一種篩選耐冷水稻品系的專用引物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種引物對(duì)PB01，所述引物對(duì)中的一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID №：1所示的核苷酸序列，所述引物對(duì)中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID №：2所示的核苷酸序列。本發(fā)明提供的引物對(duì)及篩選含有特定孕穗期耐冷基因的水稻材料的方法，可應(yīng)用于輔助選育抗逆水稻品種，可縮短育種周期，且成本低廉、周期短、容易推廣、易于操作。
【專利說(shuō)明】一種篩選耐冷水稻品系的專用引物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種篩選耐冷水稻品系的專用引物。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻是我國(guó)和世界上的主要糧食作物之一，是我國(guó)60%以上人口的主糧。全世界 水稻播種面積約1. 4億hm2,由于全球氣候變化異常，極端氣候發(fā)生頻繁，全世界有1500 萬(wàn)hm2以上的稻作受到低溫威脅。我國(guó)每年因低溫冷害損失稻谷300?500萬(wàn)噸。秈稻 和粳稻是亞洲栽培稻的兩個(gè)主要亞種類型，據(jù)研究表明，粳稻的耐冷性普遍強(qiáng)于秈稻。
[0003] 我國(guó)云南地處西南高原，由于海拔高，水稻生殖生長(zhǎng)期間晝夜平均氣溫低，自然演 化了豐富的孕穗期耐冷材料。粳稻昆明小白谷在孕穗期處于17°c -18°c以下還能正常開(kāi)花 結(jié)實(shí)，是研究水稻孕穗期耐冷優(yōu)異的遺傳資源。徐麗明的等報(bào)道了來(lái)自昆明小白谷的8個(gè) QTL能提高冷敏感品種十和田的耐冷性，進(jìn)一步證明了利用從我國(guó)地方稻種中挖掘耐冷基 因的可行性。
[0004] 開(kāi)發(fā)與篩選耐冷水稻品系及耐冷相關(guān)基因，對(duì)加速育種進(jìn)度，降低育種成本，縮短 育種周期，提高育種效率具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種引物對(duì)，名稱為PB01。
[0006] 本發(fā)明所提供的引物對(duì)，所述引物對(duì)具有下述核苷酸序列之一：
[0007] 1)所述引物對(duì)中的一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID N2 :1所示的核苷 酸序列，所述引物對(duì)中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID N2:2所示的核苷酸 序列；
[0008] 其中，序列表中的SEQ ID Ns :1由18個(gè)核苷酸組成，序列表中的SEQ ID Ns :2由 20個(gè)核苷酸組成。
[0009] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)耐冷相關(guān)基因的試劑盒或PCR試劑，包 括所述的引物對(duì)。
[0010] 本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供一種DNA片段，是用所述引物對(duì)擴(kuò)增水稻得到的。
[0011] 本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供所述引物對(duì)、所述試劑盒或PCR試劑在檢測(cè)耐冷相關(guān) 基因或耐冷植物品系中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供所述引物對(duì)、所述試劑盒或PCR試劑、所述DNA片段在 制備檢測(cè)耐冷相關(guān)基因或耐冷植物品系試劑盒中的應(yīng)用。
[0013] 所述應(yīng)用中，所述植物具體為水稻。
[0014] 所述水稻具體為粳稻。
[0015] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種輔助鑒定待測(cè)水稻是否為耐冷水稻的方法，包括 如下步驟：以待測(cè)水稻基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，若所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大 小為800bp，則判定所述待測(cè)水稻候選為耐冷水稻。
[0016] 本發(fā)明所述的耐冷具體指某水稻品種孕穗期間在17-18°c氣溫下結(jié)實(shí)率高于冷敏 感品種"十和田"的結(jié)實(shí)率；所述"十和田"的結(jié)實(shí)率為21. 9% ;所鑒定水稻品種處理后的結(jié) 實(shí)率越高，說(shuō)明耐冷性越強(qiáng)。
[0017] 本發(fā)明提供的引物對(duì)及篩選含有特定孕穗期耐冷基因的水稻材料的方法，可應(yīng)用 于輔助選育抗逆水稻品種，可縮短育種周期，且成本低廉、周期短、容易推廣、易于操作。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為利用引物PB01對(duì)20份材料進(jìn)行基因型檢測(cè)的結(jié)果，其中K表示與昆明小 白谷一樣的條帶，T表示與十和田一樣的條帶。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0020] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0021] 實(shí)施例1、利用專用引物PB01篩選耐冷水稻品系
[0022] (一）引物PB01的制備
[0023] 人工合成下述表1所示的引物序列。
[0024] 表 1
[0025]

【權(quán)利要求】
1. 一種引物對(duì)，所述引物對(duì)具有下述核苷酸序列之一： 1) 所述引物對(duì)中的一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID N2:l所示的核苷酸序 列，所述引物對(duì)中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中SEQ ID N2:2所示的核苷酸序 列； 2) 在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQ ID Ns :1或SEQ ID Ns :2限定的DNA序列雜交 的核苷酸序列； 3) 與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性，且能擴(kuò)增出耐冷相關(guān)基因的DNA 序列；具體的，所述同源性為95%以上；再具體的為96%以上；再具體的為97%以上；再具體 的為98%以上；再具體的為99%以上。
2. -種用于檢測(cè)耐冷相關(guān)基因的試劑盒或PCR試劑，包括權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。
3. -種DNA片段，是用權(quán)利要求1所述引物對(duì)擴(kuò)增水稻得到的。
4. 權(quán)利要求1所述的引物對(duì)、權(quán)利要求2所述的試劑盒或PCR試劑、或權(quán)利要求4所述 DNA片段在檢測(cè)耐冷相關(guān)基因或輔助篩選耐冷植物品系中的應(yīng)用。
5. 權(quán)利要求1所述的引物對(duì)、權(quán)利要求2所述的試劑盒或PCR試劑、或權(quán)利要求4所述 DNA片段在制備檢測(cè)耐冷相關(guān)基因或篩選耐冷植物品系試劑盒中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物具體為水稻。
7. -種輔助鑒定待測(cè)水稻是否為耐冷水稻的方法，包括如下步驟：以待測(cè)水稻基因組 DNA為模板，用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增，若所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為800bp，則判定 所述待測(cè)水稻候選為耐冷水稻。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK104450687SQ201310428665
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】李自超, 周雷, 潘英華, 張洪亮, 李金杰 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)