干細胞培養(yǎng)灌流裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種干細胞培養(yǎng)灌流裝置，包括灌流瓶、飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器、細胞灌流槽和廢液瓶，所述待培養(yǎng)細胞灌流瓶瓶口處設(shè)置第一濾頭和輸入管，所述輸入管上設(shè)置一可顯示pH值和控制溫度的第一控制器，所述輸入管尾端浸入飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器，通過基底設(shè)置半透膜的飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器連接的第一連接管上設(shè)置第二控制器和第一蠕動泵，所述細胞灌流槽兩端分別連接第二連接管和第三連接管，所述第二連接管另一端與所述第一蠕動泵相連，所述第三連接管另一端與所述第二蠕動泵相連，所述廢液瓶瓶口設(shè)置輸出管和第二濾頭，所述輸出管另一端連接所述第二蠕動泵。本發(fā)明通過第一控制器和第二控制器的作用，可觀察不同溫度和pH值變化，控制蠕動泵的速率，同時又可避免因人工觀察記錄而產(chǎn)生誤差數(shù)值，通過細胞灌流槽的設(shè)備輸出，可提高干細胞的培養(yǎng)速率。
【專利說明】干細胞培養(yǎng)灌流裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于一種灌流裝置，尤其涉及一種用于干細胞培養(yǎng)灌流裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]在胚胎干細胞體外培養(yǎng)中，除了正常的培養(yǎng)基外，需要先培養(yǎng)一層特殊的細胞(如小鼠胚胎成纖維-mouse embryonic fibroblast MEF細胞等)，然后再在其上接種要實驗的干細胞。這些特殊的細胞就是飼養(yǎng)層細胞，通常是成纖維類細胞，這些細胞可以分泌一些未知的必須生長因子如白血病抑制因子(leukemia inhibitoryfactor, LIF)、干細胞因子(stem cell factor, SCF)和喊性成纖維細胞生長因子(basic Fibroblast growthfactor,bFGF)等，提供胚胎干細胞、誘導多能干細胞更好的營養(yǎng)。這些因子對干細胞的存活和增殖是必需的，不僅可以使其數(shù)量增加，而且與干細胞在體內(nèi)外的分化有關(guān)。實驗證明，飼養(yǎng)層細胞的作用不僅僅是產(chǎn)生了一些細胞因子，在大多數(shù)細胞發(fā)育和分化過程中，細胞的黏附作用都發(fā)揮了相當重要的作用。ES細胞不能作為完全獨立的細胞而生存，總是與周圍的細胞相聯(lián)系著，在信號傳導中的黏附受體調(diào)節(jié)著細胞的運動、增殖和分化。通常在胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養(yǎng)體系下，飼養(yǎng)層細胞與干細胞處于共培養(yǎng)狀態(tài)，兩者無法分離徹底。如果采用飼養(yǎng)層與干細胞分別靜態(tài)培養(yǎng)的方式，無法實時將飼養(yǎng)層細胞分泌的因子傳送到干細胞培養(yǎng)體系內(nèi)，且操作過程多，大多不被采用。傳統(tǒng)共培養(yǎng)方式影響干細胞純度，已在干細胞應(yīng)用等方面起到了很大的限制作用，提高培養(yǎng)裝置的反應(yīng)速率無疑是本領(lǐng)域技術(shù)人員的共同目標。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的問題是提供干細胞培養(yǎng)灌流裝置，常規(guī)使用的灌流裝置不方便實時觀察，同時培養(yǎng)速率有待提高。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0005]干細胞培養(yǎng)灌流裝置，包括灌流瓶、飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器、真空培養(yǎng)器和廢液瓶，所述灌流瓶瓶口處設(shè)置第一濾頭和輸入管，所述第一濾頭可以使所述灌流瓶內(nèi)的壓強和外界相同，并且可以隔絕外界空氣中的細菌污染，所述輸入管上設(shè)置一控制溫度和PH值的第一控制器，所述輸入管尾端浸入飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器，通過基底設(shè)置半透膜的飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器連接的第一連接管上設(shè)置一第二控制器和第一蠕動泵，確保飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器內(nèi)的細胞可在適應(yīng)細胞繁殖的溫度和流速下進行細胞培養(yǎng)，所述細胞灌流槽內(nèi)腔體底部設(shè)置一形狀規(guī)則經(jīng)消毒處理的脫脂棉，脫脂棉貼合于細胞灌流槽內(nèi)腔體底部，所述脫脂棉上部設(shè)置一網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上部設(shè)置放置細胞的灌流槽支撐部，通過脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