專利名稱：用作抗腫瘤劑的c-2＇甲基化的紫杉醇衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的具有抗腫瘤活性的紫杉烷(taxane)衍生物及其制備方法。
更具體而言，本發(fā)明涉及式(I)化合物 其中R為三氟甲基、苯基、2-呋喃基、2-噻吩基；R1為叔丁氧基羰基或苯甲酰基；R2為羥基；R3為氫，或與R2一起形成具有以下通式的環(huán)狀碳酸酯， 條件是當(dāng)R3為氫時(shí)，R不同于苯基。
式(I)化合物為已知具有抗腫瘤活性的藥物紫杉醇(paclitaxel)或多西紫杉醇(docetaxel)的衍生物。
Greene等人在J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，1995，1811-1815頁中描述了其中R3為氫且R為苯基的式(I)化合物。Kant等人于Tetrahedron，37卷，6495-6498頁，1996中公開了攜帶C-2’甲基化(2R，3S)側(cè)鏈的紫杉醇衍生物。Kant已證實(shí)這種結(jié)構(gòu)修飾物在某些實(shí)驗(yàn)(抑制微管解聚)中與母體化合物紫杉醇相比可誘導(dǎo)顯著的響應(yīng)增強(qiáng)，這是由于其具有較好的微管結(jié)合親和性以及對(duì)KBVI的較大的細(xì)胞毒性。此外，這些自14β-羥基漿果赤霉素1，14-碳酸酯合成的紫杉烷類化合物中的一些具有改善的水溶性。最后，一種這類紫杉烷化合物在3位含有三氟甲基取代基，目的是阻斷與細(xì)胞色素P-450酶系有關(guān)的代謝途徑。這些新化合物的改進(jìn)的藥理學(xué)特征有可能與針對(duì)各種癌癥類型而進(jìn)行的活性譜的修飾有關(guān)。
以下為優(yōu)選的本發(fā)明的化合物(2’R，3’R)-13-[N-苯甲?；?3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-漿果赤霉素III；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-漿果赤霉素III；(2’R，3’S)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-苯基-2-甲基-異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-三氟甲基-2-甲基-異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-噻吩基)-2-甲基-異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯。
式(I)化合物是通過式(II)化合物與式(III)化合物的反應(yīng)而制備，其中式(II)化合物為 其中R2和R3如上所定義，且R4為保護(hù)基團(tuán)，優(yōu)選為三乙基甲硅烷基，式(III)化合物為
其中R和R1如上所定義。
由Tetrahedron Asymm.2001，12，1015-1027和J.Chem.Soc.PerkinTrans.1，1995，1811-1816可知，式(III)化合物可由相應(yīng)的烷基酯、尤其是甲基酯、通過在醇溶劑中進(jìn)行水解而制備。所得到的酸可不經(jīng)分離、在適宜的縮合劑例如二-2-吡啶基硫羰碳酸酯和二甲基氨基吡啶存在下、在適宜溶劑中直接與式(II)的漿果赤霉素III縮合。將7位的羥基保護(hù)基除去以得到所需的式(I)化合物。
或者，可使式(II)化合物與式(IV)化合物反應(yīng)， 其中R如上所定義。
J.Org.Chem.1991，56，1681-1684、Tetrahedron，1992，48，6585-7012、EP 400971、US 5175315中述及其中R為苯基的式(IV)化合物。
其中R為三氟甲基的式(IV)化合物可按照以下流程制備
由J.Org.Chem.1999，64，4643-4651可知，其中R1為2-呋喃基的式(IV)化合物可以以(3R，4R)-4-(呋喃-2-基)-3-羥基-3-甲基-吖丁啶-2-酮為原料、按照以下流程制備 i)TesCl/DMF/25℃；ii)Boc2O/Et3N/DMAP/0℃ to 25℃由J.Med.Chem.1997，40，267-278可知式(II)化合物。
式(II)化合物和式(IV)化合物的反應(yīng)在惰性氣體條件下于非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行。
