一種血細(xì)胞分離管的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種血細(xì)胞分離管，所述分離管由管體、旋蓋、置于管體內(nèi)的細(xì)胞分離隔膜和加樣滑板組成；所述分離管管體是一個(gè)底部為半圓形或圓錐形的離心管，管口處有用于固定所述旋蓋的外螺紋，所述分離隔膜固定在所述分離管內(nèi)接近分離管管底處；所述加樣滑板由一個(gè)圓盤和與所述圓盤邊緣連接的∩型推桿組成，所述推桿的另一端設(shè)有一個(gè)橢圓形的推桿柄，所述圓盤邊緣與所述分離管內(nèi)壁之間有一個(gè)狹窄的環(huán)形間隙。本實(shí)用新型提供的血細(xì)胞分離管通過改變加樣和取樣方式使傳統(tǒng)的、復(fù)雜的加樣模式變成易于操作的方式，使得臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和細(xì)胞生物學(xué)研究中的細(xì)胞分離過程更簡化、操作更容易。
【專利說明】一種血細(xì)胞分離管

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的細(xì)胞分離技術(shù)，具體涉及一種血細(xì)胞分離管，本 實(shí)用新型提供的血細(xì)胞分離管基于細(xì)胞密度梯度離心分離細(xì)胞的原理，通過改變加樣和取 樣方式使傳統(tǒng)的、復(fù)雜的加樣模式變成易于操作的方式。

【背景技術(shù)】
[0002] 在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中，針對(duì)特定細(xì)胞功能和生物學(xué)特性的檢查常常涉及到細(xì)胞的分 離技術(shù)，從外周血液和各種體液（胸水、腹水、心包積液等）中分離單個(gè)核細(xì)胞是體外進(jìn)行 淋巴細(xì)胞免疫學(xué)研究和細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要前處理步驟，分離的目的細(xì)胞的質(zhì)和量是保證后 續(xù)實(shí)驗(yàn)可靠性的重要環(huán)節(jié)。
[0003] 外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)是參與機(jī)體 免疫應(yīng)答反應(yīng)的一類重要免疫細(xì)胞群。PBMCs主要包含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，PBMCs中大部 分（80 %?90 % )為淋巴細(xì)胞，其余成分是單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì) 胞兩大類，這兩種免疫細(xì)胞按其細(xì)胞表面標(biāo)志和細(xì)胞功能又分為不同的細(xì)胞亞群，按照淋 巴細(xì)胞表面標(biāo)志T淋巴細(xì)胞有⑶3+、⑶4+、⑶8+、⑶28+、⑶38+、⑶45+細(xì)胞等等，按照功能分 還有輔助T細(xì)胞（helper T cell，Th)、效應(yīng)T細(xì)胞（Effector T cells, Te)、遲發(fā)性變態(tài)反 應(yīng) T 細(xì)胞（Delayed type hypersensitivity T cells, Td)和細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞（Cytotoxic T cells，Tc)等等；B淋巴細(xì)胞有B1、B2兩種亞型，對(duì)不同淋巴細(xì)胞亞群的分離、鑒別以及功 能的研究對(duì)疾病的診斷乃至治療都有十分重要的臨床意義。
