專利名稱：2－取代的4－雜芳基－嘧啶及它們在治療增殖性疾病中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及2-取代的4-雜芳基-嘧啶，它們的制備，含有它們的藥物組合物，及它們在治療如癌癥、白血病、牛皮癬等的增殖性疾病中的用途
Paul，R.等人在J.Med.Chem.(1993)Vol.36，p2716-2725中還公開了一類具有抗炎活性的苯基氨基嘧啶。這些化合物包括在嘧啶環(huán)的4-位上有單取代的2-噻吩基團(tuán)和在這位置上的二甲基-3-呋喃基團(tuán)。
本發(fā)明的目的是要提供另一類N-苯基-2-嘧啶抗增殖性化合物。人們出于意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物原來并不是蛋白激酶C抑制劑。正如下面所討論的，它們的活性可以由它們能抑制細(xì)胞系的細(xì)胞增殖和/或抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶來證實。在統(tǒng)篇說明書中“噻吩基(thienyl)”與“噻吩(thiophene)”是互換使用的。
R4，R5，R6，R7，和R8各自是H，取代或不取代的低級烷基，鹵素，NO2，CN，OH，取代或不取代的烷氧基，NH2，NH-R’，烷基-芳基，烷基-雜芳基，NH(C＝NH)NH2，N(R’)3+，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，CF3或CH2)nO(CH2)nO(CH2)mNR’R”，(CH2)nCO2(CH2)mOR”’其中n是0，1，2或3，m是1，2或3；其中R’，R”和R各自是烷基基團(tuán)，它們可以相同或不同。優(yōu)選實施方案的描述本說明書中所用的“烷基”一詞是包括具有1-8碳原子的直鏈和支鏈的烷基，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，已基等，而“低級烷基”一詞是類似地用于具有1-4碳原子的基團(tuán)。
“芳基”是包括具有6-10碳原子的基團(tuán)，例如，苯基、萘基等。
“芳烷基”是上面所述的烷基和芳基的結(jié)合。
式I的優(yōu)選化合物是那些帶有單取代或二取代的5元雜環(huán)基，該雜環(huán)基通過一個環(huán)碳原子連接到嘧啶環(huán)上并且該雜環(huán)基選自噻唑-3-基噻唑-5-基和噻吩-3-基，優(yōu)選噻吩-3-基或噻唑-5-基，最優(yōu)選該雜環(huán)基是噻唑-5-基。
優(yōu)選的是，R1，R2，和R3各自選自H，烷基，芳基，芳烷基，鹵素，NO2，CN，OH，烷氧基，芳氧基，NH2，NHCOR’，NH-芳基，NH-R’，，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，CF3，和CO-R’，其中烷基，芳基，NH-芳基和芳烷基基團(tuán)可以進(jìn)一步被一個或多個選自鹵素，NO2，CN，OH，O-甲基，NH2，COOH，CONH2和CF3的基團(tuán)取代；更優(yōu)選的是，R1和R2各自是鹵素，C1-4烷基，H，芳基，雜環(huán)基，或NH(R’)。甚至更優(yōu)選R1和R2都是氯或都是甲基。
R3優(yōu)選是選自H，芳基，取代的芳基，鹵代，C1-4迷氧基和OH，更優(yōu)選的是R3是H或甲基，最優(yōu)選是H。
基團(tuán)Z優(yōu)選是NH，NHSO2或NHCH2，更優(yōu)選NH或NHSO2，最優(yōu)選NH。
苯基取代基R4-R8優(yōu)選是選自H，OH，鹵素，硝基，氨基，烷氧基，氨基甲酰基，氨磺?；珻1-4烷基，取代的C1-4烷基，COOH，COOR’，CN，CF3，(CH2)nO(CH2)mNR’R”，烷基-芳基，烷基-雜芳基，NH(C＝NH)NH2，N(R’)3+，N(R’)(R”)和(CH2)nCO2(CH2)mOR。
甚至更優(yōu)選的是，R4-R8各自選自F，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，COOH，COOR’，CN，H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，CH2CO2CH2CH2OMe，NH(C＝NH)NH2，和O2CH2CH2OMe，CH2OCH2CH2NEt2，CH2-雜芳基，NMe3+，NMe2。
R’，R”，和R各自優(yōu)選的是甲基或乙基。
特別優(yōu)選的上述這些優(yōu)選的組合是包括其中的雜環(huán)是噻吩-3-基或噻唑-5-基，后者是最優(yōu)選的，Z是NH，R3是H，和剩余的基團(tuán)是選自上述的這些優(yōu)選的基團(tuán)。特別優(yōu)選的情況是當(dāng)R1和R2各自是一個或多個鹵素或C1-4烷基，尤其是當(dāng)R1和R2都是氯或甲基時以及當(dāng)R4-R8各自是選自F，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3和OMe時。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案中，X1和X2分別是S和N。
在另一個特別優(yōu)選的實施方案中，Z是NH，R3是H。
因此，特別優(yōu)選的實施方案包括(a)2-[N-(苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)嘧啶胺，其中該苯基是被至少一個選自Me，F(xiàn)，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，CN，COOH，CH2OH，COOMe，COOEt，NH(C＝NH)NH2，CH2CO2CH2CH2OMe，CH2-pyridyl，CH2OCH2CH2NEt2，CO2CH2CH2OMe，NMe3+和NMe2的基團(tuán)2-，3-或4-取代的；(b)2-[N-(苯基)]-4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)嘧啶胺，其中該苯基是被F，NO2，OH，Cl，或OMe的至少一個基團(tuán)2-，3-或4-取代的；(c)2-[N-(苯基)]-4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)嘧啶胺，其中該苯基是被F，NO2，OH，Cl，或OMe的至少一個基團(tuán)2-，3-或4-取代的；和(d)2-[N-(苯基)]-4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)嘧啶胺，其中該苯基是被F，OH，I，NO2，Cl，COOR’，Br，OMe或CF3的至少一個基團(tuán)2-，3-或4-取代的。
在(a)-(d)的這些基團(tuán)中，下列的苯基取代基是優(yōu)選的-對于基團(tuán)(a)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被F，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，CN，CH2OH，COOH，COOMe，COOEt，CH2CO2CH2CH2OMe或CO2CH2CH2OMe單取代，或者是被2，4-氟，3，5-二氟，3，4-二氟，2，4-二氯，3，5-二氯，3，4-二氯，4-羥基-2-硝基，4-羥基-3-硝基，6-氯-3-羧基，4-氯-3-羧基，6-氯-2-羧基，2-氟-4-碘代，2-羥基-4-甲氧基，3-氯-4-碘代，3-氯4-羥基，3-氯-4-甲基，3-氯-4-甲氧基，4-氟-3-硝基，6-氯-3-甲氧基羰基，3-氯-4-甲氧基羰基，3-氯-4-乙氧基羰基，2-羥基-4-甲氧基，2-氯-5-甲氧基羰基，4-氯-3-甲氧基羰基，6-氯-3-(CO2CH2CH2OMe)，3-氯-4-(CO2CH2CH2OMe)，4-氯-3-三氟甲基，或3-(CO2CH2CH2OMe)-4-氟代基二取代的。
-對于基團(tuán)(b)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯或硝基單取代的。
-對于基團(tuán)(c)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯單取代的。
-對于基團(tuán)(d)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯，溴，碘，氯，OH，硝基，CF3或OMe單取代的，或者是被4-羥基-3-硝基，3-氯-4-乙氧基羰基，3，4-二氟，2，4-二氟，4-氯-3-三氟甲基或4-氟-3-硝基二取代的。
甚至更優(yōu)選的是，對于基團(tuán)(a)的苯基是被Br，I或CF3單取代的。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是選自以下這些化合物
4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-2-苯基-嘧啶，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-(2-硝基-苯基)-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(2-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺，-吡啶-2-基-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-苯基)-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-甲氧基-苯基)-胺，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺，4-氯-N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯磺酰胺，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-4-氟-苯磺酰胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-4-硝基-苯磺酰胺，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，3-二胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-氯-4-甲基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，[4-溴-6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-胺，
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-苯酚，[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，(4-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[2-氨基-6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，2-氯-4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，2-氯-4-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸2-甲氧基-乙酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，2-氯-5-[3-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-苯基氨基]-苯甲酸，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，3-氯-2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-4-碘-苯基)-胺，2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-甲氧基-苯酚，(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-苯甲酸2-甲氧基-乙酯，2-氯-5-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲乙酯，(3-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氟-3-硝基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-{4-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基氨基}-苯酚，N-{5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺，(4-氟-苯基)-{4-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基}-胺，4-[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-胍，{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-吡啶-4-基-甲基-苯基)-胺，[3-(2-二乙基氨基-乙氧基甲基)-苯基]-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，
N，N-二甲基-N′-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺，{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-三甲基-銨，上述這些化合物的結(jié)構(gòu)在附
圖1中說明。
被認(rèn)為是CDK抑制劑的特別優(yōu)選的一些化合物包括以下這些化合物(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-苯基)-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-甲氧基-苯基)-胺，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，3-二胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-氯-4-甲基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，
4-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，[4-溴-6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，4-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，2-氯-4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3，5-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-甲氧基-苯酚，(3-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-胍，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)-胺，N，N-二甲基-N′-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺，
{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-三甲基-銨。
甚至更優(yōu)選的顯示為CDK抑制劑的化合物包括下列的化合物[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺。
根據(jù)細(xì)胞測定證實，下列化合物顯示為特別有效的抗增殖劑(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，(3，4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-苯酚，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，3-氯-2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-4-碘-苯基)-胺，(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺。
根據(jù)細(xì)胞測定顯示，以下該化合物是更有效的抗增殖劑[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺。
現(xiàn)已研究發(fā)現(xiàn)式I化合物具有抗增殖活性，因此它們被認(rèn)為能用于治療增殖性疾病，例如癌癥、白血病和其它與非細(xì)胞控制性增殖有關(guān)的疾病，例如牛皮癬和再狹窄。如前面定義中所述，本發(fā)明化合物的抗增殖效果可通過以下兩種途徑來驗證在體外全細(xì)胞測定中，例如用A549、HT29、Saos-2、Hela或MCF-7的任一種細(xì)胞系測定抑制細(xì)胞增殖的能力；或者在某種專門的測定中可顯示CDK酶(如CDK2或CDK4)的抑制作用。這些測定它們性能的方法在實施例23中作了較為詳細(xì)的說明。使用這樣的細(xì)胞系測定和酶測定，可以確定一種化合物是否本發(fā)明所述的抗增殖化合物。
雖然沒有理論上的解釋，但本發(fā)明化合物被認(rèn)為是以非蛋白激酶C(PKC)依賴性的方式發(fā)揮它們的抗增殖作用。本發(fā)明這些化合物中有許多化合物對于與細(xì)胞系調(diào)節(jié)有關(guān)的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的一些酶(CDKs)有抑制作用。這些CDKs包括CDK2和CDK4以及尤其是它們分別與細(xì)胞周期蛋白E和D1之間的相互作用。本發(fā)明的這些化合物還被確認(rèn)為具有對于增殖性疾病中所含有的一些CDK酶是有選擇性的優(yōu)點。所謂“選擇性”是指該化合物對其它酶(如PKC)雖然也有某種抑制作用，但其優(yōu)選的是抵抗與增殖性疾病有關(guān)的酶。
本發(fā)明化合物可抑制細(xì)胞周期中的任何步驟或階段，例如，細(xì)胞核外膜的形成、細(xì)胞周期退出非活性階段(GO)、G1步態(tài)、染色體解凝聚、核外膜破損、細(xì)胞周期調(diào)控、DNA復(fù)制的引發(fā)、DNA復(fù)制的進(jìn)程、DNA復(fù)制的終止、中心體重復(fù)、G2進(jìn)程、有絲分裂或減數(shù)分裂功能的活化、染色體的凝聚、中心體分離、微管成核、紡錘體形成和功能的產(chǎn)生、與微管動力蛋白之間的相互作用、染色單體分離、有絲分裂功能的滅活、收縮環(huán)的形成、和胞質(zhì)分裂功能的產(chǎn)生。特別是，本發(fā)明化合物可影響某些基因的功能，例如染色質(zhì)的結(jié)合、復(fù)制復(fù)合體的形成、復(fù)制許可、磷酸化或其它次級修飾活性、蛋白水解、微管結(jié)合、肌動蛋白結(jié)合、濃毒性蛋白(septin)結(jié)合、微管結(jié)構(gòu)中心成核活性以及與細(xì)胞周期信號途徑中的組分結(jié)合。
