餌的實(shí)例包括5’-CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3’(SEQID NO1)(NF-κB誘餌)，5’-GATCTAGGGATTTCCGGGAAATGAAGCT-3’(SEQ ID NO2)(STAT-1誘餌)，5’-AGCTTGAGATAGAGCT-3’)(SEQ ID NO3)(GATA-3誘餌)，5’-GATCAAGACCTTTTCCCAAGAAATCTAT-3’(SEQ ID NO4)(STAT-6誘餌)，5’-AGCTTGTGAGTCAGAAGCT-3’(SEQ ID NO5)(AP-1誘餌)，及5’-AATTCACCGGAAGTATTCGA-3’(SEQ ID NO6)(Ets誘餌)，5’-TGACGTCA-3’(CRE誘餌序列)，或者其含有寡核苷酸的互補(bǔ)序列、其突變體，或者含有這些分子的化合物。所述寡核苷酸可以是DNA或RNA。所述寡核苷酸還可以包括一種修飾的核酸和/或假核酸。另外，這些寡核苷酸可以是其突變體，或者含有其的化合物。所述寡核苷酸可以具有單鏈或雙鏈，或者可以是線性或環(huán)形的。突變體是具有上述序列的核酸，其一部分具有一個(gè)突變、取代、插入或缺失，就所述因子結(jié)合的核酸結(jié)合位點(diǎn)而言，其特異性拮抗一種轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB等，或者由轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB等控制的基因的另一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB等或由轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB等控制的基因的其它轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的誘餌的更優(yōu)選的實(shí)例包括含有一或多個(gè)上述核酸序列的雙鏈寡核苷酸或其突變體。含有一或多個(gè)上述核酸序列的核酸，當(dāng)包含的核酸序列數(shù)是2時(shí)稱為雙重誘餌，當(dāng)包含的核酸序列數(shù)是3時(shí)稱為三重誘餌，表明核酸序列數(shù)。
本發(fā)明中使用的寡核苷酸包括經(jīng)修飾的以對(duì)體內(nèi)降解具有抗性的寡核苷酸，如具有三磷酸二酯鍵的寡核苷酸(S-oligo)，所述鍵是一種磷酸二酯鍵，其氧原子被硫原子置換，及包括其磷酸二酯鍵被一個(gè)無(wú)電荷的甲基磷酸基團(tuán)取代的寡核苷酸等。
本發(fā)明的誘餌可以利用本領(lǐng)域已知的化學(xué)或生物化學(xué)合成方法生產(chǎn)。例如，當(dāng)一種核酸被用作誘餌化合物時(shí)，可應(yīng)用遺傳工程中一般使用的核酸合成方法。例如，可以使用DNA合成儀直接合成指定的誘餌核酸。另外，可以合成這些核酸、含有所述核酸或其一部分的核酸，隨后使用PCR方法和一個(gè)克隆載體進(jìn)行擴(kuò)增等。另外，將通過(guò)這些方法獲得的核酸使用一種限制酶切割，并使用DNA連接酶連接以產(chǎn)生指定的核酸。為獲得在細(xì)胞中更穩(wěn)定的誘餌核酸，可以將所述核酸的堿基、糖和磷酸部分進(jìn)行化學(xué)修飾，如烷化、?；?。
本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其只包含上述誘餌化合物或者組合一種穩(wěn)定化合物、一種稀釋劑、一種載體或另一種成分、或者一種藥劑。
本發(fā)明的藥物組合物可以這樣一種形式應(yīng)用，即所述誘餌被攝入受影響部分的細(xì)胞中或者指定組織的細(xì)胞中。
本發(fā)明的藥物組合物是在任何無(wú)菌的生物適合的藥物載體中給予的(所述載體包括但非限于生理鹽水、緩沖的生理鹽水、葡萄糖和水)。任何這些分子與一種合適的賦形劑、佐劑和/或藥物可接受的載體混和的一種藥物組合物可單獨(dú)給予患者，或者與另一種藥物組合物中的藥劑組合給予。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物可接受的載體是無(wú)藥物學(xué)活性的。
本發(fā)明的藥物組合物通過(guò)口服或非腸道給予。非傳道給藥方法包括局部給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥(例如通過(guò)頸動(dòng)脈給藥)、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、髓內(nèi)給藥、注入蛛網(wǎng)膜下隙、心室內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥或鼻內(nèi)給藥。在本發(fā)明中，任何給藥途徑均可使用，只要所述組合物通過(guò)該途徑可以到達(dá)進(jìn)行治療的部位，特別是炎癥部位即可。因此，本發(fā)明提供了一種新的治療方法以在炎癥部位或動(dòng)脈進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染及進(jìn)行該方法的一種組合物。
除了所述誘餌化合物之外，這些藥物組合物還含有一種合適的藥物可接受的載體，包括促進(jìn)所述誘餌化合物進(jìn)程的另一種化合物以產(chǎn)生可以藥物學(xué)應(yīng)用的賦形劑或制品。關(guān)于所述誘餌化合物的制備和給藥的技術(shù)的詳細(xì)描述見例如最近增補(bǔ)的日本藥典最新版本及“REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES”(MaackPublishing Co.，Easton，PA)所述。
口服給藥的藥物組合物可以使用本領(lǐng)域熟知的一種藥物可接受的載體以適于給藥的給藥形式制備。這種載體可以被制成片劑、藥丸、糖衣藥物、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等，適于患者攝取該藥物組合物。
口服給藥的藥物組合物可以如下方式獲得將一種活性化合物與一種固體賦形劑組合，如果需要?jiǎng)t將所得混合物粉碎，如果需要?jiǎng)t再加入一種合適的混合物以獲得一種片劑或糖衣藥物的核心，加工成粒狀混合物。所述合適的賦形劑可以是碳水化合物或蛋白質(zhì)充填劑，包括但非限于如下物質(zhì)糖包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；衍生自玉米、小麥、水稻、馬鈴薯或其它植物的淀粉；纖維素如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或者羧甲基纖維素鈉；樹膠包括阿拉伯樹膠和黃蓍樹膠；及蛋白質(zhì)如明膠和膠原蛋白。如果需要可使用一種分解劑或增溶劑，如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸或其鹽(例如藻酸鈉)。
提供的糖衣藥物核心是具有一種合適的包衣，如濃縮的糖溶液。所述糖衣藥物核心還可以含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、carbopolygel、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液及一種合適的有機(jī)溶劑或溶劑混和溶液。為鑒別產(chǎn)物或確定活性化合物的量(即劑量)，可以在片劑或糖衣藥物中加入染料或色素。
口服給藥的藥物制品可含有，例如，密閉的軟膠囊，其由明膠膠囊、明膠和包衣(例如甘油或山梨糖醇)組成。所述凝膠膠囊可含有一種活性成分混和一種充填劑或結(jié)合劑，如乳糖或淀粉，一種潤(rùn)滑劑，如滑石或硬脂酸鎂，及任選一種穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，所述誘餌化合物可以溶解或懸浮于一種合適的液體，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中，有或無(wú)穩(wěn)定劑。
非腸道給藥的藥物制品含有活性化合物的一種水溶液。為進(jìn)行注射，本發(fā)明的藥物組合物是在水溶液中制備的，優(yōu)選在Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理學(xué)合適的緩沖液，如緩沖的生理鹽水中制備。進(jìn)行注射的水相懸浮液可含有提高懸浮液粘性的一種物質(zhì)(例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖)。另外，所述活性化合物的懸浮液可以制備成一種合適的油相懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪酸，如芝麻油，合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。如果需要，所述懸浮液可含有一種穩(wěn)定劑以制備高濃度溶液，或者含有一種合適的藥劑或試劑以提高所述化合物的溶解性。
就局部或鼻內(nèi)給藥而言，可以在制備中使用一種滲透特殊屏障的合適滲透劑。這種滲透劑是本領(lǐng)域所熟知的。
本發(fā)明的藥物組合物可以使用與本領(lǐng)域已知方法相似的方法生產(chǎn)(例如，常規(guī)混和、分解、形成顆粒、制備糖衣制劑、淘析、乳化、包囊化、包含、冷凍干燥或凍干)。
優(yōu)選地，在非腸道給藥的情況中，如局部給藥或從頸部灌注入受影響部分的細(xì)胞或指定組織的細(xì)胞中，本發(fā)明的藥物組合物可含有一種合成的或天然的親水性聚合物作為載體。這種親水性聚合物例如包括羥丙基纖維素和聚乙二醇。本發(fā)明的誘餌化合物可以與上述親水性聚合物在合適的溶劑中混和。所述溶劑可以通過(guò)如空氣干燥方法除去。所得化合物可以根據(jù)所希望的形式成形，如薄片，然后給予靶位點(diǎn)。含有親水性聚合物的這種制品的含水量低，具有良好的保存期限及良好的誘餌保持力，因?yàn)楫?dāng)使用時(shí)所述制品吸收水分轉(zhuǎn)變?yōu)槟z。
或者，當(dāng)一種核酸或其修飾體用作誘餌時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選以基因?qū)敕椒ㄖ型ǔＪ褂玫男问接欣貞?yīng)用，如使用仙臺(tái)病毒(HVJ)等的膜融合脂質(zhì)體制品，使用胞吞等的脂質(zhì)體制品，含有陽(yáng)離子脂質(zhì)如Lipofectamine(Gibco BRL)等的制品，或者使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體的病毒制品。特別優(yōu)選膜融合脂質(zhì)體制品。
所述脂質(zhì)體制品是任何脂質(zhì)體構(gòu)建體，其是大單層小泡(LUV)、多層小泡(MLV)和小單層小泡(SUV)。LUV的顆粒大小為大約200-1000nm。MLV的顆粒大小為大約400-3500nm。SUV的顆粒大小為大約20-50nm。使用HVJ等的膜融合脂質(zhì)體制品優(yōu)選應(yīng)用顆粒大小為大約200nm-1000nm的MLV。
對(duì)生產(chǎn)脂質(zhì)體的方法無(wú)特殊限制，只要所述脂質(zhì)體具有一個(gè)誘餌。所述脂質(zhì)體可以通過(guò)常規(guī)使用的方法生產(chǎn)，例如，反相蒸發(fā)方法(Szoka，F(xiàn) et al.，Biochim Biophys Acta，Vol.601 559(1980))、醚浸漬(ether infusion)方法(Deamer，D.W.Ann.N.Y.Acad.Sci.，Vol.308 250(1978))、表面活性劑方法(Brunner，J et al.BiochimBiophys Acta，Vol.455 322(1976))等。