通常，反應(yīng)在約-40℃至5℃的溫度下、在六甲基二硅胺烷鈉存在下進(jìn)行。將7位的羥基保護(hù)基除去以得到化合物(I)。
本發(fā)明的化合物已顯示對(duì)乳房、肺、卵巢、結(jié)腸、前列腺、腎、胰腺的癌細(xì)胞以及對(duì)已知抗癌藥物如阿霉素、長春堿和鉑衍生物具有耐藥性的細(xì)胞具有強(qiáng)大的抗腫瘤活性。
因此，本發(fā)明涉及含有有效量的一種本發(fā)明化合物以及藥理學(xué)可接受的載體和賦形劑的藥物制劑。更具體而言，所述化合物可被配制為片劑、粉末劑、顆粒劑、注射用溶液、栓劑、乳劑、分散劑等形式。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，優(yōu)選使用Chremophor L和乙醇、聚山梨酸酯和乙醇或自天然或合成磷脂酰膽堿制備的脂質(zhì)體制品的混合物，或含有膽固醇的天然磷脂的混合物；對(duì)于口服施用，優(yōu)選制備軟明膠膠囊，其中任選在磷脂存在下將產(chǎn)品溶于聚山梨酸酯、PEG或其混合物中。式(I)化合物可以以50至500mg/m2的濃度施用于人體。
以下實(shí)施例更為詳細(xì)地闡述了本發(fā)明。
使用了以下縮略語TES＝三乙基甲硅烷基；DMF＝二甲基甲酰胺；DMAP＝(N，N-二甲基氨基)吡啶；NaHMDS＝六甲基二硅胺烷鈉；LiHMDS＝六甲基二硅胺烷鋰；THF＝四氫呋喃；HMPA＝六甲基磷酸三酰胺。
實(shí)施例1在無水介質(zhì)中將甲醇中的(4S，5R)-3-苯甲?；?2-(2，4-二甲氧基苯基)-4-(呋喃-2-基)-5-甲基-噁唑烷-5-羧酸甲酯(0.128g，0.285mmol)與K2CO3(2當(dāng)量)在25℃下攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮、用飽和NH4Cl溶液稀釋并用乙酸乙酯萃取。水相用5％NaHSO4酸化至pH4并用乙酸乙酯萃取。使有機(jī)相干燥并蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物(1當(dāng)量)在20℃、氬氣氛下、在二-2-吡啶基硫羰碳酸酯(1當(dāng)量)和二甲基氨基吡啶(0.5當(dāng)量)存在下加至7-TES-漿果赤霉素III(0.04g，0.057mmol)的甲苯溶液中。將反應(yīng)混合物在60℃下攪拌加熱80小時(shí)。加入乙酸乙酯后，用鹽水萃取反應(yīng)混合物。有機(jī)相用鹽水洗滌，然后干燥并蒸發(fā)。進(jìn)行色譜分離(SiO2，乙酸乙酯/正己烷，1∶1)，得到(2’R，3’R)-13-[N-苯甲酰基-N，O-(2，4-二甲氧基苯亞甲基)-3-(2-呋喃基)-2-甲基異絲氨酸基]-7-TES-漿果赤霉素III(0.023g，2.28mmol，40％)?；衔锞哂幸韵绿卣?H NMR(CDCl3)δ＝0.61(m，6H，3CH2)，0.95(t，9H，3Me)，1.22(s，3H，Me)，1.27(s，3H，Me)，1.68(s，3H，Me)，1.89(m，1H，C6-H)，2.10-2.25(m，2H，C14-H)，2.21(s，3H，Me)，2.24(s，3H，Me)，2.33(s，3H，Me)，2.50(m，1H，C6-H)，2.65(s，3H，Me，OAc，C-4)，3.90-4.0(m，8H，6H，2 Me；1H，C3-H和1H，OH)，4.12(d，1H，C20-H，J＝8.0Hz)，4.32(d，1H，C20-H)，4.58(m，1H，C7-H，J1＝5.8Hz，J2＝10.2Hz)，4.95(dd，1H，C5-H，J1＝1.5Hz，J2＝9.6Hz)，5.55(b，1H，C3′-H)，5.70(d，1H，C2-H，J＝5.7Hz)，6.30-6.40(m，2H)，6.40-6.50(m，3H)，6.54(s，1H)，6.82(s，1H)，7.20-7.40(m，5H，芳族)，7.40-7.50(m，3H，芳族)，7.54-7.60(m，1H，芳族)，8.04-8.07(m，2H，芳族)。
將該化合物(0.023g，2.28mmol)溶于CH2Cl2(3.0ml)中并于25℃下用乙酰氯的甲醇溶液(100μl)(70μl乙酰氯溶于10ml甲醇中)處理。7小時(shí)后，用水萃取反應(yīng)混合物。使有機(jī)溶劑干燥并蒸發(fā)。對(duì)殘余物進(jìn)行色譜分離(SiO2，正己烷/乙酸乙酯，1∶1)，得到0.019g(0.022mmol，98％)(2’R，3’R)-3’-脫苯基-3’-(2-呋喃基)-2’-甲基-紫杉醇。
