一種用于五種細(xì)菌的復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法，該培養(yǎng)基組分包括：牛腦浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化鈉2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7.2-7.5。制備方法包括：按照配方將各成分加入蒸餾水中，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH值，高壓滅菌。五種細(xì)菌是我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中需檢測(cè)的主要致病菌。使用本發(fā)明所述復(fù)合增菌培養(yǎng)基，能夠?qū)崿F(xiàn)五種致病菌的快速增殖。增菌16小時(shí)，菌體濃度可由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測(cè)，完成上述五種病原菌的篩查。
【專利說明】一種用于五種細(xì)菌的復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于致病菌的前增菌培養(yǎng)基，特別是涉及到一種同時(shí)對(duì)沙門氏菌、金黃色 葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴發(fā)的重要因素，是食品安全的重要風(fēng)險(xiǎn) 隱患。據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization, WHO)報(bào)道，全球每年發(fā)生腹瀉病的 病例數(shù)高達(dá)1. 5億，其中70%病例與各種致病性微生物污染的食品有關(guān)。我國(guó)研究資料顯 示，微生物病原引起的食源性疾病占46. 4%，嚴(yán)重危及人們的健康，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。沙門 氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌是食源性疾病的主要 致病菌，是食品安全風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)和危害評(píng)估中重要監(jiān)測(cè)項(xiàng)目。
[0003] 目前我國(guó)食品安全標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌時(shí)，需要經(jīng)過前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定、和血清學(xué)鑒定 等步驟。培養(yǎng)基品種繁多，操作麻煩，工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，無法滿足現(xiàn)代檢測(cè)快速、高通量的 要求，給食品生產(chǎn)企業(yè)和質(zhì)檢單位造成較大壓力。所以在食品安全問題日益被人們所重視 的今天，研制出滿足快速檢測(cè)的多種致病菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基迫在眉睫。
[0004] 關(guān)于多種致病菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基的研究，近年來已受到國(guó)內(nèi)外研究人員的廣泛關(guān) 注。Hyochin等研制的選擇性營(yíng)養(yǎng)肉湯（SEL)，可同時(shí)富集沙門氏菌、大腸埃希氏菌和單 增李斯特菌，當(dāng)接種量為l〇 2CFU/mL，經(jīng)過12h復(fù)合培養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到106?108CFU/ mL，可直接應(yīng)用于多重 PCR 擴(kuò)增（Hyochin Kim and Arun Κ· Bhunia.SEL, a Selective Enrichment Broth for Simultaneous Growth of Salmonella enterica， Escherichia coli0157H7，and Listeria monocytogenes[J]. Applied and Environmental Microbiol ogy，2008, 74(15) :4853-4866.);翁思聰?shù)妊兄频倪x擇性增菌肉湯（SSSV)，可同時(shí)富集沙 門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌，當(dāng)接種量為10 2CFU/mL，經(jīng)過8h復(fù)合培 養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到1〇5?106CFU/mL，可直接應(yīng)用于多重PCR擴(kuò)增(翁思聰，朱軍莉，馮 立芳，勵(lì)建榮.1種選擇性富集沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增 菌培養(yǎng)基SSSV研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)2013, 13(1) :19-28.);劉園園等研制的選擇性增菌 肉湯（SSL)，可同時(shí)培養(yǎng)沙門氏菌、單增李斯特菌和金黃色葡萄球菌，當(dāng)接種量為10 2CFU/ mL，經(jīng)過24h復(fù)合培養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到107?108CFU/mL，可直接應(yīng)用于熒光PCR擴(kuò)增(劉 園園，肖性龍，余以剛，陳谷，李曉鳳，唐語謙，吳暉.一種能同時(shí)富集沙門氏菌、金黃色 葡萄球菌和單增李斯特菌的培養(yǎng)基[J].微生物學(xué)報(bào)，2009, 49 (10) :1389 - 1396.)。 此外，還有UPB (通用預(yù)增菌肉湯)、BPW(緩沖蛋白胨水）、NB (營(yíng)養(yǎng)肉湯）等通用培養(yǎng)基，可 同時(shí)增殖多種細(xì)菌，但還沒有適用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌五種致病菌且組分簡(jiǎn)單、制備簡(jiǎn)便的復(fù)合增菌培養(yǎng)基。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種可同時(shí)培養(yǎng)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏 菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基，適用于多重PCR、基因芯片、微流控芯 片等高通量檢測(cè)，用于所述五種病原菌的篩查。
[0006] 本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增 菌培養(yǎng)基，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料配方組成為：牛腦浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋 白胨5-15份，氯化鈉2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙 酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7. 2-7. 5。
[0007] -種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù) 合增菌培養(yǎng)基，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其優(yōu)選配方為：牛腦浸出粉7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白 胨10份，氯化鈉5份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸 2份，七葉苷2份，蒸餾水1000份，pH值為7. 4。
[0008] 本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增 李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基的制備方法，所述方法由以下步驟組成： (1) 按照配方將牛腦浸出粉、牛心浸出粉、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、磷酸氫二鈉、甘露 醇、丙酮酸鈉、甘氨酸和七葉苷加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高壓滅菌 15-20min，4°C 保存。
[0009] 本發(fā)明提供一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶 血性弧菌菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法，所述五種細(xì)菌在該復(fù)合培養(yǎng)基中，能夠?qū)崿F(xiàn)同 時(shí)快速增殖。增菌16小時(shí)，菌體濃度可由1 CFU/mL增至106 CFU/mL~109 CFU/mL，即可直接 用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測(cè)，用于上述五種病原菌的篩查。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 稱取牛腦浸出粉5g，牛心浸出粉15g，蛋白胨5g，氯化鈉2. 5g，葡萄糖3g，磷酸氫二鈉 1. 5g，甘露醇lg，丙酮酸鈉 lg，甘氨酸3g，七葉苷lg，蒸饋水1000ml，攪拌溶解后，用10 mol/ L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 2,121°C高壓滅菌15min，4°C保存。
[0011] 將菌體濃度均為1〇9 CFU/mL的沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李 斯特菌和副溶血性弧菌培養(yǎng)液分別稀釋1〇7倍，然后分別取100 μ?，接入10 mL制備好的用 于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌培養(yǎng) 基，使培養(yǎng)基中各菌體濃度為1 CFU/mL，37°C培養(yǎng)16h，取增菌培養(yǎng)后的增菌液100 μ?，適當(dāng) 稀釋后分別涂布到沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧 菌選擇性培養(yǎng)基平板，進(jìn)行分離培養(yǎng)。根據(jù)五種病原菌在平板上的特征菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果 見表1。
[0012] 表1復(fù)合增菌培養(yǎng)基增菌效果

【權(quán)利要求】
1. 用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù) 合增菌的培養(yǎng)基，其特征在于，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料配方組成為：牛腦浸出粉5-10份，牛 心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化鈉2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3. 5 份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值 為 7. 2-7. 5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基，其特征在于：以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其配方為牛腦浸出粉 7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白胨10份，氯化鈉5份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露 醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸2份，七葉苷2份，蒸餾水1000份，pH值為7. 4。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 按照配方將牛腦浸出粉、牛心浸出粉、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、磷酸氫二鈉、甘露 醇、丙酮酸鈉、甘氨酸和七葉苷加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高壓滅菌 15-20min，4°C 保存。
【文檔編號(hào)】C12R1/42GK104195086SQ201410450436
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月27日
【發(fā)明者】張巖, 劉銘, 李云, 葛少林, 邢婉麗 申請(qǐng)人:博奧生物集團(tuán)有限公司, 清華大學(xué), 廣東粵檢生物科技有限公司