形成脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)例如包括磷脂、膽固醇、氮脂質(zhì)等。通常優(yōu)選磷脂，包括天然的磷脂，如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、心磷脂、鞘磷脂、卵黃卵磷脂、大豆卵磷脂、溶血卵磷脂等，或者通過(guò)常規(guī)使用的方法氫化相應(yīng)的磷脂，及另外的合成的磷脂，如聯(lián)十六烷磷酸酯、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、桐酰磷脂酰膽堿、桐酰磷脂酰乙醇胺、桐油酰磷脂酰絲氨酸等。
包括這些磷脂的所述脂質(zhì)可以單獨(dú)使用，或者至少兩種組合使用。在這種情況中，可以使用在分子內(nèi)具有一個(gè)正電基團(tuán)的原子基團(tuán)的脂質(zhì)，如乙醇胺、膽堿等，以提高負(fù)電性誘餌核酸的結(jié)合速度。除了用于形成脂質(zhì)體的主要磷脂之外，可以使用一種添加劑，如膽固醇、硬脂酰胺、α-生育酚等，這些添加劑是通常已知形成脂質(zhì)體的添加劑。
由此獲得的脂質(zhì)體可另外含有一種促進(jìn)膜融合的物質(zhì)，如從HVJ、失活的HVJ、仙臺(tái)病毒等中純化的一種膜融合促進(jìn)蛋白質(zhì)，以促進(jìn)被攝入受影響部位的細(xì)胞或指定組織的細(xì)胞中。
生產(chǎn)脂質(zhì)體制品的方法的實(shí)例在下文特別加以描述。例如，將上述形成脂質(zhì)體的物質(zhì)與膽固醇一起溶解于一種有機(jī)溶劑，如四氫呋喃、氯仿、乙醇等中。將所得溶液置于一個(gè)合適的試管中，隨后在減壓下除去所述溶劑，從而在試管內(nèi)壁上形成脂質(zhì)體形成物質(zhì)的一層膜。向該試管中加入含有誘餌的一種緩沖溶液，隨后攪動(dòng)。如果需要?jiǎng)t將上述膜融合促進(jìn)物質(zhì)加入所得脂質(zhì)體中，隨后分離所述脂質(zhì)體?？梢詫⒂纱双@得的含有所述誘餌的脂質(zhì)體懸浮于一種合適的溶劑中，或者可以凍干，隨后分散于一種合適的溶劑中。所得懸浮液可以用于治療。在分離脂質(zhì)體之后及使用之前的過(guò)渡時(shí)期可以加入所述膜融合促進(jìn)物質(zhì)。
本發(fā)明的組合物或試劑盒可進(jìn)一步包含一種生物適合的材料。這種生物適合的材料可含有選自如下一組中的至少一種硅氧烷、膠原、明膠、乙醇酸-乳酸共聚物、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚氨基甲酸酯、聚乙烯、聚四氟乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯。優(yōu)選硅氧烷，因?yàn)槠湟子诔尚?。生物可降解的聚合物例如包括膠原、明膠、通過(guò)脫水縮聚而不用催化劑從選自以下一組中的至少一種合成的聚合物或共聚物α-羥基羧酸(例如乙醇酸、乳酸、羥丁酸等)、羥基二羧酸(例如蘋果酸等)和羥基三羧酸(例如檸檬酸等)或其混合物；聚α氰基丙烯酸酯、聚氨基酸(例如聚-γ-偶苯酰-L-谷氨酸等)，基于順丁烯二酸酐的共聚物的可聚合的酸酐(例如苯乙烯-順丁烯二酸共聚物等)。聚合的類型是隨機(jī)的、嵌段的及接枝的。當(dāng)α-羥基羧酸、羥基二羧酸和羥基三羧酸在分子中具有光學(xué)活性中心時(shí)，可以使用任何D-異構(gòu)體、L-異構(gòu)體和DL-異構(gòu)體。優(yōu)選地，可以使用乙醇酸-乳酸共聚物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物或試劑盒可以是緩釋形式。所述緩釋劑量形式可以是本領(lǐng)域已知的任何形式，只要其在本發(fā)明中使用即可。這種形式包括例如條棒形式(小球形式、圓柱形式、針狀等)、片劑形式、圓盤形式、球形和薄片形式。制備緩釋形式的方法為本領(lǐng)域所已知，并見于例如日本藥典、美國(guó)藥典及其它國(guó)家的藥典所揭示。生產(chǎn)一種緩釋制品(延長(zhǎng)給藥的制品)的方法例如包括利用藥物從復(fù)合物中解體的方法、使用一種水相懸浮液注射的方法、使用一種油相溶液注射或油相懸浮液注射的方法、使用一種乳狀液(o/w類型和w/o類型乳狀液注射等)注射的方法。
在緩釋形式的情況中，可將一種緩釋制品(小球制品等)包埋于準(zhǔn)備給予所述制品的部位的附近?；蛘?，可以使用一個(gè)滲透泵等持續(xù)及逐漸地給予所述緩釋制品。
可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法制備注射制劑。例如，將一種成分溶解于一種合適的溶劑中(生理鹽水、緩沖液如PBS、無(wú)菌用水等)，隨后使用濾膜過(guò)濾滅菌。之后，將所得溶液充填于一個(gè)無(wú)菌容器(例如安瓿等)中，從而制備所述注射制劑。如果需要?jiǎng)t所述注射制劑可含有一種常用的藥物載體。在脂質(zhì)體形式的情況中，可加入脂質(zhì)體制備所需要的試劑，如懸浮劑、冷凍劑及通過(guò)離心濃縮的冷凍劑。所述脂質(zhì)體優(yōu)選通過(guò)非腸道給予。因此，當(dāng)給予所述脂質(zhì)體時(shí)，可以使用一種非侵入性導(dǎo)管、一種非侵入性注射器等給予。例如，作為使用非侵入性導(dǎo)管的給藥方法，本發(fā)明的組合物被直接灌注于腦部或者通過(guò)頸動(dòng)脈而注入腦部。
本發(fā)明的藥物組合物包括含有有效量的誘餌化合物的一種組合物，所述有效量是指可以達(dá)到指定目的的誘餌化合物?！爸委熡行Я俊被颉八幬镉行Я俊笔菫楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的術(shù)語(yǔ)，是指有效產(chǎn)生指定藥理學(xué)作用的藥物量。因此，治療有效量是指足以降低所治療的疾病表現(xiàn)的量。針對(duì)一種預(yù)定應(yīng)用證實(shí)有效量(例如治療有效量)的一種有效的試驗(yàn)是測(cè)定疾病的恢復(fù)程度。根據(jù)所治療的個(gè)體情況準(zhǔn)確地給予一定量。所述量?jī)?yōu)選最佳化以達(dá)到所希望的作用而又無(wú)顯著的副作用。治療有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
任何化合物的治療有效劑量最初可以使用細(xì)胞培養(yǎng)分析或任何合適的動(dòng)物模型進(jìn)行估計(jì)。所述動(dòng)物模型用于獲得所希望的濃度范圍和給藥途徑。之后，這種信息可用于確定用于給予人體的劑量和途徑。
治療有效量是指誘餌化合物的一個(gè)量，這個(gè)量導(dǎo)致疾病的癥狀或狀況減輕。這種化合物的治療作用和毒性可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)程序在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定(例如ED50，半數(shù)治療有效量；LD50，半數(shù)致死量)。治療作用和毒性作用之間的劑量比是一個(gè)治療指數(shù)，可以表示為ED50/LD50比值。優(yōu)選呈現(xiàn)高治療指數(shù)的藥物組合物。從細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)可用于配制用于人體的劑量范圍。這種化合物的劑量?jī)?yōu)選在循環(huán)濃度包括ED50時(shí)毒性很低或無(wú)毒性的范圍內(nèi)。這種劑量可在此范圍內(nèi)根據(jù)所應(yīng)用的劑型、患者的易感性及給藥途徑而變化。例如，誘餌的劑量是根據(jù)患者年齡及其它狀況、疾病類型、所應(yīng)用的誘餌的類型等而適當(dāng)選擇的。例如，所述誘餌每日一次或多次給予腦部，每次10-10000nmole。所述誘餌一般通過(guò)頸動(dòng)脈給予，每日一或多次，每次10-10000nmole。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述治療有效量典型地可以是至少0.01mg/kg體重，通常為至少0.05mg/kg體重，優(yōu)選為至少0.1mg/kg體重。在膝治療的情況中，治療有效量可以是100μg-100mg/關(guān)節(jié)，通常為至少5mg/關(guān)節(jié)，優(yōu)選為至少10mg/關(guān)節(jié)，更優(yōu)選為至少20mg/膝，及更優(yōu)選為至少30mg/關(guān)節(jié)。治療有效量/體重可以根據(jù)所治療的屬、物種而變化。在人類患者的情況中，治療有效量可以是至少1mg/關(guān)節(jié)，通常為至少5mg/關(guān)節(jié)，優(yōu)選為至少10mg/關(guān)節(jié)，更優(yōu)選為至少20mg/關(guān)節(jié)，更優(yōu)選為至少30mg/關(guān)節(jié)。在給予骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的膝的情況中，治療有效量可以是0.01-500mg/關(guān)節(jié)，通常為0.05-100mg/關(guān)節(jié)，優(yōu)選為至少0.1-5mg/關(guān)節(jié)。在其它膝的情況中，給予量可以與關(guān)節(jié)腔的體積成比例設(shè)定?？梢詮暮铩⒋笫蟮葎?dòng)物中高概率推出所述治療有效量。給藥頻率可以是任何頻率，通常是每四周一次至每日一次。在骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的情況中，上述劑量適于作為治療有效量。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的誘餌或誘餌化合物可以至少0.1mg/ml的量存在，更優(yōu)選1.0mg/ml。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的誘餌或誘餌化合物可以至少2.0mg/ml，至少5.0mg/ml，至少5.0mg/ml，至少20.0mg/ml，至少30.0mg/ml，至少50.0mg/ml，至少70.0mg/ml，至少100.0mg/ml，至少200mg/ml或更多的量存在。
精確劑量及組合物中的誘餌濃度由各個(gè)醫(yī)生根據(jù)所治療的患者的狀況加以確定。對(duì)劑量和給藥加以調(diào)節(jié)以提供足夠水平的活性部分或者具有所希望的作用。要考慮的額外因素包括疾病癥狀的嚴(yán)重程度(例如腫瘤的大小和部位、患者的年齡、體重及性別、限制飲食的時(shí)間及給藥頻率、藥物組合、反應(yīng)易感性及對(duì)治療的抗性/應(yīng)答)。根據(jù)特異制品的半衰期和消除率，每3-4天、每周或兩周一次給予持續(xù)作用的藥物組合物。在本領(lǐng)域已知的出版物中提供了特異劑量和給藥方法的指導(dǎo)。
含有由此獲得的誘餌作為主要成分的藥物可以根據(jù)疾病的類型、所應(yīng)用的誘餌的類型等而以多種方式給予。例如，就炎癥性疾病或障礙而言，所述藥物可以血管內(nèi)給予、應(yīng)用于疾病部位、給予疾病部位、或者血管內(nèi)給予疾病部位。例如在慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕癥、骨關(guān)節(jié)炎等情況中，所述藥物可以直接灌注于關(guān)節(jié)。
一方面，由本發(fā)明的化合物治療的疾病或障礙是炎癥性疾病或障礙。另一方面，本發(fā)明治療的疾病或障礙是關(guān)節(jié)疾病或障礙(如關(guān)節(jié)炎)。