因此本發(fā)明另一優(yōu)選的實施方案是涉及式I的一種或多種化合物在治療增殖性疾病中的用途。優(yōu)選的是，該增殖性疾病是癌癥或白血病?！霸鲋承约膊 边@是一個廣義詞，它包括任何一種需要控制細(xì)胞周期的疾病，例如心血管病如再狹窄和心臟病、自身免疫障礙如腎小球腎炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮膚病如牛皮癬、抗炎性、抗真茵性、抗寄生性疾病如瘧疾、氣腫和脫發(fā)。在這些疾病中，本發(fā)明化合物可根據(jù)需要誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或停滯在所需的細(xì)胞內(nèi)。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及式I的一種或多種化合物在治療CDK依賴性或敏感性疾病中的用途。CDK依賴性疾病關(guān)系到上述一種或多種CDK酶活性的正常水平。該疾病主要與CDK2和/或CDK4活性的非正常水平有關(guān)。CDK敏感性疾病是這樣的一種病，其CDK水平的失常不是主要病因，而主要是代謝失常而代謝水平低下。在這樣的情況下，CDK2和/或CDK4可被認(rèn)為是部分的敏感性代謝的途徑，因此CDK抑制劑可以有治療這些疾病的活性。這些疾病主要是癌癥或白血病。
本發(fā)明第二方面涉及下式I的一種或多種化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途， 其中X1是CH和X2是S；或X1和X2之一是S，而X1和X2之另一是N；Z是NH，NHCO，NHSO2，NHCH2，CH2，CH2CH2，或CH＝CH；R1，R2，和R3各自是H，烷基，芳基，芳烷基，雜環(huán)基，鹵素，NO2，CN，OH，烷氧基，芳氧基，NH2，NH-R’，N-(R’)(R”)，NH-芳基，N-(芳基)2，COOH，COO-R’，COO-芳基，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，CONH-芳基，CON-(芳基)2，SO3H，SO2NH2，CF3，CO-R’，或CO-芳基，其中烷基，芳基，芳烷基和雜環(huán)基團(tuán)可以進(jìn)一步被一個或多個選自鹵素，NO2，CN，OH，O-甲基，NH2，COOH，CONH2和CF3的基團(tuán)取代；R4，R5，R6，R7，和R8各自是H，取代或不取代的低級烷基，鹵素，NO2，CN，OH，取代或不取代的烷氧基，NH2，NH-R’，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，或CF3，但除了當(dāng)R5，R6和R7都是甲氧基以及R4和R8都是氫之外或者當(dāng)R6和R7都是甲氧基以及R4，R5和R8都是氫之外；其中R’和R”各自是烷基，它們可以相同或不同。
“增殖性疾病”的含義前面已經(jīng)討論，它與本發(fā)明第一方面所用的定義相同。
本發(fā)明這一方面的優(yōu)選實施方案與上述第一方面的實施方案相同。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的一種或多種化合物與一種或多種其它抗癌藥聯(lián)合施用。在此情況下，本發(fā)明的一種或多種化合物可與一種或多種其它抗癌藥依次、同時、或連續(xù)地聯(lián)合施用。
這里所用的短語“藥物的制備”，除了它用在篩選抗癌藥的程序中或在制備這種藥的任一階段之外還包括用式I化合物直接作為藥物。
本發(fā)明化合物(第一和第二方面)可以鹽或酯，特別是以藥學(xué)上可接受的鹽或酯的形式存在。
本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽(第一和第二方面)包括其適當(dāng)?shù)乃峒映甥}或堿式鹽。合適的藥用鹽可見Berge等人在J Pharm Sci，66，1-19(1977)中的綜述。用以下的酸形成鹽，例如，用強(qiáng)無機(jī)酸如硫酸、磷酸或鹽酸等的無機(jī)酸；用強(qiáng)有機(jī)羧酸如未取代或取代的(如鹵代)1-4碳原子的烷羧酸如乙酸；用飽和或不飽和的二羧酸如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或均苯四甲酸；用羥基羧酸如抗壞血酸、乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、或檸檬酸；用氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸；用苯甲酸；或用有機(jī)磺酸如未取代或取代(例如鹵代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸例如甲磺酸或?qū)妆交撬帷?br>
酯是用有機(jī)酸或用醇/氫氧化物形成的，取決于被酯化的官能基。所用的有機(jī)酸包括羧酸，例如未取代或取代的(如鹵代)1-12碳原子的烷羧酸如乙酸；飽和或不飽和的二羧酸如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或均苯四甲酸；羥基羧酸如抗壞血酸、乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、或檸檬酸；氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有機(jī)磺酸如未取代或取代的(例如鹵代)(C1-C4)-烷基-或芳基磺酸例如甲磺酸或?qū)妆交撬帷：线m的氫氧化物包括無機(jī)氫氧化物，例如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括1-12碳原子的烷醇，可以是未取代的或取代的(如鹵代)。
在前面討論的本發(fā)明的所有方面中，在適當(dāng)情況下本發(fā)明包括式I化合物的所有的對映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員會識別所有具有光學(xué)性能(一個或多個手性碳原子)或互變異構(gòu)特征的化合物。這些相應(yīng)的對映體和/或互變異構(gòu)體可以用本領(lǐng)域已知的方法制備。
本發(fā)明還涉及各種結(jié)晶形式、多晶形式和無定型形式的本發(fā)明(第一和第二方面)化合物或它們的用途。通過稍改變一下從合成制備這些化合物時所用的溶劑中純化或分離的方法，可以將化合物分離成這些形式中的任何一種形式，在制藥工業(yè)中已較完善地建立了這樣的方法。
本發(fā)明還包括前藥形式的本發(fā)明化合物(第一和第二方面)或它們的用途。這些前藥通常是式I中的一個或多個適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)已被修飾的化合物，而該修飾在人體或動物體服藥后是可以逆轉(zhuǎn)的。這種逆轉(zhuǎn)通常是通過體內(nèi)天然存在的酶進(jìn)行的，雖然與這種前藥一起服用第二種藥使體內(nèi)進(jìn)行這種逆轉(zhuǎn)也是可能的。這種修飾物的例子包括酯(例如，上述的任一種酯)，其中可進(jìn)行該逆轉(zhuǎn)的是酯酶等的物質(zhì)。其它的體系的物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。
本發(fā)明也包括含有本發(fā)明化合物(第一和第二方面)的藥物組合物。關(guān)于這一點，尤其是對人的治療來說，本發(fā)明化合物(包括它們的藥學(xué)上可接受的鹽、酯和藥學(xué)上可接受的溶劑化物)即使能被單獨服用，但通常也總是與根據(jù)用藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)的用藥實踐所選擇的藥用載體、賦型劑或稀釋劑一起混合服用。
因此，本發(fā)明也涉及含有式I的一種或多種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯與至少一種藥學(xué)上可接受的賦型劑、稀釋劑或載體一起的藥物組合物。
作為舉例，在本發(fā)明的藥物化合物中，本發(fā)明的化合物可以與任何一種或多種合適的粘結(jié)劑、潤滑劑、混懸劑、包衣劑、和/或增溶劑混合。適合于這里所述的各種不同劑型藥物組合物的賦型劑的例子可以在Wade和PJWeller出版的“藥物賦型劑手冊”第2版(1994)中找到。
本發(fā)明的藥物組合物可采用口服、直腸、陰道、腸胃外、肌肉、腹膜內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、支氣管內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻、向頰或舌下的途徑給藥。
對于口服來說，具體的是使用壓制的片劑、小丸、凝膠、滴劑、和膠囊。組合物中活性成分的含量優(yōu)選為每劑1-250mg，更優(yōu)選為10-100mg。
其它給藥劑型有溶液或乳液，它們可以是靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射的，它們可從無菌的或滅菌的溶液制備。本發(fā)明的藥物組合物也可以是栓劑、陰道栓劑、混懸劑、乳劑、洗劑、軟膏、霜膏、凝膠、噴霧劑、溶液或粉劑的形式。
另一種透皮給藥的方式是用皮膚貼劑。例如，可將活性成分摻入由聚乙二醇或液體石蠟的含水乳液組成的膏劑中。該活性成分也可按1-10％重量濃度將其摻到由白臘或白色的軟石臘與可要求使用的穩(wěn)定劑和防腐劑一起組成的軟膏中。
注射劑型中可含10-1000mg，優(yōu)選10-250mg/每劑的活性組分。
組合物可以配制成單劑量形式，即每一份含單位劑量的形式，或者多劑量或小劑量的單位劑型。
本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易確定給患者服用適當(dāng)劑量的某種組合物而無需做任何試驗。通常，醫(yī)生確定的對某一患者最合適的實際劑量可根據(jù)年齡、體重和反應(yīng)的不同而變化。本發(fā)明所公開的劑量例子是各種情況的平均值。對于個別情況當(dāng)然要考慮更高的劑量或更低的劑量，這些也應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的范圍。
在典型的實施方案中，對于治療惡性腫瘤來說，將給患者服用每天一劑或多劑的10-150mg。
本發(fā)明的藥物給合物還可含有一種或多種另外抗癌藥，例如在市場上現(xiàn)成有售的抗癌藥。
幾種抗癌藥聯(lián)合施用通常更為有效。尤其是為了避免多重的主要毒性作用機(jī)理和抗藥性機(jī)理，需要進(jìn)行聯(lián)合療法。而且，大多數(shù)藥物需要在每次劑量之間最短的時間間隔里以最大的耐受劑量服用。幾種化療藥物聯(lián)合施用的主要優(yōu)點是它可以通過生物化學(xué)的反應(yīng)來促進(jìn)加倍的或協(xié)同的作用，并且也可降低早期腫瘤細(xì)胞中耐藥性的恢復(fù)，而這些腫瘤細(xì)胞對起初用單一藥物化療已經(jīng)有了反應(yīng)。在選擇聯(lián)合用藥中利用生物化學(xué)反應(yīng)的例子是服用亞葉酸來提高5-氟尿嘧啶的活性胞內(nèi)代謝物與它的靶物即胸苷酸合酶的結(jié)合能力，從而提高它的胞毒作用。
最近，治療癌癥和白血病使用了許多聯(lián)合用藥的方法。醫(yī)學(xué)實踐中對此的更深入的評述可見Springer出版的E.E.Vokes和H.M.Golomb編的“腫瘤治療”。
對于某一種特定的初期癌癥或由該癌癥衍生的細(xì)胞系的治療是用一些已知的或尚不能確定是否有效的藥物來對受試化合物產(chǎn)生抑制活性進(jìn)行研究，通過該研究可以提出一些有效的聯(lián)合用藥方案。這種方法也能被用來確定幾種藥物傳送的次序是先、后還是同時給藥。這樣的時間上安排可能是本發(fā)明鑒定所有藥物輪流發(fā)生作用的一個特點。
可以與至少一種本發(fā)明化合物聯(lián)合用藥的合適的抗增殖劑包括DNA破壞劑、抗代謝藥、抗腫瘤的抗生素、天然產(chǎn)物或它們的類似物、二氫葉酸還原酶、嘧啶類似物、嘌呤類似物、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑、胸苷酸合酶抑制劑、DNA螯合劑、DNA剪切劑、拓樸異構(gòu)酶抑制劑、氨茴環(huán)霉素、長春花屬藥物、絲裂霉素、博來霉素、細(xì)胞毒素核苷、蝶啶類藥物、二炔烯(diynenes)、足葉草毒素、含鉑藥物、分化誘發(fā)劑、和taxans。這些類別中特別有用的成員包括，例如，氨甲蝶呤、二氯蝶呤、二氯氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶、6-巰嘌呤、三取代的嘌呤如olomoucine、roscovitine、bohemine和purvalanol、flavopiridol、staurosporin、阿糖胞苷、美潔侖、環(huán)氧長春堿、放線菌素、柔紅霉素、阿霉素、絲裂霉素D、mitomycin A、caminomycin、氨基喋呤、fallysomycin、足葉草毒素(及其衍生物)、足葉乙甙、順鉑、carboplatinum、長春(花)堿、長春新堿、長春堿酰胺、paclitaxel、docetaxel、taxotere retinoic acid、butyric acid、乙酰精脒、他莫昔芬、innotecan和喜樹堿。該藥物部分最優(yōu)選的是選自氨甲蝶呤、足葉草毒素(及其衍生物)、足葉乙甙、喜樹堿、paclitaxel、阿霉素、roscovitine和bohemine。
本發(fā)明的化合物是能合成的，例如可用Traube合成法(A.R.Katritzky，I.Taher，Can.J.Chem.1986，64，2087，這里引用的參考文獻(xiàn))，也即，如以下反應(yīng)示意圖中所示，通過1，3-羰基化合物1或者丙烯酸酯2或3，與脒4之間的縮合反應(yīng)可以合成本發(fā)明的化合物。 反應(yīng)式1其中二羰基化合物1可用許多現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法制備(J.March，InAdvanced Organic ChemistryReactions，Mechanism，and Structure，4thEd.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，1992，p.1283)。適用于本發(fā)明目的的具體的丙烯酸酯2和3可從雜環(huán)甲酮5通過其分別與二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛6和醛7縮合而制得，(反應(yīng)式2)。 反應(yīng)式2根據(jù)通式結(jié)構(gòu)中Z的定義，二氨基化合物4將是脒4a或胍4b。脒(HN＝CRNH2)可以從容易得到的胺前體通過與例如烯酮亞胺縮合或者通過氨與合適的腈或亞胺酯(imidates)加成而得到。胍4b(反應(yīng)式3)能用現(xiàn)有技術(shù)中已知的許多方法精制而成。對于本發(fā)明目的而言，最有用的途徑是氨腈8與苯胺9的胺化方法。 反應(yīng)式3或者，通式I化合物也可從適當(dāng)?shù)泥奏で绑w直接得到，例如從2，4-二取代的(鹵素、胺等)嘧啶通過逐位取代反應(yīng)而制得。以下參考附圖舉例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
圖1表示本發(fā)明化合物1-119的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖2表示化合物28在Saos-2細(xì)胞中使有絲分裂仃滯并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞用1μM化合物處理48小時。箭頭表示有絲分裂和細(xì)胞凋亡。
圖3表示化合物28和長春花堿對有絲分裂指數(shù)的影響。圖3A表示平板試驗計劃，圖3B表示從掃描平板窗口攝影的圖象。
圖4表示用化合物28處理的孔的圖象。
圖4A-化合物28，4.4μM Hoechst株核。
圖4B-化合物28，4.4μM抗有絲分裂株。
圖C-對照細(xì)胞，Hoechst株核。
圖D-對照細(xì)胞，抗有絲分裂株。
圖5表示化合物28對有絲分裂指數(shù)的影響(相對于化合物濃度的％細(xì)胞)。
圖6表示化合物28誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡，更多的細(xì)節(jié)是，圖6表示用10μM化合物28治療的人肺癌細(xì)胞(A549)。大范圍的細(xì)胞質(zhì)空泡化是在治療的細(xì)胞(A)中觀察到而不是在對照細(xì)胞(B)中觀察到的。
3-乙?；?2，5-二甲基噻吩(0.1mol，15.4g)在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(14.6mL)中的溶液在N2下回流16h。將反應(yīng)混合物蒸干。殘余物用iPr2O研制，過濾得到的該固體并用相同溶劑洗滌兩次得到標(biāo)題化合物為黃色固體(8.60g，41％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.40(s，6H，CH3)，2.63(s，6H，CH3)，5.42(d，1H，J＝12.5Hz，CH)，6.89(s，1H，Ar-H)，7.66(d，1H，J＝12.5Hz，CH)。
4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基胺將3-二甲基胺-1-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-丙烯酮(3.5mmol，0.733g)和碳酸胍(3.5mmol，0.631g)在2-甲氧基乙醇中的混合物在N2下回流21h。蒸干溶劑并將殘余物經(jīng)閃蒸色譜提純，用EtOAc/PE(5∶1，v/v)洗脫產(chǎn)品，然后從丙酮中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物為淡黃色結(jié)晶(331mg，46％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.43(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，5.05(br，2H，NH2)，6.74(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，6.97(s，1H，噻吩基-H)，8.28(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。實施例2N-(4-氯苯基)-硝酸胍4-氯苯胺(70mmol，8.88g)在EtOH(5mL)中的溶液在冰浴上用硝酸(69％水溶液；5mL)處理。向該混合物中加氨腈(50％水溶液；5.4mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后在N2下再回流22h。蒸發(fā)溶劑。用EtOH洗滌該深棕色的殘余物，在高真空下干燥，得到白色粉末(7.16g，44％)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.27-7.54(m，4H，Ph-H)，9.65(br.s，2H，NH)。
(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[3]1-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(1.2mmol，0.29g)和N-(4-氯-苯基)-硝酸胍(1.2mmol，0.27g)在iPrOH(5mL)中的混合物用NaOH(48mg)處理。反應(yīng)混合物在N2下回流20h。蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化(EtOAc/PE，5∶1和10∶3)得到淡黃色的標(biāo)題化合物。從EtOAc/PE重結(jié)晶出純產(chǎn)品(283mg，66％)。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ7.30-7.35(m，4H，Ph-H)，7.61(m，2H，Ph-H)，8.48(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。