[0004] 任何疾病的發(fā)生、發(fā)展都有相應(yīng)淋巴細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)或者功能的改變，從細(xì)菌、 病毒等一些病源微生物對(duì)人類的感染到腫瘤的發(fā)生以及一些免疫缺陷病、自身免疫性疾病 和遺傳性疾病等許多疾病都有淋巴細(xì)胞參與的應(yīng)激性免疫反應(yīng)，表現(xiàn)為某些細(xì)胞亞群數(shù)量 的改變、淋巴細(xì)胞膜表面標(biāo)志物的變化或者引起細(xì)胞功能的變化（細(xì)胞因子的分泌或抗體 的產(chǎn)生），例如結(jié)核分枝桿菌侵入人體后會(huì)迅速被體內(nèi)的淋巴細(xì)胞所識(shí)別，從而引起相應(yīng)的 細(xì)胞免疫反應(yīng)，導(dǎo)致初始淋巴細(xì)胞在結(jié)核抗原刺激下轉(zhuǎn)化成效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，這些效應(yīng)T淋 巴細(xì)胞再次受到結(jié)核桿菌特異性抗原刺激后會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞因子Y-干擾素，體外檢測 這些分泌Y-干擾素的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞對(duì)于診斷結(jié)核分枝桿菌感染具有重要的臨床意義。
[0005] 淋巴細(xì)胞的分離方法有多種，這些分離方法的原理是根據(jù)各種細(xì)胞間的密度差 異、細(xì)胞的粘附特性或者細(xì)胞膜表面標(biāo)志的不同等物理的和生物學(xué)性能而設(shè)計(jì)的，主要方 法包括粘附分離法、密度梯度離心法、免疫磁珠法和流式細(xì)胞儀法等。
[0006] 粘附分離法是根據(jù)細(xì)胞對(duì)玻璃、尼龍棉等不同材質(zhì)接觸表面的粘附差異分離細(xì)胞 的，被分離的混合細(xì)胞流經(jīng)吸附物體表面時(shí)粘附性高的細(xì)胞附著在吸附物表面，粘附性低 的隨液流被沖走。中國專利CN87102643A公布一種基于細(xì)胞粘附性質(zhì)設(shè)計(jì)的細(xì)胞分離器， 該專利對(duì)細(xì)胞吸附材料的制作進(jìn)行優(yōu)化，目的是提高分離細(xì)胞的純度和比例。粘附分離法 分離目的細(xì)胞的回收率除了與選擇的吸附材料有關(guān)外，還與分離時(shí)控制輸入細(xì)胞的流速有 關(guān)，為此中國專利CN200520134012公布了一項(xiàng)微流體細(xì)胞分離裝置制造方法，該裝置在 控制被分離的混合細(xì)胞流速方面做了一些嘗試。粘附分離法需要控制被分離混合細(xì)胞的輸 入速度，操作比較麻煩，這種方法細(xì)胞分離純度不高、回收率也低。
[0007] 免疫磁珠法是應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的原理分離細(xì)胞的，在各類淋巴細(xì)胞亞群 的細(xì)胞膜上有不同的分化抗原，利用標(biāo)記不同單克隆抗體的免疫磁珠與具有相同抗原表位 的淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合，然后在磁力場或者離心力的作用下將不同的淋巴細(xì)胞分離，這種 分離細(xì)胞的方法如同用魚餌釣魚，免疫磁珠相當(dāng)于魚餌，由于具有特異性結(jié)合的特性，所以 免疫磁珠法具有分離純度較高的特點(diǎn)，通常分離純度能達(dá)到90%?99%，細(xì)胞的收獲率也 相對(duì)較高，但是，免疫磁珠分離的淋巴細(xì)胞的效果和活力受磁珠的種類和標(biāo)記抗體的影響， 而且成本高。