本文所用術(shù)語(yǔ)“炎癥(炎癥反應(yīng))”是指一種基本病理學(xué)過(guò)程，包括由一種物理、化學(xué)或生物學(xué)活性因素、疾病血管及其相鄰的組織所導(dǎo)致的細(xì)胞和/或組織反應(yīng)的一種動(dòng)態(tài)復(fù)合體。炎癥包括局部反應(yīng)過(guò)程，由此導(dǎo)致的形態(tài)學(xué)改變，損害性物質(zhì)的破壞和清除，修復(fù)和痊愈。炎癥的主要癥狀包括紅(變?yōu)榧t色)、觸冷感熱(高溫)、生長(zhǎng)(腫脹)、痛(疼痛)等。另外，可以發(fā)生功能喪失(功能抑制或喪失)。所有這些癥狀均可以觀測(cè)到，但不是所有癥狀均存在。炎癥是相應(yīng)于對(duì)微循環(huán)系統(tǒng)分布的組織的毒性刺激的一種局部應(yīng)答。毒性刺激可例如是外源物、物理能量等，而且損害的組織本質(zhì)上也可以是這種炎性刺激。因此，炎癥是對(duì)微循環(huán)系統(tǒng)中分布的組織中不利刺激應(yīng)答的一種局部應(yīng)答。這種不利刺激包括例如外源物、物理能量等，另外包括損害的組織本身，其可以是致炎癥原。因此，在高等動(dòng)物中炎癥的特征在于對(duì)刺激的一系列微循環(huán)系統(tǒng)應(yīng)答。即在正常的炎癥中，微循環(huán)系統(tǒng)瞬時(shí)自身收縮，之后自身擴(kuò)展，從而開放通常是密閉的毛細(xì)管床，導(dǎo)致血流體積增加。另外，小靜脈區(qū)域的內(nèi)皮細(xì)胞的開放空間產(chǎn)生血管滲透增強(qiáng)現(xiàn)象，其中血漿成分通過(guò)該空間流出至間質(zhì)組織中。這種血管滲透增強(qiáng)在兩個(gè)階段發(fā)生，第一個(gè)階段是由組胺或5-羥色胺產(chǎn)生的微弱應(yīng)答，第二個(gè)階段是晚期類型滲透，在炎癥的血管滲透中起主要作用。然后，多核白細(xì)胞、單核細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)、淋巴細(xì)胞等從小靜脈區(qū)域出來(lái)至間質(zhì)組織中。由這些血漿和細(xì)胞成分產(chǎn)生的活性劑的作用促進(jìn)組織細(xì)胞的增殖，從而開始修復(fù)。這一系列過(guò)程被描述為紅、腫、熱、痛?；旧?，炎癥是局部的保護(hù)性反應(yīng)，而且另外可以具有組織損害作用。因此，炎癥還包括功能性紊亂作為主要癥狀。因此，詳細(xì)而言，炎癥反應(yīng)是與局部組織的一種復(fù)雜反應(yīng)，涉及細(xì)胞病、循環(huán)紊亂、增殖等，并因此本質(zhì)上可以稱作整體動(dòng)態(tài)過(guò)程。
本文所用術(shù)語(yǔ)“炎癥性疾病”是指導(dǎo)致整體疾病部位的慢性炎癥的一種疾病，其涉及炎性細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞。這種炎癥性疾病包括，例如，炎癥，包括關(guān)節(jié)炎如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎、腎炎、肝炎；急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎和睪丸炎等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“關(guān)節(jié)疾病或障礙”包括關(guān)節(jié)的一種疾病或障礙，包括例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征及繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“關(guān)節(jié)炎”是指導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥的一種疾病。在關(guān)節(jié)內(nèi)部，關(guān)節(jié)腔由軟骨和滑液形成，包括在軟骨下的骨，及在滑液外部的關(guān)節(jié)囊、骨、肌、腱、韌帶等。關(guān)節(jié)易患炎癥，因?yàn)楫?dāng)活動(dòng)時(shí)關(guān)節(jié)經(jīng)常受到機(jī)械刺激。炎癥的原因可以是感染、外傷、過(guò)敏、代謝障礙等。相關(guān)的癥狀可以是關(guān)節(jié)腫脹、疼痛(關(guān)節(jié)痛)、局部熱、運(yùn)動(dòng)紊亂等。病理學(xué)上，可觀測(cè)到細(xì)胞侵潤(rùn)滑膜、水腫、結(jié)締組織增生等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎”是指一種疾病，特征在于未知原因所致的慢性關(guān)節(jié)炎。男性與女性的比值為1∶4，30-50歲的人通常易患這種疾病。在日本這種疾病的發(fā)病率估計(jì)為總?cè)丝诘?.3-0.5％。然而至今還未知病因，推測(cè)可能涉及許多多因素遺傳因子，特別是HLA-D4及病毒感染。關(guān)節(jié)炎可以在所有滑膜關(guān)節(jié)中發(fā)生，并存在多發(fā)及對(duì)稱傾向。最初，只觀測(cè)到滑膜炎癥，然后進(jìn)展為軟骨和骨的衰竭，以及軟骨變形、脫臼及骨僵硬，導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)喪失。特別地，觀測(cè)到特征性的腕跗骨易于變形、在掌指關(guān)節(jié)處尺骨錯(cuò)位、腕骨彎曲(swan-neck)變形、腕骨紐孔花(bouttoniere)變形、及跗骨外翻。除了關(guān)節(jié)之外，可關(guān)聯(lián)到外層心包炎、脈管炎、皮下結(jié)節(jié)及纖維肺，而且在脈管炎類型的情況中預(yù)后更壞，如彌漫性壞死性動(dòng)脈周炎，因此這種類型稱為惡性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。常規(guī)地，藥物治療包括使用緩解癥狀藥物(palliation introductory agent)，如類固醇、非類固醇抗炎劑、金制劑、D-青霉胺等；矯形治療，如滑膜切除術(shù)、關(guān)節(jié)成形術(shù)、置換關(guān)節(jié)成形術(shù)等；恢復(fù)治療，如熱處理、訓(xùn)練治療、矯正治療、假肢修復(fù)術(shù)治療等。然而，這樣均難以達(dá)到完全治愈。特別地，類固醇等具有成問(wèn)題的不利作用。
本文所用術(shù)語(yǔ)“關(guān)節(jié)變形(arthritis deformans)”和“骨關(guān)節(jié)炎”是指一種疾病，其中慢性退化性改變和產(chǎn)生性變化在關(guān)節(jié)中同時(shí)發(fā)生，從而改變關(guān)節(jié)的形狀。其可以分為原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎和繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎。前者(原發(fā)性)是在中老年人中發(fā)現(xiàn)的，因此除了年齡增長(zhǎng)之外還隨著機(jī)械刺激而進(jìn)展。后者(繼發(fā)性)也可以見于較年輕的人中，發(fā)生明顯的原因，如關(guān)節(jié)外傷、畸形、疾病、代謝障礙等之后。病理學(xué)上，關(guān)節(jié)軟骨逐漸磨損或缺損，導(dǎo)致骨的暴露。同時(shí)，軟骨隨著血管形成而肥大性生長(zhǎng)并形成骨刺。觀測(cè)到滑膜生長(zhǎng)、關(guān)節(jié)囊肥大或萎縮、離析物出現(xiàn)。常規(guī)地，藥物治療是給予非類固醇類消炎劑及關(guān)節(jié)內(nèi)注射類固醇等。另一方面，當(dāng)損害進(jìn)展時(shí)，進(jìn)行外科手術(shù)治療，關(guān)節(jié)固定術(shù)、關(guān)節(jié)成形術(shù)、切骨術(shù)和假肢置換關(guān)節(jié)成形術(shù)等。
通過(guò)本發(fā)明治療的部位可以衍生自任何類型的生物體。通過(guò)本發(fā)明治療的生物體包括脊椎動(dòng)物和非脊椎動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物(例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物等)，更優(yōu)選靈長(zhǎng)類動(dòng)物，最優(yōu)選人。
本發(fā)明的組合物和試劑盒典型地在醫(yī)師監(jiān)督下應(yīng)用，或者在由所涉及的國(guó)家的權(quán)威機(jī)構(gòu)及法律許可下使用。
另一方面，本發(fā)明提供了治療腦缺血障礙的一種試劑盒。該試劑盒包含本發(fā)明的誘餌或誘餌化合物，及提供了給予所述誘餌或誘餌化合物的產(chǎn)品說(shuō)明書。所述產(chǎn)品說(shuō)明書描述了給予所述誘餌或誘餌化合物的一種合適的方法。所述產(chǎn)品說(shuō)明書是根據(jù)實(shí)踐本發(fā)明的國(guó)家的權(quán)威機(jī)構(gòu)(例如Health，Labor and Welfare Ministry(日本)，F(xiàn)ood andDrug Administration(FDA)(美國(guó))等)指定的形式準(zhǔn)備的，明確地描述了由權(quán)威機(jī)構(gòu)許可的用法說(shuō)明。所述產(chǎn)品說(shuō)明書是一種所謂的包裝插入物，其典型地但非限于是紙制品、電子制品(因特網(wǎng)網(wǎng)址和電子郵件)。
本發(fā)明的誘餌或誘餌化合物的量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)使用目的、靶疾病(類型、嚴(yán)重程度等)、患者年齡、體重、性別和病史、細(xì)胞中生物活性物質(zhì)的形式或類型、細(xì)胞的形式或類型等容易地確定。
應(yīng)用于患者的本發(fā)明方法的頻率也由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)使用目的、靶疾病(類型、嚴(yán)重程度等)、患者年齡、體重、性別和病史、治療進(jìn)展等確定。所述頻率例如包括每日一次至幾個(gè)月進(jìn)行一次(例如1次/周至1次/月)。優(yōu)選地，根據(jù)進(jìn)展給予1次/周至1次/月。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療方法可進(jìn)一步包括給予另一種藥物。這種藥物可以是本領(lǐng)域中的任何藥物，包括藥理學(xué)領(lǐng)域已知的任何藥物(例如抗生素等)。當(dāng)然，這種藥物可以是至少兩種其它藥物。所述藥物例如包括在最新版本的日本藥典、美國(guó)藥典及其它國(guó)家的藥典中所述那些藥物。所述藥物優(yōu)選是對(duì)腦缺血疾病(例如抗血小板劑、腦神經(jīng)功能改善劑、腦代謝改善劑、血流改善劑等)有作用的那些藥物。
本文所用的分子生物學(xué)技術(shù)、生物化學(xué)技術(shù)和微生物學(xué)技術(shù)是本領(lǐng)域熟知并常用的，見例如Ausubel F.A.等編輯(1998)，CurrentProtocols in Molecular Biology，Wiley，紐約，NY；Sambrook J等(1987)，Molecular CloningA Laboratory Manual，第2版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，冷泉港，NY；Jikken-Igaku“Idenshi-Donyu &Hatsugen-Kaiseki-Jikkenho [Experimental medicine“Experimentalmethods for Gene introduction & Expression Analysis”，Yodo-sha，special issue，1997等。
如本文所用，除非特別說(shuō)明，“核酸”、“核酸分子”、“多核苷酸”和“寡核苷酸”在此可交替地指包含一系列核苷酸的一種大分子(聚合物)。核苷酸是指其堿基是磷酯的一種核苷。所述核苷酸的堿基是嘧啶或嘌呤堿基(嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸)。多核苷酸包括DNA或RNA。
另外，使用軟件如BLAST，基于本發(fā)明的誘餌的序列通過(guò)同源搜索一個(gè)遺傳信息數(shù)據(jù)庫(kù)如GenBank(人類基因組計(jì)劃的基因組數(shù)據(jù))而獲得的序列也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