用與上述類似的方法制備以下化合物(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[2]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.99(m，1H，Ph-H)，7.29-7.42(m，4H，Ph-H，噻吩基-H，和嘧啶基-H)，8.53(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.57(m，1H，Ph-H)。
(3-氯-苯基)-[4(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[4]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.02(m，1H，Ph-H)，7.23-7.40(m，4H，Ph-H，噻吩基-Hand嘧啶基-H)，7.93(t，1H，J＝1.99，3.95Hz，Ph-H)，8.50(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。
(4-氯-苯基)[4-(2，5-二甲基-噻吩-3)-嘧啶-2-基]-胺[14]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.45(s，3H，CH3)，2.66(s，3H，CH3)，6.87(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.01(s，1H，噻吩基-H)，7.29(m，2H，Ph-H)，7.60(m，2H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(2-氯-苯)-[-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[15]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.45(s，3H，CH3)，2.68(s，3H，CH3)，6.91(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，6.97(m，1H，Ph-H)，7.04(s，1H，噻吩基-H)，7.28(m，1H，Ph-H)，7.38(m，2H，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.60(m，1H，Ph-H)。
(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺[16]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.45(s，3H，CH3)，2.70(s，3H，CH3)，6.90(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.20-7.33(m，3H，Ph-Hand噻吩基-H)，7.34(m，1H，Ph-H)，7.96(m，1H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。-(3-硝基-苯基)-胺[9]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.43(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.59(m，1H，Ph-H)，7.67(m，1H，Ph-H)，7.82(m，1H，Ph-H)，8.04(m，1H，Ph-H)，8.70(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，9.03(s，1H，噻吩基-H)。實施例33-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮將5-乙?；?2，4-二甲基噻唑(10g，60mmol)在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(10mL)中的溶液在N2下回流18h，然后將該反應(yīng)混合物蒸干并將殘余物從iPr2O/CH2Cl2重結(jié)晶得到棕色粉末的標(biāo)題化合物(9.94g，79％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.66(s，6H，CH3)，2.70(s，6H，CH3)，5.37(d，1H，J＝12.2Hz，CH)，7.66(d，1H，J＝12.2Hz，CH)。實施例4N-(3-硝基-苯基)-硝酸胍將3-硝基苯胺(50mmol，6.90g)在EtOH(10mL)中溶液在冰浴上冷卻。滴加硝酸(69％水溶液；3.6mL)。向該混合物中加氨腈(50％水溶液；5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘，然后在N2下回流22h。蒸發(fā)溶劑。用EtOAc/EtOH洗滌深棕色的固體并在高真空下干燥過夜，和得到棕色固體的標(biāo)題化合物(6.90g，57％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.66-7.75(m，2H，Ph-H)，8.09-8.14(m，2H，Ph-H)。-(3-硝基-苯基)-胺[12]3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1.0mmol，0.21g)和N-(3-硝基-苯基)-硝酸胍(1.0mmol，0.24g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中混合物用NaOH(40mg)處理。將反應(yīng)混合物在N2下處理20h。蒸發(fā)溶劑并將殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化(EtOAc/PE，5∶1)，從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶得到黃色固體的標(biāo)題化合物(151mg，46％)。M.p.176-178℃.LC-MSm/z＝328(M+1)。C15H13N5O2S理論值C，55.03；H，4.00；N，21.39； 實測值C，54.67；H，3.88；N，21.77。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.72(s，3H，CH3)，2.74(s，3H，CH3)，7.06(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.74-7.92(m，3H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3 Hz，嘧啶基-H)，8.91(t，1H，J＝4.3，2.1Hz，Ph-H).實施例5N-(4-氟-苯基)-硝酸胍4-氟代苯胺(25mmol，2.80g)在EtOH(10mL)中的溶液在冰浴上冷卻。滴加硝酸(69％水溶液；1.8mL)。然后加氨腈(50％水溶液；4mL)。將反應(yīng)混合物在N2下回流21h。蒸干溶劑，殘余物用EtOH洗滌并在高真空下干燥過夜得到紺色粉末的標(biāo)題化合物(2.54g，47％)。用該物質(zhì)接著反應(yīng)不需進(jìn)一步提純。-(4-氟-苯基)-胺[21]向3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1.0mmol，0.21g)和N-(4-氟-苯基)-硝酸胍(2.0mmol，0.44g)在2-甲氧基乙醇(5mL)加NaOH(40mg)。將反應(yīng)混合物在N2下回流24h。蒸干溶劑，殘余物用閃蒸色譜純化(EtOAc/PE，2∶1)并從EtOAc/PE重結(jié)晶得到棕結(jié)晶的標(biāo)題化合物(269mg，89％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，6.93(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.03(m，2H，Ph-H)，7.58(m，2H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(2，4-二氟-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[22]3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1.0mmol，0.21g)和N-(2，4-二氟-苯基)-硝酸胍(2mmol，0.47g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物用NaOH(40mg)處理。在N2下回流24h后，蒸干溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化(EtOAc/PE，2∶1)并從EtOAc/PE重結(jié)晶得到棕色粉末的標(biāo)題化合物(250mg，79％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，6.93(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.01(m，2H，Ph-H)，7.58(m，2H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。實施例7N-(4-羥基-2-硝基-苯基)-硝酸胍在冰浴中將4-氨基-2-硝基苯酚(25mmol，3.85g)的EtOH(6mL)混合物用硝酸(69％水溶液；1.8mL)處理。向其中加氨腈(50％水溶液；4mL)。反應(yīng)混合物在N2下回流22h。蒸發(fā)溶劑。深棕色固體殘余物用EtOH洗滌并在高真空下干燥過夜得到灰色固體的標(biāo)題化合物(3.53g，54％)。
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚[45]將3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1mmol，0.21g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的溶液在NaOH(40mg)存在下用N-(4-羥基-2-硝基-苯基)-硝酸胍(2mmol，0.52g)處理。反應(yīng)混合物在N2下回流24h后，蒸干溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化(EtOAc)并從EtOAc/PE重結(jié)晶得到黃色粉末的標(biāo)題化合物(61mg)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.73(s，3H，CH3)，7.01(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.18(m，1H，Ph-H)，7.64(m，1H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.75(d，1H，J＝2.7Hz，Ph-H)，10.45(br.s，1H，OH)。
用與上述類似的方法制備以下化合物(2-氯-苯基)[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[5]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.96-7.02(m，2H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.30-7.42(m，2H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H).8.54-8.58(m，1H，Ph-H)。
(3-氯-苯基)[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[7]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，6H，CH3)，6.97-7.04(m，2H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.23-7.36(m，2H，Ph-H)，7.94(t，1H，J＝1.9，3.9Hz，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(4-氯-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[6]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.70(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，6.96(d，2H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.33(m，2H，Ph-H)，7.60(m，2H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。(2-氟-苯基)-胺[20]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.98-7.22(m，4H，嘧啶基-H和Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H).8.50(m，1H，Ph-H)。-(3-氟-苯基)-胺[35]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.75(m，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.17-7.32(m，3H，Ph-H)，7.77(m，1H，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(3，5-二氟-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[23]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.73(s，3H，CH3)，6.49(m，1H，Ph-H)，7.02(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.28-7.34(m，2H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(3，5-二氯-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[24]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.72(s，6H，CH3)，7.01-7.04(m，2H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.67(m，2H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(2，4-二氯-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[25]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，7.02(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.29-7.42(m，2H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.54(d，1H，J＝8.9Hz，Ph-H)。-(2-三氟甲基-苯基)-胺[27]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.69(s，3H，CH3)，2.70(s，3H，CH3)，7.00(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.19(m，1H，Ph-H)，7.59-7.65(m，2H，Ph-H)，8.37(d，1H，J＝6.4Hz，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(3-三氟甲基-苯基)-胺[26]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，7.01(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.29-7.34(m，2H，Ph-H)，7.45(m，1H，Ph-H)，7.64(m，1H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(4-三氟甲基-苯基)-胺[28]橙色固體。M.p.183-185℃.LC-MSm/z＝351.4(M+1)。C16H13F3N4S的理論值C，54.85；H，3.74；N，15.99；實測值C，54.71；H，3.59；N，16.26.1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.72(s，3H，CH3)，2.73(s，3H，CH3)，7.03(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.60(m，2H，Ph-H)，7.79(m，2H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(2-溴-苯基)-[4(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[129]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.92(m，1H，Ph-H)，7.00(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.38(m，1H，Ph-H)，7.59(m，2H，Ph-H)，8.46(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.51(m，1H，Ph-H)。
