密度是否符合標(biāo)準(zhǔn)。
[0086] 結(jié)果如表3所示，混合液中乙酸、丙酸和丁酸的RSD值分別為1. 1%，0.9%和 1.3%，說明儀器精密度良好。
[0087] 表3、精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0090] 4、回收率實(shí)驗(yàn)
[0091] 分別準(zhǔn)確量取乙酸標(biāo)準(zhǔn)品、丙酸標(biāo)準(zhǔn)品和丁酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，置于IOmL容量瓶中， 分別配制已知濃度的乙酸、丙酸和丁酸混合液（原有量），每種物質(zhì)均為三個(gè)濃度（表4)。 向上述已知濃度的乙酸、丙酸和丁酸混合液中加入已知量的乙酸、丙酸和丁酸（加入量）， 得到待測(cè)的乙酸、丙酸和待丁酸混合液。將待測(cè)的乙酸、丙酸和丁酸混合液進(jìn)樣測(cè)定，利用 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算三種物質(zhì)的含量（測(cè)得量），回收率=測(cè)得量/(原有量+加入量）。在步 驟1的色譜條件下測(cè)定峰面積，根據(jù)步驟2建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各物質(zhì)含量，計(jì)算回收率。
[0092] 結(jié)果如表4所示，各物質(zhì)加樣回收率均在96%以上，測(cè)定三種揮發(fā)性脂肪酸的方 法能夠?qū)σ宜?、丙酸和丁酸的含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。
[0093] 表4、回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0094]
[0095] 5、山羊瘤胃液中乙酸、丙酸和丁酸含量的測(cè)定
[0096] 將山羊瘤胃液在4°C，4000rpm條件下離心10min，得到山羊瘤胃液上樣液，在步驟 1的色譜條件下依次測(cè)定試驗(yàn)期間對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的山羊瘤胃液中的乙酸、丙酸和丁酸的 含量。
[0097] 表5為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的山羊瘤胃液中的乙酸含量測(cè)定結(jié)果，兩組山羊瘤胃液中 乙酸含量均呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì)，但實(shí)驗(yàn)組山羊瘤胃液中的乙酸含量增速較快。在微生態(tài) 制劑灌胃4d后，實(shí)驗(yàn)組瘤胃液中乙酸的含量已顯著多于對(duì)照組（t = 9. 281，P〈0. 05);之后 兩組山羊瘤胃液中乙酸的含量一直差異顯著（P〈〇. 05)。
[0098] 表5、飼喂型微生態(tài)制劑對(duì)山羊瘤胃液中乙酸含量的影響（孓土g，yg/mL)
[0101] 表6為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的山羊瘤胃液中的丙酸含量測(cè)定結(jié)果，兩組山羊瘤胃液中 丙酸含量均呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì)，但實(shí)驗(yàn)組山羊瘤胃液中的丙酸含量增速較快。在微生態(tài) 制劑灌胃2d后，實(shí)驗(yàn)組山羊瘤胃液中的丙酸含量已顯著多于對(duì)照組（t = 5. 574，P〈0. 05); 之后兩組山羊瘤胃液中的丙酸含量一直差異顯著（P〈〇. 05)。