使用BLAST(序列分析工具)，使用默認(rèn)參數(shù)計(jì)算堿基序列的相同性對(duì)比。
本文所用“在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸”是指本領(lǐng)域熟知的并通常使用的條件。這種多肽可以通過(guò)使用選自本發(fā)明的多核苷酸的一種多核苷酸進(jìn)行集落雜交、噬菌斑雜交、Southern印跡雜交等而獲得。特別地，使用其上固定了衍生自集落或噬菌斑的DNA的一種濾膜在65℃在存在0.7-1.0M NaCl下進(jìn)行雜交。之后，使用0.1-2倍濃度的SSC(鹽水-檸檬酸鈉)溶液(1倍濃度的SSC溶液是由150mM NaCl和15mM檸檬酸鈉組成)在65℃洗滌該濾膜。通過(guò)這種方法鑒別的多核苷酸稱作“在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸”?？梢愿鶕?jù)例如Molecular Cloning第2版、Current Protocols in Molecular Biology，Supplement 1-38，DNA Cloning 1Core Techniques，A PracticalApproach，第2版，牛津大學(xué)出版社(1995)等所述的方法進(jìn)行雜交。在此，在嚴(yán)格條件下雜交的序列優(yōu)選不包括僅含有A或T的序列。
術(shù)語(yǔ)“高嚴(yán)格條件”是指設(shè)計(jì)為允許序列是高度互補(bǔ)的DNA鏈雜交的那些條件，并排除明顯錯(cuò)配的DNA雜交。雜交嚴(yán)格性主要是通過(guò)溫度、離子強(qiáng)度和變性劑如甲酰胺的濃度而確定。針對(duì)雜交和洗滌的“高嚴(yán)格條件”例如是在65-68℃，使用0.0015M的NaCl，0.0015M的檸檬酸鈉，或者在42℃使用0.015M的NaCl，0.0015M的檸檬酸鈉以及50％的甲酰胺。見Sambrook，F(xiàn)ritsch&Maniatis，Molecular CloningA Laboratory Manual(第2版，冷泉港實(shí)驗(yàn)室，N.Y.，1989)；Anderson等，Nucleic Acid HybridizationA PracticalApproach Ch.4(IRL出版有限公司)(牛津出版社)?？梢匀芜x更嚴(yán)格的條件(如較高的溫度、較低的離子強(qiáng)度、較高的甲酰胺或者其它變性劑)。根據(jù)降低非特異性和/或背景雜交的目的，在雜交和洗滌緩沖液中可以包含其它試劑。盡管也可以使用其它合適的試劑，但例如可以使用0.1％牛血清白蛋白，0.1％聚乙烯吡咯烷酮，0.1％的焦磷酸鈉，0.1％的十二烷基硫酸鈉(NaDodSO4或SDS)，F(xiàn)icoll，Denhardt’s溶液，超聲處理的鮭精DNA(或另一種非互補(bǔ)的DNA)，及硫酸葡聚糖。可以改變這些添加劑的濃度和類型而基本不影響雜交條件的嚴(yán)格性。雜交實(shí)驗(yàn)通常在pH6.8-7.4進(jìn)行；然而，在典型的離子強(qiáng)度條件下，雜交的速度幾乎不依賴于pH。見Anderson等，Nucleic AcidHybridizationA Practical Approach Ch.4(IRL出版有限公司，英國(guó)牛津)。
影響DNA雙鏈體的穩(wěn)定性的試劑包括堿基對(duì)錯(cuò)配的堿基組成、長(zhǎng)度和程度。雜交條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員加以調(diào)節(jié)以順應(yīng)這些變量，并使得不同序列的相關(guān)的DNA形成雜合體。完全匹配的DNA雙鏈體的解鏈溫度可以通過(guò)如下等式計(jì)算Tm(℃)＝81.5+16.6(log[Na+])+0.41(％G+C)-600/N-0.72(％甲酰胺)其中N是形成的雙鏈體的長(zhǎng)度，[Na+]是在雜交或洗滌溶液中的鈉離子摩爾濃度，％G+C是雜合體中(鳥嘌呤+胞嘧啶)堿基的百分比。就不完全匹配的雜合體而言，解鏈溫度隨著每錯(cuò)配1％而降低大約1℃。
術(shù)語(yǔ)“中等嚴(yán)格條件”是指在此條件下能形成比在“高嚴(yán)格條件下”可以發(fā)生的堿基對(duì)錯(cuò)配程度更高的DNA雙鏈體。典型的“中等嚴(yán)格條件”例如是在50-65℃使用0.015M的NaCl和0.0015M檸檬酸鈉，或者在37-50℃使用0.015M的NaCl，0.0015M檸檬酸鈉和20％甲酰胺。例如，在50℃在0.015M的鈉離子中的“中等嚴(yán)格條件”允許大約21％的錯(cuò)配。
本領(lǐng)域技術(shù)人員意識(shí)到在“高嚴(yán)格條件”和“中等嚴(yán)格條件”之間沒(méi)有絕對(duì)界限。例如，在0.015M的鈉離子(無(wú)甲酰胺)情況中，完全匹配的長(zhǎng)DNA的解鏈溫度為大約71℃。就在65℃洗滌(在相同離子濃度)而言，這允許大約6％錯(cuò)配。為捕捉更不相關(guān)的序列，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以簡(jiǎn)單地降低溫度或提高離子強(qiáng)度。
在1M的NaCl中就直至大約20個(gè)核苷酸的寡核苷酸探針而言，解鏈溫度的如下估算Tm＝(2℃/A-T堿基對(duì))+(4℃/G-C堿基對(duì))注意在6×檸檬酸鈉鹽(SSC)中鈉離子濃度為1M。見Suggs等，Developmental Biology Using Purified Genes 683(Brown and Fox，eds.，1981)。
用作誘餌如NF-κB的核酸可以易于從一個(gè)cDNA文庫(kù)中分離，所述文庫(kù)具有含有例如SEQ ID NO1-8任一所述核酸序列的一部分的PCR引物和雜交探針。在誘餌如NF-κB中所用的核酸或其變體或片段等優(yōu)選可與SEQ ID NO1-8所示序列的整體或部分在低嚴(yán)格條件下雜交，所述條件是雜交緩沖液在42℃，基本上含有1％牛血清白蛋白(BSA)，500mM磷酸鈉(NaPO4)，1mM EDTA和7％的SDS，洗滌緩沖液是在50℃，基本含有2×SSC(600mM NaCl，60mM檸檬酸鈉)及0.1％SDS；更優(yōu)選在如下低嚴(yán)格條件下雜交即雜交緩沖液在50℃，基本上含有1％牛血清白蛋白(BSA)，500mM磷酸鈉(NaPO4)，15％甲酰胺，1mM EDTA和7％的SDS，洗滌緩沖液是在50℃，基本含有1×SSC(300mM NaCl，30mM檸檬酸鈉)及1％SDS；最優(yōu)選在如下的低嚴(yán)格條件下雜交即雜交緩沖液在50℃，基本上含有1％牛血清白蛋白(BSA)，200mM磷酸鈉(NaPO4)，15％甲酰胺，1mM EDTA和7％的SDS，洗滌緩沖液基本含有0.5×SSC(150mMNaCl，15mM鈉。
基因的“同源性”是指兩或多個(gè)基因序列之間的相同性程度。因此，某兩個(gè)基因之間的同源性越高，則其序列之間的相同性或相似性越高。兩個(gè)基因之間是否具有同源性可以通過(guò)直接對(duì)比兩個(gè)序列或者通過(guò)在嚴(yán)格條件下雜交進(jìn)行研究。當(dāng)直接對(duì)比兩個(gè)基因序列時(shí)，如果基因的DNA序列有至少50％，優(yōu)選至少70％，更優(yōu)選至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％是相同的，則所述基因具有同源性。
本文所用核酸分子的“片段”是指一種多核苷酸，其長(zhǎng)度比參比核酸分子的全長(zhǎng)短，但足以至少用作本發(fā)明中的一個(gè)因子。因此，在此所述片段是指一種多核苷酸，其序列長(zhǎng)度是參比多核苷酸全長(zhǎng)的1至n-1(參比多核苷酸的長(zhǎng)度是n)。根據(jù)目的可以適當(dāng)?shù)馗淖兤蔚拈L(zhǎng)度。例如，在多核苷酸的情況中，所述片段的長(zhǎng)度低限為5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100和更多個(gè)核苷酸。由在此未特別說(shuō)明的整數(shù)表示的長(zhǎng)度(例如11等)可以是低限。
“可雜交的多核苷酸”是指一種多核苷酸，其可以與其它多核苷酸在上述雜交條件下雜交。特別地，所述可雜交的多核苷酸包括至少一種多核苷酸，其與SEQ ID NO1所示堿基序列具有至少60％同源性，優(yōu)選具有至少80％同源性的多核苷酸，更優(yōu)選具有至少95％同源性的多核苷酸。在此所述的同源性是使用例如應(yīng)用Altschul等(分J.Mol.Biol.215，403-410(1990))所揭示的算法的搜索程序BLAST的分值表示的。因此，除非特別說(shuō)明，氨基酸和堿基序列的相似性、相同性和同源性對(duì)比是利用FASTA，使用默認(rèn)參數(shù)計(jì)算的，F(xiàn)ASTA是進(jìn)行序列分析的一個(gè)工具。
本文所用基因(例如核酸序列、氨基酸序列等)的“相似性”是指當(dāng)在上述同源性中保守取代被認(rèn)為是陽(yáng)性的(相同)時(shí)，兩或多個(gè)序列之間的相同性的比例。因此，同源性和相似性在存在保守取代的情況中彼此不同。如果保守取代不存在，則同源性和相似性具有一樣的值。
本文所用“序列(氨基酸、核苷酸等)的相同性、同源性或相似性百分比”是通過(guò)在一個(gè)對(duì)比窗對(duì)比兩個(gè)最佳排列的序列而確定的，其中對(duì)比窗中的多核苷酸或多肽序列的部分與用于兩序列間進(jìn)行最佳對(duì)比的參比序列相比可包含添加或缺失(例如缺口)(所述參比序列不包含添加或缺失(如果另一個(gè)序列包含添加，則可發(fā)生缺口))。所述百分比是通過(guò)確定在這兩個(gè)序列中出現(xiàn)相同的核酸堿基或氨基酸殘基的位置數(shù)，將匹配的位置數(shù)除以參比序列中位置總數(shù)(即窗口大小)，并將結(jié)果乘以100而計(jì)算的，以產(chǎn)生序列相同性百分比。當(dāng)在一個(gè)搜索中使用時(shí)，同源性是通過(guò)一種合適的技術(shù)估值的，所述技術(shù)選自本領(lǐng)域熟知的多種序列對(duì)比算法和程序。這種算法和程序包括例如但非限于TBLASTN、BLASTP、FASTA、TFASTA和CLUSTALW(Pearson and Lipman，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85(8)2444-2448，Altschul et al.，1990，J.Mol.Biol.215(3)403-410，Thompson et al.，1994，Nucleic Acids Res.22(2)4673-4680，Higginset al.，1996，Methods Enzymol.266383-402，Altschul et al.，1990，J.Mol.Biol.215(3)403-410，Altschul et al.，1993，Nature Genetics 3266-272)。
本文所用術(shù)語(yǔ)“相應(yīng)”基因或序列(例如一種誘餌、啟動(dòng)子序列等)是指一種基因或序列，其具有或預(yù)期具有與在一個(gè)物種中進(jìn)行對(duì)比參考的一種預(yù)定基因或序列相似的功能。當(dāng)多數(shù)這種基因或序列呈現(xiàn)具有這種功能時(shí)，這種相應(yīng)的基因或序列是指具有相同進(jìn)化起源的基因或序列。因此，相應(yīng)于給定基因或序列的一個(gè)基因可以是給定基因或序列的直向同源基因(ortholog)。因此，相應(yīng)于小鼠NF-κB基因等的基因可以在其它動(dòng)物(人、大鼠、豬、牛等)中發(fā)現(xiàn)。這種相應(yīng)的基因可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的技術(shù)鑒別。因此，例如在一種給定動(dòng)物中的相應(yīng)基因可以通過(guò)使用一種參比基因(例如小鼠NF-κB基因等)的序列作為查詢序列，搜索該動(dòng)物(例如人、大鼠)的序列數(shù)據(jù)庫(kù)而發(fā)現(xiàn)。如此本發(fā)明包括相應(yīng)于本發(fā)明的特異序列(例如SEQ IDNO1-8任一的序列)的序列。
