酶濃縮與分析的制作方法【專(zhuān)利摘要】一種制備用于進(jìn)行分析的樣品的方法，所述方法包括：提供包含糖蛋白的輸入樣品，將糖蛋白從所述輸入樣品捕獲到固體載體上，且洗滌所述樣品載體，以除去所述輸入樣品的未結(jié)合部分?！緦?zhuān)利說(shuō)明】酶濃縮與分析[0001]I相關(guān)申請(qǐng)[0002]本專(zhuān)利申請(qǐng)涉及且要求2011年5月10日提交的標(biāo)題為“EnzymeConcentrationinNewBornScreeningAssays”的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)第61/484，827號(hào)的優(yōu)先權(quán),所述臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)弓I用并入本文。[0003]2發(fā)明領(lǐng)域[0004]本發(fā)明涉及濃縮酶的方法且涉及濃縮的酶在酶法測(cè)定中的應(yīng)用。[0005]3背景[0006]滴致動(dòng)器(dropletactuator)通常包括配置為形成用于進(jìn)行滴操作的表面或縫隙的一個(gè)或多個(gè)基片(substrate)。一個(gè)或多個(gè)基片建立用于進(jìn)行滴操作的滴操作表面或縫隙，且還可以包括電極排列，以進(jìn)行滴操作。滴操作基片或在基片之間的縫隙可以被涂覆或填充有不與形成滴的液體相混溶的填充流體。[0007]滴致動(dòng)器被用于各種應(yīng)用中，包括分子診斷分析，比如酶法測(cè)定和免疫分析。在一種應(yīng)用中，酶法測(cè)定和免疫分析被用作常規(guī)測(cè)試程序的一部分，以測(cè)試新生兒的各種遺傳性疾病。例如，酶法測(cè)定可以被用于測(cè)試各種溶酶體貯積病(LSD)。在新生兒測(cè)試程序中靶向的許多遺傳性疾病與糖蛋白分子(例如溶酶體酶)的缺陷有夫，所述糖蛋白分子僅可以代表復(fù)雜的生物樣品比如血液中的總的大分子的一小部分。用于新生兒測(cè)試的樣品通常是通過(guò)扎新生兒的腳后跟來(lái)收集的，以獲得少量的血液(通常，兩滴至三滴)，以填充濾紙卡上的幾個(gè)圈。從DBS樣品中穿透(punch)樣本(S卩，使用當(dāng)前的技術(shù)，每進(jìn)行一次測(cè)試就穿透一次)且根據(jù)特定的分析操作流程來(lái)操縱。由于血液樣品被點(diǎn)樣到固體介質(zhì)上且干燥，它們必須在分析之前重構(gòu)(reconstituted),其是需要將樣品稀釋到合適的液體介質(zhì)中的步驟。對(duì)増加NBS分析中靶標(biāo)糖蛋白分子的檢測(cè)靈敏度的改進(jìn)方法存在需要。[0008]4發(fā)明簡(jiǎn)述[0009]一種制備用于進(jìn)行分析的樣品的方法，所述方法包括:提供包含糖蛋白的輸入樣品；將糖蛋白從所述輸入樣品捕獲到固體載體上；且洗滌所述樣品載體，以除去所述輸入樣品的未結(jié)合部分。在某些實(shí)施方式中，方法包括從固體載體中洗脫糖蛋白，以產(chǎn)生輸出樣品。在某些實(shí)施方式中，方法步驟是在油中的ー個(gè)或多個(gè)滴中進(jìn)行的。在某些實(shí)施方式中，洗脫是通過(guò)固體載體與ー種或多種糖模擬物(glycomimetic)接觸來(lái)完成的。在某些實(shí)施方式中，洗脫是通過(guò)使固體載體和捕獲的糖蛋白之間的可斷裂鍵斷裂來(lái)完成的。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品包括選自由以下組成的組的樣品物質(zhì):血液、血漿、血清、眼淚、唾液和尿。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品包括新鮮血液。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品包括重構(gòu)的干血。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品主要由血衆(zhòng)組成。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品包括人的臨床樣品。在某些實(shí)施方式中，固體載體包括伴刀豆球蛋白A。在某些實(shí)施方式中，固體載體包括磁性響應(yīng)珠子。在某些實(shí)施方式中，捕獲的糖蛋白包括一種或多種酶。在某些實(shí)施方式中，捕獲的糖蛋白包括ー種或多種糖苷酶。[0010]本發(fā)明還提供進(jìn)行分析的方法，包括:進(jìn)行酶濃縮方法，將固體載體暴露到底物且測(cè)量底物的酶改性。在某些實(shí)施方式中，在將酶底物添加到輸出樣品且測(cè)量底物的酶改性之前，酶被洗脫或以其它方式與固體載體分離。通常，底物的改性與可能存在于輸出樣品中的酶的存在和/或活性有夫。在某些實(shí)施方式中，酶是溶酶體酶。在某些實(shí)施方式中，酶是糖基化的酶。在某些實(shí)施方式中，方法是在樣品收集點(diǎn)處進(jìn)行的。在某些實(shí)施方式中，底物包含糖苷底物。在某些實(shí)施方式中，底物在接觸感興趣的酶時(shí)釋放可檢測(cè)物(detectable)。在某些實(shí)施方式中，底物包括在接觸感興趣的酶時(shí)釋放熒光團(tuán)的糖苷底物。在某些實(shí)施方式中，底物包含糖苷底物。在某些實(shí)施方式中，樣品收集點(diǎn)是在受試者在場(chǎng)的情況下。在某些實(shí)施方式中，輸入樣品是從受試者收集的且立即裝載到滴致動(dòng)器上并立即進(jìn)行方法。[0011]本發(fā)明還提供計(jì)算機(jī)可讀的介質(zhì)，所述介質(zhì)被編程以使滴致動(dòng)器進(jìn)行方法步驟中任ー個(gè)。ー種系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括滴致動(dòng)器，所述滴致動(dòng)器被聯(lián)接到計(jì)算機(jī)且受計(jì)算機(jī)的控制，所述計(jì)算機(jī)被編程以使滴致動(dòng)器進(jìn)行方法的方法步驟中任ー個(gè)。[0012]5定義[0013]如本文所使用的，以下術(shù)語(yǔ)具有所說(shuō)明的意義。[0014]關(guān)于ー個(gè)或多個(gè)電極的“激活”是指影響在滴的存在下可導(dǎo)致滴操作的一個(gè)或多個(gè)電極的電氣狀態(tài)的變化。電極的激活可以用交流電或直流電來(lái)完成。可以使用任何合適的電壓。例如，電極可以用如下電壓來(lái)激活，所述電壓大于約150V，或大于約200V，或大于約250V，或從約275V到約375V，或約300V。在使用交流電的情況下，可以采用任何合適的頻率。例如，電極可以用具有從約IHz到約100Hz，或從約IOHz至約60Hz，或從約20Hz至約40Hz，或約30Hz的頻率的交流電來(lái)激活。[0015]關(guān)于滴致動(dòng)器上的珠子，“珠子”是指能夠與滴致動(dòng)器上或在滴致動(dòng)器附近的滴相互作用的任何珠子或粒子。珠子可以是許多形狀中的任何ー種，比如球形、大體球形、蛋形、圓盤(pán)形、立方形、無(wú)定形及其它三維形狀。例如，珠子能夠在滴致動(dòng)器上的滴中經(jīng)歷滴操作，或以允許滴致動(dòng)器上的滴接觸滴致動(dòng)器上的珠子和/或接觸不在滴致動(dòng)器的珠子的方式，以其它方式關(guān)于滴致動(dòng)器被配置。珠子可以被設(shè)置在滴中、在滴操作縫隙中或在滴操作表面上。珠子可以被設(shè)置在儲(chǔ)存器(reservoir)中，所述存儲(chǔ)器在滴操作縫隙的外部或遠(yuǎn)離滴操作表面被定位，且儲(chǔ)存器可以與允許包含珠子的滴被帶入到滴操作縫隙中或帶入到與滴操作表面接觸的流體路徑相關(guān)聯(lián)。珠子可以用各種材料制成，包括例如樹(shù)脂和聚合物。珠子可以是任何合適的尺寸，包括例如微米珠子(microbead)、微米粒子(microparticle)、納米珠子(nanobead)和納米粒子(nanoparticle)。在一些情況下，珠子是磁性響應(yīng)的；在其它情況下，珠子沒(méi)有顯著的磁性響應(yīng)。對(duì)于磁性響應(yīng)的珠子，磁性響應(yīng)材料可以構(gòu)成基本上整個(gè)珠子、珠子的一部分或僅珠子的ー種組分。除了其他部分，珠子的剰余部分可以包括聚合材料、涂層和允許分析試劑的附著的部分。合適的珠子的實(shí)例包括流式細(xì)胞儀微米珠子、聚苯こ烯微米粒子和納米粒子、官能化的聚苯こ烯微米粒子和納米粒子、涂覆的聚苯こ烯微米粒子和納米粒子、ニ氧化娃微米珠子、突光微米球和納米球、官能化的熒光微米球和納米球、涂覆的熒光微米球和納米球、染顏色的微米粒子和納米粒子、磁性微米粒子和納米粒子、超順磁性微米粒子和納米粒子(例如，可從InvitrogenGroup,Carlsbad,CA得到的DYNABEADS'U粒子)、熒光微米粒子和納米粒子、涂覆的磁性微米粒子和納米粒子、鐵磁性的微米粒子和納米粒子、涂覆的鐵磁性微米粒子和納米粒子；及在2005年11月24日公布的標(biāo)題為“Multiplexflowassayspreferablywithmagneticparticlesassolidphase”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050260686號(hào)、2003年7月17日公布的標(biāo)題為“Encapsulationofdiscretequantaoffluorescentparticles，，的美國(guó)專(zhuān)利公布第20030132538號(hào)、2005年6月2日公布的標(biāo)題為“MultiplexedAnalysisofClinicalSpecimensApparatusandMethod”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050118574號(hào)、2005年12月15日公布的標(biāo)題為“MicroparticleswithMultipleFluorescentSignalsandMethodsofUsingSame”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050277197號(hào)、2006年7月20日公布的標(biāo)題為“MagneticMicrospheresforuseinFluorescence-basedApplications，，的美國(guó)專(zhuān)利公布第20060159962號(hào)中所描述的那些；所述專(zhuān)利公布的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文，用于它們關(guān)于珠子及磁性響應(yīng)材料和珠子的教導(dǎo)。