培養(yǎng)皿及培養(yǎng)套件的制作方法
【專(zhuān)利摘要】培養(yǎng)皿（10）具備皿主體（20）和支承部件（60）。皿主體（20）具備：內(nèi)底面（32）成為培養(yǎng)面的有底圓筒形狀的頸縮部（30）、圓筒形狀且直徑大的開(kāi)口部（40）、和將頸縮部（30）與開(kāi)口部（40）連結(jié)的連結(jié)部（50）。開(kāi)口部（40）的外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同。此外，支承部件（60）形成為環(huán)狀，外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同。此外，該培養(yǎng)皿（10）的高度與通用的培養(yǎng)皿的高度相同。
【專(zhuān)利說(shuō)明】培養(yǎng)皿及培養(yǎng)套件

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及培養(yǎng)皿及培養(yǎng)套件。

【背景技術(shù)】
[0002]作為用于細(xì)胞或組織的培養(yǎng)的培養(yǎng)容器，例如作為通用品而市售有Φ35.ι、Φ 60mm> Φ 100mm、Φ 150mm等的有底圓筒形狀的培養(yǎng)皿。
[0003]在角膜或皮膚、口腔粘膜等薄片狀的培養(yǎng)細(xì)胞(細(xì)胞薄片)中，將培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)到作為培養(yǎng)面(培養(yǎng)皿的內(nèi)底面)整面的鋪滿狀態(tài)的制品作為最終制品用于移植。培養(yǎng)面的面積越大，為了培養(yǎng)到鋪滿狀態(tài)越花費(fèi)時(shí)間，需要較多的播種細(xì)胞等而效率較差，所以希望培養(yǎng)面的面積相比需要的細(xì)胞薄片的尺寸不過(guò)大。例如，在角膜中，只要能夠得到Φ25πιπι左右的細(xì)胞薄片就足夠，所以培養(yǎng)面的面積優(yōu)選的是Φ 25mm左右。
[0004]另一方面，如果單單使培養(yǎng)皿整體的大小匹配于培養(yǎng)面的面積而變小，則發(fā)生操作性變差而掉落、或不能對(duì)應(yīng)于設(shè)計(jì)為適合于通用品的一般的設(shè)備儀器等的不良狀況。因?yàn)檫@樣，所以開(kāi)發(fā)了在通用尺寸的培養(yǎng)皿中配置具有與培養(yǎng)面的面積匹配的底面積的圓筒、能夠在該圓筒內(nèi)培養(yǎng)少量的細(xì)胞的結(jié)構(gòu)(參照專(zhuān)利文獻(xiàn)I)。
[0005]專(zhuān)利文獻(xiàn)1:外觀設(shè)計(jì)注冊(cè)第1382462號(hào)公報(bào)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]但是，在專(zhuān)利文獻(xiàn)I的培養(yǎng)皿中，雖然能夠?qū)?yīng)于設(shè)計(jì)為適合于通用品的設(shè)備儀器，但在操作性上存在問(wèn)題。具體而言，有圓筒的開(kāi)口部過(guò)小而難以將細(xì)胞薄片取出、或難以將培養(yǎng)液供給到圓筒內(nèi)的問(wèn)題。
[0007]本發(fā)明是為了解決這樣的課題而做出的，目的是提供一種能夠?qū)?yīng)于設(shè)計(jì)為適合于通用品的設(shè)備儀器、并且操作性較好的培養(yǎng)皿。
[0008]本發(fā)明的培養(yǎng)皿及培養(yǎng)套件為了達(dá)到上述的主要目的，采用了以下的技術(shù)手段。
[0009]即，本發(fā)明的培養(yǎng)皿具備皿主體和支承部件；所述皿主體將頸縮部和開(kāi)口部經(jīng)由連結(jié)部連結(jié)，所述頸縮部為內(nèi)底面成為培養(yǎng)面的有底圓筒形狀且直徑小，所述開(kāi)口部為圓筒形狀且直徑大；所述支承部件設(shè)在上述頸縮部的底面的外側(cè)；上述開(kāi)口部的外徑及上述支承部件的外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同。
[0010]在該培養(yǎng)皿中，由于開(kāi)口部的外徑及支承部件的外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同，所以能夠?qū)?yīng)于適合于通用品而設(shè)計(jì)的設(shè)備儀器。此外，由于用直徑小的頸縮部的內(nèi)底面進(jìn)行培養(yǎng)，所以能夠得到比用通用品進(jìn)行培養(yǎng)的情況小的細(xì)胞薄片。此外，由于在頸縮部上連結(jié)著直徑大的開(kāi)口部，所以容易進(jìn)行細(xì)胞薄片比較容易取出的培養(yǎng)液的供給。