術(shù)語(yǔ)“衍生的寡核苷酸”是指一種寡核苷酸，包括核苷酸的衍生物或者核苷酸之間具有非常規(guī)鍵的衍生物。特別地，這種寡核苷酸例如包括其中磷酸二酯鍵被轉(zhuǎn)變?yōu)榱虼姿狨?phosphothioate)鍵的一種衍生的寡核苷酸，其中磷酸二酯鍵被轉(zhuǎn)變?yōu)镹3’-P5’氨基磷酸酯鍵的一種衍生的寡核苷酸，其中核糖和磷酸二酯鍵被轉(zhuǎn)變?yōu)殡?核酸鍵的一種衍生的寡核苷酸，其中尿嘧啶被C-5丙炔基尿嘧啶取代的一種衍生的寡核苷酸，其中尿嘧啶被C-5噻唑尿嘧啶取代的一種衍生的寡核苷酸，其中胞嘧啶被C-5丙炔基胞嘧啶取代的一種衍生的寡核苷酸，其中胞嘧啶被吩噁嗪修飾的胞嘧啶取代的一種衍生的寡核苷酸，其中核糖被2’-O-丙炔基核糖取代的一種衍生的寡核苷酸，其中核糖被2’-甲氧基乙氧基核糖取代的一種衍生的寡核苷酸等。
本文所用“生物活性”是指某一因子(例如多核苷酸或多肽)在生物體內(nèi)所具有的活性，包括呈現(xiàn)多種功能的活性。例如，當(dāng)某一因子是轉(zhuǎn)錄因子時(shí)，其生物活性包括調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性的活性。當(dāng)某一因子是一種酶時(shí)，其生物活性包括酶活性。再例如，當(dāng)某因子是配體時(shí)，其生物活性包括與配體相應(yīng)的受體的結(jié)合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，其生物活性包括結(jié)合至少一種轉(zhuǎn)錄因子的活性。
本文所用“核苷酸”是指任何天然的核苷酸和非天然的核苷酸?！把苌暮塑账帷笔侵敢环N核苷酸，其與天然的核苷酸不同但與其起源的天然的核苷酸具有相似的功能。這種衍生的核苷酸是本領(lǐng)域熟知的。
本文所用“變體”是指與原始的物質(zhì)部分不同的一種物質(zhì)，如多核苷酸等。這種變體例如包括一種取代變體、添加變體、缺失變體、截短變體、等位基因變體等。等位基因是指位于與相應(yīng)的基因相同的基因座的一種遺傳變體，其中兩個(gè)基因彼此不同。因此，“等位基因變體”是指與某基因具有等位基因關(guān)系的一種變體。核酸分子的“同源物”是指一種核酸分子，其具有的核苷酸序列與參比核酸分子的核苷酸序列具有同源性。代表性地，“同源物”是指一種多核苷酸，其在嚴(yán)格條件下與參比核酸分子雜交。在本發(fā)明的核酸分子的情況中，“同源物”是指一種核酸分子，其具有的核酸序列與本發(fā)明的誘餌的核酸序列具有同源性，其生物學(xué)功能與本發(fā)明的啟動(dòng)子的功能相同或相似。因此，“同源物”和“變體”的概念部分重疊。因此，同源物與某一物種中某一基因具有氨基酸或核苷酸同源性(優(yōu)選至少60％同源性、更優(yōu)選至少80％、至少85％、至少90％及至少95％同源性)。從本發(fā)明的描述中將明了獲得這種同源物的方法。例如，本發(fā)明的誘餌的同源物可以是在相同物種中的一個(gè)同源基因或者在其它物種中的相應(yīng)基因。因此，本發(fā)明的誘餌可包括所述誘餌的所有同源物。
本文所用術(shù)語(yǔ)“分離的”生物制劑(例如核酸、蛋白質(zhì)等)是指從天然的生物體的細(xì)胞中的其它生物制劑中基本上分離或純化的一種生物學(xué)制劑(例如在核酸的情況中，除了核酸之外的制劑及具有除了指定的核酸之外的核酸序列的核酸；在蛋白質(zhì)的情況中，除了蛋白質(zhì)之外的制劑及具有除了指定蛋白質(zhì)之外氨基酸序列的蛋白質(zhì))。“分離的”核酸和蛋白質(zhì)包括通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)純化方法純化的核酸和蛋白質(zhì)。分離的核酸和蛋白質(zhì)還包括化學(xué)合成的核酸和蛋白質(zhì)。因此，一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸可以是這種分離的核酸。
一方面，本發(fā)明提供了治療和預(yù)防炎癥疾病或障礙、衍生于這種疾病或障礙的障礙以及關(guān)節(jié)炎的一種藥物組合物；本發(fā)明還提供了使用這種組合物治療和預(yù)防炎癥疾病或障礙、衍生于這種疾病或障礙的障礙以及關(guān)節(jié)炎的一種方法。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包括至少一種NF-κB誘餌和一種藥物可接受的載體。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明感興趣的疾病可以是選自如下一組中的至少一種疾病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，上述藥物可接受的載體可以是藥物可接受的任何載體，優(yōu)選是脂質(zhì)體。更優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物是以HVJ脂質(zhì)體形式提供的。
本發(fā)明中使用的NF-κB誘餌可包含序列GGATTTCCC。更優(yōu)選地，所述NF-κB誘餌可包含一個(gè)序列CCTTGAAGGGATTTCCCTCC(SEQ ID NO1)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述NF-κB誘餌可以是進(jìn)一步修飾的形式。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法可以使用一種直接給藥途徑應(yīng)用于疾病部位。
優(yōu)選地，這種基因由于其在炎癥部位和/或關(guān)節(jié)中表達(dá)而可以呈現(xiàn)一種作用。所述基因例如包括NF-κB、STAT-1、GATA-3、STAT-6、AP-1、E2F、Ets和CRE的誘餌。優(yōu)選的誘餌例如包括5’-CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3’(SEQ ID NO1)(NF-κB誘餌)，5’-GATCTAGGGATTTCCGGGAAATGAAGCT-3’(SEQ ID NO2)(STAT-1誘餌)，5’-AGCTTGAGATAGAGCT-3’(SEQ ID NO3)(GATA-3誘餌)，5’-GATCAAGACCTTTTCCCAAGAAATCTAT-3’(SEQ ID NO4)(STAT-6誘餌)，5’-AGCTTGTGAGTCAGAAGCT-3’(SEQ ID NO5)(AP-1誘餌)，及5’-AATTCACCGGAAGTATTCGA-3’(SEQ ID NO6)(Ets誘餌)，5’-TGACGTCA-3’(CRE誘餌)，或者其互補(bǔ)寡核苷酸，其變體，或含有它們的化合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物可接受的載體可以是脂質(zhì)體。
在本發(fā)明中，論證了用與轉(zhuǎn)錄因子NF-κB結(jié)合的順式元件誘餌的體內(nèi)轉(zhuǎn)染用于改善炎癥如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
在常規(guī)的炎癥治療中，通常使用類固醇或非類固醇抗炎劑。然而，類固醇的應(yīng)用導(dǎo)致整體的不良作用，腎上腺皮質(zhì)萎縮，并導(dǎo)致退縮綜合征、腎衰竭、糖尿病、滿月臉，及類固醇性挫傷、類固醇性溢血、皮膚萎縮、多毛、感染性疾病等局部不良作用。
另外，NF-κB的靶基因包括凋亡相關(guān)基因(包括TP53(見Wu H，Lozano G.，J Biol Chem.1994，26920067-74)和c-myc(LaRosa FA，Pierce JW，Sonenshein GE.，Mol Cell Biol.1994，141039-44))。因此，根據(jù)本發(fā)明的使用針對(duì)NF-κB結(jié)合位點(diǎn)的誘餌的基因治療抑制了涉及炎癥應(yīng)答及關(guān)節(jié)損害的基因表達(dá)(包括凋亡)。
誘餌治療有許多益處，包括瞬時(shí)作用、低花費(fèi)及很少或無(wú)并發(fā)癥。使用裸E2F誘餌的基因治療已經(jīng)在臨床嘗試預(yù)防靜脈移植(vein-graft)疾病(見Mann MJ.Whittemore AD，Donaldson MC，Belkin M，Conte MS，Polak JF et al.，Lancet.19993541493-8)。
如上所述，應(yīng)注意誘餌在炎癥疾病和關(guān)節(jié)炎障礙領(lǐng)域中的應(yīng)用在如下描述中示出。
在后文中，本發(fā)明通過(guò)實(shí)施例進(jìn)行描述，如下實(shí)施例只是為了例證本發(fā)明。因此，本發(fā)明的范圍限于權(quán)利要求所述而非實(shí)施例所述。
實(shí)施例在如下實(shí)施例中，舉例說(shuō)明了使用的典型材料和方法。
實(shí)施例1NF-κB誘餌對(duì)猿膠原性關(guān)節(jié)炎模型的作用這個(gè)實(shí)施例測(cè)試了NF-κB誘餌在猿膠原性關(guān)節(jié)炎模型中的作用。通過(guò)將NF-κB給予關(guān)節(jié)內(nèi)部位測(cè)試了對(duì)猿II型膠原性關(guān)節(jié)炎模型的作用。另外，將其效力和毒性與關(guān)節(jié)內(nèi)給予類固醇加以對(duì)比。在本測(cè)試中不應(yīng)用GLP。
使用的測(cè)試物質(zhì)如下1)測(cè)試物質(zhì)NF-κB誘餌寡核苷酸(后文也稱作NF-κB誘餌)(AnGes MG)，(100mg/小瓶，保持在-20℃冷凍)。所用的ODN的序列為NF-κB誘餌ODN，5’-CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3’(SEQID NO1)。
2)陽(yáng)性對(duì)照乙酸倍他米松，倍他米松磷酸鈉(Rinderon懸浮液，后文稱作Rinderon)(SHIONOGI)(組成乙酸倍他米松2mg，倍他米松磷酸鈉0.66mg/0.5mL/安瓿)。
3)敏化物質(zhì)牛II型膠原(Collagen Gijutsu Kenshukai＝CollagenTechnology Instutute)(-20℃，避光保存)。
4)佐劑Freund完全佐劑(Becton Dickinson and Company)(避光保存)。
5)培養(yǎng)基-1鹽水(Otsuka Seiyaku Kojo)(在室溫保存)。
6)培養(yǎng)基-25mmol/L乙酸鹽溶液(由Wako Pure Chemical生產(chǎn)＝乙酸鹽，Otsuka Seiyaku Kojo＝鹽水)(冷凍保存)。
測(cè)試物質(zhì)及陽(yáng)性對(duì)照物質(zhì)的制備和給予測(cè)試物質(zhì)和陽(yáng)性對(duì)照物質(zhì)的制備和給予如下進(jìn)行制備方法NF-κB誘餌將其加入測(cè)試物質(zhì)小瓶中，加入鹽水溶解稀釋為6、20和60mg/mL以進(jìn)行應(yīng)用，并棄去剩余的溶液。
Rinderon安瓿中的陽(yáng)性對(duì)照物質(zhì)用鹽水稀釋。制備0.2mg/mL的乙酸倍他米松。一個(gè)安瓿(0.5mL)稀釋為10mL(20被稀釋)并棄去剩余的溶液。
作為測(cè)試動(dòng)物，將40只猿((恒河猴，專業(yè)繁殖飼養(yǎng)(purposebred))，體重2-3.5kg(在馴化起始時(shí))，年齡2-3年，來(lái)源于中國(guó)(培育地為中國(guó)廣西南寧Yongwu路14號(hào)，中國(guó)廣西靈長(zhǎng)類動(dòng)物中心(Guangxi Primate Center of China)，郵編530001)，進(jìn)口方中國(guó)國(guó)家科學(xué)設(shè)備及材料進(jìn)出口公司)馴化，并將其中30只進(jìn)行給藥處理。通常，將猿認(rèn)為是與人相似的測(cè)試動(dòng)物。其關(guān)節(jié)形式與人相似，而且其大小相似以及易于評(píng)估。因此，使用猿作為模型。就動(dòng)物應(yīng)用的倫理標(biāo)準(zhǔn)而言，本發(fā)明實(shí)施例是根據(jù)Shin-Nihon kagaku的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理標(biāo)準(zhǔn)的許可進(jìn)行的。
