專利名稱：復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
復(fù)方丹參滴丸是采用現(xiàn)代科技研制而成的新型滴丸劑型。經(jīng)過多年的臨床觀察研究，其應(yīng)用范圍得到了很大的拓展，目前已證實其具有以下方面的作用改善微循環(huán)，影響外周血循環(huán)內(nèi)皮素釋放，舒張冠狀動脈；抑制血小板聚集，減少血栓形成；改善心肌缺血，增強左心室功能；降低血脂，減輕動脈粥樣硬化；改變紅細(xì)胞膜磷脂成分，保持細(xì)胞膜的完整；抗氧化，延緩細(xì)胞的衰老；阻滯鈣通道，拮抗心律失常，等等，并應(yīng)用于相應(yīng)的疾病治療(中國專利CN1348815A)。
目前，有關(guān)丹參在改善微循環(huán)方面已有了很多報道，對其原理也做了許多有益的探索，其中包括“復(fù)方丹參制劑對小鼠紅細(xì)胞免疫粘附功能的影響”[閆玉仙等，國醫(yī)論壇，1995年第6期]，報道了復(fù)方丹參滴丸具有比其他復(fù)方丹參制劑更強的增加紅細(xì)胞免疫粘附的功能；“丹參對大鼠腦缺血再灌注損傷保護機制的實驗研究”[劉軍等，中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，1998年6月第五卷2期P77-81]，報道了丹參的神經(jīng)保護作用可能與封閉外周血中白細(xì)胞粘附分子結(jié)合點，抑制白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附有關(guān)。
至今為止還未見有關(guān)復(fù)方丹參滴丸通過抑制白細(xì)胞粘附來改善微循環(huán)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附藥物中的新應(yīng)用。
本發(fā)明通過對缺血再灌注引起的大鼠腸系膜內(nèi)抗血管內(nèi)皮粘附因子ICAM-1、抗白細(xì)胞粘附因子CD11b的單克隆抗體熒光標(biāo)記染色法標(biāo)記后，觀察細(xì)靜脈的抗ICAM-1抗體陽性部位和抗CD11b的陽性部位，可以觀察到，復(fù)方丹參滴丸給藥組在再灌注初期開始就明顯地抑制白細(xì)胞的粘附，之后復(fù)方丹參滴丸給藥組的粘附于細(xì)靜脈的白細(xì)胞數(shù)進一步減少，顯著低于缺血再灌注組。
白細(xì)胞是機體主要的炎癥反應(yīng)細(xì)胞，白細(xì)胞粘附于內(nèi)皮細(xì)胞是炎癥的最初現(xiàn)象，導(dǎo)致了白細(xì)胞在感染部位的趨化與聚集，達到破壞與清除病原菌的目的。在非感染性炎癥中自細(xì)胞的粘附可以導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞及局部組織的破壞，內(nèi)皮細(xì)胞在與白細(xì)胞粘附的過程中促進了白細(xì)胞的活化，同時白細(xì)胞對內(nèi)皮細(xì)胞的粘附和破壞力增強。白細(xì)胞粘附造成的非感染性炎癥的組織損傷可能在免疫性疾病、移植物排斥反應(yīng)、缺血性壞死以及缺血再灌注損傷中起了重要的作用。本發(fā)明復(fù)方丹參滴丸不但具有抑制白細(xì)胞粘附的作用，且其作用早期優(yōu)于SOD。復(fù)方丹參滴丸將丹參與三七、冰片配伍使用，其抑制白細(xì)胞粘附的功能得到了加強。另外，復(fù)方丹參滴丸是通過現(xiàn)代手段制成的一種高科技產(chǎn)品，具有攜帶和服用非常方便等優(yōu)點，所以復(fù)方丹參滴丸可以作為預(yù)防和治療白細(xì)胞粘附引起的疾病的理想藥物。


圖1缺血再灌注前粘附于細(xì)靜脈的白細(xì)胞的經(jīng)時變化圖2缺血再灌注后粘附于細(xì)靜脈的白細(xì)胞的經(jīng)時變化具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明，下述各實施例僅用于說明本發(fā)明而并非對本發(fā)明的限制。
實施例1 復(fù)方丹參滴丸在缺血再灌注前給藥對大鼠腸系膜細(xì)靜脈內(nèi)白細(xì)胞粘附的抑制作用1.試驗組和對照組(1)正常對照組不進行缺血再灌注處理。
(2)缺血再灌注組經(jīng)10分鐘基礎(chǔ)觀察之后，用4G聚乙稀管將還流于觀察部的腸系膜動靜脈血管同時結(jié)扎10分鐘(缺血)，解除結(jié)扎(再灌注)。將時間記錄儀調(diào)至0處。在同一視野連續(xù)觀察30分鐘。
(3)復(fù)方丹參滴丸給藥組在缺血再灌注60分鐘前，按0.4g/kg的給藥量，將復(fù)方丹參滴丸用生理鹽水溶解，一次性灌胃。
(4)SOD對照組在缺血再灌注10分鐘前，用連續(xù)推注器按12000u/kg/hr的給藥量，經(jīng)頸靜脈連續(xù)注入SOD至觀察結(jié)束。
2.實驗方法取日本慶應(yīng)義塾大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心飼養(yǎng)的Wistar雄性大鼠(體重200～250g，Charles River實驗動物，東京)，按30mg/kg的劑量腹腔注射戊巴比妥鈉進行麻醉。從右側(cè)頸靜脈插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中線作2-3cm切口，輕柔地把近回盲部的回腸移至腹腔外，將腸系膜在附有薄玻片的臺板上展開。為維持溫度和濕度，在展開的腸系膜的表面持續(xù)滴加37℃的Krebs-Ringer緩沖液。腸系膜微循環(huán)的動態(tài)，用置于37℃恒溫槽內(nèi)的倒置生物顯微鏡觀察，并用高感度攝像機攝像，S-VHS錄像機錄像。