[0011]在本發(fā)明的培養(yǎng)皿中，也可以是，上述支承部件是環(huán)狀的支承部件，所述環(huán)狀的支承部件形成為外徑與上述通用的培養(yǎng)皿的外徑一致，在上述支承部件與上述頸縮部之間形成有間隙。如果這樣，則在將得到的細(xì)胞薄片連同培養(yǎng)皿一起浸潰在輸送液中的狀態(tài)下進(jìn)行輸送，在從輸送液將培養(yǎng)皿取出而操作細(xì)胞薄片時(shí)等，由于輸送液不易殘留在支承部件，所以能夠不擔(dān)心輸送液的滴下等而進(jìn)行操作。
[0012]在本發(fā)明的培養(yǎng)皿中，也可以是，上述培養(yǎng)皿的高度與通用的培養(yǎng)皿的高度相同。如果這樣，則更容易對(duì)應(yīng)于適合于通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)的一般的設(shè)備儀器等。
[0013]本發(fā)明的培養(yǎng)套件具備:上述的本發(fā)明的培養(yǎng)皿；和載體，載置在該培養(yǎng)皿的內(nèi)底面上，以使上述內(nèi)底面的一部分露出；上述培養(yǎng)皿的內(nèi)底面被溫度響應(yīng)性聚合物覆蓋，所述溫度響應(yīng)性聚合物以規(guī)定的臨界溫度為邊界，細(xì)胞粘接性和細(xì)胞剝離性轉(zhuǎn)換；上述載體具有不依存于溫度的細(xì)胞粘接性。在該培養(yǎng)套件中，當(dāng)培養(yǎng)粘接依存性細(xì)胞時(shí)，通過(guò)將內(nèi)底面維持為作為細(xì)胞粘接性的溫度，不僅是具有細(xì)胞粘接性的載體上，在露出的內(nèi)底面上，粘接依存性細(xì)胞也粘接而增殖，成為細(xì)胞薄片。另一方面，通過(guò)在成為鋪滿狀態(tài)的時(shí)點(diǎn)將內(nèi)底面維持在為細(xì)胞剝離性的溫度，細(xì)胞薄片從內(nèi)底面剝離，能夠得到僅粘接在載體上的細(xì)胞薄片。由于細(xì)胞薄片非常薄，所以難以取出，但在該培養(yǎng)套件中，只要把持載體而從培養(yǎng)皿取出，就能夠?qū)⒓?xì)胞薄片同時(shí)取出。這樣，能夠容易地進(jìn)行粘接依存性細(xì)胞的培養(yǎng)及取出。
[0014]在本發(fā)明的培養(yǎng)套件中，也可以是，上述載體具備環(huán)狀部和耳部，所述環(huán)狀部具有比上述培養(yǎng)皿的頸縮部的內(nèi)徑稍稍小的外徑，所述耳部設(shè)在該環(huán)狀部的外側(cè)，當(dāng)將上述環(huán)狀部載置在上述培養(yǎng)皿上時(shí)，所述耳部沿著上述培養(yǎng)皿的頸縮部的側(cè)壁豎起，一部分伸出到該側(cè)壁的上方。如果這樣，則能夠在細(xì)胞薄片的外周整體粘接在載體上的狀態(tài)下將細(xì)胞薄片取出，所以能夠抑制細(xì)胞薄片的收縮及變形等。此外，由于載體的耳部伸出到頸縮部的側(cè)壁的上方，所以容易把持載體，更容易將細(xì)胞薄片取出。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1是培養(yǎng)皿10的立體圖。
[0016]圖2是將培養(yǎng)皿10從上方觀察的圖。
[0017]圖3是將培養(yǎng)皿10從下方觀察的圖。
[0018]圖4是表示圖2的各切斷面的端面的圖。
[0019]圖5是培養(yǎng)套件15的立體圖。
[0020]圖6是載體90的說(shuō)明圖。
[0021]圖7是使用培養(yǎng)套件15的細(xì)胞薄片的制作方法的說(shuō)明圖。
[0022]圖8是包裝容器100的說(shuō)明圖。
[0023]圖9是包裝體200的說(shuō)明圖。
[0024]圖10是表示從培養(yǎng)皿10將細(xì)胞薄片取出的方法的說(shuō)明圖。

【具體實(shí)施方式】
[0025]1.培養(yǎng)皿
接著，使用附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選的一實(shí)施方式進(jìn)行說(shuō)明。圖1是培養(yǎng)皿10的立體圖，圖2是將培養(yǎng)皿10從上方觀察的圖，圖3是將培養(yǎng)皿10從下方觀察的圖，圖4是表示圖2的各切斷面的端面的圖。圖4 (八)對(duì)應(yīng)于八一八切斷面，圖4 (8)對(duì)應(yīng)于8 — 8切斷面，圖4 (0對(duì)應(yīng)于(:一(:切斷面。
[0026]培養(yǎng)皿10如圖1?圖4所示，具備皿主體20、支承部件60和橋接部70。該培養(yǎng)皿10是聚苯乙烯樹(shù)脂制，整體是透明的。因此，在圖1?圖3中，雖然也應(yīng)記載透明的里側(cè)的線，但為了方便而將透明的里側(cè)的線省略。