該化合物具有以下特征1H NMR(CDCl3)δ＝1.13(s，3H，Me)，1.23(s，3H，Me)，1.55(s，3H，Me)，1.70(s，3H，Me)，1.81(s，3H，Me)，1.89(m，1H，H-6β)，2.07(m，1H，C14-H)，2.24(s，3H，Me)，2.40(m，1H，C14-H)，2.49(d，1H，OH，C7-H)，2.55(m，1H，C6-H)，2.65(s，3H，Me)，3.75(s，1H，OH)，3.82(d，1H，C3-H，J＝7.2Hz)，4.21(d，1H，C20-H，J＝8.4Hz)，4.31(d，1H，C20-H)，4.40(m，1H，C7-H)，4.95(dd，1H，C5-H，J1＝1.5Hz，J2＝9.6Hz)，5.66(d，1H，C2-H)，5.79(d，1H，C3′-H，J＝9.5Hz)，6.26(s，1H，C10-H)，6.30(m，1H，C13-H)，6.41(m，2H，2-呋喃基)，7.12(d，1H，NH)，7.33(m，2H，芳族)，7.44(m，1H，2-呋喃基)，7.46(m，1H，芳族)，7.52(m，2H，芳族)，7.60(m，1H，芳族)，7.67(m，2H，芳族)，8.19(m，2H，芳族)。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1中所述方法將(4S，5R)-N-Boc-N，O-(2，4-二甲氧基亞芐基)-3-苯基-2-甲基異絲氨酸(isosene)甲酯(J.Chem.Soc.Perkin Trahs.1995，1811-1816)(0.154g，0.336mmol)與7-TES-漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯1(0.05g，0.067mmol)連接，得到0.021g(0.023mmol，34％)(2’R，3’S)-13-(N-Boc-2-甲基-3-苯基異絲氨酸基)-14β-羥基漿果赤霉素III1，14-碳酸酯。
該化合物具有以下特征1H NMR(CDCl3)δ＝1.28(s，9H，3Me，t-Boc)，1.30(s，3H，Me，C-15)，1.38(s，3H，Me，C-15)，1.41(s，3H，Me，C2′)，1.73(s，3H，C-8的Me)，1.84(s，3H，C-12的Me)，1.92(m，C6-H的1H)，2，26(s，3H，Me，OAc，C-10)，2.36(b，1H，OH)，2.56(m，1H，C6-H)，2.69(s，3H，Me，OAc，C-4)，3.52-3.55(b，1H，OH)，3.73(d，1H，C3-H，J＝7.3Hz)，4.25(d，1H，C20-H，J＝8.5Hz)，4.31(d，1H，C20-H)，4.38(m，1H，C7-H)，4.85(d，1H，C14-H，J＝7.1Hz)，4.95(dd，1H，C5-H，J1＝2.4Hz，J2＝9.6Hz)，5.09(d，1H，C3′-H)，5.57(d，1H，NH，J＝10.0Hz)，6.13(d，1H，C2-H)，6，27(s，1H，C10-H)，6.36(m，1H，C13-H)，7.30-7.40(m，5H，芳族)，7.48(m，2H，芳族)，7.59(m，1H，芳族)，8.04(m，2H，芳族)。
實(shí)施例3(a)(3R，4S)-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(呋喃-2-基)-3-甲基-吖丁啶-2-酮在25℃、氬氣氛下，將三乙基甲硅烷基氯(0.316g，2.1mmol)和咪唑(0.100g，1.5mmol)加入攪拌下的(3R，4R)-4-(呋喃-2-基)-3-羥基-3-甲基-吖丁啶-2-酮(0.167g，1.0mmol)的DMF(6.0ml)溶液中。4小時(shí)后，用飽和NH4Cl水溶液抑制反應(yīng)溶液并用乙酸乙酯萃取。使有機(jī)相干燥并在減壓下濃縮。對(duì)殘余物進(jìn)行色譜分離(SiO2，乙酸乙酯/正戊烷，1∶2)，得到0.190g(0.67mmol，67％)(3R，4S)-4-(呋喃-2-基)-3-三乙基甲硅烷氧基-3-甲基-吖丁啶-2-酮[α]20D＝+42.8(c 1.04，CHCl3)；IR(CDCl3，cm-1)3600-3000，3413，2957，1768，1458，1377，1012；1H NMR(CDCl3)δ＝0.65(m，6H，3CH2)，0.95(t，9H，3 Me)，1.19(s，3H，Me)，4.54(s，1H)，6.27(d，1H，2-呋喃基)，6.28(m，1H，2-呋喃基)，6.72(b，1H，NH)，7.40(m，1H，2-呋喃基)；13HNMR(CDCl3)δ＝5.71(CH2)，6.73(Me)，19.3(Me)，61.0(CH)，89.1(C)，108.1(CH)，110.5(CH)，142.7(CH)，150.9(C)，171.5(C)。