[0102] 表6、飼喂型微生態(tài)制劑對(duì)山羊瘤胃液中丙酸含量的影響G ±s,yg/mL)
[0103]
[0104] 表7為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的山羊瘤胃液中的丁酸含量測(cè)定結(jié)果，兩組山羊瘤胃液中 丁酸含量均呈現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì)，但實(shí)驗(yàn)組山羊瘤胃液中的丁酸含量增速較快。在微生態(tài) 制劑灌胃2d后，實(shí)驗(yàn)組山羊瘤胃液中的丁酸含量已顯著多于對(duì)照組（t = 5. 568，P〈0. 05); 之后兩組山羊瘤胃液中的丁酸含量一直差異顯著（P〈〇. 05)。
[0105] 表7、飼喂型微生態(tài)制劑對(duì)山羊瘤胃液中丁酸含量的影響G±s, iig/mL)
[0106]
[0107] 實(shí)施例3、實(shí)施例1的飼喂型微生態(tài)制劑的制備條件的優(yōu)化
[0108] 微球特性考察：分別在各菌株微球制備完成時(shí)，制備后常溫放置1個(gè)月，2個(gè)月后 進(jìn)行載菌量測(cè)定。稱取Ig微球，置滅菌蒸餾水中攪拌，用濾紙過濾，取上清液進(jìn)行活菌數(shù)測(cè) 定，即為表面含菌量。取等量微球，放于滅菌蒸餾水中破碎，37°C恒溫振蕩24h后，用濾紙過 濾，取上清液進(jìn)行活菌數(shù)測(cè)定，即為總菌量，載菌量=總菌量-表面菌量。
[0109] -、單因素考察對(duì)各菌株微球載菌量的影響
[0110] 選用干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)ACCC10640,熱帶假絲酵母（Candida tropicalis)ACCC21161 和枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)ACCC02157 用于微生態(tài)制劑 的制備。
[0111] 下述實(shí)驗(yàn)中的干酪乳桿菌的液體菌種制備方法如下：用發(fā)酵培養(yǎng)基A在35-37°C 培養(yǎng)46h-54h得到的培養(yǎng)物（培養(yǎng)容器內(nèi)的所有物質(zhì)）。具體制備方法如下：將活化好的干 酪乳桿菌接種于裝有IOOmL的發(fā)酵培養(yǎng)基A的500mL三角瓶中，35-37°C、搖床160rpm(旋 轉(zhuǎn)半徑20mm)培養(yǎng)48小時(shí)，三角瓶?jī)?nèi)的所有物質(zhì)（培養(yǎng)物）即為干酪乳桿菌的液體菌種。 該干酪乳桿菌的液體菌種中干酪乳桿菌含量為8. 6X 109cfu/mL。
[0112] 下述實(shí)驗(yàn)中的熱帶假絲酵母的液體菌種制備方法如下：用發(fā)酵培養(yǎng)基A在 28-30°C培養(yǎng)32h-40h得到的培養(yǎng)物（培養(yǎng)容器內(nèi)的所有物質(zhì)）。具體制備方法如下：將 活化好的熱帶假絲酵母接種于裝有IOOmL的發(fā)酵培養(yǎng)基A的500mL三角瓶中，28-30°C、 180rpm(旋轉(zhuǎn)半徑20mm)振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，三角瓶?jī)?nèi)的所有物質(zhì)（培養(yǎng)物）即為熱帶假絲 酵母的液體菌種。該熱帶假絲酵母的液體菌種中熱帶假絲酵母含量為7. 8X lO^cfu/mL。