珠子可以被預(yù)先耦合有能夠結(jié)合到生物分子上且與生物分子形成復(fù)合物的生物分子或其它物質(zhì)。珠子可以被預(yù)先耦合有具有關(guān)于期望靶標(biāo)的親和カ的抗體、蛋白質(zhì)或抗原、DNA/RNA探針或任何其它分子。用于固定磁性響應(yīng)珠子和/或非磁性響應(yīng)珠子和/或用珠子進(jìn)行滴操作操作流程的滴致動(dòng)器技術(shù)的實(shí)例被描述在2006年12月15日提交的標(biāo)題為“Droplet-BasedParticleSorting”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第11/639，566號(hào);2008年3月25日提交的標(biāo)題為“MultiplexingBeadDetectioninaSingleDroplet”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第61/039，183號(hào);2008年4月25日提交的標(biāo)題為“DropletActuatorDevicesandDropletOperationsUsingBeads”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第61/047，789號(hào)；2008年8月5日提交的標(biāo)題為“DropletActuatorDevicesandMethodsforManipulatingBeads”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第61/086，183號(hào)；2008年2月11日提交的標(biāo)題為“DropletActuatorDevicesandMethodsEmployingMagneticBeads”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2008/053545號(hào)；2008年3月24日提交的標(biāo)題為“Bead-basedMultiplexedAnalyticalMethodsandInstrumentation”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2008/058018號(hào)；2008年3月23日提交的標(biāo)題為“BeadSortingonaDropletActuator”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2008/058047號(hào);及2006年12月11日提交的標(biāo)題為“Droplet-basedBiochemistry”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2006/047486號(hào)中，所述申請(qǐng)的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。在本發(fā)明的多路復(fù)用(multiplexing)方面中，可以采用珠子的特征。具有適合用于多路復(fù)用的特征的珠子以及檢測(cè)且分析從此類(lèi)珠子射出的信號(hào)的方法的實(shí)例可以發(fā)現(xiàn)于以下:2008年12月11日公布的標(biāo)題為“SystemsandMethodsforMultiplexAnalysisofPCRinRealTime”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第20080305481號(hào)；2008年6月26日公布的標(biāo)題為“MethodsandSystemsforDynamicRangeExpansion”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20080151240號(hào)；2007年9月6日公布的標(biāo)題為“Methods,Products,andKitsforIdentifyinganAnalyteinaSample”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20070207513號(hào)；2007年3月22日公布的標(biāo)題為“MethodsandSystemsforImageDataProcessing”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20070064990號(hào)；2006年7月20日公布的標(biāo)題為“MagneticMicrospheresforuseinFluorescence-basedApplications”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20060159962號(hào);2005年12月15日公布的標(biāo)題為“MicroparticleswithMultipleFluorescentSignalsandMethodsofUsingSame”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050277197號(hào)；及2005年6月2日公布的標(biāo)題為“MultiplexedAnalysisofClinicalSpecimensApparatusandMethod，，的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050118574號(hào)。[0016]“滴”是指在滴致動(dòng)器上的液體體積。通常，滴被填充流體至少部分地限制。例如，滴可以被填充流體完全包圍或可以被填充流體和滴致動(dòng)器的ー個(gè)或多個(gè)表面限制。作為另外的實(shí)例，滴可以被填充流體、滴致動(dòng)器的ー個(gè)或多個(gè)表面和/或大氣限制。作為另外的實(shí)例，滴可以被填充流體和大氣限制。例如，滴可以是含水的或非水的，或可以是包含含水組分和非水組分的混合物或乳液。滴可以采用各種形狀；非限制性實(shí)例包括大體圓盤(pán)形、蛞蝓形(slugshaped)、切去頂端的球體、橢圓形、球形、部分壓縮的球體、半球形、卵形、圓柱形、此類(lèi)形狀的組合及在滴操作期間形成比如作為此類(lèi)形狀與滴致動(dòng)器的ー個(gè)或多個(gè)表面接觸的結(jié)果合并或分裂或形成的各種形狀。對(duì)于可以經(jīng)歷使用本發(fā)明的方法的滴操作的滴流體的實(shí)例，參見(jiàn)2006年12月11日提交的標(biāo)題為“Droplet-BasedBiochemistry”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US06/47486號(hào)。在各種實(shí)施方式中，滴可以包括生物樣品，比如全血、淋巴液、血清、血漿、汗、眼淚、唾液、痰、腦脊液、羊水、精液、陰道分泌物、漿液、滑液、心包液、腹膜液、胸膜液、滲出液、溢泌物、膿囊液、膽汁、尿、胃液、腸液、排泄物樣品、包含單個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的液體、包含細(xì)胞器的液體、流態(tài)化的組織(fIuidizedtissue)、流態(tài)化的有機(jī)體、包含多細(xì)胞化有機(jī)體的液體(liquidscontainingmult1-celledorganisms)、生物拭子(biologicalswabs)和生物洗漆物。而且,滴可以包括試劑，比如水、去離子水、鹽水溶液、酸性溶液、堿性溶液、洗滌劑溶液和/或緩沖液。滴內(nèi)含物的其它實(shí)例包括試劑，比如用于生化操作流程的試劑，生化操作流程比如核酸擴(kuò)增操作流程、基于親和力的分析操作流程、酶法測(cè)定操作流程、測(cè)序操作流程和/或用于生物流體的分析操作流程。[0017]“滴致動(dòng)器”是指用于操縱滴的裝置。關(guān)于滴致動(dòng)器的實(shí)例，參見(jiàn)Pamula等人2005年6月28日提出的標(biāo)題為“ApparatusforManipulatingDropletsbyElectrowetting-BasedTechniques”的美國(guó)專(zhuān)利第6,911,132號(hào)；PamuIa等人2006年I月30日提交的標(biāo)題為“ApparatusesandMethodsforManipulatingDropletsonaPrintedCircuitBoard”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第11/343，284號(hào)；Pollack等人2006年12月11日提交的標(biāo)題為“Droplet-BasedBiochemistry”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2006/047486號(hào)；Shenderov的2004年8月10日提出的標(biāo)題為“ElectrostaticActuatorsforMicrofluidicsandMethodsforUsingSame”的美國(guó)專(zhuān)利第6，773，566號(hào)及2000年I月24日提出的標(biāo)題為“ActuatorsforMicrofluidicsWithoutMovingParts”的美國(guó)專(zhuān)利第6，565，727號(hào)；Kim和/或Shah等人2003年I月27日提交的標(biāo)題為“Electrowetting-drivenMicropumping”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第10/343,261號(hào)，2006年I月23日提交的標(biāo)題為“MethodandApparatusforPromotingtheCompleteTransferofLiquidDropsfromaNozzle”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