(3-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5)-嘧啶-2-基]-胺[30]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.72(s，6H，CH3)，6.98(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.19(m，2H，Ph-H)，7.41(m，1H，Ph-H)，8.11(m，1H，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[31]黃色固體。M.p.173-175℃。LC-MSm/z＝363(M+1)。C15H13BrN4S理論值C，49.87；H，3.63；N，15.51；實測值C，49.81；H，3.61；N，15.56.1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.70(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.97(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.47(m，2H，Ph-H)，7.55(m，2H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(2-碘苯基)-胺[32]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.70(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.80(m，1H，Ph-H)，6.99(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.42(m，1H，Ph-H)，7.84(m，1H，Ph-H)，8.39(m，1H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(3-碘-苯基)-胺[33]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.68(s，6H，CH3)，7.03(m，2H，嘧啶基-H和Ph-H)，7.28(d，1H，J＝7.9Hz，Ph-H)，7.68(m，1H，Ph-H)，8.41(m，1H，Ph-H)，8.47(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(4-碘-苯基)-胺[34]黃色固體。M.p.171-173℃。LC-MSm/z＝409(M+1)。C15H13IN4S理論值C，44.13；H，3.21；N，13.72；實測值C，44.03；H，3.17；N，13.73.1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.70(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.97(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.46(m，1H，Ph-H)，7.64(m，2H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(3，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[36]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.70(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.98(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.11(m，2H，Ph-H)，7.83(m，1H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(3-甲氧基-苯基)-胺[38]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.70(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，3.86(s，3H，OCH3)，6.61(m，1H，Ph-H)，6.94(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.10-7.28(m，3H，Ph-H)，8.42(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。-(2-甲氧基-苯基)-胺[37]
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，3.92(s，3H，OCH3)，6.89-7.04(d，4H，Ph-H和嘧啶基-H)，8.43(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.53(m，1H，Ph-H)。-(4-甲氧基-苯基)-胺[39]橙黃色固體。M.p.137-139℃。LC-MSm/z＝313(M+1)。C16H16N4OS理論值C，61.51；H，5.16；N，17.94；實測值C，61.32；H，5.18；N，18.36.1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.68(s，3H，CH3)，2.70(s，3H，CH3)，3.82(s，3H，OCH3)，6.88-6.93(d，4H，Ph-Hand嘧啶基-H)，7.52(m，1H，Ph-H)，8.37(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[40]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.67(s，3H，CH3)，2.68(s，3H，CH3)，6.42(d，1H，J＝8.0Hz，Ph-H)，6.94(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.05(m，1H，Ph-H)，7.24(m，2H，Ph-H)，7.99(m，1H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.99(br.s，1H，NH)，9.21(br.s，1H，OH)。
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[41]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.61(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)，6.71(m，2H，Ph-H)，6.97(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.49(m，2H，Ph-H)，7.24(m，2H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，9.06(br.s，1H，NH)，9.32(br.s，1H，OH)。
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈[48]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.65(s，3H，CH3)，2.67(s，3H，CH3)，7.22(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.77(m，2H，Ph-H)，7.99(m，2H，Ph-H)，8.61(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，10.2(s，1H，NH)。
3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈[49]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.71(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，7.03(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.31-7.45(m，2H，Ph-H)，7.67(m，1H，Ph-H)，8.29(m，1H，Ph-H)，8.45(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)。
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸[53]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.65(s，3H，CH3)，2.67(s，3H，CH3)，7.09(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.70(m，2H，Ph-H)，7.82(m，2H，Ph-H)，8.52(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯[50]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.72(s，3H，CH3)，2.73(s，3H，CH3)，3.91(s，3H，OCH3)，7.02(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.41(sbr，1H，NH)，7.76(m，2H，Ph-H)，8.05(m，2H，Ph-H)，8.47(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(3-氟-4-甲基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[51]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.45(s，3H，CH3)，2.71(s，6H，CH3)，6.99(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.18-7.32(m，2H，Ph-H)，7.82(m，1H，Ph-H)，8.41(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[52]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.70(s，3H，CH3)，2.71(s，3H，CH3)，3.90(s，3H，OCH3)，6.92(m，2H，嘧啶基-H & Ph-H)，7.10(sbr，1H，NH)，7.38(m，1H，Ph-H)，7.85(m，1H，Ph-H)，8.40(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-苯甲酸2-甲氧基-乙酯[98]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.64(s，3H，CH3)，2.66(s，3H，CH3)，3.29(s，3H，OCH3)，3.66(m，2H，CH2)，4.44(m，2H，CH2)，7.13(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.32(m，1H，Ph-H)，7.98(m，1H，Ph-H)，8.39(m，1H，Ph-H)，8.54(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，9.93(s，1H，NH)。實施例84-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基胺該化合物是由加熱等摩爾量的3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮和胍在2-甲氧基乙醇中進(jìn)行回流而制備的。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.67(s，3H，CH3)，2.68(s，3H，CH3)，5.14(br，2H，NH2)，6.83(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.30(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)。
N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺[42]將4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基胺(1mmol，0.227g)、3-硝基苯磺酰氯(1.5mmol，0.33g)在吡啶(4mL)的溶液在r.t.下攪拌24h。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥。深棕色的殘余物溶解在EtOAc中并用2M含水HCl溶液、鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。濃縮得到淡黃色的殘余物，經(jīng)閃蒸色譜(EtOAc/PE，5∶1)純化，從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶得到黃色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(44mg)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.68(s，3H，CH3)，2.73(s，3H，CH3)，7.59(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.90(m，1H，Ph-H)，8.60(m，1H，Ph-H)，8.75(m，1H，Ph-H)，8.81(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.15(t，1H，J＝1.98，3.91Hz，Ph-H)。實施例93-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-丙烯酮將3-氯-2，4-戊二酮(2.5g，19mmol)的MeOH(15mL)溶液用N-甲基-2-硫尿(1.67g，19mmol)和吡啶(1.5mL)處理。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2-3h。過濾所得的沉淀并用Et2O洗滌得到5-乙?；?2-甲基氨基-4-甲基噻唑，白色固體產(chǎn)物，無需進(jìn)一步純化就可用于下一步反應(yīng)。將該產(chǎn)物(2.05g)在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(10mL)在100-110℃下加熱22h。將反應(yīng)混合物濃縮。收集沉淀并用EtOAc洗滌得到橙色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.55，2.94(s，6H，CH3)，3.40(s，6H，NCH3)，5.29(d，1H，J＝12.2Hz，CH)，7.62(d，1H，J＝12.2Hz，CH)。實施例10(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[62]向3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1mmol，0.22g)和N-(4-氟-苯基)-硝酸胍(2mmol，0.44g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物中加NaOH(40mg)。將反應(yīng)混合物在110-120℃和N2下加熱20h。蒸干溶劑，將殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化，用EtOAc/PE(1∶1，v/v)洗脫該產(chǎn)物得到黃色固體。從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶，產(chǎn)生230mg棕色結(jié)晶的標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.46(s，3H，CH3)，2.86(d，3H，CH3)，6.90(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.11(m，2H，Ph-H)，7.76(m，2H，Ph-H)，8.07(m，1H，NH)，8.32(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.48(s，1H，NH)。
用與上述類似的方法制備以下化合物4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[62]1H-NMR(300MHz，CD3OD3)δ2.53(s，3H，CH3)，2.98(s，3H，CH3)，6.77(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，6.86(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.44(d，2H，J＝8.8Hz，Ph-H)，8.21(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)。
(4-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[72]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.50(s，3H，CH3)，2.92(d，6H，CH3)，6.85(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.53(d，2H，J＝8.8Hz，Ar-H)，7.65(d，2H，J＝8.8Hz，Ar-H)，8.28(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)9.41(s，1H，NH)。-(3-硝基-苯基)-胺[76]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.80s，3H，CH3)，3.09(s，3H，CH3)，7.01(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.55(m，1H，Ph-H)，7.79(d，1H，Ph-H)，8.02(d，1H，Ph-H)，8.15(m，1H，NH)，8.41(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.00(s，1H，Ph-H)，10.02(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝345.15(C15H14N6O2S理論值342.38)。
3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚[85]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.86(s，3H，CH3)，3.24(s，3H，CH3)，6.36(m，1H，Ph-H)，6.88(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.03(m，1H，Ph-H)，7.24(m，1H，Ph-H)，8.06(m，1H，NH)，8.32(d，1H，J＝4.5Hz，嘧啶基-H)，9.21(s，1H，Ph-H)，9.31(s，1H，NH)。DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝315.92(C15H15N6OS理論值313.38)。
(4-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[86]黃棕色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.86(s，3H，CH3)，3.09(s，3H，CH3)，6.93(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.43(m，2H，Ph-H)，7.75(m，2H，Ph-H)，8.07(m，1H，NH)，8.34(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.61(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝378.8(C15H14N6SBr理論值376.28)。
(4-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[87]褐色結(jié)晶。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87(s，3H，CH3)，3.23(s，3H，CH3)，6.94(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.32(m，2H，Ph-H)，7.81(m，2H，PhH)，8.09(m，1H，NH)，8.35(d，1H，J＝5.7Hz，嘧啶基-H)，9.61(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝332.1(C15H14N6SCl理論值331.8)。