[0027]皿主體20具備頸縮部30、開(kāi)口部40和連結(jié)部50。該皿主體20與通用的培養(yǎng)皿高度相同(這里是12mm)。頸縮部30形成為內(nèi)底面32為培養(yǎng)面的有底圓筒形狀，在底上設(shè)有腳36。內(nèi)底面32的直徑在這里為Φ25πιπι。在該內(nèi)底面32上鋪設(shè)有溫度響應(yīng)性聚合物。溫度響應(yīng)性聚合物以規(guī)定的臨界溫度(這里是32°C )為邊界，在比其低溫下顯現(xiàn)細(xì)胞剝離性，在比其高溫下顯現(xiàn)細(xì)胞粘接性。因此，在培養(yǎng)粘接依存性細(xì)胞時(shí)，將內(nèi)底面32的溫度維持為例如37°C左右而使內(nèi)底面32為細(xì)胞粘接性，由此細(xì)胞粘接在內(nèi)底面32上而增殖。另一方面，在成為鋪滿狀態(tài)的時(shí)點(diǎn)，將內(nèi)底面32的溫度降低到例如20°C左右而成為細(xì)胞剝離性，由此細(xì)胞從內(nèi)底面32剝離。另外，關(guān)于溫度響應(yīng)性聚合物，例如在特開(kāi)2003 - 38170等中被詳細(xì)地說(shuō)明，所以這里省略詳細(xì)的說(shuō)明。腳36與設(shè)在通用的培養(yǎng)皿的底上的腳同樣，是用來(lái)防止因皿主體20的底直接接觸在作業(yè)臺(tái)等上而發(fā)生的損傷等的。該腳36形成為外徑與內(nèi)底面32相同、按照90°具有間隙的環(huán)狀。開(kāi)口部40形成為直徑比頸縮部30大的圓筒形狀，外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同(這里是Φ35πιπι)。連結(jié)部50將頸縮部30的上端與開(kāi)口部40的下端連結(jié)。該連結(jié)部50具有從頸縮部30的側(cè)壁的上端大致水平地朝外側(cè)擴(kuò)大、逐漸向外側(cè)上方延伸的剖視圓弧狀的形狀。另外，在本發(fā)明中，所謂通用的培養(yǎng)皿，是指Φ35ι?πι、Φ 60mm> Φ 100mm、Φ 150mm等的作為通用品市售的培養(yǎng)皿。此外，在本發(fā)明中，所謂外徑或高度與通用的培養(yǎng)皿相同，只要是以能夠?qū)?yīng)于一般的設(shè)備儀器等的程度相同就可以，所述一般的設(shè)備儀器適合于該通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)。
[0028]支承部件60形成為環(huán)狀。該支承部件60外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同(這里是Φ35πιπι)。此外，支承部件60的下端與皿主體20的腳36的下端高度方向的位置一致。在支承部件60上設(shè)有突起62。
[0029]橋接部70在皿主體20與支承部件60之間按照90°設(shè)有4處，將皿主體20和支承部件60橋接。由此，形成由皿主體20、支承部件60和橋接部70包圍的間隙80。在橋接部70中，有將皿主體20的頸縮部30和支承部件60橋接的第I橋接部72、和不僅是頸縮部30也與連結(jié)部50橋接的第2橋接部74，將它們交替地配置。橋接部70的底與皿主體20的底(除了腳36以外)高度方向的位置相同。
[0030]2.培養(yǎng)套件
以下，使用附圖對(duì)包括上述培養(yǎng)皿10的培養(yǎng)套件的一例進(jìn)行說(shuō)明。圖5是培養(yǎng)套件15的立體圖，圖6是載體90的說(shuō)明圖。
[0031]培養(yǎng)套件15如圖5、圖6所示，具備培養(yǎng)皿10和載體90。關(guān)于培養(yǎng)皿10，由于已在上述“1.培養(yǎng)皿”中說(shuō)明，所以省略說(shuō)明。載體90是厚度為0.1mm以下(更優(yōu)選的是0.05mm以下)的聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯樹(shù)脂(PET)制的薄片，作為細(xì)胞粘接面的表面被親水處理。通過(guò)親水處理，而具有不依存于溫度的細(xì)胞粘接性。這里，所謂“具有不依存于溫度的細(xì)胞粘接性”，是指至少在鋪設(shè)于培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32上的溫度響應(yīng)性聚合物的臨界溫度附近(正負(fù)10°C以?xún)?nèi))不具有細(xì)胞粘接性和細(xì)胞剝離性明確地轉(zhuǎn)換的溫度。該載體90具備具有比培養(yǎng)皿10的頸縮部30的內(nèi)徑稍稍小的外徑的環(huán)狀部92、和在環(huán)狀部92的外側(cè)按照90°設(shè)置的4個(gè)耳部94。如果將環(huán)狀部92載置到培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32上，則內(nèi)底面32的一部在環(huán)狀部92的內(nèi)側(cè)露出。耳部94如圖6那樣在虛線部彎折而使用。該耳部94當(dāng)將環(huán)狀部92載置到培養(yǎng)皿10上時(shí)，沿著培養(yǎng)皿10的頸縮部30的側(cè)壁豎起，一部分伸出到側(cè)壁的上方。
