本發(fā)明屬于飼料研制及應(yīng)用領(lǐng)域，涉一種水蚤專用高硒飼料及其使用方法。

背景技術(shù)：

水蚤俗稱紅蟲，是禽、畜、魚類的好飼料，不污染水、不得寄生蟲病。其干品含蛋白質(zhì)60.4%、脂肪21.8%、糖1.1%、酪氨酸4.27%、色氨酸3.62%、精氨酸10.92%、組氨酸2.69%、胱氨酸1.17%、蛋氨酸3.45%.還含豐富的維生素和礦物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值優(yōu)于魚粉。水蚤作為魚飼料在很多方面有不可代替性，如，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的鱘魚和鮭魚、革胡子鯰魚、幼魚必須吃水蚤，否則成活率極低；名貴金魚也必須喂蚤，否則易患消化不良病。

水蚤也是實(shí)驗(yàn)室用于環(huán)境檢測(cè)、動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育研究的模式生物之一，水蚤的培養(yǎng)環(huán)境和飼養(yǎng)條件是保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可信性的重要標(biāo)準(zhǔn)。

目前水蚤的培養(yǎng)主要為綠水培養(yǎng)和單獨(dú)的酵母，單獨(dú)的螺旋藻培養(yǎng)，但是池塘水培養(yǎng)的水蚤衛(wèi)生條件無(wú)法確定，單獨(dú)的酵母培養(yǎng)或螺旋藻培養(yǎng)則易爆缸，需定期清理，耗時(shí)耗力。

酵母是一些單細(xì)胞真菌，并非系統(tǒng)演化分類的單元。是子囊菌、擔(dān)子菌等幾科單細(xì)胞真菌的通稱，一般泛指能發(fā)酵糖類的各種單細(xì)胞真菌，可用于釀造生產(chǎn)。酵母含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和酶等生理活性物質(zhì)，醫(yī)藥上將其制成酵母片如食母生片，用于治療因不合理的飲食引起的消化不良癥。

se是動(dòng)物體內(nèi)的必需微量營(yíng)養(yǎng)元素，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（gsh-px）是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶，硒是gsh-px的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。測(cè)定gsh-px的活力可以作為衡量機(jī)體硒水平的一項(xiàng)生化指標(biāo)。超氧化物歧化酶（sod）對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基保護(hù)細(xì)胞免受損傷。通過(guò)測(cè)定機(jī)體內(nèi)的gsh-px與t-sod活性，可以反映機(jī)體細(xì)胞的健康狀態(tài)及抗逆性能力。硒酵母中有機(jī)硒含量較高,是一種比較理想的硒營(yíng)養(yǎng)劑。

研究發(fā)現(xiàn)，水蚤不能直接利用藻類做食物，必須加入酵母幫助其消化藻類食物。李荷超等人利用小球藻酵母粉做到水蚤的規(guī)模化養(yǎng)殖，螺旋藻與其具有相似的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，且培養(yǎng)成本低，生長(zhǎng)周期短，規(guī)?；B(yǎng)殖技術(shù)成熟，目前市場(chǎng)上尚未見(jiàn)到硒酵母螺旋藻飼料的報(bào)道。

鑒于以上分析，本發(fā)明利用硒酵母與螺旋藻以特定比例混合，控制硒含量，得到水蚤專用的硒酵母培養(yǎng)飼料。通過(guò)喂食硒酵母螺旋藻飼料培養(yǎng)出的水蚤可作為餌料喂養(yǎng)出營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的魚蝦類水產(chǎn)品，又可培育出無(wú)污染健康的模式動(dòng)物水蚤用于實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是利用硒酵母螺旋藻飼料培育出高繁殖力，高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，抗逆性強(qiáng)的水蚤，用于水蚤的商業(yè)生產(chǎn)及無(wú)污染健康的模式動(dòng)物水蚤用于實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)研究。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料，其特征在于，制備方法為：

將新鮮螺旋藻與硒酵母粉,以適當(dāng)比例混合后加適量水制成懸浮液，使硒的最終濃度為0.03-0.05ug/ml,螺旋藻0.03-0.05g/ml,即可。

所述的一種高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料，其特征在于，

所述的硒酵母粉中的硒含量為1mg～2.5mg/g。

所述的一種高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料，其特征在于，所述的適量水指的是隔夜自來(lái)水0.8-1.2l。

所述的一種高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料，其特征在于，

新鮮螺旋藻的培養(yǎng)方法：將螺旋藻種投入螺旋藻培養(yǎng)液中培養(yǎng)，接種量v/v為9-11%,溫度24-26℃，光照強(qiáng)度3900-4100lx，培養(yǎng)8-10天后，用濾網(wǎng)撈出1/3左右的螺旋藻，用水沖洗干凈后，即得新鮮螺旋藻備用，剩余的藻液繼續(xù)培養(yǎng)。