(b)(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(呋喃-2-基)-3-甲基-吖丁啶-2-酮0℃下向得自前述步驟的衍生物(0.060g，0.21mmol)、DMAP(0.010g)和三乙基胺(88μl，0.63mmol)的CH2Cl2(3.0ml)溶液中加入二叔丁基-二碳酸酯(121ml，0.52mmol)的CH2Cl2(1.0ml)溶液。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌1小時(shí)，然后用飽和NH4Cl抑制。用乙酸乙酯萃取混合物并用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥并在減壓下濃縮。進(jìn)行色譜分離(SiO2，正戊烷/乙酸乙酯，8∶2)后，得到0.077g(0.020mmol，97％)(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(呋喃-2-基)-3-甲基-吖丁啶-2-酮[α]D20＝+26.6(c 0.98，CHCl3)；IR(CDCl3，cm-1)2958，1813，1726，1327，1152；1H NMR(CDCl3)δ＝0.54(m，6H，3CH2)，0.80(t，9H，3Me)，1.41(s，9H，3Me)，1.61(s，3H，Me)，4.73(s，1H)，6.27(d，1H，2-呋喃基)，6.34(m，1H，2-呋喃基)，7.37(m，1H，2-呋喃基)；13H NMR(CDCl3)δ＝5.6(CH2)，6.5(Me)，23.0(Me)，27.8(3 Me)，62.7(CH)，83.3(C)，85.4(C)，108.9(CH)，110.3(CH)，142.4(CH)，147.9(C)，148.7(C)，167.7(C)。
(c)(2’R，3’R)-13-[N-Boc-2-甲基-3-(2-呋喃基)-異絲氨酸基]-漿果赤霉素III在氬氣氛下，將得自步驟b)的β-內(nèi)酰胺形式(0.082g，0.214mmol)和7-TES-漿果赤霉素III(0.060g，0.086mmol)溶解于THF中。將溶液冷卻至-45℃。攪拌下滴加NaHMDS(1.0M的正己烷溶液，2.5當(dāng)量)。將溫度在4小時(shí)內(nèi)升至-20℃。用飽和NH4Cl抑制反應(yīng)；用乙酸乙酯萃取混合物并使之干燥。蒸發(fā)溶劑后，通過色譜法純化粗品。將反應(yīng)產(chǎn)物在0℃下溶解于1∶1 MeCN/吡啶溶劑中。滴加HF/吡啶溶液(70/30)(0.1ml/10mg試劑)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后于25℃下攪拌6小時(shí)，隨后用乙酸乙酯萃取。用飽和CuSO4和水將萃取物洗滌三次并用無水MgSO4干燥，得到0.035g(0.041mmol，48％)標(biāo)題化合物1H NMR(CDCl3)δ＝1.15(s，3H，Me，C-15)，1.23(s，9H，3Me，t-Boc)，1.30(s，3H，Me，C-15)，1.42(s，3H，Me，C2′)，1.69(s，3H，Me，C-8)，1.84(s，3H，Me，C-12)，1.89(m，1H，H-6β)，2.15(m，1H，H-14)，2，25(s，3H，Me，OAc of C-10)，2.37(m，1H，H-14)，2.55(m，1H of C6-H)，2.61(s，3H，Me，OAc，C-4)，3.58-3.65(b，1H，OH)，3.82(d，1H，C3-H，J＝7.0Hz)，4.18(d，1H，C20-H，J＝8.4Hz)，4.31(d，1H，C20-H)，4.42(dd，1H，C7-H，J1＝6.4Hz，J2＝10.8Hz)，4.95(dd，1H，C5-H，J1＝2.4Hz，J2＝9.6Hz)，5.23(d，1H，J＝9.6Hz，NH)，5.39(d，1H，C3′-H)，5.66(d，1H，C2-H)，6，28(s，1H，C10-H)，6.34(m，1H，2-呋喃基)，6.36(m，1H，H-13)，6.38(m，1H，2-呋喃基)，7.42(m，1H，2-呋喃基)，7.49(m，2H，芳族)，7.59(m，1H，芳族)，8.14(m，2H，芳族).