(3-甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[88]淡黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.85(s，3H，CH3)，3.09(s，3H，CH3)，3.78(s，3H，CH3)，6.52(m，1H，Ph-H)，6.92(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.16(m，1H，Ph-H)，7.29(m，1H，Ph-H)，7.56(s，1H，Ph-H)，8.10(m，1H，NH)，8.35(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，9.45(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝327.8(C16H17N5OS理論值327.4)。-(4-三氟甲基-苯基)-胺[89]黃棕色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.88(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，7.01(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.62(m，2H，Ph-H)，8.01(m，2H，Ph-H)，8.12(m，1H，NH)，8.40(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.91(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝365.5(C16H14N5SF3理論值365.4)。-(3-三氟甲基-苯基)-胺[90]黃棕色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.86(s，3H，CH3)，3.11(s，3H，CH3)，6.99(d，1H，J＝5.5Hz，Ph-H)，7.27(m，1H，Ph-H)，7.50(m，1H，Ph-H)，7.87(m，1H，Ph-H)，8.15(m，1H，NH)，8.40(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，8.47(s，1H，Ph-H)，9.86(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝369.8(C16H14N5SF3理論值365.4)。
(3-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[83]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87(s，3H，CH3)，3.11(s，3H，CH3)，6.96(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.10(m，1H，Ph-H)，7.23(m，1H，Ph-H)，7.62(m，1H，Ph-H)，8.15(m，1H，NH)，8.31(s，1H，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，9.70(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝377.4(C15H14N6SBr理論值376.3)。
(3-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[108]黃色結(jié)晶。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.86(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，6.95(d，2H，J＝5.7Hz，嘧啶基-H)，7.29(m，1H，Ph-H)，7.61(m，1H，Ph-H)，8.14(s，1H，Ph-H)，8.38(d，1H，J＝4.3Hz，嘧啶基-H)，9.72(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝331.6(C15H14N6SCl理論值331.8)。
(3-碘苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[102]黃色結(jié)晶。1H-NMR(30MHz，d6-DMSO)δ2.88(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，6.96(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，7.07(m，1H，Ph-H)，7.28(m，1H，Ph-H)，7.61(m，1H，Ph-H)，8.14(m，1H，NH)，8.37(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，8.50(s，1H，Ph-H)，9.64(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝423.3(C15H14N6SI理論值423.3)。
(3-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[103]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，6.74(m，1H，Ph-H)，6.97(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.29(m，1H，Ph-H)，7.47(m，1H，Ph-H)，7.87(m，1H，Ph-H)，8.12(m，1H，NH)，8.38(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H)，9.71(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝316.3(C15H14N5SF理論值315.4)。
(3，5-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[106]黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，6.74(m，1H，Ph-H)，7.02(d，1H，J＝5.5，嘧啶基-H)，7.60(m，2H，Ph-H)，8.18(m，1H，NH)，8.41(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.92(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝333.4(C15H13N5SF2理論值333.4)。
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[107]淡黃色結(jié)晶。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.86(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，7.01(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.61(m，1H，Ph-H)，7.92(m，1H，Ph-H)，8.17(m，1H，NH)，8.40(d，1H，J＝5.5Hz，Ph-H)，8.53(s，1H，Ph-H)，9.96(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝399.8(C16H13N5SClF3理論值399.8)。
(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2基]-胺[104]淡黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87s，3H，CH3)，3.12(s，3H，CH3)，6.97(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)，7.35(m，1H，Ph-H)，8.04(d，1H，Ph-H)，8.08(d，1H，Ph-H)，8.20(m，1H，NH)，8.37(d，1H，J＝5.3，嘧啶基-H)，9.71(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝333.8(C15H13N5SF2理論值333.4)。
(2，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[105]淡黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.84(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，6.86(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.06(m，1H，Ph-H)，7.29(m，1H，Ph-H)，7.67(m，1H，Ph-H)，8.04(m，1H，NH)，8.26(d，1H，J＝5.3，嘧啶基-H)，8.92(s，1H，NH)).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝334.2(C15H13N5SF2理論值333.4)。
(4-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[109]
綠黃色固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.87(s，3H，CH3)，3.35(s，3H，CH3)，3，74(s，3H，CH3)，6.85(m，1H，嘧啶基-H)，6.86(m，2H，Ph-H)，7.66(m，2H，Ph-H)，8.02(m，1H，NHCH3)，8.29(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，9.25(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝327.8(C16H17N5OS理論值327.4)。
2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯[101]黃色結(jié)晶。1H-NMR(30MHz，d6-DMSO)δ2.88(s，3H，CH3)，3.10(s，3H，CH3)，3，82(s，3H，CH3)，7.05(d，1H，J＝5.5，嘧啶基-H)，7.73(d，1H，J＝8.8Hz，Ph-H)，7.85(d，1H，J＝8.7Hz，Ph-H)，8.20(m，1H，NHCH3)，8.27(s，1H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.6Hz，嘧啶基-H).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝388.8(C17H16N5O2SCl理論值389.9)。實施例113-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-丙烯酮5-氯-戊二酮(5.12g，38mmol)和硫煙酰胺(5.25g，38mmol)在MeOH(10mL)中的混合物用吡啶(3mL)處理。反應(yīng)混合物在70-75℃加熱5h。蒸發(fā)溶劑。過濾所得的固體并用EtOAc/MeOH洗滌得到4.33g 5-乙?；?4-甲基-2-(3-吡啶)-噻唑黃色固體，無需進(jìn)一步純化就可進(jìn)行下一步反應(yīng)。該物質(zhì)(2.0g)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(4mL)在80℃加熱22h。濃縮反應(yīng)混合物，然后用EtOAc/PE研制。收集沉淀并用EtOAc/PE洗滌得到標(biāo)題化合物(2.05g，75％)是灰色固體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.80(s，6H，CH3)，3.50(s，3H，CH3)，5.47(d，1H，J＝12.1Hz，CH)，7.39(m，1H，Ar-H)，7.78(d，1H，J＝12.1Hz，CH)，8.28(m，1H，Ar-H)，8.66(m，1H，Ar-H)，9.16(s，1H，Ar-H)。實施例12[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺[71]向3-二甲基氨基-1-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1mmol，0.27g)和N-(3-硝基-苯基)-硝酸胍(1mmol，0.24g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物中加NaOH(40mg)。反應(yīng)混合物在120℃和N2下加熱20h。蒸干溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化，用EtOAc/PE(2∶1，v/v)洗脫產(chǎn)物，將其從MeOH中重結(jié)晶，得到淡黃色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(154mg)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.82(s，3H，CH3)，7.24(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，7.53(m，2H，Ar-H)，7.82(m，1H，Ph-H)，8.00(m，1H，Ar-H)，8.09(s，1H，Ar-H)，8.35(m，1H，Ar-H)，8.61(d，1H，J＝5.2Hz，Py-H)，8.68(m，1H，Ar-H)，10.23(s，1H，NH)。
用與上述類似的方法制備以下化合物(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[67]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.78(s，3H，CH3)，7.22(m，2H，嘧啶基-H，Ar-H)，7.59(m，1H，Ar-H)，7.82(m，2H，Ar-H)，8.38(m，1H，Ar-H)，8.60(d，1H，J＝5.2Hz，嘧啶基-H)，8.72(m，1H，Ar-H)，9.21(s，1H，Ar-H)，9.83(s，1H，NH)。實施例131-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙烯酮向NaOH(2.2g)在H2O(10mL)的冰冷溶液中加2，4-二甲基-5-乙?；邕?43mmol，6.6g)。攪拌5分鐘之后用三氟-對-甲苯醛(43mmol，7.49g)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?h。將其用CH2Cl2稀釋，用HCl/H2O鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥過夜。蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物(4.86g)。實施例144-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚[66]1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙烯酮(1mmol，0.31g)和N-(4-羥基-3-硝基-苯基)-硝酸胍(1.5mmol，0.39g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物中加NaOH(40mg)。反應(yīng)混合物在120℃和N2下加熱20h。蒸干溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化，用EtOAc/PE(2∶1，v/v)洗脫產(chǎn)物，將其從MeOH/EtOAc中重結(jié)晶，得到橙色結(jié)晶的標(biāo)題化合物(178mg)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.75(s，3H，CH3)，2.79(s，3H，CH3)，7.18(m，1H，Ar-H)，7.44(s，1H，嘧啶基-H)，7.61(m，1H，Ar-H)，7.81(m，2H，Ar-H)，8.22(m，2H，Ar-H)，8.98(m，1H，Ar-H)。
用與上述類似的方法制備以下化合物-(4-氟-苯基)-胺[64]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.73(s，3H，CH3)，2.78(s，3H，CH3)，7.05(m，2H，Ar-H)，7.36(s，1H，嘧啶基-H)，7.78(m，4H，Ar-H)，8.22(m，2H，Ar-H)，8.67(sbr，1H，NH)。(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-胺[65]1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ2.73(s，3H，CH3)，2.79(s，3H，CH3)，7.29(m，2H，Ar-H)，7.39(s，1H，嘧啶基-H)，7.80(m，4H，Ar-H)，8.22(m，2H，Ar-H)，8.96(sbr，1H，NH)。-(3-硝基-苯基)-胺[57]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.68(s，3H，CH3)，2.75(s，3H，CH3)，7.61(m，4H，Ar-H)，7.84(m，1H，Ar-H)，8.08(m，1H，Ar-H)，8.27(m，2H，Ar-H)，9.15(s，1H，Ar-H)，10.3(s，1H，NH)。
4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-Ar-氟-苯基amino)-嘧啶-4-基]-苯酚[70]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.67(s，3H，CH3)，2.72(s，3H，CH3)，6.93(m，2H，Ar-H)，7.18(m，2H，Ar-H)，7.42(s，1H，嘧啶基-H)，7.84(m，2H，Ar-H)，8.09(m，2H，Ar-H)，9.67(s，1H，NH or OH)，10.11(s，1H，NH or OH)。實施例15[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺[91]向1-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-3-二甲基氨基-丙烯酮(1.0mmol，0.25g)和N-(3-硝基-苯基)-硝酸胍(1.5mmol，0.36g)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物中加NaOH(40mg)。反應(yīng)混合物在110-120℃和N2下加熱22h。蒸干溶劑，殘余物經(jīng)閃蒸色譜純化，用EtOAc/PE(1∶1，v/v)洗脫產(chǎn)物為黃色固體。從EtOAc/MeOH重結(jié)晶得到棕色的標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.51(s，3H，CH3)，3.92(sbr，2H，CH2)，5.20(m，2H，CH2)，5.91(m，1H，CH)，7.02(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.57(m，1H，Ph-H)，7.80(m，1H，Ph-H)，8.06(m，1H，Ph-H)，8.43(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，8.94(s，1H，Ph-H)，10.04(s，1H，NH).