如下進(jìn)行培育培育溫度設(shè)定為26±2℃，培育濕度設(shè)定為50±10％。換氣周期設(shè)定為15次/小時(shí)，光照使用人工光照設(shè)定為12小時(shí)/天(6:00a.m.至6:00p.m.)。使用的培育籠是由不銹鋼制成的，而且符合USDA許可，圈養(yǎng)數(shù)為1只猿/籠。使用的飼料是固體飼料(Teklad Global經(jīng)檢驗(yàn)合格的25％蛋白質(zhì)靈長(zhǎng)類飼料，Harlan SpragueDawley Inc.)，每天在3:00pm給予一次大約108g(大約12g×9)，在第二天9:00am給予一次，收集剩余的飼料。在進(jìn)行血液測(cè)試、血液生物化學(xué)測(cè)試、給藥及尸檢前一天，在大約5:00pm收集剩余的飼料。
飲用水使用自動(dòng)飲水供應(yīng)設(shè)備(Okasaki Sangyo KabushikiKaisha)隨意給予，水質(zhì)符合Water Works Law的標(biāo)準(zhǔn)。
每日用水對(duì)室內(nèi)進(jìn)行清潔，并用水清潔籠內(nèi)的下水道。
動(dòng)物的鑒別如下個(gè)體鑒別在動(dòng)物胸部紋身編號(hào)(SpauldingSpecial Electric Tattoo Marker，Spaulding&Rogers Mfg.，Inc.)。為對(duì)猿進(jìn)行鑒別，使用彩色卡片(具有測(cè)試編號(hào)、組編號(hào)、給藥量、性別和動(dòng)物編號(hào))。
馴化選擇40只經(jīng)檢疫的雌性猿稱重。馴化階段設(shè)定為在開始給藥前3周，其間一天觀測(cè)一次一般狀況，并在開始給藥之前7天每天進(jìn)行一次食物攝取測(cè)定，在分組時(shí)及馴化結(jié)束時(shí)對(duì)每只動(dòng)物進(jìn)行稱重。進(jìn)行一次血液學(xué)和血液生物化學(xué)測(cè)試。詳細(xì)的方法見“17.觀測(cè)及測(cè)試章節(jié)”。
動(dòng)物分組對(duì)從開始馴化及直至開始敏化的前期觀測(cè)無(wú)異常的動(dòng)物進(jìn)行分組，以便每組在開始敏化之前一天具有大約相同的平均體重(每組有5只雄性動(dòng)物，共30只)。未用于該測(cè)試的動(dòng)物作為剩余動(dòng)物剔除出該測(cè)試，并保留作為后備培育動(dòng)物。
將猿用氯胺酮(鹽酸氯胺酮，大約10mg/kg，Sigma Chemical Co.，肌內(nèi)注射，任選額外的給藥途徑)，然后在踝關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和腕(intracarpus)關(guān)節(jié)給藥(左側(cè)、右側(cè)，共6處)。給藥量為0.5mL/關(guān)節(jié)(踝關(guān)節(jié)和腕關(guān)節(jié))及1.0mg/關(guān)節(jié)(膝關(guān)節(jié))。給藥周期如下1-3組和6組6次(兩周一次)；4組5次(兩周一次，在第四周期后4周(第70天)進(jìn)行第5次給藥)；5組3次(四周一次，在第二次給藥后大約6周(第72天)進(jìn)行第3次給藥)。選擇猿的給藥周期以預(yù)測(cè)臨床應(yīng)用于人體。給藥時(shí)間是10:00到中午。
測(cè)試方法1)膠原性關(guān)節(jié)炎模型的制備使用30只雌性恒河猴。將24mg/小瓶牛II型膠原加入6mL的5mmol/L乙酸鹽水中，在冰箱中(4℃)攪動(dòng)24小時(shí)使之溶解。在將等量的該溶液和Freund’s完全佐劑混和后，通過(guò)充分懸浮產(chǎn)生乳狀液。使用一次性注射器和針頭為每只猿經(jīng)皮內(nèi)注射于背部，給予2mL該乳狀液(II型膠原，4mg)以進(jìn)行敏化(初級(jí)敏化)。在初級(jí)敏化一周后，在背部經(jīng)皮內(nèi)注射背部給予相同成分的乳狀液以強(qiáng)化免疫。在氯胺酮e(鹽酸氯胺酮e，大約10mg/kg，Sigma Chemical Co.，肌內(nèi)注射，任選額外的給藥途徑，記錄給藥量)麻醉下給予該乳狀液。
測(cè)試組構(gòu)成使用對(duì)照組1；測(cè)試物質(zhì)4組；及陽(yáng)性對(duì)照物質(zhì)1組(共6組)進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。方案示于圖3。
表1

*給予膝關(guān)節(jié)雙倍量**與測(cè)試物質(zhì)相似的方式給予鹽水***4組第5次給藥是在第4周期后4周(第70天)進(jìn)行，5組的第3次給藥是在第2次給藥后大約6周(第72天)進(jìn)行。
在猿II型膠原關(guān)節(jié)炎模型的測(cè)試中，在兩周間隔給予10mg/關(guān)節(jié)NFκB誘餌的有效比為3/4。觀測(cè)到混雜的誘餌的有效比為1/4。因此，考慮到在臨床中的安全性，最大量設(shè)定為30mg/關(guān)節(jié)，隨后量設(shè)定為10和3mg/關(guān)節(jié)，總比值(common ratio)為3。另外，由于NFκB誘餌當(dāng)被摻入細(xì)胞核時(shí)示出長(zhǎng)期的效力，因此還設(shè)立四周給予一次30mg量的實(shí)驗(yàn)組。由于類固醇(Rinderon)的劑量為2mg/關(guān)節(jié)，因此猿的劑量根據(jù)體重設(shè)定為1/20。
觀測(cè)和測(cè)試參數(shù)如下。起始給藥時(shí)間設(shè)定為在第0天給藥，開始給藥的那周設(shè)定為給藥第1周。
1)一般條件在給藥期間進(jìn)行觀測(cè)一天一次以上(早晨和中午)，在尸檢期間針對(duì)所有樣例一天一次。關(guān)節(jié)的腫脹用4個(gè)階段評(píng)估(無(wú)異常、輕度腫脹、中度腫脹及高度腫脹)，記錄結(jié)果。
2)飼料量在開始給藥之前7天記錄飼料數(shù)及剩余量，針對(duì)所有樣例計(jì)算飼料量(g)，并計(jì)算每周平均量作為該周每日平均量。
3)體重用電子稱(HP-40K，A and D，Inc.)在敏化前一天(分組當(dāng)天)、給藥前一天(最后馴化當(dāng)天)、在開始給藥后一周及尸檢時(shí)針對(duì)所有樣例測(cè)定體重。
4)血液學(xué)測(cè)試測(cè)試頻率1-3組和6組在馴化期間、在(給藥前)第0、14、28、42、56和70天及尸檢時(shí)測(cè)試一次。
4和5組在馴化期間、第0、14、28、42、56、70天(給藥前)及第84天測(cè)試一次。
實(shí)例數(shù)每組中所有樣例血液取樣方法使用注射器從股靜脈中取血樣。使用經(jīng)EDTA-2K抗凝處理的全血。
測(cè)試項(xiàng)如下表。
表2

*總血液學(xué)測(cè)試設(shè)備(ADVIA120，BAYER DIAGNOSTICSMANUFACTURINGLTD)5)血液生物化學(xué)測(cè)試測(cè)試頻率1-3組和6組在馴化期間、在第0、14、28、42、56和70天(給藥前)及尸檢時(shí)測(cè)試一次。
4和5組在馴化期間、第0、14、28、42、56、70天(給藥前)及第84天測(cè)試一次。
實(shí)例數(shù)每組中所有樣例血液取樣方法使用注射器從股靜脈放血大約1.2mL血液。在將該樣品在室溫靜置20-40分鐘后，在3000rpm離心15分鐘，使用所得的血清。
測(cè)試項(xiàng)測(cè)定CRP(濁度免疫學(xué)分析(TIA)，見Clin Chim Acta1977 May 2，76(3)377-88)。
6)X光成像使用便攜式X光機(jī)(DOP-82S-120-D型，Hitachi Medico，Inc.)在如下日期在氯胺酮麻醉下(使用大約10mg/kg的鹽酸氯胺酮，SigmaChemical Co.，肌內(nèi)注射，任選額外的注射途徑，記錄給藥量)對(duì)踝關(guān)節(jié)，膝關(guān)節(jié)和腕關(guān)節(jié)(均為左右側(cè))進(jìn)行放射顯影分析在1-3組和6組的所有樣例中(初級(jí)敏化之前)，在第0、14、28、42、56和70天(給藥前)及在尸檢前一天或當(dāng)天；在4-5組的所有樣例中，在第0、14、28、42和70天(給藥前)及在尸檢前一天和當(dāng)天。對(duì)腕關(guān)節(jié)從前面照相(同時(shí)右側(cè)和左側(cè))，對(duì)膝關(guān)節(jié)從前面(同時(shí)右側(cè)和左側(cè))及側(cè)面(單側(cè)橫向，從內(nèi)側(cè)照射，膝彎曲60°)照相，對(duì)踝關(guān)節(jié)從側(cè)面(單側(cè)橫向，從內(nèi)側(cè)照射)照相以獲得照片。照射距離設(shè)定基本相同。對(duì)X光照片進(jìn)行標(biāo)記。
7)骨體積測(cè)定就所有樣例而言，在開始給藥之前及在解剖時(shí)使用雙能量X光吸收分析儀(double energy X-ray absorption analyzer)(DPX-α，LUNAR)測(cè)定股骨的遠(yuǎn)端和脛骨近端(均左右雙側(cè))的骨體積。
8)血液抗膠原抗體值的測(cè)定血液取樣頻率1-3組和6組 在初級(jí)敏化之前、第0、14、28、42、56和70天(給藥前)及尸檢，4-5組 在初級(jí)敏化之前、第0、14、28、42和70天(給藥前)及第84天。
實(shí)例數(shù) 每組所有的樣例放血體積大約1mL(大約0.4mL血清)。在尸檢時(shí)及給藥第84天時(shí)進(jìn)一步取大約7.5mL(大約3mL血清)。
血液取樣方法使用注射器從股靜脈取血樣。將血液在室溫放置20-40分鐘，然后在3000rpm離心15分鐘獲得血清。
將所得血清在-20℃冷凍保存直至使用(在尸檢時(shí)及給藥第84天額外取血清(大約3mL)，在-80℃保存)。將該血清在干冰存在下送至測(cè)試請(qǐng)求人(AnGesMG，Inc.)。
測(cè)定方法將牛II型膠原包被于一個(gè)微滴板(microplate)上形成固相。為測(cè)定抗體值，獲得的血清用作初級(jí)抗體，抗IgG(Fc)、過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗體和猿IgM(Fc)過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗體用作二級(jí)抗體以進(jìn)行ELISA測(cè)定。在產(chǎn)生顏色之后使用平板讀數(shù)器(SEM3400，Iwaki Glass，Inc.)進(jìn)行測(cè)定。
9)關(guān)節(jié)內(nèi)內(nèi)窺鏡檢查測(cè)試頻率給藥第4、8和12周實(shí)例數(shù)給藥第4周每個(gè)未處理組、對(duì)照組、NF-κB 30mg組(兩周間隔)及給予類固醇組(動(dòng)物編號(hào)4，19和29)均一個(gè)。
給藥第8和12周未處理組一個(gè)、兩個(gè)對(duì)照組(動(dòng)物編號(hào)2和4)、NF-κB 10mg組一個(gè)(兩周間隔)、NF-κB 30mg組一個(gè)(兩周間隔)及給予類固醇組(動(dòng)物編號(hào)13，19和29)一個(gè)。
測(cè)試方法在吸入麻醉或鹽酸美托咪定麻醉下將關(guān)節(jié)內(nèi)內(nèi)窺鏡插入膝關(guān)節(jié)。