實(shí)施例4(2’R，3’R)-13-[N-Boc-2-甲基-3-(2-呋喃基)異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯在實(shí)施例3c所述的條件下，將7-TES-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯(0.080g，0.125mmol)與(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(呋喃-2-基)-3-甲基-吖丁啶-2-酮(0.12g，0.312mmol)偶聯(lián)，得到(2’R，3’R)-13-[N-Boc-2-甲基-3-(2-呋喃基)異絲氨酸基]-3’，7-二TES-14 β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯(0.087g，0.0775mmol，62％)1H NMR(CDCl3)δ＝0.5-0.6(m，12H，6CH2)，0.85-0.95(m，18H，6 Me)，1.25(s，3H，Me)，1.29(s，9H，3Me)，1.31(s，3H，Me)，1.56(s，3H，Me)，1.75(s，3H，Me)，1.92(m，1H，C6-H，J6-6，＝14.3Hz)，2.02(s，3H，Me)，2.20(s，3H，Me)，2.51(m，1H，C6-H)，2.71(s，3H，Me)，3.76(d，1H of C3-H，J＝8.1Hz)，4.26(q，2H ofC20，J＝8.5Hz)，4.44(m，1H，C7-H，J1＝10.8Hz，J2＝7.0Hz)，4.85(d，1H，C14-H，J＝7.0Hz)，4.89(m，1H，C5-H，J1＝1.8Hz，J2＝9.8Hz)，5.24(d，1H，1H，C3′-H，J＝10.0Hz)，5.28(d，1H，NH)，6.10(d，1H，C2-H)，6.26(d，1H，2-呋喃基)，6.38(m，1H，2-呋喃基)，6.42(s，1H，C10-H)，6.47(d，1H，C13-H)，7.38(m，1H，2-呋喃基)，7.42-7.50(m，2H，芳族)，7.54-7.60(m，1H，芳族)8.02-8.08(m，2H，芳族)。
用HF/吡啶溶液處理該衍生物，得到標(biāo)題化合物(0.063g，0.70mmol，91％)1H NMR(CDCl2)δ1.25(s，9H，3Me)，1.28(s，3H，Me)，1.43(s，3H，Me)，1.75(s，3H，Me)，1.86(s，3H，Me)，1.92(m，1H，C6′-H，J6-6，＝14.3Hz)，2.24(s，3H，Me)，2.55(m，1H，C6-H)，2.63(s，3H，Me)，3.73(d，1H，C3-H，J＝8.0Hz)，4.26(q，2H，C20，J＝8.5Hz)，4.38(m，1H，C7-H，J1＝10.8Hz，J2＝7.0Hz)，4.86(d，1H，C14-H，J＝7.0Hz)，4.93(m，1H，C5-H，J1＝1.8Hz，J2＝9.8Hz)，5.26(d，1H，1H，C3′-H，J＝9.5Hz)，5.44(d，1H，NH)，6.12(d，1H，C2-H)，6.28(s，1H，C10-H)，6.36(d，1H，2-呋喃基)，6.40(m，1H，2-呋喃基)，6.47(d，1H，C13-H)，7.42(m，1H，2-呋喃基)，7.44-7.50(m，2H，芳族)，7.58-7.62(m，1H，芳族)8.02-8.08(m，2H，芳族)。
實(shí)施例5a)(3R，4R)-3-羥基-1-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-4-三氟甲基-吖丁啶-2-酮在78℃下，將1M LiHMDS(2.4ml，2.4mmol)的THF溶液加入(J.Org.Chem.，1999，64，4643-4651中所述的)(2S，5S)-2-叔丁基-2，5-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-酮(0.344g，2.03mmol)的THF溶液中。30分鐘后，連續(xù)加入HMPA和N-(4-甲氧基苯基)三氟乙醛亞胺(trifluoroacetaldimine)(0.81g，4.00mmol)的溶液(THF∶HMPA＝85∶15)。4小時(shí)后，在-78℃下用5ml 1MCH3CO2H水溶液處理反應(yīng)混合物，用1N HCl、然后用NH4Cl、最后用鹽水進(jìn)行萃取。使有機(jī)相干燥(Na2SO4)并在減壓下蒸除溶劑。對(duì)殘余物進(jìn)行色譜分離(SiO2，EtOAc/正戊烷，1∶2)，得到0.25g(0.91mmol，45％)標(biāo)題化合物β-內(nèi)酰胺(3R，4R)[α]D20＝+28.4(c 1.01，CHCl3)；1HNMR(CDCl3)δ＝1.70(d，3H，Me，J＝1.2Hz)，3.02-3.10(b，1H，OH)，3.78(s，3H，OMe)，4.33(q，1H，JH-F＝5.7Hz)，6.85-7.40(m，4H，芳族)；13H NMR(CDCl3)δ＝22.2(Me)，55.5(OMe)，63.9(q，CH，J＝31Hz)，82.8(C)，114.4(2CH)，119.7(2CH)，123.7(CF3，J＝279Hz)，129.3(C)，157.3(C)，167.9(C)。