[0032]3.細(xì)胞薄片的制作
以下，對(duì)使用包括培養(yǎng)皿10的培養(yǎng)套件15制作細(xì)胞薄片的操作的一例使用附圖進(jìn)行說(shuō)明。圖7是使用培養(yǎng)套件15的細(xì)胞薄片的制作方法的說(shuō)明圖。
[0033]在采取約Imm2的角膜環(huán)部組織后，通過(guò)胰蛋白酶處理從組織將細(xì)胞分散，調(diào)制細(xì)胞懸濁液。
[0034]在培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32上鋪設(shè)載體90 (圖7 (A))。并且，在鋪設(shè)了載體90的內(nèi)底面32上鋪設(shè)飼養(yǎng)細(xì)胞，播種細(xì)胞懸濁液(圖7 (B))。作為飼養(yǎng)細(xì)胞，使用通過(guò)絲裂霉素C或X射線照射等的不活化處理抑制了增殖能力的鼠纖維芽細(xì)胞。在細(xì)胞播種后，供給含有10v/v%FBS (胎牛血清)的DMEM/F12混合培養(yǎng)基作為培養(yǎng)用培養(yǎng)基，在飼養(yǎng)細(xì)胞的存在下培養(yǎng)角膜細(xì)胞。通過(guò)持續(xù)培養(yǎng)角膜細(xì)胞，在7天左右達(dá)到鋪滿狀態(tài)，形成培養(yǎng)角膜細(xì)胞的細(xì)胞薄片(圖7 (C))。在達(dá)到鋪滿狀態(tài)的時(shí)候，飼養(yǎng)細(xì)胞幾乎全部被從培養(yǎng)系統(tǒng)中排除。培養(yǎng)在培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32顯現(xiàn)細(xì)胞粘接性的37°C左右的溫度條件下進(jìn)行。因此，在使用培養(yǎng)套件15的培養(yǎng)中，在培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32露出的部分中細(xì)胞粘接在內(nèi)底面32上而增殖，在鋪設(shè)有載體90的部分中，細(xì)胞粘接在載體90的上表面上而增殖。此時(shí)，粘接在內(nèi)底面32上的細(xì)胞和粘接在載體90上的細(xì)胞超過(guò)載體90的厚度而結(jié)合，形成成為一體的細(xì)胞薄片。此時(shí)，如果載體90的厚度是0.1mm以下，則細(xì)胞容易超過(guò)載體的厚度而結(jié)合。另外，雖然省略了圖示，但在培養(yǎng)時(shí)，對(duì)培養(yǎng)皿10蓋上蓋而進(jìn)行培養(yǎng)。本實(shí)施方式的培養(yǎng)皿10由于開(kāi)口部40及支承部件60的外徑是與通用的培養(yǎng)皿相同的Φ 35mm，所以能夠原樣應(yīng)用適合于Φ35_的通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)的蓋(通用品)。此外，培養(yǎng)也可以根據(jù)需要而在中途進(jìn)行培養(yǎng)基更換或繼代操作。在培養(yǎng)中，也可以使用自動(dòng)進(jìn)行溫度管理或培養(yǎng)基更換等的自動(dòng)培養(yǎng)裝置。另外，這樣的裝置一般是適合于通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)的，從其偏離的培養(yǎng)皿不能使用的情況較多，需要準(zhǔn)備專(zhuān)用夾具等的對(duì)策。特別是，在把持培養(yǎng)皿而進(jìn)行培養(yǎng)皿的移動(dòng)或培養(yǎng)基更換等的類(lèi)型的裝置中，如果外徑與通用的培養(yǎng)皿不一致則不能把持培養(yǎng)皿、不能使用的情況較多。本實(shí)施方式的培養(yǎng)皿10由于開(kāi)口部40及支承部件60的外徑是與通用的培養(yǎng)皿相同的Φ 35mm,所以能夠?qū)@樣的裝置原樣應(yīng)用。
[0035]4.細(xì)胞薄片的包裝
以下，對(duì)將在上述“3.細(xì)胞薄片的制作”中制作出的細(xì)胞薄片連同培養(yǎng)皿10 —起包裝的操作進(jìn)行說(shuō)明。這里，對(duì)使用圖8所示的包裝容器100包裝的情況進(jìn)行說(shuō)明。
[0036]首先，對(duì)包裝容器100進(jìn)行說(shuō)明。包裝容器100是用來(lái)將細(xì)胞薄片連同培養(yǎng)皿10一起包裝而進(jìn)行保存或輸送的容器，具備容器主體110、適配器170和蓋體140。
[0037]容器主體110是能夠儲(chǔ)存輸送液等液體的容器，是在側(cè)壁上具有多個(gè)階差的杯狀的容器。具體而言，從內(nèi)底面112朝向上方，形成有第I階差部114、第2階差部116、第3階差部118。在該容器主體110的側(cè)壁上，形成有在上下方向上延伸的一對(duì)縱槽124、125。一對(duì)縱槽124、125相互面對(duì)而形成，從內(nèi)底面112經(jīng)過(guò)第I階差部114達(dá)到第2階差部116。在第3階差部118的外周側(cè)，形成有隔開(kāi)了較小的階差的水平面120。