第11/275，668號(hào)，2006年I月23日提交的標(biāo)題為“SmallObjectMovingonPrintedCircuitBoard”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第11/460,188號(hào)，2009年5月14日提交的標(biāo)題為“MethodforUsingMagneticParticlesinDropletMicrofluidics”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第12/465，935號(hào)及2009年4月30日提交的你題為“MethodandApparatusforReal-timeFeedbackControlofElectricalManipulationofDropletsonChip”的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第12/513，157號(hào)；Velev的2009年6月16日提出的標(biāo)題為“DropletTransportationDevicesandMethodsHavingaFluidSurface”的美國(guó)專(zhuān)利7，547，380;Sterling等人2007年I月16日頒發(fā)的標(biāo)題為“Method,ApparatusandArticleforMicrofluidicControlviaElectrowetting,forChemical,BiochemicalandBiologicalAssaysandtheLike”的美國(guó)專(zhuān)利第7，163，612號(hào)；Becker和Gascoyne等人2010年I月5日頒發(fā)的標(biāo)題為“MethodandApparatusforProgrammablefluidicProcessing”的美國(guó)專(zhuān)利第7，641，779號(hào),2005年12月20日頒發(fā)的標(biāo)題為“MethodandApparatusforProgrammablefluidicProcessing”的美國(guó)專(zhuān)利第6,977,033號(hào)；Decre等人2008年2月12日頒發(fā)的標(biāo)題為“SystemforManipulationofaBodyofFluid”的美國(guó)專(zhuān)利7，328，979；Yamakawa等人的2006年2月23日公布的標(biāo)題為“ChemicalAnalysisApparatus”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20060039823號(hào)；ffu的2008年12月31日公布的標(biāo)題為“DigitalMicrofluidicsBasedApparatusforHeat-exchangingChemicalProcesses”的國(guó)際專(zhuān)利公布第W0/2009/003184；Fouillet等人的2009年7月30日公布的標(biāo)題為“ElectrodeAddressingMethod”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20090192044號(hào)；Fouillet等人2006年5月30日頒發(fā)的標(biāo)題為“DeviceforDisplacementofSmallLiquidVolumesAlongaMicro-catenaryLinebyElectrostaticForces，，的美固專(zhuān)矛[I7,052,244；Marchand等人的2008年5月29日公布的標(biāo)題為“DropletMicroreactor”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20080124252號(hào)；Adachi等人的2009年12月31日公布的標(biāo)題為“LiquidTransferDevice”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20090321262號(hào)；Roux等人的2005年8月18日公布的不不題為“DeviceforControllingtheDisplacementofaDropBetweentwoorSeveralSolidSubstrates”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20050179746號(hào)；Dhindsa等人的標(biāo)題為VirtualElectrowettingChannels:ElectronicLiquidTransportwithContinuousChannelFunctionality”，LabChip,10:832-836(2010);上文文獻(xiàn)的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容及其優(yōu)先權(quán)文獻(xiàn)通過(guò)引用并入本文。某些滴致動(dòng)器將包括具有布置在其間的縫隙的ー個(gè)或多個(gè)基片，及與一個(gè)或多個(gè)基片相關(guān)聯(lián)(例如，放置在，附接到和/或嵌入到)且被布置以進(jìn)行一種或多種滴操作的電極。例如，某些滴致動(dòng)器將包括基礎(chǔ)(或底部)基片、與基片相關(guān)聯(lián)的滴操作電極、在基片和/或電極上部的ー個(gè)或多個(gè)介電層及任選地在基片上部的一個(gè)或多個(gè)疏水層，形成滴操作表面的介電層和/或電極。還可以設(shè)置頂部基片，其通過(guò)縫隙與滴操作表面分離，所述縫隙通常被稱(chēng)為滴操作縫隙。在上文所引用的專(zhuān)利和申請(qǐng)中討論了在頂部和/或底部基片上的各種電極布置，且在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中討論了應(yīng)用和某些新的電極布置。在滴操作期間，優(yōu)選的是，滴保持與地面或參考電極的連續(xù)接觸或頻繁接觸。地面或參考電極可以與縫隙中的面向縫隙的頂部基片、面向縫隙的底部基片相關(guān)聯(lián)。在將電極設(shè)置在兩個(gè)基片上時(shí)，用于使電極耦合到滴致動(dòng)器設(shè)備上用于控制或監(jiān)控電極的電接觸可以與ー個(gè)或兩個(gè)平板相關(guān)聯(lián)。在一些情況下，在一個(gè)基片上的電極被電耦合到另ー個(gè)基片上，使得僅ー個(gè)基片接觸滴致動(dòng)器。在一個(gè)實(shí)施方式中，導(dǎo)電材料(例如，環(huán)氧樹(shù)脂，比如可從MasterBond,Inc.，Hackensack,NJ購(gòu)得的MASTERBOND?聚合物系統(tǒng)EP79)提供在一個(gè)基片上的電極和在另ー個(gè)基片上的電氣路徑之間的電聯(lián)接，例如在頂部基片上的接地電極可以通過(guò)此類(lèi)導(dǎo)電材料耦合到底部基片上的電氣路徑上。在使用多個(gè)基片的情況下，可以在基片之間設(shè)置間隔器，以確定在其間的縫隙的高度且限定分配儲(chǔ)存器。例如，間隔器高度可以為從約5iim至約600um,或約100um至約400um,或約200um至約350iim,或約250um至約300um,或約275um。例如，間隔器可以由來(lái)自頂部或底部基片的突出物，和/或插入到頂部基片和底部基片之間的材料的層形成。一個(gè)或多個(gè)開(kāi)ロ可以被設(shè)置在一個(gè)或多個(gè)基片中，用于形成液體可以通過(guò)其被輸送到滴操作縫隙中的流體路徑。在ー些情況下，一個(gè)或多個(gè)開(kāi)ロ可以對(duì)齊，用干與一個(gè)或多個(gè)電極相互作用，例如，對(duì)齊，使得流動(dòng)通過(guò)開(kāi)ロ的液體將充分靠近ー個(gè)或多個(gè)滴操作電極，以允許用液體使滴操作受到滴操作電極的影響。在一些情況下，基礎(chǔ)(或底部)基片和頂部基片可以被形成為ー個(gè)整體部件。ー個(gè)或多個(gè)參考電極可以被設(shè)置在基礎(chǔ)(或底部)基片和/或頂部基片上和/或被設(shè)置在縫隙中。上述參考專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)峁┝藚⒖茧姌O布置的實(shí)例。在各種實(shí)施方式中，滴通過(guò)滴致動(dòng)器的操縱可以是電極調(diào)節(jié)的，例如，電濕潤(rùn)調(diào)節(jié)的或雙向電泳調(diào)節(jié)的或庫(kù)倫カ調(diào)節(jié)的。用于控制可用于本發(fā)明的滴致動(dòng)器的滴操作的其它技術(shù)的實(shí)例包括使用誘導(dǎo)水動(dòng)射流壓力(hydrodynamicfluidicpressure)的裝置，比如基于機(jī)械原理(例如,外部注射器泵、氣動(dòng)膜泵、振動(dòng)膜泵、真空裝置、離心力、壓電/超聲波泵及聲力);電氣或磁性原理(例如，電滲流、電動(dòng)泵、鐵磁流體塞(ferrofluidicplug)、電液動(dòng)カ泵(electrohydrodynamicpump)、使用磁性力的吸引或排斥及磁流體動(dòng)力泵(magnetohydrodynamicpump));熱力學(xué)原理(例如，氣泡產(chǎn)生/相變誘導(dǎo)的體積膨脹)；其它類(lèi)型的表面濕潤(rùn)原理(例如，電濕潤(rùn)和光電濕潤(rùn)(optoelectrowetting)以及化學(xué)、熱、結(jié)構(gòu)和放射性地誘導(dǎo)的表面張カ梯度)；重力；表面張カ(例如，毛細(xì)管作用)；靜電カ(例如，電滲流)；離心流(基片被布置在緊湊的圓盤(pán)上且旋轉(zhuǎn))；磁力(例如，振動(dòng)離子引起流動(dòng))；磁流體動(dòng)カ；及真空或壓カ差操作的那些裝置。在某些實(shí)施方式中，可以采用前述技術(shù)中的兩種或更多種的組合，以在本發(fā)明的滴致動(dòng)器中進(jìn)行滴操作。類(lèi)似地，前述中的一種或多種可以被用于例如，從另外裝置中的儲(chǔ)存器或從滴致動(dòng)器的外部?jī)?chǔ)存器(例如與滴致動(dòng)器基片和從儲(chǔ)存器至滴操作縫隙的流體路徑相關(guān)聯(lián)的儲(chǔ)存器)輸送液體至滴操作縫隙。