)共同作用，可抬高灌流槽支撐部的反應(yīng)位置，使細胞充分接觸帶有營養(yǎng)物質(zhì)的流動空氣，脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)均不能與細胞培養(yǎng)液直接接觸，同時脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)還能確保灌流槽支撐部與細胞灌流槽內(nèi)腔體底部不直接接觸起到保溫的功效，所述細胞灌流槽下部設(shè)置一支撐架，確保細胞灌流槽在空中某位置處獲得穩(wěn)固支撐，所述細胞灌流槽兩端分別連接第二連接管和第三連接管，所述第二連接管另一端與所述第一蠕動泵相連，所述第三連接管另一端與所述第二蠕動泵相連，所述廢液瓶瓶口設(shè)置輸出管和第二濾頭，所述第二濾頭可以使所述廢液瓶內(nèi)的壓強和外界相同，并且可以隔絕外界空氣中的細菌污染，所述輸出管另一端連接所述第二蠕動泵。
[0006]進一步地，所述飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器底部設(shè)置一細胞培養(yǎng)板，且所述半透膜位于所述細胞培養(yǎng)板上。
[0007]進一步地，所述細胞灌流槽兩端設(shè)置防止培養(yǎng)細胞穿過的半透膜，但半透膜能使液體自由通過。
[0008]進一步地，所述細胞灌流槽中部設(shè)置一環(huán)形透明孔，方便觀察細胞灌流槽內(nèi)細胞繁殖情況。
[0009]本發(fā)明具有的優(yōu)點和積極效果是:本發(fā)明所述的一種干細胞培養(yǎng)灌流裝置，該裝置通過第一控制器和第二控制器的作用，可觀察不同溫度下PH值變化以及通過不同pH值判斷蠕動泵的流速，同時又可避免因人工測量而產(chǎn)生誤差數(shù)值，兩個蠕動泵、脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的使用以及細胞灌流槽兩端的半透膜的作用，提高干細胞的培養(yǎng)速率，還能使細胞灌流槽起到保溫功效。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是本發(fā)明的示意圖
[0011]圖中:
[0012]1-灌流瓶2-第一濾頭 3-輸入管 4-第一控制器
[0013]5-飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器6-第一連接管 7-第二控制器
[0014]8-第一蠕動泵9-第二連接管10-細胞灌流槽
[0015]11-第三連接管12-第二蠕動泵 13-輸出管
[0016]14-第二濾頭15-廢液瓶16-支撐架

【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施例做詳細說明。
[0018]如圖1所示，干細胞培養(yǎng)灌流裝置，包括灌流瓶1、飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5、細胞灌流槽10和廢液瓶15，灌流瓶I瓶口處設(shè)置第一濾頭2和輸入管3，第一濾頭2可以使灌流瓶I內(nèi)的壓強和外界相同，并且可以隔絕外界空氣中的細菌污染，輸入管3上設(shè)置一控制溫度和PH值的第一控制器4，輸入管3尾端浸入飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5，通過基底設(shè)置半透膜的飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5連接的第一連接管6上設(shè)置第二控制器7和第一蠕動泵8，確保飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5內(nèi)的細胞可在適應(yīng)細胞繁殖的溫度和流速下進行細胞培養(yǎng)，細胞灌流槽10內(nèi)腔體底部設(shè)置一形狀規(guī)則經(jīng)消毒處理的脫脂棉，脫脂棉貼合于細胞灌流槽10內(nèi)腔體底部，脫脂棉上部設(shè)置一網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上部設(shè)置放置細胞的灌流槽支撐部，通過脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)共同作用，可抬高灌流槽支撐部的反應(yīng)位置，使細胞充分接觸帶有營養(yǎng)物質(zhì)的流動空氣，提高干細胞的培養(yǎng)速率，脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)均不能與細胞培養(yǎng)液直接接觸，同時脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)還能確保灌流槽支撐部與細胞灌流槽10內(nèi)腔體底部不直接接觸起到保溫的功效，細胞灌流槽10下部設(shè)置一支撐架16，確保細胞灌流槽10在空中某位置處獲得穩(wěn)固支撐，細胞灌流槽10兩端分別連接第二連接管9和第三連接管11，第二連接管9另一端與第一蠕動泵8相連，第三連接管11另一端與第二蠕動泵12相連，廢液瓶15瓶口設(shè)置輸出管13和第二濾頭14，第二濾頭14可以使廢液瓶15內(nèi)的壓強和外界相同，并且可以隔絕外界空氣中的細菌污染，輸出管13另一端連接第二蠕動泵12 ;飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5底部設(shè)置一細胞培養(yǎng)板；細胞灌流槽10兩端設(shè)置防止培養(yǎng)細胞穿過的半透膜，但半透膜能使液體自由通過；細胞灌流槽10中部設(shè)置一環(huán)形透明孔，方便觀察細胞灌流槽內(nèi)細胞繁殖情況。