[0038]適配器170用來(lái)將培養(yǎng)皿10以從容器主體110的內(nèi)底面11離開(kāi)間隔的狀態(tài)保持。適配器170具備圓筒172、和設(shè)在圓筒172的上端的凸緣174。圓筒172是在其內(nèi)側(cè)固定培養(yǎng)皿10的部位，內(nèi)徑形成得比培養(yǎng)皿10的外徑稍大。此外，圓筒172在下端設(shè)有折入到內(nèi)側(cè)的爪186，使得培養(yǎng)皿10不向下方錯(cuò)移。凸緣174彎曲為凹狀，具備俯視的形狀是將圓用兩個(gè)平行的弦切掉的形狀的彎曲部176、和從兩個(gè)弦垂直地豎起的I對(duì)縱壁178、179。彎曲部176的外周為與容器主體110的第2階差部116的內(nèi)周大致相同的形狀。此外，在彎曲部176的背側(cè)，設(shè)有具有水平的底面的載置爪188，以便穩(wěn)定地載置到容器主體110的第I階差部114的上表面上?？v壁178、179分別具備流通用缺口 180、181。該適配器170具備橫跨圓筒172和凸緣174的兩方將內(nèi)外貫通而設(shè)置的流通孔182、及設(shè)在圓筒172的下端處的流通狹縫184。另外，設(shè)在培養(yǎng)皿10的支承部件60上的突起62鉤掛在流通狹縫184上，限制培養(yǎng)皿10的向上方的移動(dòng)。
[0039]蓋體140將容器主體110的開(kāi)口封堵。蓋體140具備底面142、和設(shè)在底面142的外周側(cè)的水平面144，底面142和水平面144用壁面146連結(jié)。此外,蓋體140具備從底面142隆起的捏手148。在底面142上，平行地形成有多個(gè)向下凸的線狀的加強(qiáng)用凹部150。該蓋體140的外周為與容器主體110的第3階差部118的外周大致相同的形狀。
[0040]使用這樣的包裝容器100，如以下這樣連同培養(yǎng)皿10 —起將細(xì)胞薄片包裝。首先，將制作出的細(xì)胞薄片用清洗液清洗多次。接著，將具有細(xì)胞薄片的原狀的培養(yǎng)皿10推入到適配器170的圓筒172中而固定，將該適配器170安設(shè)到容器主體110內(nèi)。如果將適配器170安設(shè)到容器主體110中，則圓筒172進(jìn)入到容器主體110的內(nèi)底面112與第I階差部114之間，凸緣174的彎曲部176進(jìn)入到第2階差部116的內(nèi)周，設(shè)在彎曲部176的底面上的載置爪188被載置到第I階差部114上。此時(shí)，I對(duì)的縱壁178、179與設(shè)在容器主體110上的I對(duì)縱槽124、125對(duì)置，在適配器170與容器主體110之間形成將適配器170的上側(cè)的區(qū)域與下側(cè)的區(qū)域連結(jié)的通路。接著，從在縱壁178、179與縱槽124、125之間形成的通路向適配器170的下側(cè)的區(qū)域注入輸送液，注入直到其水位成為容器主體110的第2階差部116的上表面的高度。輸送液如果其水位超過(guò)適配器170的流通用缺口 180、181，則經(jīng)由流通用缺口 180、181也向適配器170的上側(cè)的區(qū)域進(jìn)入。在輸送液的注入時(shí)等，有在培養(yǎng)皿10的下方形成空氣積存部的情況，但這樣的空氣除了形成于縱壁178、179與縱槽124、125之間的通路以外，還能夠經(jīng)過(guò)設(shè)在適配器170上的流通孔182及流通狹縫184、設(shè)在培養(yǎng)皿10的腳36與腳36之間的間隙、以及皿主體20與支承部件60之間的間隙80等向適配器170的上方排出。輸送液的注入結(jié)束后，用蓋體140蓋住。如果用蓋體140將容器主體110蓋住，則底面142和壁面146進(jìn)入到第3階差部118的內(nèi)周，水平面144被載置到第3階差部118的上表面上,水平面144的上表面和水平面120的上表面成為大致同面。然后，在包裝容器100的上方載置密閉薄片210 (圖中用陰影網(wǎng)格表示)，通過(guò)熱熔接到包裝容器100的上表面上，得到圖9所示那樣的包裝體200。密閉薄片210具備作為從包裝容器100剝下時(shí)的把手的耳212。
[0041]5.細(xì)胞薄片的取出
以下，對(duì)從由上述“4.細(xì)胞薄片的包裝”得到的包裝體200將移植用的細(xì)胞薄片取出的操作進(jìn)行說(shuō)明。
[0042]首先，將包裝體200的密閉薄片210從包裝容器100剝下，將蓋體140從容器主體110拆下，從容器主體110將適配器170取出。接著，在將培養(yǎng)皿10固定在適配器170上的原狀下，通過(guò)將其傾斜，從流通用缺口 180、181將培養(yǎng)皿10內(nèi)的不需要的輸送液排出。另夕卜，關(guān)于輸送液的排出，也可以不將適配器170傾斜，而使用注射器或吸管排出。