本發(fā)明的某些滴致動(dòng)器的滴操作表面可以由疏水材料形成或可以被涂覆或處理以使它們疏水。例如，在一些情況下，滴操作表面的某一部分或全部可以被衍生化有低表面能材料或化學(xué)制品，例如，通過(guò)沉積或使用原位合成，所述原位合成使用化合物比如在溶液中的聚氟化或全氟化化合物或可聚合單體。實(shí)例包括TEFLON?AF(可從DuPont,Wilmington,DE購(gòu)得)、氟樹(shù)脂材料家族的成員(membersofthecytopfamilyofmaterials)、在疏水性和超疏水性涂層的FLUOROPEし?'家族中的涂層(可從CytonixCorporation,Beltsville,MD購(gòu)得)、娃燒涂層、氟娃燒涂層、疏水性的磷酸酯衍生物(例如,Aculon,Inc所銷(xiāo)售的那些)及N0VEC?電子涂層(可從3MCompany,St.Paul,MN購(gòu)得)以及用于等離子體增強(qiáng)的化學(xué)氣相沉積(PECVD)的其他氟化單體。在一些情況下，滴操作表面可以包括具有在約IOnm至約1，OOOnm的范圍內(nèi)的厚度的疏水性涂層。而且，在ー些實(shí)施方式中，滴致動(dòng)器的頂部基片包括導(dǎo)電的有機(jī)聚合物，其然后被涂覆有疏水涂層或以其他方式被處理以使滴操作表面疏水。例如，被沉積在塑料基片上的導(dǎo)電有機(jī)聚合物可以是聚(3，4-次こ基ニ氧噻吩)聚(苯こ烯磺酸酷)(PED0T:PSS)。導(dǎo)電有機(jī)聚合物和可選擇的傳導(dǎo)層的其它實(shí)例被描述在Pollack等人的標(biāo)題為“DropletActuatorDevicesandMethods”的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/US2010/040705號(hào)中，所述專(zhuān)利申請(qǐng)的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。可以用印刷電路板(PCB)、玻璃、銦錫氧化物(IT0)涂覆的玻璃和/或半導(dǎo)體材料作為基片來(lái)制造ー個(gè)或兩個(gè)基片。當(dāng)基片為ITO涂覆的玻璃吋，ITO涂層的厚度優(yōu)選地在約20至約200nm的范圍內(nèi)，優(yōu)選地約50至約150nm,或約75至約125nm,或約lOOnm。在一些情況下，頂部和/或底部基片包括涂覆有電介質(zhì)比如聚酰亞胺電介質(zhì)的PCB基片，在ー些情況下，其還可以被涂覆或以其它方式被處理以使滴操作表面疏水。當(dāng)基片包括PCB吋，以下材料是合適的材料的實(shí)例:MITSUI?BN-300(可從MITSUIChemicalsAmerica,Inc.,SanJoseCA購(gòu)得)；ARLONtmIIN(可從Arlon,Inc,SantaAna,CA購(gòu)得).；NELCO'；N4000-6和N5000-30/32(可從ParkElectrochemicalCorp.，Melville,NY購(gòu)得)；ISOLA?FR406(可從IsolaGroup,Chandler,AZ購(gòu)得)，尤其是IS620;氟聚合物家族(由于其具有低的背景熒光，適合用于熒光檢測(cè))；聚酰亞胺家族；聚酯；聚萘二甲酸こ二酯；聚碳酸酯；聚醚醚酮；液晶聚合物；環(huán)烯烴共聚物(coc);環(huán)烯烴聚合物(cop);芳香聚酰胺；ThermounTk非紡織芳香聚酰胺增強(qiáng)(可從DuPont,Wilmington,DE購(gòu)得)；NOMEX?牌的纖維(可從DuPont,Wilmington,DE購(gòu)得)；及紙。多種材料也適合用作基片的電介質(zhì)組分。實(shí)例包括:蒸汽沉積的電介質(zhì)，比如parylene?c(尤其是在玻璃上)和parylene?n(可從ParyleneCoatingServices,Inc.，Katy,TX購(gòu)得)；TEFLONAF涂層；氟樹(shù)脂；焊接掩模(soIdermask),比如液體可感光的(liquidphotoimageable)焊接掩模(例如，在PCB上)，如TAIYO?PSR4000系列，TAIYO?PSR和AUS系列(可從TaiyoAmerica,Inc.CarsonCity，NV購(gòu)得)(用于應(yīng)用的良好的熱特征涉及熱控制)，及PR0BMER?8165(用于應(yīng)用的良好的熱特征涉及熱控制)(可從HuntsmanAdvancedMaterialsAmericasInc.,LosAngeles,CA購(gòu)得)；干燥膜焊接掩模，比如在VACREL--干燥膜焊接掩模線(xiàn)上的那些(可從DuPont,Wilmington,DE購(gòu)得)；膜電介質(zhì)，比如聚酰亞胺膜(例如，KAPTON'!架酰亞胺膜，可從DuPont,Wilmington,DE購(gòu)得),聚乙烯,及氟聚合物(例如，F(xiàn)EP),聚四氟乙烯；聚酯；聚萘二甲酸こ二酯；環(huán)烯烴共聚物(COC);環(huán)烯烴聚合物(COP);上文列出的任何其它PCB基片材料；黑矩陣樹(shù)脂(blackmatrixresin);以及聚丙烯。可以根據(jù)用于特定分析操作流程的試劑的性能(performance)選擇滴運(yùn)送電壓和頻率。設(shè)計(jì)參數(shù)可以變化，例如，致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器的數(shù)目和布置、獨(dú)立電極連接件的數(shù)目、不同儲(chǔ)存器的尺寸(體積)、磁鐵/珠子洗滌區(qū)域的布置、電極尺寸、電極間的傾斜及縫隙高度(在頂部基片和底部基片之間)可以改變，用于特定的試劑、操作流程、滴體積等。在一些情況下，本發(fā)明的基片可以衍生化有低表面能的材料或化學(xué)制品，例如使用沉積或原位合成，所述原位合成使用在溶液中的聚氟化或全氟化化合物或可聚合單體。實(shí)例包括用于浸潰或噴涂的TEFLON?AF涂層和Fluoropelk涂層，以及用于等離子體增強(qiáng)的化學(xué)氣相沉積(pecvd)的其它氟化單體。此外，在一些情況下，滴操作表面的某一部分或全部可以被涂覆有用于減少背景噪音比如來(lái)自PCB基片的背景熒光的物質(zhì)。例如，減少噪音的涂層可以包括黑矩陣樹(shù)脂，比如可從日本的Torayindustries,Inc.購(gòu)得的黑矩陣樹(shù)脂。滴致動(dòng)器的電極通常是通過(guò)控制器或處理器來(lái)控制的，所述控制器或處理器本身作為系統(tǒng)的一部分被設(shè)置，可以包括處理功能以及數(shù)據(jù)和軟件存儲(chǔ)及輸入能力和輸出能力。試劑可以被設(shè)置在滴致動(dòng)器上，在滴操作縫隙中或在流體聯(lián)接(fluidlycouple)到滴操作縫隙的儲(chǔ)存器中。試劑可以以液體形式例如滴，或它們可以以可重構(gòu)的形式被設(shè)置在滴操作縫隙中或在流體聯(lián)接到滴操作縫隙的儲(chǔ)存器中?？芍貥?gòu)的試劑通常可與用于重構(gòu)的液體結(jié)合。適合與本發(fā)明一起使用的可重構(gòu)試劑的實(shí)例包括在Meathrel等人的2010年6月I日授權(quán)的標(biāo)題為“Disintegratablefilmsfordiagnosticdevices”的美國(guó)專(zhuān)利7，727，466中所描述的那些。[0018]“滴操作”是指在滴致動(dòng)器上的任何滴操縱。例如，滴操作可以包括:將滴裝載到滴致動(dòng)器上；分配來(lái)自源滴的ー個(gè)或多個(gè)滴；使滴分裂、分離或分割成兩個(gè)或更多個(gè)滴；將滴從ー個(gè)位置運(yùn)輸?shù)饺魏畏较蛑械牧硪晃恢?；將兩個(gè)或更多個(gè)滴合并或組合成單個(gè)滴；稀釋滴；混合滴；攪動(dòng)滴；使滴變形；將滴保持在位置；培養(yǎng)滴；加熱滴；蒸發(fā)滴；冷卻滴；處理滴；將滴運(yùn)送出滴致動(dòng)器；本文所描述的其它滴操作；和/或前述操作的任何組合。術(shù)語(yǔ)“合并(merge)”、“合并(merging)”、“組合(combine)”、“組合(combining)”及類(lèi)似術(shù)語(yǔ)被用于描述從兩個(gè)或更多個(gè)滴產(chǎn)生ー個(gè)滴。應(yīng)理解的是，當(dāng)關(guān)于兩個(gè)或更多個(gè)滴使用這樣的術(shù)語(yǔ)時(shí)，可以使用足以導(dǎo)致兩個(gè)或更多個(gè)滴組合成一個(gè)滴的滴操作的任何組合。例如，“合并滴A和滴B”可以通過(guò)運(yùn)送滴A以接觸靜止的滴B、運(yùn)送滴B以接觸靜止的滴A或運(yùn)輸?shù)蜛和B以彼此接觸來(lái)實(shí)現(xiàn)。術(shù)語(yǔ)“分裂(splitting)”、“分離(separating)”和“分割(dividing)”并非意圖指任何關(guān)于得到的滴的體積(即，得到的滴的體積可以是相同的或不同的)或得到的滴數(shù)目(得到的滴數(shù)目可以為2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或更多個(gè))的任何特定結(jié)果。術(shù)語(yǔ)“混合”指的是導(dǎo)致滴內(nèi)的一種或多種組分的較均勻分布的滴操作?！把b載”滴的操作實(shí)例包括微量滲透裝載、壓カ輔助的裝載、機(jī)器人裝載、無(wú)源裝載(passiveloading)及移液管裝載。滴操作可以是電極調(diào)節(jié)的。在一些情況下，通過(guò)表面上的親水和/或疏水區(qū)域，和/或通過(guò)物理障礙物進(jìn)ー步易化滴操作。對(duì)于滴操作的實(shí)例，參見(jiàn)上文在“滴致動(dòng)器”的定義下引用的專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)。阻抗或電容傳感或成像技術(shù)有時(shí)可以被用于確定或確認(rèn)滴操作的結(jié)果。此類(lèi)技術(shù)的實(shí)例被描述在Sturmer等人的2008年8月21日公布的標(biāo)題為“CapacitanceDetectioninaDropletActuator”的國(guó)際專(zhuān)利公布第W0/2008/101194號(hào)中，所述專(zhuān)利公布的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。