10)尸檢對(duì)死亡的樣品在稱重后迅速尸檢，并對(duì)腕關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)(左右側(cè))進(jìn)行X光照相。另外，將針對(duì)關(guān)節(jié)觀測(cè)和組織病理學(xué)檢驗(yàn)而貯存的器官貯存在10％中性緩沖的福爾馬林中。針對(duì)剩留的器官和組織，進(jìn)行總體觀測(cè)。根據(jù)負(fù)責(zé)尸檢的人的判斷，通過(guò)總體觀測(cè)觀測(cè)到其中有改變的組織和器官貯存在福爾馬林中。根據(jù)通過(guò)前肢頭(forearmcephalic)靜脈給藥在觀測(cè)的最后時(shí)間給予活樣品0.4mL/kg戊巴比妥水溶液(64.8mg/mL)(Tokyo Kasei Kogyo Co.Ltd.)。在麻醉下通過(guò)放血進(jìn)行安樂(lè)死之后，將動(dòng)物通過(guò)灌注10％中性緩沖的福爾馬林而固定，以與針對(duì)死亡樣品同樣的方式進(jìn)行觀測(cè)。當(dāng)觀測(cè)到異常時(shí)，對(duì)其中出現(xiàn)認(rèn)為是由于給予測(cè)試物質(zhì)所致的變化的動(dòng)物進(jìn)行照相。
11)組織病理學(xué)檢驗(yàn)實(shí)例數(shù)所有樣品標(biāo)本制備通過(guò)灌注而固定后獲得器官(指貯存的器官)。切下腕關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)(左右側(cè))(關(guān)節(jié)滑膜和關(guān)節(jié)軟骨)，脫鈣，在石蠟中包埋，并切成薄片，這些由Shin Nippon BiochemicalLaboratories，Ltd。將每種樣品的一個(gè)進(jìn)行H.E.染色的樣品和兩個(gè)未染色的樣品送至檢測(cè)儀。當(dāng)需要檢驗(yàn)其中通過(guò)總體觀測(cè)觀測(cè)到改變的器官和組織時(shí)，根據(jù)本領(lǐng)域熟知的及常規(guī)使用的技術(shù)制備H.E.染色的樣品。
貯存的器官心、肺*、支氣管、肝、膽囊、腎*、腎上腺*、腕關(guān)節(jié)*、膝關(guān)節(jié)*、踝關(guān)節(jié)*及異常部位。
*是指兩側(cè)均貯存的器官。
樣本的貯存將上述器官和組織(大器官的一部分)在真空后貯存。
結(jié)果本實(shí)施例的結(jié)果示于圖1。在圖1中，通過(guò)X光照片示出了在猿膠原關(guān)節(jié)炎模型中由本發(fā)明的誘餌對(duì)關(guān)節(jié)的改變。觀測(cè)到未處理及混雜誘餌無(wú)作用，而接受本發(fā)明誘餌處理的模型觀測(cè)到具有顯著改善，如抑制滑膜炎癥改變、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)的骨破折。
實(shí)施例2NF-κB對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型的作用這個(gè)實(shí)施例闡述了NF-κB誘餌組合透明質(zhì)酸(hyarulonic acid)對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型的作用。將NF-κB與透明質(zhì)酸的組合藥物經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)給予大鼠以檢測(cè)其對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型的作用。
在切下大鼠的交叉韌帶后，經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)給予用FITC標(biāo)記的NF-κB誘餌以在一和兩個(gè)月后研究誘餌轉(zhuǎn)移進(jìn)軟骨中的特性。本測(cè)試作為非GLP測(cè)試進(jìn)行。
測(cè)試物質(zhì)如下1)測(cè)試物質(zhì)1NF-κB誘餌寡核苷酸(后文稱作NF-κB誘餌)(AnGes MG)(100mg/小瓶，在-20℃冷凍保存)。
2)測(cè)試物質(zhì)2低分子量的透明質(zhì)酸(ARTS(商標(biāo))；SEIKAGAKUCORPORATION，在-20℃貯存)。
3)測(cè)試物質(zhì)3HVJ-E導(dǎo)入的NF-κB(AnGes MG)(0.1mg(NF-κB)，2000 HAU(HVJ-E))，在-20℃貯存。如參考文獻(xiàn)(Morishita R，Sugimoto T，Aoki M，Kida I，Tomita N，Moriguchi Aet al.，Nat Med.1997，3894-9)所述制備HVJ病毒-脂質(zhì)體復(fù)合物。簡(jiǎn)而言之，將磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰膽堿(PC)和膽固醇(Chol)以1∶4.8∶2的重量比混和。將該脂質(zhì)混合物(10mg)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中通過(guò)除去溶劑(四氫呋喃)而沉淀在培養(yǎng)瓶的側(cè)壁上。將干燥的脂質(zhì)在含有200μg的ODN的200μl的生理鹽水中水合。通過(guò)搖動(dòng)和超聲制備脂質(zhì)體。將脂質(zhì)體懸浮液(0.5mL，含有10mg的脂質(zhì))與在生理鹽水中失活的HVJ(10000血凝單位)混和，總體積為4mL。將該混合物在4℃溫育5分鐘，然后在30℃輕輕搖動(dòng)30分鐘。通過(guò)密度梯度離心從HVJ脂質(zhì)體中除去游離的HVJ。收集蔗糖梯度的上層應(yīng)用。ODN的序列如下NF-κB誘餌ODN為5’-CCTTGAAGGGATTTCCCTCC-3’(SEQ ID NO1)，混雜誘餌ODN為5’-CATGTCGTCACTGCGCTCAT-3’(SEQ ID NO7)，及5’-ATGAGCGCAGTGACGACATG-3’(SEQ ID NO8)。
測(cè)試物質(zhì)的制備與給予制備方法就測(cè)試物質(zhì)1而言，稱重20mg的NF-κB誘餌，在室溫溶解于鹽水中，如果需要?jiǎng)t加以稀釋應(yīng)用。棄去剩余溶液。
就測(cè)試物質(zhì)2而言，在一個(gè)安瓿中(2.5mL)含有25mg透明質(zhì)酸鈉的溶液中制備誘餌。
就混雜誘餌而言，如NF-κB誘餌同樣制備。
上述制備使用前進(jìn)行。
對(duì)于測(cè)試動(dòng)物，將50只雄性大鼠(Fischer 334品系)(在測(cè)試開始時(shí)體重250-300g，12周齡，Japan Charles River Inc.，Hino，Gamo-gun，Shiga)馴化，并將其中43只動(dòng)物進(jìn)行給藥。通常，大鼠廣泛用作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，而且易于進(jìn)行膝關(guān)節(jié)操作及進(jìn)行藥理學(xué)作用評(píng)價(jià)，因此用作骨關(guān)節(jié)炎模型。就動(dòng)物應(yīng)用倫理標(biāo)準(zhǔn)而言，本發(fā)明人根據(jù)Osaka大學(xué)規(guī)定的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理標(biāo)準(zhǔn)的許可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
如下進(jìn)行動(dòng)物培養(yǎng)。培育溫度設(shè)為26±2℃，培育濕度設(shè)為50±10％。通風(fēng)頻率設(shè)為15次/小時(shí)，人工照明為每天12小時(shí)(照明時(shí)間為6:00am至6:00pm)。培育籠由不銹鋼制成，其大小符合USDA標(biāo)準(zhǔn)。圈養(yǎng)動(dòng)物數(shù)設(shè)為5只/籠。所用飼料為固體飼料，動(dòng)物可自由攝食。
飲用水為由自動(dòng)供水裝置(Okazaki Sangyo Co.Ltd.)制備的符合Water Works Law規(guī)定的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的水。
動(dòng)物鑒別個(gè)體鑒別應(yīng)用顏料籠鑒別使用籠卡片(描述測(cè)試編號(hào)、組別、給藥量、動(dòng)物編號(hào))醫(yī)學(xué)觀察和馴化從接受醫(yī)學(xué)觀察的動(dòng)物中選擇43個(gè)雄性大鼠并稱重。操作前1周被確定為馴化期間，在此期間觀察一般狀況。
動(dòng)物分組在馴化最后的時(shí)間隨機(jī)選擇在馴化期間未顯示異常的動(dòng)物(43個(gè)雄性動(dòng)物)。不進(jìn)行動(dòng)物分組。未用作檢查的多余動(dòng)物實(shí)行安樂(lè)死。
骨關(guān)節(jié)炎模型的制備隨機(jī)選擇在馴化期間沒(méi)有顯示異常的動(dòng)物(33個(gè))。為動(dòng)物肌內(nèi)注射300μl的Ketalar(氯胺酮)和Celactal(甲苯噻嗪)2∶1的水溶液。在這種麻醉下，暴露膝關(guān)節(jié)并切斷交叉韌帶。未用作檢查的多余動(dòng)物實(shí)行安樂(lè)死。
如下進(jìn)行給藥。選擇關(guān)節(jié)內(nèi)給藥為給藥途徑，這是為了根據(jù)臨床給藥途徑而進(jìn)行。選擇在麻醉下直接注射進(jìn)大鼠膝關(guān)節(jié)作為給藥方法。關(guān)節(jié)內(nèi)給藥常規(guī)用于大鼠的治療。給藥量為0.05mL/關(guān)節(jié)，給藥頻率設(shè)定為每周8次。選擇這一頻率是為了預(yù)測(cè)人臨床情況。
測(cè)試方法劑量和動(dòng)物數(shù)將動(dòng)物分為3組，創(chuàng)建模型。每輪操作數(shù)平均化。測(cè)試組構(gòu)成和動(dòng)物編號(hào)如下所示。給藥計(jì)劃如圖4所示。
表3 第一操作組

表4 第二操作組

表5 第三操作組

在II型膠原關(guān)節(jié)炎猿模型測(cè)試中，以兩周間隔給藥NF-κB誘餌10mg/關(guān)節(jié)，有效率為3/4，同時(shí)觀察到給予混雜誘餌的有效率為1/4。由于能關(guān)節(jié)內(nèi)給予大鼠的最大劑量為0.05mL，因此給予大鼠關(guān)節(jié)的以相應(yīng)于10mg/mL猿有效劑量的劑量設(shè)定為0.5mg/關(guān)節(jié)。另外，以相同量給予混雜誘餌，其DNA序列對(duì)于NF-κB誘餌是隨機(jī)化的。
將臨床應(yīng)用的透明質(zhì)酸與NF-κB誘餌組合給藥，并比較NF-κB誘餌的有效性。所使用的HVJ-E如下制備用Triton滅活HVJ病毒并除去其RNA，然后與NF-κB誘餌10mg/mL混合后而將NF-κB誘餌包括進(jìn)病毒。
將NF-κB誘餌包括進(jìn)HVJ-E的劑量為25600HAU(1HAU＝1×106病毒)/mg的NF-κB誘餌，每個(gè)關(guān)節(jié)給予約2000HAU。
以這種方式，計(jì)算出給藥量為0.1mg。因此測(cè)定包括NF-κB誘餌的HVJ-E。
觀察和檢查項(xiàng)目(給藥日設(shè)定為第0天)如下1)一般狀況在給藥前1天、給藥日給藥后立即、之后每日以及尸檢日進(jìn)行觀察，并記錄存活或死亡樣例。在給藥日，任選地定期進(jìn)行觀察。
2)體重用電子稱(得自A and D Co.Ltd的EP-41KA或HP-40K)對(duì)所有樣例在開始日、給藥日稱重，之后每周稱重1次，在尸檢日也稱重。
3)血液學(xué)測(cè)試實(shí)例數(shù)所有樣例取血樣日期尸檢時(shí)取血樣方法用注射器取血樣。使用經(jīng)EDTA-2K進(jìn)行抗凝血處理的全血。
測(cè)試項(xiàng)目如下表6

*多項(xiàng)自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(E-4000，Sysmex Co.Ltd.)
