專利名稱：一種營養(yǎng)液的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于工業(yè)發(fā)酵的一種方法，特別是關(guān)于利用假單孢菌屬的一種命名為YZH菌的菌株作為生產(chǎn)菌株進行工業(yè)發(fā)酵來生產(chǎn)單細胞蛋白營養(yǎng)液的方法。
在當今世界，人們通過各種嘗試采用生物發(fā)酵方法生產(chǎn)單細胞蛋白取得成功。楊振華利用具有特殊功能的851R菌及設(shè)計出適合于該菌生長的以大豆為主要原料的培養(yǎng)基，運用常規(guī)的工業(yè)發(fā)酵的生產(chǎn)方法生產(chǎn)出851R型超級營養(yǎng)液。大豆是蛋白質(zhì)豐富的食物，但由于大豆中含有蛋白酶抑制劑，所以大豆蛋白很難被人體全部吸收，然而，大豆蛋白經(jīng)過851R菌利用后，轉(zhuǎn)化為單細胞蛋白營養(yǎng)液，不但成為易被人體吸收的蛋白源，而且該營養(yǎng)液具有健全中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機體免疫功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功效，該營養(yǎng)液對癌細胞的生長有某些抑制作用。(中國發(fā)明專利申請?zhí)?8107615.5，1988年10月31日)。
本發(fā)明的目的是通過具有特殊功能的YZH菌使用適合于該菌生長的含氮源培養(yǎng)基，以達到用YZH菌作為生產(chǎn)菌株，運用常規(guī)的工業(yè)發(fā)酵的生產(chǎn)方法生產(chǎn)出Y型營養(yǎng)液，以及運用多種離子交換樹脂、有機溶劑提取濃縮發(fā)酵液中有效營養(yǎng)成分。用YZH菌生產(chǎn)出的Y型營養(yǎng)液不僅具有健全中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機體免疫功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功效，而且對癌細胞有明顯的抑制與殺傷作用，甚至還能使癌細胞逆轉(zhuǎn)為正常細胞。
本發(fā)明所涉及的微生物是假單孢菌屬變異菌YZH菌，其主要特征為菌體極端鞭毛，鞭毛數(shù)1～2根，該菌體內(nèi)含有YZH片段，可用已克隆的YZH片段運用DNA分子雜交技術(shù)可檢測出該片段的存在(該菌種已送交武漢中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號為CCTCCNo.M89049)。
在本發(fā)明所設(shè)計或使用的含氮源培養(yǎng)基中，用YZH菌作為生產(chǎn)菌種，可生產(chǎn)出富含多糖、多肽、雙糖、低聚糖、Y因子、多種微量元素及維生素的單細胞蛋白營養(yǎng)液。該營養(yǎng)液中含有二十余種氨基酸。每100毫升這種營養(yǎng)液中含有氨基酸350～800毫克，維生素E0.2～0.5mg，維生素B20.05～0.1mg，維生素PP0.7～1.0mg，硒0.04～0.08mg，鋅0.2～0.5mg，鉬0.08～0.24mg，鈷0.08～0.24mg，錳0.05～0.06，銅0.07～0.2mg，鐵0.1～0.7mg等。干物質(zhì)1.21～1.38g，蛋白質(zhì)1.21～2.2g，脂肪0.11～0.13g，脂肪酸中肉豆蔻7.1～8.3%，棕櫚14.3～15.8%，硬脂74.4～75.5%，油酸0.1～0.8%。
本發(fā)明所設(shè)計及使用的培養(yǎng)基為1.含氮源培養(yǎng)基大豆粉5～10%或豆?jié){(以大豆量計)5～15%或牛肉湯5～15%酵母膏0.02～0.15%或酵母粉0.02～0.3%或蛋白胨、牛肉膏0.02～0.4%碳酸鈣0.05～0.25%磷酸氫二鉀0.02～0.1%硫酸鎂0.01～0.05%氯化鈉0.01～0.04%鉬酸鈉5.0～30ppm亞硒酸鈉2.5～15ppm硫酸鋅2.5～40ppm氯化鈷5～20ppm