一般而言，傳感或成像技術(shù)可以被用于確認(rèn)滴在特定電極處的存在或不存在。例如，在滴分配操作后，分配的滴在目標(biāo)電極處的存在確認(rèn)了滴分配操作是有效的。類(lèi)似地，在分析操作流程中的合適的步驟中，滴在檢測(cè)點(diǎn)(detectionspot)處的存在可以證明之前的ー組滴操作已經(jīng)成功地產(chǎn)生了用于檢測(cè)的滴。滴運(yùn)輸時(shí)間可以是非?？斓?。例如，在各種實(shí)施方式中，滴從ー個(gè)電極至下ー個(gè)電極的運(yùn)輸可以超過(guò)約I秒，或約0.1秒，或約0.01秒，或約0.001秒。在一個(gè)實(shí)施方式中，電極以AC模式操作，但轉(zhuǎn)換到用于成像的DC模式。對(duì)于進(jìn)行滴操作有用的是，滴足跡面積(footprintarea)類(lèi)似于電濕潤(rùn)面積；換而言之,分別用I個(gè)、2個(gè)和3個(gè)電極,有用地控制lx-、2x-、3x-滴。如果滴足跡大于可用于在給定的時(shí)間下進(jìn)行滴操作的電極數(shù)目，滴尺寸和電極數(shù)目之間的差通常應(yīng)不大于I;換而言之，用I個(gè)電極來(lái)有用地控制2x滴且用2個(gè)電極來(lái)有用地控制3x滴。當(dāng)?shù)伟樽訒r(shí)，有用的是滴尺寸等于控制滴例如運(yùn)輸?shù)蔚碾姌O的數(shù)目。[0019]“填充流體”是指與滴致動(dòng)器的滴操作基片相關(guān)聯(lián)的流體，所述流體與滴相充分不相混溶，以使滴相經(jīng)歷電極調(diào)節(jié)的滴操作。例如，滴致動(dòng)器的縫隙通常被填充有填充流體。例如，填充流體可以為低粘度的油比如硅油或鯨蠟烷填充流體。填充流體可以填充滴致動(dòng)器的整個(gè)縫隙或可以涂覆滴致動(dòng)器的ー個(gè)或多個(gè)表面。填充流體可以是傳導(dǎo)性的或非傳導(dǎo)性的。例如，填充流體可以被摻雜有表面活性劑或其它添加剤。例如，可以選擇添加劑，以改進(jìn)滴操作和/或減少試劑或祀標(biāo)物質(zhì)從滴的損失、微滴(microdroplet)的形成、滴之間的交叉污染、滴致動(dòng)器表面的污染、滴致動(dòng)器材料的降解等?？梢愿鶕?jù)用于特定分析操作流程的試劑的性能和與滴致動(dòng)器材料有效相互作用或不與滴致動(dòng)器材料相互作用來(lái)選擇包括表面活性劑摻雜的填充流體的組合物。適合用于本發(fā)明的填充流體和填充流體制劑的實(shí)例被提供在Srinivasan等人的2010年3月11日公布的標(biāo)題為“DropletActuators,ModifiedFluidsandMethods”的國(guó)際專(zhuān)利公布第W0/2010/027894號(hào)和2009年2月12日公布的標(biāo)題為“UseofAdditivesforEnhancingDropletOperations”的國(guó)際專(zhuān)利公布W0/2009/021173;Sista等人的2008年8月14日公布的標(biāo)題為“DropletActuatorDevicesandMethodsEmployingMagneticBeads”的國(guó)際專(zhuān)利公布第W0/2008/098236號(hào)；以及Monroe等人的2007年5月17日提交的標(biāo)題為“ElectrowettingDevices”的美國(guó)專(zhuān)利公布第20080283414號(hào)中；所述專(zhuān)利以及本文所引用的其它專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。[0020]關(guān)于磁性響應(yīng)珠子的“固定”是指在滴致動(dòng)器上的滴或填充流體中，珠子基本上被保持在合適位置中。例如，在一個(gè)實(shí)施方式中，固定的珠子可以被充分保持在滴中的合適位置中，以允許滴分裂操作的實(shí)施，得到具有基本上所有珠子的一個(gè)滴和基本上沒(méi)有珠子的ー個(gè)滴。[0021]“磁性響應(yīng)”是指響應(yīng)于磁場(chǎng)?！按判皂憫?yīng)珠子”包含磁性響應(yīng)材料或由磁性響應(yīng)材料組成。磁性響應(yīng)材料的實(shí)例包括順磁性材料、鐵磁性材料、亞鐵磁性材料及變磁性材料。合適的順磁性材料的實(shí)例包括鐵、鎳和鈷，以及金屬氧化物，比如Fe304、BaFe12O19,Co0、Ni0、Mn2O3、Cr2O3和CoMnP。[0022]“儲(chǔ)存器”是指配置用于保持、儲(chǔ)存或供應(yīng)液體的包圍物(enclosure)或部分包圍物。本發(fā)明的滴致動(dòng)器系統(tǒng)可以包括在盒子上(on-cartridge)的儲(chǔ)存器和/或不在盒子上的儲(chǔ)存器。在盒子上的儲(chǔ)存器可以為(I)在致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器，其為在滴操作縫隙中或在滴操作表面上的儲(chǔ)存器；(2)不在致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器，其為在滴致動(dòng)器盒子上但在滴操作縫隙外且不接觸滴操作表面的儲(chǔ)存器；或(3)混合儲(chǔ)存器，其具有在致動(dòng)器上的區(qū)域和不在致動(dòng)器上的區(qū)域。不在致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器的實(shí)例為在頂部基片中的儲(chǔ)存器。不在致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器通常與開(kāi)ロ或配置用于使液體從不在致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器流動(dòng)到滴操作縫隙中比如到致動(dòng)器上的儲(chǔ)存器中的流體路徑流體相通。不在盒子上的儲(chǔ)存器可以是完全不是滴致動(dòng)器盒子的一部分，但使液體流動(dòng)到滴致動(dòng)器盒子的某一部分的儲(chǔ)存器。例如，不在盒子上的儲(chǔ)存器可以是在操作期間滴致動(dòng)器盒子可以耦合到其上的系統(tǒng)或?？空?dockingstation)的一部分。類(lèi)似地，不在盒子上的儲(chǔ)存器可以是試劑儲(chǔ)存容器或注射器，所述容器或注射器被用于迫使流體進(jìn)入盒子上的儲(chǔ)存器或進(jìn)入滴操作縫隙中。使用不在盒子上的儲(chǔ)存器的系統(tǒng)通常將包括流體通路方式，因此液體可以從不在盒子上的儲(chǔ)存器被運(yùn)送到在盒子上的儲(chǔ)存器或到滴操作縫隙中。[0023]如本文用于指滴和/或滴內(nèi)的磁性響應(yīng)珠子的“運(yùn)送到磁鐵的磁場(chǎng)中”、“朝著磁鐵運(yùn)送”及類(lèi)似術(shù)語(yǔ)意圖指運(yùn)送到大體上能夠吸引滴中的磁性響應(yīng)珠子的磁場(chǎng)區(qū)域中。類(lèi)似地，如本文用于指滴和/或滴內(nèi)的磁性響應(yīng)珠子的“運(yùn)送遠(yuǎn)離磁鐵或磁場(chǎng)”、“運(yùn)送出磁鐵的磁場(chǎng)”及類(lèi)似術(shù)語(yǔ)意圖指運(yùn)送遠(yuǎn)離大體上能夠吸引滴中的磁性響應(yīng)珠子的磁場(chǎng)區(qū)域，不管滴或磁性響應(yīng)珠子是否被完全從磁場(chǎng)中移除。將理解的是，在本文所描述的此類(lèi)情況中任一種情況下，滴可以朝著或遠(yuǎn)離期望的磁場(chǎng)區(qū)域被運(yùn)送，和/或期望的磁場(chǎng)區(qū)域可以朝著或遠(yuǎn)離滴被移動(dòng)。提及在磁場(chǎng)“內(nèi)”或“中”及類(lèi)似術(shù)語(yǔ)的電極、滴或磁性響應(yīng)珠子，意圖描述以下情況:其中電極以允許電極將滴運(yùn)送到和/或遠(yuǎn)離期望的磁場(chǎng)區(qū)域的方式被定位，或滴或磁性響應(yīng)珠子被定位在期望的磁場(chǎng)區(qū)域中，在每ー種情況下，其中在期望的區(qū)域中的磁場(chǎng)能夠大體上吸引滴中的任何磁性響應(yīng)珠子。類(lèi)似地，提及在磁場(chǎng)“外部”或“遠(yuǎn)離”磁場(chǎng)及類(lèi)似術(shù)語(yǔ)的電極、滴或磁性響應(yīng)珠子，意圖描述以下的情況:其中電極以允許電極將滴運(yùn)送遠(yuǎn)離磁場(chǎng)的某一區(qū)域的方式被定位，或滴或磁性響應(yīng)珠子被定位遠(yuǎn)離磁場(chǎng)的某一區(qū)域,在每ー種情況下,其中在這樣的區(qū)域中的磁場(chǎng)大體上不能吸引滴中的任何磁性響應(yīng)珠子或其中任何剩下的吸引力不消除在區(qū)域中進(jìn)行的滴操作的有效性。在本發(fā)明的各種方面中，系統(tǒng)、滴致動(dòng)器或系統(tǒng)的其它部件可以包括磁鐵，比如ー個(gè)或多個(gè)永久性磁鐵(例如，單個(gè)圓柱形或條形磁鐵或此類(lèi)磁鐵的陣列，比如Halbach陣列)，或電磁鐵，或電磁鐵的陣列，以形成磁場(chǎng)，用干與磁性響應(yīng)珠子或芯片上的其它部件相互作用。例如，這樣的相互作用可以包括在儲(chǔ)存期間或在滴操作期間的滴中基本上固定或保持磁性響應(yīng)珠子的運(yùn)動(dòng)或流動(dòng)，或拉動(dòng)磁性響應(yīng)珠子離開(kāi)滴。[0024]關(guān)于洗滌珠子的“洗滌”是指減少與珠子接觸或暴露到珠子的一種或多種物質(zhì)的量和/或濃度，所述物質(zhì)來(lái)自與珠子接觸的滴。物質(zhì)的量和/或濃度的減少可以是部分的，基本上完全的或甚至完全的。物質(zhì)可以是各種物質(zhì)中的任ー種；實(shí)例包括用于進(jìn)一歩分析的靶標(biāo)物質(zhì)，和不想要的物質(zhì)，比如樣品的組分、污染物和/或過(guò)量的試劑。在一些實(shí)施方式中，洗滌操作開(kāi)始于初始滴接觸磁性響應(yīng)珠子，其中滴包括物質(zhì)的初始量和初始濃度?？梢杂酶鞣N滴操作來(lái)進(jìn)行洗滌操作。洗滌操作可以產(chǎn)生包含磁性響應(yīng)珠子的滴，其中滴具有物質(zhì)的總量和/或濃度，所述物質(zhì)的總量和/或濃度小于物質(zhì)的初始量和/或濃度。