**血細(xì)胞自動(dòng)分析儀(MICROX HEG-120A，OMRON)4)血液生化測(cè)試樣例數(shù)所有樣例取血樣日期尸檢時(shí)取血樣方法取血樣后，室溫放置40-60分鐘，之后在3000rpm離心15分鐘以獲得血清備用。
測(cè)試項(xiàng)目通過(guò)免疫比濁法測(cè)定CRP。
5)X光成像在尸檢時(shí)使用小動(dòng)物X光系統(tǒng)(便攜式X光裝置，DOP-82S-120D，Hitachi Medico)對(duì)麻醉下對(duì)后肢進(jìn)行X光照相。
6)尸檢死亡實(shí)例在稱重后迅速進(jìn)行尸檢，對(duì)腕關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)(左右側(cè))進(jìn)行X光照相。另外，將欲儲(chǔ)存進(jìn)行關(guān)節(jié)觀察和組織病理學(xué)檢查的器官儲(chǔ)存在10％中性緩沖的福爾馬林中。對(duì)于其余的器官和組織進(jìn)行大致觀察。根據(jù)尸檢負(fù)責(zé)人員的判斷，將由大致觀察而觀察到有變化的組織和器官儲(chǔ)存在福爾馬林中。存活實(shí)例在觀察的最后一日在前臂頭靜脈給予0.4mL/kg戊巴比妥水溶液(64.8mg/mL)(Tokyo Kasei Kogyo Co.Ltd.)。在麻醉下放血安樂(lè)死后，以與死亡實(shí)例相同的方式觀察動(dòng)物。
7)組織病理學(xué)檢查樣品數(shù)從所有實(shí)例取后肢膝關(guān)節(jié)，之后固定、包埋在石蠟中，根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)方法制備薄切片，進(jìn)行檢查。
樣本制備和檢查方法將后肢膝關(guān)節(jié)用10％中性緩沖的福爾馬林固定。固定后將樣本切片，將樣本包埋于石蠟中并制備薄切片，進(jìn)行H.E.染色，通過(guò)顯微鏡觀察染色情況。如果需要特殊染色，由負(fù)責(zé)檢查的人員判斷并進(jìn)行這種染色。
儲(chǔ)存的器官膝關(guān)節(jié)照相對(duì)代表性膝關(guān)節(jié)進(jìn)行照相。
(結(jié)果)在圖2中，NF-κB誘餌對(duì)骨關(guān)節(jié)炎大鼠模型的效果以關(guān)節(jié)的切片照片示出，其中顯示了健康供體、膠原衍生關(guān)節(jié)炎模型以及NF-κB誘餌(10mg、30mg給藥)的效果。10mg誘餌給藥已經(jīng)有顯著改善，30mg誘餌給藥完全消除了關(guān)節(jié)炎癥。這一效果優(yōu)于類固醇。另外，類固醇處理伴有其所特有的不利作用，但是當(dāng)使用本發(fā)明誘餌時(shí)，未發(fā)現(xiàn)這種顯著的不利作用。
盡管本文描述了一些優(yōu)選的實(shí)施方案，但是這些實(shí)施方案不應(yīng)被看作對(duì)權(quán)利要求書限定的本發(fā)明范圍的限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀說(shuō)明書后能夠了解并且在不偏離本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)的前提下做出多種其它修飾和等價(jià)替換。本文所引用的所有專利、公布的專利申請(qǐng)以及出版物以其全文并入?yún)⒖肌?br> 工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供了一種使用誘餌而治療或預(yù)防炎癥性疾病或障礙的藥物組合物。另外，用于本發(fā)明治療方法中的組合物的制備、病毒構(gòu)建體、試劑盒和藥物有充分的工業(yè)實(shí)用性。本發(fā)明被認(rèn)為具備工業(yè)實(shí)用性，因?yàn)槔缰扑幑I(yè)可以不通過(guò)醫(yī)生而工業(yè)生產(chǎn)本發(fā)明的組合物。本發(fā)明方法除了純粹的醫(yī)生用藥，還可用于臨床試驗(yàn)，這是商業(yè)目的，因此本發(fā)明方法具備工業(yè)實(shí)用性。另外，直接或間接實(shí)施本發(fā)明治療方法在醫(yī)藥業(yè)被認(rèn)為是實(shí)用的，因此具備工業(yè)實(shí)用性。
序列表<110>安琪士多摩奇 株式會(huì)社<120>治療和預(yù)防炎癥性疾病的誘餌組合物<130>AN008PCT<150>JP2002-156524<151>2002-5-29<160>21<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceNF-κB decoy<300>
<400>1ccttgaaggga tttccctcc 20<210>2<211>28<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSTAT-1 decoy<400>2gatctaggga tttccgggaa atgaagct 28<210>3<211>16<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceGATA-3 decoy<400>3agcttgagat agagct 16<210>4<211>28<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSTAT-6 decoy<400>4gatcaagacc ttttcccaag aaatctat28<210>5<211>19<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceAP-1 decoy<400>5agcttgtgag tcagaagct 19<210>6<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceEts decoy<400>6aattcaccgg aagtattcga 20<210>7<211>20
<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceNF-κB decoy<300>
<400>7catgtcgtca ctgcgctcat20<210>8<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial Sequencescrambled decoy ODN<400>8atgagcgcag tgacgacatg20
權(quán)利要求
1.一種治療和預(yù)防炎癥性疾病或障礙的藥物組合物，其包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述疾病或障礙是選自如下一組的至少一種疾病或障礙腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎、睪丸炎。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
6.權(quán)利要求1的組合物，其適于膝關(guān)節(jié)給藥。
7.權(quán)利要求6的組合物，其包含至少10mg所述NF-κB誘餌。
8.權(quán)利要求6的組合物，其包含至少30mg所述NF-κB誘餌。
9.一種治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的藥物組合物，其包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述疾病或障礙是選自如下一組的至少一種疾病或障礙類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)關(guān)節(jié)炎。
11.權(quán)利要求9的組合物，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
12.權(quán)利要求9的組合物，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
13.權(quán)利要求9的組合物，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
14.權(quán)利要求9的一種組合物，其中所述疾病或障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述組合物包含至少治療有效量的所述誘餌。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述治療有效量是至少0.01mg/kg體重。
16.權(quán)利要求9的組合物，其適于膝關(guān)節(jié)給藥。
17.權(quán)利要求16的組合物，其包含至少10mg所述NF-κB誘餌。
18.權(quán)利要求16的組合物，其包含至少30mg所述NF-κB誘餌。
19.一種治療或預(yù)防炎癥性疾病或障礙的方法，包括給予患者一種組合物，所述組合物包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述疾病或障礙是選自如下一組的至少一種疾病或障礙腎炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、動(dòng)脈硬化、腎小球性腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、前列腺炎、尿道炎、附睪炎、睪丸炎。
21.權(quán)利要求19的方法，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
22.權(quán)利要求19的方法，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
23.權(quán)利要求19的方法，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
24.權(quán)利要求19的方法，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述組合物包含至少10mg的NF-κB誘餌。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述組合物包含至少30mg的NF-κB誘餌。
27.一種治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的方法，包括給予患者一種組合物，所述組合物包含至少一種NF-κB誘餌，及一種藥物可接受的載體。
28.權(quán)利要求27的方法，其中所述疾病或障礙是選自如下一組的至少一種疾病或障礙類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周炎、頸臂綜合征和繼發(fā)關(guān)節(jié)炎。
29.權(quán)利要求27的方法，其中所述藥物可接受的載體是脂質(zhì)體。
30.權(quán)利要求27的方法，其中所述NF-κB誘餌包含一個(gè)序列GGATTTCCC。
31.權(quán)利要求27的方法，其中所述疾病或障礙是骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
32.權(quán)利要求27的方法，其中所述疾病或障礙是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述誘餌的量是至少治療有效量。
33.權(quán)利要求27的方法，其中所述治療有效量是至少0.01mg/kg體重。
34.權(quán)利要求27的方法，其中所述組合物適于膝關(guān)節(jié)給藥。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述組合物包含至少10mg的NF-κB誘餌。
36.權(quán)利要求34的方法，其中所述組合物包含至少30mg的NF-κB誘餌。
37.至少一種NF-κB誘餌在生產(chǎn)治療和預(yù)防炎癥性疾病或障礙的藥物中的應(yīng)用。
38.至少一種NF-κB誘餌在生產(chǎn)治療和預(yù)防關(guān)節(jié)疾病或障礙的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明目的是有效治療炎癥性疾病而不引起副作用。這個(gè)目的可以通過(guò)提供一種治療和預(yù)防炎癥性疾病和障礙和由所述疾病和障礙引起的障礙的藥物組合物實(shí)現(xiàn)，所述組合物含有至少一種NF－κB誘餌或類似的轉(zhuǎn)錄因子及一種藥物可接受的載體；本發(fā)明還提供了治療和預(yù)防的方法。
文檔編號(hào)A61P19/02GK1671424SQ0381816
公開日2005年9月21日 申請(qǐng)日期2003年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月29日
發(fā)明者富田哲也, 吉川秀樹, 森下竜一 申請(qǐng)人:安琪士多摩奇株式會(huì)社