選直徑在25-40pm之間的細(xì)靜脈非分支部(長2001am以上)為觀察部位。經(jīng)10分鐘基礎(chǔ)觀察之后，用4G聚乙烯管將觀察部的腸系膜動靜脈血管同時結(jié)扎10分鐘(缺血)，解除結(jié)扎(再灌注)，將時間記錄儀調(diào)至0處。在同一視野連續(xù)觀察30分鐘。
3.測定方法用連接于倒置生物顯微鏡的高感度CCD攝像系統(tǒng)，記錄微循環(huán)動態(tài)。重放錄像，計數(shù)缺血再灌注前，和再灌注開始后0、10、20、30分的各時限同一視野內(nèi)停留于細(xì)胞靜脈內(nèi)皮30秒以上的白細(xì)胞數(shù)。用100μm長細(xì)靜脈上粘附的細(xì)胞數(shù)來表示。
4.結(jié)果圖1顯示正常對照組在本觀察的時間范圍內(nèi)，僅可觀察到極少數(shù)的白細(xì)胞粘附于靜脈壁上；缺血再灌注組在開始時，已經(jīng)有大量的白細(xì)胞粘附于靜脈壁上，隨著時間再灌注時間的延長，附于靜脈壁上的白細(xì)胞數(shù)量逐漸增多；SOD給藥組對缺血期的白細(xì)胞粘附無明顯地抑制作用，但是在10分鐘后年附于細(xì)靜脈的白細(xì)胞明顯少于缺血再灌注組；復(fù)方丹參滴丸組在再灌注開始時就明顯地抑制了白細(xì)胞的粘附。
實施例2 復(fù)方丹參滴丸在缺血再灌注后給藥對大鼠腸系膜細(xì)靜脈內(nèi)白細(xì)胞粘附的抑制作用1.試驗組和對照組
(1)正常對照組不進行缺血再灌注處理。
(2)缺血再灌注組同實施例1。
(3)復(fù)方丹參滴丸給藥組在缺血再灌注后，將復(fù)方丹參滴丸用生理鹽水配制成50mg/ml的溶液，在觀察的腸系膜表面連續(xù)滴加(2.6ml/min)。
(4)SOD對照組在缺血再灌注10分鐘時，用連續(xù)推注器按12000u/kg/hr的給藥量，經(jīng)頸靜脈連續(xù)注入SOD至觀察結(jié)束。
2.實驗方法同實施例1。
3.測定方法同實施例14.結(jié)果圖2顯示在缺血再灌注10分鐘，大量的白細(xì)胞粘附于細(xì)靜脈壁；SOD給藥組在再灌注30分鐘，粘附于細(xì)靜脈壁的白細(xì)胞數(shù)沒有顯著變化；復(fù)方丹參滴丸組粘附于細(xì)靜脈壁的白細(xì)胞數(shù)在給藥10分鐘后明顯地減少，說明復(fù)方丹參滴丸對白細(xì)胞的粘附具有明顯地抑制作用。
權(quán)利要求
1.復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附藥物中的應(yīng)用。
2.復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附引起的微循環(huán)障礙藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的冠心病的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的腦病的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的肝病的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的腎病的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的糖尿病微循環(huán)障礙的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的銀屑病的藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方丹參滴丸在制備治療白細(xì)胞粘附引起的特異性免疫疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方丹參滴丸在制備抑制白細(xì)胞粘附藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過對缺血再灌注引起的大鼠腸系膜內(nèi)抗血管內(nèi)皮粘附因子ICAM－1、抗白細(xì)胞粘附因子CD11b的單克隆抗體熒光標(biāo)記染色法標(biāo)記后，觀察到復(fù)方丹參滴丸給藥組在再灌注初期開始就明顯地抑制白細(xì)胞的粘附，之后其粘附于細(xì)靜脈的白細(xì)胞數(shù)進一步減少，顯著低于缺血再灌注組。復(fù)方丹參滴丸可以作為治療白細(xì)胞粘附所至的微循環(huán)障礙疾病的理想藥物。
文檔編號A61P43/00GK1522716SQ0310450
公開日2004年8月25日 申請日期2003年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月17日
發(fā)明者韓晶巖, 秋葉保忠, 鈴木秀和, 永田博司, 三浦總一郎, 織田正也, 石井裕正, 一郎, 也, 司, 和, 忠, 正 申請人:天津天士力制藥股份有限公司