[0043]接著，從培養(yǎng)皿10將細(xì)胞薄片取出。關(guān)于以后的操作，使用圖10進(jìn)行說(shuō)明。首先，通過(guò)將培養(yǎng)皿10冷卻到201左右，使培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32成為細(xì)胞剝離性，將內(nèi)底面32和細(xì)胞薄片直接接觸的部分剝離。此時(shí)，是在作為不具有溫度響應(yīng)性的細(xì)胞粘接性的薄片的載體90上粘接著細(xì)胞薄片的原狀。接著，把持載體90的耳部94，連同載體90—起，將形成在其上的細(xì)胞薄片取出(圖10 (八接著，將細(xì)胞薄片中的在載體90的環(huán)狀部92的內(nèi)側(cè)部分處形成的部分用手術(shù)刀切下(圖10 (8)),用于移植等。
[0044]在以上說(shuō)明的實(shí)施方式的培養(yǎng)皿10中，由于開(kāi)口部40的外徑及支承部件60的外徑是與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同的0 35臟，所以能夠?qū)?yīng)于適合于35臟的通用品而設(shè)計(jì)的設(shè)備儀器。此外，在對(duì)培養(yǎng)皿10鋪設(shè)溫度響應(yīng)性聚合物時(shí)，也能夠原樣使用適合于小35臟的通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)的設(shè)備。
[0045]此外，由于用￠25111111的內(nèi)底面32進(jìn)行培養(yǎng)，所以能夠得到比用小35臟的通用品進(jìn)行培養(yǎng)的情況小的細(xì)胞薄片，具有以下這樣的優(yōu)點(diǎn)。在上述角膜細(xì)胞的培養(yǎng)中，由于細(xì)胞薄片是￠25111111左右就足夠，所以如果用￠35111111的通用品進(jìn)行培養(yǎng)，則為了成為鋪滿狀態(tài)而花費(fèi)時(shí)間、或播種較多的細(xì)胞、或在多余的區(qū)域中形成細(xì)胞薄片。另一方面，如果使用培養(yǎng)皿10，則能夠有效率地得到細(xì)胞薄片。
[0046]進(jìn)而，由于在有底圓筒形狀的頸縮部30上連結(jié)著直徑大的開(kāi)口部40，所以細(xì)胞薄片比較容易取出。關(guān)于這一點(diǎn)，在沒(méi)有開(kāi)口部40的有底圓筒形狀的培養(yǎng)容器中，也可以想到只要容器的深度較淺，細(xì)胞薄片就能夠容易取出。但是，在細(xì)胞的培養(yǎng)中需要某種程度的培養(yǎng)液的液量，在操作時(shí)在容器的深度上需要余量以使培養(yǎng)液不會(huì)溢出，所以難以使容器變淺。此外，只要對(duì)直徑大的開(kāi)口部40供給培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液就必然向直徑小的頸縮部30流入，所以培養(yǎng)液向培養(yǎng)面的供給較容易。
[0047]進(jìn)而，由于支承部件60是形成為使外徑與通用的培養(yǎng)皿一致的環(huán)狀的支承部件，在與頸縮部30之間形成有間隙80，所以能夠?qū)⒌玫降募?xì)胞薄片連同培養(yǎng)皿10 —起在浸潰于輸送液中的狀態(tài)下進(jìn)行輸送，當(dāng)從輸送液將培養(yǎng)皿10取出而操作細(xì)胞薄片時(shí)等，輸送液不易殘留在支承部件60中。因此，能夠不擔(dān)心輸送液的滴下等而進(jìn)行操作。
[0048]此外，皿主體20與通用的培養(yǎng)皿高度相同，培養(yǎng)皿10作為整體而與通用的培養(yǎng)皿高度相同。因此，更容易對(duì)應(yīng)于適合于通用的培養(yǎng)皿而設(shè)計(jì)的一般的設(shè)備儀器等。
[0049]此外，培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32鋪設(shè)有在規(guī)定的臨界溫度下細(xì)胞粘接性和細(xì)胞剝離性轉(zhuǎn)換的溫度響應(yīng)性聚合物，進(jìn)而，將具有不依存于溫度的細(xì)胞粘接性、當(dāng)載置時(shí)內(nèi)底面32的一部分露出那樣的形狀的載體90載置于內(nèi)底面32上而使用。因此，細(xì)胞薄片的培養(yǎng)和取出較容易。此外，由于載體90具備具有比培養(yǎng)皿10的頸縮部30的內(nèi)徑稍稍小的外徑的環(huán)狀部92，所以能夠在外周整體粘接在載體90上的狀態(tài)下將細(xì)胞薄片取出。因此，能夠抑制細(xì)胞薄片的收縮及變形等。此外，由于載體90的耳部94伸出到頸縮部30的側(cè)壁的上方，所以容易把持載體94，更容易將細(xì)胞薄片取出。
[0050]此外，通過(guò)使用包裝容器100那樣的包裝容器，能夠連同培養(yǎng)皿10 —起包裝而進(jìn)行保存及輸送。在該包裝容器100中，也可以代替培養(yǎng)皿10而使用通用的培養(yǎng)皿。