還可以增加其他人體必需的微量元素，其限度為1.5～100ppm，也可增加苯甲酸或苯甲酸鈉。
2.1640培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的1640培養(yǎng)基也適用于YZH菌的生長。
該菌種可以用一般發(fā)酵工業(yè)中的發(fā)酵罐進行通氣培養(yǎng)，這種罐它帶有攪拌和通氣裝置，可以依需要對所培養(yǎng)的培養(yǎng)物進行攪拌，使其所處的條件一致，也可以按需要通入經(jīng)過濾的無菌空氣，以滿足細菌等微生物在發(fā)酵過程中對氧氣的需要。將YZH菌作為生產(chǎn)菌株，經(jīng)過在種子培養(yǎng)基(本發(fā)明所設(shè)計和或使用的培養(yǎng)基)中繁殖。即由小種、中種到大種的繁殖培養(yǎng)，再接種到裝有預(yù)先經(jīng)過消毒滅菌的生產(chǎn)用培養(yǎng)基(本發(fā)明所設(shè)計和/或使用的培養(yǎng)基)中培養(yǎng)24～72小時，在培養(yǎng)過程中通入過濾的無菌空氣，通氣量為1∶0.6～1.2，攪拌速度180～260轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度28～38℃，培養(yǎng)結(jié)束后經(jīng)高溫滅菌收獲培養(yǎng)液。培養(yǎng)液可直接分裝而成產(chǎn)品，也可采用乙醇、醋酸乙酯、丙酮等有機溶劑及大孔樹脂柱、717陰離子交換柱等樹脂柱對發(fā)酵的培養(yǎng)液進行提取、萃取及吸附有效營養(yǎng)成分的方法制成Y型營養(yǎng)液的精萃。
本發(fā)明不限于以下實施例，其保護范圍由權(quán)項要求限定。
實施例1在5噸發(fā)酵罐中培養(yǎng)，種子罐為0.5噸，投料量為40%。采用10%大豆培養(yǎng)基，其中大豆含量為200kg(大豆先經(jīng)過挑選，洗凈，磨成漿，去渣)，酵母膏800g，磷酸氫二鉀1000g，硫酸鎂400g，碳酸鈣5kg，氯化鈉400g，鉬酸鈉20g，亞硒酸鈉5g，硫酸鋅20g，氯化鈷20g，及苯甲酸1kg。接菌量按1%，種子罐為0.5噸，投料為200kg，培養(yǎng)基如上所述量縮小10倍。接菌量1%，(小種→中種→大種，培養(yǎng)24小時作為種子培養(yǎng)物)培養(yǎng)溫度30℃，攪拌速度220轉(zhuǎn)/分，通氣量1∶0.8。種子在種子罐中培養(yǎng)結(jié)束后接入5噸大罐，培養(yǎng)溫度30℃，攪拌速度220轉(zhuǎn)/分，通氣量1∶0.8，培養(yǎng)48小時結(jié)束培養(yǎng)。終止培養(yǎng)后采用高溫滅菌，培養(yǎng)液經(jīng)流水線裝瓶，再經(jīng)高溫高壓滅菌即成為產(chǎn)品。每100毫升培養(yǎng)液中，干物質(zhì)含量為2.2%蛋白質(zhì)含量為1.38%，脂肪含量0.13%，碳水化合物為0.09%及維生素、無機鹽等詳見下表實施例二用實施例一生產(chǎn)所得的培養(yǎng)液，經(jīng)過離心去渣后再裝瓶而成產(chǎn)品。
實施例三用實施例二生產(chǎn)所得離心去渣后的培養(yǎng)液，通過薄膜過濾濃縮后再裝瓶成產(chǎn)品。
實施例四用實施例三生產(chǎn)所得的濃縮培養(yǎng)液，用95%乙醇提取、濃縮成精萃。
實施例五用實施例一生產(chǎn)所得的培養(yǎng)液，用大孔樹脂D4006吸附后用水洗脫，再經(jīng)中性氧氣鋁柱濃縮成產(chǎn)品。