合適的洗漆技術(shù)的實(shí)例描述在Pamula等人的2008年10月21日授權(quán)的標(biāo)題為“Droplet-BasedSurfaceModificationandWashing”的美國(guó)專(zhuān)利7，439，014中，所述專(zhuān)利的整個(gè)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。[0025]術(shù)語(yǔ)“上部”、“底部”、“上方”、“下方”和“在....上”在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中關(guān)于滴致動(dòng)器的部件的相對(duì)位置比如滴致動(dòng)器的頂部基片和底部基片的相對(duì)位置使用。將理解的是，滴致動(dòng)器是功能性的，而不管其空間定向。[0026]當(dāng)以任何形式的液體(例如，滴或連續(xù)主體，不管是移動(dòng)還是靜止的)被描述為在電極、陣列、基質(zhì)或表面“上”、“處”或“上方”時(shí)，這樣的液體可以直接接觸電極/陣列/基質(zhì)/表面，或可以接觸在液體和電極/陣列/基質(zhì)/表面之間插入的一個(gè)或多個(gè)層或膜。[0027]當(dāng)?shù)伪幻枋龀伞霸诘沃聞?dòng)器上”或“裝載在滴制動(dòng)器上”時(shí)，應(yīng)理解的是，滴以促進(jìn)使用滴制動(dòng)器在滴上進(jìn)行ー種或多種滴操作的方式來(lái)布置在滴制動(dòng)器上；滴以促進(jìn)滴的屬性或來(lái)自滴的信號(hào)的傳感的方式被布置在滴致動(dòng)器上，和/或滴已經(jīng)在滴制動(dòng)器上經(jīng)歷滴操作。[0028]6附圖簡(jiǎn)述[0029]圖1顯示為ConA-碳水化合物結(jié)合的有效抑制劑(競(jìng)爭(zhēng)劑)的糖模擬物(NSC120634)的實(shí)例；[0030]圖2闡述使ConA結(jié)合的分子從磁性響應(yīng)珠子上釋放的方法的實(shí)例；[0031]圖3顯示使用DBS在用于酸性鞘磷脂酶活性的NiemannPick分析中的提取緩沖液組成和ConA珠子體積的效果圖的實(shí)例；[0032]圖4顯示使用DBS在用于半乳糖腦苷酯酶活性的Krabbe分析中的提取緩沖液組成和ConA珠子體積的效果圖的實(shí)例；[0033]圖5A和圖5B分別顯示使用DBS在NiemannPick分析中的洗脫緩沖液組成的效果的圖表和圖形的實(shí)例；[0034]圖6顯示使用DBS在用于酸性P-D-葡糖苷酶活性的Gaucher分析中的洗脫緩沖液組成的效果的條形圖的實(shí)例；[0035]圖7A和圖7B分別顯示在用水，0.1%Tween?20(EXT)或PBSpH6.0,0.1%(w/V)Tween?20在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，a-葡糖苷酶(Pompe)和0-半乳糖苷酶(Fabry)酶活性的圖的實(shí)例；[0036]圖8A和圖8B分別顯示在用水，0.1%Tween?20(EXT)或PBSpH6.0,0.l%(w/V)Tween?20和用ConA珠子的酶濃縮步驟在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，a-葡糖苷酶(Pompe)和P-半乳糖苷酶(Fabry)酶活性的圖的實(shí)例；[0037]圖9A和圖9B分別顯示在具有或不具有使用ConA珠子的酶濃縮步驟的在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，a-葡糖苷酶(Pompe)和P_半乳糖苷酶(Fabry)酶活性的圖的實(shí)例；[0038]圖1OA和圖1OB分別顯示在用水，0.1%Tween?20(EXT)或PBSpH6.0,0.1%(w/v)Tween?20在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，艾杜糖醒酸-2-硫酯酶(Hunter)和a-L-艾杜糖醒酸酶(Hurler)酶活性的圖的實(shí)例；[0039]圖1lA和圖1lB分別顯示在用水，0.1%Tween?20(EXT)或PBSpH6.0,0.l%(w/V)Tween?20且用ConA珠子的酶濃縮步驟在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，艾杜圖糖醛酸-2-硫酸酯酶(Hunter)和a-L-艾杜糖醒酸酶(Hurler)酶活性的圖的實(shí)例；[0040]圖12A和圖12B分別顯示在具有或不具有使用ConA珠子的酶濃縮步驟在工作臺(tái)上制備的DBS提取物中，艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(Hunter)和a-L-艾杜糖醛酸酶(Hurler)酶活性的圖的實(shí)例；[0041]圖13顯示在血漿的熱滅活期間的溫度曲線(xiàn)圖的實(shí)例；[0042]圖14顯示在熱處理的血漿中的a-半乳糖苷酶活性(Fabry)的圖的實(shí)例；[0043]圖15顯示在熱處理的血漿中的P-葡糖苷酶活性(Gaucher)的圖的實(shí)例；[0044]圖16顯示在熱處理的血漿中的艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶活性(Hunter)的圖的實(shí)例；[0045]圖17顯示在熱處理的血漿中的酸性鞘磷脂酶活性(NiemannPick)的圖的實(shí)例；[0046]圖18顯示在熱處理的血漿中的酸性a-葡糖苷酶活性(Pompe)的圖的實(shí)例；[0047]圖19顯示用于新生兒測(cè)試(例如，用于LSD測(cè)試)的干血斑(DBS)質(zhì)量控制(QC)材料的生產(chǎn)的全血池(pool)制備操作流程的實(shí)例的高度概述的流程圖；以及[0048]圖20顯示用于制備用于新生兒測(cè)試的DBS樣品的質(zhì)量控制血液池組成的實(shí)例。[0049]7描述[0050]本發(fā)明提供濃縮生物樣品中的糖蛋白(例如，酶)用于新生兒代謝疾病的測(cè)試的方法。在各種實(shí)施方式中，在進(jìn)行ー種或多種新生兒篩查分析(例如，酶法測(cè)定)之前，固定在固體載體上的伴刀豆球蛋白A(ConA)可以被用于濃縮生物樣品中的N-糖基化的蛋白質(zhì)(例如，酶)。在一個(gè)實(shí)施方式中，在裝載到滴致動(dòng)器上之前，用于新生兒代謝疾病的測(cè)試的樣品可以用在工作臺(tái)上的糖蛋白濃縮操作流程來(lái)制備。在另外的實(shí)施方式中，生物樣品中的糖蛋白的濃縮可以直接在滴致動(dòng)器上來(lái)進(jìn)行。在各種實(shí)施方式中，本發(fā)明包括用于濃縮生物樣品中的酶活性的方法，比如新鮮血液和/或血漿樣品和干血和/或血漿樣品。本發(fā)明的方法大體上減少了污染物(例如，分析抑制物)且增加了生物樣品中的靶標(biāo)蛋白(例如，酶)濃度。本發(fā)明的方法提供在新生兒篩查分析(例如，酶法測(cè)定)和其它診斷測(cè)試中的改進(jìn)的靈敏度。[0051]在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的方法可以用于樣品制備，所述樣品制備用于基于酶-底物的生物分析比如用于溶酶體貯積病(LSD)的NBS分析。在通過(guò)特定的天冬酰胺殘基處的高的甘露寡糖的合成過(guò)程中(N-糖基化)，使溶酶體酶改性。由于溶酶體酶是N-糖基化的，使用ConA的固定可以被用于富集且濃縮復(fù)雜生物樣品中的酶，比如干血斑(DBS)樣品。[0052]在另外的實(shí)例中，本發(fā)明的方法可以用于減少，優(yōu)選地完全消除污染物，所述污染物可以抑制酶活性且在篩查分析(例如，NBS分析)和診斷測(cè)試中造成假陽(yáng)性讀數(shù)。在各種實(shí)施方式中，在進(jìn)行篩選分析或診斷測(cè)試之前，磁性響應(yīng)的ConA珠子被用于減少，優(yōu)選地完全消除污染物，且濃縮生物樣品中的N-糖基化分子。[0053]7.1酶濃縮[0054]伴刀豆球蛋白A(ConA)是特異性結(jié)合包含在C3、C4和C6位置處的未改性的羥基殘基的葡萄糖和/或甘露糖殘基(即高甘露糖類(lèi)型、雜合類(lèi)型和雙觸角(b1-antennary)復(fù)合物類(lèi)型的N-聚糖)的凝集素。在一個(gè)實(shí)例中，固定在磁性響應(yīng)珠子上的ConA可以被用于從復(fù)雜的生物樣品中富集N-糖基化的蛋白質(zhì)(S卩，在它們的寡糖側(cè)鏈中包含甘露糖殘基的蛋白質(zhì))。N-糖蛋白非共價(jià)地結(jié)合到ConA上，而沒(méi)有活性和/或穩(wěn)定性的損失。非糖基化的分子和0-糖基化的分子沒(méi)有被ConA結(jié)合，且在后續(xù)的步驟中從樣品中被除去。由于ConA結(jié)合的N-糖蛋白是有效的/穩(wěn)定的，因此可以直接分析珠子結(jié)合的酶活性(例如溶酶體酶活性)?？蛇x擇地，在分析之前，結(jié)合的糖蛋白(例如，溶酶體酶)可以從ConA珠子上被釋放。通過(guò)ConA固定來(lái)富集N-糖基化的蛋白質(zhì)(例如，溶酶體酶)可以被用于大體上改進(jìn)復(fù)雜生物樣品比如DBS樣品中的較不豐富的N-糖基化的蛋白質(zhì)的檢測(cè)。[0055]在一個(gè)實(shí)施方式中，ConA磁性響應(yīng)珠子比如SiMAG-ConA珠子(可從chemicelIGmbH購(gòu)得)和洗脫緩沖液化學(xué)成分(chemistries)可以被用于富集且純化N-糖基化的蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)與糖(例如，甲基-a-D-吡喃甘露糖苷)競(jìng)爭(zhēng)，結(jié)合到SiMAG-ConA磁性響應(yīng)珠子上的N-糖基化的蛋白質(zhì)(例如，溶酶體酶)可以從珠子上被釋放(洗脫)。在另外的實(shí)例中，糖模擬物可以用于從磁性響應(yīng)ConA珠子上洗脫N-糖基化的蛋白質(zhì)(例如，溶酶體酶)。SI顯示作為ConA-碳水化合物結(jié)合的有效抑制劑(競(jìng)爭(zhēng)劑)的糖模擬物(NSC120634)的實(shí)例的結(jié)構(gòu)100。在抑制ConA-碳水化合物結(jié)合的方面，在美國(guó)國(guó)家癌癥研究院多樣性集合(NationalCancerInstituteDiversitySet)中的化合物NSC120634比甲基-a-D-吡喃甘露糖苷要至少有效20倍。