[0008] 流式細(xì)胞分離法是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的細(xì)胞鑒定和分選技術(shù)，它將激光技 術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、熒光化學(xué)技術(shù)以及單克隆抗體技術(shù)融合，使 流式細(xì)胞儀得以誕生。流式細(xì)胞儀將細(xì)胞的分離和鑒別合二為一，其分離細(xì)胞的原理是： 細(xì)胞液流在高頻超聲振蕩波的作用下分成均勻的含單個(gè)細(xì)胞的微小液滴，液滴在交變電場 的作用下極化成帶有不同電荷微粒，不同種類的細(xì)胞極化后帶的電荷密度不一樣，這些帶 電微粒在電場力的作用下發(fā)生偏離，由此實(shí)現(xiàn)對(duì)帶有不同表面抗原的淋巴細(xì)胞分離。如果 將液流中的某些細(xì)胞預(yù)先用熒光染色抗體或者DNA染料標(biāo)記，標(biāo)記的細(xì)胞會(huì)被流式細(xì)胞儀 中的光電檢測系統(tǒng)識(shí)別，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的自動(dòng)分析。目前，流式細(xì)胞分離技術(shù)已經(jīng)比較成 熟，流式細(xì)胞術(shù)在分選細(xì)胞的同時(shí)還可以同時(shí)檢測細(xì)胞的DNA含量、細(xì)胞體積、細(xì)胞膜受體 和表面抗原以及細(xì)胞所處周期等許多生物信息，但是，用流式細(xì)胞術(shù)分選細(xì)胞成本較高，分 離過程可能對(duì)細(xì)胞有損傷，從而影響細(xì)胞的活性。另外，該方法不能進(jìn)行無菌操作，這使得 分選的細(xì)胞不宜再做培養(yǎng)方面的研究。
[0009] 免疫磁珠法和流式細(xì)胞分離法分離的淋巴細(xì)胞對(duì)分離樣本有選擇，通常這兩種方 法使用的樣本是經(jīng)過密度梯度離心方法分離獲得的混合淋巴細(xì)胞，這也是上述兩種方法能 獲得較高純度的重要原因。
[0010] 在多種細(xì)胞分離方法當(dāng)中，F(xiàn)icoll-Hypaque密度梯度離心法是分離淋巴細(xì) 胞最傳統(tǒng)和經(jīng)典的方法，這種方法是利用密度接近單個(gè)核細(xì)胞的聚蔗糖-泛影葡胺 (Ficoll-Hypaque)細(xì)胞分離液分離目的細(xì)胞的，原理是利用人類血液中各種血細(xì)胞之間 存在密度差異，例如紅細(xì)胞密度為1. 090?1. 093,粒細(xì)胞密度為1. 090?1. 092,單個(gè)核 細(xì)胞的密度為1. 075-1. 090,血小板為1. 030?1. 035。Ficoll-Hypaque是一種密度為 1. 077±0. 001g/L與血漿等滲的低粘度混合溶液，如果將全血疊加在Ficoll-Hypaque分離 液上面在離心力場的作用下，各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集，紅細(xì)胞與粒細(xì)胞 由于密度較大，離心后沉降在分離液的底部，血漿和血小板密度較低，離心后懸浮在分離 液的上面，單個(gè)核細(xì)胞密度接近于分離液，由于分離液對(duì)單個(gè)核細(xì)胞的浮力作用大于離心 力的作用，所以使單個(gè)核細(xì)胞不會(huì)下沉，離心后依然位于分離液界面上，這樣就可以分離 獲得單個(gè)核細(xì)胞。密度梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞的主要優(yōu)點(diǎn)是：
[0011] ⑴操作步驟比較簡單，適合大量樣本的分離；
[0012] ⑵能夠?qū)崿F(xiàn)無菌操作，分離的單個(gè)核細(xì)胞適宜臨床應(yīng)用；
[0013] ⑶對(duì)分離的單個(gè)核細(xì)胞的損傷較小。
[0014] 正是由于密度梯度離心法具有的上述這些優(yōu)點(diǎn)，才使得它作為最經(jīng)典的細(xì)胞分離 方法占有重要的地位，雖然新的細(xì)胞分離方法不斷出現(xiàn)，但是，密度梯度離心法具備的這些 優(yōu)勢是其他方法難以替代的。盡管如此，密度梯度分離法也受一些因素影響，其主要影響因 素包括：
[0015] ⑴分離液的化學(xué)組成成分及性質(zhì)；