[0113] 下述實(shí)驗(yàn)中的枯草芽孢桿菌的液體菌種制備方法如下：用發(fā)酵培養(yǎng)基A在 30-32°C培養(yǎng)18h-24h得到的培養(yǎng)物（培養(yǎng)容器內(nèi)的所有物質(zhì)）。具體制備方法如下：將 活化好的枯草芽孢桿菌接種于裝有IOOmL的發(fā)酵培養(yǎng)基A的500mL三角瓶中，30-32°C、 180rpm(旋轉(zhuǎn)半徑20mm)振蕩培養(yǎng)20小時(shí)，三角瓶?jī)?nèi)的所有物質(zhì)（培養(yǎng)物）即為枯草芽孢 桿菌菌液。該枯草芽孢桿菌菌液中枯草芽孢桿菌含量為9. 6X 109cfu/mL。
[0114] 每升發(fā)酵培養(yǎng)基A按照如下方法配制：10g葡萄糖，IOg蛋白胨，I. 5g KH2P04、0. 80g MnSO4U. OOg MgSO4U. Og NaCl，用蒸餾水定容至 1000mL，pH 值 6. 5 ;121°C條件下滅菌 20 分 鐘。
[0115] 海藻酸鈉水溶液：將IOg海藻酸鈉加入去離子水中，配置成濃度為l〇g/L的海藻 酸鈉水溶液；將15g海藻酸鈉加入去離子水中，配置成濃度為15g/L的海藻酸鈉水溶液；將 2〇g海藻酸鈉加入去離子水中，配置成濃度為20g/L的海藻酸鈉水溶液；將30g海藻酸鈉加 入去離子水中，配置成濃度為30g/L的海藻酸鈉水溶液。
[0116] 氯化鈣-殼聚糖液體：向pH值為4的醋酸溶液加入適量氯化鈣溶解，然后稱取一 定量的殼聚糖溶解即得到氯化鈣-殼聚糖液體。氯化鈣-殼聚糖液體中的氯化鈣濃度可為 40g/L、50g/L、60g/L、80g/L或 100g/L;殼聚糖的濃度為 10g/L。
[0117] 向海藻酸鈉膠體溶液中加入液體菌種，得到菌種-海藻酸鈉液體（以下簡(jiǎn)稱A 液），將菌種-海藻酸鈉液體4°C靜置24h除去氣泡。用注射器將菌種-海藻酸鈉液體滴加 到氯化鈣-殼聚糖液體（以下簡(jiǎn)稱B液）中，并以600r^min1速度攪拌一定時(shí)間使殼聚糖 和海藻酸鈉發(fā)生膠核反應(yīng)形成微球。當(dāng)液體菌種的活性成分為干酪乳桿菌時(shí)，得到干酪乳 桿菌微球（干酪乳桿菌菌劑）；當(dāng)液體菌種的活性成分為熱帶假絲酵母時(shí)，得到熱帶假絲酵 母微球（熱帶假絲酵母菌劑）；當(dāng)液體菌種的活性成分為枯草芽孢桿菌時(shí)，得到枯草芽孢桿 菌微球（枯草芽孢桿菌菌劑）。
[0118] 1、海藻酸鈉濃度對(duì)各菌株微球載菌量的影響
[0119] 每種菌液加入量固定為海藻酸鈉膠體溶液體積的5 %，A液和B液的體積比固定為 2:1，B液中氯化鈣濃度固定為50g/L，反應(yīng)時(shí)間為20min，分別考察海藻酸鈉膠體溶液中海 藻酸鈉濃度分別為l〇g/L、15g/L、20g/L和30g/L時(shí)對(duì)各菌株微球載菌量形成的影響。
[0120] 結(jié)果如表8所示，隨著海藻酸鈉膠體溶液中海藻酸鈉濃度的增加，三種菌株微球 的載菌量均呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，三種菌株微球均在海藻酸鈉濃度為20g/L時(shí)載菌 量最大，干酪乳桿菌微球?yàn)?. 8X105cfu/g微球，熱帶假絲酵母微球?yàn)?. 2X104cfu/g微球， 枯草芽孢桿菌微球?yàn)?. 2X105cfu/g微球。當(dāng)海藻酸鈉濃度低時(shí)微球機(jī)械強(qiáng)度較差，在攪 拌過程中容易破裂而使包裹的菌株流失；而當(dāng)海藻酸鈉濃度過高時(shí)，黏度也隨之增加，攪拌 過程中不同微球相互碰撞粘連，在外力進(jìn)行分開時(shí)引起微球破裂，也會(huì)影響載菌量。
[0121] 表8、海藻酸鈉濃度對(duì)各菌株微球載菌量的影響
[0122]
[0123] 2、氯化鈣濃度對(duì)各菌株微球載菌量的影響
[0124] 海藻酸鈉膠體溶液中海藻酸鈉濃度固定在20g/L，每種菌液加入量固定為海藻酸 鈉膠體溶液體積的5%，A液和B液的體積比固定為2:1，反應(yīng)時(shí)間為20min，分別考察B液 中氯化鈣濃度為40g/L，60g/L、80g/L和100g/L時(shí)對(duì)各菌株微球載菌量形成