用與上述類似的方法制備以下化合物-(4-氟-苯基)-胺[82]1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.51(s，3H，CH3)，3.92(sbr，2H，CH2)，5.24(m，2H，CH2)，5.91(m，1H，CH)，6.90(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.11(m，2H，Ph-H)，7.76(m，2H，Ph-H)，8.33(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，9.49(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝341.4(C17H16FN5S理論值341.4)。實施例16[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺[75]3-二甲基氨基-1-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1mmol，0.24g)和NaOH(40mg)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物用N-(4-氟-苯基)-硝酸胍(0.36g，1.5mmol)處理。反應(yīng)混合物在110-120℃和N2下加熱20h。濃縮以后，過濾殘余物并用MeOH洗滌。從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶得到黃色固體的標(biāo)題化合物(291mg)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ1.17(m，3H，CH3)，2.51(s，3H，CH3)，3.26(m，2H，CH2)，6.89(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.11(m，2H，Ph-H)，7.77(m，2H，Ph-H)，8.33(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H).DEMALDI-TOF MS[M+H]+＝331.2(C16H16FN5S理論值329.4)。實施例174-{4-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基氨基}-苯酚[111]3-二甲基氨基-1-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-丙烯酮(1mmol，0.32g)和NaOH(50mg)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物用N-(4-羥基-苯基)-硝酸胍(0.32g，1.5mmol)處理。反應(yīng)混合物在110-120℃和N2下加熱6h。濃縮以后，過濾殘余物并用MeOH洗滌。從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶得到橙色固體的標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ6.67(m，2H，Ph-H)，6.93(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.48(m，2H，Ph-H)，7.86(m，2H，Ph-H)，8.26(m，2H，Ph-H)，8.36(d，1H，J＝5.3Hz，嘧啶基-H).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝406.82(C19H14N6O3S理論值406.42)。實施例18N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-胍[115]向[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺(3.97mmol，1.3g)在2-甲氧基乙醇(15mL)中的混合物中加AcOH(1mL)。反應(yīng)混合物在N2下攪拌10分鐘。加鉑催化劑(660mg；10％活性碳上)將反應(yīng)混合物在H2下攪拌18h。使該反應(yīng)混合物通過Celite 521，并將沉淀用MeOH洗幾律。將濾液濃縮，從MeOH/EtOAc重結(jié)晶得到灰色結(jié)晶的N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，3-二胺。將在2-甲氧基乙醇中等分的這種物質(zhì)(500mg)中冰浴中冷卻，用HCl(conc.1mL)處理。滴加氨腈(50％aq soln.，4mL)。加完之后將反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝?，再回?0h。將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物用EtOAc稀釋，用水和鹽水洗滌。蒸發(fā)有機(jī)相，經(jīng)色譜純化，用EtOAc/MeOH(3∶1，v/v)洗脫，得到標(biāo)題化合物。DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝339.16(C16H17N7S理論值339.42)。實施例19{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇[116]3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(10mmol，2.1g)在2-甲氧基乙醇中的溶液在NaOH(400mg)存在下用N-(4-羥甲基-苯基)-鹽酸胍(1.65g)處理。使反應(yīng)混合物回流20h。濃縮后，將沉淀過濾并用EtOAc/MeOH洗幾次。從MeOH/EtOAc中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(2.17g，70％)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ3.00(s，3H，CH3)，3.02(s，3H，CH3)，4.86(s，2H，CH2)，7.30(m，1H，Ph-H)，7.44(d，1H，J＝6.1Hz，嘧啶基-H)，7.61(m，1H，Ph-H)，8.01(m，1H，Ph-H)，8.13(s，1H，Ph-H)，8.88(d，1H，J＝6.1Hz，嘧啶基-H)。實施例20[3-(2-二乙基氨基-乙氧基甲基)-苯基]-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺[118]將{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇(1mmol，0.34g)在干燥的DMF中的溶液用NaH(1mmol，24mg)處理。室溫下攪拌20分鐘后，加(2-氯-乙基)-二乙基-胺鹽酸鹽(0.17g，1mmol)和吡啶(0.4mL)。在室溫下攪拌21h后，反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻并滴加水。將該反應(yīng)混合物通過加HCl水溶液而中和。并用EtOAc萃取。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。蒸干溶劑。殘余物經(jīng)色譜純化，用EtOAc/MeOH(1∶1，v/v)洗脫，從EtOAc/PE中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物為淡黃色的固體。1H-NMR(CDCl3)δ1.00(t，6H，J＝7.0Hz，CH3)，2.59(m，2H，CH2)，2.62(s，3H，CH3)，2.66(s，3H，CH3)，2.78(m，2H，CH2)，4.12(m，2H，CH2)，4.72(s，2H，CH2)，6.76(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.24(m，3H，Ph-H)，7.36(m，1H，Ph-H)，7.40(m，2H，Ph-H)，8.28(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝416.15(C22H29N5SO理論值411.56)。實施例21[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)-胺[117]4-(4-硝基-芐基)-吡啶(24mmol，5.1g)的MeOH(15mL)溶液在500mg鉑(10％，活性碳)存在下氫化。在室溫下攪拌20h后將該反應(yīng)混合物通過Celite 521過濾。用MeOH將助濾劑洗幾次。蒸干濾液得到4-吡啶-4-基甲基-苯基胺(1.84g)為灰色固體。分析RP-HPLC表示是單一的產(chǎn)物。將該產(chǎn)物在MeOH(15mL)中的溶液在冰浴中冷卻，先用HCl(濃縮，1.75mL)處理，再用氨腈(50％aq soln.；5mL)處理。將該反應(yīng)混合物回流加熱18小時。蒸發(fā)溶劑，殘余物用EtOAc/MeOH(2∶1，v/v)洗滌得到N-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)胍鹽酸鹽(2.25g)，白色固體。
將3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(1mmol，0.21g)和N-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)-胍鹽酸鹽(2mmol，0.40mg)在2-甲氧基乙醇的混合物用NaOH(40mg)處理。使反應(yīng)混合物加熱回流2天。蒸發(fā)溶劑并將殘余物從EtOAc/MeOH中重結(jié)晶，得到澄色的標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ3.00(s，3H，CH3)，3.02(s，3H，CH3)，4.29(s，2H，CH2)，7.44(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H)，7.56(m，2H，Ph-H)，7.61(m，2H，Ar-H)，8.09(m，2H，Ph-H)，8.82(m，2H，Ar-H)，8.87(d，1H，J＝5.5Hz，嘧啶基-H).DEMALDI-TOF MS[M+H]+＝377.52(C21H19N5S理論值373.48)。實施例22{4-[-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-三甲基-銨[120]向3-二甲基氨基-1-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-丙烯酮(0.95mmol，0.19g)和N-(4-二甲基氨基-苯基)-胍(2mmol)在2-甲氧基乙醇(5mL)中的混合物中加NaOH(40mg)。反應(yīng)混合物在120℃下加熱18h。蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)色譜純化，用EtOAc/PE洗脫得到N，N-二甲基-N′-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺[119](74mg)，是紅棕色的固體。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.62(s，3H，CH3)，2.65(s，3H，CH3)，2.86(s，6H，CH3)，6.73(m，2H，Ph-H)，6.97(d，1H，J＝5.1Hz，嘧啶基-H)，7.56(m，2H，Ph-H)，8.44(d，1H，J＝5.0Hz，嘧啶基-H)，9.33(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝329.51(C17H19N5S理論值325.43)。
向上述化合物(0.13mmol，42mg)在無水丙酮(6mL)中的溶液中滴加12L的碘甲烷并將該反應(yīng)混合物回流加熱18h。蒸發(fā)溶劑將所得的油狀物用甲苯(5mL)研制。過濾所得的沉淀，用EtOAc洗滌并在高真空下干燥過夜處到標(biāo)題化合物(18mg)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)δ2.63(s，3H，CH3)，2.65(s，3H，CH3)，3.56(s，9H，CH3)，7.17(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，7.88(m，2H，Ph-H)，7.96(m，2H，Ph-H)，8.57(d，1H，J＝5.4Hz，嘧啶基-H)，10.04(s，1H，NH).DE MALDI-TOF MS[M+H]+＝343.39(C19H25N5S理論值340.47)。
根據(jù)分析篩選和/或用一種或多種細(xì)胞系測定細(xì)胞毒性，對CDK的抑制作用進(jìn)行了測定，由此證實了本發(fā)明化合物的生物學(xué)活性。實施例23選擇化合物的激酶特異性對上述實施例所選的化合物的激酶特異性進(jìn)行了研究。使用的是蛋白激酶試片，包括與本發(fā)明相關(guān)的CDKs，以及許多有代表性的功能上不相關(guān)的激酶。
對CDK4/Cyclin D1、CDK2/Cyclin E、CDIK1/Cyclin B激酶的測定可以在適當(dāng)體系中通過控制GST-Rb的磷酰化作用來進(jìn)行。因此，由CDK4/Cyclin D1，CDK2/Cyclin E或CDK1/Cyclin B激酶誘發(fā)的GST-Rb磷?；饔檬鞘褂?6-孔型體外激酶測定中的放射性標(biāo)記的ATP通過將放射性標(biāo)記的磷酸鹽摻在GST-Rb(772-928)中來進(jìn)行檢測的。該磷酶化反應(yīng)混合物(總體積40μl)的組成是50mM HEPES pH7.4，20mM MgCl2，5mMEGTA，2mM DTT，20mM β-甘油磷酸鹽，2mM NaF，1mM Na3VO4，蛋白酶抑制劑混合物(Sigma，見上述)，BSA 0.5mg/ml，1μg純化的酶復(fù)合體，10μlof GST-Rb-瓊脂糖小珠，100μM ATP，0.2μCi32P-ATP。該反應(yīng)在30℃和恒定振蕩下進(jìn)行30分鐘。在該時間末了，向每一孔中加100μl of 50mMHEPES，pH7.4和1mM ATP，并將它們?nèi)哭D(zhuǎn)移到GFC濾板上。將該濾板用200μl of 50mM HEPES，pH7.4_和1mM ATP洗5次。向每個孔加50μl閃爍液體，并在閃爍記數(shù)器(Topcount，HP)上測定樣品的放射性。用GraFit軟件計算不同肽的IC50值。
或者，CDK2/cyclin A激酶的測定也可以用重組的CDK2/cyclin A在96-孔板中進(jìn)行。測定緩沖液的組成是25mM β-甘油磷酸鹽，20mM MOPS，5mM EGTA，1mM DT T，1mM NaVO3，pH7.4，其中加有2-4μg CDK2/cyclinA與底物pRb(773-928)。加Mg/ATP混合物(15mM MgCl2，100μM ATP，每孔30-50 kBq的[γ-32P]-ATP)來引發(fā)反應(yīng)并將混合物根據(jù)需要在30℃培養(yǎng)10-30分鐘。使反應(yīng)在冰上終止，接著通過p81濾板(Whatman Polyfitronics，Kent，UK)過濾。用75mM正磷酸洗3次后，將濾板干燥，摻加閃爍劑，在閃爍記數(shù)器(TopCount，Packard Instruments，Pangboume，Berks，UK)上測定放射活性。