[0051]另外，本發(fā)明完全不限定于上述實(shí)施方式，當(dāng)然只要屬于本發(fā)明的技術(shù)范圍，就能夠以各種形態(tài)實(shí)施。
[0052]例如，在上述實(shí)施方式中，支承部件60是環(huán)狀的支承部件，在與頸縮部30之間形成有間隙80，但只要外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同就可以，并不限定于此。例如，支承部件60也可以是在與頸縮部30之間不形成間隙80的圓盤(pán)形狀，也可以由從頸縮部30以放射狀延伸的多個(gè)棒狀部件構(gòu)成。這樣，也能夠?qū)?yīng)于適合于通用品而設(shè)計(jì)的設(shè)備儀器。
[0053]在上述實(shí)施方式中，培養(yǎng)皿10為聚苯乙烯樹(shù)脂制，但并不限定于此。例如，可以使用聚氯乙烯樹(shù)脂、聚乙烯樹(shù)脂、丙烯酸樹(shù)脂、聚丙烯樹(shù)脂、聚甲基戊烯樹(shù)脂、氟樹(shù)脂、苯酚樹(shù)月旨、尿素樹(shù)脂、環(huán)氧樹(shù)脂、三聚氰胺樹(shù)脂、硅樹(shù)脂等各種樹(shù)脂。此外，培養(yǎng)皿10整體為透明，以便容易確認(rèn)細(xì)胞的狀態(tài)，但并不限定于此。例如，只要頸縮部30的底是透明的，就能夠進(jìn)行顯微鏡觀察，所以其以外的部分也可以不是透明的。
[0054]在上述實(shí)施方式中，假設(shè)開(kāi)口部40和支承部件60的外徑是Φ35πιπι，內(nèi)底面32的直徑是Φ 25mm,高度是12mm,但并不限定于此。例如,在細(xì)胞薄片的尺寸是Φ 1mm就足夠的情況下，內(nèi)底面32的直徑只要設(shè)為(MOmm就可以。此外，在需要Φ40πιπι的細(xì)胞薄片的情況下，內(nèi)底面32的直徑只要設(shè)為Φ40πιπι就可以，在此情況下，例如可以將開(kāi)口部40和支承部件60的外徑設(shè)為Φ60mm,以便能夠?qū)?yīng)于適合于Φ60mm的通用品的設(shè)備。高度既可以與通用品相同，也可以不同。
[0055]在上述實(shí)施方式的培養(yǎng)皿中，假設(shè)內(nèi)底面32鋪設(shè)有溫度響應(yīng)性聚合物，但并不限定于此。例如，也可以代替溫度響應(yīng)性聚合物的鋪設(shè)，而通過(guò)細(xì)胞粘接性聚合物的鋪設(shè)或親水處理等表面處理單單賦予細(xì)胞粘接性。通過(guò)這樣，也能夠培養(yǎng)角膜細(xì)胞等粘接依存性細(xì)胞。在此情況下，為了將細(xì)胞剝離而進(jìn)行酵素處理，由此能夠?qū)⒓?xì)胞薄片剝離。表面處理只要是能夠得到細(xì)胞粘接性的處理，是怎樣的處理都可以，例如可以舉出骨膠原、纖連蛋白等粘接因子或由溫度響應(yīng)性聚合物等化學(xué)材料進(jìn)行的涂層、通過(guò)離子照射或等離子處理等進(jìn)行的表面改性等。
[0056]在上述實(shí)施方式中，橋接部70按照90°設(shè)有4處，但并不限定于此。例如也可以不以等間隔設(shè)置，也可以設(shè)置3處以下或5處以上。此外，為具備將皿主體20的頸縮部30的側(cè)面與支承部件60橋接的第I橋接部72、和不僅是頸縮部30的側(cè)面、與連結(jié)部50的下表面也橋接的第2橋接部74、它們交替地配置的結(jié)構(gòu)，但也可以?xún)H具備第I橋接部72，也可以?xún)H具備第2橋接部74。此外，它們也可以不是交替地配置。另外，由于第I橋接部72有液體不易滯留在培養(yǎng)皿10的底上的優(yōu)點(diǎn)，第2橋接部74有容易提高強(qiáng)度的優(yōu)點(diǎn)，所以只要根據(jù)使用方法等適當(dāng)選擇就可以。此外，橋接部70的底與皿主體20的底(除了腳36以外)高度方向的位置相同，但并不限定于此。例如，也可以與腳36的下端高度方向的位置相同。
[0057]在上述實(shí)施方式中，在皿主體20的底上設(shè)有腳36，但也可以不具有腳36。此外，腳36按照90°具有間隙，但也可以不具有間隙，間隙也可以不是等間隔地設(shè)置，間隙的間隔也可以不是90°。
[0058]在上述實(shí)施方式中，使連結(jié)部50的形狀為從頸縮部30的側(cè)壁的上端大致水平地朝向外側(cè)擴(kuò)大、逐漸向外側(cè)上方延伸的剖視圓弧狀，但并不限定于此。例如，也可以從頸縮部30的側(cè)壁的上端朝向開(kāi)口部40的上端為平緩的斜坡形狀，也可以朝向頸縮部30的側(cè)壁的上端和開(kāi)口部40的上端的中途地點(diǎn)為平緩的斜坡形狀，也可以為從那里到開(kāi)口部40的上端垂直地豎立的形狀。
[0059]在上述實(shí)施方式中，進(jìn)行角膜細(xì)胞的培養(yǎng)，但培養(yǎng)的細(xì)胞并不限定于此。例如，可以適當(dāng)?shù)赜糜谄つw或口腔粘膜等粘接依存性細(xì)胞的培養(yǎng)。此外，也可以用于細(xì)胞的培養(yǎng)以外的用途。