所述的高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料的使用方法，其特征在于，取制得的硒酵母螺旋藻飼料懸浮液靜置0.8-1.2小時(shí)，即可加入水蚤進(jìn)行培養(yǎng)。

所述的高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料的使用方法，其特征在于，水蚤進(jìn)行培養(yǎng)后每2天投食一次即可。

水蚤生長(zhǎng)狀態(tài)及抗逆性檢測(cè)

水蚤生長(zhǎng)狀態(tài)可通過(guò)水蚤存活率、胚胎成活率進(jìn)行檢測(cè)。水蚤抗逆性則可通過(guò)gsh-px與t-sod活性測(cè)定來(lái)判斷。

與用池塘水喂養(yǎng)的水蚤相比存活率可提高10%-15%、抱卵率可提高18%-23%、水蚤體內(nèi)gsh-px活性可提高163%-180%、t-sod活性提高83.67%-85.72%。獲得高產(chǎn)水蚤的硒酵母螺旋藻飼料，以便培育出高繁殖力，高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，抗逆性強(qiáng)的水蚤，用于水蚤的商業(yè)生產(chǎn)。

1.水蚤硒酵母-螺旋藻飼料配制

將新鮮螺旋藻與硒酵母粉(硒含量1mg～2.5mg/g),以適當(dāng)比例混合后加隔夜自來(lái)水1l制成懸浮液，使硒的最終濃度為0.04ug/ml,螺旋藻0.04g/ml。

螺旋藻的培養(yǎng)：

將螺旋藻種投入螺旋藻培養(yǎng)液培養(yǎng)，接種量為10%（v/v）、溫度25度、光照強(qiáng)度4000lx培養(yǎng)8-10天后，用濾網(wǎng)撈出1/3螺旋藻，用水沖洗干凈后備用，剩余的藻液繼續(xù)培養(yǎng)。螺旋藻培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：nahco316.8g/l，nano332.5g/l，k2hpo40.5g/l，nacl1.0g/l,naedta0.08g/l，mgso4.7h2oo.2g/l，cacl20.04g/l.

2.水蚤飼養(yǎng)方法

取1制成的硒酵母螺旋藻飼料懸浮液靜止1小時(shí)（避免螺旋藻進(jìn)入水蚤氣管使其窒息死亡），即可加入水蚤進(jìn)行培養(yǎng)，每2天投食一次即可。

3.水蚤存活率檢測(cè)

在5ml螺旋藻懸浮液中加入10只發(fā)育初期水蚤培養(yǎng)32小時(shí)后，記錄其剩余數(shù)目，計(jì)算其存活率。

存活率(%)=剩余水蚤數(shù)/總水蚤數(shù)x100/100。

4.水蚤抱卵率的檢測(cè)

在24孔培養(yǎng)板的每孔中放2只水蚤成熟雌體進(jìn)行培養(yǎng)，等其產(chǎn)卵后，將同一發(fā)育期的水蚤取出后每孔2只放入培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)，以此得到一定數(shù)目同一發(fā)育期的水蚤。

在5ml螺旋藻懸浮液中加入10只同一發(fā)育期水蚤培養(yǎng)48小時(shí)后,取出水蚤于載玻片上，用70%乙醇固定2分鐘，顯微鏡下觀察拍照，觀察其生理狀態(tài)，計(jì)數(shù)小水蚤的個(gè)數(shù)，計(jì)算水蚤抱卵率。

5.gsh-px活性和t-sod活性的測(cè)定

樣品準(zhǔn)備：在24孔培養(yǎng)板的每孔中放2只水蚤成熟雌體進(jìn)行培養(yǎng)，等其產(chǎn)卵后，將同一發(fā)育期的水蚤取出后每孔2只放入培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)，以此得到一定數(shù)目同一發(fā)育期的水蚤。

在5ml螺旋藻懸浮液中加入10只同一發(fā)育期水蚤培養(yǎng)32小時(shí)后，取5只水蚤測(cè)量其濕重后加10倍體積生理鹽水4℃保存。

將4℃保存的樣品在冰浴條件下置于超聲波破碎儀中,調(diào)整探頭位置使之離ep管底lcm,破碎條件為破碎3see、間歇3see,輸出功率為400w,破碎時(shí)間為5min,將破碎完成的樣品置于高速離心機(jī)中13000轉(zhuǎn)離心10min,取上清制備成1%的組織勻漿,用于蛋白含量和gsh-px活性與t-sod活性的測(cè)定。

檢測(cè)方法：以南京建成生物工程研究所研發(fā)的gsh-px活性和t-sod活性測(cè)試盒檢測(cè)步驟進(jìn)行檢測(cè).