在組蛋白3(Histone 3)中混合放射標(biāo)記的磷酸鹽，如所述的，可測定PKCα激酶的活性。該反應(yīng)混合物(總體積65μl)有組成是50mM Tris-HCl，1mM乙酸鈣，3mM DTT，0.03mg/ml磷脂酰絲氨酸，2.4μg/ml PMA，0.04％NP40，12mM Mg/Cl，純的PKCα-100ng，Histone 3，0.2mg/ml，100μM ATP，0.2μCi[γ-32P]-ATP。該反應(yīng)在微板振蕩器中在37℃下進(jìn)行15分鐘然后加10μl 75mM正磷酸并將該板置于冰上使反應(yīng)終止。將50μl反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到P81濾板上并在洗出游離的放射性磷酸鹽(每孔用200μl 75mM正磷酸洗3次)，將50μl of閃爍液(Microscint 40)加到每個孔中，在閃爍記數(shù)器(TopCount，HP)上測定放射活性。
在所述這些測定中用的CDK2和/或PKC可以從現(xiàn)有的貨源中得到或者通過如所述的重組方法制備。His-標(biāo)記的CDK2/Cyclin E和CDK1/Cyclin B可以共同表達(dá)而PKCα可以單獨表達(dá)在被適當(dāng)?shù)臈U狀病毒構(gòu)體感染的Sf9昆蟲細(xì)胞中。收獲通過低速離心感染兩天后的細(xì)胞，并通過金屬螯合物色譜從昆蟲細(xì)胞沉淀物中純化蛋白。簡單地說，該昆蟲細(xì)胞沉淀物通過超聲處理在緩沖液A中被溶胞，該緩沖液A的組成是10mM Tris-HCl，pH8.0，150mMNaCl，0.02％NP40 and 5mM β-巰基乙醇，1mM NaF，1mM Na3VO4和含AEBSF的蛋白酶抑制劑混合物(Sigma)，抑胃酶肽A，E 64，苯丁抑制素，亮抑蛋白酶肽。離心清除可溶的部分并將其載在Ni-NTA-Agarose(Quiagen)上。用300mM NaCl，5-15mM咪唑緩沖液A洗出未結(jié)合的蛋白，而結(jié)合的蛋白則用250mM咪唑緩沖液A洗脫。該純的蛋白對著等分的和貯存在-70℃下的貯存緩沖液(Storage buffer)(20mM HEPES pH7.4，50mM NaCl，2mMDTT，1mM EDTA，1mM EGTA，0.02％NP40，10％v/v Glycerol)被完全透析。PKC-α-6 x His可用同樣方法純化，但要用不同的緩沖液-50mM NaH2PO4，pH8.0和0.05％Triton X-100w分別代替Tris和NP40。
下面表1的結(jié)果顯示，本發(fā)明的化合物對于CDKs的抑制作用具有高度的選擇性。
表1激酶測定IC50(μM)化合物 CDK1/ CDK2/cyclinECDK4/ERK-2PKCa SAPK2aS6CyclinB cyclinD12-[N-(4-氯苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)- ＞20 9±12 0.5±0.5 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20嘧啶胺2-[N-(3-硝基苯基)]4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)- 0.1 0.17±0.06 0.19±0.14 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20嘧啶胺2-[N-(4-氟苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)- 0.2 0.019±0.0040.47±0.14 2.5 ＞20 ＞20 1嘧啶胺對CDK2/cyclin E抑制作用的其它結(jié)果表示在以下表2。
表2
實施例24所選化合物的抗增殖活性使用一長列各種不同的人腫瘤細(xì)胞系對從上面實施例選擇的化合物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞增殖測定。進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)的72-h MTT(噻唑蘭；3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物)測定(Haselsberger，K.；Peterson，D.C.；Thomas，D.G.；Darling，J.L.Anti Cancer Drugs 1996，7，331-8；Loveland，B.E.；Johns，T.G.；Mackay，I.R.；Vaillant，F(xiàn).；Wang，Z.X.；Hertzog，P.J.BiochemistryInternational 1992，27，501-10)。人腫瘤細(xì)胞系是從ATCC(American TypeCulture Collection，10801 University Boulevard，Manessas，VA 20110-2209，USA)得到。
下面表3說明了本發(fā)明所述化合物的抗增殖活性。表372-h細(xì)胞毒性IC50(μM)化合物A549Saos-2 MCF-7 AGS DU145 HeLa2-[N-(3-硝基苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)- 1.5±0.31.4±0.3 1.7±0.1 1.0± 0.2 1.0± 0.1 1.2±0.2嘧啶胺2-[N-(4-氟苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)- 5.4±0.48.5±1.6 9.9±0.4 4.2±0.34.3±0.23.2±0.8嘧啶胺使用A549細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞毒性測定的其它數(shù)據(jù)在表4中表示。表4
下列實驗表明了某些化合物誘導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞中的細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞程序死亡的能力實施例25在人腫瘤細(xì)胞中有絲分裂停滯和細(xì)胞程序死亡的誘導(dǎo)人的骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)用1μM的化合物28處理48h。用相差顯微鏡(圖1)觀察有絲分裂細(xì)胞的積累和細(xì)胞程序死亡的出現(xiàn)?；衔?8誘發(fā)的有絲分裂細(xì)胞的積累用有絲分裂指數(shù)的HitKit(Cellomix)進(jìn)一步加以定量。實施例26用有絲分裂指數(shù)的HitKit(Cellomix)研究了化合物28對有絲分裂指數(shù)的影響。用長春花堿作為實驗的對照。按絲分裂指數(shù)的HitKit中的指示來制備A549細(xì)胞的板，得到的結(jié)果在圖3和4中表示。實施例27圖5表示化合物28對有絲分裂指數(shù)的影響。圖5中的數(shù)據(jù)是在每一孔的6個場中所觀察到的，它們表明了受試化合物對于有絲分裂細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)的影響?；衔?8使該有絲分裂細(xì)胞百分?jǐn)?shù)從在未處理孔中樣品的2.6％(未表示出數(shù)據(jù))提高到在4.4μM濃度時的最大值17％。在這個濃度以上觀察到有絲分裂細(xì)胞數(shù)量增加，這與細(xì)胞總數(shù)增加有關(guān)。這表明了發(fā)生了毒性，也表明了這些細(xì)胞正在從板底脫離。長春花堿在22nM濃度下使有絲分裂細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加到31％同時在此濃度以上又出現(xiàn)了毒性。實施例28除了誘發(fā)細(xì)胞程序死亡之外，本發(fā)明的某些化合物能使誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡的形式易于從形態(tài)學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)上與細(xì)胞程序死亡加以區(qū)別?；衔?8以細(xì)胞質(zhì)空胞化為特征的誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡表示在圖6。將人的肺癌細(xì)胞(A549)用10μM的化合物28處理16h。在經(jīng)過處理的細(xì)胞(A)中觀察到大范圍的細(xì)胞質(zhì)空胞化現(xiàn)象，而在對照細(xì)胞(B)中沒有觀察到。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中X1是CH和X2是S；或X1和X2之一是S，而X1和X2之另一是N；Z是NH，NHCO，NHSO2，NHCH2，CH2，CH2CH2，或CH＝CH；R1，R2，和R3各自是H，烷基，芳基，芳烷基，雜環(huán)基，鹵素，NO2，CN，OH，烷氧基，芳氧基，NH2，NH-R’，N-(R’)(R”)，NH-COR’，NH-芳基，N-(芳基)2，COOH，COO-R’，COO-芳基，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，CONH-芳基，CON-(芳基)2，SO3H，SO2NH2，CF3，CO-R’，或CO-芳基，其中烷基，芳基，芳烷基，雜環(huán)基和NH-芳基基團(tuán)可以進(jìn)一步被一個或多個選自鹵素，NO2，CN，OH，O-甲基，NH2，COOH，CONH2和CF3的基團(tuán)取代；當(dāng)X1或X2都是S時，R1和R2中至少一個不是H；R4，R5，R6，R7，和R8各自是H，取代或不取代的低級烷基，鹵代基，NO2，CN，OH，取代或不取代的低級烷氧基，NH2，NH-R’，烷基-芳基，烷基-雜芳基，NH(C＝NH)NH2，N(R’)3+，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，CF3或(CH2)nO(CH2)nO(CH2)mNR’R”，(CH2)nCO2(CH2)mOR其中n是0，1，2或3，m是1，2或3；其中R’，R”和R各自是烷基基團(tuán)，它們可以相同或不同。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中-X1和X2分別是S和N，或者分別是CH和S；-R1，R2和R3各自是選自H，烷基，芳基，芳烷基，鹵代基，NO2，CN，OH，烷氧基，芳氧基，NH2，NHCOR’，NHCOR’，NH-芳基，NH-R’，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，CF3，和CO-R’其中烷基，芳基，NH-芳基和芳烷基基團(tuán)可以進(jìn)一步被一個或多個選自鹵代基，NO2，CN，OH，O-甲基，NH2，COOH，CONH2和CF3取代；-Z是選自N，NHSO2和NHCH2；-R4-R8是各自選自H，OH，鹵代基，硝基，氨基，烷氧基，氨基甲?；?，氨磺?；?，C1-4烷基，取代的C1-4烷基，COOH，COOR’，CN，CF3，(CH2)nO(CH2)mNR’R”，烷基-芳基，烷基-雜芳基，NH(C＝NH)NH2，N(R’)3+，N(R’)(R”)和(CH2)nCO2(CH2)mOR。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中X1和X2分別是S和N。
4.前面任一權(quán)利要求的化合物，其中Z是NH，R3是H。
5.前面任一權(quán)利要求的化合物，其中R1和R2各自是一個或多個以下基團(tuán)鹵代基，C1-4烷基，H，aryl，雜環(huán)基或NH(R’)。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中R1和R2兩者均是氯或甲基。
7.前面任一權(quán)利要求的化合物，其中R3是選自H，芳基，取代的芳基，鹵素，C1-4烷氧基和OH。
8.前面任一權(quán)利要求的化合物，其中R4-R8各自選自F，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，COOH，COOR’，CN，H，C1-4烷基，C1-4烷氧基，CH2CO2CH2CH2OMe，NH(C＝NH)NH2，和O2CH2CH2OMe，CH2OCH2CH2NEt2，CH2-雜芳基，NMe3+，NMe2。
9.前面任一權(quán)利要求的一種化合物，選自(a)2-[N-(苯基)]-4-(2，4-二甲基噻唑-5-基)嘧啶胺，其中苯基是在2-，3-或4-位上被至少一個以下基團(tuán)取代的Me，F(xiàn)，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，CN，COOH，CH2OH，COOMe，COOEt，NH(C＝NH)NH2，CH2CO2CH2CH2OMe，CH2-吡啶基，CH2OCH2CH2NEt2，CO2CH2CH2OMe，NMe3+和NMe2；(b)2-[N-(苯基)]-4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)嘧啶胺，其中苯基在2-，3-，或4-位被至少一個F，NO2，OH，Cl，或OMe取代；(c)2-[N-(苯基)]-4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)嘧啶胺，其中苯基在2-，3-，或4-位被至少一個F，NO2，OH，Cl，或OMe取代；和(d)2-[N-(苯基)]-4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)嘧啶胺，其中苯基在2-，3-或4-位被至少一個F，OH，I，NO2，Cl，COOR’，Br，OMe或CF3取代。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中-對于基團(tuán)(a)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被F，NH2，NO2，OH，Cl，Br，I，CF3，OMe，CN，CH2OH，COOH，COOMe，COOEt，CH2CO2CH2CH2OMe或CO2CH2CH2OMe單取代，或者是被2，4-二氟，3，5-二氟，3，4-二氟，2，4-二氟，3，5-二氯，3，4-二氯，4-羥基-2-硝基，4-羥基-3-硝基，6-氯-3-羧基，4-氯-3-羧基，6-氯-2-羧基，2-氟-4-碘代，2-羥基-4-甲氧基，3-氯-4-碘代，3-氯4-羥基，3-氯-4-甲基，3-氯-4-甲氧基，4-氟-3-硝基，6-氯-3-甲氧基羰基，3-氯-4-甲氧基羰基，3-氯-4-乙氧基羰基，2-羥基-4-甲氧基，2-氯-5-甲氧基羰基，4-氯-3-甲氧基羰基，6-氯-3-(CO2CH2CH2OMe)，3-氯-4-(CO2CH2CH2OMe)，4-氯-3-三氟甲基，或3-(CO2CH2CH2OMe)-4-氟代基二取代。-對于基團(tuán)(b)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯或硝基單取代的。-對于基團(tuán)(c)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯單取代的。-對于基團(tuán)(d)，該苯基在2-，3-或4-的任一位上是被氯，溴，碘，氯，OH，硝基，CF3或OMe單取代的，或者是被4-羥基-3-硝基，3-氯-4-乙氧基羰基，3，4-二氟，2，4-二氟，4-氯-3-三氟甲基或4-氟-3-硝基二取代的。