b)(3R，4R)-3-三乙基甲硅烷氧基-1-(4-甲氧基-苯基)-3-甲基-4-三氟甲基-吖丁啶-2-酮在25℃下，將Et3SiCl(0.31g，2.0mmol)和N-甲基咪唑(0.28g，4mmol)加入得自步驟a)化合物(0.25g，0.91mmol)的DMF(3.0ml)溶液中。攪拌2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物倒入冰水中、用乙酸乙酯萃取并使之干燥。蒸除溶劑并對(duì)殘余物進(jìn)行色譜分離，得到0.32g(0.82mmol，90％)標(biāo)題產(chǎn)物IR(CDCl3，cm-1)2957，2878，1778，1514，1298，1251；1H NMR(CDCl3)δ＝0.75(m，6H，3CH2)，0.98(t，9H，3Me)，1.65(s，3H，Me)，3.79(s，3H，OMe)，4.22(q，1H，JH-F＝5.9Hz)，6.85-7.40(m，4H，芳族)；13H NMR(CDCl3)δ＝5.7(CH2)，6.6(Me)，23.4(Me)，55.5(OMe)，64.3(q，CH，J＝32Hz)，84.0(C)，114.4(2CH)，119.5(2 CH)，123.6(CF3，J＝283Hz)，129.8(C)，157.1(C)，167.1(C)。
c)(3R，4R)-3-三乙基甲硅烷氧基-3-甲基-4-三氟甲基-吖丁啶-2-酮在50℃下于2小時(shí)內(nèi)向得自b)的化合物(0.30g，0.77mmol)的乙腈(13.0ml)溶液中滴加硝酸鈰(IV)銨(1.5g，2.74mmol)的水(20.0ml)溶液以及水(30ml)。用水(30ml)將混合物稀釋并用乙酸乙酯萃取。用飽和NaHCO3、飽和NaHSO3、再用飽和NaHCO3洗滌有機(jī)相。將有機(jī)層干燥并于真空下濃縮。對(duì)殘余物進(jìn)行柱色譜分離(SiO2，CH2Cl2/乙酸乙酯，3∶1)，得到標(biāo)題產(chǎn)物(0.168g，0.59mmol，77％)1H NMR(CDCl3)δ＝0.69(m，6H，3CH2)，0.94(t，9H，3Me)，1.60(s，3H，Me)，3.77(q，1H，JH-F＝6.2Hz)，6.20-6.45(b，1H，NH)；13H NMR(CDCl3)δ＝5.8(CH2)，6.8(Me)，23.7(Me)，61.0(q，CH，J＝32Hz)，86.3(C)，123.8(CF3，J＝280Hz)，170.8(C)。
d)(3R，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-三乙基甲硅烷氧基-3-甲基-4-三氟甲基-吖丁啶-2-酮在0℃下將二叔丁基二碳酸酯(0.32g，1.47mmol)的二氯甲烷(1.0ml)溶液加入步驟c)化合物(0.168g，0.59mmol)、DMAP(10mg)和三乙胺(0.25ml，1.77mmol)的二氯甲烷(2.0ml)溶液中。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌2小時(shí)，然后用飽和NH4Cl抑制。用乙酸乙酯萃取混合物，并用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥并在減壓下濃縮。進(jìn)行色譜分離(SiO2，正戊烷/乙酸乙酯，4∶1)，得到0.210g(0.56mmol，95％)標(biāo)題產(chǎn)物1H NMR(CDCl3)δ＝0.69(m，6H，3CH2)，0.95(t，9H，3Me)，1.52(s，9H，3Me)，1.63(s，3H，Me)，4.10(q，1H，JH-F＝6.2HZ)；13H NMR(CDCl3)δ＝5.6(CH2)，6.5(Me)，23.5(Me)，27.8(3Me)，63.2(q，CH，J＝32Hz)，84.7(C)，122.8(CF3，J＝281Hz)，147.2(C)，167.4(C)。