糖模擬物比如NSC120634可以被用于有效地洗脫結(jié)合到磁性響應(yīng)ConA珠子上的新生兒篩查酶靶標(biāo)(例如，溶酶體酶)。[0056]在另外的實(shí)施方式中，定位在磁性響應(yīng)珠子和ConA之間的可斷裂的鍵可以被用于從磁性響應(yīng)珠子上釋放(洗脫)ConA結(jié)合的分子。Si闡述方法200，所述方法是使ConA結(jié)合的分子從磁性響應(yīng)珠子上釋放的方法的實(shí)例。磁性響應(yīng)珠子210可以被涂覆有錨分子212，所述錨分子與ConA或ConA的改性形式形成可容易地?cái)嗔训逆I214。通過(guò)與ConA結(jié)合，N-糖基化的蛋白質(zhì)216可以被錨定在磁性響應(yīng)珠子210上。N-糖基化的蛋白質(zhì)216可以是例如溶酶體酶。ConA結(jié)合的N-糖基化的蛋白質(zhì)216復(fù)合物可以通過(guò)可斷裂的鍵214的斷裂(斷開(kāi))從磁性響應(yīng)珠子210上被釋放。[0057]在一個(gè)實(shí)施方式中，可容易地?cái)嗔训逆I可以用生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)來(lái)形成。在一個(gè)實(shí)例中，錨分子212可以是與生物素化的ConA形成可斷裂的鍵214的鏈霉親和素分子。在可斷裂的鍵214斷開(kāi)時(shí)，釋放生物素化的ConA-糖基化的蛋白質(zhì)216復(fù)合物。在另外的實(shí)例中，錨分子212可以是與鏈霉親和素改性的ConA形成可斷裂的鍵214的生物素分子。在可斷裂的鍵214斷開(kāi)時(shí)，釋放鏈霉親和素-ConA-糖基化的蛋白質(zhì)216復(fù)合物。ConA-蛋白質(zhì)復(fù)合物(例如，[生物素]-[ConA]-[蛋白質(zhì)]或[鏈霉親和素]-[ConA]-[蛋白質(zhì)])可以與磁性響應(yīng)珠子分離且用在工作臺(tái)上或在致動(dòng)器上的NBS分析操作流程來(lái)分析。[0058]7.1.1在工作臺(tái)上的濃縮操作流程[0059]在一個(gè)實(shí)施方式中，用于新生兒代謝疾病的測(cè)試的樣品可以用磁性響應(yīng)ConA珠子在工作臺(tái)上來(lái)制備，以濃縮N-糖基化的蛋白質(zhì)。濃縮的樣品可以隨后從ConA珠子上被釋放，且用在工作臺(tái)上的NBS分析操作流程來(lái)分析或裝載到滴致動(dòng)器的流體儲(chǔ)存器上且用數(shù)字微流體NBS分析操作流程來(lái)分析。[0060]對(duì)于N-糖基化的蛋白質(zhì)(例如，酶)，使用磁性響應(yīng)ConA珠子(例如，SiMAG-ConA珠子)和DBS提取物的在工作臺(tái)上的濃縮操作流程的實(shí)例可以包括但不限于以下步驟:將3mmDBS樣品穿透物(samplepunch)放入96孔的圓底板的一個(gè)孔中的IOOiiL的提取緩沖液(例如PBSpH6.0,0.l%w/vTween?20)中，且在定軌振蕩器(orbitalshaker)上室溫孵育30分鐘?？梢蕴崛《鄠€(gè)DBS樣品穿透物，以提供用于多個(gè)ConA珠子結(jié)合反應(yīng)的充足的樣品體積。例如，對(duì)于12個(gè)ConA珠子結(jié)合反應(yīng)，可以提取14個(gè)DBS穿透物，以提供用于將珠子結(jié)合體積調(diào)節(jié)至100uL的額外的提取物。在提取結(jié)束時(shí)，將ー小份100iiL的DBS提取物添加到包含磁性響應(yīng)ConA珠子的一定量(例如，約IUL至約10iiL至約20uL)的管中且用翻轉(zhuǎn)式旋轉(zhuǎn)(end-over-endrotation)室溫孵育約30分鐘。用磁鐵將磁性響應(yīng)ConA珠子收集到管的底部。從管中用移液管吸取包含未結(jié)合的材料的上清液(例如，約IOOiiL)且丟棄?？梢灾苯臃治鲋樽咏Y(jié)合的酶活性，或在分析之前可以使結(jié)合的糖蛋白(酶)從ConA珠子上被釋放。為了評(píng)估珠子結(jié)合的酶活性,將10iiL的包含0.l%Tween20的ImMこ酸鹽緩沖液PH5.0添加到管中，到珠子上，且將重新懸浮的珠子轉(zhuǎn)移到96孔微量滴定板的単獨(dú)的孔中?？蛇x擇地，可以將重新懸浮的珠子(約10yL)裝載到滴致動(dòng)器的流體儲(chǔ)存器上，且用數(shù)字微流體NBS分析操作流程來(lái)分析。在分析之前，為了從ConA珠子(例如，SiMAG-ConA珠子)上釋放結(jié)合的分子，可以使收集的珠子重新懸浮在例如約IOyL的洗脫緩沖液中，所述洗脫緩沖液包含充足濃度的競(jìng)爭(zhēng)分子比如糖甲基-a-D-吡喃甘露糖苷，且用偶爾輕彈孵育10分鐘。在孵育期結(jié)束時(shí)，可以用磁鐵將磁性響應(yīng)ConA珠子收集在管的底部中?？梢詮墓苤腥〕鱿疵撘?約IOyL)且放入96孔板的単獨(dú)的孔中，用于隨后的在工作臺(tái)上的分祈?？蛇x擇地，可以將洗脫液(約IOyL)裝載到滴致動(dòng)器的流體儲(chǔ)存器上，且用數(shù)字微流體NBS分析操作流程來(lái)分析。[0061]7.1.2在致動(dòng)器上的濃縮操作流程[0062]在另外的實(shí)施方式中，使用在滴致動(dòng)器上的ConA磁性響應(yīng)珠子，可以濃縮且收集用于新生兒代謝疾病的測(cè)試的樣品。珠子濃縮操作流程可以用于將樣品體積中的N-糖基化蛋白質(zhì)濃縮且收集在流體儲(chǔ)存器中，所述流體儲(chǔ)存器與開(kāi)ロ流體相通，用于使液體從儲(chǔ)存器流動(dòng)到滴致動(dòng)器的滴操作縫隙中。滴致動(dòng)器的樣品輸入分配電極和儲(chǔ)存器可以被設(shè)計(jì)，用于較大的樣品輸入體積(例如，約80至約200yL)。一個(gè)或多個(gè)磁鐵可以鄰近樣品輸入分配電極和儲(chǔ)存器被布置，用于磁性響應(yīng)珠子(例如，磁性響應(yīng)ConA珠子)的一定量的濃縮和收集。磁鐵可以是固定的磁鐵或可移動(dòng)的磁鉄。[0063]在一個(gè)實(shí)例中，珠子濃縮操作流程可以用于將樣品體積中的N-糖基化的蛋白質(zhì)濃縮且收集在不在致動(dòng)器上的樣品儲(chǔ)存器中。在將樣品裝載到不在致動(dòng)器上的樣品儲(chǔ)存器上之前,磁性響應(yīng)ConA珠子的一定量(例如，約2至3iiL)可以被添加到大的樣品體積(例如，約100uL至約200uL)中，所述不在致動(dòng)器上的樣品儲(chǔ)存器與開(kāi)ロ流體相通，用于使液體從儲(chǔ)存器流動(dòng)到滴致動(dòng)器的滴操作縫隙中。然后，可以在致動(dòng)器上用珠子濃縮操作流程將大體積樣品處理成IX至4X滴(S卩，約IOOnL至約1320nL的滴，取決于滴操作電極的尺寸)。在其它實(shí)例中，大的樣品體積可以被濃縮在致動(dòng)器上的樣品儲(chǔ)存器中。在這個(gè)實(shí)例中，使用包含磁性響應(yīng)ConA珠子的一定量的單個(gè)試劑滴，可以在致動(dòng)器上的樣品儲(chǔ)存器中順序地孵育一系列的樣品滴(例如，660nL樣品滴)?？梢杂脤?zhuān)門(mén)的混合電極來(lái)促進(jìn)珠子混合。由于數(shù)字微流體的靈活性和可編程性，樣品處理操作流程可以容易地被改編，用于在致動(dòng)器上的樣品處理、不在致動(dòng)器上的樣品處理或樣品處理的任何組合。形成濃縮的磁性響應(yīng)珠子滴后，其可以在滴致動(dòng)器內(nèi)經(jīng)歷其它的滴操作(例如，珠子洗滌和珠子結(jié)合分子的洗脫；數(shù)字微流體NBS分析操作流程)。[0064]對(duì)于N-糖基化的蛋白質(zhì)，使用磁性響應(yīng)ConA珠子和DBS提取物的不在致動(dòng)器上的濃縮操作流程的實(shí)例包括但不限于以下步驟:將ー個(gè)3mmDBS樣品穿透物放入在96孔的圓底板中的一個(gè)孔中的IOOiIL的提取緩沖液(例如PBSpH6.0,0.l%w/vTweeil?20))中，且在定軌振蕩器上室溫孵育30分鐘。提取結(jié)束時(shí)，將ー小份的100uLDBS提取物添加到包含磁性響應(yīng)ConA珠子的一定量(例如，約I至約20uL)的管中，且將包含珠子的樣品轉(zhuǎn)移到樣品儲(chǔ)存器中，所述樣品儲(chǔ)存器與開(kāi)ロ流體相通，用于使液體從儲(chǔ)存器流動(dòng)到滴致動(dòng)器的滴操作縫隙中。然后，可以在致動(dòng)器上用珠子濃縮操作流程將大體積樣品孵育且處理成較小的樣品滴，處理成IX至4X滴(S卩，約IOOnL至約1320nL的滴，取決于滴操作電極的尺寸)?？梢灾苯臃治鲋樽咏Y(jié)合的酶活性，或在分析之前可以使結(jié)合的糖蛋白(酶)從ConA珠子上被釋放，例如使用珠子洗滌和洗脫操作流程?？梢詫饪s的樣品分配到ー個(gè)或多個(gè)子樣品中且用ー種或多種數(shù)字微流體NBS分析操作流程來(lái)分析。[0065]7.1.3用于DBS樣品的珠子結(jié)合和洗脫參數(shù)[0066]在用于使用磁性響應(yīng)ConA比如SiMAG-ConA珠子的DBS樣品的濃縮操作流程中可變化的參數(shù)可包括但不限于=DBS提取緩沖液的組成和體積、DBS穿透物的數(shù)目(例如，I個(gè)、2個(gè)或3個(gè)穿透物)、磁性響應(yīng)ConA珠子的量(例如，1、5、10或20iiL)、珠子孵育時(shí)間(例如，15、30或60分鐘)、結(jié)合緩沖液的組成(例如，甘露糖；NaCl;EDTA對(duì)螯合金屬離子和金屬離子比如ZnCl的隨后添加)以及洗脫緩沖液的組成(例如，10、20、50mM或更高濃度的甲基-a-D-吡喃甘露糖苷；ImMこ酸鹽pH5.5)。[0067]為了評(píng)估提取緩沖液組成和ConA-珠子體積在NBS分析中的影響，從質(zhì)量控制(QC)的干血斑樣品(即，基礎(chǔ)池(QC-BP)、低活性樣品(QC-低)、中等活性樣品(QC-中)及高活性樣品(QC-H))制備DBS提取物。如參考圖19所描述地制備QC樣品?；A(chǔ)池(BP)QC樣品是從用血清調(diào)節(jié)至50%血細(xì)胞比容(hematocrit)的去白細(xì)胞(Ieukoreduced)的人紅細(xì)胞的池中制備的。高(H)活性QC樣品是從用血清調(diào)節(jié)至50%血細(xì)胞比容的匯集(pooled)的臍帶血中制備的。BP樣品被用作對(duì)全血細(xì)胞溶酶體酶無(wú)特異性的水解的對(duì)照(背景對(duì)照)。將每ー個(gè)DBS樣品置于96孔板的單獨(dú)的孔中。