實施例六Y型營養(yǎng)液的上清液對各種離體癌細胞均有較明顯的抑制生長與殺傷作用，甚至對癌細胞有逆轉(zhuǎn)作用，促使癌細胞變成正常細胞。例含20%的Y型營養(yǎng)液的上清液對人胃癌腺細胞MGC803培養(yǎng)12～24小時內(nèi)出現(xiàn)抑制與殺傷效果，沒有被殺傷的癌細胞繼續(xù)培養(yǎng)7～9天內(nèi)逐漸逆轉(zhuǎn)為與正常細胞相似，見以下圖片的說明。


圖1-2相差顯微鏡活細胞觀察，圖1示MGC80-3細胞，圖2為經(jīng)15%"851"處理的MGC80-3細胞形態(tài)。
圖3-6掃描電鏡觀察，示MGC80-3細胞邊緣絲狀偽足增多，表面具有豐富的微絨毛。
圖7-10掃描電鏡觀察，示經(jīng)20%"851"處理的MGC80-3細胞表面微絨毛消失，細胞邊緣有片狀偽足，并出現(xiàn)長胞質(zhì)突起。一些細胞表面有皺痕狀結(jié)構(gòu)及少量小泡狀突起。
圖11-14透射電鏡觀察，示經(jīng)20%"851"處理的MGC80-3細胞中可出現(xiàn)細胞核形規(guī)則(N)，核仁(Nu)縮小，異染色質(zhì)減少，常染色質(zhì)增多，細胞質(zhì)內(nèi)高爾基體(G)，線粒體(M)發(fā)達，粗糙型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(REG)增多等與正常細胞相似的顯著變化。
圖15-18透射電鏡觀察，示經(jīng)20%"851"處理的MGC80-3細胞中可出現(xiàn)細胞核(N)內(nèi)常染色質(zhì)豐富(圖15)，細胞質(zhì)內(nèi)可見環(huán)形辮狀體(圖16)和正常分泌顆粒(圖17SG)，以及發(fā)達的粗糙型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(圖18，RER)等與正常細胞相似的超顯微結(jié)構(gòu)特征。
權(quán)利要求
1.一種利用細菌生產(chǎn)單細胞蛋白營養(yǎng)液的工業(yè)生產(chǎn)方法，其特征是采用假單胞菌屬(pseudomonas)的一株命名為YZH的菌株(CCTCCNO89049)作為生產(chǎn)菌株，在本發(fā)明所設(shè)計的以大豆為主的含氮源培養(yǎng)基或本發(fā)明所使用的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)液，還包括用多種濃縮法精制培養(yǎng)液的方法。
2.如權(quán)利要求1所說的以大豆為主得含氮源培養(yǎng)基，其特征在于含有大豆粉5～10%，或豆?jié){(以大豆量計)5～15%，或牛肉湯5～15%，酵母膏(或酵母粉、蛋白胨、牛肉膏)0.02～0.4%，碳酸鈣0.05～0.25%，磷酸氫二鉀0.02～0.1%，硫酸鎂0.01～0.05%，氯化鈉0.01～0.04%，鉬酸鈉5～30ppm，亞硒酸鈉1.5～15PPM，硫酸鋅2.5～40PPM，氯化鈷5～20PPM，還可以加入適量人體所需的其他微量元素，其限度為1.5～100PPM及苯甲酸或苯甲酸鈉。
全文摘要
應(yīng)用一株命名為YZH菌的菌株，用該株菌作為生產(chǎn)菌株，在本發(fā)明所設(shè)計和使用的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可分別生產(chǎn)出富含多糖、多肽、雙糖、低聚糖、Y因子、多種微量元素及多種維生素的單細胞蛋白的營養(yǎng)液，該營養(yǎng)液對人類不僅具有健全人體免疫、增強代謝的功能，而且對癌細胞有明顯的抑制與殺傷作用，這對于防治人類癌癥有進一步的開發(fā)利用價值。
文檔編號C12N1/00GK1047695SQ89104728
公開日1990年12月12日 申請日期1989年7月17日 優(yōu)先權(quán)日1989年7月17日
發(fā)明者楊振華 申請人:楊振華