本發(fā)明的有益效果為：

與用池塘水培養(yǎng)的水蚤相比，用本專用高硒飼料培養(yǎng)下的水蚤其存活率可提高10%-15%、抱卵率提高18%-23%、水蚤體內(nèi)gsh-px活性提高163%-180%、t-sod活性提高83.67%-85.72%。

而只用螺旋藻-普通酵母培養(yǎng)的水蚤其存活率提高7%-10%、抱卵率提高10%-17%，gsh-px活性降低90.54%-92.36%、t-sod活性提高84.29%-89.15%。

與池塘水喂養(yǎng)的水蚤相比硒的主要作用是提高水蚤的存活率、抱卵率、gsh-px活性、t-sod活性；與酵母加螺旋藻喂養(yǎng)的水蚤相比硒的主要作用是提高水蚤的存活率、抱卵率、gsh-px活性，而對(duì)t-sod活性則無(wú)太大影響。

水蚤俗稱紅蟲，是禽、畜、魚類的好飼料，也是實(shí)驗(yàn)室用于環(huán)境檢測(cè)、動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育研究的模式生物之一。本發(fā)明公開(kāi)了一種水蚤專用高硒飼料配方及其應(yīng)用。與用池塘水培養(yǎng)的水蚤相比，用本專用高硒飼料培養(yǎng)下的水蚤其存活率可提高10%-15%、產(chǎn)卵率提高18%-23%、水蚤體內(nèi)gsh-px活性提高163%-180%、t-sod活性提高83.67%-85.72%。該配方含硒量高，所用原料培養(yǎng)成本低，生長(zhǎng)周期短，規(guī)模化養(yǎng)殖技術(shù)成熟，培養(yǎng)出的水蚤繁殖力、抗逆性強(qiáng)，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，可用于水蚤的商業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為專用高硒飼料喂養(yǎng)的水蚤繁殖狀況圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：中華哲水蚤的硒酵母螺旋藻飼料培養(yǎng)：

將螺旋藻種投入螺旋藻培養(yǎng)液培養(yǎng)，接種量為10%（v/v）,溫度25度，光照強(qiáng)度4000lx培養(yǎng)8天后，取培養(yǎng)的螺旋藻200g，飼料酵母200mg（硒含量為1mg/g),配制培養(yǎng)液5l，加入適量水蚤（硒濃度0.04ug/ml），48小時(shí)后與池塘水培養(yǎng)的水蚤相比其存活率提高12.18%，產(chǎn)卵率提高20.03%，gsh-px活性提高170.26%,t-sod活性提高85.67%。

實(shí)施例2：裸腹水蚤的硒酵母螺旋藻飼料培養(yǎng)

將螺旋藻種投入螺旋藻培養(yǎng)液培養(yǎng)，接種量為10%（v/v）,溫度25度，光照強(qiáng)度4000lx培養(yǎng)8天后，取培養(yǎng)的螺旋藻200g，飼料酵母130mg（硒含量為1.5mg/g),配制培養(yǎng)液5l，加入適量水蚤（硒濃度0.04ug/ml），48小時(shí)后與池塘水培養(yǎng)的水蚤相比其存活率提高10.53%，產(chǎn)卵率18.72%，gsh-px活性提高175.58%，t-s0d活性提高84.15%。

實(shí)施例3：實(shí)驗(yàn)室裸腹水蚤的硒酵母螺旋藻飼料培養(yǎng)

將螺旋藻種投入螺旋藻培養(yǎng)液培養(yǎng)，接種量為10%（v/v）,溫度25度，光照強(qiáng)度4000lx培養(yǎng)8天后，取培養(yǎng)的螺旋藻1g，飼料酵母2.6mg（硒含量為1.5mg/g),配制培養(yǎng)液100ml,加入適量水蚤（硒濃度0.04ug/ml），48小時(shí)后與綠水培養(yǎng)的水蚤相比其存活率提高14.36%，產(chǎn)卵率22.90%，gsh-px活性提高178.64%，t-s0d活性提高87.29%。

實(shí)施例4、一種高產(chǎn)養(yǎng)殖水蚤專用高硒飼料，制備方法為：

將新鮮螺旋藻與硒酵母粉,取培養(yǎng)的螺旋藻1g，飼料硒酵母2.0mg（硒含量為2.0mg/g),配制培養(yǎng)液100ml,加入適量水蚤（硒濃度0.04ug/ml)喂養(yǎng)即可。

如圖1所示為專用高硒飼料喂養(yǎng)的水蚤繁殖狀況圖；

在顯微鏡下觀察到的專用飼料喂養(yǎng)的水蚤，其中a為池塘水培養(yǎng)的水蚤其育兒袋有3只待出生的小水蚤。b為喂食4.0mg/ml酵母螺旋藻培養(yǎng)的水蚤，其其育兒袋有4只待出生的小水蚤.c為喂食本實(shí)施例4所得硒含量為0.04ug/ml，酵母含量為20ug/ml的硒酵母螺旋藻培養(yǎng)的水蚤，可見(jiàn)旁邊有已出生的4只水蚤及育兒袋中待出生的1只水蚤。