[0016] ⑵將樣本疊加在分離液液面上的操作技巧；
[0017] ⑶離心力和離心時(shí)間；
[0018] ⑷樣本抗凝和被稀釋比例；
[0019] (5)離心過程的溫度控制。
[0020] 分離液的化學(xué)組成和性質(zhì)是決定分離效果的重要的因素，為此一些研究人員通 過改變分離液的組成成分借此提高單個(gè)核細(xì)胞的分離效果，目前除了由聚蔗糖_泛影葡 胺制備的分離液，人們也開發(fā)了由不同化合物組成的密度梯度分離液，比如由Percoll 硅膠顆粒制備的連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度分離液，這種分離液能選擇性地分離某種類型 的免疫細(xì)胞，并且可以提高分離的目的細(xì)胞的純度。鄒常春等（實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009， 27(4) :337-344)報(bào)道了一種改良的從全血中分離中性粒細(xì)胞的方法。2012年中國專利 CN201110456878公布了一種復(fù)方淋巴細(xì)胞分離介質(zhì)，配方中的全部原料均符合靜脈注射級(jí) 原料藥的標(biāo)準(zhǔn)，原料的安全性高，分離的淋巴細(xì)胞純度及淋巴細(xì)胞回收率與常規(guī)分離液比 無顯著差異。另外一項(xiàng)中國專利CN20121011408公布了由羥乙基淀粉替代右旋糖酐的細(xì)胞 分離液的制備方法，這種組合方法進(jìn)一步提高了分離液的生物安全性，使得分離的淋巴細(xì) 胞狀態(tài)更好，活力更高。
[0021] 密度梯度離心法是根據(jù)各種血細(xì)胞之間的密度差異分離單個(gè)核細(xì)胞的，由于分離 液的密度最接近目的細(xì)胞，因此，離心后這些細(xì)胞被富集在分離液的上面，形成一層濃集的 目的細(xì)胞層。一般情況下通過優(yōu)化離心力、離心時(shí)間等條件密度梯度離心法分離的目的細(xì) 胞混有其他雜細(xì)胞的數(shù)量是可以控制的（郭繼強(qiáng)，劉愛兵，沈丹等.中國組織工程研究與康 復(fù).2011，15(45) :8447-8450 ;樊衛(wèi)平，宋玉靖，郝顏琴等，山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010, 41(3): 274-284)。但是，任何改變分離液密度的因素都會(huì)影響密度梯度離心法的分離效果，分離液 密度的變化不僅會(huì)影響分離的目的細(xì)胞的數(shù)量，還可能導(dǎo)致富集的目的細(xì)胞層中混入其他 的雜細(xì)胞。為了不影響分離液的密度，除了離心時(shí)應(yīng)控制適當(dāng)?shù)臏囟韧猓儆芯褪窃诩尤霕?本時(shí)操作必需非常小心，不能讓樣本沖散分離液液面，如果有部分樣本與分離液混合，勢必 會(huì)改變分離液的密度，影響分離效果。
[0022] 密度梯度離心法的操作過程有以下幾個(gè)步驟：⑴將樣本（如外周血液）用細(xì)胞培 養(yǎng)液或生理鹽水1 : 1?1 : 2稀釋，使各類細(xì)胞充分分散；⑵將1/2樣本量的分尚液加入 離心管中；⑶用巴氏吸管將稀釋樣本沿離心管管壁緩慢加到分離液的上面，盡量保持加入 樣本與分離液液面清晰；⑷以500?1000g的離心速度離心20?30min ;(5)用巴氏吸管吸 取目的細(xì)胞層。上述第⑶、第(5)步驟是密度梯度離心法操作最繁瑣的步驟，操作生疏者不容 易掌握，對(duì)于操作熟練者也是一個(gè)繁瑣、費(fèi)力的事。 實(shí)用新型內(nèi)容
[0023] 為解決密度梯度離心法加樣、取樣操作繁瑣問題，本實(shí)用新型的目的是提供一種 血細(xì)胞分離管。
[0024] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用了以下技術(shù)方案：