[0019]本發(fā)明在使用時，灌流瓶I內(nèi)裝入適于干細胞培養(yǎng)繁殖的養(yǎng)料，飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5內(nèi)裝入補充營養(yǎng)素，通過第一蠕動泵8和第二蠕動泵12的作用將灌流瓶I內(nèi)的養(yǎng)料流入飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5和細胞灌流槽10中，為干細胞提供充足的營養(yǎng)，提高干細胞的培養(yǎng)速率，飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5底部的半透膜的具體孔徑大小控制在能阻止干細胞通過但能實現(xiàn)液體通過即可，同樣地，細胞灌流槽10兩端的半透膜具體孔徑大小控制在能阻止干細胞通過但能實現(xiàn)液體通過即可，此灌流裝置可在第一控制器4和第二控制器7和兩個蠕動泵(8、12)共同作用下完成干細胞的培養(yǎng)繁殖，方便記錄不同溫度、pH值時飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器5及細胞灌流槽10內(nèi)干細胞培養(yǎng)繁殖的情況，避免因人工觀察測量而產(chǎn)生溫度及PH值的誤差數(shù)值，通過細胞灌流槽10設(shè)備輸出，可提高干細胞的培養(yǎng)速率。
[0020]以上對本發(fā)明的一個實施例進行了詳細說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，不能被認為用于限定本發(fā)明的實施范圍。凡依本發(fā)明申請范圍所作的均等變化與改進等，均應(yīng)仍歸屬于本發(fā)明的專利涵蓋范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.干細胞培養(yǎng)灌流裝置，其特征在于:包括灌流瓶(I)、飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器(5)、細胞灌流槽(10)和廢液瓶(15)； 所述灌流瓶(I)瓶口處設(shè)置第一濾頭(2)和輸入管(3)，所述輸入管(3)上設(shè)置一可顯示PH值和控制溫度的第一控制器(4)，所述輸入管(3)尾端浸入飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器(5)，通過基底設(shè)置半透膜的飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器(5)連接的第一連接管(6)上設(shè)置一可顯示pH值和控制溫度的第二控制器(7)和第一蠕動泵(8)，所述細胞灌流槽(10)內(nèi)腔體底部設(shè)置一形狀規(guī)則經(jīng)消毒處理的脫脂棉，所述脫脂棉上部設(shè)置一網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，所述網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上部設(shè)置放置細胞的灌流槽支撐部，且脫脂棉和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)均不能與細胞培養(yǎng)液直接接觸，所述細胞灌流槽(10)下部設(shè)置一支撐架(16)，所述細胞灌流槽(10)兩端分別連接第二連接管(9)和第三連接管(11)，所述第二連接管(9)另一端與所述第一蠕動泵(8)相連，所述第三連接管(11)另一端與所述第二蠕動泵(12)相連，所述廢液瓶(15)瓶口設(shè)置輸出管(13)和第二濾頭(14)，所述輸出管(13)另一端連接所述第二蠕動泵(12)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)灌流裝置，其特征在于:所述飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)器(5)底部設(shè)置一細胞培養(yǎng)板且所述半透膜位于所述細胞培養(yǎng)板上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)灌流裝置，其特征在于:所述細胞灌流槽(10)兩端設(shè)置半透膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)灌流裝置，其特征在于:所述細胞灌流槽(10)中部設(shè)置一環(huán)形透明孔。
【文檔編號】C12M1/38GK104403946SQ201410812200
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月22日
【發(fā)明者】孫麗娟, 申靖毅, 賈夢, 張雨時, 王冠華 申請人:順昊細胞生物技術(shù)（天津）股份有限公司