[0060]在上述實(shí)施方式中，鋪設(shè)使用載體90，但并不一定需要鋪設(shè)載體90。此外，載體90具備具有比培養(yǎng)皿10的頸縮部30的內(nèi)徑稍稍小的外徑的環(huán)狀部92，但并不限定于這樣的結(jié)構(gòu)，只要在將載體90載置在培養(yǎng)皿10的內(nèi)底面32上時(shí)，內(nèi)定面32的一部分露出就可以。此外，載體90將耳部94按照90。具備4個(gè)耳部94，但也可以不具備耳部94，也可以不是等間隔地具備，也可以具備3個(gè)以下或5個(gè)以上。
[0061]在上述實(shí)施方式中，在將得到的細(xì)胞薄片用包裝容器100包裝后取出使用，但也可以不進(jìn)行這樣的包裝。此外，也可以用包裝容器100以外的包裝容器包裝。
[0062]本申請(qǐng)以2012年5月31日提出申請(qǐng)的日本專(zhuān)利申請(qǐng)第2012 — 124818號(hào)為基礎(chǔ)主張優(yōu)先權(quán)，在本說(shuō)明書(shū)中通過(guò)引用而包含其全部?jī)?nèi)容。
[0063]產(chǎn)業(yè)上的可利用性
本發(fā)明能夠在生物體外(111 ^1^0)培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中使用。
[0064]附圖標(biāo)記說(shuō)明
10培養(yǎng)皿，15培養(yǎng)套件，20皿主體，30頸縮部，32內(nèi)底面，36腳，40開(kāi)口部，50連結(jié)部，60支承部件，62突起，70橋接部，72第1橋接部，74第2橋接部，80間隙，90載體，92環(huán)狀部，94耳部，100包裝容器，110容器主體，112內(nèi)底面，114第1階差部，116第2階差部，118第3階差部，120水平面，124、125縱槽，140蓋體，142底面，144水平面，146壁面，148捏手，150加強(qiáng)用凹部，170適配器，172圓筒，174凸緣，176彎曲部，178、179縱壁，180、181流通用缺口，182流通孔，184流通狹縫，186爪，188載置爪，200包裝體，210密閉薄片，212耳。
【權(quán)利要求】
1.一種培養(yǎng)皿,其特征在于， 具備皿主體和支承部件； 所述皿主體將頸縮部和開(kāi)口部經(jīng)由連結(jié)部連結(jié)，所述頸縮部為內(nèi)底面成為培養(yǎng)面的有底圓筒形狀且直徑小，所述開(kāi)口部為圓筒形狀且直徑大； 所述支承部件設(shè)在上述頸縮部的底面的外側(cè)； 上述開(kāi)口部的外徑及上述支承部件的外徑與通用的培養(yǎng)皿的外徑相同。
2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)皿，其特征在于， 上述支承部件是環(huán)狀的支承部件，所述環(huán)狀的支承部件形成為外徑與上述通用的培養(yǎng)皿的外徑一致，在上述支承部件與上述頸縮部之間形成有間隙。
3.如權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)皿，其特征在于， 上述培養(yǎng)皿的高度與通用的培養(yǎng)皿的高度相同。
4.一種培養(yǎng)套件，其特征在于， 具備:權(quán)利要求1?3中任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)皿；和 載體，載置在該培養(yǎng)皿的內(nèi)底面上，以使上述內(nèi)底面的一部分露出； 上述培養(yǎng)皿的內(nèi)底面被溫度響應(yīng)性聚合物覆蓋，所述溫度響應(yīng)性聚合物以規(guī)定的臨界溫度為邊界，細(xì)胞粘接性和細(xì)胞剝離性轉(zhuǎn)換； 上述載體具有不依存于溫度的細(xì)胞粘接性。
5.如權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)套件，其特征在于， 上述載體具備環(huán)狀部和耳部，所述環(huán)狀部具有比上述培養(yǎng)皿的頸縮部的內(nèi)徑稍稍小的外徑，所述耳部設(shè)在該環(huán)狀部的外側(cè)，當(dāng)將上述環(huán)狀部載置在上述培養(yǎng)皿上時(shí)，所述耳部沿著上述培養(yǎng)皿的頸縮部的側(cè)壁豎起，一部分伸出到該側(cè)壁的上方。
【文檔編號(hào)】C12M3/00GK104334713SQ201380028128
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月31日
【發(fā)明者】淡海陽(yáng)子, 井家益和, 杉浦誠(chéng), 諏訪裕子, 小笠原隆廣 申請(qǐng)人:株式會(huì)社日本組織工程