[0025] -種血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述分離管由管體、旋蓋、置于管體內(nèi)的細(xì)胞分 離隔膜和加樣滑板組成；所述分離管管體是一個(gè)底部為半圓形或圓錐形的離心管，管口處 有用于固定所述旋蓋的外螺紋，所述分離隔膜固定在所述分離管內(nèi)接近分離管管底處；所 述加樣滑板由一個(gè)圓盤和與所述圓盤邊緣連接的n型推桿組成，所述推桿的另一端設(shè)有一 個(gè)橢圓形的推桿柄，所述圓盤邊緣與所述分離管內(nèi)壁之間有一個(gè)狹窄的環(huán)形間隙。
[0026] 優(yōu)選地，所述分離管分離隔膜以上的一段長度為3?5厘米的管壁或分離隔膜至 管口這部分管壁為相同內(nèi)徑的圓柱形結(jié)構(gòu)。
[0027] 優(yōu)選地，所述分離管內(nèi)在所述分離隔膜以下預(yù)留的容積為3?5ml。
[0028] 優(yōu)選地，所述分離隔膜上有1個(gè)或1個(gè)以上等間距分布的小孔，所述小孔的孔徑相 同，所述孔徑為1?l〇mm。
[0029] 優(yōu)選地,所述小孔依軸心對(duì)稱分布。
[0030] 優(yōu)選地，所述環(huán)形間隙的寬度為0. 01?5mm，所述環(huán)形間隙的寬度使得在所述圓 盤以上加入一定量的血液樣本時(shí)，所述血液樣本在自身重力作用下不會(huì)通過所述環(huán)形間隙 向下泄漏，當(dāng)改變所述圓盤的上下位置時(shí)，所述血液樣本能夠通過所述環(huán)形間隙自由流動(dòng)。
[0031] 優(yōu)選地，所述加樣滑板和管體的材料選擇非極性或弱極性的高分子聚合材料，這 些材料包括聚乙烯（PE)、聚丙烯（PP)、聚苯乙烯（PS)、聚碳酸酯（PC)、ABS以及SEBS其中 的任意一種。
[0032] 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于：所提供的血細(xì)胞分離管與應(yīng)用普通離心管分 離單個(gè)核細(xì)胞的方法相比，簡化了后者復(fù)雜的操作過程，其特征是使常規(guī)的必需應(yīng)用巴氏 吸管加樣、取樣操作簡化了。
[0033] 本實(shí)用新型所提出的加樣滑板改變了傳統(tǒng)的加樣方式，使血液樣本與分離液的疊 加界面更清晰，并減少了不必要的失誤。
[0034] 在以下本實(shí)用新型實(shí)施方案中，為了提高目的細(xì)胞的收率，采用在分離隔膜上增 加分離液的方式。因?yàn)橛辛思訕踊澹訕訒r(shí)才可以直接倒入樣本，這樣不僅可以提高分離 細(xì)胞的收獲率，又仍然保持簡化的加樣操作的特點(diǎn)。
[0035] 本實(shí)用新型所提供的血細(xì)胞分離管適用所有密度梯度分離介質(zhì)，如將上述預(yù)充的 Ficoll-Hypaque分離液用Percoll分離液代替，在應(yīng)用Percoll連續(xù)的密度梯度分離方式 時(shí)，加入分離液的方法與加入Ficoll-Hypaque分離液相同。本實(shí)用新型所提供的血細(xì)胞分 離管更適用于Percoll不連續(xù)密度梯度法分離細(xì)胞，在利用Percoll不連續(xù)密度梯度法分 離目的細(xì)胞時(shí)，可將密度較高的Percoll分離液加在分離隔膜以下，然后直接將密度較低 的Percoll分離液倒入分離管的適當(dāng)?shù)母叨燃纯?，由于有分離隔膜的阻擋，不必?fù)?dān)心高密 度與低密度的Percoll分離液相互混合。
[0036] 本實(shí)用新型中，分離隔膜上的小孔依軸心對(duì)稱分布，使流體通過分離隔膜后流速 均勻分布同時(shí)增加其流通系數(shù)；制作加樣滑板和分離管的材料選擇非極性或弱極性的高分 子聚合材料，這些材料包括聚乙烯（PE)、聚丙烯（PP)、聚苯乙烯（PS)、聚碳酸酯（PC)、ABS以 及SEBS其中的任意一種，這類材料的表面能低，潤濕性差，所形成的縫隙能夠利用液體的 表面張力特性呈現(xiàn)自封閉性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖1是血細(xì)胞分離管的完整結(jié)構(gòu)圖。