用包含0.1%Tween?20的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)pH6.0;包含0.1%Tween?20的水；或包含0.1%Tween?20的ImMこ酸鹽、50mMNaClpH5.5作為提取緩沖液來(lái)制備DBS樣品的提取物。DBS提取物用在工作臺(tái)上的分析操作流程來(lái)進(jìn)行NiemannPick、Gaucher、Krabbe>Pompe>Fabry、Hunter和Hurler疾病的分析。[0068]在使用DBS樣品的NBS分析中，用于評(píng)估提取緩沖液組成和ConA-珠子體積的效果的在工作臺(tái)上的分析操作流程包括但不限于以下步驟:將3mm的DBS樣品穿透物置于96孔圓底板的單獨(dú)孔中的100uL提取緩沖液(例如，PBSpH6.0，0.l%w/vTween?20;水，0.1%Tween?20;或ImMこ酸鹽、50mMNaClpH5.5,0.1%Tween?20)中，且在定軌振蕩器上室溫孵育30分鐘。在提取結(jié)束吋，從每ー個(gè)孔中將100iiL的DBS提取物轉(zhuǎn)移到包含磁性響應(yīng)SiMAG-ConA珠子的一定量(例如，20、10、5或IyL)的單獨(dú)的管中且用翻轉(zhuǎn)式旋轉(zhuǎn)室溫孵育25至30分鐘。將ー小份10yL的每ー提取物上清液從管中轉(zhuǎn)移至96孔板的單獨(dú)的孔中。將每ー個(gè)管中的剩下的上清液轉(zhuǎn)移至廢棄物中。將珠子重新懸浮在IOiiL的包含0.l%Tween20的ImMこ酸鹽緩沖液pH5.0中且轉(zhuǎn)移至96孔板的單獨(dú)的孔中。將小份的珠子對(duì)照(即，洗滌且重新懸浮在10iiL的包含0.l%Tween20的ImMこ酸鹽緩沖液pH5.0中的僅20、10、5或IiiL的ConA珠子)置于96孔板的指定孔中。將酶底物(10uL)添加到每ー個(gè)樣品和對(duì)照孔中且在定軌振蕩器上混合20秒。反應(yīng)在37°C下孵育20小時(shí)(過(guò)夜)。在孵育期結(jié)束時(shí)，將50yL終止緩沖液添加到所有樣品和對(duì)照孔中，并讀取熒光。[0069]_顯示圖300，圖300是使用DBS在用于酸性鞘磷脂酶活性的NiemannPick分析中的提取緩沖液組成和ConA珠子體積的效果圖的實(shí)例。與圖300有關(guān)的數(shù)據(jù)顯示在表I中。在NiemannPick分析中，終止緩沖液為具有0.25%w/vTritonX-100的0.2M碳酸氫鈉pH10.1。在NiemannPick分析中，HMU底物為6-十六?；?4-甲基傘形酮(methylumbelliferyl)-憐酸膽喊(HMU-PC;可從MoscerdamSubstrates購(gòu)得)。5.6mMHMU-PC儲(chǔ)備溶液是在NP緩沖液(具有0.5%(w/v)牛磺膽酸鈉鹽水合物和0.25mM氯化鋅的0.1Mこ酸鹽緩沖液，pH5.2)中制備的。HMU-PC儲(chǔ)備溶液在60°C水浴中短暫加熱(直到澄清)、分成小份且在-800C下儲(chǔ)存。NiemannPick底物的工作液是通過(guò)在60°C下加熱冷凍的小份HMU-PC儲(chǔ)備溶液直到澄清，且用100ULNP緩沖液將20iiL儲(chǔ)備底物稀釋至120uL的最終體積來(lái)制備的。立即使用NiemannPick底物的工作液。以75的增益，在400/460激發(fā)/發(fā)射下讀取HMU熒光。數(shù)據(jù)表明，與QC-BP樣品(背景對(duì)照)相比，DBS穿透物在こ酸鹽提取緩沖液(ImMこ酸鹽、50mMNaClpH5.5,0.1%Tweeil?20)中的提取在QC-H上清液樣品中提供更高水平的酶活性。然而，與QC-BP樣品(背景對(duì)照)相比，DBS穿透物在PBS提取緩沖液(包含0.1%Tween?20的PBSpH6.0)的提取在所有QC-H樣品(即10、5或IyLConA珠子)中提供更高水平的珠子結(jié)合的酶活性。使用10iiLConA珠子，在PBS緩沖液中提取的QC-HDBS樣品中觀察到最高水平的珠子結(jié)合的酶活性。[0070]【權(quán)利要求】1.一種制備用于進(jìn)行分析的樣品的方法，所述方法包括:(a)提供包含糖蛋白的輸入樣品；(b)將糖蛋白從所述輸入樣品捕獲到固體載體上；且(C)洗滌所述樣品載體，以除去所述輸入樣品的未結(jié)合部分。2.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，還包括從所述固體載體上洗脫糖蛋白以產(chǎn)生輸出樣品。3.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(b)、(c)和(d)是在油中的一個(gè)或多個(gè)滴中進(jìn)行的。4.如權(quán)利要求2及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述洗脫是通過(guò)使所述固體載體與ー種或多種糖模擬物接觸來(lái)完成的。5.如權(quán)利要求2及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述洗脫是通過(guò)使所述固體載體和捕獲的糖蛋白之間的可斷裂鍵斷裂來(lái)完成的。6.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品包含選自由以下組成的組的樣品物質(zhì):血液、血漿、血清、眼淚、唾液及尿。7.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品包括新鮮血液。8.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品包括重構(gòu)的干血。9.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品主要由血漿組成。10.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品包括人的臨床樣品。11.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述固體載體包括伴刀球蛋白A。12.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述固體載體包括磁性響應(yīng)珠子。13.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所捕獲的糖蛋白包括一種或多種酶。14.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所捕獲的糖蛋白包括一種或多種糖苷酶。15.一種進(jìn)行分析的方法，所述方法包括:(a)進(jìn)行如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法；(b)將來(lái)自步驟1(c)的所述固體載體暴露到底物；且(c)測(cè)量所述底物的酶改性。16.—種進(jìn)行分析的方法，所述方法包括:(a)進(jìn)行權(quán)利要求2及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法以產(chǎn)生所述輸出樣品；(b)將酶底物添加到所述輸出樣品中；(C)測(cè)量所述底物的酶改性。17.如權(quán)利要求15及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述底物的改性與可能存在于所述輸出樣品中的酶的存在和或活性有夫。18.如權(quán)利要求15及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶是溶酶體酶。19.如權(quán)利要求15及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶是糖基化的酶。20.如權(quán)利要求15及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法是在樣品收集點(diǎn)處進(jìn)行的。21.如權(quán)利要求16及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述底物包括糖苷底物。22.如權(quán)利要求16及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中在與感興趣的酶接觸時(shí)，所述底物釋放可檢測(cè)物。23.如權(quán)利要求16及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述底物包括在與感興趣的酶接觸時(shí)釋放熒光團(tuán)的糖苷底物。24.如權(quán)利要求16及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述底物包括糖苷底物。25.如權(quán)利要求20及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣品收集點(diǎn)是在受試者在場(chǎng)的情況下。26.如權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述輸入樣品是從受試者收集的且立即裝載到滴致動(dòng)器上并立即進(jìn)行所述方法。27.一種計(jì)算機(jī)可讀的介質(zhì)，其被編程以使滴致動(dòng)器進(jìn)行權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法的所述方法步驟中的任ー個(gè)。28.—種系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括滴致動(dòng)器，所述滴致動(dòng)器被聯(lián)接到計(jì)算機(jī)且受計(jì)算機(jī)的控制，所述計(jì)算機(jī)被編程以使所述滴致動(dòng)器進(jìn)行權(quán)利要求1及其后權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法的所述方法步驟中的任ー個(gè)?！疚臋n編號(hào)】C12N9/24GK103597356SQ201280022792【公開(kāi)日】2014年2月19日申請(qǐng)日期:2012年5月9日優(yōu)先權(quán)日:2011年5月10日【發(fā)明者】卡麗·格雷厄姆,艾倫·?？斯?利薩·珀金斯申請(qǐng)人:先進(jìn)流體邏輯公司