e)(2’R，3’R)-13-[N-Boc-2-甲基-3-三氟甲基異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯按照實(shí)施例4的方法，使7-TES-14β-羥基漿果赤霉素III(0.080g，0.11mmol)與得自步驟d)的化合物(0.103g，0.27mmol)反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物的7，3’-二-TES-衍生物(0.071g，0.063mmol，57％)1H NMR(CDCl3)δ＝0.62-0.72(m，12H，6CH2)，0.88-0.95(m，18H，6Me)，1.25(s，9H，3Me)，1.31(s，3H，Me)，1.52(s，6H，2Me)，1.63(s，3H，Me)，1.90(m，1H，C6′-H)，2.00(s，3H，Me)，2.19(s，3H，Me)，2.48(m，1H，C6-H)，2.58(s，3H，Me)，3.74(d，1H，C3-H，J＝7.5Hz)，4.24(q，2H，C20，J＝8.8Hz)，4.41(m，1H，C7-H，J1＝10.6Hz，J2＝6.4Hz)，4.74(m，1H，C3′-H)，4.83(d，1H，C14-H，J＝6.9Hz)，4.86(m，1H，C5-H，J1＝1.90Hz，J2＝9.8Hz)，5.10(d，1H，NH)，6.10(d，1H，C2-H)，6.40(s，1H，C10-H)，6.42(m，1H，C13-H)，7.44-7.50(m，2H，芳族)，7.58-7.60(m，1H，芳族)8.06-8.10(m，2H，芳族)。
將該衍生物用HF/吡啶溶液處理，得到標(biāo)題化合物(0.048g，0.54mmol，85％)1H NMR(CDCl3)1.28(s，9H，3 Me)，1.31(s，3H，Me)，1.33(s，3H，Me)，1.73(s，3H，Me)，1.90(s，3H，Me)，1.90(m，1H，C6′-H)，2.25(s，3H，Me)，2.55(m，1H，C6-H)，2.57(s，3H，Me)，3.736(d，1H，C3-H，J＝7.6Hz)，4.26(q，2H，C20，J＝8.8Hz)，4.38(m，1H，C7-H，J1＝10.8Hz，J2＝6.4Hz)，4.82(m，1H，C3′-H)，4.86(d，1H，C14-H，J＝6.8Hz)，4.90(m，1H，C5-H，J1＝2.3Hz，J2＝9.9Hz)，5.24(d，1H，NH)，6.10(d，1H，C2-H)，6.26(s，1H，C10-H)，6.47(d，1H，C13-H)，7.48-7.54(m，2H，芳族)，7.58-7.64(m，1H，芳族)8.08-8.12(m，2H，芳族)。
實(shí)施例6(2’R，3’R)-13-[N-Boc-2-甲基-3-(2-噻吩基)異絲氨酸基]-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯在實(shí)施例3c所述條件下，將7-TES-14β-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯(0.24g，0.375mmol)與(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-4-(噻吩-2-基)-3-甲基-吖丁啶-2-酮(0.36g，0.936mmol)偶聯(lián)。
用HF/吡啶溶液進(jìn)行保護(hù)后，得到標(biāo)題化合物(0.189g，2.1mmol，55％)，為白色固體1H NMR(CDCl2)δ1.25(s，9H，3Me)，1.28(s，3H，Me)，1.43(s，3H，Me)，1.75(s，3H，Me)，1.86(s，3H，Me)，1.92(m，1H，C6′-H，J6-6′＝14.3Hz)，2.24(s，3H，Me)，2.55(m，1H，C6-H)，2.63(s，3H，Me)，3.73(d，1H，C3-H，J＝8.0Hz)，4.26(q，2H，C20，J＝8.5Hz)，4.38(m，1H，C7-H，J1＝10.8Hz，J2＝7.0Hz)，4.86(d，1H，C14-H，J＝7.0Hz)，4.93(m，1H，C5-H，J1＝1.8Hz，J2＝9.8Hz)，5.26(d，1H，1H，C3′-H，J＝9.5Hz)，5.44(d，1H，NH)，6.12(d，1H，C2-H)，6.28(s，1H，C10-H)，7.07(dd，5.0，3.6Hz，H-3噻吩基)，7.16(dd，3.6，1.0，H-4噻吩基)，6.47(d，1H，C13-H)，7.35(dd，5.0，1.0，H-5噻吩基)，7.44-7.50(m，2H，芳族)，7.58-7.62(m，1H，芳族)8.02-8.08(m，2H，芳族)。
藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)使用濃度為0.1％的本發(fā)明化合物的二甲亞砜溶液進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。使用了A2780wt、A2780cis、A2780adr和A2780tax細(xì)胞系。將細(xì)胞接種于96孔平底培養(yǎng)板(Viewplates，Packard)上。24小時(shí)后，除去培養(yǎng)基，并在洗滌后加入含有供試化合物的培養(yǎng)基。對(duì)每張板重復(fù)四次建立劑量-效應(yīng)對(duì)數(shù)曲線，濃度由0.01至100000000nM。每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均一式兩份地進(jìn)行三次。在供試化合物存在下培養(yǎng)72小時(shí)后，收集細(xì)胞并根據(jù)ATP劑量、使用ATPlite試劑盒(Packard，Meridien，MO，USA)和Topcount(Packard)自動(dòng)照度儀估算存活細(xì)胞數(shù)。對(duì)于每種藥物/細(xì)胞系組合，繪制劑量-效應(yīng)曲線并由濃度-效應(yīng)曲線計(jì)算IC50值，濃度-效應(yīng)曲線是在對(duì)sigmoid-Emax模型進(jìn)行的三次實(shí)驗(yàn)中、使用非線性回歸獲得，用預(yù)期效應(yīng)平方的倒數(shù)進(jìn)行加權(quán)。得到的經(jīng)72小時(shí)連續(xù)暴露于供試化合物后的IC50值報(bào)告于下表化合物 A2780wt A2780cisA2780tax A2780adr紫杉醇 5.3±1.3 4.6±0.74498±1232688±454實(shí)施例13.1±0.2 2.9±0.1420±93 61.4±3.9實(shí)施例32.9±0.1 3.3±0.2312±61 41.3±7.4實(shí)施例22.53±1.471.7±0.4299±77 52.9±16.2實(shí)施例54.64±2.582.8±0.6285±60 79.3±19.9實(shí)施例45.9±0.7 2.5±0.330.9±3.727.1±10.1實(shí)施例63.7±0.4 2.9±0.2160.4±3293.2±20.權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其中R為三氟甲基、苯基、2-呋喃基、2-噻吩基；R1為叔丁氧基羰基或苯甲?；?；R2為羥基；R3為氫，或與R2一起形成具有以下通式的環(huán)狀碳酸酯殘基， 條件是當(dāng)R3為氫時(shí)，R不同于苯基。
2.式(I)化合物，其為(2’R，3’R)-13-[N-苯甲酰基-3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-漿果赤霉素III；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-漿果赤霉素III；(2’R，3’S)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-苯基-2-甲基-異絲氨酸基]-14-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-三氟甲基-2-甲基-異絲氨酸基]-14-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-呋喃基)-2-甲基-異絲氨酸基]-14-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯；(2’R，3’R)-13-[N-叔丁氧基羰基-3-(2-噻吩基)-2-甲基-異絲氨酸基]-14-羥基漿果赤霉素III 1，14-碳酸酯。
3.藥物組合物，其含有一種式I化合物以及可藥用的載體和賦形劑。
4.式I化合物在制備具有抗腫瘤活性的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的紫杉烷衍生物，如式(Ⅰ)，其中R為三氟甲基、苯基、2－呋喃基、2－噻吩基；R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1538841SQ02815352
公開日2004年10月20日 申請(qǐng)日期2002年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月7日
發(fā)明者E·邦巴爾代利, G·豐塔納, A·巴塔哥利亞, S·奇米坦, E 邦巴爾代利, 滋, 繢 申請(qǐng)人:因德納有限公司