11.權(quán)利要求9的化合物，其中基團(tuán)(a)的苯基是被Br，I或CF3單取代的。
12.權(quán)利要求1的化合物，選自4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-2-苯基-嘧啶，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)嘧啶-2-基]-(2-硝基-苯基)-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-噻啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-噻啶-2-基]-胺，(3，5-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-噻啶-2-基]-胺，(2，4-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-噻啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(2-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-吡啶-2-基-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-苯基)-胺，(3，4-三氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-甲氧基-苯基)-胺，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺，4-氯-N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]苯磺酰胺，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-4-硝基-苯磺酰胺，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1-1，3-二胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-氯-4-甲基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，[4-溴-6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-苯酚，[4-(4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，(4-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[2-氨基-6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，2-氯-4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，2-氯-4-[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，2-氯-5-[3-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-苯基氨基]-苯甲酸，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，3-氯-2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-4-碘-苯基)-胺，2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-甲氧基-苯酚，(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，2-氯-4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氟-3-硝基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-{4-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基氨基}-苯酚，N-{5-[2-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-4-甲基-噻唑-2-基}-乙酰胺，(4-氟-苯基)-{4-[2-(4-硝基-苯基氨基)-噻唑-5-基]-嘧啶-2-基}-胺，4-[4-(2-氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-胍，{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-甲醇，[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)-胺，[3-(2-二乙基氨基-乙氧基甲基)-苯基]-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，N，N-二甲基-N′-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺，和{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-三甲基-銨。
13.前面任一權(quán)利要求的化合物，選自(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，5-氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-硝基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-氟-苯基)-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-甲氧基-苯基)-胺，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，N-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，3-二胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-芐腈，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-氯-4-甲基-苯基)-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-4-甲氧基-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸，[4-溴-6-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，4-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-硝基-苯酚，2-氯-4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2-乙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-氟-苯基)-胺，(3-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2-烯丙基氨基-4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，3-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-溴-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-苯甲酸-2-甲氧基-乙酯，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3，5-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-甲氧基-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-5-甲氧基-苯酚，(3-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，N-{3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-胍，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-吡啶-4-基甲基-苯基)-胺，N，N-二甲基-N′-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-苯-1，4-二胺，{4-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯基}-三甲基-銨。
14.權(quán)利要求13的化合物，選自[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺，(4-溴-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯酚，(4-氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺。
15.權(quán)利要求12的化合物，選自(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3-氯-苯基)-[4-(2，5-二氯-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2-氯-苯基)-[4-(2，5-二甲基-噻吩-3-基)-嘧啶-2-基]-胺，(3，5-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(3-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-三氟甲基-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-碘-苯基)-胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺，N-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-3-硝基-苯磺酰胺，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-苯基-嘧啶-2-基]-(3-硝基-苯基)-胺，(3，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-苯基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(4-氯-苯基)-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-6-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-胺，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-2，6-二甲氧基-苯酚，4-[6-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-2-(4-氟-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-苯酚，2-氯-5-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，3-氯-2-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸乙酯，[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(2-氟-4-碘-苯基)-胺，(3-氯-4-碘-苯基)-[4-(2，4-甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，4-氯-3-[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基氨基]-苯甲酸甲酯，(3-碘-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺，(2，4-二氟-苯基)-[4-(4-甲基-2-甲基氨基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-胺。
16.權(quán)利要求15的化合物，它是[4-(2，4-二甲基-噻唑-5-基)-嘧啶-2-基]-(4-碘-苯基)-胺。
17.藥物組合物，含有權(quán)利要求1至12的任一項的化合物或其藥用可接受的鹽與藥用可接受的賦型劑。
18.權(quán)利要求17的藥物組合物，還含一種或多種抗癌劑。
19.權(quán)利要求1-16的任一項中所定義的一種或多種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療增殖性疾病中的用途。
20.權(quán)利要求19的用途，其中增殖性疾病是癌癥或白血病。
21.權(quán)利要求19或20的用途，其中所述的一種或多種化合物是按足以抑制至少一種CDK酶的量施用。
22.權(quán)利要求21的用途，其中CDK酶是CDK2和/或CDK4。
23.下式的一種或多種化合物的用途或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療增殖性疾病的藥物中的用途， 其中X1是CH和X2是S；或X1和X2之一是S，而X1和X2之另一是N；Z是NH，NHCO，NHSO2，NHCH2，CH2，CH2CH2，或CH＝CH；R1，R2，和R3各自是H，烷基，芳基，芳烷基，雜環(huán)基，鹵素，NO2，CN，OH，烷氧基，芳氧基，NH2，NH-R’，N-(R’)(R”)，NH-芳基，N-(芳基)2，COOH，COO-R’，COO-芳基，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，CONH-芳基，CON-(芳基)2，SO3H，SO2NH2，CF3，CO-R’，或CO-芳基，其中烷基，芳基，芳烷基和雜環(huán)基團(tuán)可以進(jìn)一步被一個或多個選自鹵素，NO2，CN，OH，O-甲基，NH2，COOH，CONH2和CF3的基團(tuán)取代；R4，R5，R6，R7，和R8各自是H，取代或不取代的低級烷基，鹵素，NO2，CN，OH，取代或不取代的烷氧基，NH2，NH-R’，N-(R’)(R”)，COOH，COO-R’，CONH2，CONH-R’，CON-(R’)(R”)，SO3H，SO2NH2，或CF3，但除了當(dāng)R5，R6和R7都是甲氧基以及R4和R8都是氫之外或者當(dāng)R6和R7都是甲氧基以及R4，R5和R8都是氫之外；其中R’和R”各自是烷基，它們可以相同或不同。
24.權(quán)利要求23的用途，其中該化合物是權(quán)利要求2-12的任一項中所定義的。
25.權(quán)利要求19-24的任一項的用途，其中所述的化合物是與一種或多種其它抗癌化合物聯(lián)合施用的。
全文摘要
本發(fā)明涉及2－取代的4－雜芳基－嘧啶(圖1)，其中X
文檔編號A61P35/00GK1420884SQ01807419
公開日2003年5月28日 申請日期2001年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月29日
發(fā)明者彼得·M·費希爾, 王淑東 申請人:西克拉塞爾有限公司