[0038] 圖中1旋蓋，2分離管管體，3推桿，4推桿柄，5加樣滑板，6圓盤7分離隔膜 [0039] 圖2是實(shí)例1的操作示意圖。
[0040] 圖中：I血漿層II單個(gè)核細(xì)胞層III分離隔膜IV紅細(xì)胞層
[0041] 圖3是實(shí)例2的操作示意圖。
[0042] 圖4是實(shí)例3的操作示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0043] 實(shí)例1本實(shí)用新型的一個(gè)應(yīng)用方式是，不用加樣滑板的情況下也可以按照簡化的 操作方法分離目的細(xì)胞。圖2是本方案的示意圖，在這項(xiàng)實(shí)施方案中可以將預(yù)分離血液樣 本直接倒入分離管中，在血液樣本倒入分離管過程中，分離隔膜將阻止樣本與分離液混合， 選擇2000轉(zhuǎn)/分的離心速度離心20分鐘，離心后紅細(xì)胞通過分離隔膜沉積在分離管底，單 個(gè)核細(xì)胞則被富集在分離隔膜以上的細(xì)胞分離液和血漿層之間，取樣時(shí)將分離隔膜以上的 液體直接倒入新的試管中即可。
[0044] 表1兩種方法分離的淋巴細(xì)胞濃度、純度和活力
[0045]

【權(quán)利要求】
1. 一種血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述分離管由管體、旋蓋、置于管體內(nèi)的細(xì)胞分離 隔膜和加樣滑板組成；所述分離管管體是一個(gè)底部為半圓形或圓錐形的離心管，管口處有 用于固定所述旋蓋的外螺紋，所述分離隔膜固定在所述分離管內(nèi)接近分離管管底處；所述 加樣滑板由一個(gè)圓盤和與所述圓盤邊緣連接的η型推桿組成，所述推桿的另一端設(shè)有一個(gè) 橢圓形的推桿柄，所述圓盤邊緣與所述分離管內(nèi)壁之間有一個(gè)狹窄的環(huán)形間隙。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述分離管分離隔膜以上的一 段長度為3?5厘米的管壁或分離隔膜至管口這部分管壁為相同內(nèi)徑的圓柱形結(jié)構(gòu)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述分離管內(nèi)在所述分離隔膜 以下預(yù)留的容積為3?5ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于：所述分離隔膜上有1個(gè)或1 個(gè)以上等間距分布的小孔，所述小孔的孔徑相同，所述孔徑為1?l〇mm。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述小孔依軸心對(duì)稱分布。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于，所述環(huán)形間隙的寬度為 0. 01?5mm，所述環(huán)形間隙的寬度使得在所述圓盤以上加入一定量的血液樣本時(shí)，所述血 液樣本在自身重力作用下不會(huì)通過所述環(huán)形間隙向下泄漏，當(dāng)改變所述圓盤的上下位置 時(shí)，所述血液樣本能夠通過所述環(huán)形間隙自由流動(dòng)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的血細(xì)胞分離管，其特征在于：所述加樣滑板和管體的材 料選擇非極性或弱極性的高分子聚合材料，這些材料包括聚乙烯（PE)、聚丙烯（PP)、聚苯 乙烯（PS)、聚碳酸酯（PC)、ABS以及SEBS其中的任意一種。
【文檔編號(hào)】C12M1/12GK204097473SQ201420358393
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月1日
【發(fā)明者】宋雪, 程月紅 申請(qǐng)人:北京圣浦博大生物科技有限公司